作為整合素抑制劑的二醯基肼衍生物的製作方法

2023-06-24 16:33:11 1

專利名稱：作為整合素抑制劑的二醯基肼衍生物的製作方法
技術領域：
本發明涉及式Ⅰ的化合物及其鹽和溶劑化物， 其中X 是H2N-C(=NH)-、H2N-C(=NH)-NH-、A-C(=NH)-NH-、Het1-或Het1-NH-,Y 是 -(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-或-(CH2)p-Het2-(CH2)q-,Z 是-(CH2)r-R5,R1、R2彼此獨立地是H或A,R3是H、F、Cl、Br、A、OA或OCF3,R4是苯基，其未被取代或被F、Cl、Br、A、OA或OCF3取代，R5是COOH、COOA、CONH2、SO3H、PO3H2或四唑基，Het1是含1至4個氮原子的單或雙環雜環，其可以未被取代或被NH2單或二取代，Het2是含1至4個氮原子和/或硫原子的5或6元芳香雜環，其可以未被取代或被F、Cl、Br、A、OA或OCF3單或二取代，A是含1至6個碳原子的烷基，n是0、1、2、3、4、5、6、7或8,m,o,p,q,r,s,t彼此獨立地是0、1、2、3、4或5。
特別類似的化合物是已知的，例如，見US5741796。
本發明基於發現了有價值的新化合物，特別是可以用於製備藥物的那些化合物的目的。
已發現式Ⅰ的化合物及其鹽具有非常有價值的藥學性質，並具有良好的耐受性。尤其是，它們作為整合素(integrin)抑制劑，並特別抑制αv-、β3-或β5-整合素受體與配體的相互作用，例如，纖維蛋白原與β3-整合素受體的結合。對於整合素αvβ1-、αvβ3-、αvβ5-、αⅡbβ3-和αvβ6-及αvβ8-，這些化合物表現出了特別的活性；具體地講，發現了這些化合物是玻璃體結合蛋白受體αvβ3的強選擇性抑制劑。
例如，此作用可以通過J.W.Smith等在J.Biol.Chem.265,12267-12271(1990)中描述的方法證明。
血管生成的進行對血管整合素和細胞外基質蛋白間相互作用的依賴性由P.C.Brooks,R.A.Clark和D.A.Cheresh描述於Science,264,569-71(1994)。
環肽抑制此相互作用，並因此引起生成血管的血管細胞的編程性細胞死亡(細胞程序死亡)，這種可能性由P.C.Brooks,A.M,Montgomery,M.Rosenfeld,R.A.Reisfeld,T.-Hu,G.Klier和D.A.Cheresh描述於Cell,79,1157-64(1994)。
式Ⅰ的化合物阻斷整合素受體和配體的相互作用,例如，纖維蛋白原與纖維蛋白原受體(糖蛋白Ⅱb/Ⅲa)的結合，其作為GPⅡb/Ⅲa拮抗劑，防止腫瘤細胞轉移傳播。這被如下的觀察證實這些化合物能抑制金屬蛋白酶結合整合素，因此防止細胞利用此蛋白酶的酶活性。在環-RGD肽抑制MMP-2(基質金屬蛋白酶-2)與玻璃體結合蛋白受體αvβ3結合中發現了一個實例，見P.C.Brooks等，Cell,85,683-693(1996)。
通過腫瘤細胞與血小板作用形成微凝集物(微血栓)，造成了腫瘤細胞從局部腫瘤傳播到血管系統中。這些腫瘤細胞在微凝集物中受到了屏蔽保護，且不會被免疫系統的細胞識別。這些微凝集物本身可以附於血管壁，這樣就有利於腫瘤細胞向組織的滲透。因為微血栓的形成是由纖維蛋白原與被激活的血小板上的纖維蛋白原受體結合所介導的，故GPⅡa/Ⅲb拮抗劑可以被看作是活動性腫瘤轉移抑制劑。
式Ⅰ的化合物可以在人和獸藥中用作醫療活性物質，特別是預防和/或治療血栓形成、心肌梗塞、動脈硬化、炎症、中風、心絞痛、腫瘤疾病、溶骨性疾病如骨質疏鬆、病理性血管生成疾病如炎症、眼疾病、糖尿病性視網膜病、黃斑變性、近視、眼組織胞漿菌病、類風溼性關節炎、骨關節炎、發紅性青光眼、潰瘍性結腸炎、克羅恩氏病、動脈粥樣硬化、牛皮癬、血管成形術後再狹窄、多發性硬化、病毒感染、細菌感染、真菌感染，在急性腎衰竭和傷口癒合中有助於病癒。
在使用了生物材料、移植物、插管或心臟起搏器的手術中，式Ⅰ的化合物可以用作抗菌活性物質。
此時，它們具有抗菌防腐作用。抗菌活性的效果可以由P.Valentin-Weigund等在Infection and Immunity,2851-2855(1988)中描述的方法證明。
因為式Ⅰ的化合物是纖維蛋白原結合及血小板上的纖維蛋白原受體的配體的抑制劑，故如果例如被放射活性或UV可檢查的基團取代，則它們可以用作體內血管系統中血栓檢查及定位的診斷試劑。
作為纖維蛋白原結合的抑制劑，式Ⅰ的化合物還可以用作研究不同活化階段中血小板代謝或纖維蛋白原受體的細胞內信號機制的有效輔助手段。必須摻入的「標記」的可檢查單位，例如用3H進行同位素標記，允許研究受體結合後上述機制。
所用縮略語如下Ac 乙醯基Asp 天冬氨酸Aza-Gly H2N-NH-COOHBOC 叔丁氧羰基CBZ或Z苄氧羰基DCCI 二環己基碳化二亞胺DCM二氯甲烷DIPEA 二異丙基乙胺DMF甲基甲醯胺EDGI N-乙基-N,N′-(二甲基氨基丙基)-碳化二亞胺Et 乙基Fmoc 9-芴基甲氧羰基Gly甘氨酸HATU 0-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲鎓(uronium)六氟磷酸鹽HOBt 1-羥基苯並三唑Me 甲基MBHA 4-甲基二苯甲基胺Mtr4-甲氧基-2,3,6-三甲基苯基磺醯基NMPN-甲基吡咯烷酮HONSu N-羥基琥珀醯亞胺OBzl 苄基酯OtBu叔丁基酯Oct辛醯基OMe甲基酯OEt基酯Pbf2,2,4,6,7-五甲基二氫苯並呋喃-5-磺醯基POA苯氧基乙醯基Sal水楊醯基TBTU0-(1H-苯並三唑-1-基)-N,N,N′,N＇-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽TFA三氟乙酸Trt三苯基甲基式Ⅰ的化合物至少具有一個手性中心並因此可以以多種立體異構體的形式存在。式Ⅰ包括了所有這些形式(例如D和L型)及其混合物(例如DL型)。
本發明的化合物還包括所謂的前藥衍生物，即例如用烷基或醯基、糖或寡肽衍生的並在有機體內快速裂解為本發明活性化合物的式Ⅰ化合物。還包括本發明化合物的生物可降解聚合物衍生物，例如，Int.J.Pharm,115,61-67(1995)所描述的。
溶劑化物是式Ⅰ的化合物與惰性溶劑形成的加成化合物。例如，溶劑化物為一或二水合物，或與醇如甲醇或乙醇的加成產物。
本發明還提供了製備權利要求1所述式Ⅰ化合物及其鹽的方法，其特徵在於a)式Ⅱ的化合物 其中X、Y、R1和R2定義如權利要求1且其中游離的氨基被適宜的氨基保護基保護，與式Ⅲ的化合物反應， 其中Z如權利要求1定義，且其中游離的羥基被適宜的羥基保護基保護，且其中保護基隨後除去，或者，b)式Ⅳ的化合物， 其中X和Y定義如權利要求1且其中游離的氨基被適宜的氨基保護基保護，與式Ⅴ的化合物反應， 其中R1、R2和Z如權利要求1定義，且其中游離的羥基被適宜的羥基保護基保護，且其中保護基隨後除去；或者，c)通過用溶劑分解或氫解試劑處理，從其一個官能基衍生物中釋放出式Ⅰ的化合物，和/或其中式Ⅰ的鹼性或酸性化合物通過用酸或鹼處理轉變為它的一種鹽。
上述式中，烷基優選甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，還包括戊基，1-、2-或3-甲基丁基，1,1-、1,2-或2,2-二甲基丙基，1-乙基丙基，己基，1-、2-、3-或4-甲基戊基，1,1-、1,2-、1,3-、2,2-、2,3-或3,3-二甲基丁基，1-或2-乙基丁基，1-乙基-1-甲基丙基，1-乙基-2-甲基丙基，1,1,2-或1,2,2-三甲基丙基。
亞烷基優選亞甲基、亞乙基、亞丙基、亞丁基、亞戊基或亞己基。
氨基保護基優選乙醯基、丙醯基、丁醯基、苯乙醯基、苯甲醯基、甲苯醯基、POA、甲氧羰基、乙氧羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、BOC、2-碘代乙氧羰基、CBZ(苄酯基)、4-甲氧基苄氧羰基、FMOC、Mtr或苄基。
R1優選H或A，特別是H或Me。
R2優選H，還包括甲基。
OA優選甲氧基、乙氧基、丙氧基或丁氧基，還包括戊氧基或己氧基。
R4優選苯基，其未被取代或被F、Cl、Br、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基或OCF3單取代，並優選單取代的苯基，特別優選苯基，鄰、間或對甲苯基，鄰、間或對乙基苯基，鄰、間或對丙基苯基，鄰、間或對異丙基苯基，鄰、間或對叔丁基苯基，鄰、間或對甲氧基苯基，鄰、間或對乙氧基苯基，鄰、間或對氟苯基，鄰、間或對溴苯基，鄰、間或對氯苯基，鄰、間或對三氟甲氧基苯基。
R5優選COOH、COOCH3、COOC2H5、COO(叔丁基)、CONH2、PO3H2、SO3H或四唑基。
Het1優選未被取代或單或二氨基取代的1-、2-或3-吡咯基，1-、2-、4-或5-咪唑基，1-、3-、4-或5-吡唑基，2-、3-或4-吡啶基，2-、4-、5-或6-嘧啶基，還優選1,2,3-三唑-1-、-4-或-5-基，1,2,4-三唑-1-、-3-或-5-基，1-或5-四唑基，3-或4-噠嗪基，吡嗪基，1-、2-、3-，4-、5-、6-或7-吲哚基，1-、2-、4-或5-苯並咪唑基，1-、3-、4-、5-、6-或7-苯並吡唑基，2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基，1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-異喹啉基，3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基，2-、4-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基，1H-咪唑並[4,5-b]吡啶-2-基或1,8-二氮雜萘-7-基。雜環基團還可以部分或全部氫化。
Het1因此還可以是，例如，2,3-二氫-1-、-2-、-3-、-4-或-5-吡咯基，2,5-二氫-1-、-2-、-3-、-4-或-5-吡咯基，1-、2-或3-吡咯烷基，四氫-1-、-2-或-4-咪唑基，2,3-二氫-1-、-2-、-3-、-4-或-5-吡唑基，四氫-1-、-3-或-4-吡唑基，1,4-二氫-1-、-2-、-3-或-4-吡啶基，1,2,3,4-四氫-1-、-2-、-3-、-4-、-5-或-6-吡啶基，1-、2-、3-或4-哌啶基、六氫-1-、-3-或-4-噠嗪基，六氫-1-、2-、-4-或-5-嘧啶基，1-、-2-或3-哌嗪基，1,2,3,4-四氫-1-、-2-、-3-、-4-、-5-、-6-、-7-或-8-喹啉基，1,2,3,4-四氫-1-、-2-、-3-、-4-、-5-、-6-、-7-或-8-異喹啉基或者1,2,3,4-四氫-1,8-二氮雜萘-7-基。
Het2優選未被取代或單-F-、-Cl-、-Br-、-A-、-OA-或-OCF3-取代的2,3-、2,4-、2,5-或3,4-噻吩基，2,3-、2,4-、2,5-或3,4-吡咯基，2,4-、2,5-或4,5-咪唑基，2,3-、2,4-、2,6-或3,5-吡啶基，2,4-、2,5-、2,6-、4,5-或5,6-嘧啶基。
n優選為2、3、4、5或6，還包括0、1、7或8；特別優選n是3、4或5。
m和o優選在每種情況下彼此獨立地是0、1或2，且特別優選它們是0。
s和t優選1或2。
p和q優選0或1，特別優選0。
因此，本發明特別提供了式Ⅰ的化合物，其中至少一個上述基團具有一個上述優選的含義。化合物的一些優選基團可以通過相應於式Ⅰ的如下部分式Ⅰa至Ⅰi表示，且除了如下的基團，其中對式Ⅰ中給出含義的基團不詳加限定在Ⅰa)中，X是H2N-C(=NH)-NH-，在Ⅰb)中，Y是 在Ⅰc)中，Z是-CH2-COOH，在Ⅰd)中，X是H2N-C(=NH)-NH-、A-C(=NH)-NH-或Het1-NH-，在Ⅰe)中，X是H2N-C(=NH)-NH-或Het1-NH-,R1和R2是H，在Ⅰf)中，X是H2N-C(=NH)-NH-或Het1-NH-,Y是 或-(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-，在Ⅰg)中，X是H2N-C(=NH)-NH-或Het1-NH-,
Y是 或-(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-,Z是-CH2-COOH,R4是未被取代或Cl取代的苯基，在Ⅰh)中，X是H2N-C(=NH)-NH-、A-C(=NH)-NH-或Het1-NH-,Y是 -(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-或-(CH2)p-Het2-(CH2)q-,Z是-CH2-COOH,R4是未被取代或Cl取代的苯基，Her1是未被取代或單-NH2-取代的苯並咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、2,3-二氫吲哚基、吲哚基或二氮雜萘基，s和t是1，m,o,p,q是0或1，在Ⅰi)中，X是H2N-C(=NH)-NH-或Het1-NH-,Y是 吡啶-2,5-二基或-(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-,
Z是-CH2-COOH,R4是未被取代或Cl取代的苯基，Het1是未被取代或單-NH2-取代的苯並咪唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哌啶基、哌嗪基、2,3-二氫吲哚基、吲哚基或二氮雜萘基，s和t是1,m和o是0。
式Ⅰ的化合物以及製備它們的起始物可通過本身已知的方法製備，例如描述於文獻(如標準著作如Houben-Weyl,Methoden derorganischen Chemie(有機化學方法),Georg-Thieme-Verlag,Stuttgart)中，並特別是在已知且適於上述反應的反應條件下。在這些反應中，可以使用本身已知的、在此處並未詳細提及的變化形式。
如果需要，起始物質也可就地形成，以便不從反應混和物中將它們分離而立即進一步反應，得到式Ⅰ的化合物。
式Ⅰ的化合物可優選在肽合成的條件下得到。用肽合成的常規方法是有利的，例如，如Houben-Weyl,1.c.,15/Ⅱ卷，1至806頁(1974)所述。
因此，式Ⅰ的化合物可以通過式Ⅱ的化合物與式Ⅲ的化合物反應，隨後除去保護基製得。
通過式Ⅳ的化合物與式Ⅴ的化合物反應，隨後除去保護基，也可以製得式Ⅰ的化合物。
該偶聯反應優選在脫水劑的存在下、在惰性溶劑中、在約-10至40℃優選0至30℃下進行，脫水劑如碳化二亞胺如DCCI或EDCI，還有如丙烷磷酸酐(參見Angew.Chem.92,129(1980))，二苯基磷醯疊氮化物或2-乙氧基-N-乙氧羰基-1,2-二氫喹啉；惰性溶劑如滷代烴如二氯甲烷、醚如四氫呋喃或二噁烷、醯胺如DMF或二甲基乙醯胺、腈如乙腈、二甲基亞碸或這些溶劑的混合物。在稀溶液中處理有利於促進分子內環合而不是分子間肽的形成。根據所使用的條件，反應時間為幾分鐘至14天。
除了式Ⅱ和/或Ⅳ的化合物，還可以使用式Ⅱ和/或Ⅳ化合物的衍生物，優選預活化的羧酸或醯滷化物、對稱的或混合的酸酐或活化的酯。在典型的醯化反應中活化羧基的這些基團描述於文獻中(例如，在標準著述如Houben-Weyl,Methden der organischen Chemie,Georg-Thieme-Verlag,Stuttgart)。就地形成活化的酯，例如，通過加入HOBt或N-羥基琥珀醯亞胺，是有利的。
如果在酸結合劑優選有機鹼如三乙胺、二甲基苯胺、吡啶或喹啉的存在下使用醯滷化物，則該反應一般在惰性溶劑中進行。
還可以有利地加入鹼金屬或鹼土金屬氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽，或鹼金屬或鹼土金屬的其它弱酸鹽，優選鉀鹽、鈉鹽、鈣鹽或銫鹽。
也可以合成式Ⅰ化合物的直接前體，例如，按照Merrifield(Angew.Chem.97,801-812,1985)在固相、可膨脹的聚苯乙烯樹脂上。
式Ⅰ的化合物還可以通過溶劑分解特別是水解，或氫解從其官能團衍生物中獲得。
溶劑分解或氫解的優選起始物是相應於式Ⅰ化合物，但是用相應保護的氨基和/或羥基基團代替了一個或多個游離氨基和/或羥基基團的化合物，優選用氨基保護基代替結合在N原子上的H原子的那些，特別是代替氨基而帶上NHR＇基團的那些化合物(其中R′是氨基保護基，例如，BOC或CBZ)。
此外，優選起始物中羥基的H原子被羥基保護基代替，例如，那些相應於式Ⅰ的、但是代替羥基苯基以R″O-苯基的化合物(其中R″是羥基保護基)。
起始物的分子上還可以存在幾個相同或不同的氨基和/或羥基保護基。如果存在的保護基彼此不同，在很多情況下它們可以選擇性地被裂解。
術語「氨基保護基」一般指適於保護(阻斷)氨基而不讓其發生化學反應，卻又在所需的化學反應在該分子的其它位點完成後可以容易地除去的基團。典型的基團特別是未被取代或取代的醯基、芳基、芳烷氧基甲基或芳烷基。由於氨基保護基在所需反應(或系列反應)完成後除去，它們的性質和大小並不嚴格；但是，優選含1-20，特別是1-8個碳原子的那些。術語「醯基」可以聯繫本發明的方法廣義地加以解釋。包括從脂族、芳脂族、芳香族或雜環羧酸或磺酸衍生的醯基，特別是烷氧羰基、芳氧羰基，並首選芳烷氧羰基。這些醯基的實例為烷醯基如乙醯基、丙醯基、丁醯基；芳烷醯基如苯基乙醯基；芳醯基如苯甲醯基或甲苯醯基；芳氧烷醯基如POA；烷氧羰基如甲氧羰基、乙氧羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、BOC、2-碘代乙氧羰基；芳烷氧羰基如CBZ(苄酯基)、4-甲氧基苄氧基羰基、FMOC；芳基磺醯基如Mtr。優選的氨基保護基是BOG和Mtr，以及CBZ、Fmoc、苄基和乙醯基。
術語「羥基保護基」一般還是已知的，並指適於保護羥基而不讓其發生化學反應，卻又在所需的化學反應在該分子的其它位點完成後可以容易地除去的基團。典型的基團特別是上述未被取代或取代的芳基、芳烷基或醯基，以及烷基。由於羥基保護基在所需化學反應或系列反應完成後除去，它們的性質和大小並不嚴格；但是，優選含1-20，特別是1-10個碳原子的那些。羥基保護基的實例特另是苄基、對硝基苯甲醯基、對甲苯磺醯基、叔丁基和乙醯基，其中苄基和叔丁基是特別優選的。在天冬氨酸和穀氨酸中COOH基團特別優選以其叔丁基酯(例如Asp(OBut))的形式保護。
從其官能基衍生物中釋放式Ⅰ的化合物，這要根據所使用的保護基，例如，用強酸，便利地用TFA或高氯酸，但是也可以用其它強的無機酸如鹽酸或硫酸，強有機羧酸如三氯乙酸、或磺酸例如苯磺酸或對甲苯磺酸。可以存在其它惰性溶劑，但是這不總是需要的。適宜的惰性溶劑優選優選有機化合物，如羧酸如乙酸，醚如四氫呋喃或二噁烷，醯胺如DMF，滷代烴如二氯甲烷，還包括醇如甲醇、乙醇或異丙醇，以及水。還可以是上述溶劑的混合物。優選加入過量的TFA而不加入其它溶劑，高氯酸以乙酸和70％高氯酸的9∶1的混合物的形式使用。裂解的反應溫度便利地為約0至約50℃，且此反應優選在15至30℃(室溫)下進行。
基團BOC、OBut和Mtr可以優選除去，例如，用TFA在二氯甲烷中，或用約3至5N HCl在二噁烷中，在15-30℃下，而FMOC基團可以用約5至50％的二甲基胺、二乙基胺或哌啶的DMF溶液在15-30℃下裂解掉。
例如，通過用氫氣在催化劑(如貴金屬催化劑如鈀，便利地在載體如碳上)存在下處理，通過氫解可以除去保護基(例如CBZ或苄基)。此反應用的適宜溶劑如上所述，特別是，例如，醇如甲醇或乙醇，或醯胺如DMF。此氫解反應一般在約0至100℃並在約1至200巴下進行，優選在20-30℃和1-10巴壓力下。例如，CBZ基團的氫解在5至10％Pd/C上在甲醇中，或用甲酸銨(代替氫氣)在Pd/C上在甲醇/DMF中，在20-30℃下，可以容易地進行。
用酸可以將式Ⅰ的鹼轉變為相應的酸加成鹽，例如，通過等量的鹼和酸在惰性溶劑如乙醇中反應，並隨後蒸發。能得到生理可接受鹽的酸特別可能用於此反應。因此，可以使用無機酸，例如，硫酸、硝酸、氫滷酸如氫氯酸或氫溴酸、磷酸如正磷酸、氨基磺酸，或者有機酸，特別是脂族、脂環族、芳脂族、芳香族或雜環單或多價羧酸、磺酸或硫酸，例如，甲酸、乙酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、異煙酸、甲或乙磺酸、乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、對甲苯磺酸、萘一和二磺酸以及十二烷基硫酸。與生理不可接受的酸形成的鹽，例如，苦味酸鹽，可以用來分離和/或純化式Ⅰ的化合物。
另一方面，式Ⅰ的酸可以用鹼轉變為其生理可接受的金屬或銨鹽之一。適用於此目的的鹽特別是鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽、鈣鹽和銨鹽，還有取代的銨鹽，例如，二甲基-、二乙基-或二異丙基銨鹽，單乙醇-、二乙醇-或二異丙醇銨鹽，環己基-、二環己基銨鹽，二苄基亞乙基二銨鹽，另外，例如，與精氨酸或賴氨酸形成的鹽。
本發明進一步提供了式Ⅰ的化合物和/或其生理可接受的鹽製備藥物製劑(特別是通過非化學途徑)的用途。為此，它們可以與至少一種固體、液體和/或半液體賦形劑或輔劑，如果需要，還可以與一種或多種其它活性化合物混合，一起製成適宜的劑型。
本發明還提供了藥物製劑，其中含有至少一種式Ⅰ的化合物和/或其一種生理可接受的鹽。
這些製劑可以用作人或獸醫藥用藥物。可能的賦形劑為適於腸內(如口服)、非腸道或局部給藥或適於吸入噴霧形式給藥的、且不與這些新化合物反應的無機或有機物，例如，水、植物油、苄醇、亞烷基二醇、聚乙二醇、甘油三乙酸酯、明膠、碳水化物如乳糖或澱粉、硬脂酸鎂、滑石和凡士林。片劑、丸劑、包衣片劑、膠囊、粉劑、顆粒劑、糖漿、汁或滴劑特別用於口服，栓劑用於直腸給藥，溶液劑(優選油性或水溶液劑)、以及混懸劑、乳劑或埋植劑用於非腸道給藥，而軟膏、霜或粉劑用於局部給藥。這些新化合物還可以凍幹，所得凍乾物可以用於，例如，製備注射製劑。所述製劑可以是滅菌的並/或含有輔劑，如潤滑劑、防腐劑、穩定劑和/或溼潤劑、乳化劑、調節滲透壓的鹽、緩衝物質、顏料、矯味劑和/或若干其它活性化合物，例如，一種或多種維生素。
對於吸入噴霧給藥，可以使用含活性化合物的噴霧劑，該化合物或者溶解於或者懸浮於拋射劑或拋射劑混合物中(例如，二氧化碳或氯氟烴)。此時，該活性化合物便利地以微粒化的形式使用，並可以存在一種或多種其它生理可接受的溶劑，例如，乙醇。吸入溶液劑可以藉助常規吸入器給藥給藥。
式Ⅰ的化合物及其生理可接受的鹽可以用作整合素抑制劑來治療疾病，特別是血栓形成、心肌梗塞、冠心病、動脈硬化、腫瘤、骨質疏鬆、炎症和感染。
權利要求1的式Ⅰ化合物和/或其生理上可接受的鹽還可以用於病理學過程，該過程由血管生成維持或傳播，特別是腫瘤或類風溼性關節炎。
為此，本發明的物質一般優選以約0.05至500mg，特別是0.5至100mg每單位劑量的劑量給藥，類似於已知的、商購肽，並特別類似於US-A-4472305中描述的化合物。日劑量優選約0.01至2mg/kg體重。但是，每個患者的特定劑量依賴於多種因素，例如，所用特定化合物的活性，患者的年齡、體重、總的健康狀況、性別，飲食，給藥時間和途徑，排洩速率，藥物聯合及所治療特定疾病的嚴重程度。優選非腸道給藥。
式Ⅰ的化合物還可以用作整合素配體來製備親和色譜柱，用於製備純的整合素。
最後，該配體，例如式Ⅰ的化合物，通過固定功能基，例如Asp的羧基共價偶聯在聚合物載體上。
適宜的聚合物載體物質為肽化學領域本身已知的聚合固相，優選具有親水性的那些，例如，交聯多糖，如纖維素、瓊脂糖或Sephadex(交聯葡聚糖)、丙烯醯胺、基於聚乙二醇的聚合物或Tentakelpolymere。
純化整合素用的親和色譜物質在類似於本身已知的胺基酸常規縮合反應的條件下製備。
式Ⅰ的化合物含一個或多個手性中心，因此可以存在外消旋或光學活性形式。所製得的外消旋物可以通過本領域已知的方法，用機械或化學方法分離為對映體。優選，外消旋混合物通過與光學活性拆分試劑反應轉變為非對映異構體。適宜的拆分試劑為，例如，光學活性的酸，如D和L型的酒石酸、二乙醯基酒石酸、二苯甲醯基酒石酸、扁桃酸、蘋果酸、乳酸或不同的光學活性的樟腦磺酸，如β-樟腦磺酸。藉助於填充了光學活性拆分試劑(如二硝基苯甲醯基苯基甘氨酸)的柱的對映體分離也是有利的；適宜的流動相為，例如，己烷/異丙醇/乙腈混合物，例如，其體積比為82∶15∶3。
當然，通過上述方法用已具有光學活性的起始物獲得式Ⅰ的光學活性化合物也是可能的。
上述以及以下給出的所有溫度為攝氏溫度。在下列實施例中，「常規處理」指加入水，如果需要，將pH值調節為2至10，如果需要，根據終產物的結構，用乙酸乙酯或二氯甲烷萃取此混合物，分離出有機相，用硫酸鈉乾燥並蒸發，並將此殘餘物通過矽膠色譜和/或結晶純化。在下列系統中HPLC的矽膠Rf值；流動相正丁醇/乙酸/水3∶1∶1(A)，氯仿/甲醇9∶1(B),RT=保留時間(分鐘)如下柱Nucleosil-5-C18-柱(250×4；5μm)。
所用洗脫劑為含0.1％TFA的乙腈(B)和含0.1％TFA的水的梯度(在各種情況下數據是佔乙腈體積的百分數)。保留時間Rt在流速為1ml/分鐘測定。在220和254nm下檢查。
非對映異構體優選在給出的條件下分離。
質譜(MS):ESI(電子噴霧電離)(M+H)+。
實施例11、5-(9H-芴-9-基甲氧基)-3H-[1,3,4]噁二唑-2-酮將2個當量的光氣(1.89M在甲苯中，4.2ml)加入到995mg的肼甲酸(9H-芴-9-基-甲基)酯在40ml二氯甲烷和40ml飽和碳酸氫鈉水溶液的溶液中。將此混合物攪拌15分鐘並常規處理得到5-(9H-芴-9-基甲氧基)-3H-[1,3,4]噁二唑-2-酮(「A」)。 58mg；IR(KBr):3300s,1780s,1650s,1451m,1426m,1347m,1224m,918m,758w,740m cm-1.
2、結合樹脂的Asp(OtBu)-NH2(「B」)將1.86g的4-(4-(1-(9-芴基甲氧羰基-氨基)乙基)-2-甲氧基-5-硝基苯氧基)丁酸R-TentaGel樹脂(0.18mmol的光連接劑/g樹脂)，用20ml DMF洗滌並用15ml存在於DMF中的20％哌啶脫保護兩次。用DMF洗滌後，將此樹脂與0.27g Fmoc-Asp(OtBu)-OH、0.1g HOBt和0.211g TBTU的6ml DMF溶液混合。加入0.22ml DIPEA(最高至pH7)，並室溫下將此混合物搖動1小時。用DMF(6×20ml)洗滌此混合物並用15ml存在於DMF中的20％哌啶脫保護兩次。將此混合物用DMF(5×20ml)、甲醇(3×20ml)和乙醚(2×20ml)洗滌，並隨後將此樹脂乾燥。 3、結合樹脂的Aza-Gly-Asp(OtBu)-NH2(「C」)將1.12g的「B」用DCM(3×7ml)洗滌，並與0.176g的「A」的5ml DCM溶液混合併搖動1小時。
用DCM(5×7ml)、NMP(5×7ml)、DMF(3×7ml)洗滌此混合物，並用7ml 20％的哌啶DMF溶液脫保護兩次。將此混合物用DMF(5×7ml)、甲醇(3×7ml)和乙醚(2×7ml)洗滌，並將此樹脂隨後乾燥。 4、(3S)-3-[4-(3-胍基苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸將0.349g的「C」用NMP(5×5ml)和DMF(1×5ml)洗滌並與53mg的3-(9H-芴-9-基甲氧羰基氨基)苯甲酸、56mg的HATU和0.24ml的可力丁在1.5ml DMF中的溶液混合，並將此混合物攪拌1小時。將此樹脂如上所述洗滌並脫保護。
此樹脂隨後與0.24g的N,N＇-雙-BOC-1-脒基吡唑(「D」)的2ml氯仿溶液混合，並在50℃下放置16小時。用DCM、甲醇和乙醚洗滌此樹脂。
為了除去BOC基團，將此樹脂與95％TFA和5％水(5ml)的混合物一起搖動1小時。將此樹脂用DCM、存在於DCM的吡啶、DCM、甲醇和乙醚洗滌。為了裂解，將此樹脂在塑料注射器中懸浮於ACN/水(6ml)的1∶1混合物中，用磁力攪拌器緩慢攪拌並用TQ 150汞燈照射8小時。除去溶劑並通過半製備HPLC純化，得到(3S)-3-[4-(3-胍基苯甲醯基)脲氨基]琥珀酸，三氟代乙酸鹽。 4.8mg；Rt=10.8(0→20,BinA,30min)；MS(ESI)352[M+H]+
實施例2將1摩爾當量的N,N＇-雙-BOC-1-脒基吡唑和1摩爾當量的(3S)-3-[4-(3-氨基苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸叔丁基酯[由3-(9H-芴-9-基甲氧羰基氨基)苯甲酸與Aza-Gly-Asp(OtBu)-NH2反應隨後除去Fmoc基團得到]在氯仿中在40℃下攪拌10小時。常規處理得到(3S)-3-[4-(3-(N,N＇-雙-BOC-胍基)苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸叔丁酯。 為了除去BOC基團並裂解叔丁基酯，將此化合物在95％TFA和5％水的混合物中攪拌10分鐘。將其在DCM中回收並常規處理，得到(3S)-3-[4-(3-胍基苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸。
實施例3將1摩爾當量的N,N＇-雙-BOC-1-脒基苯甲酸、1摩爾當量的Aza-Gly-Asp(OtBu)-NH2和1摩爾當量HATU在氯仿中在30℃下攪拌10小時。常規處理得到(3S)-3-[4-(3-(N,N＇-雙-BOC-胍基)苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸叔丁基酯。為了除去BOC基團並裂解叔丁基酯，將此混合物在95％TFA和5％水的混合物中攪拌10分鐘。將此混合物在DCM中回收並常規處理，得到(3S)-3-[4-(3-胍基苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸。
實施例4按照實施例1的方法，將336mg的「C」與49mg的5-(Fmoc-氨基)戊酸反應，除去Fmoc保護基，與35mg的「D」反應並隨後用TFA除去Boc保護基，並從樹脂上裂解，得到化合物(3S)-3-[4-(5-胍基戊醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸。 6.0mg；Rt=10.6(0→30,BinA,30min)；MS(ESI)332類似地，「C」與4-(Fmoc-氨基)-3-甲氧基苯甲酸和「D」分步反應並從樹脂上裂解得到(3S)-3-[4-(4-胍基-3-甲氧基苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸，MS(ESI) 382；與2-(Fmoc-氨基)吡啶-5-甲酸和「D」反應並從樹脂上裂解得到(3S)-3-[4-(2-胍基-吡啶-5-羰基)脲氨基]琥珀醯胺酸，MS(ESI)353；類似地，結合樹脂的Aza-N＇-Me-Gly-Asp(OtBu)-NH2與5-(Fmoc-氨基)戊酸和「D」分步反應並從樹脂上裂解，得到(3S)-3-[4-(5-胍基戊醯基)-4-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸，MS(ESI)346；與3-(Fmoc-氨基)苯甲酸和「D」反應並從樹脂上裂解得到(3S)-3-[4-(3-胍基苯甲醯基)-4-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸，MS(ESI)366；與3-(Fmoc-氨基)苯基乙酸和「D」反應並從樹脂上裂解得到(3S)-3-[4-(3-胍基苯乙醯基)-4-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸。 與3-(Fmoc-氨基甲基)苯甲酸和「D」反應並從樹脂上裂解，得到(3S)-3-[4-(3-胍基甲基苯甲醯基)-4-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸，MS(ESI) 380；與4-(Fmoc-氨基)苯甲酸和「D」反應並從樹脂上裂解得到(3S)-3-[4-(4-胍基苯甲醯基)-4-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸，MS(ESI)366；類似地，結合樹脂的Aza-N-Me-Gly-Asp(OtBu)-NH2與5-(Fmoc-氨基)戊酸和「D」分步反應並從樹脂上裂解，得到(3S)-3-[4-(5-胍基戊醯基)-3-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸，與3-(Fmoc-氨基)苯甲酸和「D」反應並從樹脂上裂解得到(3S)-3-[4-(3-胍基苯甲醯基)-3-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸，與3-(Fmoc-氨基)苯基乙酸和「D」反應並從樹脂上裂解得到(3S)-3-[4-(3-胍基苯乙醯基)-3-甲基脲氨基]琥珀醯胺酸。
實施例5通過實施例1的方法，將「C」與4-(1H-苯並咪唑-2-基氨基)-3-(4-氯苯基)-丁酸反應，得到(3S)-3-{4-[4-(1H-苯並咪唑-2-基氨基)-3-(4-氯苯基)丁醯基]脲氨基}琥珀醯胺酸。 與4-(2-吡啶基氨基)-3-(4-氯苯基)丁酸反應得到(3S)-3-{4-[4-(2-吡啶基氨基)-3-(4-氯苯基)丁醯基]脲氨基}琥珀醯胺酸，與3-氯-5-(2-吡啶基氨基)苯甲酸反應得到(3S)-3-{4-[3-氯-5-(2-吡啶基氨基)苯甲醯基]脲氨基}琥珀醯胺酸，與3-(1H-苯並咪唑-2-基氨基)苯甲酸反應得到(3S)-3-{4-[3-(1H-苯並咪唑-2-基氨基)苯甲醯基]脲氨基}琥珀醯胺酸，與3-亞氨代乙醯基苯甲酸反應得到(3S)-3-{4-[3-亞氨代乙醯基苯甲醯基]脲氨基}琥珀醯胺酸， 下列實施例涉及藥物製劑實施例A注射小瓶100g式Ⅰ活性化合物和5g磷酸氫二鈉在3升雙蒸水中的溶液，用2N鹽酸將其pH調節至6.5，並進行除菌過濾，並用此溶液填充注射小瓶，在無菌條件下凍幹並在無菌條件下封裝。每隻注射小瓶含5mg的活性化合物。
實施例B栓劑將20g式Ⅰ的活性化合物與100g大豆卵磷脂和1400g可可脂的混合物熔化，倒入模具中並讓其冷卻。每個栓劑含20mg的活性化合物。
實施例C溶液劑用1g式Ⅰ的活性化合物、9.38g二水磷酸二氫鈉、28.48g十二水磷酸氫二鈉和0.1g苯扎氯銨在940ml雙蒸水中製備溶液。將其pH調節為6.8，加至1升並通過照射滅菌。將此溶液以滴眼劑的形式使用。
實施例D軟膏將500mg的式Ⅰ活性化合物與99.5g凡士林在無菌條件下混合。
實施例E片劑將1kg式Ⅰ活性化合物、4kg乳糖、1.2kg馬鈴薯澱粉、0.2kg滑石和0.1kg硬脂酸鎂的混合物以常規方式壓制為片劑，每片含10mg的活性化合物。
實施例F包衣片劑類似於實施例E壓製片劑，然後以常規方式用蔗糖、馬鈴薯澱粉、滑石、黃蓍膠和顏料包衣。
實施例G膠囊用2kg的式Ⅰ活性化合物以常規方式填充硬明膠膠囊，以便每個膠囊中含20mg的活性化合物。
實施例H安瓿將1kg的式Ⅰ活性化合物在60升雙蒸水中的溶液，進行除菌過濾，並用此溶液填充安瓿，在滅菌條件下凍幹並在滅菌條件下封裝。每個安瓿中含10mg的活性化合物。
實施例Ⅰ吸入噴霧劑將14g的式Ⅰ活性化合物溶解於10升等滲的氯化鈉溶液中，並將此溶液裝入帶有閥裝置的常規商用噴霧容器中。此溶液可以噴霧到口或鼻內。1噴(約0.1ml)相當於約0.14mg的劑量。
權利要求
1．式Ⅰ的化合物及其鹽和溶劑化物， 其中X 是H2N-C(=NH)-、H2N-C(=NH)-NH-、A-C(=NH)-NH-、Het1-或Het1-NH-,Y 是 -(CH2)s-CH(R4)-(CH2)t-或-(CH2)p-Het2-(CH2)q-,Z是 -(CH2)r-R5,R1、R2彼此獨立地是H或A,R3是 H、F、Cl、Br、A、OA或OCF3,R4是苯基，其未被取代或被F、Cl、Br、A、OA或OCF3取代，R5是COOH、COOA、CONH2、SO3H、PO3H2或四唑基，Het1是含1至4個氮原子的單或雙環雜環，其可以未被取代或被NH2單或二取代，Het2是含1至4個氮原子和/或硫原子的5或6元芳香雜環，其可以未被取代或被F、Cl、Br、A、OA或OCF3單或二取代，A 是含1至6個碳原子的烷基，n是0、1、2、3、4、5、6、7或8,m,o,p,q,r,s,t彼此獨立地是0、1、2、3、4或5。
2．權利要求1所述的式Ⅰ化合物，它是如下化合物及其鹽a)(3S)-3-[4-(3-胍基苯甲醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸；b)(3S)-3-[4-(5-胍基戊醯基)脲氨基]琥珀醯胺酸。
3．權利要求1所述的式Ⅰ化合物及其鹽的製備方法，其特徵是a)式Ⅱ的化合物 其中X、Y、R1和R2定義如權利要求1且其中游離的氨基被適宜的氨基保護基保護，與式Ⅲ的化合物反應， 其中Z如權利要求1定義，且其中游離的羥基被適宜的羥基保護基保護，且其中保護基隨後除去，或者，b)式Ⅳ的化合物， 其中X和Y定義如權利要求1且其中游離的羥基被適宜的氨基保護基保護，與式Ⅴ的化合物反應， 其中R1、R2和Z如權利要求1定義，且其中游離的羥基被適宜的羥基保護基保護，且其中保護基隨後除去；或者，c)通過用溶劑分解或氫解試劑處理，從其一個官能基衍生物中釋放出式Ⅰ的化合物，和/或其中式Ⅰ的鹼性或酸性化合物通過用酸或鹼處理轉變為它的一種鹽。
4．製備藥物製劑的方法，其特徵在於權利要求1所述的式Ⅰ化合物和/或其一種生理可接受鹽與至少一種固體、液體或半固體賦形劑或輔劑一起製成適宜的劑型。
5．藥物製劑，其特徵在於其含有至少一種權利要求1所述的式Ⅰ化合物和/或其一種生理可接受的鹽。
6．作為整合素抑制劑治療血栓形成、心肌梗塞、冠心病、動脈硬化、腫瘤、骨質疏鬆、炎症和感染的權利要求1所述的式Ⅰ化合物及其生理可接受的鹽。
7．權利要求1所述的式Ⅰ化合物和/或其生理可接受的鹽用於由血管生成維持或傳播的病理過程的用途。
8．權利要求1所述的式Ⅰ化合物和/或其生理可接受的鹽在製備治療血栓形成、心肌梗塞、冠心病、動脈硬化、腫瘤、骨質疏鬆、炎症和感染的藥物方面的用途。
9．權利要求1所述的式Ⅰ化合物和/或其生理可接受的鹽治療疾病的用途。
全文摘要
本發明涉及式(Ⅰ)的化合物及其鹽和溶劑化物,其中X、Y、Z、R
文檔編號A61K31/165GK1309633SQ99808610
公開日2001年8月22日 申請日期1999年7月6日 優先權日1998年7月15日
發明者G·赫爾澤曼, S·古德曼, H·克斯勒, C·吉布森, J·S·施米特 申請人:默克專利股份公司