新型4-氨基-3-(吡咯基-苯氧基甲基)-噻吩並[3,2]吡啶-7-羧酸衍生物的製作方法

2023-06-08 03:35:51 5

專利名稱：新型4-氨基-3-(吡咯基-苯氧基甲基)-噻吩並[3,2]吡啶-7-羧酸衍生物的製作方法
專利說明新型4-氨基-3-(吡咯基-苯氧基甲基)-噻吩並[3，2]吡啶-7-羧酸衍生物 本發明涉及作為Raf激酶的小分子抑制劑的取代的噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸衍生物。
更具體而言，本發明提供至少一種式I化合物
其中 R1選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，氰基，NR4R5，三氟甲基和NO2； R2可以是選自下列基團中的一個或多個基團氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基或雜芳基取代的低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，氰基，滷素，甲基磺醯基，磺醯胺，三氟甲基，磺醯脲，醯胺，酯，氨基甲酸酯和脲； R3選自氫，羥基，低級烷基，取代的低級烷基，低級烷氧基和NR4R5；環B選自芳基和雜芳基； 環A是任選還被取代的
A獨立地選自C，N，O和S，並且環A是芳族的， R4和R5選自氫，低級烷基或被羥基或低級烷氧基取代的低級烷基， X是O或NH， 及其藥用鹽。
如上所述，本發明化合物是Raf激酶抑制劑。此抑制可能與化合物作為有效和選擇性抗癌劑的活性相聯繫。
許多疾病症狀的特徵在於細胞不受控制的增殖和分化。這些疾病症狀包括各種細胞類型和疾病如癌症，動脈粥樣硬化症，和再狹窄。在許多的這類疾病症狀中，激酶，即通過調節細胞分裂和增殖而進行基本功能的重要細胞酶，看來似乎起著決定性的作用。
調節細胞增殖和生存的分子機理和信號路徑作為抗癌策略的潛在標靶而正受到相當多的關注。近年來，針對靶向MAPK路徑的努力有了顯著的增加，所述的路徑將由受體酪氨酸激酶(RTKs)和G蛋白偶合受體引起的增殖信號的廣泛陣列集成在一起。
MAPK信號串包括由三種激酶組成的中心模塊的G蛋白Ras工作上遊Raf磷酸化並且由此活化MEK1/2，而MEK1/2又最終導致ERK1/2的活化。長期認為Raf激酶對於藥物發現是有吸引力的靶，原因在於其作為癌症相關的信號轉導用的潛在關卡的重要性(Strumberg和Seeber，Onkologie，2005，28101-107；Beeram等，J.Clin.Oncol.2005，236771-6790)。用於腫瘤細胞的增殖和生存的MAPK信號串的重要性最近隨著在人類腫瘤中活化B-Raf突變的發現而增加。已經在黑素瘤、甲狀腺、結腸和其它癌症中確定活化Raf突變(Strumberg和Seeber，Onkologie，2005，28101-107；Bollag等，Current Opinion in Investigational Drugs，2003，41436-1441)。
因此，除了用Ras突變和活化生長因子受體控制腫瘤的任務外，Raf激酶抑制劑在攜帶B-Raf致癌基因的腫瘤中可具有治療潛力(Sharma等，Cancer Res.2005，652412-2421)。
哺乳動物Raf絲氨酸/蘇氨酸激酶家族由稱作A-Raf，B-Raf和C-Raf(Raf-1)的三種68-至74-kd蛋白組成，它們高度共享保存氨基終端調節區域和在羧基終端的催化域。Raf蛋白通常是胞質的，但是它們被小G-蛋白Ras恢復成質膜，並且這對於它們由生長因子、細胞因子和激素的活化是基本步驟。在膜上，通過包括一些殘基的構象變化、結合到其它蛋白上、結合到脂質上和磷酸化和脫磷酸化的高度複雜的過程，發生Raf活化。
已經發現各種試劑幹涉Raf激酶，包括反義寡核苷酸和小分子。這些抑制劑防止Raf蛋白的表達、阻斷Ras/Raf相互作用，或阻隔其激酶活性。B-Raf活性由siRNA或通過激酶抑制劑BAY-43-9006的向下調節導致黑素瘤細胞生長的抑制和導致1205Lu細胞腫瘤發生潛力降低的B-Raf的siRNA-介導減少。目的正進行臨床評價的Raf抑制劑顯示出具有完全可容忍安全分布的抗癌功效的有望信號。臨床上最先進的是Raf抑制劑BAY43-9006，它是最近由FDA認可的，用於治療轉移性腎細胞癌，其中另外的第III期臨床試驗用於治療其它癌症。
儘管已經取得了進展，但是對於可以用於治療各種各樣的腫瘤和其它增殖性疾病的小分子化合物繼續研究，所述的其它增殖性疾病包括再狹窄，血管發生，糖尿病性視網膜病，銀屑病，手術粘連，黃斑變性和動脈粥樣硬化症。因此，對於提供具有抗增殖活性的組合物、藥品和/或藥物存在強烈需要。與其它的抗增殖藥劑相比，這些組合物、藥品和/或藥物可以不僅具有強活性，而且表現出減少的副作用。此外，響應於用這些組合物、藥品和/或藥物治療的腫瘤範圍可以是廣泛的。這種類型的活性成分可以作為單個藥劑和/或組合治療而適宜於上述症狀，所述的組合治療是它與其它的治療劑，與放射線，與手術/外科程序，熱處理或在所述的症狀中已知的任何其它治療相結合。
在說明書中，在指出時，各種基團可以被1-5個或優選1-3個取代基取代，所述的取代基獨立地選自低級烷基，低級-鏈烯基，低級-炔基，二氧代-低級-亞烷基(形成例如苯並二氧基(benzodioxyl))，滷素，羥基，CN，CF3，NH2，N(H，低級-烷基)，N(低級-烷基)2，氨基羰基，羧基，NO2，低級-烷氧基，硫代-低級-烷氧基，低級-烷基磺醯基，氨基磺醯基，低級-烷基羰基，低級-烷基羰氧基，低級-烷氧基羰基，低級-烷基-羰基-NH，氟-低級-烷基，氟-低級-烷氧基，低級-烷氧基-羰基-低級-烷氧基，羧基-低級-烷氧基，氨基甲醯基-低級-烷氧基，羥基-低級-烷氧基，NH2-低級-烷氧基，N(H，低級-烷基)-低級-烷氧基，N(低級-烷基)2-低級-烷氧基，苄氧基-低級-烷氧基，單-或二-低級烷基取代的氨基-磺醯基和可以任選被以下基團取代的低級-烷基滷素，羥基，NH2，N(H，低級-烷基)或N(低級-烷基)2。用於烷基，芳基，雜芳基和雜環的優選取代基是滷素，低級烷氧基，低級烷基和氨基。
表述「R2可以是一個或多個基團」表示可以有一個或多個連接到A基團上的R2基團，優選1至3個，並且更優選1或2個，且再優選只有1個。
術語「烷基」是指具有1至約20個碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基，包括具有1至約7個碳原子的基團。在一些實施方案中，烷基取代基可以是低級烷基取代基。術語「低級烷基」是指具有1至6個碳原子的烷基，並且在一些實施方案中，具有1至4個碳原子的烷基。烷基的實例包括但不限於，甲基，乙基，正-丙基，異-丙基，正-丁基，仲-丁基，叔-丁基，正-戊基，和仲-戊基。
如本文所用的，「環烷基」意指只由碳原子組成的任何穩定的單環或多環體系，其任何一個環是飽和的，並且術語「環烯基」意指只由碳原子組成的任何穩定的單環或多環體系，其至少一個環是部分未飽和的。優選的環烷基是C3-C6-環烷基。環烷基的實例包括但不限於，環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環庚基，金剛烷基，環辛基，雙環烷基，包括雙環辛烷如[2.2.2]雙環辛烷或[3.3.0]雙環辛烷，雙環壬烷如[4.3.0]雙環壬烷，和雙環癸烷如[4.4.0]雙環癸烷(十氫化萘)，或螺環化合物。環烯基的實例包括但不限於，環戊烯基或環己烯基。
如本文所用的術語「鏈烯基」是指含有一個雙鍵並且具有2至6個，優選2至4個碳原子的不飽和直鏈或支鏈脂族烴基。這樣的「鏈烯基」的實例是乙烯基，烯丙基，異丙烯基，1-丙烯基，2-甲基-1-丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，3-丁烯基，2-乙基-1-丁烯基，3-甲基-2-丁烯基，1-戊烯基，2-戊烯基，3-戊烯基，4-戊烯基，4-甲基-3-戊烯基，1-己烯基，2-己烯基，3-己烯基，4-己烯基和5-己烯基。
如本文所用的術語「炔基」是指含有一個叄鍵並且具有2至6個，優選2至4個碳原子的不飽和直鏈或支鏈脂族烴基。這樣的「炔基」的實例是乙炔基，1-丙炔基，2-丙炔基，1-丁炔基，2-丁炔基，3-丁炔基，1-戊炔基，2-戊炔基，3-戊炔基，4-戊炔基，1-己炔基，2-己炔基，3-己炔基，4-己炔基和5-己炔基。
術語「醯胺」表示-(C＝O)-N-RaRb，其中Ra和Rb獨立地為氫或低級烷基。醯胺基的實例是氨基甲醯基-(C＝O)-NH2。
術語「酯」表示-(C＝O)-O-C1-6-烷基。
如在定義中所用的術語「滷素」是指氟、氯、溴或碘，優選氟和氯。
「芳基」是指一價單環或雙環的芳族碳環烴基，優選6-10元芳族環體系。優選的芳基包括但不限於，苯基，萘基，甲苯基和二甲苯基。
「雜芳基」是指含有最多兩個環的芳族雜環體系。優選的雜芳基包括5或6元雜芳基，但不限於，噻吩基，呋喃基，吲哚基，吡咯基，吡啶基，吡嗪基，噁唑基，噻唑基(thiaxolyl)，喹啉基，嘧啶基，咪唑和四唑基。
在作為雙環的芳基或雜芳基的情況下，應當理解一個環可以是芳基，而另一個環是雜芳基，並且它們都是取代或未取代的。
「雜環」是指取代或未取代的5至8元單或雙環的非芳族烴，其中1至3個碳原子被選自氮、氧或硫原子中的雜原子代替。實例包括吡咯烷-2-基；吡咯烷-3-基；哌啶基；嗎啉-4-基等。
「雜原子」是指選自N，O和S中的原子。
「烷氧，烷氧基或低級烷氧基」是指連接到氧原子上的任何上述低級烷基。典型的低級烷氧基包括甲氧基，乙氧基，異丙氧基或丙氧基，丁氧基等。在烷氧基的含義內進一步包括的是多個烷氧基側鏈，例如乙氧基乙氧基，甲氧基乙氧基，甲氧基乙氧基乙氧基等；和取代的烷氧基側鏈，例如二甲基氨基乙氧基，二乙基氨基乙氧基，二甲氧基-磷醯基甲氧基等。
「藥用的」如藥用載體、賦形劑等是指對給予特定化合物的受試者而言是藥理上可接受的且基本上無毒性的。
「藥用鹽」是指保留本發明化合物的生物有效性和特性且由適宜的無毒性有機酸或無機酸或有機鹼或無機鹼形成的常規酸加成的鹽或鹼加成的鹽。酸加成的鹽的實例包括那些來源於無機酸、諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、氨基磺酸、磷酸和硝酸的鹽以及那些來源於有機酸、諸如對甲苯磺酸、水楊酸、甲磺酸、草酸、琥珀酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、富馬酸、三氟乙酸等的鹽。鹼加成的鹽的實例包括那些來源於銨、鉀、鈉和季銨氫氧化物的鹽、諸如氫氧化四甲銨。將藥物化合物(即藥物)化學修飾成鹽是藥劑師眾所周知的獲得化合物改善的物理和化學穩定性、吸溼性、流動性和溶解性的技術。例如，參見Ansel等《藥物劑型和藥物轉運系統》(Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)(第6版1995)196和1456-頁。
具有至少一個不對稱碳原子的式I化合物及它們的鹽可以作為外消旋混合物或不同的立體異構體存在。可以由已知的分離方法如色譜分離各種異構體。
本文公開且由式I所涵蓋的化合物可以顯示出互變異構現象或結構異構現象。認為本發明包括這些化合物的任何互變異構或結構異構形式，或這些形式的混合物，並且不限於上面的式I中描述的任一互變異構或結構異構形式。
「有效量＂是指對於防止、減輕或改善疾病症狀或延長被治療的患者生存有效的量。
「IC50」是指需要抑制50％特定測量活性的特定化合物的濃度。IC50可被測定，尤其如在下文在試驗描述中所述測定。
「藥用酯」是指常規酯化的帶有羧基或羥基的通式I化合物，該酯類保留了通式I-IV化合物的生物有效性和特性且在體內(在生物體內)分別被裂解成相應的活性羧酸或醇。
本發明的化合物還包括的是那些式I化合物，其中 R1選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，氰基，NR4R5，三氟甲基和NO2； R2選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基或雜芳基取代的低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，氰基，滷素，甲基磺醯基，磺醯胺，三氟甲基，磺醯脲，醯胺，酯，氨基甲醯基，氨基甲酸酯和脲； R3選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，低級烷氧基和NR4R5； 環B選自芳基和雜芳基； 環A是任選還被取代的
A獨立地選自C，N，O和S，並且環A是芳族的， R4和R5選自氫，低級烷基或被羥基或低級烷氧基取代的低級烷基， X是O或NH， 及其藥用鹽。
在根據本發明的式I化合物全部實施方案中，R2可以是選自下列基團中的一個或多個基團 氫， 低級烷基， 被羥基取代的低級烷基， 芳基或雜芳基取代的低級烷基，其中芳基或雜芳基可以被滷素或低 級烷基取代， 低級鏈烯基， 低級炔基， 低級烷氧基， 芳基， 芳基-低級亞烷基，其中芳基被低級烷氧基或滷素取代， 雜芳基， 雜芳基-低級亞烷基，其中雜芳基被低級烷基或被羥基取代的低級烷 基取代， 氰基， 滷素， 甲基磺醯基， 磺醯胺， 三氟甲基， 磺醯脲， 醯胺， 酯， 氨基甲酸酯， 和脲。
在根據本發明的式I化合物的全部實施方案中，R3可以選自氫，羥基，低級烷基，低級烷氧基和NR4R5。
在根據本發明的式I化合物的全部實施方案中，環A可以是
其中A獨立地選自C，N，O和S，並且其中連接到R2上的A和連接到分子其餘部分上的A是C或N，且環A是芳族的。
優選的是所述式的化合物，其中 R1是氫或低級烷基，其在5-取代的1-羥基環B的C2處，其中環B是苯基，或 R1是氫或低級烷基，其在5-取代的3-羥基環B的C2處，其中環B是吡啶。
優選的環A包括


和
其中所述的環可以還任選如上所述取代。
特別優選的所述式的化合物是 4-氯-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯； 4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯； 4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺， 4-氯-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽， 4-氨基-3-{5-[4-(2-羥基-乙基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺甲苯-4-磺酸鹽， 4-氯-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺， 4-氯-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺， 4-氯-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺， 4-氯-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺， 4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺甲苯-4-磺酸鹽， 4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺， 4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸， 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽， 4-氯-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並-[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽， 4-氯-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺， 4-氯-3-[2-甲基-5-(甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯， 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，和 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺。
本發明的化合物用於治療或控制細胞增殖性疾病，特別是腫瘤疾病。這些化合物和含有這些化合物的製劑可以用於治療或控制實體瘤，諸如乳腺、結腸、肺和前列腺腫瘤。
根據本發明的化合物的治療有效量指的是有效預防、緩解或改善疾病症狀或延長所治療受試者存活的用量。治療有效量的測定屬於本領域技術的範圍。
本發明化合物的治療有效量或劑量可以在寬限內改變並且可以按照本領域公知的方式測定。可以在每種特定情況中根據個體需要調整這類劑量，包括所給予的具體化合物、給藥途徑、所治療的疾病和所治療的患者。一般來說，就對體重約為70Kg的成年人的口服或非腸道給藥而言，約10mg至約10,000mg，優選約200mg至約1,000mg的每日劑量應是合適的，不過，當指示時，可以超過上限。可以將每日劑量作為單劑量或分劑量給藥，或就非腸道給藥而言，可以作為連續輸注給藥。
本發明的製劑包括適宜於以下的那些口服、鼻、局部(包括口腔和舌下)、直腸、陰道和/或胃腸外給藥。該製劑可以方便地以單位劑量形式存在，並且可以由製藥學領域中周知的任何方法製備。可以與載體材料組合以產生單一劑量形式的活性成分的量將根據將治療的主體以及給藥的特定模式而變化。可以與載體材料組合以產生單一劑量形式的活性成分的量通常將是產生治療效果的式I化合物的量。通常，在100％中，該量的範圍為約1％至約99％活性成分，優選約5％至約70％，最優選約10％至約30％。
製備這些製劑或組合物的方法包括以下步驟將本發明的化合物與載體，以及任選的一種或多種輔助成分組合。通常，通過將本發明的化合物與液體載體或細碎的固體載體，或它們兩者，均勻並且密切地組合，然後，如果需要，成型為產品，製備製劑。
本發明適宜於口服給藥的製劑可以是以下形式膠囊劑、扁囊劑、小藥囊、丸劑、片劑、錠劑(使用矯味的基質(flavored basis)，通常是蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)、粉劑、顆粒劑或作為在水性或非水性液體中的溶液劑或懸浮劑，或作為水包油或油包水液體乳劑，或作為酏劑或糖漿劑，或作為軟錠劑(使用惰性基質(inert base)，如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)和/或漱口劑等，各自含有預定量的本發明化合物作為活性成分。還可以將本發明的化合物作為大丸劑(bolus)、藥糖劑或糊劑給藥。
可以根據下面的通用方案合成本發明的化合物。
方案1
方案2
方案3
方案4
方案5
方案6
方案7
方案8
方案9
方案10
在方案1至10中，R1，R2，和R3如上面對於式I所定義，基團R，R』的實例可以在下面的實施例中發現。PG和PG』是如在下面的實施例中舉例說明的標準保護基團。
在下面的實施例中進一步舉例並且詳細說明方案1至10的反應條件。
在這些方案中，原料是可商購的，或如在下面的實施例所述獲得的。
提供下列實施例和參考文獻以幫助理解本發明，本發明的真實範圍闡明在後附權利要求中。
實施例1 3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.334.62C11H9BrClNO2S 根據Luk，K.；McDermott，L.A.；Rossman，P.L.；Wovkulich，P.M.；Zhang，Z.US專利20050256154 A1的程序，由3-甲基噻吩製備3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯原料。
實施例2 3-羥基-4-甲基-苯甲酸乙酯
M.W.180.205C10H12O3 將3-羥基-4-甲基苯甲酸(25.42g，167mmol)(TCI US)和濃硫酸(3mL)在無水乙醇(180mL)中的混合物加熱回流20小時。冷卻後，加入固體碳酸氫鈉(10g)，以中和酸。將混合物在二乙醚(2 X 400mL)和水(2 X 300mL)之間分配。將有機層用鹽水(300mL)洗滌，合併，乾燥(MgSO4)，過濾，並且濃縮。將剩餘物從己烷中重結晶，以兩批得到3-羥基-4-甲基-苯甲酸乙酯，為白色晶體。(產量29.14g，96.8％)。
實施例3 3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯甲酸乙酯
M.W.224.259 C12H16O4 在冰-水浴中冷卻下，將N，N-二異丙基乙胺(5.3mL，30.5mmol)(Aldrich)加入到3-羥基-4-甲基苯甲酸乙酯(5.0g，27.75mmol)(來自上面的實施例2)在二氯甲烷(20mL)中的懸浮液中。然後，滴加氯甲基甲基醚(4.2mL，55.5mmol)(Aldrich)，並且將混合物於室溫攪拌5小時。然後，將混合物用乙醚(100mL)稀釋，並且用水(100mL)，然後0.1N HCl(2 X 100mL)和鹽水(100mL)洗滌。將水層用乙醚(100mL)反洗。將有機溶液合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物通過用二氯甲烷洗脫的矽膠(Biotage 40L)過濾。將餾分合併並且濃縮，得到3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯甲酸乙酯，為無色油狀物。(產量4.88g，78.4％)。
實施例4 4-甲基-3-(2-三甲代甲矽烷基-乙氧基甲氧基)-苯甲酸乙酯
M.W.310.469 C16H26O4Si 將氫化鈉(60％，在油中，1.80g，45mmol)(Aldrich)用戊烷(2 X 50mL)洗滌，通過移液管除去戊烷。將得到的固體懸浮在無水N，N-二甲基甲醯胺(15mL)中，並且在冰-水浴中冷卻。在30分鐘內，滴加3-羥基-4-甲基苯甲酸乙酯(5.41g，30mmol)(來自上面的實施例2)在N，N-二甲基甲醯胺(10mL)中的溶液。在攪拌另外30分鐘後，在10分鐘內滴加2-(三甲代甲矽烷基-乙氧基甲基氯(6.4mL，36mmol)(Aldrich)。於室溫攪拌另外2小時後，將反應混合物在水(3 X 100mL)和二乙醚(2 X 100mL)之間分配。將有機層用鹽水(100mL)洗滌，然後合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮，得到粗製的4-甲基-3-(2-三甲代甲矽烷基-乙氧基甲氧基)-苯甲酸乙酯，為無色油狀物。將其在沒有進一步純化的情況下用於下一步驟。(產量9.00g，96.6％)。
實施例5 2-甲基-5-[4-甲基-3-(2-三甲代甲矽烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-[1，3，4]噁二唑
M.W.320.467 C16H24N2O3Si 將粗製4-甲基-3-(2-三甲代甲矽烷基-乙氧基甲氧基)-苯甲酸乙酯(9.0g，29mmol)(來自上面的實施例4)在無水肼(10mL，318mmol)(Aldrich)中的懸浮液加熱回流(150℃浴溫)1.5小時。在冷卻至室溫後，將混合物在乙酸乙酯(2 X 100mL)和水(3 X 100mL，加有幾mL的鹽水)之間分配。將有機層用鹽水(100mL)洗滌，然後合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物用乙醇(300mL)稀釋並且濃縮，得到中間體醯肼，為白色固體。將其懸浮在原乙酸三乙酯(20mL，109mmol)(Aldrich)中，並且加熱回流(150℃浴溫)22小時。在冷卻後，將混合物用己烷稀釋，並且由快速色譜(Biotage 40L，5％，然後25％的乙酸乙酯的己烷溶液作為溶劑)純化。將餾分合併並且濃縮，得到2-甲基-5-[4-甲基-3-(2-三甲代甲矽烷基-乙氧基甲氧基)-苯基]-[1，3，4]噁二唑，為淡黃色油狀物，其通過放置而結晶為白色晶體。(產量8.22g，88.5％)。
實施例6 3-羥基-4-甲基-苯甲酸醯肼
M.W.166.181 C8H10N2O2 將3-羥基-4-甲基苯甲酸乙酯(14.42g，80mmol)(來自上面的實施例2)在無水肼(30mL，956mmol)(Aldrich)中的懸浮液加熱回流(150℃浴溫)2.0小時。在冷卻至室溫後，將混合物在減壓(高真空)下濃縮，得到粗製的3-羥基-4-甲基-苯甲酸醯肼，為灰白色固體。(產量13.26g，100％)。
實施例7 3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚
36721-179B M.W.176.176 C9H8N2O2 在密封壓力反應器中，將3-羥基苯甲酸醯肼(0.91g，6mmol)(Aldrich)和原乙酸三乙酯(4.5mL，24mmol)(Aldrich)的混合物於150℃浴中加熱22小時。在冷卻至室溫後，將混合物濃縮，並且剩餘物由快速色譜(Biotage40L，乙酸乙酯-己烷11作為溶劑)純化，得到2種產物。較高Rf物質從二氯甲烷-己烷中結晶，得到2-(3-乙氧基-苯基)-5-甲基-[1，3，4]噁二唑，為白色晶體(產量0.29g，23.7％)。較低Rf原料從二氯甲烷-己烷中重結晶，得到3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚，為白色晶體。(產量0.77g，72.8％)。
實施例8 4-氯-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.429.885 C20H16ClN3O4S 在密封管中，在磁力攪拌下，將3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚(0.15g，0.85mmol)(來自上面的實施例7)，碳酸鉀(0.25g，1.8mmol)和18-冠-6(10mg，0.04mmol)(Aldrich)在N，N-二甲基甲醯胺(5mL)中的懸浮液於65℃加熱2小時。然後，加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.27g，0.8mmol)(來自上面的實施例1)和碘化鉀(0.13g，0.8mmol)，並且在密封管中，將混合物於65℃加熱另外20小時。冷卻後，將混合物在乙酸乙酯(2 X 100mL)和水(2 X 100mL)之間分配。將有機層用鹽水洗滌，然後合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物由快速色譜(Biotage 40S，20％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液作為溶劑)純化，得到4-氯-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.22g，63.1％)。
實施例9 4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
37009-142A M.W.410.455 C20H18N4O4S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.12g，0.29mmol)(來自上面的實施例8)在2-丙醇(15mL)中的溶液中20分鐘。在微波反應器中將混合物於140℃加熱2小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.07g，58％)。
HRMS(ES+)m/z對於C20H18N4O4S+H[(M+H)+]的計算值411.1122。實測值411.1121。
實施例10 4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
37009-143A M.W.425.470 C20H19N5O4S 將4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.05g，0.12mmol)(來自上面的實施例9)在二甲亞碸(0.5mL)中的溶液用乙醇胺(1.5mL)(Aldrich)處理，並且在微波反應器中於160℃加熱2小時。將反應混合物由用乙腈-水洗脫的反相色譜(C18柱)純化，得到4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，為白色粉末。(產量15.0mg，29％)。
HRMS(ES+)m/z對於C20H19N5O4S+H[(M+H)+]計算值426.1231。實測值426.1227。
實施例11 2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚
M.W.190.203 C10H10N2O2 將3-羥基-4-甲基苯甲酸乙酯(3.60g，20mmol)(來自上面的實施例6)在無水肼(10mL，318mmol)(Aldrich)中的懸浮液加熱回流(150℃浴溫)3小時。在冷卻至室溫後，將混合物在減壓下濃縮，得到乾燥固體。將其懸浮於二甲苯(50mL)中，並且在減壓下濃縮。將得到的固體懸浮於原乙酸三乙酯(35mL，191mmol)(Aldrich)中，並且加熱回流(150℃浴溫)20小時，除去乙醇。冷卻後，加入二氯甲烷，並且通過過濾收集固體，得到2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚，為灰白色結晶物質。(產量2.28g，60.0％)。
將來自上面的濾液由快速色譜(Biotage 40L，10％，然後是40％的乙酸乙酯的二氯甲烷溶液作為溶劑)純化，得到第二批的2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚，為白色結晶物質。(產量0.99g，26.0％)。
實施例12 4-氯-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.443.912 C21H18ClN3O4S 在密封管中，在磁力攪拌下，將3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.29g，0.87mmol)(來自上面的實施例1)，碘化鉀(0.14g，0.87mmol)，2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚(0.17g，0.9mmol)(來自上面的實施例11)，碳酸鉀(0.27g，1.9mmol)和18-冠-6(10mg，0.04mmol)(Aldrich)在N，N-二甲基甲醯胺(5mL)中的懸浮液於65℃加熱20小時。冷卻後，將混合物在乙酸乙酯(2 X 100mL)和水(2 X 100mL)之間分配。將水層用二氯甲烷(2 X 100mL)萃取。[該物質在二氯甲烷中比在乙酸乙酯中更可溶]。將有機層用鹽水洗滌，然後合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物由快速色譜(Biotage 40S，二氯甲烷，然後20％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液作為溶劑)純化，得到4-氯-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.24g，62.4％)。
實施例13 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
37009-145A M.W.424.482 C21H20N4O4S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基-甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.12g，0.28mmol)(來自上面的實施例12)在2-丙醇(15mL)中的溶液20分鐘。在微波反應器中將混合物於140℃加熱2小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物由用30％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到回收的原料(25mg)和4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.053g，44％)。
HRMS(ES+)m/z對於C21H20N4O4S+H[(M+H)+]計算值425.1278。實測值425.1274。
實施例14 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽
37009-148A M.W.439.497+114.024 C21H21N5O4S·C2HF3O2 將4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.043g，0.10mmol)(來自上面的實施例13)在二甲亞碸(0.5mL)中的溶液用乙醇胺(1.5mL)(Aldrich)處理，並且在微波反應器中，於160℃加熱2小時。將反應混合物由用乙腈-含三氟乙酸的水洗脫的HPLC純化，得到兩種產物。第一種產物得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽，為白色粉末。(產量20.0mg，47％)。
HRMS(ES+)m/z對於C21H21N5O4S+H[(M+H)+]計算值440.1387。實測值440.1384。
實施例15 4-氨基-3-{5-[4-(2-羥基-乙基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽
37009-148B M.W.482.565+114.024 C23H26N6O4S·C2HF3O2 第二種產物(來自上面的實施例14)得到4-氨基-3-{5-[4-(2-羥基-乙基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽。(產量10.0mg，21％)。
HRMS(ES+)m/z對於C23H26N6O4S+H[(M+H)+]計算值483.1809。實測值483.1808。
實施例16 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺甲苯-4-磺酸鹽
37009-187A M.W.439.497+172.204 C21H21N5O4S·C7H8O3S 將4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺(0.045g，0.10mmol)(來自上面的實施例14)在甲醇(6mL)中的溶液，用一水合甲苯-4-磺酸(19.5mg，0.10mmol)(Aldrich)處理，並且於40℃加熱30分鐘。將溶液濃縮。將剩餘物用二乙醚洗滌，溶解於水中，並且凍幹，得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺甲苯-4-磺酸鹽。(產量60.8mg，97％)。
HRMS(ES+)m/z對於C21H21N5O4S+H[(M+H)+]計算值440.1387。實測值440.1384。
實施例17 5-碘-2-甲基-苯酚
M.W.234.038C7H7IO 根據Laugraud，S；Reinier，N，於1996年10月17公布的WO96/32399的程序，製備5-碘-2-甲基-苯酚。
將5-氨基-O-甲酚(10.0g，81mmol)(Aldrich)在四氫呋喃(100mL)，水(150mL)和濃硫酸(6mL，0.11mmol)的混合物中的溶液在冰-水浴中冷卻。在30分鐘內滴加亞硝酸鈉(5.6g，81mmol)在水(30mL)中的溶液。在冷卻下，將混合物攪拌另外30分鐘。(形成懸浮液)。加入粉末銅金屬(200mg，3mmol)，接著加入碘化鉀(17.5g，0.11mmol)在水(70mL)中的溶液。將混合物溫熱至室溫，並且攪拌90分鐘，然後傾到入水(200mL)中。將混合物用乙酸乙酯(2 X 400mL)萃取。將有機層用水(400mL)和鹽水(400mL)洗滌，然後合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物由快速色譜(Biotage 75L，己烷-二氯甲烷23作為溶劑)純化。將純餾分合併，並且物質從己烷中重結晶，以2批得到5-碘-2-甲基-苯酚，為白色針狀物。(產量10.08g，53.0％)。
實施例18 4-碘-2-甲氧基甲氧基-1-甲基-苯
M.W.278.091 C9H11IO2 在冰-水浴中冷卻下，將N，N-二異丙基乙胺(8.3mL，47.4mmol)(Aldrich)加入到5-碘-2-甲基-苯酚(10.1g，43.1mmol)(來自上面的實施例17)在二氯甲烷(40mL)中的懸浮液中。滴加氯甲基-甲基醚(6.5mL，86.1mmol)(Aldrich)，並且混合物於室溫攪拌5小時。然後將混合物用乙醚(200mL)稀釋，並且用水(200mL)，然後0.1N HCl(2 X 200mL)和鹽水(200mL)洗滌。將水層用乙醚(200mL)反洗。將有機溶液合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物通過用二氯甲烷-己烷(14V/V)洗脫的矽膠(Biotage 40L)過濾。將餾分合併並且濃縮，得到4-碘-2-甲氧基甲氧基-1-甲基-苯，為無色油狀物。(產量9.05g，75.6％)。
實施例19 4-乙炔基-2-甲氧基甲氧基-1-甲基-苯
M.W.176.217 C11H12O2 在壓力反應器中，於室溫，將氬氣鼓泡進入到4-碘-2-甲氧基甲氧基-1-甲基-苯(7.63g，27.5mmol)(來自上面的實施例18)，三乙胺(55mL)(Aldrich)和乙腈(100mL)的混合物中20分鐘。加入乙炔基三甲基矽烷(9.2mL，64.5mmol)(Aldrich)，碘化亞銅(I)(245mg，1.28mmol)(Aldrich)和二氯二(三苯膦)鈀(II)(911mg，1.29mmol)(Aldrich)。將反應器密封，並且在磁力攪拌下，將混合物於100℃加熱5小時。在冷卻至室溫後，將混合物懸浮在二乙醚(250mL)和水(250mL)中，並且通過

過濾。進行層分離。將有機層用水(250mL)和鹽水(250mL)洗滌。將水層用乙醚(250mL)反洗。將有機層合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物溶解於甲醇(50mL)中，並且加入碳酸鉀(500mg)。將混合物於室溫攪拌過夜。在濃縮後，將剩餘物在二乙醚(2 X 250mL)和水(2 X 250mL)之間分配。將有機層用鹽水(200mL)洗滌，合併，乾燥(MgSO4)，過濾並且濃縮。將剩餘物由快速色譜(Biotage 40L，己烷，然後己烷-二氯甲烷91和31，作為溶劑)純化，得到4-乙炔基-2-甲氧基甲氧基-1-甲基-苯為褐色油狀物。(產量4.65g，96.2％)。
實施例20 4-(3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯基)-1-甲基-1H-[1，2，3]三唑
M.W.233.27 C12H15N3O2 向4-乙炔基-2-甲氧基甲氧基-1-甲基-苯(0.64g，3.63mmol)(來自上面的實施例19)，碘代甲烷(0.23mL，3.63mmol)(Aldrich)和疊氮化鈉(0.24g，3.63mmol)(Aldrich)在水(6mL)和叔丁醇(6mL)的混合物中的懸浮液中，加入銅粉(0.17g，2.68mmol)和硫酸銅水溶液(1N，0.7mL)。在微波反應器中，將反應混合物於125℃加熱20分鐘。冷卻後，將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物由用5-60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到4-(3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯基)-1-甲基-1H-[1，2，3]三唑。(產量0.57g，67％)。
實施例21 2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯酚
M.W.189.219 C10H11N3O 向4-(3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯基)-1-甲基-1H-[1，2，3]三唑(0.57g，2.44mmol)(來自上面的實施例20)在四氫呋喃-2-丙醇(11，20mL)中的溶液中，加入HCl的二噁烷溶液(4M，8mL)(Aldrich)。將反應混合物於室溫攪拌2天。將溶液濃縮。將剩餘物用乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物從乙酸乙酯-己烷中重結晶並且乾燥，得到2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯酚。(產量0.24g，52％)。
實施例22 4-氯-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.442.928 C21H19ClN4O3S 將碳酸銫(0.56g，1.73mmol)(Aldrich)，2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯酚(0.24g，1.27mmol)(來自上面的實施例21)在四氫呋喃-N，N-二甲基甲醯胺(52，17.5mL)中的懸浮液於70℃加熱3小時。加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.40g，1.15mmol)(來自上面的實施例1)。繼續加熱18小時。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物由用30％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到4-氯-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基-甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.25g，48％)。
實施例23 4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
37009-158A M.W.423.497 C21H21N5O3S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基-甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.17g，0.38mmol)(來自上面的實施例22)在2-丙醇(15mL)中的溶液20分鐘。在微波反應器中，將混合物於140℃加熱2小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.10g，63％)。HRMS(ES+)m/z對於C21H21N5O3S+H[(M+H)+]計算值424.1438。實測值424.1436。
實施例24 4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
37009-159A M.W.438.512 C21H22N6O3S 將4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.050g，0.11mmol)(來自上面的實施例23)在二甲亞碸(0.5mL)中的溶液用乙醇胺(1.5mL)(Aldrich)處理，並且在微波反應器中，於160℃加熱2小時。將反應混合物由用乙腈-水洗脫的C18柱純化，得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，為白色粉末。(產量31.0mg，60％)。
HRMS(ES+)m/z對於C21H22N6O3S+H[(M+H)+]計算值439.1547。實測值439.1545。
實施例25 3-(2H-四唑-5-基)-苯酚
M.W.162.15 C7H6N4O 將3-氰基苯酚(4.14g，34.75mmol)(Aldrich)，疊氮化鈉(2.49g，38.23mmol)(Aldrich)和氯化銨(2.05g，38.23mmol)在N，N-二甲基甲醯胺(30mL)中的混合物加熱至160℃ 18小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物由用乙腈-水洗脫的C18柱純化，得到3-(2H-四唑-5-基)-苯酚。(產量0.9g，16％)。
實施例26 3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯酚
M.W.282.304 C15H14N4O2 將4-甲氧基苄基氯(0.26mL，1.94mmol)(Aldrich)，碘化鉀(0.31g，1.85mmol)(Aldrich)，3-(2H-四唑-5-基)-苯酚(0.3g，1.85mmol)(來自上面的實施例25)，碳酸鉀(0.38g，2.78mmol)和18-冠-6(24.0mg，0.09mmol)(Aldrich)在N，N-二甲基甲醯胺(15mL)中的懸浮液於65℃加熱1天。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物由用5-40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯酚。(產量0.38g，73％)。
實施例27 4-氯-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.536.013 C26H22ClN5O4S 將碳酸銫(0.60g，1.83mmol)，3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯酚(0.38g，1.35mmol)(來自上面的實施例26)在四氫呋喃-N，N-二甲基甲醯胺(52，17.5mL)中的懸浮液於70℃加熱3小時。加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.41g，1.22mmol)(來自上面的實施例1)。繼續加熱18小時。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物由用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到4-氯-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.17g，26％)。
實施例28 4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
37009-202A M.W.516.583 C26H24N6O4S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.17g，0.32mmol)(來自上面的實施例27)在2-丙醇(15mL)中的溶液20分鐘。在微波反應器中，將混合物於140℃加熱2小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.15g，94％)。
HRMS(ES+)m/z對於C26H24N6O4S+H[(M+H)+]計算值517.1653。實測值517.1653。
實施例29 4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
37009-208A M.W.531.598 C26H25N7O4S 將4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.050g，0.10mmol)(來自上面的實施例28)在二甲亞碸(0.5mL)中的溶液用乙醇胺(1.5mL)(Aldrich)處理，並且在微波反應器中，於160℃加熱2小時。將沉澱物過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺。(產量18.0mg，35％)。
HRMS(ES+)m/z對於C26H25N7O4S+H[(M+H)+]計算值532.1762。實測值532.1762。
實施例30 3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯酚
M.W.176.179 C8H8N4O 將碳酸銫(0.60g，1.83mmol)，3-(2H-四唑-5-基)-苯酚(0.30g，1.85mmol)(來自上面的實施例25)在四氫呋喃-N，N-二甲基甲醯胺(52，17.5mL)中的懸浮液於70℃加熱3小時。加入碘代甲烷(0.29g，2.04mmol)(Aldrich)。繼續加熱18小時。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物由用40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯酚。(產量0.23g，70％)。
實施例31 4-氯-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.429.888 C19H16ClN5O3S 將3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(042g，1.24mmol)(來自上面的實施例1)，3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯酚(0.23g，1.31mmol)(來自上面的實施例30)，碘化鉀(0.21g，1.24mmol)，碳酸鉀(0.38g，2.78mmol)和18-冠-6(16.0mg，0.06mmol)在N，N-二甲基甲醯胺(15mL)中的混合物於65℃加熱1天。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物由用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到4-氯-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.15g，28％)。
實施例32 4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
37009-206A M.W.410.458 C19H18N6O3S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.15g，0.35mmol)(來自上面的實施例31)在2-丙醇(15mL)中的溶液20分鐘。在微波反應器中，將混合物於140℃加熱2小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.11g，79％)。
HRMS(ES+)m/z對於C19H18N6O3S+H[(M+H)+]計算值411.1234。實測值411.1235。
實施例33 4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
37009-209A M.W.425.472 C19H19N7O3S 將4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.050g，0.12mmol)(來自上面的實施例32)在二甲亞碸(0.5mL)中的溶液用乙醇胺(1.5mL)(Aldrich)處理，並且在微波反應器中，於160℃加熱2小時。將沉澱物過濾，用甲醇洗滌並且乾燥，得到4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，為白色粉末。(產量39.0mg，75％)。
HRMS(ES+)m/z對於C19H19N7O3S+H[(M+H)+]計算值426.1343。實測值426.1344。
實施例34 5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯酚
M.W.299.762C16H14ClN3O 向4-乙炔基-2-甲氧基甲氧基-1-甲基-苯(1.50g，8.50mmol)(來自上面的實施例19)，4-氯苄基溴(1.76g，8.50mmol)和疊氮化鈉(0.56g，8.50mmol)在水(12mL)和叔丁醇(12mL)的混合物中的懸浮液中，加入銅粉(0.40g，6.30mmol)和硫酸銅溶液的水溶液(1N，1.64mL)。在微波反應器中，將反應混合物於130℃加熱30分鐘。冷卻後，將反應混合物在二氯甲烷和水之間分配。將水相用二氯甲烷(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(MgSO4)並且濃縮。將剩餘物由用40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯酚；(產量0.75g，59％)；和1-(4-氯-苄基)-4-(3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯基)-1H[1，2，3]三唑。(產量0.61g，21％)。
實施例35 4-氯-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.553.471 C27H22Cl2N4O3S 將碳酸銫(1.11g，3.41mmol)，5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯酚(0.75g，2.50mmol)(來自上面的實施例34)在四氫呋喃-N，N-二甲基甲醯胺(52，23mL)中的懸浮液於70℃加熱2小時。加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.76g，2.27mmol)(來自上面的實施例1)。繼續加熱18小時。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將沉澱物過濾，用乙酸乙酯洗滌並且乾燥，得到4-氯-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.33g，26％)。
實施例36 4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.534.041 C27H24ClN5O3S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.33g，0.60mmol)(來自上面的實施例35)在2-丙醇(30mL)中的溶液中20分鐘。在微波反應器中，將混合物於140℃加熱2小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.23g，72％)。
實施例37 4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
M.W.549.056 C27H25ClN6O3S 將4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.050g，0.09mmol)(來自上面的實施例36)在二甲亞碸(0.5mL)中的溶液用乙醇胺(1.5mL)(Aldrich)處理，並且在微波反應器中，於160℃加熱2小時。將沉澱物過濾，用甲醇洗滌並且乾燥，得到4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，為白色粉末。(產量34.5mg，68％)。
HRMS(ES+)m/z對於C27H25ClN6O3S+H[(M+H)+]計算值549.1470。實測值549.1459。
實施例38 4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺甲苯-4-磺酸鹽
M.W.549.056+172.204 C27H25ClN6O3S·C7H8O3S 將4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺(0.159g，0.29mmol)(來自上面的實施例37)在甲醇(10mL)中的溶液，用一水合甲苯-4-磺酸(61.0mg，0.319mmol)處理，並且於室溫加熱40分鐘。將溶液濃縮。將剩餘物用二乙醚洗滌，溶解於水中，且凍幹為4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺1.5甲苯-4-磺酸鹽。(產量0.21g，100％)。
HRMS(ES+)m/z對於C27H25ClN6O3S+H[(M+H)+]計算值549.1470。實測值549.1467。
實施例39 3-羥基-4-甲基-苯甲酸N』-[2-(4-氯-苯基)-乙醯基]-醯肼
M.W.318.76 C16H15ClN2O3 將4-氯苯基乙醯氯(1.36g，7.22mmol)(Aldrich)，3-羥基-4-甲基-苯甲酸醯肼(1.0g，6.02mmol)(來自上面的實施例6)和三乙胺(1.36mL)在四氫呋喃(20mL)中的混合物於85℃加熱1天。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(1X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並且濃縮。將剩餘物用乙酸乙酯和二氯甲烷洗滌並且乾燥，得到3-羥基-4-甲基-苯甲酸N』-[2-(4-氯-苯基)-乙醯基]-醯肼。(產量0.91g，95％)。
實施例40 5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]-噁二唑-2-基]-2-甲基-苯酚
M.W.300.75 C16H16ClN2O2 向3-羥基-4-甲基-苯甲酸N』-[2-(4-氯-苯基)-乙醯基]-醯肼(0.91g，2.85mmol)(來自上面的實施例39)在乙腈(20mL)中的溶液中，加入二異丙基乙胺(3.0mL，17.1mmol)和三苯膦(1.50g，5.70mmol)。在攪拌5分鐘後，加入六氯乙烷(1.01g，4.28mmol)(Aldrich)，並且將混合物於室溫攪拌2天。蒸發溶劑。將剩餘物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(1X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並且濃縮。將剩餘物由用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化為5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]-噁二唑-2-基]-2-甲基-苯酚。(產量0.68g，79％)。
實施例41 4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.554.46 C27H21Cl2N3O4S 將碳酸銫(0.54g，1.66mmol)，5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]-噁二唑-2-基]-2-甲基-苯酚(0.36g，1.20mmol)(來自上面的實施例40)在四氫呋喃/N，N-二甲基甲醯胺(52，21mL)中的懸浮液於68℃加熱2小時。加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.36g，1.08mmol)(來自上面的實施例1)。繼續加熱2小時。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並且濃縮。將剩餘物用乙酸乙酯洗滌並且乾燥，得到4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.17g，26％)。
實施例42 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.535.03 C27H23ClN4O4S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.11g，0.20mmol)(來自上面的實施例41)在2-丙醇(15mL)中的溶液中20min。在微波反應器中，將混合物於140℃加熱5.5小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.07g，64％)。
實施例43 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
M.W.550.037 C27H24ClN5O4S 將4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.07g，0.13mmol)(來自上面的實施例42)在二甲亞碸(0.5mL)中的溶液用乙醇胺(1.5mL)處理，並且在微波反應器中，於160℃加熱2.8小時。將反應混合物由C18柱色譜和SFC柱色譜純化，得到4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，為白色粉末。(產量8mg，11％)。
HRMS(ES+)m/z對於C27H24ClN5O4S+H[(M+H)+]計算值550.1311。實測值550.1311。
實施例44 3-羥基-4-甲基-苯甲酸N』-(4-氯-苯甲醯基)-醯肼
M.W.304.74 C15H13ClN2O3 將4-氯苯甲醯氯(0.92mL，7.22mmol)(Aldrich)，3-羥基-4-甲基-苯甲酸醯肼(1.0g，6.02mmol)(來自上面的實施例6)和三乙胺(1.36mL)在四氫呋喃(20mL)中的混合物於85℃加熱1天。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將沉澱物用乙酸乙酯和二氯甲烷洗滌並且乾燥，得到3-羥基-4-甲基-苯甲酸N』-(4-氯-苯甲醯基)-醯肼。(產量1.28g，70％)。
實施例45 5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]-噁二唑-2-基]-2-甲基-苯酚
M.W.286.72 C15H11ClN2O2 向3-羥基-4-甲基-苯甲酸N』-(4-氯-苯甲醯基)-醯肼(1.28g，4.20mmol)(來自上面的實施例44)在乙腈(20mL)中的溶液中，加入二異丙基乙胺(4.4mL，25.2mmol)和三苯膦(2.21g，8.40mmol)。在攪拌5分鐘後，加入六氯乙烷(1.49g，6.30mmol)(Aldrich)，並且將混合物於室溫攪拌1天。蒸發溶劑。將剩餘物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(1X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並且濃縮。將剩餘物由用0-60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]-噁二唑-2-基]-2-甲基-苯酚。(產量0.34g，28％)。
實施例46 4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.540.43 C26H19Cl2N3O4S 將碳酸銫(0.54g，1.66mmol)，5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]-噁二唑-2-基]-2-甲基-苯酚(0.34g，1.19mmol)(來自上面的實施例45)在四氫呋喃/N，N-二甲基甲醯胺(52，21mL)中的懸浮液於68℃加熱2小時。加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.36g，1.08mmol)(來自上面的實施例1)。繼續加熱2小時。將反應混合物在乙酸乙酯和水之間分配。將水相用乙酸乙酯(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並且濃縮。將剩餘物用乙酸乙酯洗滌並且乾燥，得到4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.30g，47％)。
實施例47 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.521.00 C26H21ClN4O4S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.30g，0.56mmol)(來自上面的實施例46)在2-丙醇(30mL)中的溶液中20分鐘。在微波反應器中，將混合物於140℃加熱5.5小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.22g，76％)。
實施例48 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸
M.W.492.94 C24H17ClN4O4S 將氫氧化鈉水溶液(2N，2.0mL，1.0mmol)加入到4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.22g，0.42mmol)(來自上面的實施例47)在四氫呋喃/甲醇(31，8mL)中的溶液中，並且將混合物於50℃加熱1天。將反應混合物濃縮且與甲苯共沸蒸餾。將固體剩餘物與乙酸乙酯一起研磨。然後將固體懸浮於水中，並且用鹽酸(1N)處理。在攪拌30分鐘後，收集固體，用水洗滌並且乾燥，得到4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸。(產量0.20g，95％)。
實施例49 4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽
M.W.650.032 C26H22ClN5O4S·C2HF3O2 在攪拌下，將4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(0.10g，0.20mmol)(來自上面的實施例48)，一水合1-羥基苯並三唑(43mg，0.32mmol)(Aldrich)和1，3-二異丙基碳二亞胺(0.044mL，0.17mmol)(Aldrich)的混合物在四氫呋喃/N，N-二甲基甲醯胺(3.6mL，5:1)中合併。在1小時後，加入乙醇胺(0.036mL，0.60mmol)(Aldrich)。將混合物於室溫攪拌18小時，然後濃縮。將剩餘物由用乙腈/水洗脫的HPLC純化，得到4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽，為白色粉末。(產量52mg，40％)。
HRMS(ES+)m/z對於C26H22ClN5O4S+H[(M+H)+]計算值536.1154。實測值536.1149。
實施例50 3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯甲酸
C10H12O4M.W.196.205 將3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯甲酸乙酯(4.5g，20mmol)(來自上面的實施例3)在乙醇(50mL)，水(20mL)和1N氫氧化鈉水溶液(30mL)的混合物中的溶液於室溫攪拌18小時。將混合物濃縮以除去大部分乙醇。將得到的水溶液用乙酸(2.5g，41.6mmol)酸化。在放置另外30分鐘後，將形成的沉澱物通過過濾收集，用水洗滌並且乾燥，得到3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯甲酸，為白色粉末。(產量3.82g，97％)。
實施例51 5-(3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯基)-3-甲基-[1，2，4]噁二唑
M.W.234.257 C12H14N2O3 將3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯甲酸(1.96g，10mmol)(來自上面的實施例50)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(1.92g，10mmol)(Aldrich)和一水合1-羥基苯並三唑(1.35g，10mmol)(Aldrich)在N，N-二甲基甲醯胺(25mL)中的混合物於室溫攪拌30分鐘。加入乙醯胺肟(0.74g，10mmol)(GFS Chemicals)，並且混合物於140℃加熱2小時。冷卻後，將混合物在乙酸乙酯(2X)和飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。將乙酸乙酯溶液合併並且濃縮，剩餘物由快速色譜純化，得到5-(3-甲氧基甲氧基-4-甲基-苯基)-3-甲基-[1，2，4]噁二唑。(產量1.23g，52.5％)。
實施例52 2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯酚
M.W.190.20 C10H10N2O 向5-(3-甲基氧基甲氧基-4-甲基-苯基)-3-甲基-[1，2，4]噁二唑(1.23g，5.25mmol)(來自上面的實施例51)在四氫呋喃/2-丙醇(11，30mL)中的溶液中，加入13.1mL的4M HCl的二噁烷溶液(Aldrich)。將反應混合物於室溫攪拌18小時。將溶液濃縮。將剩餘物用乙酸乙酯稀釋，用水和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並且濃縮。將剩餘物在乙酸乙酯/己烷中重結晶，並且乾燥，得到2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯酚。(產量0.88g，88％)。
實施例53 4-氯-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.443.91 C21H18ClN3O4S 將碳酸銫(1.02g，3.13mmol)，2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯酚(0.42g，2.20mmol)(來自上面的實施例52)在四氫呋喃/N，N-二甲基甲醯胺(52，21mL)中的懸浮液於70℃加熱2小時。加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.68g，2.04mmol)(來自上面的實施例1)。繼續加熱1小時。將反應混合物在二氯甲烷和水之間分配。將水相用二氯甲烷(2X)萃取。將合併的有機相用水和鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)並且濃縮。將剩餘物由用5-10％乙酸乙酯的二氯甲烷溶液洗脫的快速色譜純化，得到4-氯-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.51g，57％)。
實施例54 4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.424.48 C21H20N4O4S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.42g，0.95mmol)(來自上面的實施例53)在2-丙醇(30mL)中的溶液中20分鐘。在微波反應器中，將混合物於140℃加熱2小時。將反應混合物濃縮。將剩餘物用熱甲醇洗滌，過濾並且乾燥，得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色粉末。(產量0.33g，83％)。
實施例55 4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸
M.W.396.43 C19H16N4O4S 將氫氧化鈉水溶液(2N，3.0mL，1.5mmol)加入到4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.33g，0.78mmol)(來自上面的實施例54)在四氫呋喃/甲醇(31，8mL)中的溶液中，並且將混合物於50℃加熱1天。將反應混合物濃縮，並且與甲苯共沸蒸餾。將固體剩餘物與乙酸乙酯一起研磨。然後將固體懸浮於水中，並且用鹽酸(1N)處理。在攪拌30分鐘後，收集固體，用水洗滌且乾燥為4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸。(產量0.29g，94％)。
實施例56 4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並-[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽
M.W.553.516 C21H21N5O4S·C2HF3O2 在攪拌下，將4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(0.10g，0.25mmol)(來自上面的實施例55)，一水合1-羥基苯並三唑(54mg，0.40mmol)(Aldrich)和1，3-二異丙基碳二亞胺(0.055mL，0.36mmol)(Aldrich)的混合物在四氫呋喃/N，N-二甲基甲醯胺(3.6mL，51)中合併。在1小時後，加入乙醇胺(0.046mL，0.76mmol)(Aldrich)。將混合物於室溫攪拌18小時，然後濃縮。將剩餘物由用乙腈/水洗脫的HPLC純化，得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽，為白色粉末。(產量70mg，50％)。
HRMS(ES+)m/z對於C21H21N5O4S+H[(M+H)+]計算值440.1387。實測值440.1384。
實施例57 5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯酚
M.W.309.37 C18H19N3O2 在密封反應管中，將2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯酚(0.65g；3.42mmol)(來自上面的實施例11)和4-甲氧基苄基胺(3.10g；22.6mmol)(Aldrich)的混合物在油浴中於150-155℃加熱42小時。將反應混合物冷卻至室溫，且用二氯甲烷和己烷稀釋，從而迫使產物從溶液中沉澱出。將粗製固體通過過濾收集，然後再從二氯甲烷-甲醇溶液中在蒸發掉溶劑時沉澱出。收集固體並且乾燥，得到5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯酚。(產量0.849g，76.3％)。
實施例58 4-氯-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.563.08 C29H27ClN4O4S 將碳酸鉀(0.246g；1.67mmol)加入到5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯酚(0.17g；0.55mmol)(來自上面的實施例57)在DMF(3.4mL)中的溶液中，並且將混合物於室溫攪拌5分鐘。然後淨加入3-溴甲基-4-氯-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.246g；0.74mmol)(來自上面的實施例1)，並且於室溫繼續攪拌4.25小時。將深紅色混合物用乙酸乙酯稀釋，並且將混合物用水洗滌兩次，然後用鹽水洗滌一次。將有機相用硫酸鈉乾燥並且濃縮。粗製物質由快速色譜(80g柱，用4％甲醇的二氯甲烷溶液，然後到40％甲醇的梯度洗脫)純化。將含產物的餾分合併並且濃縮。然後通過濃縮物質的二氯甲烷-己烷溶液至小體積，從經過色譜的物質中除去少量的汙染物，從而導致為白色固體的產物沉澱，然後將其通過過濾收集並且乾燥，得到4-氯-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量0.188g；60.8％)。
實施例59 4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.543.65 C29H29N5O4S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.330g；0.59mmol)(來自上面的實施例58)在2-丙醇(20mL)中的懸浮液中15-20分鐘。然後在微波反應器中，將混合物於140℃加熱90分鐘。將反應混合物濃縮，且將剩餘物由快速色譜(120g柱；4％甲醇的二氯甲烷溶液，然後到40％甲醇的梯度)純化，得到4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.263g；96％純；78.72％)。
實施例60 4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
M.W.558.66 C29H30N6O4S 將乙醇胺(1.8mL；29.9mmol)(Aldrich)加入到4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(50mg；0.08277mmole)(來自上面的實施例59)在二甲亞碸(0.6mL)中的溶液中。在微波反應器中，將混合物於135℃加熱2.25小時。在冷卻至室溫後，將反應混合物用水稀釋，導致產物沉澱為乳狀固體，將其通過離心收集和乾燥。將粗製固體與熱甲醇一起研磨，稍微冷卻，過濾和乾燥，以兩批得到4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺。(產量31.2mg，51.3％)。
HRMS(ES+)m/z對於C29H30N6O4S+H[(M+H)+]計算值559.2122。實測值559.2120。
實施例61 4-氯-3-[2-甲基-5-(甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.442.93 C21H19ClN4O3S 將4-氯-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(85mg；0.151mmol)(來自上面的實施例58)與三氟乙酸(1.0mL；13mmol)，茴香醚(100μL；0.92mmol)(Aldrich)和硫酸(50μL；0.94mmol)的混合物於室溫攪拌42小時。將混合物濃縮。將剩餘物用二氯甲烷稀釋，且再次濃縮。然後，將剩餘物用二氯甲烷和甲醇稀釋，並且用飽和碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。將水相用二氯甲烷和甲醇的混合物反洗。將兩種有機相合併，用硫酸鈉乾燥並且濃縮。粗製物質由快速色譜(12g柱；EtOAc，接著到6040 EtOAc甲醇梯度)純化，得到4-氯-3-[2-甲基-5-(甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。(產量56.3mg，84.20％)。
實施例62 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯
M.W.423.50 C21H21N5O3S 將氨氣鼓泡進入到4-氯-3-[2-甲基-5-(甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(0.106g；0.24mmol)(來自上面的實施例61)在2-丙醇(20mL)中的懸浮液中15-20分鐘。然後在微波反應器中，將混合物於140℃加熱75分鐘。在冷卻至室溫後，將反應混合物用二氯甲烷(～75mL)稀釋，並且用水，然後用鹽水洗滌。將有機相干燥(Na2SO4)並且濃縮。將剩餘物與熱二氯甲烷一起研磨兩次，得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，為白色固體。(產量80.4mg)。通過將來自兩次研磨的母液進行色譜純化，得到另外的產物。(產量7.7mg，合計82.49％)。
HRMS(ES+)m/z對於C21H21N5O3S+H[(M+H)+]計算值424.1438。實測值424.1433。
實施例63 4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺
M.W.438.51 C21H22N6O3S 將乙醇胺(1.5mL；24.9mmol)(Aldrich)加入到4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯(68.4mg；0.162mmol)(來自上面的實施例62)在二甲亞碸(0.5mL)中的懸浮液中。在微波反應器中，將混合物於135℃加熱90分鐘，然後於140℃加熱1小時。在加熱下，將粗製反應混合物在高真空下濃縮，以除去大部分乙醇胺和DMSO。將剩餘物用水稀釋，從而引起乳狀沉澱物從溶液中析出。通過過濾收集固體，用水洗滌且乾燥。然後將物質與熱甲醇一起研磨，得到4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，為灰白色固體。(產量48mg，67.8％)。
HRMS(ES+)m/z對於C21H22N6O3S+H[(M+H)+]計算值439.1547。實測值439.1544。
實施例64 激酶抑制分析(IC50) 用6H-MEK作為底物的c-RafHTRF分析(劑量響應) 分析原則 分析利用6H-MEK作為底物。通過c-Raf磷酸化，磷酸化的6H-MEK用兔抗-磷酸基-MEK1/2，Eu-標記的抗兔和APC-標記的抗-6H抗體檢測。
試劑和儀器 酶具有EE-標記的複製人c-Raf；磷酸化的(與杆狀病毒Hi5細胞中的v-src-FLAG共表達的)，0.2mg/mL(2.74μM，假定73kD分子量)，貯存於-15℃。
底物WT全長6H-MEK，4.94mg/mL(154.4μM，假定32kD的MW)，貯存於-15℃。
抗體兔(α-P-(Ser217/221)-MEK-1/2Ab(獲自Cell Signaling，Cat.#9121B，Lot 14)Eu-(α-兔IgG(獲自Wallac，Cat.# AD0083，Lot 318663，710ug/mL，4.4μM)；(α-6H-SureLight-APC(獲自Martek，Cat.#AD0059H，LotE012AB01，3.03μM)。
讀數器PerkinElmer的Envision，用412反射鏡的HTRF讀數模式。
分析板基片全黑聚丙烯板(Cat.#4344)。
其它複合板用Weidman384聚丙烯板(REMP)。
分析程序 (1)製備激酶分析緩衝液(KAB)50mM HEPES(HyClone)pH7，10mM MgCl2，1mM DTT，0.1mM Na3V2O4，和0.3mg/ml BSA。
(2)製備在KAB中的6H-MEK(150nM)。加入12μl/孔到分析板中。
(3)製備在KAB中的ATP(66μM)。
(4)在DMSO中，將化合物稀釋到2.4mM並且將任何陽性對照稀釋到480μM。在DMSO中進行10點3x稀釋。撤回2.5μl/孔的DMSO溶液，並且加入到(3)中的27.5μl/孔ATP溶液中。
(5)混合，然後將(4)中的6μl/孔的溶液加入到分析板中，對於在MEK磷酸化過程中的DMSO濃度為2.1％。
(6)製備在KAB中的c-Raf(12nM)。
(7)在柱1-2中，加入6μl/孔的KAB，並且在柱3-24中，加入6μl/孔的c-Raf。
(8)於37℃溫育30min。
(9)製備在AB1中的兔(α-P-(Ser 217/221)-MEK-1/2 Ab(來自貯液的1240)50mM HEPES pH7，0.2mg/ml BSA，和43mM EDTA。
(10)為了停止反應，將來自(9)的6μl/孔的溶液加入到分析板中，並且於37℃溫育30min。
(11)製備在AB2中的Eu-(α-兔IgG(9nM)和(α-6H-SureLight-APC(120nM)50mM HEPES pH7和0.2mg/ml BSA。
(12)將來自(11)的6μl/孔的溶液加入到分析板中。
(13)為了測定光譜幹擾因子，按照步驟(1)至(10)製備兩個樣品。對於空白樣品，加入6μl/孔的AB2。對於幹擾因子樣品，加入6μl/孔的Eu-抗兔IgG(9nM)。
(14)於室溫溫育1.5小時。
(15)在Envision上讀出於615nm和665nm的HTRF信號。在光譜幹擾校正後，標準化HTRF信號。
c-Raf的表達和純化 在High-5細胞中表達N末端EE-標記的c-Raf。將5升培養物用EE-c-Raf和FLAG-vSrc為12比率的病毒共轉染，並且在48小時後收穫。將細胞塊在含有5mM EDTA，50mM KF，20mM焦磷酸鈉，20mM β-甘油磷酸酯，0.5mM Na VO3，1％NP-40(w/v)和Complete Protease Tablets的TBS中裂解。將裂解產物於20,000xg離心1小時。將上清液與8ml的抗-EE標記-G蛋白瓊脂糖於4℃溫育2小時。然後，將樹脂用30體積的上述緩衝液洗滌。將c-Raf蛋白通過與含有100mg/ml的EE肽的上述緩衝液於4℃溫育1小時而洗脫。使用具有YM10膜的Amicon Stir Cell濃縮蛋白。將濃縮的蛋白相對於含有1mM DTT和30％甘油的TBS透析。由BioRad DC方法測定蛋白濃度。
6H-MEK1(62-393)的純化 將含有用於表達6H-MEK1(62-393)的質粒的大腸桿菌細胞在RichMedia中生長，並且用1mM IPTG於22℃誘導24小時。將細胞塊重新懸浮於50mM磷酸鉀緩衝液，pH8.0，300mM NaCl，5mM MgCl2，10mMCHAPS，2mM TCEP和Complete Protease Inhibitor Tablets中。由超聲波破壞細胞。將裂解產物通過於13,000xg離心45分鐘而清除。將上清液用50mM磷酸鉀緩衝液，pH8.0，10mM咪唑，4mM TCEP，300mM NaCl，10mM CHAPS，2mM吡咯-2-羧酸酯，和100mM ZnCl2以11稀釋，然後與TALON金屬親和性樹脂於4℃溫育1小時。
將樹脂用10體積的50mM磷酸鉀緩衝液，pH8.0，5mM咪唑，2mMTCEP，300mM NaCl，10mM CHAPS，1mM吡咯-2-羧酸酯，和50mMZnCl2洗滌。蛋白通過與5體積的20mM HEPES，pH8.0，100mM EDTA，2mM TCEP，10％v/v甘油於4℃溫育1小時而洗脫。使用具有10Kd MW截止膜(cutoff membrane)的Amicon Ultra 15裝置濃縮洗脫的材料。然後將樣品在Superdex 200 26/60柱上進行尺寸排阻色譜。將6H-MEK1 Peak匯集並且如上所述濃縮。由BioRad方法測定蛋白。
用6H-MEK作為底物的b-Raf野生型HTRF分析(劑量響應) 分析原則 分析利用6H-MEK作為底物。通過b-Raf WT磷酸化，磷酸化的6H-MEK用兔抗-磷酸基-MEK1/2，Eu-標記的抗兔和APC-標記的抗-6H抗體檢測。
試劑和儀器 酶獲自Upstate的具有N-末端GST-標記的重組人b-Raf殘基416-端；(由在Sf21昆蟲細胞中的杆狀病毒表達)，0.26mg/mL(3.87μM，假定67.2kD的分子量)Cat.#14-530M，Lot#25502AU，貯存於-80℃。
底物獲自C.Belunis(5/26/04)的WT全長6H-MEK，4.94mg/mL(154.4μM，假定32kD的MW)，貯存於-15℃。
抗體兔(α-P-(Ser217/221)-MEK-1/2Ab(獲自Cell Signaling，Cat.#9121B，Lot 14)Eu-(α-兔IgG(獲自Wallac，Cat.#AD0083，Lot 318663，710ug/mL，4.4μM)；(α-6H-SureLight-APC(獲自Martek，Cat.#AD0059H，LotE012AB01，3.03μM)。
讀數器PerkinElmer的Envision，用412反射鏡的HTRF讀數模式。
分析板基片全黑聚丙烯板(Cat.#4344)。
其它複合板用Weidman384聚丙烯板(REMP)。
分析程序 (1)製備激酶分析緩衝液(KAB)50mM HEPES(HyClone)pH7，10mM MgCl2，1mM DTT，0.1mM Na3V2O4，和0.3mg/ml BSA。
(2)製備在KAB中的6H-MEK(150nM)。加入12μl/孔到分析板中。
(3)製備在KAB中的ATP(66μM)。
(4)在DMSO中，將化合物稀釋到2.4mM並且將任何陽性對照稀釋到480μM。在DMSO中進行10點3x稀釋。撤回2.5μl/孔的DMSO溶液，並且加入到(3)中的27.5μl/孔ATP溶液中。
(5)混合，然後將(4)中的6μl/孔的溶液加入到分析板中，對於在MEK磷酸化過程中的DMSO濃度為2.1％。
(6)製備在KAB中的b-Raf WT(100pM)。
(7)在柱1-2中，加入6μl/孔的KAB，並且在柱3-24中，加入6μl/孔的b-RafWT。
(8)於37℃溫育30min。
(9)製備在AB1中的兔(α-P-(Ser 217/221)-MEK-1/2 Ab(來自貯液的1200)50mM HEPES pH7，0.2mg/ml BSA，和43mM EDTA。
(10)為了停止反應，將來自(9)的6μl/孔的溶液加入到分析板中，並且於37℃溫育30min。
(11)製備在AB2中的Eu-(α-兔IgG(9nM)和(α-6H-SureLight-APC(180nM)50mM HEPES pH7和0.2mg/ml BSA。
(12)將來自(11)的6μl/孔的溶液加入到分析板中。
(13)為了測定光譜幹擾因子，按照步驟(1)至(10)製備兩個樣品。對於空白樣品，加入6μl/孔的AB2。對於幹擾因子樣品，加入6μl/孔的Eu-抗兔IgG(9nM)。
(14)於室溫溫育1.5小時。
(15)在Envision上讀出於615nm和665nm的HTRF信號。在光譜幹擾校正後，標準化HTRF信號。
用6H-MEK作為底物的b-RafV600E突變型HTRF分析(劑量響應) 分析原則 分析利用6H-MEK作為底物。通過b-Raf V600E磷酸化，磷酸化的6H-MEK用兔抗-磷酸基-MEK1/2，Eu-標記的抗兔和APC-標記的抗-6H抗體檢測。
試劑和儀器 酶獲自Upstate的具有N-末端GST-標記的含V600E突變的重組人b-Raf殘基416-端；(由在Sf21昆蟲細胞中的杆狀病毒表達)，0.26mg/mL(7.49μM，假定67.3kD的分子量)Cat.#14-5M，Lot#25633AU，貯存於-80℃。
底物獲自C.Belunis(5/26/04)的WT全長6H-MEK，4.94mg/mL(154.4μM，假定32kD的MW)，貯存於-15℃。
抗體兔(α-P-(Ser217/221)-MEK-1/2Ab(獲自Cell Signaling，Cat.#9121B，Lot14)Eu-(α-兔IgG(獲自Wallac，Cat.#AD0083，Lot 318663，710ug/mL，4.4μM)；(α-6H-SureLight-APC(獲自Martek，Cat.#AD0059H，LotE012AB01，3.03μM)。
讀數器PerkinElmer的Envision，用412反射鏡的HTRF讀數模式。
分析板基片全黑聚丙烯板(Cat.#4344)。
其它複合板用Weidman 384聚丙烯板(REMP)。
分析程序 (1)製備激酶分析緩衝液(KAB)50mM HEPES(HyClone)pH7，10mM MgCl2，1mM DTT，0.1mM Na3V2O4，和0.3mg/ml BSA。
(2)製備在KAB中的6H-MEK(150nM)。加入12μl/孔到分析板中。
(3)製備在KAB中的ATP(66μM)。
(4)在DMSO中，將化合物稀釋到2.4mM並且將陽性對照稀釋到480μM。在DMSO中進行10點3x稀釋。撤回2.5μl/孔的DMSO溶液，並且加入到(3)中的27.5μl/孔ATP溶液中。
(5)混合，然後將(4)中的6μl/孔的溶液加入到分析板中，對於在MEK磷酸化過程中的DMSO濃度為2.1％。
(6)製備在KAB中的b-Raf V600E(100pM)。
(7)在柱1-2中，加入6μl/孔的KAB，並且在柱3-24中，加入6μl/孔的b-Raf V600E。
(8)於37℃溫育30min。
(9)製備在AB1中的兔α-P-(Ser 217/221)-MEK-1/2Ab(來自貯液的1200)50mM HEPES pH7，0.2mg/ml BSA，和43mM EDTA。
(10)為了停止反應，將來自(9)的6μl/孔的溶液加入到分析板中，並且於37℃溫育30min。
(11)製備在AB2中的Eu-α-兔IgG(9nM)和α-6H-SureLight-APC(180nM)50mM HEPES pH7和0.2mg/ml BSA。
(12)將來自(11)的6μl/孔的溶液加入到分析板中。
(13)為了測定光譜幹擾因子，按照步驟(1)至(10)製備兩個樣品。對於空白樣品，加入6μl/孔的AB2。對於幹擾因子樣品，加入6μl/孔的Eu-抗兔IgG(9nM)。
(14)於室溫溫育1.5小時。
(15)在Envision上讀出於615nm和665nm的HTRF信號。在光譜幹擾校正後，標準化HTRF信號。
分析數據 表1激酶酶抑制分析(IC50)
權利要求
1.式I化合物
其中
R1選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，氰基，NR4R5，三氟甲基和NO2；
R2可以是選自下列基團中的一個或多個基團氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基或雜芳基取代的低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，氰基，滷素，甲基磺醯基，磺醯胺，三氟甲基，磺醯脲，醯胺，酯，氨基甲酸酯和脲；
R3選自氫，羥基，低級烷基，取代的低級烷基，低級烷氧基和NR4R5；
環B選自芳基和雜芳基；
環A是任選還被取代的
A獨立地選自C，N，O和S，並且環A是芳族的，
R4和R5選自氫，低級烷基或被羥基或低級烷氧基取代的低級烷基，
X是O或NH，
及其藥用鹽。
2.根據權利要求1所述的式I化合物，
其中
R1選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，氰基，NR4R5，三氟甲基和NO2；
R2選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基或雜芳基取代的低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，氰基，滷素，甲基磺醯基，磺醯胺，三氟甲基，磺醯脲，醯胺，酯，氨基甲醯基，氨基甲酸酯和脲；
R3選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，低級烷氧基和NR4R5；
環B選自芳基和雜芳基；
環A是
A獨立地選自C，N，O和S，並且環A是芳族的，
R4和R5選自氫，低級烷基或被羥基或低級烷氧基取代的低級烷基，
X是O或NH，
及其藥用鹽。
3.權利要求1或2任何一項所述的化合物，其中R1是氫或低級烷基，其在5-取代的1-羥基環B的C2處，其中環B是苯基。
4.權利要求1或2任何一項所述的化合物，其中R1是氫或低級烷基，其在5-取代的3-羥基環B的C2處，其中環B是吡啶。
5.權利要求1至4中任何一項所述的化合物，其中環A選自
和
其中
R2選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基或雜芳基取代的低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，氰基，滷素，甲基磺醯基，磺醯胺，三氟甲基，磺醯脲，醯胺，酯，氨基甲醯基，氨基甲酸酯和脲，並且
環B選自芳基和雜芳基。
6.權利要求1的化合物，其選自
4-氯-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯；
4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯；
4-氨基-3-[3-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，
4-氯-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽，
4-氨基-3-{5-[4-(2-羥基-乙基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽，
4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺甲苯-4-磺酸鹽，
4-氯-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，和
4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。
6.權利要求1的化合物，其選自
4-氨基-3-[2-甲基-5-(1-甲基-1H-[1，2，3]三唑-4-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，
4-氯-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{3-[2-(4-甲氧基-苄基)-2H-四唑-5-基]-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，
4-氯-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-[3-(2-甲基-2H-四唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，
4-氯-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，和
4-氨基-3-{5-[1-(4-氯-苄基)-1H-[1，2，3]三唑-4-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺甲苯-4-磺酸鹽。
7.權利要求1的化合物，其選自
4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苄基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，
4-氯-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸，
4-氨基-3-{5-[5-(4-氯-苯基)-[1，3，4]噁二唑-2-基]-2-甲基-苯氧基-甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽，和
4-氯-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯。
8.權利要求1的化合物，其選自
4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸，
4-氨基-3-[2-甲基-5-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-苯氧基甲基]-噻吩並-[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺三氟乙酸鹽，
4-氯-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-{5-[4-(4-甲氧基-苄基)-5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基]-2-甲基-苯氧基甲基}-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺，
4-氯-3-[2-甲基-5-(甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2c]吡啶-7-羧酸乙酯，
4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸乙酯，和
4-氨基-3-[2-甲基-5-(5-甲基-4H-[1，2，4]三唑-3-基)-苯氧基甲基]-噻吩並[3，2-c]吡啶-7-羧酸(2-羥基-乙基)-醯胺。
9.藥物組合物，其包含式I化合物，
其中
R1選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，氰基，NR4R5，三氟甲基和NO2；
R2選自氫，低級烷基，取代的低級烷基，芳基或雜芳基取代的低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，低級烷氧基，芳基，取代的芳基，雜芳基，取代的雜芳基，氰基，滷素，甲基磺醯基，磺醯胺，三氟甲基，磺醯脲，醯胺，酯，
氨基甲醯基，氨基甲酸酯和脲；
R3選自氫，羥基，低級烷基，取代的低級烷基，低級烷氧基和NR4R5；
環B選自芳基和雜芳基；
環A是
A獨立地選自C，N，O和S，並且環A是芳族的，
R4和R5選自氫，低級烷基或被羥基或低級烷氧基取代的低級烷基，
X是O或NH，
或其藥用鹽，
以及藥用載體。
10.根據權利要求1至8中任何一項的式I化合物在製備對於治療癌症，動脈粥樣硬化症，和/或再狹窄有用的藥物中的應用。
11.如上所述的本發明。
全文摘要
本發明提供式(I)化合物，其中R1，R2，R3，X，環A和環B如本文中所述。該化合物顯示抗癌性。
文檔編號C07D495/04GK101479278SQ200780023914
公開日2009年7月8日 申請日期2007年6月22日 優先權日2006年6月29日
發明者奕 陳, 建春·託馬斯·陸, 帕梅拉·勞倫·羅斯曼, 蘇松塞 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司