一種棉花脫水素類似基因及其應用的製作方法

2023-06-10 09:21:21 2

專利名稱：一種棉花脫水素類似基因及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及植物基因工程領域，尤其涉及一種棉花脫水素類似基因以及其構建的 植物表達載體及其在耐旱、耐寒、耐鹽鹼轉基因植物研製方面的應用。
背景技術：
在自然界，植物暴露在各種各樣的環境條件下，水分虧缺，冷和凍，熱，鹽和氧匱乏 是影響植物生長的主要環境因子。大多數農作物對不良環境條件是敏感的，經常會由於環 境脅迫而產生減產。在脅迫發生期間，植物體內會產生一系列生理生化變化，如糖，脂，蛋白 質和核酸以及光合作用，固氮作用和呼吸作用等以適應脅迫。植物生長的不同階段，包括種 子萌發，種子成熟和衰老都不同程度受脅迫條件的影響。植物不能依靠自身的運動趨利避害，所以在長期的進化過程中形成了一系列主動 適應外界環境變化以保護自身的機理。在逆境條件下，植物細胞會發生諸如可溶性蛋白、糖 類、有機酸、脯氨酸、ABA含量的增加，新的蛋白異聚體的出現，膜脂成分的改變等相應變化。 同樣在鹽分脅迫和乾旱條件下也可以誘發植物細胞啟動保護機制，以減少水分喪失。同時 在植物種子形成過程為了保證能適應各種逆境和長期保存，也存在一個脫水過程。在這些 過程中，涉及到一些與植物脫水有關的基因及其產物，脫水素(dehydrin)就是其中較重要 的一種，它們主要功能是保護植物細胞中的大分子在脫水過程中不受傷害，使植物對乾旱、 鹽鹼、寒冷等水分脅迫相關的非生物逆境表現出更好的耐受能力。脫水素的一個重要結構特徵是它具有3類非常保守的區域K、S和Y片段，其中K 片段是所有脫水素都具有的。K片段富含賴氨酸，通常位於C端，可具有1到12個重複，一 般由15個胺基酸殘基組成(EKKGIMDKIKEKLPG)，其中也可能存在某些單核苷酸的置換或結 構上的修飾。K片段能形成雙親性的α 2螺旋，這是脫水素的重要功能結構。許多脫水素還 含有由絲氨酸殘基組成的S片段。有證據表明S片段的磷酸化可以使脫水素在信號肽的引 導下進入細胞核。很多脫水素的N端還具有另一類保守區域Y片段。它的序列為DEYGNP， 與植物和細菌分子伴侶的核酸結合位點有同源性。除了以上3個保守區域外，脫水素還具 有另外一些保守性稍差的區域，這些區域富含甘氨酸和極性胺基酸(特別是蘇氨酸)，稱作 S片段，它們通常分布於K片段之間。基於3種保守區域組成的不同，可將脫水素分為5種類型^iSK2、Kn、SKn、KnS和 Y2Kn。^iSK2型脫水素是最豐富的一類，含有1到3個Y片段、1個S片段和2個K片段，是 一類鹼性或中性蛋白質，能被乾旱或脫落酸(abscisic acid, ABA)誘導，但不被低溫誘導。 Kn型脫水素含有2到9個K片段，而不含有Y片段和S片段，是一類酸性或中性蛋白質，能 被低溫、乾旱和ABA誘導，並且被低溫誘導的能力要強於乾旱和ABA。SKn型脫水素含有1 個S片段和2到3個K片段，是一類酸性蛋白質，它們優先被低溫誘導。KnS型脫水素的K 片段與其它類脫水素有所不同，起始序列為KEG(其它類的起始序列為EKKG)，它們能被低 溫和乾旱誘導。Y2Kn型脫水素含有2個Y片段和1到2個K片段，是一類酸性蛋白質。

發明內容
本發明的目的在於提供一種棉花脫水素類似基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1 所示。本發明的第二個目的在於提供棉花脫水素類似基因的cDNA序列，其核苷酸序列 如 SEQ ID NO 2 所示。本發明的第三個目的在於提供一種棉花脫水素類似蛋白，由SEQ ID NO 1所示核 苷酸序列編碼，其胺基酸序列如SEQ ID N0:3所示。本發明的第四個目的在於提供含有所述棉花脫水素類似基因的植物表達載體。本發明的第五個目的在於提供用所述植物表達載體轉化的植物細胞、組織或植 株。本發明的第六個目的在於所述棉花脫水素類似基因在可提高對水分脅迫相關非 生物逆境耐受能力的植物品種中的應用。本發明的技術路線為1)乾旱處理棉花幼苗；2)從經乾旱處理的的棉花幼苗上取葉片，並從葉片提取總RNA ；3)mRNA差異顯示分析，得到差異表達的cDNA片段；4)根據差異表達的cDNA片段，用RACE方法獲得棉花脫水素類似基因，命名為 GhDhl ；6)構建(ihDhl植物表達載體，用農桿菌介導轉化菸草，獲得轉(ihDhl基因菸草，採 用乾旱模擬實驗驗證轉(^hDhl基因菸草，比對照菸草具有更強的耐旱能力。本發明克隆了一種棉花棉花脫水素類似基因(ihDhl，構建(ihDhl基因植物表達載 體，用根癌農桿菌介導轉化菸草，獲得轉(^hDhl基因菸草，採用乾旱模擬實驗驗證轉(ihDhl 基因菸草，比對照菸草具有更強的耐旱能力，且(^hDhl基因在菸草中的表達能在一定程度 上提高菸草種子在萌發過程中對乾旱脅迫的抵抗能力。


圖1是棉花總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖；圖2是差異片段的反向Northern Dot blot圖；圖3是棉花脫水素類似蛋白(ihDhl親水性分析圖；圖4是植物表達載體pBI 121-GhDhl構建流程圖；圖5是轉GhDhl基因菸草GhDhl基因Southern雜交檢測圖；圖6A、6B和6C是轉基因菸草和非轉基因菸草PEG模擬乾旱脅迫實驗結果示意圖；圖7是菸草幼苗乾旱模擬實驗結果示意圖；圖8是菸草幼苗乾旱處理後重新澆水實驗結果示意圖；圖9A是轉空載體pBI121和轉(ihDhl基因菸草Tl代種子萌發狀況對比圖； 和9B是轉空載體PBI121菸草Tl代種子萌發狀況圖示；
圖9C是轉(ihDhl基因菸草Tl代種子萌發狀況圖示。
具體實施例方式以下結合具體實施例對本發明的技術路線做進一步詳細說明。
實施例1棉花脫水素類似基因(ihDhl的克隆一、棉花材料的處理鄂雜棉11號Fl代種子萌發15天，取整株材料乾旱誘導8小時，凍存於_70度冰箱。二、棉花總RNA的提取A.取0. Ig棉花葉片液氮研磨後，加0. 5ml植物RNA提取液(購自invitrogen)， 振蕩至徹底混勻。B.室溫放置5分鐘。C. 4"C 12，OOOrpm離心1分鐘，上清轉入新的無RNase離心管。D.加入 0. Iml 5M NaCl，溫和混勻。E.加入0. 3ml氯仿，上下顛倒混勻。F. 4"C 12，OOOrpm離心10分鐘，取上層水相轉入新的無RNase離心管。G.加與所得水相等體積的異丙醇，混勻，室溫放置10分鐘。H.4°C 12，OOOrpm離心10分鐘。棄掉上清，注意不要倒出沉澱。加Iml 75%乙I. 40C 5，OOOrpm離心3分鐘。倒出液體，剩餘的少量液體短暫離心，然後用槍頭吸 出，室溫晾乾2-3分鐘。J.加50 μ 1無RNase水，反覆吹打、混勻，充分溶解RNA。提取的總RNA用瓊脂糖凝膠檢測完整性，電泳結果如圖1所示。三、RNA樣品中DNA汙染的去除Α.在 RNase-free 的 Eppendorf■管中依次力口入 16 μ 1 總 RNA、2 μ 1 10XBuffer> 1 μ IRnaseOUTU μ 1 RNase-free DNaseI (2U/μ 1)；B.室溫放置 15min ；C.力卩入 2μ1 25mM EDTA，65°C保溫 15min。四、mRNA差異顯示分析依據GEN0MYX 公司 f IuoroDD Kit System 進行操作(一 )逆轉錄1、在0· 2mltube中，加入下列成分總RNA(0. lug/ul) 2. OulHIEROGLPH T7(dT12)AP anchored primer (2uM) 2. Oul2、70°C水浴10分鐘。立即放置在冰浴中。3、加入下列成分2. Oul 10XSuperScriptII RT buffer ；2. Oul 250uM dNTP mix ；2.OullOOmM DTT ；9.8ul DEPC · H20 ;0·2ul 200U/ul SuperScriptII RT。4、進行下列循環42 °C 5 分鐘；50 °C 50 分鐘；70 °C 15 分鐘；4°C 保存( 二 ) DDRT-PCR 1、向0. 2ml tube中加入下列成分1. Oul RT mix (unlabeled 3，AP) ；1. Oul 10XPCR buffer ； 1. 5ul 25mM MgCl2 ； 2. 0ul250uM dNTP ； 1.75ul 2uM 5' ARP ；0.7ul 5uM 3' TMR-AP (flurescent 3' AP)；1. 75ulH20 ；0.Iul AmpliTaq(5U/ul)2、進行下列循環950C 2 分鐘；92°C 15 秒，50°C 30 秒，72°C 2 分鐘共 4 個循環；92°C 15 秒，60°C 30秒，72 °C 2分鐘共30個循環；4°C3、取 4. Oul DDRT-PCR 產物，加入 1. 5ul fluoro loading buffer，95°C變性 5 分 鍾，冰浴，上樣。(三)聚丙烯醯胺凝膠電泳1、清洗33 X 61cm的低螢光玻璃和250微米spacer及梳子2、配製5. 6%序列膠取70ml 5. 6% denaturing HR-IOOOgel (FL407), 560ul 10% APS,56ul TEMED 混 勻，鋪膠，使膠聚合1小時3、上槽加入0. 5 X TBE，下槽加入IXTBE4、上樣，兩側力口入 4. Oul DNA standard marker 禾口 1. 5ul fluoroDD loading dye5、電壓 3000V，5 小時6、蒸餾水多次衝洗序列膠7、GenomyxSC Fluorescent Imaging Scanner 掃描呈像(四)DDRT-PCR 產物的第二次 PCR 1、將所切的膠條放入含有30ulTE buffer的0. 5ml tube中，37°C，溫育1-2天2、在0. 2ml tube中加入下列成分2ul 膠溶液；2ul 10XPCR buffer ；1. 2ul 25mM MgCl2 ；0. 3ul IOOmM dNTP ；2ul2uM M13reverse primer ；2ul 2uM T7 Promoter primer ；0.5ul Taq03、循環參數95°C 2 分鐘；92°C 15 秒，50°C 30 秒，72°C 2 分鐘共 4 個循環；92°C 15 秒，60°C 30秒，72 °C 2分鐘共30個循環；4°C4、取IOul電泳檢測(五)反向Northern雜交，克隆和序列分析為降低差異顯示中的假陽性，進行了兩次反向Northern雜交。在克 隆片段之前進行第一次反向Northern雜交，取6ul擴增的片段同時點在兩張 Hybond-N+ (AmershamPharmarcia, U. S. A)尼龍膜上，用地高辛標記的dUTP分別以乾旱誘導 和未誘導的棉花總RNA為模板標記總cDNA。在預雜交液中，65°C進行2_3小時的預雜交， 過夜進行雜交。陽性的cDNA片段被克隆到pGEM-T fesy載體(ftOmega，USA)上，每一條 片段選擇6個克隆，進行第二次反向Northern雜交。選擇陽性cDNA片段進行測序。反向 Northern的結果如圖2所示，其中A代表乾旱誘導後的總cDNA探針，B代表乾旱誘導前的 總cDNA探針，1-8代表mRNA差異顯示出差異片段。將經過反向Northern Dot blot鑑定的mRNA差異顯示片段2號用引物T7和M13 擴增，回收後連入.pGEM -T Vector，篩選到陽性克隆後，進行序列分析，其核苷酸序列 如SEQ ID N0:4所示。該序列全長為579bp，經BLAST搜索，未發現與dehydrin家族基因 同源性很高。按三個讀碼框翻譯出胺基酸序列，最大的讀碼框為4(^bp，編碼的135個氨基 酸，其胺基酸序列如SEQ ID N0:5所示。
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五、用RACE方法獲得棉花脫水素類似基因(ihDh 1全長cDNA依據已知部分cDNA序列，按照設計兩條基因特異性引物，序列如下GSPl :5』 CTGTTGCCGCCTCATCGCAC 3』GSP2 :5』 GGGACTGCACTGTCCTCTTC 3』以乾旱誘導的總RNA為模板，用GSPl進行逆轉錄，隨後用GSP2和AAP進行PCR擴 增，具體操作如下A逆轉錄1、在0. 5ml離心管中加入以下成分Iul IOuM GSPl ；12.5ul (l-5ug)Total RNA ；13.5ul DEPC · H202、混勻，70°C變性10分鐘，置於冰浴中至少2分鐘，離心3、按下表加入以下成分2. 5ul 10XPCR buffer ；2. 5ul 0. IM DTT ；1. 25ul RNaseOUT (40U/ul)； 3ul25mMMgC12 ；1. 25ul IOmM dNTP,以上各種成分可在另一管中混勻，在45°C預熱4、混勻各種成分，離心，42°C溫育1-2分鐘5、加入 Iul SuperscriptII RT 混勻，42°C 10 分鐘，50°C 1-1. 5 小時6、70°C 15分鐘，以終止反應7、離心 10-20 秒，37°C溫育，加入 Iul RNase Mix 混勻，37°C 30 分鐘8、離心，冰浴B純化cDNA單鏈ljfbinding solution 平衡至室溫2、取 IOOul ddH20 70°C溫育3、將120ul binding solution (6M NaI)加入到第一鏈合成混合物中，混勻4、將cDNA/Nal混合物轉移到GlassMAX離心柱中，13000g離心20s5、從管中取出柱子，將濾過液轉移至另一乾淨離心管中，保存此管直至cDNA純化 完成，將離心柱放回原來的離心管中6、將0. 4ml冷1 Xwash buffer加入到柱子中，13000g離心20秒，棄濾過液重複3 次7、用0.鈿1冷70%乙醇洗2次柱子8、13000g離心1分鐘，以徹底除去殘留的乙醇9、將柱子轉移到另一個離心管中，加入50ul 65°C預熱的ddH20，13000g離心20秒CcDNA 力口尾1、在0.5ml離心管中加入以下成分5. Oul 5Xtailing buffer ；2. 5ul 2mM dCTP ； 16. 5ul cDNA sample ；24. Oul H202、94°C 3分鐘，置於冰上1分鐘，離心3、加入 Iul TdT，混勻，37°C 10 分鐘4、65°C加熱10分鐘，離心，冰浴保存D 加尾 cDNA PCR 擴增1、在冰上，向0. 2ml離心管中加入以下成分5ul 10XPCR buffer ；3. Oul 25mM MgC12 ； 1. Oul IOmM dNTP ；2. Oul IOuM GSP2 ；2.Oul IOuM AAP ；5.Oul dC-tailed cDNA ；31.5ul ddH20。2、94°C 變性 5 分鐘3、加入 0. 5ul Taq 酶，混勻4、循環參數940C 5 分鐘；94°C 30 秒，55°C 30 秒，72°C 2 分鐘 30 個；72°C 7 分鐘；5°C5、取5_20ul電泳檢測E 巢式 PCR:1、取 5ul 第一輪 PCR 產物加入 495ul TE buffer2、在冰上，向0. 2ul離心管中，加入以下成分5ul 10XPCR buffer ；3. Oul 25mM MgC12 ； 1. Oul IOmM dNTP ；2. Oul IOuM GSP2 ； 2.Oul IOuM AAP ；5.Oul dC-tailed cDNA ；31.5ul ddH20。3、94°C5 分鐘4、加入 0. 5ul Taq 酶，混勻5、循環參數940C 5 分鐘；94°C 30 秒，55 °C 30 秒，72 °C 2 分鐘 30 個；72 °C 7 分鐘；5°C將第二輪PCR獲得的片段克隆至pGEM-T-easy載體上測序獲得基因5』端序列，其 核苷酸序列如SEQ ID NO 6所示。根據已知序列設計引物進行RT-PCR擴增並將獲得片段克隆至pGEM-T-easy載體 上測序，獲得(^hDhl cDNA全長序列如SEQ ID NO 2所示。根據已知序列設計引物進行PCR擴增基因組DNA並將獲得片段克隆至 pGEM-T-easy載體上測序，獲得GhDhl基因組DNA全長序列如SEQ ID NO 1所示。該(ihDhl基因的cDNA全長為909bp，包含一個600bp的開放讀碼框，編碼299個氨 基酸，從第312個鹼基開始含有一個95bp的內含子。它的5』端非翻譯區長為87bp，3』端 非翻譯區長為219bp。(ihDhl編碼的蛋白的胺基酸序列如SEQ ID NO :3所示，該基因編碼的299個氨基 酸序列具有脫水素蛋白的明顯特徵，含有一個S片段和兩個K片段。將推導出的胺基酸全序列在NCBI Genebank上進行Blast搜索，同源性最高的幾 個搜索結果如下g bA A N 7 8 1 2 5.1 dehydrin [Citrus χ paradisi]1383e-31
gbIAAC02689. 1|coId regulated LTC0R18[Lavatera thuringiaca]1206e-26
refXP_002285919.1 I PREDICTED !hypothetical protein[Vitis vi...1083e-22
e mbCAN66038. 1hypothetical protein [Vitis vinifera]1083e-22
g bAAP56259.1 dehydrin [Citrus sinensis]1023e-20
g bABC68275.1 dehydrin [Coffea canephora]99.4 2e-19gb AAT06600. 2 | dehydrin [Lupinus albus] 96. 7 le-18gb |ABS12348. 1 | dehydrin[Populus χ canadensis] 95.9 2e-18ref | NP_850947. 1 | ERDlO (EARLY RESPONSIVE TO DEHYDRATION 10). 95.9 2e-18gb |ABS12346. 1 | dehydrin[Populus maximowiczii] 95. 5 2e-18emb | CAA78515. 1 | dehydrin-cognate [Pisum sativum] 94.4 5e-18用軟體DNAMAN計算(ihDhl蛋白的pi = 5. 48，預測的分子量是22. 420kD，分析 GhDhl蛋白胺基酸殘基的親水性，如圖3所示，可見它是一個親水性很強的蛋白。實施例2 (ihDhl基因植物表達載體的構建請參閱圖4，將PCR擴增得到的(ihDhl基因cDNA用T4DNA連接酶連接至 pGEM-TEasy 上得到質粒 pGEM-GhDhl，用 BamHl 和 SacI 同時雙酶切 pGEM-GhDhl 和 pBI121， 分別獲得(^hDhl片段和線性pBI121載體，用T4DNA連接酶將(ihDhl片段和線性pBI121載 體連接，得到(^hDhl基因植物表達載體pBIl21-GhDh 1。實施例3利用農桿菌介導的方法轉化法獲得轉(ihDhl基因菸草1、根癌農桿菌LBA4404感受態細胞的製備1)挑取新鮮的LBA4404單菌落接種於含適量抗生素的LB液體培養基中，28°C培養 至對數生長期；2)4°C，8000rpm離心5分鐘，收集菌體於小離心管中；3)用600 μ 1冰預冷的500mM CaCl2重懸洗滌細胞；4) 40C，8000rpm離心5分鐘，細胞沉澱中加入100 μ 1冰預冷的500mM CaCl2,混 勻後備用04-48小時後使用效果最佳)。2、根癌農桿菌LBA4404的轉化1)加入1 μ 1植物表達載體質粒DNA至農桿菌感受態細胞中，輕輕混勻，於液氮中 速凍5分鐘，37°C溫浴5分鐘；2)加入600μ1 LB液體培養基輕搖4-6小時，室溫，6000rpm離心3分鐘，富
集菌體；3)保留50-200 μ 1菌液，混勻，均勻塗布於含適量抗生素的LB選擇平板上，28°C倒 置培養兩天。4)挑取新鮮菌落，進行PCR鑑定，篩選陽性克隆。3、菸草的遺傳轉化及植株再生採用葉盤法轉化菸草，將經PCR法鑑定的陽性植株移栽到土壤中，菸草生長正常。4、轉基因菸草植株的Southern檢測用SDS法提取菸草葉片總DNA，EcoR I消化後走瓊脂糖凝膠電泳，以DIG標記 的(ihDhl基因為探針進行Southern雜交，表明(ihDhl已經整合到菸草中，雜交結果如圖5
9所示，1號泳道為正對照、2號泳道為未轉基因菸草負對照，3號和4號泳道為轉(ihDhl基因菸草。5, GhDhl基因功能鑑定及轉(ihDhl基因菸草的乾旱耐受實驗(1) PEG模擬乾旱脅迫實驗請參閱圖6A，將卡那抗性菸草置於含3 % PEG4000的生根培養基上進行培養，20天 後觀察，植株生根，圖6B和6C為對照菸草(即非轉基因植株)置於含3% PEG4000的生根 培養基上進行培養，20天後觀察，不生根，葉緣黃化，表現出較重的乾旱脅迫的症狀。(2)轉(ihDhl基因菸草乾旱耐受實驗以未轉基因菸草作為對照，將移栽到土壤後10天的的菸草進行乾旱處理，結果顯 示，轉(ihDhl基因菸草乾旱脅迫條件下生長狀況明顯好於對照，如圖7所示，1為非轉基因 對照植株、2為第6號轉基因株系、3為第15號轉基因株系；重新澆水進行復甦後轉基因植 株與對照組相比受乾旱影響較小，如圖8所示，1為非轉基因對照植株、2為第6號轉基因株 系、3為第15號轉基因株系。(3)轉(ihDhl基因菸草Tl代種子萌發實驗請參閱圖9A、9B和9C，9A中A代表轉GhDhl基因Tl代種子，CK代表轉PBI121載 體Tl代種子。分別選取轉(ihDhl基因菸草各6個株系的Tl代種子，以轉空載體PBI121的菸草 (圖9B)做為對照，在附加13% PEG的MS培養基上進行萌發試驗。結果發現，轉(ihDhl基 因菸草第11號株系的種子萌發明顯快於轉空載體的菸草種子(圖9C)，而且在萌發後的生 長速度也比對照快。這說明(^hDhl基因在菸草中的表達能在一定程度上提高菸草種子在萌 發過程中對乾旱脅迫的抵抗能力。SEQUENCE LISTING創世紀轉基因技術有限公司 一種棉花脫水素類似基因及其應用6PatentIn version 3.31720DNA 棉花1
0184]gaagtgatccacaatcttgatacggtaatacgttaggtagttttcagcatacttgttttg600185]agtttagtggttgtagataaagaaaaaatggctgaggagcataccaaggttggtggtgag1200186]gaagcagtggcgagcaaggagcgagggatgtttgatttcttggggaagaaagaagaggag1800187]aagcctcaacctcaagaggaggtggtgtccacccagtttgagaaagtcaagatagaagag2400188]gaacataaggaagatgagaagaaacacagtctcctggacaagcttcaccgatccaatagc3000189]agctccagctcttctagtgacgaggaagaaggtgaaggtgaaggcggagagaagaagaag3600190]aagaaaaaggagaagaagggaaagaaagaagaggacagtgcagtcccagtggagaagtgc4200191]gatgaggcggcaacagttcaccactcagagacgccggaaaagaagggtttcatggagaag480
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3
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〈213〉棉花
3
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Pro Gln Pro Gln Glu Glu Val ValSer Thr Gln Phe Glu Lys Val Lys
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505560



Lys
65
Glu
Leu His Arg Ser Glu Gly
Gly
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Glu Ala Ala 115 Lys
Asn 70 Gly
Lys 100 Thr
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Ser Ser Ser Ser Glu Lys
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Glu 145 His
Lys
Lys
Pro 150 Thr
Lys 135 Pro
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棉花
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棉花
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1權利要求
1.一種棉花脫水素類似基因，其核苷酸序列如SEQ ID N0:1所示。
2.根據權利要求1所述的一種棉花脫水素類似基因，其特徵在於所述棉花脫水素類 似基因的cDNA序列如SEQ ID NO 2所示。
3.權利要求2所述的棉花脫水素類似基因編碼的蛋白質，具有SEQID NO :3所示的胺基酸序列。
4.含有權利要求1或2所述棉花脫水素類似基因的植物表達載體。
5.用權利要求4所述植物表達載體轉化的植物細胞、組織或植株。
6.權利要求1或2所述棉花脫水素類似基因在耐旱、耐寒、耐鹽鹼植物品種中的應用。
全文摘要
本發明涉及植物基因工程領域，提供了棉花脫水素類似基因GhDh1，其核苷酸序列如SEQ ID NO1所示，構建GhDh1基因植物表達載體，用根癌農桿菌介導轉化菸草，獲得轉GhDh1基因菸草，採用乾旱模擬實驗驗證轉GhDh1基因菸草，比對照菸草具有更強的耐旱能力，且GhDh1基因在菸草中的表達能在一定程度上提高菸草種子在萌發過程中對乾旱脅迫的抵抗能力。
文檔編號C12N15/29GK102080088SQ20091018955
公開日2011年6月1日 申請日期2009年11月27日 優先權日2009年11月27日
發明者孫超, 崔洪志, 王君丹, 陳文華 申請人:創世紀轉基因技術有限公司