在高壓下擠出泡囊的方法和裝置的製作方法

2023-06-06 02:41:46 2

專利名稱：在高壓下擠出泡囊的方法和裝置的製作方法
技術領域：
本發明總體上涉及通過在高壓下將含有能夠形成泡囊的材料的溶液通過篩網膜(screen membrances)擠出來製備包括微團(micelles)，尤其是脂質體在內的泡囊的方法和裝置。
背景技術：
使用脂質體用於藥物輸送已被提出用於多種藥物，特別是那些腸胃外給藥的藥物。脂質體具有在一段延長的期間內提供給藥藥物控釋「補給站」的潛力，並有通過限制游離藥物在血液中的濃度降低藥物副作用的潛力。脂質體還能夠以有利於治療的方式改變藥物的組織分布和吸收，並能夠通過減少給藥次數而提高治療的方便性。這些效果可以通過結合將脂質體靶向體內特定類型的細胞或組織的配體而得到加強。Poznansky等人在1984，Pharmacol.Rev.36277-336中綜述了脂質體藥物輸送系統。
通常，用於腸胃外給藥的脂質體的理想尺寸是直徑在約70至300，最高約400nm之間。通過使該尺寸範圍的脂質體通過可識別約200nm粒子尺寸的常規深層過濾器可以對其進行滅菌。該尺寸範圍的脂質體也有利於在特定的目標器官，如肝臟、脾臟和骨髓中的生物分布，並實現更加均勻和可預測的藥物釋放速率和在血液中的穩定性。尺寸低於約400nm的脂質體在儲存中還表現出低聚集的傾向，因此在腸胃外使用中，通常比大尺寸的脂質體更安全和毒性更低。
已經提出了多種製備脂質體的技術，例如包括超聲處理法、擠出法、高壓均化法、微流化法、洗滌劑透析法、鈣誘導的小脂質體泡囊的融合和醚灌輸法。例如參見美國專利No.4,186,183；美國專利No.4,217,344；美國專利No.4,261,975；美國專利No.4,485,054；美國專利No.4,774,085；美國專利No.4,946,787；美國專利No.6,139,871；PCT公開號No.WO91/17424，Deamer等人，1976年，Biochim.Biophys.Acta，443629-34；Fraley等人，1979年，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，763348-52；Hope等人，1985，Biochim.Biophys.Acta.81255-65；Mayer等人，1986，Biochim.Biophys.Acta，858161-68；Williams等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85242-46和Szoka等人，1980，Biochim.Biophys.Acta，601559-71。通常，這些方法所獲得的脂質體是雜分散的並且大多數尺寸大於1微米。可以通過多種已知的方法降低這些最初的雜分散懸浮液的尺寸和尺寸分布。一種適合大規模生產的顆粒大小處理方法是均質化方法。在高壓下將最初的雜分散脂質體製劑泵送通過一個小孔或反應室。通常使懸浮液循環通過反應室直至獲得脂質體微粒需要的平均尺寸。此種方法的一個限制是，根據均質化循環的次數、壓力和內部溫度，脂質體的尺寸分布通常很寬並且易變，平均脂質體直徑在100nm範圍時尤其如此。此外，處理的流體可能從均質化泵中沾染金屬和油脂汙染物，並且可能進一步被用於泵密封件滅菌的殘餘化學試劑汙染。
超聲處理或超聲幅射是用於降低脂質體尺寸的另一種方法。此種技術特別適用於製備在25至80nm尺寸範圍的小單層泡囊(SUVs)。但是，只有在脂質體尺寸在約50nm時，即在脂質體被降低至其最低尺寸時，才能實現脂質體狹窄的尺寸分布。與下文所述在100至400nm尺寸範圍的脂質體相比，這些非常小的脂質體具有有限的藥物攜帶或加載能力以及不利的生物分布性能。此種方法的處理能力也是非常有限的，因為要求較少體積的長時間超聲處理。此外，在超聲處理過程中積累的熱可能導致對脂質的過氧化損害，並且聲波探頭脫落的鈦微粒在體內具有非常高的毒性。
第三種已知的尺寸處理方法基於將脂質體通過由聚碳酸酯或其他類似材料製成的均勻孔徑膜擠出。參見，Szoka等人1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，754194-8。此種方法比上述均質化和超聲處理方法的優點在於可以使用多種膜孔徑用於製備不同選擇尺寸範圍的脂質體，此外，尤其可以通過使材料循環通過選定尺寸的過濾器幾次使脂質體的尺寸分布範圍很窄。已經報導了多種用於擠出脂質體的技術。例如，美國專利No.4,927,637描述了一種在低壓(例如，250磅/平方英寸(psi))下擠出脂質通過曲折路徑的尼龍、TUFFRYN_(PallCorp.，East Hills NY)、聚碸、聚丙烯或燒結鋼(scintered steel)膜的方法。美國專利No.5,008,050教導了在100和700psi或更高的壓力下通過聚碳酸酯過濾器擠出脂質體的方法。美國專利No.4,737,323教導了一種通過在200至250psi壓力下通過陶瓷膜擠出脂質懸浮液製備脂質體的方法。
但是，在大規模加工時，膜擠出方法有幾方面的缺點。一個缺點是膜的孔隙傾向於阻塞，特別是在處理濃縮的懸浮液和/或當脂質體的尺寸顯著大於膜孔隙尺寸時。多數生產規模的擠出裝置不允許通過反衝洗來淨化膜。即使膜被反衝洗，用新的膜代替阻塞的膜需要使擠出系統向環境打開，因此帶來了汙染產品的風險。由於其固有的易碎性，不能以高可信度對膜進行就地蒸汽滅菌。不論應用何種方法克服阻塞或結垢的膜，都需要在擠出處理中增加時間和費用。
當擠出特定類型的脂質時，目前可用的脂質體擠出方法的缺點是特別嚴重的。脂雙層在低於Tc′的溫度時是結晶相，在Tc′和Tc溫度之間時是凝膠，在高於Tc的溫度時是液晶相。參見Lasic，1997，Liposomesin Gene Delivery，CRC Press LLC，Boca Raton 67-71。Tc值高於約室溫的脂質特別難以通過聚碳酸酯膜擠出。特定脂質的Tc值取決於多個因素，包括脂質烴鏈的長度和飽和度。具有更長、更飽和烴鏈的脂質傾向於比具有更短、更不飽和烴鏈的脂質具有更高的Tc值(因此更難以通過聚碳酸酯膜擠出)。也可能因為起始原料中的雜質，例如生產過程中的副產物樹脂的汙染使脂質難以擠出。難以擠出的脂質也具有較低的流速，因此比其他脂質更容易汙染和阻塞膜。如上文的解釋，阻塞或結垢的膜必須被清洗和更換，增加了生產的時間和成本以及汙染的可能性。
因此，需要以節約時間和成本的方式用於擠出脂質，特別是難以擠出的脂質的方法和裝置，所述方法和裝置能夠減少膜阻塞或結垢的發生，並可降低汙染的可能性。
發明概述本發明涉及特別適用於製備包括微團，尤其是脂質體在內的泡囊以及含有泡囊、微團或脂質體的藥學產品的方法和裝置。更具體地，我們發現在高壓下將脂質通過親水性篩網膜擠出而實現了顯著提高的流速，同時仍然製備了所需尺寸和層狀結構的泡囊。如將在下文詳細描述的，所述篩網膜是具有孔的膜，並且所述通過膜的孔通道基本上是直線。本發明的方法和裝置特別適合用於由使用常規技術難以擠出的脂質製備具有所需尺寸和層狀結構的泡囊。
我們還發現通過PORETICSTM膜(Osmonics，Minnetonka MN)擠出脂質製劑比通過其他可購買的膜擠出顯著提高了流速。
我們還發現使用本發明的親水膜以及使用高擠出壓力降低了通過擠出製備的泡囊的大小。
可以以相對無故障、膜的阻塞或結垢減少、通過體積高並且以大規模的方式操作本發明的方法和裝置。因此，本發明的方法和裝置非常適合用於生產脂質體。
本發明一方面提供了脂質體懸浮液的製備方法，所述方法包括在高壓下將脂質含水懸浮液通過親水膜，特別是篩網膜擠出。本發明提供了具有均勻尺寸分布的脂質體懸浮液的製備方法。也就是說，通過本發明的方法製備的脂質體的平均尺寸分布的變化很小。此外，本發明提供了任何形式的脂質體的製備方法，例如，可以將所述脂質體懸浮液凍幹製成粉末。
本發明的另一個方面，提供了脂質體懸浮液的製備方法，所述方法包括在高壓下通過斜孔(angled pore)篩網膜擠出脂質的含水懸浮液。如將在下文所描述的，斜孔篩網膜是指其中的孔與膜的表面平面之間的角度低於約90°的篩網膜。
在本發明的另一個方面，提供了脂質體懸浮液的製備方法，所述方法包括在高壓下通過親水的、斜孔篩網膜擠出脂質的含水懸浮液。
在本發明的另一個方面，提供了用於在高壓下擠出脂質的含水懸浮液的裝置，所述裝置包括處於支撐盒架中的親水篩網膜。
在實施本發明的方法過程中，以高壓將脂質體懸浮液擠出通過親水篩網膜。如將在下文中的詳細描述，根據所使用的膜的數量、脂質體循環通過膜的次數、膜的厚度、擠出壓力、膜的孔徑和密度、膜的化學組成、階梯式下降方法的使用、所使用的脂質的類型、潤溼劑的使用、脂質體包封劑或脂質體相關的試劑的存在等，所獲得的脂質體具有約50和400nm之間的平均直徑以及約50nm的標準尺寸分布。本發明的方法能夠對所製備的脂質體的尺寸和尺寸分布進行控制。
所述懸浮液可以多次通過膜，每次以相同的方向通過膜。或者，通過膜的流向可以反轉，以通過膜一次或多次。也就是說，可以以從外向內的方向使懸浮液通過膜，以維持膜處於不阻塞的狀態，即使對於濃縮的脂質體懸浮液，也允許實現高通量處理。
可以使用「階梯式下降」(step-down)方法獲得所需要的脂質體尺寸。也就是說，為了製備平均直徑逐漸降低的脂質體，使脂質體懸浮液通過一系列通過口孔徑尺寸逐漸降低的膜。
在結合附圖閱讀了本發明的下列詳細描述後，本發明的這些和其他方面會更加明確。
附圖簡要說明

圖1表示在400和800psi下，對於二種不同的購買的(來自Osmonics(「O」)和Whatman(「W」)的0.1μm孔徑的聚碳酸酯徑跡蝕刻(polycarbonate track-etched，PCTE)膜)，擠出體積對時間的函數。
圖2是對通過單一PCTE膜和單一聚酯徑跡蝕刻(PETE)膜擠出進行比較的一組曲線圖，二種膜均具有0.1μm的孔徑。圖2A表示作為通過次數的函數的粒子尺寸曲線。圖2B表示作為通過次數的函數的流速曲線。
圖3A是比較在400psi下，將20％的1-棕櫚醯-2-油醯-sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼(POPC)通過0.1μm平均孔徑的PCTE和PETE膜擠出，擠出體積相對時間的曲線圖。圖3B是比較在800psi下，擠出20％的POPC通過0.1μm平均孔徑的PCTE和PETE膜，擠出體積相對時間的曲線圖。
圖4是描述在800psi下，使用1-、2-、5-和10-堆疊的0.1μm平均孔徑PETE膜在擠出POPC時的膜堆疊尺寸的一組效果圖。圖4A表示作為通過次數函數的大單層泡囊(LUV)的平均粒子尺寸圖。圖4B表示作為通過次數函數的流速圖。圖4C是獲得約120nm的平均粒子尺寸所需要的通過次數相對堆疊尺寸的圖。
圖5是描述在400、600和800psi擠出壓力下，使用5-堆疊的0.1μm孔徑PETE膜在擠出POPC時的壓力的一組效果圖。圖5A表示作為通過次數函數的粒子尺寸圖。圖5B表示作為通過次數的函數的流速圖。圖5C是獲得約120nm的平均粒子尺寸所需要的通過次數相對擠出壓力的圖。
圖6表示在膜被結垢或阻塞前，對於0.1μm Osmonics PORETICSTMPCTE和PETE和Whatman NUCLEPORETMPCTE膜，作為擠出壓力函數的最大擠出體積。
發明詳述一方面，本發明提供了通過在高壓下將脂質製劑通過親水性篩網膜擠出來製備具有所需尺寸泡囊的簡單快速的方法。脂質製劑可以通過膜一次或多次擠出，經多次「通過」，製備具有需要尺寸的泡囊。當使用多次通過時，懸浮液通過膜的流動方向可以被反轉一次或多次。脂質製劑也可以通過多個「堆疊」的膜擠出以減少獲得所需要尺寸微粒的通過次數。或者，可以使脂質製劑在相同的通道內通過連續排列的膜，所述膜在其連續排列中可以是堆疊、非堆疊或堆疊和非堆疊的組合。
在另一個方面，本發明提供了通過在高壓下通過親水性篩網膜擠出脂質的含水懸浮液來製備直徑在約50至約400nm之間脂質體的裝置。
本發明的方法和裝置的一個重要特徵是使用高壓驅動脂質的含水懸浮液通過膜。已經發現使用遠遠大於擠出所要求的最低壓力的壓力，為獲得需要平均直徑的脂質體以及避免與膜的阻塞或結垢相關的問題方面提供了意想不到的效果。對於擠出使用常規方法難以擠出的脂質體，使用高壓是特別有利的。如實施例中所示出的，所使用的壓力越大，發生阻塞和結垢的情況越少。此種關係沒有明顯的上限。所使用的壓力僅受到所使用的擠出裝置、膜支撐體和所用膜的耐受性的限制。所使用的壓力的最低值應高於約400psi。優選使用高於約800psi的壓力。更優選使用高於約1000psi的壓力。更優選使用超過約1500psi的壓力。更優選使用超過約5000psi的壓力。最優選使用超過約8000psi的壓力。
如在本說明書中所使用的「脂質體」、「泡囊」和「脂質體泡囊」應當理解為具有包封含水內部的含脂質膜的結構。雖然通常脂質體僅具有一層膜，但除非特別指明，所述結構可以具有一個或多個脂質膜。在此將單一層的脂質體稱作「單層」。單層脂質體可以分為小單層泡囊(SUVs)、大單層泡囊(LUVs)或巨單層泡囊(GUVs)。參見Lasic，1997，Liposomes in Gene Delivery，CRC Press LLC，Boca Raton67-71，第70頁。SUVs通常被定義為其曲率效應對其性能有重要意義的脂質體。使用該定義，可以被描述為SUV的脂質體的尺寸將取決於其所含有的一種或多種脂質。通常，對於軟雙層，SUV的上限是約50nm，而對於機械上很粘結的雙層，上限可以在約80nm至約100nm之間。GUVs通常被定義為具有高於約1μm直徑的脂質體。本領域的普通技術人員理解這些種類的泡囊之間的界線並非清晰劃分的，並且他們之間的邊界會有明顯的重疊。
在一個實施方案中，本發明的脂質體可以是包封含水內部結構的含有脂質的膜，所述含水內部結構含有藥物化合物。在一個實施方案中，脂質體的含水內部結構中可不含藥物，而是由含有脂質的膜包封一種內部介質。此種不含藥物的脂質體用於從血液中清除膽固醇並用於治療或預防動脈硬化。
如在此所使用的「與脂質體結合」或「結合於脂質體」指受試化合物共價或非共價結合在脂質體的表面上，或者全部或部分地包含在脂質體的內部。
術語「藥學活性化合物」或「藥物」指沒有與載體、輔劑、活化劑或輔因子結合的，適合治療用途的合成化合物。本發明的脂質體可以在其含水內部結構中含有藥物。在特定的實施方案中，脂質體的內部可以不含藥物，在此類實施方案中，脂質體本身可以是藥物或藥學活性化合物。這些「空」的脂質體可以用於從體內除去膽固醇和治療或預防動脈硬化。
「篩網膜」是具有孔的膜，並且所述孔在膜上的通道大體上基本是直線。篩網膜可以具有與膜的表面垂直和/或成角度的孔。「斜孔膜」是指其中的孔相對膜的表面平面所形成的角度小於約90°的篩網膜。孔的「脊長度」指從膜的一個表面到另一個表面所測量的孔長度。因此，對於垂直於膜的表面的孔，其脊長度等於膜的厚度。具有較小孔角度的孔具有較大的脊長度。
對於給定固體表面的液滴，「接觸角」是固體表面與固液接觸點處液滴半徑的切線所形成的角度的測量值。按照Young方程式，接觸角與表面張力有關，通過Young’s方程式可以計算出特定的液體-固體相互作用的行為。0度的接觸角導致浸潤，而0°到90°之間的接觸角導致液滴的擴展(由於分子引力)。大於90°的接觸角表示該液體傾向於形成珠狀或縮離固體表面。因此，表面和水滴之間的接觸角越小，表面的親水性越大。例如參見Martin等人，1983，Physical PharmacyPhysical Chemical Priniciples in the Pharmaceutical Sciences，Lea Febiger Publishers，費城；Gennaro等人，1990，Remington’sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Company，Easton，賓夕法尼亞州。
「難以擠出的脂質」指由於傾向於或使膜阻塞結垢，使用常規技術相對難以擠出的脂質。相反，「易於擠出的脂質」指使用常規技術相對容易擠出的脂質。通常，具有高於約室溫的轉變溫度(Tc)的脂質難以擠出，而具有約室溫或低於室溫的Tc的脂質易於擠出。少數難以擠出的脂質具有低於室溫的轉變溫度，例如，1-棕櫚醯-2-油醯-sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼(POPC)。幾個不同的因素可以影響某種特定的脂質是否難以擠出。最重要的因素是脂質的醯基鏈的剛度。具有更剛性的醯基鏈的脂質，例如含有單不飽和醯基鏈的脂質傾向於在使用常規方法和裝置時更難以擠出。脂質製劑中的雜質，例如在製備脂質過程中引入的樹脂也可能導致脂質難以擠出。此外，雜質可能影響脂質在溶液中的形態或者脂質通過膜孔變形的能力。如果使用具有更大的表面積或更高孔隙率的膜，例如Whatman ANOPORETM膜可以克服這些問題。締結了藥物的脂質、帶電荷的脂質以及含有蛋白質的脂質也可能是難以擠出的脂質。有些在實驗室規模易於擠出的脂質在更大的生產規模可能難以擠出。難以擠出的脂質的例子包括但不限於，POPC、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯甘油和二硬脂醯磷脂醯乙醇胺。易於擠出的脂質包括但不限於蛋黃磷脂醯膽鹼(EPC)、卵磷脂醯甘油和二油醯磷脂醯膽鹼。
膜用於實施本發明的膜是親水性篩網膜。用於實施本發明的親水性篩網膜可以由任何親水性材料製成。所述膜可以由單一的一種親水材料或一種以上的親水材料或親水和非親水材料的混合物製成。在一個優選的實施方案中，所述膜由天然親水材料製成。在另一個優選的實施方案中，所述膜由在生產膜的過程中使其具備親水性的材料製成，例如聚酯。在一個優選的實施方案中，用於實施本發明的親水性篩網膜具有低於120度，優選低於70度，更優選低於50度，最優選低於40度或更低的表面水接觸角。在另一個優選的實施方案中，用於實施本發明的親水性篩網膜在蝕刻前具有約41達因/釐米或更高，優選42達因/釐米或更高，最優選43達因/釐米或更高的表面張力。用於實施本發明的具體的親水性膜包括但不限於聚對苯二甲酸乙二酯(聚酯)、氧化鋁、聚丙烯腈、乙酸纖維素、纖維素混合酯、玻璃、聚醚碸、聚碸和聚六亞甲基己二醯胺(尼龍)。應當注意的是，我們已經確定聚酯是目前最適合用於本發明方法和裝置的可購買到的膜。
也可以使用疏水性更強的材料製成的膜，條件是對其進行改性以使其具有更好的親水性。提高膜的親水性的方法是本領域已知的，包括但並不限於用表面活性劑處理膜、用溼潤劑塗布膜或者用不同聚合物或單體系統的薄膜施加系統例如聚乙烯吡咯烷(polyvinylpyrolidine，PVP)塗布膜以通過形成複合材料形成新的表面、在膜上化學接枝一種低分子量活性基團(單體)、由二種或多種聚合物的組合和等離子體修飾形成膜。例如參見，Martin等人，1983，PhysicalPharmacyPhysical Chemical Principles in the PharmaceuticalSciences，Lea Febiger Publishers，費城；Gennaro等人，1990，Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，Mack PublishingCompany，Easton，賓夕法尼亞。
在另一個優選的實施方案中，用於實施本發明的篩網膜由TEFLON_(Du Pont，Wilmingtong，DE)製成。在一個更加優選的實施方案中，所述膜由TEFLON_構成或主要由TEFLON_構成。在另一個更優選的實施方案中，所述膜含有TEFLON_和一種或多種其他物質。
篩網膜具有「直通的」通道(也稱作毛細管型孔)。也就是說，通過膜的孔通道基本上是直線。如果該通道與膜的表面垂直，則其具有90°的孔隙角度。斜孔膜具有低於約90°的孔隙角度。
使用任何方法製備的篩網膜均可用於本發明的方法和裝置。通常使用二步徑跡蝕刻方法製備篩網膜，例如參見Wagner，2001，MembraneFiltration HandbookPractical Tips and Hints，第2版，Osmonics，Inc.印刷，Minnetonka，MN。第一步，對膜進行電離輻射。此種輻射形成在膜的表面上隨機分布的損傷徑跡。通過將膜浸沒在蝕刻溶液，例如強鹼性溶液，如氫氧化鈉中將損傷徑跡蝕刻成穿過膜的孔。在第一步中帶電粒子轟擊和穿過膜的角度決定所獲得的孔道的孔隙角度。因此，通過控制帶電粒子轟擊膜的角度可以獲得具有所需平均孔隙角度的過濾器。
蝕刻方法可能影響膜的親水性。對於多種類型的膜，包括聚碳酸酯和聚酯膜，浸沒在蝕刻浴中提高了膜的親水性。在類似的蝕刻條件下處理時，有些膜，例如聚酯膜比其他膜，例如聚碳酸酯膜可更快速地獲得更強的親水性。例如，參見Kroschwitz，1990，ConciseEncyclopedia of Polymer Science and Engineering，Wiley，紐約，363-67，558-60；Domininghaus，1993，Plastics for EngineersMaterial，Properties，Applications，Hanser Publishers，紐約，第14章；Zeronian等人，1990，J.Appl.Polym.Sci.，41527-34；Gillberg等人，1981，J.Appl.Polym.Sci.，262023-51。
我們發現，與通過其他可購買到的膜擠出相比，通過OsmonicsPORETICSTM膜擠出獲得了顯著提高的流速，並且當擠出的脂質是難以擠出的脂質時，此種差別特別大。不受任何特定理論的限制，我們注意到流速和脂質體微粒的尺寸受到多種因素的影響，包括但不限於如本說明書所描述的孔徑、孔密度、平均孔隙角度、孔隙角度範圍、膜厚度以及用於製備或塗布膜的材料。在例如下列文獻中討論了聚酯、聚碳酸酯和其他膜的性質Kroschwitz，1990，ConciseEncyclopedia of Polymer Science and Engineering，Wiley，紐約；Domininghaus，1993，Plastics for EngineersMaterial，Properties，Applications，Hanser Publishers，紐約；Zeronian等人，1990，J.Appl.Polym.Sci.，41527-34和Gillberg等人，1981，J.Appl.Polym.Sci.，262023-51。
在一個優選的實施方案中，所述膜是斜孔膜。在一個更優選的實施方案中，膜的孔與膜的表面平面具有低於約56°的平均角度(即，平均孔隙角度)。在一個最優選的實施方案中，平均孔隙角度是約45°。在另一個優選的實施方案中，為了將孔隙的脊長度降低至與膜的厚度相同，平均孔隙角度是約90°。
適合用於本發明的可購買到的聚酯膜包括但不限於NUCLEPORETMPETE膜，目錄編號(Cat.No.)188607，188107，188606，188106，188605，188105和188604(Whatman)、CYCLOPORETMPETE膜，目錄編號7061-2504，7061-4704，7061-2502，7061-4702，7061-2501和7061-4701(Whatman)和PORETICSTMPETE膜，目錄編號T01CP02500，T04CP04700，T02CP02500，T02CP04700，T01CP02500和T01CP04700(Osmonics)。
任何厚度的膜均可以用於本發明的方法和裝置。本領域的普通技術人員可以理解的是，在其他條件類似的情況下，厚度較大的膜比厚度小的膜獲得的泡囊更小，並且具有更低的流速。用於本發明的方法和裝置的膜厚度的上限由所使用的擠出裝置的耐受性決定。用於本發明的方法和裝置的膜厚度的下限由所述膜的脆性及其耐受擠出壓力的能力決定。在一個優選的實施方案中，膜的厚度在約3至約50μm之間。在一個更優選的實施方案中，膜的厚度在約3至約20μm之間。在一個最優選的實施方案中，膜的厚度在約3至約12μm之間。
任何尺寸和形狀的膜均可以用於本發明的方法和裝置。膜的尺寸和形狀僅由擠出裝置的耐受性決定。通常，膜的表面積越大，通過膜的流速越高。可以由更大片的膜切割任何需要的尺寸或形狀。例如，該膜可以是表面積為約1平方釐米至約3平方米的圓形、方形或矩形。在一個優選的實施方案中，膜是直徑約為25毫米的圓形。在另一個優選的實施方案中，膜是直徑約為47毫米的圓形。在另一個優選的實施方案中，膜是直徑約為90毫米的圓形。在另一個優選的實施方案中，膜是直徑約為142毫米的圓形。在又一個優選的實施方案中，膜是直徑約為293毫米的圓形。
任何拓撲結構的膜均可以用於本發明的方法和裝置，僅受所使用的擠出裝置的耐受性的限制。本領域中的普通技術人員知道如何處理膜的拓撲結構，以提高與待擠出的製劑接觸的膜的表面積，並降低膜的阻塞和結垢。在一個優選的實施方案中，膜是平的。在另一個優選的實施方案中，膜是皺褶的。
具有任何平均孔徑的膜均可以用於本發明的方法和裝置。在其他條件類似的情況下，具有更大平均孔徑的膜可以比更小平均孔徑的膜製備出更大的泡囊，並且具有更高的流速。在一個優選的實施方案中，該膜具有與待製備的泡囊的直徑基本相等的平均孔徑。在另一個優選的實施方案中，膜的平均孔徑在約50至約400nm之間。在一個更優選的實施方案中，膜的平均孔徑在約75至約200nm之間。在一個更優選的實施方案中，膜的平均孔徑在約100至約125nm之間。在一個最優選的實施方案中，膜的平均孔徑是約100nm。
具有任何孔密度的膜均可以用於本發明的方法和裝置。在其他條件類似的情況下，具有更高孔密度的膜比孔密度更低的膜較少發生阻塞或結垢，以及流速更大。因此，通常優選更高的孔密度。但是，高孔密度會伴隨幾個缺點。第一，高孔密度會損害膜的抗張強度，因此損害膜耐受其所承受的擠出壓力的能力。第二，在具有隨機分布孔的膜中，隨著膜密度的增高，重疊的孔數量增大。重疊的孔具有高於膜的額定尺寸的孔徑，因此，他們可能導致通過膜擠出的泡囊的平均直徑增大。因此，優選在不損害膜的抗張強度或顯著增大擠出的泡囊的平均顆粒直徑情況下可實現的最高孔密度。可實現的或需要的最高孔密度也受膜的平均孔徑的限制。在其他條件類似的情況下，平均孔徑更大的膜比平均孔徑更小的膜具有更低的最高孔密度。在一個優選的實施方案中，孔密度在約8×105至9×109隨機分布的孔/平方釐米之間。在一個更優選的實施方案中，孔密度在約8×106至5×109隨機分布的孔/平方釐米之間。在一個最優選的實施方案中，孔密度在約1.5×107至2.6×109隨機分布的孔/平方釐米之間。
通過使用非隨機分布的孔，可以在不顯著提高其平均孔徑的情況下在膜上獲得更高的孔密度。可以形成具有成圖案排列的孔隙的篩網膜，其中即使在高孔密度下，實際上也排除了孔隙發生重疊的情況。因此，在一個優選的實施方案中，孔密度在約8×105至9×109非隨機分布的孔/平方釐米之間。在一個更優選的實施方案中，孔密度在約8×106至5×109非隨機分布的孔/平方釐米之間。在一個最優選的實施方案中，孔密度在約1.5×107至2.6×109非隨機分布的孔/平方釐米之間。
在擠出過程中用於有效地處理和/或更換膜的裝置可以用於本發明的方法。此種裝置可以是一種支撐支架，所述支架包括例如，膜和用於支撐膜處於單一平面以防止發生摺疊或粘附的支撐環。所述支撐支架裝置可以包括以夾層構型或堆疊構型排列的不同或類似孔徑的膜。當與膜一起工作時，本發明的裝置可以提供簡易性和方便性，例如，在擠出過程中可以容易地移開或更換裝置並且進行滅菌。
本發明的方法根據本發明的方法，在高壓下將能夠形成泡囊、微團或脂質體的材料通過篩網膜擠出，以製備泡囊、微團或脂質體的懸浮液。適合使用本發明的方法和裝置擠出的示例性的材料將在下文討論。
使用高擠出壓力實施本發明的方法和裝置。其他條件相同時與較低的壓力下進行擠出相比，在更高的壓力下進行的擠出將獲得更高的流速、更少發生阻塞或結垢，使得膜在生產過程中能夠耐受更大程度的阻塞或結垢，並且可以製備更小尺寸的泡囊。可以使用的壓力僅受所使用的擠出裝置和膜的耐受性的限制。在一個優選的實施方案中，使用大於約400psi的壓力。在另一個優選的實施方案中，使用大於約800psi的壓力。在一個更優選的實施方案中，使用大於約1500psi的壓力。在另一個更優選的實施方案中，使用大於約5000psi的壓力。在最優選的實施方案中，使用大於約8000psi的壓力。
可以在任何溫度實施本發明。在一個優選的實施方案中，在控制的溫度進行擠出。在一個更優選的實施方案中，所述控制的溫度是恆溫。在另一個實施方案中，所述恆溫是約室溫，在另一實施方案中所述恆溫等於或高於被擠出脂質的Tc。在另一個實施方案中，被擠出的混合物含有多種脂質，並且所述恆溫等於或高於被擠出脂質的最高Tc。在另一個實施方案中，所述恆溫在約15℃和約35℃之間。在一個更優選的實施方案中，所述恆溫在約20℃和約30℃之間。在更優選的實施方案中，所述恆溫在約23℃和約27℃之間。在一個最優選的實施方案中，所述恆溫是約25℃。
本發明的方法和裝置可以用於製備任何所需平均直徑的泡囊。通常，如在上文的說明，選擇平均孔徑類似於所需泡囊平均直徑的膜。例如，可以通過被擠出的泡囊多擠出一次或多次、使用堆疊的膜、使用更厚的膜、提高擠出壓力或者按照本文的描述處理泡囊以降低平均泡囊尺寸。可以使用本領域任何已知的技術測定泡囊的尺寸。例如，可以使用在Bloomfield，1981，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.10421-50中所描述的準電光散射(QELS)，也稱為動態光散射(DLS)。在一個優選的實施方案中，所述泡囊具有約50至400nm之間的平均直徑。在一個更優選的實施方案中，平均直徑在約50至150nm之間。在一個更優選的實施方案中，平均直徑在約100至150nm之間。在最優選的實施方案中，平均直徑是約169±37nm，158±39.5nm，136±42nm，153.6±45.2nm，138.6±35.6nm，114.4±35.8nm或118.1±36.2nm。
本發明的方法和裝置可以用於製備所需層狀泡囊。單層泡囊具有單層膜。多層泡囊(MLV)包括多個膜層。參見，Lasic，1997，Liposomesin Gene Delivery，CRC Press LLC，Boca Raton 67-71。在一個優選的實施方案中，使用本發明的方法或裝置擠出MLV懸浮液，以製備具有所需平均直徑的單層泡囊懸浮液。在另一個優選的實施方案中，使用本發明的方法或裝置擠出乳液。
可以使用任何處理技術進一步加工使用本發明的方法或裝置製備的泡囊。在一個優選的實施方案中，使用本發明的方法或裝置製備的泡囊懸浮液在擠出後，其平均泡囊直徑被改變。在一個更優選的實施方案中，被擠出的泡囊被額外擠出一次或多次。在一個更優選的實施方案中，使用本發明的方法或裝置進行額外的擠出。在最優選的實施方案中，使用「階梯式下降」方法在多次通過中擠出泡囊，即每次相繼擠出通過更小平均孔徑的膜。在另一個更優選的實施方案中，懸浮液交替地以前進和倒轉的方向通過膜，以減少膜的阻塞或結垢的量。
在另一個優選的實施方案中，通過超聲處理法進一步降低被擠出泡囊的平均直徑。在另一個優選的實施方案中，間斷的超聲處理循環和QELS測定交替進行，以指導有效的泡囊合成。
在另一個優選的實施方案中，對擠出的泡囊進行處理以除去汙染物或雜質。在另一個優選的實施方案中，被擠出的懸浮液含有待引入泡囊中物質，並且處理步驟除去了沒有引入泡囊的部分物質。在一個更優選的實施方案中，待引入泡囊中的物質是藥學活性物質，例如小分子藥物、蛋白質、核酸或低聚核苷酸。
可以使用任何數量的堆疊膜實施本發明的方法和裝置。本領域普通技術人員可以理解的是，在其他條件類似的擠出中，通過更多數量的堆疊膜擠出會比通過較少堆疊膜獲得更低的流速和更小平均直徑的泡囊。在堆疊中可以使用的膜的數量僅受擠出裝置耐受性的限制。在一個優選的實施方案中，該堆疊包含2至10層膜。在最優選的實施方案中，該堆疊包含2至5層膜。在另一個優選的實施方案中，所述的堆疊膜是基本相同的。在另一個優選的實施方案中，所述堆疊中至少一層膜與該堆疊中的至少另一個膜不同。所述差別可以是影響擠出的任何性質。所述差別可以是，例如本說明書中所描述的膜的組成、塗層、孔尺寸、孔角度、孔形狀或膜的尺寸。
在另一個優選的實施方案中，使用多次通過膜或堆疊膜進行擠出。如果在擠出中使用堆疊膜實施方案，為了獲得具有所需直徑的脂質體，可能沒有必要多次通過。在特別優選的實施方案中，使用階梯式下降的方法。在階梯式下降方法中，懸浮液多次通過孔徑逐漸減小的膜。在特別優選的階梯式下降方法的實施方案中，第一次通過孔徑約為0.4μm的膜，第二次通過孔徑約為0.2μm的膜，如果必要，第三次、第四次、第五次和第六次通過孔徑約為0.1μm的膜。
在另一個優選的實施方案中，用清洗劑處理膜。在一個更優選的實施方案中，在擠出前用清洗劑處理膜。在另一個更優選的實施方案中，在完成至少一次通過膜之後和在至少下一次通過膜之前用清洗劑處理膜。清洗劑可以是從阻塞或結垢的膜孔隙上除去物質或者防止膜阻塞或結垢或形成「篩孔效應」的任何物質或組合物。在優選的實施方案中，清洗劑含有有機醇。在更優選的實施方案中，清洗劑含有乙醇。
擠出裝置能夠容納適當的膜並耐受高擠出壓力的任何擠出裝置均可用於實施本發明的方法和裝置。在優選的實施方案中，本發明的擠出裝置和用於實施本發明方法的擠出裝置包含親水性、斜孔或親水性斜孔篩網膜。在更優選的實施方案中，所述膜是聚酯徑跡蝕刻(PETE)膜。在另一個更優選的實施方案中，擠出裝置還包括外殼和收集容器，其中的外殼通過耐壓和耐液體密封可操作地連接在膜的第一面上，收集容器位於懸浮液從膜的第二面排出後可以接收所擠出懸浮溶液的位置。在另一個更優選的實施方案中，所述裝置還包括膜支撐體或裝置。在另一個優選的實施方案中，擠出裝置的構造可以使含水懸浮液以前進和倒轉的方向交替地通過膜擠出。在另一個優選的實施方案中，擠出裝置使用切向流。可以裝配適當的膜並用於本發明的可購買的裝置包括但不限於THE MINI-EXTRUDERTM，目錄編號610000(AVANTI_，Polar Lipids，Inc.，Alabaster AL)，參見Subbarao等人，1991，Biochim.Biophys.Acta，1063147-54，Liposome Extruder，PartNo.ER-1(Eastern Scientific，Rockville MD)，參見EMULSIFLEX_-C50擠出機，目錄編號EFC50EX(Avestin，Inc.，Ottowa，Ontario，Canada)，參見LIPOSOFASTTM(AVESTIN，Inc.)，LIPEXTM擠出機(Northern Lipids Inc.，Vancouver，BritishColumbia，Canada)。用於實施本發明的其他擠出裝置包括在美國專利No.5,948,441；5,556,580和6,217,899B1中所描述的裝置。
所述的擠出裝置必須能夠耐受高擠出壓力。作為一個普遍的規則，更高的壓力會獲得改進的性能，例如提高的流速、較少發生膜結垢或阻塞以及擠出的泡囊尺寸更快速的減小。作為最低值，擠出裝置應當能夠耐受高於約400psi的擠出壓力。在一個優選的實施方案中，擠出裝置可以耐受高於約800psi的擠出壓力。在更優選的實施方案中，擠出裝置可以耐受高於約1000psi的擠出壓力。在另一更優選的實施方案中，擠出裝置可以耐受高於約1500psi的擠出壓力。在更優選的實施方案中，擠出裝置可以耐受高於約5000psi的擠出壓力。在最優選的實施方案中，擠出裝置可以耐受高於約8000psi的擠出壓力。
也可以使用膜支撐支架或外殼優化可使用的表面積，條件是其能夠耐受所施加的擠出壓力。在一個優選的實施方案中，膜是皺褶的。在另一個優選的實施方案中，所述支撐支架或外殼利用了三維膜定位配置。本發明還提供了在擠出過程中有效地處理膜和/或更換膜的方法和裝置。可購買的聚碳酸酯徑跡蝕刻(PCTE)和聚酯徑跡蝕刻(PETE)膜的性質脆弱並且帶靜電。這些膜容易彎折並與自身粘附，使得難以處理並將他們固定在用於擠出的膜支架上。當膜或膜支架是溼的時，這尤其明顯。此外，PCTE、PETE和其他類型的膜特別易碎，因此要求小心地處理。為了解決該問題，本發明提供了通過使用膜支撐支架或外殼能夠有效地處理和在支架上安裝膜的方法和裝置。膜支撐支架可以是，例如卡盒式(cartridge)支撐支架。
在一個實施方案中，卡盒式支撐體或支架可以包括一個或多個能夠以單面的方式將一層或多層膜固定在支撐環的邊界以防止在高壓下發生摺疊和粘附的支撐環。所述裝置能夠以多種不同的結構支撐一層或多層膜，例如可以以「三明治」結構或堆疊結構容納膜。如果在卡盒中有多層膜，所述膜可以具有相同或不同的孔徑。該裝置或卡盒可以具有多種其他特徵，例如，該卡盒式支架可以預先安裝膜、該裝置可以是無菌的以及易於引入自動化的膜更換系統。
所述卡盒式支架裝置提供了減少膜處理和大大提高安裝膜的方便性的優點。此外，卡盒式支架裝置提供了生產過程中總體效率的改進，因為，例如可以在將產品流轉向一個新的卡盒式支架裝置的同時更換阻塞或結垢的卡盒式裝置，從而更換阻塞或結垢的膜。
脂質可以使用本發明的方法和裝置擠出任何適當物質的泡囊、微團或脂質體。在一個優選的實施方案中，使用本發明的方法和裝置由脂質或脂質組合製備脂質體。可以使用任何脂質或脂質的組合。在一個優選的實施方案中，所擠出的脂質是使用常規方法和裝置難以擠出的。在更優選的實施方案中，難以擠出的脂質具有高於約室溫的Tc。在另一個更優選的實施方案中，難以擠出的脂質含有剛性醯基鏈。在更優選的實施方案中，該剛性醯基鏈是單不飽和醯基鏈。在另一優選的實施方案中，難以擠出的脂質含有雜質或汙染物。在一個更優選的實施方案中，所述雜質或汙染物是使得脂質難以擠出的樹脂或雜質。在一個更優選的實施方案中，雜質或汙染物是在生產過程中引入的樹脂。在另一個優選的實施方案中，難以擠出的脂質結合了另一種分子。在一個更優選的實施方案中，所述分子是藥物。在另一個更優選的實施方案中，所述分子是蛋白質。在另一個優選的實施方案中，難以擠出的脂質是帶電荷的脂質。在另一個優選的實施方案中，難以擠出的脂質難以在生產規模擠出。在一個特別優選的實施方案中，難以擠出的脂質選自1-棕櫚醯-2-油醯-sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼(POPC)、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯甘油和二硬脂醯磷脂醯乙醇胺。
在另一個優選的實施方案中，脂質是易於擠出的脂質。在一個更優選的實施方案中，易於擠出的脂質選自蛋黃磷脂醯膽鹼(EPC)、卵磷脂醯甘油和二油醯磷脂醯膽鹼。
其他適合用於本發明的磷脂包括但不限於二月桂醯磷脂醯膽鹼、二月桂醯磷脂醯甘油、油醯棕櫚醯磷脂醯膽鹼、糖脂連接的磷脂、磷脂醯膽鹼、磷脂醯甘油、卵磷脂、β，γ-二棕櫚醯-α-卵磷脂、神經鞘磷脂、磷脂醯絲氨酸、磷脂酸、N-(2，3-二(9-(Z)-十八烯基氧))-丙-1-基-N，N，N-三甲基氯化銨、磷脂醯乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、腦磷脂、心磷脂、腦苷脂、二(十六烷基)磷酸酯、二油醯磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯甘油、棕櫚醯-油醯-磷脂醯膽鹼、二-硬脂醯-磷脂醯膽鹼、硬脂醯-棕櫚醯-磷脂醯膽鹼、二-棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺、二-硬脂醯-磷脂醯乙醇胺、二-十四醯-磷脂醯絲氨酸、二-油醯-磷脂醯膽鹼等。
在最優選的實施方案中，所述脂質是磷脂醯膽鹼或神經鞘磷脂。
不含磷的脂質也可以用於本發明的組合物的脂質體中。這些包括但不限於膽固醇、其他甾醇、十八烷胺、十二烷胺(docecylamine)、乙醯棕櫚酸酯和脂肪酸醯胺。
適合用於本發明的脂質體的其他脂質是本領域中的普通技術人員熟知的並且引用在多種已知的資料中，例如McCutcheon’s Detergentsand Emulsifiers and McCutcheon’s Functional Materials，Allured Publishing Co.，Ridgewood，N.J.。
用於本發明的方法和裝置的脂質包括化學修飾的脂質。在一個優選的實施方案中，脂質共價連接在一個改性基團上。所述改性基團可以影響脂質的任一種或多種性質。例如，改性基團可以改變脂質的轉變溫度、聚集性質、擠出性質、包封性質、體內的靶向性質、體內的處理性質、生理性質、穩定性或半壽期。在一個優選的實施方案中，改性的脂質是聚乙二醇連接的(PEG-連接的)。在另一個優選的實施方案中，改性的脂質是聚乙二醇化的磷脂。
在另一個優選的實施方案中，脂質的組合可以用於本發明的方法和裝置。例如，磷脂和PEG-連接的脂質可以用於本發明的方法和裝置。
待擠出的製劑也可以含有其他類型的分子。可以與脂質伴隨的其他分子或離子的例子包括但不限於膽固醇或其他甾族化合物或甾族化合物的衍生物、溶劑、緩衝劑、酸、鹼、鹽、金屬、螯合劑、糖、蛋白質、核酸和藥物，如下文的描述。例如參見Lasic，1997，Liposomesin Gene Delivery，CRC Press LLC，Boca Raton 67-71。
對於向患者施用的脂質體製劑，通常要求所述脂質體由在37℃，通常在35℃，甚至32℃時是液晶的脂質組成。由於患者通常具有約37℃的體核溫度，由在37℃時是液晶相的脂質組成的脂質體在治療過程中通常是液晶狀態。
在某種程度上由於使用了所述高壓，在本發明的方法中使用了最高質量的原料。所述原料脂質在用於擠出過程之前應當滿足特定的質量控制標準。例如，應當控制pH、粉末粒度、乾粉的形態、溼顆粒粒度、滲透度、鈣水平、粒化水平、乾燥條件和生產過程中的添加劑、殘餘物質或雜質水平。這些參數可能影響脂質在溶液或懸浮液中的物理性質，使得脂質難以擠出。特別地，應當控制pH並保持穩定、鈣水平應當低並且原料應當很好地乾燥並具有良好的視覺特性。
脂質製劑任何含有一種或多種能夠被擠出形成泡囊、微團或脂質體的物質的製劑均可以用於本發明的方法和裝置。在一個優選的實施方案中，使用含有一種或多種脂質的製劑。在特別優選的實施方案中，所述製劑是含有一種或多種脂質的含水懸浮液。可以使用製備此類製劑的任何方法。例如參見Lasic，1997，Liposomes in Gene Delivery，CRCPress LLC，Boca Raton 67-71，第88-91頁；Szoka等人，1980，Biochim.Biophys.Acta，601559-71。這些方法通常包括製備脂質的含水懸浮液。在一個優選的實施方案中，脂質在懸浮液中形成多層泡囊(MLVs)。MLVs懸浮液可以被擠出以製備具有需要尺寸和層狀的泡囊，例如SUVs或LUVs。雖然高達約400mg/ml或更高的濃度是可行的，但通常使用約5至50mM之間濃度的脂質。當使用多種脂質時，通常首先在有機溶劑中，例如氯仿、3∶1(體積∶體積)氯仿∶甲醇混合物或叔丁醇中混合脂質。通常在約30℃至約50℃之間的溫度，將脂質溶解在溶劑中，然後例如通過在乾冰-乙醇或乾冰-丙酮浴中迅速冷凍。然後蒸發有機溶劑並在適當的含水溶液中再水化乾燥的脂質膜、餅或粉末。通常在高於具有最高的Tc(如果使用的多種脂質)的脂質的Tc的溫度下在含水溶液，例如蒸餾水、緩衝蒸餾水、生理鹽水溶液或糖溶液或其他溶解了非電解質的溶液中進行再水化。雖然根據脂質，水化步驟可以在短到幾分鐘內完成，但優選水化步驟持續超過約1小時並伴隨進行攪拌。在水化處理過程中所形成的MLVs的尺寸範圍通常在約500nm至約10,000nm(10微米)或更高之間。通常，在水化過程中更劇烈的攪拌有利於形成更小的MLVs。任選在水化後允許混合物靜置過夜，這有利於單層泡囊的形成。在製備脂質的含水懸浮液的一個優選的方法中，渦旋攪拌脂質的氯仿溶液並在穩定的N2氣流下除去溶劑，在高真空下乾燥樣品。在150mM NaCl和20mM[4-(2-羥乙基)]-哌嗪-乙磺酸(Hepes，pH7.4)中再水化所得到的乾燥脂質膜。
在另一個優選的實施方案中，待擠出的製劑含有一種或多種脂質的乳液。可以使用任何已知的技術和機械裝置，例如均化器、微流化器或混合器，例如roto-stator製備乳液。例如，參見，Martin等人，1983，Physical PharmacyPhysical Chemical Principles inthe Pharmeceutical Sciences，Lea Febiger Publishers，Philadelphia；Gennaro等人，1990，Remington’s PharmaceuticalSciences，第18版，Mack Publishing Company，Easton，賓夕法尼亞。脂質的製備也可以利用其他脂質體形成技術，所述技術可能不能在脂質體製備中獲得需要的最終平均泡囊直徑或狹窄的泡囊直徑範圍，這些技術包括但不限於均質化方法、微流化方法、超聲處理法、高剪切混合或通過金屬燒結體或陶瓷過濾器擠出法。例如，參見，New，1990，LiposomesA Practical Approach，牛津大學出版社，紐約，第2章。
在另一個優選的實施方案中，在高包封率條件下形成脂質體。優選反蒸發相方法。通過此種方法形成的反相蒸發泡囊(REVs)的特徵是(a)一個或多個雙層，(b)包封率通常在約20-50％之間，和(c)在約500和高達20,000nm(20微米)之間的寬範圍尺寸。這些和其他脂質體製劑方法已經有過評述。參見，Szoka等人，1980，Biochim.Biophys.Acta 601559-71。
被擠出的製劑也可以含有希望包入泡囊、微團或脂質體內或與其結合的任何物質。在一個優選的實施方案中，所述物質是膽固醇或其他甾族化合物或甾族化合物的衍生物、溶劑、緩衝劑、酸、鹼、鹽、金屬、螯合劑、糖、蛋白質、核酸或藥物。例如，參見Lasic，1997，Liposomes in Gene Delivery，CRC Press LLC，Boca Raton 67-71。在一個更優選的實施方案中，所述物質是膽固醇、聚乙二醇、烷基硫酸酯、溴化銨或白蛋白。在另一個更優選的實施方案中，所述物質是藥物。脂質體例如可以有利於治療的方式用於改變藥物的組織分布和吸收，並且通過允許更少的給藥次數提高治療的方便性。例如，參見Poznansky等人，1984，Pharmacol.Rev.36277-336。在另一個更優選的實施方案中，所述藥物是抗高血脂藥劑。參見，ThePhysicians』Desk Reference(第54版，2000)。在一個更優選的實施方案中，所述抗高血脂藥劑是鹽酸考來替泊、2-(對-氯苯氧基)-2-甲基丙酸乙酯、吉非羅齊、非諾貝特、西立伐他汀鈉、氟伐他汀鈉、阿伐他汀鈣、洛伐他汀、普伐他汀鈉、辛伐他汀或煙酸。參見，同前。在另一個優選的實施方案中，所述藥物是抗生素。在一個更優選的實施方案中，所述抗生素是多柔比星。參見，同前，第508頁。在另一個更優選的實施方案中，所述抗生素是兩性黴素B。參見，同前，第1653頁。在另一個優選的實施方案，抗癌藥物是長春新鹼、米託蒽醌或其他抗癌藥物。參見，例如Bally等人，1990，Biochim.Biophys.Acta，1023133-9；Sugarman等人，1992，Crit.Rev.Oncol.Hematol.，12231-42；Kim等人，1993，Drugs，46618-38；Lim，1997，J.Pharmacol.Exp.Ther.，281566-73；Fielding，1991，Clin.Pharmokinet.，21155-64。
對於欲在體內使用的脂質體，可以使用含有藥學上可接受的載體的含水緩衝液。此種組合物可以含有接近生理條件所需要的藥用輔助物質，例如pH調節和緩衝劑、滲漲度調節劑等，例如乙酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉、氯化鉀、氯化鈣等。優選的實施方案使用具有接近生理重量摩爾滲透壓濃度(即290mOsm/kg)的含水緩衝液。此類緩衝液的例子包括0.9％的鹽水、5％葡萄糖和10％蔗糖溶液。可以使用其他多種可藥用的載體。通常，生理鹽水可作為可藥用的載體。其他適當的載體包括，例如水、緩衝水、0.4％鹽水、0.3％氨基乙酸等，包括用於提高穩定性的糖蛋白，例如白蛋白、脂蛋白、球蛋白等。
被擠出的製劑還可能含有雜質或汙染物，雖然在優選的實施方案中在擠出加工前、擠出過程中或之後從含水溶液中除去了雜質或汙染物。
可以通過常規、已知的滅菌技術對這些組合物進行滅菌。所獲得的含水溶液可以包裝好使用或者在無菌條件下過濾並凍幹，在使用前將凍幹的製劑與無菌的含水溶液混合。
脂質體的應用使用本發明的方法和裝置製備的泡囊、微團和脂質體可以以使用常規技術製備的泡囊、微團和脂質體的任何方式使用。在一個優選的實施方案中，本發明的方法和裝置製備的脂質體被用於向患者輸送藥物或藥學活性成分。例如，參見，美國專利No.4,769,250；4,906,477；5,736,155；6,060,080；Poznansky等人，1984，Pharmacol.Rev.，36277-36；Lim，1997，J.Pharmacol.Exp.Ther.，281566-73；Kim，1993，Drugs，46618-38；Fielding，1991，Clin.Pharmokinet.21155-64；Sugarman等人，1992，Crit.Rev.Oncol.Hematol.，12231-42；Bally等人，1990，Biochim.Biophys.Acta，1023133-39。在一個更優選的實施方案中，脂質體有選擇地向患者體內的組織或細胞類輸送藥物或藥學活性物質。在另一個優選的實施方案中，脂質體包封核酸。參見，Lasic，1997，Liposomes in GeneDelivery，CRC Press LLC，Boca Raton 67-71。在特別優選的實施方案中，該核酸是用於抑制基因表達的antisense核酸。在另一個特別優選的實施方案中，含該核酸的脂質體用於基因治療方案，以治療例如遺傳病(例如，囊性纖維化、高雪氏病、鐮狀細胞貧血、地中海貧血、血友病或家族性高膽固醇血症)、癌症(例如通過強化腫瘤的免疫原性、提高免疫細胞活性、在腫瘤內插入自殺基因、在腫瘤內插入腫瘤抑制基因、阻斷基因的表達、保護幹細胞或插入受腫瘤特異啟動子控制的毒素編碼基因)、感染性疾病(例如，獲得性免疫缺乏綜合症、肝炎或皰疹)、神經系統疾病(例如，帕金森氏症、阿爾海默氏病或肌萎縮側索硬化)、心血管疾病(例如，動脈粥樣硬化、再狹窄、血栓症或心臟缺血)或其他疾病或不適(例如，關節炎、哮喘、糖尿病、骨質疏鬆和老年性虛弱)。參見，Lasic，1997，Liposomesin Gene Delivery，CRC Press LLC，Boca Raton 67-71，第8-13頁。
在特別優選的實施方案中，使用本發明的方法和裝置製備用於治療動脈粥樣硬化的脂質體，如在美國專利No.5,746,223；6,367,479；6,079,416；6,080,422；5,736,157；5,948,435；5,858,400；5,843,474；6,312,719和6,139,871中的描述。所述脂質體可以結合在蛋白質或多肽上以提高膽固醇的轉移率或脂質體攜帶膽固醇的能力。載脂蛋白和脂質體的結合是特別有用的。載脂蛋白A1、載脂蛋白A2和載脂蛋白E或其片斷、衍生物、激動劑、類似物或肽模擬物通常是與脂質體結合的最有用的載脂蛋白。例如，參見美國專利No.6,037,323；6,004,925和6,046,166。這些載脂蛋白促進膽固醇和膽固醇酯向肝臟的轉移進行代謝。卵磷脂-膽固醇醯基轉移酶也被用於將游離膽固醇代謝為膽固醇酯。脂質體可以單獨或以任何組合方式和摩爾比率與載脂蛋白A1、載脂蛋白A2和卵磷脂-膽固醇醯基轉移酶或其片斷、衍生物、激動劑、類似物或肽模擬物結合。
在一個優選的實施方案中，按照本發明的方法和裝置製備的用於治療患者的脂質體存在於生理可接受的緩衝液、載體或稀釋液中。脂質體在緩衝液、載體或稀釋液中的濃度可以變化。通常，所述濃度可以是約20-300mg/ml，通常約100-300mg/ml，最常見的是約100-200mg/ml。本領域的普通技術人員可以改變這些濃度以優化使用不同的脂質體組分或針對特定的患者的治療。例如，可以提高濃度以降低與治療相關的流體負荷。這在患有動脈粥樣硬化相關的充血性的心力衰竭或嚴重高血壓的患者中是特別需要的。或者，可以稀釋含有刺激性脂質的脂質體，降低濃度以減輕給藥部位的炎症。
實施例1.在600psi下，將20％POPC通過0.1μm聚碳酸酯徑跡蝕刻膜擠出下列實施例說明使用常規的方法和裝置時，如果不有利地使用清洗劑，難以擠出的脂質可能阻塞或結垢擠出膜。
在50ml的錐形管中，將2g 1-棕櫚醯-2-油醯-sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼(POPC)(Genzyme，Cambridge MA，目錄編號.LP-04-031)加入8ml磷酸鹽緩衝的鹽水溶液(PBS)(140mM鹽水，20mM磷酸鹽，pH＝7.4)中，並用手劇烈震蕩約5分鐘，形成200mg/ml POPC MLVs在PBS中的均勻懸浮液。按照擠出機製造商的指導，在10ml的LIPEXTM擠出機(Northern Lipids，Vancouver，British Columbia，Canada)上安裝2-堆疊的0.1μm聚碳酸酯徑跡蝕刻膜(PCTE)NUCLEPORETM膜(Whatman，Ann Arbor，MI；產品目錄110605)並用PBS衝洗。在600psi下使POPC-PBS MLV懸浮液通過膜堆疊。擠出10ml體積所需的全部時間是17分鐘32秒。嘗試第二次通過相同的膜堆疊但在25分鐘後放棄。在該時間內，只有約2.5ml的懸浮液通過了膜堆疊，表明膜被阻塞或結垢。通過向系統中加入乙醇並使擠出繼續，證實了這一點。向擠出機容器中加入100％乙醇，最終的乙醇濃度是10％。約0.8ml 100％的乙醇加入管中，通過旋轉管2分鐘乙醇的含量達到約10％。在擠出機上施加600psi的壓力可以繼續擠出，表明過濾膜被POPC MLVs阻塞或結垢。
2.在400和800psi下，將20％POPC通過2-堆疊的PORETICSTM和NUCLEPORETMPCTE膜擠出本實施例說明用PORETICSTMPCTE膜(Osmonics，Minnetonka，MN)擠出20％POPC懸浮液比用NUCLEPORETMPCTE膜明顯減少阻塞或結垢，並且使用此二種膜在性能上的差別隨著壓力的增大而增大。
如在實施例1中的描述製備20％的GENZYMETMPOPC懸浮液並擠出通過10ml LIPEXTM擠出機。在各自的實驗中，擠出機安裝2-堆疊的PORETICSTM或NUCLEPORETM0.1μm平均孔徑的PCTE膜(分別是OsmonicPORETICSTM，產品目錄K01CP02500和Whatman NUCLEPORETM產品目錄110605)。在各自的實驗中，在400或800psi進行擠出。如圖1所示，即使在400psi，PORETICSTMPCTE膜也比NUCLEPORETMPCTE膜更不易發生阻塞或結垢。在800psi也觀察到了此種差別。
3.將20％POPC通過聚酯徑跡蝕刻(PETE)膜擠出本實施例說明脂質可以通過親水性擠出膜而不阻塞膜或使膜結垢。
在分開的實驗中，將10ml 200mg/ml的POPC MLVs在PBS中的懸浮液(按照實施例1的描述製備)擠出通過PORETICSTM聚酯徑跡蝕刻(PETE)膜，目錄編號T04CP02500(0.4μm平均孔徑，25mm膜直徑)；T02CP047FX(0.2μm平均孔徑，47mm膜直徑，手工切割至25mm直徑)和T01CP02500(0.1μm平均孔徑，25mm膜直徑)。結果示於表1中。每次實驗製備一批新的POPC MLVs。每次實驗之間用鹽水衝洗擠出機。使用380ZLS粒度分級器(Nicomp，Santa Barbara，CA)按照製造商的說明書通過QELS測定擠出的懸浮液的平均顆粒直徑。
表1

這些結果表明在PCTE膜發生阻塞或結垢的條件下，PETE膜不發生阻塞或結垢。而且，這些結果表明通過提高擠出壓力可以降低擠出脂質所獲得的粒子尺寸。
4.在高壓和低壓通過5-堆疊的PETE膜擠出20％EPC本實施例表明相對容易擠出的脂質可以通過親水性膜擠出。
在50ml的錐形瓶中，通過向總量為30ml的鹽水溶液(Abbot，Abbott Park，IL)加入6g LIPOID EPC_(Lipoid，Ludwigshafen，Germany)、取自蛋黃的磷脂醯膽鹼以製備20％的EPC溶液。用手震蕩燒瓶約5分鐘，直至看上去均勻。在10ml的LIPEXTM擠出機上安裝5-堆疊的0.1μm平均孔徑，25mm膜直徑的PORETICSTMPETE膜(目錄編號T01CP02500)。在兩個分開的實驗中，在400或800psi下，10ml EPC懸浮液通過過濾膜10次。在實驗之間清洗擠出機。結果示於下表2中。
表2

然後，能獲得其馬氏距離小於第一閾值的像素的坐標(x和y坐標)的統計數據，例如平均值、方差和協方差(步驟S207)。
上述4313個像素具有以下統計數據坐標的平均值-0.52 1.05坐標的方差1.20 1.25x和y坐標的協方差0.25因而，能如下構成一個具有25維的候選臉C1的特徵向量64.75 7.86 1.48 4.76 47.7411.37 1.29 1.52 2.52 3.9476.73 4.74 1.50 0.50 0.22120.4245.3313.8029.0055.92-0.52 1.05 1.20 1.25 0.25能獲得特徵向量和給定加權向量w的內積。對於候選臉C1，內積為617。
6.在600psi通過5-堆疊的PETE膜擠出20％POPC本實施例說明，通過在適度高壓下將難以擠出的脂質懸浮液通過親水性膜擠出，可以將其有效地轉化為SUVs懸浮液。
按照實施例1的描述製備20％的GENZYMETMPOPC懸浮液。在10ml的LIPEXTM擠出機上安裝5-堆疊的PORETICSTM0.1μm平均孔徑PETE膜(目錄編號T01CP02500)。在600psi下通過該膜擠出POPC懸浮液5次。結果示於下表3。
表3

7.在400和800psi下通過2-堆疊的PCTE和PETE膜擠出POPC本實施例證明在高壓下PETE膜比斜孔PCTE膜更不容易發生阻塞或結垢。
在我們先前的部分實施例中，在高壓下實施擠出的末端，由於過量的氮氣從出口收集管以高速逸出，導致部分擠出的脂質懸浮液在擠出後損失。此種逸出的氣體常常導致出口管從擠出機底座上吹掉並導致部分產物溶液從收集容器中濺出。為了矯正這一問題，我們安裝了一種防護管，以防止出口收集管從擠出機基座上吹落。所述防護管實質上是允許較細的出口收集管從其中通過的更大直徑的管。防護管提供了出口收集管和底板之間更大的摩擦力。為了更好地控制擠出溶液，安裝一種具有導向作用的環架，使管保持在正確的方向，使擠出的懸浮液由我們的收集容器充分地收集。這二種額外的裝置為出口收集管提供了額外的控制，以最大限度地防止產品損失。
按照實施例1的描述製備20％GENZYMETMPOPC懸浮液。在分開的實驗中，在10ml LIPEXTM擠出機上安裝2-堆疊的PORETICSTM0.1μm平均孔徑PETE膜(目錄編號T01CP02500)或PCTE(目錄編號K01CP02500)膜。對於每種設置，在400或800psi通過膜擠出POPC懸浮液，在一次通過中處理的擠出懸浮液的體積作為時間的函數進行測量。結果示於圖3。圖3A表明在400psi，PETE和PCTE膜之間沒有明顯的差別。圖3B表明在高壓時，在膜發生阻塞或結垢前，PETE構造的膜比PCTE構造的膜處理的體積大得多。
8.通過1-、2-、5-和10-堆疊的PETE膜擠出20％POPC下列實施例說明膜的數目對POPC LUVs製備效率的影響。
按照實施例1的描述製備20％的GENZYMETMPOPC懸浮液並通過10mlLIPEXTM擠出機擠出。在分開的實驗中，在擠出機上安裝1、2、5或10-堆疊的PORETICSTM0.1μm平均孔徑PETE膜(Osmonics Poretics目錄編號T01CP02500)。所有擠出均在800psi下進行。結果示於圖4中。圖4A示出了通過次數和所製備的LUVs的平均直徑之間的關係。在堆疊的膜的數量和製備所需平均直徑的LUVs所要求的通過次數之間總體上是逆相關的關係。圖4B示出了通過次數和流速之間的關係。對於任何給定的通過次數，流速與堆疊中的過濾膜的數量成反比例。如圖4C所示，對於製備平均直徑為120nm的LUVs所要求的通過次數，5-堆疊的膜(通過4次)比10-堆疊的膜(通過5次)略低。
9.在400、600和800psi通過5-堆疊的PETE膜擠出20％POPC本實施例說明了壓力對POPC LUVs的製備效率的影響。
按照實施例1的描述製備20％的GENZYMETMPOPC懸浮液並通過10mlLIPEXTM擠出機擠出。擠出機安裝了5-堆疊的PORETICSTM0.1μm平均孔徑PETE膜(Osmonics PORETICSTM目錄編號T01CP02500)。在分開的實驗中，在400、600或800psi下進行擠出。如圖5A所示，與400psi相比，使用600或800psi以更少的通過次數獲得了更小尺寸的顆粒。圖5B示出對於給定的通過次數，在800psi的流速大約是600psi的二倍，而600psi的流速大約是400psi的二倍。圖5C表示為了製備平均直徑約為120nm的LUVs，在400psi下需要通過8次，在600psi下需要通過5次以及在800psi下需要通過4次。
10.在400至1500psi通過2-堆疊的PCTE和PETE PORETICSTM和PCTE NUCLEPORETM膜擠出GENZYMETMPOPC本實施例說明與通過PCTE膜擠出相比，提高通過PETE膜的擠出壓力使得膜的阻塞或結垢意想不到地大幅度降低，因此意想不到地提高了膜的脂質加工能力。本實施例進一步證明此種效果沒有明顯的上限。
如上文的描述製備20％的POPC懸浮液。在分開的實驗中，在10ml的LIPEXTM擠出機上安裝2-堆疊的PORETICSTMPETE或PCTE或NUCLEPORETMPCTE 0.1μm孔徑膜(分別為Osmonica PORETICSTM目錄編號T01CP02500，K01CP02500和Whatman Nuclepore目錄編號110605)。對於每種設備，在400psi至1500psi壓力範圍擠出POPC懸浮液通過膜。作為時間的函數測量擠出的POPC懸浮液的重量，並計算在給定的壓力下，每種膜可以通過的懸浮液量的最高值。如圖6所示，繪製這些計算值相對擠出壓力的曲線。對於所使用的每種類型的膜，在膜完全阻塞前處理的懸浮液的最大量隨著擠出壓力的提高線性地增大。此種線性增大沒有明顯的上限。每種膜曲線的斜率是隨著壓力增大膜的改善程度的度量。PORETICSTMPETE，PORETICSTMPCTE和NUCLEPORETMPCTE膜的結果曲線的斜率分別是0.051，0.028和0.015。
11.在高達5000和8000psi壓力下通過階梯式下降的2-堆疊PETE膜擠出20％POPC本實施例說明使用高擠出壓力更快速地降低了粒子尺寸，因此可以較少的擠出通過次數達到需要的粒子尺寸。本實施例類似於實施例9(圖5C)的描述，不同之處是在本實施例中，與更高的擠出壓力結合，使用了階梯式下降的擠出加工方法，和使材料通過孔徑不斷下降的雙堆疊膜。由於擠出壓力較高，為獲得需要的粒子尺寸所要求的擠出通過次數減少，因此明顯降低了總的處理時間。
在分開的實驗中，通過在磷酸緩衝鹽水溶液中水化POPC製備20％的POPC懸浮液。然後在高達5000或8000psi的擠出壓力下，使所獲得的溶液以離散的通過方式通過膜擠出。首先通過2-堆疊的PORETICSTMPETE 0.4μm膜，第二通過2-堆疊的PORETICSTMPETE 0.2μm膜，其餘的是通過2-堆疊的PORETICSTMPETE 0.1μm膜。在每次通過後測量粒子尺寸。表4的數據說明由於壓力較高，獲得低於140nm平均粒子直徑所要求的通過次數減少了。
表4

12.在高達1500psi的壓力下通過2-堆疊的Whatman ANOPORETM膜擠出20％POPC本實施例說明使用更高的擠出壓力提高了擠出體積，並降低了阻塞或結垢的發生。在本實施例中，製備20％的POPC懸浮液並在不同的壓力下通過2-堆疊的0.1μm Whatman ANOPORETM氧化鋁無機膜擠出。在較高的壓力下，更大體積的物質能夠流過膜。
表5

已經描述了本發明的各種實施方案。上述描述和實施例用於說明本發明而不構成限制。事實上，本領域的普通技術人員顯然可以對所描述的本發明的各種實施方案做出修改而不偏離本發明的精神或所附權利要求的範圍。
本文所引用的所有文獻均通過引用併入其全部內容。
權利要求
1.一種泡囊懸浮液的製備方法，所述方法包括在高壓下將含有脂質的混合物通過親水性篩網膜擠出。
2.權利要求1的方法，其中所述泡囊懸浮液是脂質體懸浮液。
3.權利要求1的方法，其中所述混合物含有多層泡囊的懸浮液。
4.權利要求1的方法，其中所述混合物是乳液。
5.權利要求1的方法，其中所述混合物含有多種脂質。
6.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜具有約70度或更小的水接觸角。
7.權利要求6的方法，其中所述篩網膜具有約50度或更小的水接觸角。
8.權利要求7的方法，其中所述篩網膜具有約40度或更小的水接觸角。
9.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜含有至少一種選自聚酯、氧化鋁、乙酸纖維素、纖維素混合酯、玻璃、聚醚碸、聚乙烯吡咯烷和聚碸的材料。
10.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜是聚酯膜。
11.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜是徑跡蝕刻的膜。
12.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜包含塗層。
13.權利要求12的方法，其中所述塗層是親水性塗層。
14.權利要求12的方法，其中所述塗層是疏水性塗層。
15.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約50nm至400nm範圍的平均直徑。
16.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約50nm至150nm範圍的平均直徑。
17.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約100nm至150nm範圍的直徑。
18.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約169±37nm範圍的平均直徑。
19.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約158±39.5nm範圍的平均直徑。
20.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約136±42nm範圍的平均直徑。
21.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約153.6±45.2nm範圍的平均直徑。
22.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約138.6±35.6nm範圍的平均直徑。
23.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約114.4±35.8nm範圍的平均直徑。
24.權利要求1的方法，其中所述泡囊具有約118.1±36.2nm範圍的平均直徑。
25.權利要求1的方法，其中所述脂質具有室溫或低於室溫的轉變溫度。
26.權利要求1的方法，其中所述脂質具有高於室溫的轉變溫度。
27.權利要求1的方法，其中所述脂質含有剛性醯基鏈。
28.權利要求27的方法，其中所述剛性醯基鏈是單不飽和醯基鏈。
29.權利要求1的方法，其中所述的混合物含有雜質或汙染物。
30.權利要求1的方法，其中所述的脂質是結合藥物的脂質。
31.權利要求1的方法，其中所述的脂質是帶電荷的脂質。
32.權利要求1的方法，其中所述的脂質是結合蛋白質的脂質。
33.權利要求1的方法，其中所述的脂質選自1-棕櫚醯-2-油醯-sn-丙三氧基-3-磷酸膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二棕櫚醯磷脂醯甘油、二硬脂醯磷脂醯乙醇胺、蛋黃磷脂醯膽鹼、二油醯磷脂醯膽鹼、二月桂醯磷脂醯膽鹼、二月桂醯磷脂醯甘油、油醯棕櫚醯磷脂醯膽鹼、糖脂連接的磷脂、磷脂醯膽鹼、磷脂醯甘油、卵磷脂、β，γ-二棕櫚醯-α-卵磷脂、神經鞘磷脂、磷脂醯絲氨酸、磷脂酸、N-(2，3-二(9-(Z)-十八烯氧基))-丙-1-基-N，N，N-三甲基氯化銨、磷脂醯乙醇胺、溶血卵磷脂、溶血磷脂醯乙醇胺、磷脂醯肌醇、腦磷脂、心磷脂、腦苷脂、二(十六烷基)磷酸酯、二油醯磷脂醯甘油、棕櫚醯-油醯-磷脂醯膽鹼、二-硬脂醯-磷脂醯膽鹼、硬脂醯-棕櫚醯-磷脂醯膽鹼、二-棕櫚醯-磷脂醯乙醇胺、二-硬脂醯-磷脂醯乙醇胺、二-十四醯-磷脂醯絲氨酸和二-油醯-磷脂醯膽鹼。
34.權利要求33的方法，其中所述的脂質是磷脂醯膽鹼或神經鞘磷脂。
35.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜具有約0.4μm或更低的平均孔徑。
36.權利要求35的方法，其中所述親水性篩網膜具有約0.2μm或更低的平均孔徑。
37.權利要求36的方法，其中所述親水性篩網膜具有約0.1μm或更低的平均孔徑。
38.權利要求1的方法，其中在約400psi或更高的壓力下進行所述擠出。
39.權利要求38的方法，其中在約800psi或更高的壓力下進行所述擠出。
40.權利要求39的方法，其中在約1500psi或更高的壓力下進行所述擠出。
41.權利要求40的方法，其中在約5000psi或更高的壓力下進行所述擠出。
42.權利要求41的方法，其中在約8000psi或更高的壓力下進行所述擠出。
43.權利要求42的方法，其中將所述脂質的含水懸浮液通過多個堆疊膜擠出。
44.權利要求43的方法，其中每個堆疊膜具有相同的平均孔徑。
45.權利要求44的方法，其中至少一個堆疊膜的平均孔徑不同於至少另一個堆疊膜的平均孔徑。
46.權利要求45的方法，其中所述堆疊膜的排列方式是使所述混合物通過平均孔徑依次減小的膜擠出。
47.權利要求1的方法，其中在控制的溫度下進行所述擠出。
48.權利要求47的方法，其中所述控制的溫度是近似恆溫的溫度。
49.權利要求48的方法，其中所述近似恆溫的溫度約為室溫。
50.權利要求49的方法，其中所述近似恆溫的溫度在約20℃至約30℃之間。
51.權利要求50的方法，其中所述近似恆溫的溫度是約25℃。
52.權利要求1的方法，其中以約0.0001至約40毫升/分鐘/平方毫米的通量速率將所述混合物通過所述親水性膜擠出。
53.權利要求1的方法，其中所述泡囊含有藥學活性物質。
54.權利要求1的方法，其中所述擠出包括多次通過。
55.權利要求54的方法，其中所述擠出包括階梯式下降的擠出。
56.權利要求1的方法，其中交替地以向前和反轉的方向使所述混合物通過所述親水性篩網膜擠出。
57.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜具有高於約8×105孔/平方釐米的孔密度。
58.權利要求1的方法，其中所述親水性篩網膜具有在約3至約50μm之間的厚度。
59.一種用於在高壓下擠出脂質的含水懸浮液的裝置，所述裝置包括親水性篩網膜和用於在高壓下通入和排出液體的裝置。
60.權利要求1的方法，其中在進行所述擠出前用清洗劑衝洗所述親水性篩網膜。
61.權利要求60的方法，其中所述清洗劑從所述膜的孔上除去阻塞或結垢的物質。
62.權利要求60的方法，其中所述清洗劑防止物質阻塞所述膜或在所述膜上結垢。
63.權利要求61或62的方法，其中所述清洗劑含有乙醇。
64.一種脂質體的製備方法，所述方法包括在高於約8000psi的壓力下，將含有脂質的混合物通過親水性膜擠出。
65.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有約50nm至400nm之間的平均直徑。
66.權利要求65的方法，其中所述脂質體具有在約50nm至150nm之間的平均直徑。
67.權利要求65的方法，其中所述脂質體具有在約100nm至150nm之間的平均直徑。
68.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有在約169±37nm範圍的平均直徑。
69.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有在約158±39.5nm範圍的平均直徑。
70.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有在約136±42nm範圍的平均直徑。
71.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有在約153.6±45.2nm範圍的平均直徑。
72.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有在約138.6±35.6nm範圍的平均直徑。
73.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有在約114.4±35.8nm範圍的平均直徑。
74.權利要求64的方法，其中所述泡囊具有在約118.1±36.2nm範圍的平均直徑。
全文摘要
本發明總體上涉及製備包括微團，特別是脂質體在內的泡囊的方法和裝置，該方法包括在高壓下將含有能夠形成泡囊的物質的溶液通過篩網膜擠出。
文檔編號B01J13/02GK1635873SQ02823595
公開日2005年7月6日 申請日期2002年9月27日 優先權日2001年9月28日
發明者K·R·希爾, W·羅德裡格扎, G·A·西 申請人:埃斯佩裡安醫療公司