可溶性人st-2抗體和分析法的製作方法

2023-06-04 10:06:21 2

專利名稱：可溶性人st-2抗體和分析法的製作方法
技術領域：
本文描述的是能夠結合人可溶性生長刺激表達基因2 (ST2)蛋白的抗體和抗體的抗原結合片段、含有所述抗體和抗體片段的試劑盒，以及使用這些抗體和抗體片段進行的分析檢驗。背景ST2是有跨膜(ST2L)和可溶性(sST2或可溶性ST2)兩種亞型的白介素_1受體家族成員(Iwahana et al.，Eur.J.Biochem.264:397-406，1999)。近年發表的文章描述了目前對 ST2 與炎症性疾病關係的了解(Arend et al., Immunol.Rev.223:20-38, 2008;Kakkaret al.，Nat.Rev.Drug Discov.7:827-840，2008; Hayakawa et al.，J.Biol.Chem.282: 26369-26380, 2007;Trajkovic et al., CytokineGrowth Factor Rev.15:87-95，2004)。人可溶性ST2的循環濃度在患有與異常2型輔助T細胞(Th2)應答相關的多種疾病(包括系統性紅斑狼瘡和哮喘)的患者中以及基本獨立於Th2應答的炎症狀況(比如感染性休克或外傷)中出現升高(Trajkovic et al., Cytokine Growth FactorRev.15:87-95, 2004;Brunner et al., Intensive Care Med.30:1468-1473，2004)。 而且，白介素33/ST2L信號傳導代表了機械超荷情況時的一種關鍵心肌保護機制(Sekiet al., Circulation HeartFai1.2:684-691，2009;Kakkar et al., Nat.Rev.DrugDiscov.7:827-40, 2008; Sanada et al.，J.Clin.1nvest.117:1538-1549，2007)。人可溶性ST2的升高還預示 了心衰(HF)和心肌梗塞患者的更差預後(Kakkar et al., Nat.Rev.Drug Discov.7:827-40, 2008;Weinberg et al., Circulation 107:721-726，2003;Shimpoet al., Circulation 109:2 186-2 190，2004;Januzzi et a 1., J.Am.Coll.Cardiol.50:607-613, 2007;Mueller et al., Clin.Chem.54:752-756, 2008;Rehmanet al., J.Am.Col 1.Cardiol.52:1458-65,2008;Sabatine et al., Circulation117:1936-1944, 2008) 人可溶性ST2水平升高還預示了個體在一年內發生死亡(參見例如W007/127749)。總之，人可溶性ST2被認為與某些炎症性疾病和心肌保護旁分泌系統有關，並且是心衰患者預後和受試者在一年內死亡的預測指標。概述本發明至少部分基於人可溶性ST2蛋白特異性新抗體的開發。這些抗體及其抗原結合片段可以用於例如對生物樣品(例如臨床樣品)中的人可溶性ST2蛋白進行定量、預測受試者一年內死亡的風險、確定是否允許受試者出院或者開始或繼續治療(例如，住院治療)，以及選擇參與臨床研究的受試者。文中提供了這些抗體及其抗原結合片段、含有這些抗體和抗體片段的試劑盒，以及各種使用這些抗體和抗體片段的方法。
本文提供了分離的抗體及其抗原結合片段，所述抗體及其抗原結合片段是由雜交瘤產生的抗體或者與所述雜交瘤產生的抗體競爭結合，所述雜交瘤保藏在American TypeCulture Collection(ATTC)並被指定為專利保藏命名(Patent Deposit Designation)PTA-10431和PTA 10432。在一些實施方案中，抗體或其片段不與D066-3或D067-3抗體(MBL International)之一或者兩者競爭結合(美國專利7，087，396中有描述)，或者與人可溶性ST2結合的Kd等於或者小於1.51x10_9M。在一些實施方案中，抗體或其片段與人可溶性ST2結合的Kd等於或者小於8.59x10,11。在一些實施方案中，抗體或其片段是嵌合的或者人源化的。在一些實施方案中，片段選自:Fab片段、F(ab' )2片段和scFv片段。在一些實施方案中，抗體或其片段是糖基化的。在一些實施方案中，抗體或其片段含有雜交瘤產生的抗體的輕鏈或重鏈的一或多個互補決定區，其中所述雜交瘤被保藏在ATCC，指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432。在一些實施方案中，抗體是保藏在ATCC被指定為專利保藏命名PTA-10431的雜交瘤產生的抗體，或其抗原結合片段；或者是保藏在ATCC被指定為專利保藏命名PTA-10432的雜交瘤產生的抗體，或其抗原結合片段。還提供了與可溶性ST2特異結合的分離的抗體及其抗原結合片段，其中所述抗體及其抗原結合片段的產生過程包括用從人細胞(例如人成纖維細胞、神經細胞、上皮細胞或內皮細胞、胚胎或成年細胞，特別是人胚胎腎細胞)分離的重組人可溶性ST2免疫非人哺乳動物(例如小鼠、大鼠、兔、山羊、牛、豬、猴或馬)。在一些實施方案中，分離到的重組人可溶性ST2是完全糖基化的，即和人血清中存在的天然內源人可溶性ST2有基本相同糖基化狀態。在本文描述的所有抗體和片段的一些實施方案中，抗體或其片段帶有標記。還提供了保藏在ATCC並被指定為專利保藏命名PTA-10431的雜交瘤的細胞，和保藏在ATCC並被指定為專利保藏命名PTA-10432的雜交瘤的細胞。還提供了定量來自受試者 的樣品中的人可溶性ST2水平的方法。所述方法包括將樣品與至少一種本文描述的抗體或其片段接觸，和檢測抗體或其片段與人可溶性ST2的結合情況。在一些實施方案中，方法包括使用至少兩種本文描述的不同的抗體或其片段。還提供了預測受試者一年內死亡的風險的方法。所述方法包括獲取受試者樣品和利用至少一種本文描述的抗體或其片段確定樣品中的人可溶性ST2水平，其中與人可溶性ST2參照水平相比，樣品中人可溶性ST2水平升高表明受試者在一年內死亡的風險增加(例如相對那些與相同對照相比，人可溶性ST2水平下降或者基本相同的受試者(例如患有相同疾病的受試者)一年內死亡的風險增加)，下降的或者基本相同的人可溶性ST2水平表明受試者一年內死亡的風險減少(例如相對那些與相同對照相比，人可溶性ST2水平升高或者基本相同的受試者(例如患有相同疾病的受試者)一年內死亡的風險下降)。還提供了確定是否允許住院病人出院或者給受試者開始或繼續住院治療的方法，所述方法包括獲取受試者樣品和利用至少一種本文描述的抗體或其片段確定樣品中的人可溶性ST2水平，其中與人可溶性ST2參照水平相比，升高的人可溶性ST2水平表明應當開始或者繼續住院治療，下降的或者相等的人可溶性ST2水平表明可以考慮允許受試者出院。在一些實施方案中，受試者有以下症狀中的至少一種或多種:胸痛或者不適、呼吸急促、噁心、嘔吐、噯氣、出汗、心悸、頭暈、疲勞和昏厥。還提供了選擇參與臨床研究的受試者的方法，所述方法包括獲取受試者樣品，利用至少一種本文描述的抗體或其片段確定樣品中的人可溶性ST2水平，以及如果與人可溶性ST2參照水平相比，受試者的人可溶性ST2水平表明他應當被選中參與臨床研究則選擇該受試者參與臨床試驗。在一些實施方案中，存在升高的人可溶性ST2水平表明受試者應當被選中參與臨床研究。還提供了給受試者選擇治療方案的方法，所述方法包括利用至少一種本文描述的抗體或其片段確定來自受試者的生物樣品中的人可溶性ST2水平，其中相對人可溶性ST2參照水平的受試者的人可溶性ST2水平被用於給受試者選擇治療方案。在一些實施方案中，存在升高的人可溶性ST2水平被用於給受試者選擇治療方案。在本文描述的任意一種方法的一些實施方案中，受試者未被診斷或者不存在疾病狀態的兩種或更多種(例如，至少三、四或五種)症狀；受試者已被診斷患有某種疾病(例如心衰、冠狀動脈疾病、心血管疾病、急性冠狀動脈症候群、腎功能不全、中風或者本文描述的疾病中的任意一種)；或者受試者患有以下的一或多種:高甘油三酯血症、高膽固醇血症、高血壓並且身體質量指數>30。在本文描述的任意一種方法的一些實施方案中，確定利用了至少兩種本文描述的抗體或其片段。在本文描述的任意一種方法的一些實施方案中，人可溶性ST2參照水平是人可溶性ST2的閾值水平。在一些實施方案中，閾值水平上健康患者群體(例如健康男性患者群體或者健康女性患者群體)中的平均人可溶性ST2水平。在本文描述的任意一種方法的一些實施方案中，參照水平是這樣的受試者樣品中存在的人可溶性ST2水平，所述受試者未呈現兩種或更多種疾病症狀、未被診斷患有某種疾病、或者未被鑑定為有發展出疾病的風險。在本文描述的任意一種方法中，受試者未被診斷為患有疾病(例如，心衰、冠狀動脈疾病、心血管疾病、急性冠狀動脈症候群、腎功能不全、中風或者本文描述的疾病中的任意一種)。在本文描述的任意一種方法中，樣品含有血液、血清或血漿。本文描述的任何抗體及其片段都可以用於這裡描述的任意一種方法。還提供了診斷受試 者的疾病的方法，所述方法包括獲取受試者樣品，利用至少一種本文描述的抗體或其片段確定樣品中的人可溶性ST2水平和至少一種額外標記物的水平，其中如果與人可溶性ST2參照水平相比，受試者的人可溶性ST2水平；其中與人可溶性ST2參照水平相比，樣品中升高的人可溶性ST2水平，和相對所述至少一種額外標記物的參照水平發生改變的至少一種額外標記物水平表明受試者患有疾病(例如，心血管疾病、肺病、敗血症、川崎病(Kawasaki disease)或Th2相關疾病，或者本文描述的其他疾病中的任意一種)。還提供了確定受試者是否有正常的人可溶性ST2水平(因此可能未患有嚴重疾病(例如心血管疾病)和例如一年內死亡或入院的風險正常)的方法，所述方法包括獲取受試者樣品，利用至少一種本文描述的抗體或其片段確定樣品中的人可溶性ST2水平，其中如果人可溶性ST2水平落在特定的範圍(例如，在大約14.5-大約25.3ng/mL，或者大約
18.1-大約19.9ng/mL之間)，則確定受試者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果男性受試者的人可溶性ST2水平處於表9列舉的任何範圍之間，則受試者被確定為具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果女性受試者的人可溶性ST2水平處於表9列舉的任何範圍之間，則受試者被確定為具有正常的人可溶性ST2水平。還提供了試劑盒，所述試劑盒含有本文描述的至少一種(例如兩種、三種、四種或五種)抗體或其抗原結合片段。這些試劑盒的一些實施方案含有兩種本文描述的抗體或其抗原結合片段。在這些試劑盒的一些實施方案中，至少一種抗體或其片段對人可溶性ST2(例如，重組人可溶性ST2)的結合Kd等於或者小於8.δθχΙΟ,Μ。在一些實施方案中，試劑盒提供為酶聯免疫吸附檢驗(ELISA)的形式。在一些實施方案中，試劑盒還含有從人細胞(例如，人胚胎腎細胞)分離的重組人可溶性ST2。在一些實施方案中，重組人可溶性ST2完全糖基化。術語「可溶性ST2」意味著含有這樣序列的可溶性蛋白，所述序列與NCBI登錄號NP_003847.2 (SEQ ID NO:1)至少 90% 相同(例如，至少 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同)；或者含有這樣序列的核酸，所述序列與NCBI登錄號NM_003856.2(SEQ ID NO:2)至少90% 相同(例如，至少 95%、96%、97%、98%、99% 或 100% 相同)。術語「升高的」或者「升高」意味著與參照水平(例如，未患疾病的受試者、沒有呈現疾病的兩種或更多種症狀的受試者、或者未沒鑑定為有發展疾病的風險的受試者中的人可溶性ST2水平；或者人可溶性ST2的閾值水平)相比，確定的或者測量的水平(例如，人可溶性ST2蛋白水平)存在差異，例如統計學上的顯著差異(例如，增加)。在一些實施方案中，參照是閾值水平，任何超過它的水平都認為是「升高的」。文中描述了人可溶性ST2的其他參照水平。術語「醫療機構」意味著受試者可以接受醫護人員(例如護士、醫師或醫師助理)的醫療護理的地方。醫療機構的非限制性例子包括醫院、診所和輔助護理機構(例如，養老院)。術語「住院病人」意味著被收入醫療機構(例如，醫院或輔助護理機構)的受試者。術語「住院治療」意味著對收入醫療機構(例如，醫院或輔助護理機構)的受試者進行的監測和/或醫療。例如，接受住院治療的受試者可能被醫護人員給予一或多種治療劑或者進行醫學程序(例如，手術(例如，器官移植、心臟搭橋術)，血管成形術、成像(例如，磁共振成像、超聲成像和電腦斷層掃描))。在其他實施例中，可以由醫護人員周期性地測量疾病或狀況嚴重程度的一或多種標記物從而評估疾病或者受試者的狀況的嚴重程度或進展。術語「參照水平」意味著對照受試者或對照患者群體中的閾值水平。參照水平取決於進行的檢驗，可以由本領域技術人員確定。參照水平可以是基礎水平或者相同患者中更早或晚的時間點測量的水平。人可溶性ST2參照水平的一些非限制性例子包括這樣的患者中的人可溶性ST2水平，所述患者:未被診斷患有疾病；沒有呈現疾病的兩種或更多種症狀；沒有高風險CVD ;沒有腎衰竭；沒有高甘油三酯血症、高膽固醇血症、高血壓和/或身體質量指數〈30 (例如，BMI低於25);沒有發展出疾病的風險；和/或未患與ST2水平增加相關的疾病(例如，心血管疾病、肺病、敗血症、川崎病或Th2相關疾病，或本文描述的任意一種其他疾病)。本文還描述了其他對照患者群體。人可溶性ST2參照水平的其他例子是人可溶性ST2閾值水平。可以利用本領域已知方法確定人可溶性ST2參照水平；本文描述了一些示範性的水平。在一些實施方案中，計算了受試者中兩個人可溶性ST2水平的比率。可以將參照比率與受試者(例如文中描述的任何對照受試者或者同一受試者)中測量到的人可溶性ST2水平的參數比率進行比較，例如參照比率可以是疾病(例如，心臟病(例如，心衰竭、冠狀動脈疾病、心血管疾病、急性冠狀動脈症候群和心絞痛)、腎功能不全或中風，或者如本文描述的與提高的人可溶性ST2水平相關的任何其他疾病)症狀出現前和後的人可溶性ST2水平的比率；疾病(例如，心衰竭、冠狀動脈疾病、心血管疾病、急性冠狀動脈症候群和心絞痛)、腎功能不全或中風，或者如本文描述的與提高的人可溶性ST2水平相關的任何其他疾病)診斷前後的人可溶性ST2水平的比率；疾病(例如，心衰竭、冠狀動脈疾病、心血管疾病、急性冠狀動脈症候群和心絞痛)、腎功能不全或中風，或者如本文描述的與提高的人可溶性ST2水平相關的任何其他疾病)治療前後的ST2水平的比率；疾病(例如，心衰竭、冠狀動脈疾病、心血管疾病、急性冠狀動脈症候群和心絞痛)、腎功能不全或中風，或者如本文描述的與提高的人可溶性ST2水平相關的任何其他疾病)治療(例如住院或者門診治療)過程中兩個不同時間點的人可溶性ST2水平的比率；或者心臟事件(例如心肌梗塞)前後的人可溶性ST2水平的比率。在一些實施方案中，可以將受試者中測量到的人可溶性ST2水平的比率與閾值參照比率進行比較。人可溶性ST2的參照比率可以利用本領域已知方法確定；可以利用本文描述的數據計算人可溶性ST2的參照比率。例如，人可溶性ST2的參照比率可以是大約0.7 -大約1.1之間，或者大約I。術語「治療性處置」或「治療」意味著將一或多種藥劑給予受試者或者對受試者的身體實施醫學程序(例如，諸如器官移植或心臟手術的手術)。可以給予受試者的藥劑的非限制性例子包括硝酸鹽、鈣通道阻滯劑、利尿劑、血栓溶解劑、毛地黃、腎素血管緊張素醛固酮系統(RAAS)調理劑(例如，β_腎上腺素能阻斷劑、血管收縮素轉化酶抑制劑、醛固酮拮抗劑、腎素抑制劑和血管緊張素II受體阻斷劑)和膽固醇降低劑(例如，染料)。術語治療性處置還包括調節(例如，增加或減少)受試者使用的一或多種藥劑的劑量或頻率、給予受試者一或多種新的藥劑，或者從受試者的治療方案中去掉一或多種藥劑。用於本文，「受試者」是哺乳動物，例如人。用於本文，「生物樣品 」包括血液、血清、血漿、尿和身體組織中的一或多種。一般來說，生物樣品是含有血清、血液或血漿的樣品。用於本文，術語「抗體」是指通常含有重鏈多肽和輕鏈多肽的蛋白質。抗原識別和結合發生在重鏈和輕鏈的可變區。具有一個重鏈和一個輕鏈的單結構域抗體，和不含輕鏈的重鏈抗體也是已知的。給定抗體包含被稱為α、δ、ε、Υ和μ的五種不同類型重鏈中的一種，其分類基於重鏈恆定區的胺基酸序列。這些不同類型的重鏈形成了五類抗體，分別是 IgA (包括 IgAl 和 IgA2)、IgD、IgE、IgG (IgGl、IgG2、IgG3 和 IgG4)和 IgM0 給定的抗體還包含被稱為κ和λ的兩類輕鏈中的一種，其分類基於輕鏈恆定結構域的胺基酸序列。IgG、IgD和IgE抗體通常含有兩個相同的重鏈和兩個相同的輕鏈和兩個抗原結合結構域，每個由重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)組成。通常，IgA抗體由兩個單體組成，每個單體由兩個重鏈和兩個輕鏈組成(對於IgG、IgD和IgE抗體)。這樣，IgA分子有四個抗原結合結構域，每個同樣由VH和VL組成。某些IgA抗體是單體性質的，因為它們由兩個重鏈和兩個輕鏈構成。分泌的IgM抗體一般由五個單體構成，每個由兩個重鏈和兩個輕鏈組成(對於IgG和IgE抗體)。這樣,分泌的IgM分子具有十個抗原結合結構域,每個同樣由VH和VL構成。還存在細胞表面形式的IgM，其與IgG、IgD和IgE抗體類似，具有兩個重鏈/兩個輕鏈的結構。.
用於本文，術語「嵌合抗體」是指經過改造包含至少一個人恆定區的抗體。例如，小鼠抗體(例如小鼠單克隆抗體)的一個或全部(例如，一個、兩個或三個)輕鏈可變區和/或一個或全部(例如，一個、兩個或三個)重鏈可變區可以各自與人恆定區連接，比如但不限於IgGl人恆定區。相對非嵌合抗體，嵌合抗體一般對人的免疫原性較低，因此在某些情況下賦予治療上的益處。本領域技術人員了解嵌合抗體，並且了解製備它們的合適技術。參見例如美國專利4，816，567,4, 978，775,4, 975，369和美國專利4，816，397。用於本文，術語「完全人抗體」是只含有來源於人的胺基酸序列的抗體或抗體的抗原結合片段。例如，完全人抗體可以由人B細胞或者人雜交瘤細胞產生。在其他實施方案中，可以由轉基因動物產生抗體，所述轉基因動物含有人重鏈免疫球蛋白和人輕鏈免疫球蛋白的基因座，或者含有編碼特定人抗體的重鏈和輕鏈的核酸。術語「互補決定區」或「⑶R」用於本文是指重鏈和輕鏈多肽可變區內的短的多肽序列，這些短的多肽序列主要負責介導特異抗原識別。Kabat，et al., J.Biol.Chem.252，6609-6616，1977;Chothia et al., J.Mol.Biol.196:901-917,1987;和MacCallum et al.，J.Mol.Biol.262:732-745，1996 中描述過 CDRs。在每個 VL 和每個 VH中有三個⑶Rs (名稱為⑶R1、⑶R2和⑶R3)。術語「片段」或「抗體片段」用於本文是指來源於抗體多肽分子(例如，抗體重鏈和/或輕鏈多肽)的多肽，不包含全長抗體多肽，但仍含有能夠結合抗原的全長抗體多肽的至少一部分。抗體片段可以包含全長抗體多肽的切割的一部分，雖然這個術語不限於這類切割片段。抗體片段可以包括，例如Fab片段、F (ab』)2片段、scFv (單鏈Fv)片段、線性抗體、單特異性或多特異性抗體片段，比如雙特異性、三特異性和多特異性抗體(例如，二體、三體、四體)、微型抗體、螯合(chelating)重組抗體、三體或二體、內抗體、納米抗體、小模塊免疫藥物(smal l modular immunopharmaceuticals, SMIP)、結合結構域免疫球蛋白融合蛋白、駱駝化抗體和含有VHH的抗體。抗原結合抗體片段的其他例子是本領域已知的。術語「框架區」用於本文是指重鏈和輕鏈多肽可變區內不是CDR序列的胺基酸序列，主要負責維持CDR序列的正確定位以便發生抗原結合。雖然框架區本身一般不直接參與抗原結合，但正如本領域已知的，某些抗體的框架區內的某些殘基可以直接參與抗原結合或者會影響CDRs著一或多個胺基酸與抗原相互作用的能力。術語「人源化抗體」用於本文是指經過改造在可變區內與非人(例如，小鼠、大鼠或倉鼠)重鏈和/或輕鏈互補決定區(CDRs) —起包含一或多個人框架區。在一些實施方案中，人源化抗體包含除了 CDR區完全來自人的序列。相對非人源化抗體，人源化抗體對人的免疫原性一般更低，因此在某些情況中提供了治療上的優勢。人源化抗體是本領域已知的，製備人源化抗體的合適技術也是已知的。參見例如Hwang et al., Methods36:35，2005; Queen et al.，Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86:10029-10033，1989; Jones etal.，Nature321:522-25，1986;Riechmann et al.，Nature 332:323-27，1988;Verhoeyenet al.，Science 239: 1534-36，1988;Orlandi et al.,Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86:3833-3837, 1989;美國專利 5，225，539、5，530，101、5，585，089、5，693，761、5，693，762 和 6，180，370;以及 WO 90/07861。用於本文，術語「Th2相關疾病」是指與異常2型輔助性T細胞(Th2)應答相關的疾病。用於本文，術語「心血管疾病」是指心臟和血管的紊亂，包括動脈、靜脈、小動脈、小靜脈和毛細血管的紊亂。用於本文，術語「肺病」是指肺部的紊亂。術語「其他標記物」意味著能夠診斷特定疾病的存在的蛋白、核酸、脂類或碳水化合物或者它們的組合(例如，兩種或以上)。本文描述的診斷受試者是患有疾病的方法包括檢測來自受試者的樣品中的可溶性人ST2和至少一種其他標記物的水平。可以用於疾病診斷的幾個其他標記物是本領域已知的(例如，proANP、NT-proANP、ANP、proBNP、NT_proBNP、BNP、肌鈣蛋白、CRP、肌酐、血尿氮(BUN)、肝功能酶、白蛋白和細菌內毒素；以及美國專利申請 2007/0248981、2011/0053170、2010/0009356、2010/0055683、2009/0264779 中描述的那些標記物，這些專利申請均通過引用併入本文)。術語「高甘油三酯血症」意味著大於或者等於180ng/mL的甘油三酯水平(例如，大於或等於200ng/mL)。術語「高膽固醇血症」意味著受試者中的至少一種膽固醇形式或者總膽固醇的水平增加。例如，有高膽固醇血症的受試者可能有彡40mg/dL(例如，彡50mg/dL或彡60mg/mL)的高密度脂蛋白(HDL)水平，彡130mg/dL(例如，彡160mg/dL或彡200mg/dL)的低密度脂蛋白(LDL)水平，和/或> 200mg/dL(例如，240mg/dL)的總膽固醇水平。術語「高血壓」意味著升高的收縮和/或舒張壓水平。例如，患有高血壓的受試者可能收縮壓> 12OmmHg(例如，^ 140mmHg或> 16OmmHg)和/或舒張壓> 8OmmHg(例如，^ 9 OmmHg 或 > IOOmmHg)。術語「健康受試者」意味著受試者未患有疾病(例如,心血管疾病或肺病)。例如，健康受試者未被診斷為患有疾病，和未呈現疾病狀態的一或多種(例如，兩種、三種、四種或五種)症狀。「死亡風險」意味著與參照群體(例如，健康對照群體)相比，受試者由於疾病或者與疾病相關的併發症 而死亡的風險。文中使用的術語「死亡風險」不包括故意或者意外死亡，例如由砸傷或壓傷(比如車禍)造成的死亡。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的含義相同。文中描述了本發明使用的方法和材料。也可以使用本領域已知的其他合適的方法和材料。所述材料、方法和實施例僅用於闡述，不是對發明的限制。文中提及的所有出版物、專利申請、專利、序列、資料庫錄入項和其他參考均通過引用全部併入本文。在衝突的情況下，本說明書包括定義優先。從以下詳述和附圖，以及權利要求可以清楚看出本發明的其他特徵和優點。附圖描述

圖1的圖像顯示了重組人可溶性ST2蛋白純化的組分的SDS-PAGE凝膠分析結果。泳道(每個樣品道10 μ L)如下:1-MWM(5 μ L) ;2_His序列梯(3 μ L) ；3 -未轉染陰性對照；4 -純化前的上清；5 -柱子流過液；6 -第一次結合緩衝液洗滌；7 -第二次5mM洗滌；8 -第三次5mM洗滌；9-200mM洗脫流分2 ；10-200mM洗脫流分3 ；ll-200mM洗脫流分
4;12-200mM洗脫流分5 ; 13_200mM洗脫流分6 ; 14_200mM洗脫流分7 ;和15-0.3 μ g可溶性ST2。圖2顯示了用於檢測重組人可溶性ST2蛋白中的組氨酸標籤的純化流分的Western印跡。泳道(每個樣品道10 μ L)如下:1-MWM(5 μ L) ；2 - His序列梯(3 μ L) ；3 -純化前的上清；4 -柱子流過液；5 -第一次結合緩衝液洗滌；6 -第二次結合緩衝液洗滌；7_第二次5mM洗滌；8 -第三次5mM洗滌；9-200mM洗脫流分2 ；10-200mM洗脫流分3 ；
ll-200mM洗脫流分4 ；12-200mM洗脫流分5 ；13-200mM洗脫流分6 ；14-200mM洗脫流分7 ；和15-0.3μ g可溶性ST2。圖3A-3C顯示了純化重組可溶性ST2的考馬斯膠(圖3A)和兩個Western印跡，是與商品抗ST2抗體D066(MBL International)(圖3B)和六組氨酸抗體(圖3C)比較。泳道(每個樣品道10 μ L)如下:1- MWM ;2 - His序列梯；3 -血清ST2_His IOOOng ；4~血清ST2-His 500ng ；5-血清 ST2_His 200ng ；6-血清 ST2_His IOOng ；7-血清 ST2_His 50ng ；8-無血清 ST2-His IOOOng ;9-無血清 ST2-His 500ng ; 10-無血清 ST2_His 200ng;ll_無血清 ST2-Hisl00ng ;和 12 -無血清 ST2_His 50ng。圖4的曲線圖顯示了 7E4和9F8抗體的抗原靈敏度評估結果。圖5的曲線圖顯示了 7E4和9F8抗體的抗原靈敏度評估結果。7E4和9F8抗體以
5μ g/mL-0的濃度包埋在96孔板的單個孔中，對單個濃度的偶聯了生物素的重組可溶性ST2進行測試。圖6的線圖顯示了測試它們一起用於單克隆抗體夾心酶免疫分析(EIA)格式的能力的結果，其中7E4或9F8抗體被生物素化。圖7A-7F的六個圖形顯示了對抗體-抗原複合體形成的表面等離子共振(SPR)分析的結果。圖7A顯示了對抗體9F8(L1)的SPR分析。圖7B顯示了對抗體7E4(L2)的SPR分析。圖7C顯示了對抗體11A7(L3)的SPR分析。圖7D顯示了對抗體D066 (L4)的SPR分析。圖7E顯示了對抗體D067(L5)的SPR分析。圖7F顯示了對無關抗體(L6)的SPR分析。圖8A-8F的六個圖形顯示了抗體-抗原複合體形成的SPR分析結果。圖8A顯示了對抗體9F8 (LI)的SPR分析。圖8B顯示了對抗體7E4 (L2)的SPR分析。圖8C顯示了對抗體11A7 (L3)的SPR分析。圖8D顯示了對抗體15D6 (L4)的SPR分析。圖8E顯示了對抗體D066 (L5)的SPR分析。圖8F顯示了對抗體D067 (L6)的SPR分析。圖9的箱須圖顯示了按照抗凝試管類型的人可溶性ST2濃度。圖10的直方圖顯示了正常健康供體的人可溶性ST2濃度分布。圖11的箱須圖顯示了正常健康供體中作為性別和年齡函數的人可溶性ST2濃度。詳述本文描述了能夠特異結合人可溶性ST2的抗體及其抗原結合片段、含有所述抗體和片段的試劑盒，以及這些抗體和片段的使用方法。ST2ST2基因是白介素-1受體家族的成員，其蛋白產物的存在形式有跨膜形式和可以在血清中檢測到的可溶性受體形式(Kieser et al., FEBS Lett.372 (2-3): 189-193, 1995;Kumar et al.,J.Biol.Chem.270 (46):27905-27913,1995;Yanagisawa etal., FEBS Lett.302(I):51-53，1992;Kuroiwa et al., Hybridomal9(2):151-159,2000)。可溶性ST2據描述在心衰試驗模型中被顯著地上調(Weinberg et al., Circulation106(23):2961-2966, 2002)，並且數據表明人可溶性ST2濃度在那些患有慢性嚴重心衰(Weinberg et al., Circulation 107 (5): 721-726，2003)和患有急性心肌梗塞(Shimpo etal., Circulation 109(18):2186-2190, 2004) 的人中也有升高。
在不希望被理論約束的情況下，跨膜形式的ST2被認為在調理輔助性2型T細胞的應答中有重要作用(Lohning et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.95 (12): 6930-6935,1998; Schmitz et al., Immunity 23 (5): 479-490，2005)，可能在嚴重或慢性炎症狀態下耐受性的發展中發揮作用(Brint et al., Nat.1mmunol.5 (4): 373-379，2004),而可溶性形式的ST2在生長刺激成纖維細胞中被上調(Yanagisawa et al.，1992，同前)。試驗數據表明ST2基因在心肌牽張狀態下被顯著上調(Weinberg et al., 2002,同前)，上調的方式與BNP 基因的誘導類似(Bruneau et al., Cardiovasc.Res.28 (10): 1519-1525, 1994)。Tominaga et al.(FEBS Lett.258:301-304, 1989)分離到在 BALB/cIT3 細胞內受生長刺激特異表達的小鼠基因。Haga et al.(Eur.J.Biochem.270:163-170, 2003)描述了基於其被生長刺激所誘導的ST2基因命名。ST2基因編碼兩種蛋白產物:可溶的分泌形式ST2或sST2 ;和與白介素-1受體非常相似的跨膜受體形式ST2L。The HUGONomenclature Committee 將 ST2 的人同源物(其克隆在 Tominaga et al., Biochim.Biophys.Acta.1171:215-218，1992 中有描述)命名為白介素 I 受體樣(InterleukinIReceptor-Like) I (ILlRLl)。這兩個術語在本文中可交換使用。人ST2的較短可溶性亞型的mRNA序列可以在GenBank登錄號NM_003856.2 (SEQID NO: 2)找到，多肽序列是·GenBank登錄號NP_003847.2(SEQ ID NO:1)。人ST2的較長形式的mRNA序列是GenBank登錄號ΝΜ_016232.4 (SEQ ID NO:4)，多肽序列是GenBank登錄號 NP_057316.3(SEQ ID NO:3) 其他信息在公共資料庫 GeneID:9173, MIM ID#601203 和UniGene N0.Hs.66有提供。總的來說，本文描述的方法中測量的是人可溶性形式的ST2多肽。抗體和抗原結合抗體片段本文提供了與人可溶性ST2結合的分離的抗體及其抗原結合片段。所提供的抗體及其片段可以與雜交瘤產生的抗體競爭結合，所述雜交瘤保藏在ATCC並被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432(分別對應7E4和9F8抗體)。在一些實施方案中，抗體或片段不與D066-3和D067-3抗體(MBLInternational)(在美國專利7，087, 396中有描述)競爭結合，並且結合人可溶性ST2的Kd等於或者小於1.51x10_9M。在一些實施方案中，抗體或片段結合人可溶性ST2的Kd等於或者小於8.59xl0-10Mo文中描述了確定抗體或片段結合人可溶性ST2的親和力(Kd)的方法(例如，表面等離子共振)，其他方法是本領域已知的。還提供了由本文描述的方法產生的7E4和9F8單克隆抗體以及它們的抗原結合片段。用於本文，短語「競爭結合」是指這樣的情況，其中一個抗體或抗體片段與給定抗原的結合降低了第二個抗體或抗體片段與相同抗原的結合。在一些實施方案中，當兩個抗體或片段基本結合的是位於給定抗原(例如，人可溶性人ST2)上的相同表位時，抗體或片段與另一個抗體或片段競爭結合。正如以下實施例中更詳細描述的，被指定為專利保藏命名PTA-10431和PTA-10432的雜交瘤所產生的每一個抗體都識別和被測試的各種其他抗體(例如，來自MBL International的D066-3和D067-3抗體)所識別的不同的表位，因此不會與那些測試抗體競爭結合。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段所結合的人可溶性ST2上的表位被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤產生的抗體識別。確定兩個不同抗體或片段是否競爭結合的方法在文中有描述，並且是本領域已知的(例如，競爭性酶聯免疫吸附法)。
在一些實施方案中，抗體或片段與表位結合或者顯示出提高的結合，所述表位存在於由人細胞(例如，人成纖維細胞、上皮細胞、內皮細胞、或神經細胞、胚胎或成年細胞，或者人胚胎腎細胞，例如HEK293)產生的重組人可溶性ST2蛋白中，但不存在於由非人類細胞類型產生的重組人可溶性ST2中。在一些實施方案中，抗體或片段與表位結合或者顯示出提高的結合，所述表位存在於完全糖基化的人可溶性ST2蛋白(例如，從人細胞中分離的人可溶性ST2蛋白)，而不存在於沒有糖基化或者錯位糖基化或糖基化不足(例如沒有完全糖基化或者糖基化的模式(例如糖的數量、位點和/或類型)在人體(例如在人血清)的天然人可溶性ST2中不存在)的重組人可溶性ST2蛋白中。在一些實施方案中，相比其他商品抗體，抗體和抗體片段與天然人可溶性ST2結合更好(例如，親和力更高)。在一些實施方案中，抗體是保藏在ATCC並指定為專利保藏命名PTA-10431的雜交瘤所產生的單克隆抗體(7E4抗體)，或者是保藏在ATCC並指定為專利保藏命名PTA-10431的雜交瘤所產生的抗體的抗原結合片段(7E4抗體的片段)。在一些實施方案中，抗體是保藏在ATCC並指定為專利保藏命名PTA-10432的雜交瘤所產生的單克隆抗體(9F8抗體)，或者是保藏在ATCC並指定為專利保藏命名PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的抗原結合片段(9F8抗體的片段)。本文描述的兩種或更多種抗體或片段的組合(例如，7E4抗體、7E4抗體片段、9F8抗體和9F8抗體片段中的兩種或更多種)可以用於文中描述的任何方法。指定為專利保藏命名PTA-10431和專利保藏命名PTA-10432的雜交瘤所產生的人可溶性ST2結合單克隆抗體均可通過用分離自人胚胎腎(HEK)-293細胞的重組人可溶性ST2免疫非人哺乳動物來生成。人可溶性ST2有相當大量/數量的翻譯後修飾。根據其胺基酸序列，預測人可溶性ST2的分子量約為36kDa。而天然蛋白由於翻譯後修飾，分子量大約是58kDa。正如本領域已知的，這種翻譯後修飾對抗體或抗體片段結合給定蛋白的能力會有影響。因此，正如以下實施例部分詳細描述的，由指定為專利保藏命名PTA-10431的雜交瘤產生的人可溶性ST2結合單克隆抗體比其他抗體對天然人可溶性ST2有更高的親和力，因此可以作為診斷性和其他試劑。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段包含由指定為專利保藏命名PTA-10431和/或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的重鏈和/或輕鏈(或其片段)。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段包含由指定為專利保藏命名PTA-10431和/或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的重鏈和/或輕鏈可變區(或其片段)。正如本領域已知的，抗體對給定抗原的特異性是由重鏈和輕鏈可變區介導的。具體來說，抗體對給定抗原的特異性主要是由重鏈和輕鏈可變區內被稱為互補決定區或CDRs的短序列決定的。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段含有指定為專利保藏命名PTA-10431和/或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的重鏈和/或輕鏈的一或多個(例如，一個、兩個、三個、四個、五個或六個)⑶Rs。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段包含被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的重鏈的每個CDRs。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段包含被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的輕鏈的每個CDRs。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段包含被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的每個⑶Rs (所有重鏈和輕鏈⑶Rs)。 還提供了與人可溶性ST2特異結合的分離的抗體和抗原結合抗體片段，產生所述抗體和抗原結合抗體片段的過程包括用從腎細胞(例如，人腎細胞、胚胎腎細胞和人胚胎腎細胞)分離的重組人可溶性ST2免疫非人哺乳動物。在一些實施方案中，重組人可溶性ST2被完全糖基化或者含有天然可溶性ST2蛋白中存在的所有翻譯後修飾。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段是嵌合的，因為它包含至少一個人恆定區。例如，由被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤產生的抗體的恆定區可以替換為人恆定區。相對非嵌合抗體，嵌合抗體一般對人的免疫原性更低，因此在某些情況可以帶來治療上的優勢。在一些實施方案中，本文描述的嵌合抗體包含IgGl恆定區。本領域技術人員知道各種人恆定區。製備嵌合抗體的方法是本領域已知的。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段是人源化的，因為它包含至少一個人框架區。例如，由指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的一或多個(例如一個、兩個、三個、四個、五個或六個)框架區可以替換為一或多個(例如一個、兩個、三個、四個、五個或六個)人框架區。相對非人源化抗體，人源化抗體一般對人的免疫原性更低，因此在某些情況可以帶來治療上的優勢。本領域技術人員知道各種人框架區。製備人源化抗體的方法是本領域已知的。例如，可以利用基於CDR同源性的方法進行人源化(參見例如，Hwangetal.,Methods 36:35, 2005)。這些方法通常涉及根據結構類似的非人和人CDRs，而不是結構類似的非人和人框架區，將非人CDRs取代到人可變結構域框架中。確定非人和人CDRs的相似性通常是通過鑑定相同類型鏈的人基因中與非人(例如小鼠)結合分子有相同典型CDR結構組合，因此保持了 CDR肽骨架的三維構象。其次，對於具有匹配典型結構的每個候選可變區基因，將非人和候選的人CDRs的逐個殘基進行同源性評估。最後，為了產生人源化結合分子，將選中的人候選CDR中與非人CDR還不相同的CDR殘基轉換為非人(例如小鼠)序列。在一些實施方案中，人源化結合分子中未引入人框架的突變。在一些實施方案中，將非人CDRs取代到人可變結構域框架中是根據非人可變結構域框架的正確空間取向的保持，這是通過鑑定能夠保持和CDRs所來源的非人可變結構域框架相同構象的人可變結構域 框架。在一些實施方案中，這是通過從這樣的人結合分子獲取人可變結構域實現的，所述人結合分子的框架序列展示出與CDRs所來源的非人可變框架結構域的高度序列同一性。參見例如Kettleborough et al., Protein Engineering4:773，1991;Kolbingeret al., Protein Engineering 6:971，1993 和 WO 92/22653。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段是單特異性的，因為它只識別單個表位。單特異性抗體是本領域已知的(參見例如W0/9639858)。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段是雙特異性的，因為它能識別一個以上的表位(例如，兩個表位)。雙特異性抗體是本領域已知的(參見例如美國專利申請公開2009/0162360)。在一些實施方案中，本文描述的單特異性或者雙特異性抗體或片段能夠結合的表位被這樣的抗體或抗體片段識另Ij，所述抗體或抗體片段具有被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的單克隆抗體的CDRs。在一些實施方案中，雙特異性抗體或片段結合人可溶性ST2，和不同的非ST2多肽。在一些實施方案中，雙特異性抗體或片段結合人可溶性ST2的兩個不同表位。在一些實施方案中，本文描述的抗體或片段是二價的(參見例如W0/1999/064460)。對於包含被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的單克隆抗體的一或多個CDRs的其他抗體和片段的更詳細描述，參見美國專利申請公開20070105199和TO/2007/059782。在一些實施方案中，片段(例如，抗原結合片段)來源於完整抗體分子，例如單克隆抗體。所述抗體可以是例如在它的鉸鏈區的羧基端(用胰蛋白酶)切割產生？(&13』)2片段，或者在它的鉸鏈區的氨基端(用木瓜蛋白酶)切割產生Fab片段。在一些實施方案中，本文描述的抗原結合片段是Fab片段、F(ab』)2片段、scFv片段、線性抗體、多特異性抗體片段，比如雙特異性、三特異性或多特異性抗體(例如，二體、三體或四體)、微型抗體、螯合重組抗體、內抗體、納米抗體、小模塊免疫藥物(SMIP)、結合結構域免疫球蛋白融合蛋白、駱駝化抗體或含有Vhh的抗體。製備這些片段的方法是本領域已知的。在一些實施方案中，本文描述的人可溶性ST2結合抗體或抗原結合抗體片段與被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的重鏈和/或輕鏈相t匕，包含具有一或多個胺基酸取代、缺失或插入的多肽。通過諸如定點突變或PCR介導的突變的常規技術，可以給編碼包含被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體重鏈和/或輕鏈的多肽的核酸分子(例如或者編碼所述重鏈或輕鏈的一或多個(例如一個、兩個或三個)CDR區的核酸)引入取代、缺失或插入。在一些實施方案中，在一或多個位點進行了保守性胺基酸取代。「保守性胺基酸取代」是其中一個胺基酸殘基被具有類似側鏈的胺基酸殘基代替的情況。具有類似側鏈的胺基酸家族在現有技術中已有限定，包括鹼性側鏈(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側鏈(例如，天冬氨酸、穀氨酸)、不帶電荷的極性側鏈(例如，甘氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非極性側鏈(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β側鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香族側鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)。因此，抗人可溶性ST2抗體或人可溶性ST2結合抗體片段的多肽中的胺基酸殘基可以被來自相同側鏈家族的另一個胺基酸殘基代替。在一些實施方案中，本文描述的人可溶性ST2結合抗體或人可溶性ST2結合抗體片段包含的胺基酸序列與被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的重鏈和/或輕鏈至少90%相同、至少95%、96%、97%、98%、99%或100%相同(例如，或者與被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體重鏈和/或輕鏈的至少一個(例如，一個 、兩個或三個)CDR至少90%、95%、96%、97%、98%、99%或100%相同)。例如，本文描述的人可溶性ST2結合抗體或人可溶性ST2結合抗體片段可能含有一或多個⑶Rs，所述⑶Rs在位於被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體重鏈和/或輕鏈中可以看到的相應CDR序列中含有一或多個胺基酸取代、缺失或插入。在一些實施方案中，本文描述的組合物含有兩個或更多個文中所述的不同人可溶性ST2結合抗體或人可溶性ST2結合抗體片段。例如，本文描述的組合物可以含有由被指定為專利保藏命名PTA-10431和PTA-10432的雜交瘤中的一個所產生的抗體。正如以下實施例部分更詳細地描述的，這種抗體組合比任何一種單個抗體以及其他商品抗體都顯示出對ST2抗原更高的親和力。本文描述的這種含有抗體或抗原結合片段的組合物會在許多方法中都有用，例如診斷方法。在一些實施方案中，本文描述的組合物含有兩個或更多個不同ST2結合片段(例如，Fab片段、F(ab)2片段或scFv片段)，比如來源於被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤所產生的抗體的片段。
在任何以上方法中，抗體或抗體片段都可以被糖基化或者標記。例如，抗體和抗體片段可以被標記上可檢測的物質，包括但不限於各種酶、輔基、螢光物質、發光物質、生物發光物質和放射性物質。合適的酶的例子包括辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β -半乳糖苷酶或乙醯膽鹼酯酶；合適的輔基複合體的例子包括鏈黴親和素/生物素和親和素/生物素；合適的螢光物質的例子包括傘形酮、螢光素、異硫氰酸螢光素、若丹明、二氯三嗪氨基螢光素、丹醯氯、量子點或藻紅蛋白；發光物質的例子包括魯米諾(Iuminol);生物發光物質的例子包括螢光素酶、螢光素和水母發光蛋白；合適的放射性物質的例子包括1251、m1、35S或3H。雜交瘤本文還提供了能夠產生結合人可溶性ST2的抗體的雜交瘤。正如本領域已知的，術語「雜交瘤」是指通過將產生抗體的淋巴細胞和不產生抗體的癌細胞(通常是骨髓瘤或淋巴瘤)融合產生的細胞。融合後,雜交瘤增殖並產生特定的本來由被融合的淋巴細胞產生的單克隆抗體。在一些實施方案中，提供的雜交瘤是保藏在ATCC並被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤。在一些實施方案中，還提供了單個細胞、收穫細胞和培養物，其含有來源於保藏在ATCC並被指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-10432的雜交瘤的細胞。所提供抗體和片段的使用方法特別是為了預測一年內死亡的風險、確定是否允許受試者出院或者開始或繼續其住院治療、選擇參與臨床試驗的受試者、診斷受試者患有疾病或者確認有發展出疾病的風險的受試者，一或多個本文描述的任意抗體或抗體片段可以用於定量樣品(例如來自受試者的樣品)中的人可溶性ST2水平。人可溶性ST2水平的定量方法本文提供了確定受 試者樣品中人可溶性ST2水平的方法，所述方法包括將樣品與至少一種本文描述的抗體或抗體片段進行接觸；和檢測抗體或片段與人可溶性ST2的結合。在一些實施方案中，使用了至少兩種(例如，兩種、三種或四種)本文描述的抗體或抗體片段來確定受試者樣品中的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，受試者未被診斷或者沒有呈現出疾病的一或多個(例如兩個、三個或四個)症狀。在一些實施方案中，受試者已被診斷為患有與ST2水平升高相關的疾病(例如心衰、冠狀動脈疾病、心血管疾病、急性冠狀動脈症候群、腎功能不全、中風或者本文描述的其他疾病中的任意一種)。在一些實施方案中，受試者患有高甘油三酯血症、高膽固醇血症、高血壓、腎功能不全中的一或多種(例如兩種、三種或四種)，並且身體質量指數> 30。在一些實施方案中，樣品含有血液、血清或血漿。在一些實施方案中，樣品可以由醫護人員(例如，刺絡醫師、醫師、護士、醫師助理或實驗室技術員)從受試者採集。樣品在與至少一種本文描述的抗體或片段接觸前，可以(例如，在<4° C、<0° C或-80° C)保存一段時間，檢測抗體或片段的結合。文中描述了將生物樣品與抗體或抗體片段進行接觸以及檢測抗體或片段結合的方法，其他方法是本領域已知的。定量還可以包括檢測至少一種本文描述的抗體或抗體片段與純化的重組人可溶性ST2(例如，分離自人胚胎腎細胞的重組人可溶性ST2)的結合的對照實驗。在一些實施方案中，對正常或健康受試者中的人可溶性ST2水平進行了定量。所述正常或健康受試者是這樣的受試者，其未受累於ST2相關狀況(例如,本文描述的ST2相關狀況)、未被診斷為患有疾病(例如，任何本文描述的疾病)並且沒有出現疾病的兩個或更多個(例如，兩個、三個或四個)症狀。正常或健康受試者可以通過本領域已知的多種技術中的任何一種來確認，包括但不限於通過生物標記物篩選或體檢(例如，通過沒有與ST2相關狀況或者任何其他本文描述的疾病關聯的兩種或多種症狀的外在表現形式)。例如，通過篩選低水平的一或多個標記物可以篩選出沒有潛血CVD或炎症性疾病的正常或健康受試者，其中所述標記物包括，但不限於腦鈉肽(BNP)、前降鈣素(PCT)、C反應蛋白(CRP)和白介素-6(IL-6)。本領域技術人員知道用於確定正常或健康受試者沒有顯示潛血CVD或炎症性疾病，或者任何本文描述的其他疾病的其他合適標記物。來自受試者 (例如，正常或健康受試者)的樣品中的人可溶性ST2水平的定量在許多情況中都是有用的。在一些實施方案中，可以周期性地定量受試者(例如，正常或健康受試者、發展出疾病的風險增加的受試者、被診斷患有疾病的受試者或者呈現疾病的兩種或更多種症狀的受試者)的人可溶性ST2水平，例如每天、每周、每兩周、每月、每兩月、每年等，或者周期性的體檢。本領域技術人員一種的多種技術中的任何一種，包括文中描述的那些，都可以用於利用本文描述的抗體和抗體的抗原結合片段來對受試者中的人可溶性ST2進行定量。在一些實施方案中，對照受試者(例如正常或健康受試者)中的人可溶性ST2水平經過定量得到參照水平，以便用於確定受試者不存在ST2相關狀況、有發展成疾病的風險、或者有一年內死亡的風險。例如，可以定量未患疾病的受試者中的人可溶性ST2水平來得到人可溶性ST2參照水平，所述疾病是比如，但不限於心血管疾病、心衰、冠狀動脈疾病、急性冠狀動脈症候群、腎功能不全、中風、肺病、敗血症、川崎病或Th2相關疾病，或者本文描述的任何其他疾病。在一些實施方案中，本文公開的抗體或抗原結合片段中的至少一個可以用於定量受試者(例如正常或健康受試者)中的人可溶性ST2水平。例如,受試者(例如正常或健康受試者)中人可溶性ST2水平可以在免疫分析法中利用至少一種本文描述的抗體或抗原結合片段(例如，與保藏在ATCC並指定為專利保藏命名PTA-10431或PTA-104312的雜交瘤所產生的抗體競爭結合的抗體或片段，或這兩種)來定量。在一些實施方案中，對樣品中的人可溶性ST2水平進行定量以便保證常規操作的再現性、參照範圍、臨床臨界值等。例如可以定量兩個或更多個樣品(例如參照樣品)中的人可溶性ST2水平，並評估兩個或更多個樣品之間人可溶性ST2水平的變異係數(「Cr』)。此外或者替代地，樣品(或受試者)中的人可溶性ST2水平可以定量兩次或更多次(例如，利用不同批次的參照樣品，或者從相同受試者取的不同樣)，並確定人可溶性ST2水平之間的CV。在一些實施方案中，人可溶性ST2水平之間的CV小於20%』例如，小於19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1% 或更低。在一些實施方案中，提供了確定受試者是否具有正常的人可溶性ST2水平的方法。確定受試者是否具有正常的人可溶性ST2水平在許多情況中都是有用的。在一些實施方案中，確定受試者是否具有正常的人可溶性ST2水平的方法包括分析檢測受試者樣品(例如，任何以上描述的樣品，比如但不限於含有血液、血清或血漿的樣品)中的人可溶性ST2的水平，其中如果發現樣品中的人可溶性ST2水平與已知的正常或中值人可溶性ST2水平基本類似；或者如果樣品中的人可溶性ST2水平落在某個範圍內，例如在已知的正常或中值人可溶性ST2水平(例如，95%置信區間或者四分位距，或者任何表9中列出的範圍)附近，可以確定受試者具有正常的人可溶性ST2水平。例如，如果來自受試者的樣品經分析檢驗發現樣品中的人可溶性ST2水平位於已知正常或中值人可溶性ST2水平(例如正常或健康受試者中的中值水平)的95%置信區間，可以確定受試者具有正常的人可溶性ST2水平。此外或者替代地，如果來自受試者的樣品經分析檢驗發現樣品中的人可溶性ST2水平位於已知的正常或中值人可溶性ST2水平的四分位距，可以確定受試者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果受試者樣品中的人可溶性ST2水平是大約18.8ng/mL，可以確定該受試者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果樣品中的人可溶性ST2水平在大約14.5-25.3ng/mL的範圍內，可以確定該受試者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果樣品中的人可溶性ST2水平在大約18.1-19.9ng/mL的範圍內，可以確定該受試者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果來自受試者的樣品中的人可溶性ST2水平是大約16.2ng/mL，可以確定該女性受試者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果樣品中的人可溶性ST2水平位於表9列出的任何範圍之內，可以確定該女性具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果來自受試者的樣品中的人可溶性ST2水平是大約23.6ng/mL，可以確定該男性受試者具有正常的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，如果樣品中的人可溶性ST2水平位於表9列出的任何範圍之內，可以確定該男性具有正常的人可溶性ST2水平。

在一些實施方案中，如果受試者樣品中的人可溶性ST2水平低於閾值(例如，25.3ng/mL，或者19.9ng/mL(對於女性)或30.6ng/mL(對於男性))，可以確定受試者(例如，男性或女性受試者)具有正常的可溶性ST2水平。提到受試者中的人可溶性ST2水平的數值或範圍(例如正常的人可溶性ST2水平的範圍)時使用的術語「大約」或「基本相同」是指參照數值或範圍周圍的間距，例如為了評估人可溶性ST2水平(例如，正常的人可溶性ST2水平或患有疾病或者呈現兩種或更多種疾病症狀的患者群的人可溶性ST2水平)的目的，本領域技術人員會認為是等同於參照數值或範圍(例如，表9中列出的任何範圍)的數值或範圍。用於本文，當人可溶性ST2水平(例如，正常的人可溶性ST2水平)的數值或範圍位於參照數值或範圍的+/_25%，例如在數值或範圍的 +/_20%、+/-15%、+/-10%、+/-9%、+/-8%、+/-7%、+/_6%、+/_5%、+/_4%、+/_3%、+/-2%或+/-1%內，則所述數值或範圍「大約」是參照數值或範圍。在一些實施方案中，至少一或兩個本文描述的任意抗體或抗原結合片段可以用於確定受試者是否具有正常的人可溶性ST2水平、是否具有與疾病相關的人可溶性ST2水平，或者是否具有與發展成疾病的風險增加或者一年內死亡的風險增加相關的人可溶性ST2水平。預測一年內死亡風險的方法亦提供了在受試者中預測一年內死亡風險的方法，其包括從受試者獲得樣品，並使用至少一種本文中所述的抗體或抗體片段確定樣品中人可溶性ST2的水平。與人可溶性ST2的參照水平相比，樣品中升高水平或基本上相同水平的人可溶性ST2表明所述受試者在一年內具有增加的死亡風險(例如，相對於在樣品中與相同參照水平的ST2相比具有減少水平的人可溶性ST2的受試者(例如，具有或診斷患有相同疾病的受試者)，在一年內具有增加的死亡風險)。與人可溶性ST2的參照水平相比，樣品中減少水平的人可溶性ST2表明所述受試者在一年內具有較低的死亡風險(例如，相對於在樣品中與相同參照水平的ST2相比具有升高水平或基本上相同水平的人可溶性ST2的受試者(例如，具有或診斷患有相同疾病的受試者)，在一年內具有較低的死亡風險)。通過本文中所述的方法確定的在一年內的死亡風險水平會取決於疾病狀態。
在一些實施方案中，受試者未經診斷或未呈現疾病的一種或多種(例如兩種、三種、四種或五種)症狀。在一些實施方案中，所述受試者經診斷具有疾病(例如心衰，冠狀動脈病，心血管疾病，急性冠狀動脈症候群，腎功能不全，或中風，或任何本文中所述疾病)。在一些實施方案中，所述受試者具有下述一種或多種(例如一種、兩種、三種或四種):高甘油三酯血症，高膽固醇血症，高血壓，和> 30的體重指數。在一些實施方案中，所述確定使用至少一種(例如兩種、三種、四種或物種)本文中所述的抗體或片段進行。在一些實施方案中，所述人可溶性ST2的參照水平是人可溶性ST2的閾值水平(例如健康患者群體如健康男性患者全體或健康女性患者群體的人可溶性ST2的中位水平，或人可溶性ST2中位水平的百分位數(例如75、80、85、90或95百分位數，或任何表9中列出的範圍或濃度))。在一些實施方案中，所述參照水平可以是未出現與ST2水平升高有關的疾病的一或多種症狀的患者樣品中的人可溶性ST2水平。在一些實施方案中，所述參照水平可以是在未診斷具有疾病(例如心衰，冠狀動脈病，心血管疾病，急性冠狀動脈症候群，腎功能不全，中風，或任何本文中所述疾病)的受試者或鑑定為不具有發生疾病(例如任何本文中所述疾病)風險的受試者的樣品中存在的人可溶性ST2的水平。其它的參照水平可由本領域技術人員確定。在一些實施方案中，所述人可溶性ST2參照水平是約30ng/mL至約35ng/mL。在一些實施方案中，當受試者患有心衰時，人可溶性ST2參照水平為約30ng/mL至約35ng/mL。在一些實施方案中，所述人可溶性ST2參照水平為約35ng/mL或約60ng/mL。在一些實施方案中，樣品含有血、血清或血漿。可獲得所述樣品，且使用至少一種本文中所述的抗體或片段確定人可溶性ST2的水平可如本文中所述進行。確定是否讓住院的受試者出院或起始或繼續治療的方法亦提供了確定是否讓住院的受試者出院或起始或繼續治療的方法，其包括從受試者獲得樣品，並使用本文中所述的至少一種(例如兩種)抗體或抗體片段確定樣品中的人可溶性ST2的水平，其中與人可溶性ST2的參照水平相比，樣品中人可溶性ST2的升高水平表明應起始或繼續所述受試者的住院治療(例如醫院收容(hospitalization)或收容入輔助護理機構(admittance into anassisted-care facility),而與人可溶性ST2的參照水平相比，樣品中降低或相同水平的人可溶性ST2表明讓所述受試者出院。為了確定是否應繼續住院治療，該方法可對於相同受試者進行數次(例如每周進行一次，每周進行兩次，每周進行三次，每月進行一次，每月進行兩次，每月進行三次，和每月進行四次)。在一些實施方案中，所述受試者未經診斷，未呈現疾病狀態的兩種或更多種症狀，或未鑑定為具有發生疾病(例如任何本文中所述疾病)的風險。在一些實施方案中，所述受試者經診斷為患有疾病(例如心衰,冠狀動脈病，心血管疾病，急性冠狀動脈症候群，腎功能不全，中風，或任何本文中所述疾病)，呈現疾病(例如任何本文中所述疾病)的一種或多種症狀，或經鑑定為具有發生疾病(例如任何本文中所述疾病)的風險。在一些實施方案中，所述受試者具有下述一種或多種(例如一種、兩種、三種或四種):高甘油三酯血症，高膽固醇血症，高血壓，和> 30的體重指數。在一些實施方案中，所述受試者並未診斷為患有心衰，冠狀動脈病，心血管疾病，急性冠狀動脈症候群，腎功能不全，或中風，或任何本文中所述疾病。在一些實施方案中，人可溶性ST2的水平的確定使用至少兩種本文中所述的抗體或抗體片段進行。在一些實施方案中，人可溶性ST2的參照水平可為任何本文中所述的參照水平。其它人可溶性ST2參照水平可由本領域技術人員確定。在一些實施方案中，所述樣品含有血、血清或血漿。可獲得所述樣品，且使用至少一種本文中所述的抗體或片段確定人可溶性ST2的水平可如本文中所述進行。選擇參與臨床研究的受試者的方法亦提供了用於選擇參與臨床研究的受試者的方法。這些方法包括從受試者獲得樣品，使用本文中所述的至少一種抗體或抗體片段確定樣品中的人可溶性ST2的水平，並且如果該受試者的人可溶性ST2水平相對於人可溶性ST2的參照水平表明應選擇該受試者參與臨床研究，選擇所述受試者參與臨床研究。在一些實施方案中，人可溶性ST2的升高水平的存在表明應選擇該受試者參與臨床研究。在一些實施方案中，人可溶性ST2的升高水平的存在表明應排除該受試者參與臨床研究。在一些實施方案中，所述受試者未經診斷，未呈現疾病(例如任何本文中所述疾病)狀態的兩種或更多種症狀，或未鑑定為具有發生疾病(例如任何本文中所述疾病)的風險。在一些實施方案中 ，所述受試者經診斷為患有疾病(例如心衰，冠狀動脈病，心血管疾病，急性冠狀動脈症候群，腎功能不全，中風，或任何本文中所述疾病)，呈現疾病(例如任何本文中所述疾病)的一種或多種症狀，或經鑑定為具有發生疾病(例如任何本文中所述疾病)的風險。在一些實施方案中，所述受試者具有下述一種或多種(例如一種、兩種、三種或四種):高甘油三酯血症，高膽固醇血症，高血壓，和> 30的體重指數。所述確定使用至少兩種本文中所述的抗體或抗體片段進行。在一些實施方案中，人可溶性ST2的參照水平可為任何本文中所述的參照水平。其它人可溶性ST2參照水平可由本領域技術人員確定。在一些實施方案中，所述樣品含有血、血清或血漿。可獲得所述樣品，且使用至少一種本文中所述的抗體或片段確定人可溶性ST2的水平可如本文中所述進行。選擇治療的方法亦提供了對於受試者選擇治療的方法，其包括從受試者獲得樣品，並使用本文中所述的至少一種抗體或抗體片段確定樣品中的人可溶性ST2的水平，其中與人可溶性ST2的參照水平相比，樣品中人可溶性ST2的升高水平表明應對受試者提供特定治療。舉例而言，所述特定治療可選自下組:亞硝酸鹽、鈣通道阻斷劑、利尿劑、血栓溶解劑、洋地黃、腎素-血管緊張素-醛固酮系統(RAAS)調節劑(例如β_腎上腺素能阻滯劑(例如阿普洛爾(alprenolol)、布新洛爾(bucindolol)、卡替洛爾(carteolol)、卡維地洛(carvedilol)、拉貝洛爾(Iabetalol)、納多洛爾(nadolol)、噴布洛爾(penbutolol)、口引哚洛爾(pindolol)、普萘洛爾(propanolol) (inderal)、索他洛爾(sotalol)、噻嗎洛爾(timolol)、醋丁洛爾(acebutolol)、阿替洛爾(atenolol)、倍他洛爾(betaxolol)、比索洛爾(bisoprolol)、塞利洛爾(celiprolol)、艾司洛爾(esmolol)、美託洛爾(metoprolol)和萘必洛爾(nebivolol)、血管緊張素轉化酶抑制劑(例如貝那普利(benazepril)、卡託普利(captopril)、依那普利(enalopril)、福辛普利(fosinopril)、賴諾普利(Iisinopril)、莫昔普利(moexipril)、培哚普利(perindopril)、喹那普利(quiapril)、雷米普利(ramipril)和群多普利(trandolapril)),醒留酮拮抗劑(例如螺內酯(spironolactone)、依普利酮(eplerenone)、坎利酮(canrenone) (canrenoatepotassium)、prorenone (prorenoate potassium)和 mexrenone(mexrenoatepotassium))、腎素抑制劑(例如阿利吉侖(aliskiren)、瑞米吉侖(remikiren)和依那吉侖(enalkiren))、和血管緊張素II受體阻滯劑(例如糹顏沙坦(valsartan)、替米沙坦(teImisartan)、氯沙坦(1sartan)、厄貝沙坦(irbesartan)和奧美沙坦(olmesartan))、和降膽固醇劑(例如抑制素)。其它用於治療的方法在本領域中也是已知的，例如Braunwald’s Heart Disease:ATextbook of CardiovascularMedicine, Single Volume, 9th Edition。具體治療亦可為向受試者施用至少一種或多種治療劑，改變(例如增加或減少)向受試者施用的一種或多種治療劑的頻率、劑量或長度，或從患者的治療方案中去除至少一種或多種治療劑。所述治療亦可為受試者的住院護理(例如將受試者收容或重新收容至醫院(例如重症監護或危症監護單元)或輔助護理機構)。在一些實施方案中，所述治療是手術(例如器官或組織移植或血管成形術)。在一些實施方案中，所述人可溶性ST2的參照水平可為任何本文中所述的參照水平。其它人可溶性ST2參照水平可由本領域技術人員確定。在一些實施方案中，所述樣品含有血、血清或血漿。可獲得所述樣品，且使用至少一種本文中所述的抗體或片段確定人可溶性ST2的水平可如上所述進行。診斷受試者的方法本文中 所述的方法可用於廣泛種類的臨床背景。舉例而言，此類方法可用於一般性群體篩選(general population screening),包括由醫師篩查,例如在醫院和門診診所中，以及急診室中。在一些實施方案中，本文中所述的方法可用於確定受試者中疾病存在的可能性。增加水平的人可溶性ST2通常與某些疾病的存在相關，所述疾病如但不限於:心血管疾病，肺病，敗血病，川崎病，和Th2相關疾病，以及任何本文中所述的其它疾病。Th2相關疾病是與異常2型T輔助細胞(Th2)應答相關的疾病。Th2相關疾病由數個因素表徵，包括但不限於TNF-alpha、IL-4、-5、-6、-10和-13,但非IFN-gamma的存在(Robinson, J.Allergy Clin.1mmunol.92:313, 1993)。CD4+T 細胞根據其分泌的細胞因子分類。Th2細胞分泌大量白介素-4(IL-4)，IL-5和IL-13，其促進B細胞的抗體產生和成纖維細胞的膠原合成，而Thl細胞分泌大量幹擾素-Y和相關的促炎症細胞因子。Thl型和Th2型的細胞因子可交叉調節彼此的應答。認為Thl/Th2的失衡導致數種感染、變態反應和自身免疫性疾病的發病。某些示例性Th2相關疾病包括但不限於，系統性紅斑狼瘡和哮喘，以及主要獨立於Th2應答的炎性病狀(inflammatoryconditions),如感染性休克或外傷(Trajkovic 等，Cytokine Growth Factor Rev.15:87-95，2004;Brunner 等，IntensiveCare Med.30:1468-1473, 2004) 0其它示例性Th2相關疾病包括先兆子癇和多發性硬化。在一些實施方案中，Th2相關疾病是自身免疫性疾病。自身免疫性疾病通常在當受試者的免疫系統針對一種或多種受試者的組分(細胞、組織或不含細胞/組織的分子)活化，並攻擊該受試者自身的正常器官、組織或細胞時發生。示例性自身免疫性疾病包括但不限於腎上腺素能藥抗性(adrenergic drug resistance)，斑秀(alopecia areata)，強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis)，抗憐脂症候群(antiphospholipidsyndrome)，自身免疫性阿狄森病(autoimmune Addison』 s disease)，腎上腺的自身免疫性疾病(autoimmunediseases of the adrenal gland)，變應性腦脊髓炎(allergic encephalomyelitis),自身免疫性溶血性貧血(autoimmune hemolyticanemia),自身免疫性肝炎(autoimmunehepatitis)，自身免疫性炎性眼病(autoimmune inflammatory eye disease)，自身免疫性新生兒血小板減少症(autoimmune neonatal thrombocytopenia),自身免疫性嗜中性白血球減少症(autoimmune neutropenia),自身免疫性卵巢炎和睪丸炎(autoimmuneoophoritisand orchitis)，自身免疫性血小板減少(autoimmune thrombocytopenia),自身免疫性甲狀腺炎(autoimmune thyroiditis)，貝切特病(Behcet』 s disease)，大皰性類天皰瘡(bullous pemphigoid)，心肌病(cardiomyopathy)，心內血回收症候群(cardiotomy syndrome), 口炎性腹灣-皮炎(celiac sprue-dermatitis)，慢性活動性肝炎(chronic active hepatitis)，慢性疲勞免疫功能障礙症候群(chronic fatigueimmunedysfunction syndrome (CFIDS))，急性炎性脫髓鞘性多神經病(chronicinfIammatorydemyelinating polyneuropathy),丘-施二氏症候群(Churg-Strausssyndrome)，症痕性類天皰瘡(cicatrical pemphigoid)，CREST 症候群(CRESTsyndrome)，冷凝集素病(cold agglutinin disease)，克羅恩病(Crohn，s disease)，緻密沉積物病(dense deposit disease)，與來自器官移殖作用相關的疾病(diseases associatedwith effects from organ transplantation)，盤狀狼瘡(discoidlupus)，特發性混合型冷沉澱球蛋白血症(essential mixed cryoglobulinemia)，纖維肌痛-纖維肌炎(fibromyalgia-fibromyositis),腎小球腎炎(glomerulonephritis 例如 IgA 腎病(IgAnephrophathy))，麩膠敏感性腸病(gluten-sensitiveenteropathy)，古德帕斯丘症候群(Goodpasture’s syndrome)，移植物抗宿主病(graft vs.host disease (GVHD))，格雷夫斯病(Graves』 disease，包括例如格雷夫斯甲狀腺炎(Graves thyroiditis)和格雷夫斯眼病(Graves opthalmopathy))，格-巴二氏多神經炎(Guillain-Barre)，甲狀腺功能允進症(hyperthyroidism，即橋本甲狀腺炎(Hashimoto』 s thyroiditis))，特發性肺纖維變性(idiopathic pulmonaryf ibrosis)，特發性阿狄森病(idiopathic Addison』 s disease)，特發性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenia purpura(ITP))，IgA 神經病(IgA neuropathy)，膜島素耐受症候群(Insulin Resistance Syndrome)，幼年型關節炎(juvenilearthritis)，扁平苔蘚(lichen planus)，紅斑性狼瘡(lupus erythematosus),梅尼爾病(Meniere』 s disease)，代謝症候群(Metabolic Syndrome)，混合性結締組織病(mixed connective tissue disease)，多發性硬化(multiple sclerosis)，重症肌無力(Myasthenia Gravis)，心肌炎(myocarditis)，糖尿病(diabetes，例如 I 型糖尿病(Type
Idiabetes)或II型糖尿病(diabetes))，神經炎(neuritis)，其它內分泌腺衰竭(otherendocrine gland failure)，尋常型天皰瘡(pemphigus vulgaris)，惡性貧血(perniciousanemia)，結節性多動脈炎(polyarteritis nodosa)，多軟骨炎(polychrondritis)，多內分泌腺病(Polyendocrinopathies)，多腺性症候群(polyglandular syndromes)，風溼性多肌痛(polymyalgia rheumatica)，多肌炎和皮肌炎(polymyositis and dermatomyositis)，心肌梗塞後心包炎(post-myocardial infarct ion)，原發性無丙種球蛋白血症(primaryagammaglobulinemia),原發性膽汁性肝硬變(primary biliary cirrhosis)，銀屑病(psoriasis)，銀屑病關節炎(psoriatic arthritis)，雷諾現象(Raynaud’s phenomenon)，復發性多軟骨炎(relapsing polychondritis)，萊特爾症候群(Reiter』 s syndrome),風溼性心臟病(rheumatic heart disease)，風溼性關節炎(rheumatoid arthritis)，結節病(sarcoidosis)，硬皮病(scleroderma)，口腔乾燥-風溼性關節炎症候群(Sjogren』 ssyndrome)，僵體症候群(stiff-man syndrome)，系統性紅斑狼瘡(systemiclupuserythematosus)，大動脈炎(Takayasu arteritis)，顳動脈炎/巨細胞動脈炎(temporalarteritis/giant cell arteritis)，潰痕性結腸炎(ulcerative colitis)，蕁麻疫(urticaria)，葡萄膜炎(uveitis)，眼葡萄膜炎(uveitis opthalmia)，血管炎(vasculitides)如皰疫樣皮炎血管炎(dermatitis herpetiformis vasculitis)，白癒風(vitiligo)，和韋格納肉芽腫病(Wegener，s granulomatosis)。心血管疾病是心臟和血管的病症，並包括動脈、靜脈、微動脈和毛細血管的病症。由本文中所述方法診斷的心血管疾病可包括但不限於充血性心衰(congestiveheart failure，HF)，急性冠狀動脈病(acute coronary artery disease，CAD)，心律失常(arrhythmia)，不對稱性室中隔肥大(asymmetric septalhypertrophy)(例如左心室肥大伴隨舒張期功能障礙(left ventricular hypertrophywith resultant diastolicdysfunction))，心肌病(cardiomyopathy)，辧膜功能障礙(valvular dysfunction)，心包炎(pericarditis)，動脈粥樣硬化(atherosclerosis)，和急性心肌梗死(acutemyocardial infarction，Ml)。肺病是肺的病症。由本文中所述的方法診斷的肺病可包括但不限於)，慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease (COPD))，哮喘(asthma)，(pneumonia)，氣胸(pneumothorax)，肺栓塞(pulmonary embolism)，晚期呼吸窘迫症候群(advanced respiratory distress syndrome (ARDS))，胸腔積液(pleuraleffusion)，轉移性疾病(metast atic disease)，肺水腫(pulmonary edema)，胃食管返流疾病伴吸引術(gastrooesophageal reflux disease with aspiration)，間質性纖維化(interstitialfibrosis)，肺塵埃沉著病(pneumoconiosis)，肉芽腫病(granulomatous disease)，膠原血管病(collagen vascular disease)，和限制性肺疾病(restrictive lung disease)。若受試者具有人可溶性ST2的升高水平，例如與參照水平相比升高，則可作出積極治療受試者的決定，且所述受試者可由醫院收容以供住院治療，例如在醫院(例如急症監護或危症監護單元)或輔助護理機構中。確定受試者是否患有疾病如心血管疾病或肺病，敗血病，川崎病，或Th2相關疾病，或任何本文中所述疾病，在多種情況下是需要的。舉例而言，可攜式測試試劑盒可允許急救醫療人員在當場衡量受試者，以確定是否應將其運送至急診科。而且，傷員檢別分類決定(triage decision)，如在急診科或其它臨床情形中的傷員檢別分類決定，亦可基於由本文中所述方法提供的信息作出。呈現增加的人可溶性ST2水平的那些患者應相對於具有較低水平的那些患者優先處置。
在一些實施方案中，人可溶性ST2的水平確定一次，例如，當懷疑受試者患有疾病時(例如，當交付予醫學從業人員或健康護理設施時)。在一些實施方案中，人可溶性ST2的水平在懷疑受試者患有疾病(例如，當交付予醫學從業人員或健康護理設施時)之後2、4、6、8、12、18和/或24小時，和/或1-7日或更久中的一個或多個時點確定。在一些實施方案中，人可溶性ST2的水平的確定多於一次。在一些實施方案中，當人可溶性ST2的水平的確定多於一次時，可使用最高水平，或可確定並使用水平之間的變化。人可溶性ST2的水平亦可確定多次以衡量受試者對治療的響應。舉例而言，可將在施用治療(例如一劑或多劑或一輪或多輪治療)之後獲取的人可溶性ST2水平與在起始治療之前的人可溶性ST2的水平(例如基線水平)相比較。人可溶性sT2水平之間的變化會表明治療是否有效，例如，人可溶性ST2水平的減少會表明治療是有效的。在一些實施方案中，測定受試者中人可溶性ST2的水平並與人可溶性ST2參照水平相比較。任何本領域技術人員已知的多種技術可用於測定受試者中的人可溶性ST2水平。示例性測定方法包括但不限於，本領域已知方法如定量PCR或Northern印跡分析。在一些實施方案中，受試者中人可溶性ST2的水平使用免疫分析法如酶聯免疫吸附分析(ELISA)測定。舉例而言，在一些實施方案中，將抗體或其抗原結合片段與來自受試者的樣品相接觸。樣品可包含或來源於任何受試者的多種細胞或組織。舉例而言，樣品可含有血、血清或血漿中的一種或多種。然後，檢測並任選地定量抗體或抗體片段的結合，並基於抗體或抗體片段結合的水平確定蛋白質水平。在一些`實施方案中，樣品基本上不含ST2蛋白質的ST2L形式，使得根據本文中公開的方法檢測出的樣品中的ST2的大多數是人可溶性ST2。在一些實施方案中，樣品不含可檢測的ST2L，使得樣品中僅有的可檢測的ST2是人可溶性ST2。在一些實施方案中，基本上不含ST2L，或不含可檢測的ST2L的樣品，是血清或血樣品。在一些實施方案中，使用至少一種本文中所述的抗體或抗原結合片段在免疫分析法中測定受試者中的人可溶性ST2水平。如下文實施例部分更加詳細地敘述，包含由在ATCC保藏並賦予專利保藏號PTA-10431的雜交瘤產生的抗體的抗體組合物相對於其它商業上可獲得的抗體，對人可溶性ST2抗原呈現增加的親和力。此類抗體可依照本文中所述方法使用。本文中所述方法可用於確定受試者不患有ST2相關病狀。ST2相關病狀是與升高水平的ST2相關的病狀。某些示例性的ST2相關病狀包括但不限於心血管疾病，肺病，敗血病，川崎病，和Th2相關疾病。ST2相關病狀通常是嚴重的，且通常要求積極治療。呈現某些非特異性症狀的受試者可能患有或未患有ST2相關病狀(例如心血管疾病，肺病，敗血病，川崎病，或Th2相關疾病)。非特異性症狀包括但不限於胸痛或不適，呼吸急促，噁心，嘔吐，噯氣(eructation)，流汗，心悸，頭暈，疲勞和昏厥。每個症狀可具有不同的病因。在一些實施方案中，本文中所述的方法可用於風險分層(riskstratification),例如，確定受試者具有低嚴重性或低風險形式的ST2相關病狀。舉例而言，某些患有心血管疾病(例如心肌梗死或心衰)的受試者具有不利後果(如死亡或復發心臟事件)的風險低，並呈現較低濃度的人可溶性ST2，是與患有心血管疾病、且不利後果的風險高的受試者中觀察到的相比。此類受試者可視為具有「低嚴重性」或「低風險」形式的ST2相關心血管病狀。然而，無論在高風險還是在低風險群體中，均觀察到與在未患有ST-2相關病狀的受試者中觀察到的相比較高濃度的人可溶性ST2。患有低嚴重性形式的ST2相關病狀的受試者通常具有高於人可溶性ST2參照水平(例如健康或正常個體的人可溶性ST2中位濃度)的人可溶性ST2濃度，而患有高嚴重性形式的ST2相關病狀的受試者通常具有高於人可溶性ST2參照水平(例如健康或正常個體中觀察到的人可溶性ST2濃度)的80%的人可溶性ST2濃度。確定呈現某些非特異性症狀的受試者並不患有，或患有低嚴重性形式的ST2相關病狀，可導致改善的診斷和/或更加有效的治療決策，例如此種受試者可能不需要積極治療。舉例而言，在急性心肌梗死之後人可溶性ST2濃度升高的患者與人可溶性ST2濃度低的患者相比呈現更多的心重塑(cardiac remodeling)(增加的纖維化)，而且在呈現人可溶性ST2高濃度的受試者中，依普利酮差異化地減弱心重塑(Weir等，J.Am.Coll.Cardiol.55:243-250,2010)。因此，可使用人可溶性ST2濃度鑑定哪個患者應接受不同的，可能是非標準的住院治療，或更加積極的治療。胸痛胸痛在約1%至2%的門診病人中是主要的抱怨，且儘管原因通常不是心源性的，心臟疾病仍為在美國死亡的最主··要原因。因此，區分胸痛的嚴重和良性原因是至關重要的。本文中所述的方法可用於作出這種決定。出現在急診科的具有胸痛的受試者可患有食道痛，潰瘍，急性肺障礙(Iungproblem)如肺栓塞(PE)(潛在致命的)，破裂的或剖開的動脈瘤(高度致命的)，膽囊發作(gall bladder attack),心包炎(圍繞心臟的包囊的驗證)，心絞痛(無損傷的心臟疼痛)，或心肌梗死(潛在致命的)。精確的診斷可能無法立即作出，但是否收容受試者或積極治療受試者的決策通常應立即作出。若本文中所述的方法表明該受試者具有升高的可溶性ST2水平，例如，罹患ST2相關病狀，可作出積極處理受試者的決定，例如，以避免因缺乏治療導致的潛在不利後果。其它關於胸痛的治療和診斷的信息可見於，例如Cayley (Am.Fam.Phys.72(10):2012-2028，2005)。呼吸困難呼吸困難，或呼吸急促(亦定義為異常或不適的呼吸)，是出現在急診科的受試者的常見症狀。對於呼吸困難的區別診斷包括四大類:(I)心源性，(2)肺源性，(3)混合的心源性和肺源性，和(4)既非心源性亦非肺源性。心源性呼吸困難的原因包括右、左或雙心室充血性心衰伴以其導致的收縮期功能障礙，冠狀動脈病，近期或遠期心肌梗死，心肌病，瓣膜功能障礙，左心室肥大伴以其導致的收縮期功能障礙，不對稱性室中隔肥大，心包炎，和心律失常。肺源性原因包括阻塞性(例如慢性阻塞性肺病(COPD)和哮喘)和限制性過程(例如肺外原因如肥胖，脊柱或胸壁急性，和內在性肺病理學(intrinsicpulmonarypathology),如間質性纖維化,肺塵埃沉著病，肉芽腫病，或膠原血管病)。混合的心源性和肺源性病狀包括COPD伴以肺動脈高壓和肺源性心臟病，去條件化(deconditioning)，肺栓塞，ARDS，和外傷。既非心源性亦非肺源性病症包括代謝病狀如貧血、糖尿病酮症酸中毒和其它較不常見的原因，包括代謝性酸中毒，胸壁或身體其它位置的疼痛，和神經肌肉障礙如多發性硬化和肌營養不良。阻塞性鼻喉問題(Obstructive rhinolaryngeal problem)包括由於息肉或鼻中隔偏曲導致的鼻阻塞，擴大的扁桃體，和聲門上或聲門下氣道狹窄(supraglottic or subglottic airway stricture)。呼吸困難亦可作為精神疾病的肉體表現而呈現，例如焦慮症，其導致通氣過度。關於呼吸困難的衡量和治療的信息可見於，例如Morgan和Hodge, Am.Fam.Phys.57(4):711-718, 1998。任何本文中公開的抗體或抗原結合片段可用於確定患者不患有ST2相關病狀。在一些實施方案中，測定受試者中的人可溶性ST2的水平(例如通過上述任一種方法)並與人可溶性ST2參照水平比較。若受試者中人可溶性ST2的水平類似於人可溶性ST2參照水平，可確定受試者具有非常低的患有ST2相關病狀的可能性。當受試者中人可溶性ST2的水平與人可溶性ST2參照水平在範圍上充分接近時，這兩者是「類似的」，該受試者不太可能患有ST2相關病狀。通常，當受試者中人可溶性ST2的水平與人可溶性ST2參照水平彼此相差約25%以內，例如約25%，20%, 15%，10%, 5%或更低以內時，這兩者是「類似的」。本領域技術人員對於所討論的ST2相關病狀能夠確定合適的人可溶性ST2參照水平。本領域技術人員亦會知道此類人可溶性ST2水平的正常差異，且當閱讀本公開時，能夠確定人可溶性ST2水平是否類似於人可溶性ST2參照水平。在一些實施方案中，人可溶性ST2水平確定一次，例如，當懷疑受試者患有ST2相關病狀時進行確定。在一些實施方案中，人可溶性ST2水平在懷疑受試者患有ST2相關病狀之後2、4、6、8、12、18和/或24小時，和/或1-7日或更久中的一個或多個時點確定。在一些實施方案中，人可溶性ST2的水平確定進行多於一次，例如以確認或檢查在第一次測定中確定的人可溶性ST2的水平。在一些實施方案中，本文中所述的人可溶性ST2-結合抗體及其抗原結合片段可用於一種或多種描述於美國專利申請
發明者J.V.斯奈德 申請人:重症監護診斷股份有限公司