近紅外螢光造影劑和螢光成像的製作方法

2023-06-23 22:43:41 2

專利名稱：近紅外螢光造影劑和螢光成像的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種近紅外螢光造影劑以及使用所述造影劑的螢光成像。
背景技術：
在治療疾病方面，在疾病的早期階段檢測由疾病引起的活體中的形態與功能性變化至關重要。尤其是在治療癌症時，腫瘤的位置與大小是有效治療方案的重要的決定性因素。用於這一目的的已知方法包括通過穿刺進行活檢及類似方法，以及成像診斷如X射線成像、MRI、超聲成像及類似方法。活檢對確診是有效的，但同時它給受試者施加很大的負擔，並且它不適用於追蹤損傷的時間過程變化。X射線成像和MRI不可避免地將受試者暴露於輻射和磁波中。另外，如上面提到的常規成像診斷需要複雜的操作和長的時間用於測定和診斷。用於這一目的的大型設備也使在操作中運用這些方法變得困難。
成像診斷的一種是螢光成像(Lipspn R.L.等，J.Natl.CancerInst.，26，1-11(1961))。這一方法使用當暴露於具有特定波長的激發光時發射螢光的物質作為造影劑。因而，體被暴露於來自體外的激發光，由體內螢光造影劑發出的螢光可被檢測到。
這樣的螢光造影劑可以是，例如，在腫瘤中累積的卟啉化合物，它被用於光動力學治療(PDT)，如血卟啉。其它例子包括光敏鈉和benzoporphyrin(見Lipspn R.L.等，supra，Meng T.S.等，SPIE，1641，90-98(1992)，WO 84/04665等)。這些化合物最初用於PDF並具有光毒性，因為這是PDF所需要的。因此，這些並不是理想的診斷試劑。
同時，使用已知的螢光染料如螢光黃、fluorescamin和riboflabin的視網膜循環微血管造影術已為人所知(美國專利4945239)。這些螢光染料在400-600nm的可見光區發射螢光。在這一區域，穿透活組織的光傳輸很慢，因此體內深層部位損傷的檢測幾乎是不可能的。
另外，包括吲哚花青綠(本文以下略為ICG)在內的花青化合物作為螢光造影劑的用途已有文件記載(Haglund M.M.等，Neurosurgery，35，930(1994)，Li，X.等，SPIE，2389，789-797(1995))，吲哚花青綠用於測定肝功能和心輸出量。花青化合物在近紅外區(700-1300nm)顯示吸收。
近紅外光顯示高的穿透活組織的傳輸，並且能夠穿透大小約10cm的頭骨。因此，它在臨床醫學上日益引起人們的注意。例如，使用介質光傳輸的光CT技術已作為新技術在臨床領域引起人們的注意。這是因為近紅外光能夠穿透活體，並能被用於監控活體中的氧濃度和循環。
花青化合物在近紅外區發射螢光。這一區域的螢光能穿透活組織而提供作為螢光造影劑的潛力。近年來已經開發了許多花青化合物，並被嘗試用作螢光造影劑(WO96/17628、WP97/13490等)。然而，具有足夠水溶性且對活體安全，並具有區分正常組織和疾病組織能力(對成像靶位的選擇性)的試劑還不存在。

發明內容
因而本發明的目的之一是提供一種螢光造影劑。本發明的試劑是低毒性的，並具有優越的水溶性。另外，它發射能夠穿透活組織的近紅外區的螢光，形成腫瘤和/或血管的特定影像。
本發明的另一目的是提供一種使用所述近紅外螢光造影劑的螢光成像方法。
本發明基於將三個或更多個磺酸基引入到花青染料化合物中導致產生具有高水溶性的螢光造影劑的發現。還發現當使用該造影劑時可建立一種螢光成像方法。
因而，本發明提供以下(1)一種近紅外螢光造影劑，其包含分子中具有三個或更多個磺酸基的化合物，它由分子式[I]表示 其中R1和R2相同或不同，各自是取代或未取代的烷基；Z1和Z2各自是形成取代或未取代的稠苯環或稠萘環所需的非金屬原子；r是0、1或2；L1-L7相同或不同，各自是取代或未取代的次甲基，條件是當r是2時，同時出現的L6和L7相同或不同；以及X和Y相同或不同，各自是下列分子式中的一個基團-O-、-S-、 或 其中R3和R4相同或不同，各自是取代或未取代的烷基，或其藥學可接受的鹽。(2)上述(1)中的近紅外螢光造影劑，分子中沒有羧酸基團。(3)上述(1)或(2)中的近紅外造影劑，其中，在分子式[I]中，r是1。(4)上述(1)到(3)中任一項中的近紅外螢光造影劑，其中分子中具有4個或更多個磺酸基。(5)上述(1)到(4)中任一項中的近紅外螢光造影劑，其中分子中具有10個或低於10個磺酸基。(6)上述(1)到(4)中的任一項中的近紅外螢光造影劑，其中分子中具有8個或低於8個磺酸基。(7)上述(1)到(6)中的任一項中的近紅外螢光造影劑，其中藥學可接受的鹽是鈉鹽。(8)上述(1)到(7)中的任一項中的近紅外螢光造影劑，用於腫瘤成像和/或血管造影術。(9)分子式[II]的化合物的鈉鹽，分子中具有三個或更多個磺酸基 其中，R1、R2、L1-L7、X和Y如上定義，且R5到R16相同或不同，各自是氫原子、磺酸基、羧基、羥基、烷基(磺烷基)氨基、二(磺烷基)氨基、磺烷氧基、(磺烷基)磺醯基或(磺烷基)氨基磺醯基，不包括以下分子式的基團 (10)上述(9)中的鈉鹽，其中，在分子式[II]中，R1和R2各自是具有1到5個碳原子的被磺酸基取代的低級烷基，且X和Y相同或不同，各自是分子式如下的基團 其中R17和R18是未取代的具有1到5個碳原子的低級烷基。(11)上述(10)中的鈉鹽，具有如下分子式 (12)如分子式[III-1]的分子中具有三個或更多個磺酸基的化合物的鈉鹽 其中L1-L7如上定義，R19和R20是具有1到5個碳原子的被磺酸基取代的低級烷基，R21-R28相同或不同，各自是氫原子、磺酸基、羧基、羥基、烷基(磺烷基)氨基、二(磺烷基)氨基、磺烷氧基、(磺烷基)磺醯基或(磺烷基)氨基磺醯基，且X』和Y』相同或不同，各自是以下分子式中的一個基團 其中R17和R18如上定義，不包括以下分子式 (13)上述(12)中的鈉鹽，其中，在分子式[III-1]中，L4是被具有1到4個碳原子的烷基取代的次甲基。(14)上述(12)中的鈉鹽，其是分子中具有三個或更多個磺酸基的如分子式[III-2]的化合物的鈉鹽 其中R19-R28、X』和Y』如上定義，Z3是形成5-或6-元環所需的非金屬原子基團，且A是氫原子或一價基團。(15)上述(14)中的鈉鹽，具有如下分子式 (16)上述(12)中的鈉鹽，具有如下分子式 (17)上述(9)、(10)、(12)、(13)和(14)中的任一項中的鈉鹽，分子中包括4個或更多個磺酸基。(18)上述(9)、(10)、(12)、(13)、(14)和(17)中的任一項中的鈉鹽，分子中包括10個或低於10個磺酸基。(19)上述(9)、(10)、(12)、(13)、(14)和(17)中的任一項中的鈉鹽，分子中包括8個或低於8個磺酸基。(20)一種包括上述(9)到(19)中的任一項中的鈉鹽的近紅外造影劑。(21)上述(20)中的近紅外造影劑，用於腫瘤成像和/或血管造影術。(22)一種螢光成像方法，包括將上述(1)中的近紅外螢光造影劑引入活體中，將體暴露於激發光，並檢測來自造影劑的近紅外螢光。(23)上述(9)中的鈉鹽，至少是選自下列分子式的化合物的一員 (24)上述(12)中的鈉鹽，至少是選自下列分子式的化合物的一員 (25)上述(1)中的近紅外螢光造影劑，包括至少一種選自下列分子式的化合物的化合物 (26)上述(14)中的鈉鹽，其中一價基團A是取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的芳烷基、低級烷氧基，任選地是取代的氨基、烷基羰氧基(alkylcarbonyloxy)、取代或未取代的烷硫基、取代或未取代的芳硫基、氰基、硝基或滷素原子。


圖1到4是給予化合物24小時後的螢光成像照片，其中給予的是AICG(5mg/Kg)，BNK-1967(5mg/Kg)，C化合物(29)(0.5mg/Kg)和D化合物(6)的K鹽(5mg/Kg)。
圖5是給予化合物24小時後的螢光成像照片，其中給予的是E化合物(31)(5mg/Kg)。
圖6到9是給予化合物(5mg/Kg)20秒和5分鐘後的螢光成像照片，其中給予的是AICG(20秒後)，BICG(5分鐘後)，C化合物(29)(20秒後)和D化合物(29)(5分鐘後)。
圖10是給予化合物0.5、1、4和24小時後在血漿中的化合物濃度的圖，其中縱軸是在各時間點血漿中的化合物濃度(μg/ml)。
圖11是化合物(29)的紅外吸收譜圖。
圖12是化合物(31)的紅外吸收譜圖。
圖13是化合物(6)的紅外吸收譜圖。
圖14是化合物(54)的紅外吸收譜圖。
具體實施例方式
本說明書所用術語定義如下。
本發明中的近紅外螢光造影劑指發射近紅外區螢光的造影劑。
在本發明中，當磺酸基被用於形成內鹽時，所述磺酸基可以指磺酸根(-SO3-)。在本發明中，優選的X和Y是以下分子式 其中R3和R4相同或不同，各自是取代或未取代的烷基。
在R1、R2、R3和R4中的「取代或未取代的烷基」的烷基優選為直鏈或支鏈的具有1到5個碳原子的低級烷基，如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、異戊基、新戊基、叔戊基、2-甲基丙基、1，1-二甲基丙基等。取代基可以是，例如磺酸基、羧基、羥基等。取代的烷基的例子包括羥甲基、1-羥乙基、2-羥乙基、2-羥丙基、3-羥丙基、4-羥丁基、羧甲基、羧乙基、羧丁基、磺甲基、2-磺乙基、3-磺丙基、4-磺丁基等。優選的R1和R2是被磺酸基取代的具有1到5個碳原子的低級烷基(如2-磺乙基、3-磺丙基、4-磺丁基等)，R3和R4是未取代的具有1到5個碳原子的低級烷基(如甲基、乙基等)。
R17和R18的具有1到5個碳原子的未取代低級烷基以以上提到的那些關於R1、R2、R3和R4的「取代的或未取代的烷基」的烷基作為例子。
R19和R20的被磺酸基取代的具有1到5個碳原子的低級烷基的烷基以以上提到的那些關於R1、R2、R3和R4的「取代或未取代的烷基」的烷基作為例子，具有1到5個碳原子的取代的低級烷基的例子包括2-磺乙基、3-磺丙基和4-磺丁基。
R21-R28的烷基(磺烷基)氨基、二(磺烷基)氨基、磺烷氧基、(磺烷基)磺醯基和(磺烷基)氨基磺醯基的烷基部分優選是具有1到5個碳原子的直鏈或支鏈低級烷基，以以上提到的那些關於R1、R2、R3和R4的「取代或未取代的烷基」的烷基為例子。
在本發明中，「形成取代或未取代的稠苯環或稠萘環所需的非金屬原子」指形成稠苯環或稠萘環所需的連接基團，它是分子式如下的基團 當稠苯環或稠萘環有取代基時，所述的連接基團可以具有取代基。
其特定的例子包括碳原子、氮原子、氧原子、氫原子、硫原子、滷素原子(如氟原子、氯原子、溴原子和碘原子)等。
由非金屬原子在Z1和Z2形成的稠苯環和稠萘環的取代基以磺酸基、羧基、羥基、滷素原子(如氟原子、氯原子、溴原子和碘原子)、氰基、取代的氨基(如二甲氨基、二乙氨基、乙基4-磺丁氨基、二-(3-磺丙基)氨基等)，以及以上定義的直接或通過二價連接基團鍵合於環上的取代或未取代的烷基為例子。優選的二價連接基團可以是，例如-O-、-NHCO-、-NHSO2-、-NHCOO-、-NHCONH-、-COO-、-CO-、-SO2-等。直接或通過二價連接基團鍵合於環的取代或未取代的烷基的烷基優選地以甲基、乙基、丙基和丁基為例子，取代基優選地以磺酸基、羧基和羥基為例子。
L1-L7的次甲基的取代基以取代或未取代的烷基(如上定義)、滷素原子(如上定義)、取代或未取代的芳基、低級烷氧基等為例子。「取代或未取代的芳基」的芳基以苯基、萘基等為例子，優選為苯基。取代基的例子包括滷素原子(如上定義，優選為氯原子)等。取代的芳基包括，如4-氯苯基等。低級烷基優選為具有1到6個碳原子的直鏈或支鏈烷氧基，具體是甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基等，優選為甲氧基和乙氧基。另外，L1-L7的次甲基的取代基可以相互連接形成具有三個次甲基的環，該環可以進一步與具有另外的次甲基的環形成稠環。通過L1-L7的次甲基的取代基連接而形成的具有三個次甲基的環以4，4-二甲基環己烯等為例子。
由L1-L7基團組成的具有環的共軛次甲基鏈優選為分子式(a)的基團 其中Z3表示形成5-或6-元環所需的非金屬原子，A是氫原子或一價基團。
「形成5-或6-元環所需的非金屬原子」以以上提到的那些原子為例子。
在分子式(a)和後面將提到的分子式[III-2]中，Z3的5-或6-元環以環戊烯環、環己烯環、4，4-二甲基環己烯環等為例子，特別優選的是環戊烯環。
A代表的一價基團包括，如取代或未取代的烷基(如上定義)、取代或未取代的芳基(如上定義)、取代或未取代的芳烷基、低級烷氧基(如上定義)、被任選地取代的取代的氨基、烷基羰氧基(如乙醯氧基)、取代或未取代的烷硫基、取代或未取代的芳硫基、氰基、硝基、滷素原子(如上定義)等。如本文所用的，「取代或未取代的芳烷基」的芳烷基以苯甲基、2-苯乙基、1-苯乙基、3-苯丙基等為例子，取代基可以是磺酸基、羧基、羥基、取代或未取代的烷基(如上定義)、烷氧基(如上定義)、滷素原子(如上定義)等。「取代的氨基」的被任選地取代的取代的氨基包括，例如，烷氨基(如甲氨基、乙氨基等)、二烷氨基(二甲氨基、二乙氨基等)、二苯基氨基、甲基苯基氨基、環狀氨基(如嗎啉代、imidazolidino、ethoxycarbonylpiperadino等)等。關於「被任選地取代的取代的氨基」的任選的取代的取代基包括磺酸基、羧基等。「取代或未取代的烷硫基」的烷硫基可以是，例如，甲硫基、乙硫基等。取代基的例子包括磺酸基、羧基等。「取代或未取代的芳硫基」的芳硫基以苯硫基、萘硫基等為例子。取代基的例子包括磺酸基、羧基等。
A代表的一價基團優選為氟原子、氯原子、二烷基氨基(優選具有6個或低於6個碳原子，且任選地成環)或嗎啉代。該基團特別優選地具有磺酸基。
在分子式[I]中，r優選為1。
藥學可接受的鹽可以是與分子式[I]的化合物形成的任何無毒鹽。其例子包括鹼金屬鹽如鈉鹽、鉀鹽，鹼土金屬鹽如鎂鹽、鈣鹽等，有機銨鹽如銨鹽、三乙基銨鹽、三丁基銨鹽、吡啶鹽等，胺基酸鹽如賴氨酸鹽、精氨酸鹽等。特別優選的是在活體內毒性更低的鈉鹽。
用於活體的螢光造影劑特別地應該是水溶性的。在本發明中，因在上述化合物中引入3個或更多個磺酸基而使近紅外螢光造影劑具有顯著提高的水溶性。為了有更好的水溶性，磺酸基的數目優選為4個或更多。為合成簡單起見，磺酸基的數目不超過10個，優選不超過8個。水溶性的提高可以通過測定各化合物的分配係數來確定，例如，可以在丁醇/水的兩相體系中測定。更具體地說，3個或更多個磺酸基的引入導致正丁醇/水的分配係數log Po/w不超過一1.00。
磺酸基特別優選是引入到分子式[I]的R1、R2、Z1和/或Z2的位置和分子式[II]的R1、R2、R5、R7、R11和/或R13的位置上。
另外，這些磺酸基優選通過二價基團如亞烷基引入到上述分子式(a)的共軛次甲基鏈在位置A的L4上。
在分子中具有3個或更多個磺酸基的分子式[II]的化合物的鈉鹽中，優選的是以下化合物的鈉鹽，其中R1和R2是具有1到5個碳原子的被磺酸基取代的低級烷基，X和Y相同或不同，各自是如下分子式的基團 其中R17和R18相同或不同，各自是具有1到5個碳原子的未取代的烷基，所述的鹽分子中具有3個或更多個磺酸基，特別優選的是分子式如下的化合物 在分子中具有3個或更多個磺酸基的分子式[I]的化合物及其藥學可接受的鹽中，優選的是分子式[III-1]的化合物的鈉鹽 其中L1-L7如上定義，R19和R20是被磺酸基取代的具有1到5個碳原子的低級烷基，R21到R28相同或不同，各自是氫原子、磺酸基、羧基、羥基、烷基(磺烷基)氨基、二(磺烷基)氨基、磺烷氧基、(磺烷基)磺醯基或(磺烷基)氨基磺醯基，且X』和Y』相同或不同，各自是如下分子式的基團 其中R17和R18如上定義，所述的分子中具有3個或更多個磺酸基的鹽，特別優選的是如下分子式的化合物 在分子中具有3個或更多個磺酸基的分子式[III-1]的化合物的鈉鹽中，優選的是分子式[III-2]的化合物的鈉鹽 其中R19-R28、X』和Y』如上定義，Z3是形成5-或6-元環所需的非金屬原子，A是氫原子或一價基團，所述的分子中具有3個或更多個磺酸基的鹽，特別優選的是如下分子式的化合物
包含於本發明的近紅外螢光造影劑中的化合物可以是任何具有分子式[I]或[II]，分子中還具有3個或更多個，優選為4個或更多個磺酸基的化合物。這些化合物可根據已知的花青染料化合物的生產方法來合成，這些方法在《花青染料和相關化合物》(The Cyanine Dyesand Related Compounds)，F.M.Hamer，John Wiley and Sons，紐約，1964，《血細胞計數》(Cytometry)，10，3-10(1989)，《血細胞計數》，11，418-430(1990)，《血細胞計數》，12，723-730(1990)，《生物共軛化學》(Bioconjugate Chem.)，4，105-111(1993)，《生物分析化學》(Anal.Biochem.)，217，197-204(1994)，《四面體》(Tetrahedron)，45，4845-4866(1989)，EP-A-0591820A1，EP-A-0580145A1等中被公開。或者，它們可以通過已知方法從商品化的花青染料半合成。具體地說，它們可以通過將dianyl化合物與雜環季鹽反應而合成。
本發明的分子式[I]的化合物可通過以下方法合成。(i)當r＝0時(a)L1＝L5，X＝Y，R1＝R2，Z1＝Z2分子式[IV-1]的雜環季鹽(2摩爾) 其中L1、X、Z1和R1如上定義，與分子式[V-1]的dianyl化合物(1摩爾) 其中L2、L3和L4如上定義，在鹼和溶劑的存在下反應，生成分子式[VI-1]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、R1、Z1和X如上定義，該化合物[VI-1](1摩爾)和需要摩爾量的分子式[VII]的化合物T1-Na[VII]其中T1是有機酸殘基，反應生成上述分子式[VI-1]的化合物的鈉鹽。(b)L1≠L5或X≠Y或R1≠R2或Z1≠Z2上述分子式[IV-1]的雜環季鹽化合物(1摩爾)和上述分子式[V-1]的dianyl化合物(1摩爾)在鹼和溶劑的存在下反應生成分子式[VIII-1]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、R1、Z1和X如上定義，該化合物[VIII-1](1摩爾)和分子式[XI-1]的雜環季鹽化合物(1摩爾) 其中L5、Y、Z2和R2如上定義，反應生成分子式[X-1]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、L5、R1、R2、Z1、Z2、X和Y如上定義，該分子式[X-1]的化合物(1摩爾)和需要摩爾量的上述分子式[VII]的化合物反應生成上述分子式[X-1]的化合物的鈉鹽。(ii)當r＝1時(a)L1＝L7，X＝Y，R1＝R2且Z1＝Z2分子式[IV-1]的雜環季鹽化合物(2摩爾) 其中L1、X、Z1和R1如上定義，和分子式[V-2]的dianyl化合物(1摩爾) 其中L2、L3、L4、L5和L6如上定義，在鹼和溶劑的存在下反應生成分子式[VI-2]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、L5、L6、R1、Z1和X如上定義，該分子式[VI-2]的化合物(1摩爾)和需要摩爾量的分子式[VII]的化合物T1-Na [VII]其中T1如上定義，反應生成上述分子式[VI-2]的化合物的鈉鹽。(b)L1≠L7或X≠Y或R1≠R2或Z1≠Z2上述分子式[IV-1]的雜環季鹽化合物(1摩爾)和上述分子式[V-2]的dianyl化合物(1摩爾)在鹼和溶劑的存在下反應生成分子式[VIII-2]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、L5、L6、R1、Z1和X如上定義，該化合物[VIII-2](1摩爾)和分子式[IX-2]的雜環季鹽化合物(1摩爾) 其中L7、Y、Z2和R2如上定義，反應生成分子式[X-2]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、R1、R2、Z1、Z2、X和Y如上定義，該分子式[X-2]的化合物(1摩爾)和需要摩爾量的上述分子式[VII]的化合物反應，生成上述分子式[X-2]的化合物的鈉鹽。(iii)當r＝2時當r是2時，L6和L7在分子式[I]中重疊。為了避免這一點，重疊的L6和L7被稱為L8和L9以清楚表達。(a)L1＝L9，X＝Y，R1＝R2且Z1＝Z2分子式[IV-1]的雜環季鹽化合物(2摩爾) 其中L1、X、Z1和R1如上定義，和分子式[V-3]的dianyl化合物(1摩爾) 其中L2、L3、L4、L5、L6和L7如上定義，L8是被任選地取代的次甲基，在鹼和溶劑的存在下反應，生成分子式[VI-3]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、R1、Z1和X如上定義，該化合物[VI-3](1摩爾)和需要摩爾量的分子式[VII]的化合物T1-Na[VII]其中T1如上定義，反應生成上述分子式[VI-3]的化合物的鈉鹽。(b)L1≠L9或X≠Y或R1≠R2或Z1≠Z2上述分子式[IV-1]的雜環季鹽化合物(1摩爾)和上述分子式[V-3]的dianyl化合物(1摩爾)在鹼和溶劑的存在下反應，生成分子式[VIII-3]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、R1、Z1和X如上定義，該化合物[VIII-3](1摩爾)和分子式[IX-3]的雜環季鹽化合物(1摩爾) 其中Y、Z2和R2如上定義，L9是被任選地取代的次甲基，反應生成分子式[X-3]的化合物 其中L1、L2、L3、L4、L5、L6、L7、L8、L9、R1、R2、Z1、Z2、X和Y如上定義。該分子式[X-3]的化合物(1摩爾)和需要摩爾量的上述分子式[VII]的化合物反應，生成上述分子式[X-3]的化合物的鈉鹽。
需要摩爾量的分子式[VII]的化合物是不少於與分子式[I]的化合物的目標鈉鹽的一個分子中含有的鈉的量相等的量。
L8和L9的取代的次甲基的取代基以上述L1到L7的次甲基的取代基為例子。
在上述合成方法(i)、(ii)和(iii)中，化合物[IV-1]和[V-1]的反應，化合物[VIII-1]和[XI-1]的反應，化合物[IV-1]和[V-2]的反應，化合物[VIII-2]和[IX-2]的反應，化合物[IV-1]和[V-3]的反應，以及化合物[VIII-3]和[IX-3]的反應在-20℃到-80℃，優選在-10℃到-40℃的溫度間，優選在醯化試劑如乙酸酐的存在下進行。
在上述合成方法(i)、(ii)和(iii)中，化合物[IV-1]和[VII]的反應，化合物[X-1]和[VII]的反應，化合物[VI-2]和[VII]的反應，化合物[X-2]和[VII]的反應，化合物[VI-3]和[VII]的反應，以及化合物[X-3]和[VII]的反應在0℃到40℃的溫度間，優選在溶劑如乙醇和水的存在下進行。
在上述合成方法(i)、(ii)和(iii)中，所用的鹼可以是，例如，三乙胺、三丁胺、吡啶、二氮雜雙環十一烯(diazabicycloundecene)、甲醇鈉等；所用溶劑可以是，例如，醯胺化合物如N，N-二甲基乙醯胺、N-甲基吡咯烷酮和N，N-二乙基甲醯胺，或醇類如甲醇；有機酸殘基可以是，例如，CH3COO等。
關於前述分子式[I]的化合物的各種藥學可接受的鹽的生產，分子式[I]的化合物的銨鹽和鉀鹽可通過，例如用分子式[VII]的化合物，其中鈉原子變成銨基團或鉀原子，取代上述合成方法(i)、(ii)和(iii)中使用的分子式[VII]的化合物而得到；前述分子式[I]的化合物的不同陽離子鹽可以通過按需要使用離子交換樹脂將所述銨鹽和鉀鹽轉換成不同的陽離子鹽而得到。
包括分子式[II]的化合物在內的用於本發明的上述分子式[I]的化合物特定地以以下分子為例子，本發明並不限於它們。 包含於本發明的近紅外螢光造影劑中的上述化合物在700-1300nm，特別是約700-900nm的近紅外區具有吸收和螢光，摩爾吸光係數不小於100000。
只要本發明的近紅外螢光造影劑含有分子式[I]或[II]的化合物和/或其藥學可接受的鹽，且分子中具有3個或更多個，優選為4個或更多個磺酸基，它不受到特別的限制。該化合物或其鹽可以獨自或以組合形式包含於所述造影劑中。
具體地說，所述造影劑包括所述化合物或在溶劑，如注射用蒸餾水、生理鹽水、林格氏溶液等中懸浮或溶解的所述化合物。當需要時，可以加入藥學可接受的添加劑如載體、賦形劑等。這些添加劑含有如藥理學可接受的電解質、緩衝劑、洗滌劑以及調節滲透壓並提高穩定性和溶解性的物質(例如環糊精、脂質體等)的物質。可以使用在相關領域中常用的各種添加劑。當本發明的近紅外螢光造影劑為藥用而設計時，它優選通過無菌方法製備。
所述造影劑可以通過注射、噴霧或塗敷、血管內(靜脈內、動脈內)、口服、腹膜內、經皮、皮下、囊內或氣管內給予。優選地，該劑以水溶液劑、乳劑或混懸劑給予到血管中。
只要劑量使要最終診斷的部位能夠被檢測，本發明的近紅外螢光造影劑的劑量沒有特別的限制。它取決於所使用的發射近紅外螢光的化合物的種類、給藥對象的年齡、體重和靶器官等而被適當地調節。通常，劑量在0.1-100mg/kg體重的範圍內，優選為0.5-20mg/kg體重，以所述化合物的量計。
除了人以外，本發明的造影劑可以被適當地用於各種動物。給藥形式、途徑和劑量依賴於目標動物的體重和症狀而被適當地確定。
另外，在本發明中，上述分子中具有3個或更多個，優選為4個或更多個磺酸基的分子式[I]，特別優選是分子式[II]的化合物，傾向於顯著地積聚於腫瘤組織。利用這一特性，使用本發明的螢光造影劑，腫瘤組織能夠被特定地成像。另外，一系列所述化合物能夠長時間地存在於血管中，它們預期能被很好地用作血管造影術的造影劑。
本發明的螢光成像方法的特徵是本發明的近紅外螢光造影劑的使用。該方法用已知方法實施，各個參數，如激發波長和所檢測的螢光波長，是依賴於要給予的近紅外螢光造影劑的種類和給藥目標而被適當地確定以實現最佳的影像和評價。從給予測定目標本發明的近紅外螢光造影劑到開始用本發明的螢光成像方法測定的時間花費依賴於所使用的近紅外螢光造影劑的種類和給藥目標而變化。例如，當該劑含有腫瘤成像用的分子式[1]的化合物時，間隔時間是給藥後約4-120小時。在分子式[II]的化合物情況中，間隔時間是給藥後約24-120小時。當間隔時間太短時，螢光太強以至於靶部位與其它部位不能被清楚地區分。當間隔時間太長時，所述造影劑可能從體內被清除。當需要進行血管成像時，分子式[I]或[II]的化合物在給藥後立即或在其後約30分鐘後被檢測。
該方法通常包括以下步驟。
即，給予檢測目標本發明的近紅外螢光造影劑並將檢測目標暴露於來自激發光源的激發光。然後，來自近紅外造影劑的由所述激發光導致的螢光用螢光檢測器檢測。
激發波長依賴於所使用的近紅外螢光造影劑而變化。只要所述化合物在近紅外區有效地發射螢光，它沒有限制。優選地，使用具有較好生物傳輸能力的近紅外光。
所檢測的近紅外螢光的波長也依賴於所使用的造影劑而變化。概括而言，使用具有600-1000nm，優選為700-850nm波長的激發光，檢測波長為700-1000nm，優選為750-900nm區的近紅外螢光。在這種情況中，激發光源可以是常規的激發光源，如各種雷射(如離子雷射器、染料雷射器、半導體雷射器)、滷素光源、氙光源等。當需要時，可使用各種濾光片來得到最佳激發波長。同樣，可以使用各種濾光片來測定螢光，以僅得到來自所述近紅外螢光造影劑的螢光。
檢測到的螢光作為螢光信息進行數據處理並被用於產生能被記錄的螢光影像。螢光影像通過照射包括靶組織在內的較大區域，用CCD相機檢測螢光並對得到的螢光信息進行影像處理而產生。或者，可以使用光學CT設備，可以使用內窺鏡，或者可以使用眼底照相機。
本發明的螢光成像方法使人們能夠目測全身疾病、腫瘤、血管等而不損傷活體。
本發明通過實施例和試驗實施例的方式進行更詳細的解釋，但本發明不限於這些實施例。在以下實施例和實驗例中的化合物序號與結構式表示的化合物序號一致。其中在化合物序號後有標明「鉀鹽」、「鈣鹽」或「吡啶鹽」的符號的化合物(如化合物(29)K鹽)是指除了抗衡離子是鉀鹽、鈣鹽或吡啶鹽而不是鈉鹽之外，與該化合物序號表示的化合物(鈉鹽)相同的化合物。例如，「化合物(31)K鹽」是指除了抗衡離子是鉀而不是鈉之外，與化合物(31)相同的化合物；「化合物(31)Ca鹽」是指除了抗衡離子是鈣而不是鈉之外，與化合物(31)相同的化合物；「化合物(31)吡啶鹽」是指除了抗衡離子是吡啶而不是鈉之外，與化合物(31)相同的化合物。
得到作為本發明的近紅外螢光造影劑的活性成分的化合物的合成方法在實施例中得到解釋。
以下合成方法主要由表1中列出的雜環季鹽化合物和表2和3中列出的dianyl化合物的反應組成。表1 雜環季鹽化合物 表2 Dianyl化合物-1 表3 Dianyl化合物-2 實施例在以下實施例中，為方便起見，化合物用表1到3中的符號表示(如A1、Q1等)實施例1化合物(29)的合成向雜環季鹽化合物Q1(5g)中加入甲醇(100ml)、N，N-二甲基甲醯胺(25ml)、三乙胺(5.6ml)、dianyl化合物A1(1.83g)和乙酸酐(3ml)，混合物在室溫下攪拌4小時。加入三乙胺(2.2ml)和乙酸酐(2ml)，混合物在室溫下攪拌3小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(2g)在甲醇(15ml)中的溶液，接著在室溫下攪拌1小時。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加入水(20ml)溶解得到的粗晶體(3.5g)。加入乙酸鈉(1g)，然後加入甲醇(30ml)，接著攪拌1小時。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到3g化合物(29)。得到的化合物(29)在焰色試驗中顯示黃色。最大吸收波長(H2O)780nm摩爾吸光係數(H2O)243000最大螢光發射波長(H2O)802nm使用傅利葉變換紅外光譜儀(VALOR-III，JASCO製造)，用溴化鉀壓片法測定得到的化合物(29)的紅外吸收光譜。檢測到以下峰。光譜如圖11所示。
IR(νmax(KBr))1414，1086，1037，995，889cm-1實施例2化合物(34)的合成向雜環季鹽化合物Q2(2.13g)中加入甲醇(20ml)，混合物冷至10℃。向其中加入dianyl化合物A2(0.75g)、三乙胺(4ml)和乙酸酐(2ml)，混合物攪拌20分鐘。加入乙酸酐(2ml)，混合物在10℃下攪拌4小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(2g)在少量甲醇中的溶液。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加水(7ml)溶解得到的粗晶體。加入甲醇(7ml)沉澱晶體。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到1.2g化合物(34)。得到的化合物(34)在焰色試驗中顯示黃色。最大吸收波長(H2O)794nm摩爾吸光係數(H2O)176000最大螢光發射波長(H2O)812nn實施例3化合物(6)的合成向雜環季鹽化合物Q3(9.5g)中加入甲醇(50ml)、三乙胺(7ml)、dianyl化合物A3(3.1g)和乙酸酐(3.9ml)，混合物在室溫下攪拌7小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(5g)在少量甲醇中的溶液。混合物放置過夜。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加水(30ml)溶解晶體。加入乙酸鈉(2g)，然後加入甲醇(30ml)。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到化合物(6)。實施例4化合物(45)的合成向雜環季鹽化合物Q3(4.8g)中加入甲醇(50ml)、三乙胺(4ml)、dianyl化合物A4(1.7g)和乙酸酐(2ml)，混合物在室溫下攪拌3小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(4g)在少量甲醇中的溶液。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加水(10ml)溶解晶體。然後加入甲醇(10ml)。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並風乾，得到1.6g化合物，除次甲基鏈上的取代基是-Cl而不是-SCH2CH2SO3Na外，該化合物與化合物(45)相同。
重複以上步驟，得到4.2g所述化合物。向其中加入水(30ml)、三乙胺(1.2ml)和2-巰基乙烷磺酸鈉(0.8g)，混合物在室溫下攪拌4小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(2g)在少量水中的溶液。過濾收集生成的晶體，用甲醇(20ml)洗滌並風乾，得到2.3g化合物(45)。得到的化合物(45)在焰色試驗中顯示黃色。最大吸收波長(H2O)815nm摩爾吸光係數(H2O)196000最大螢光發射波長(H2O)827nm實施例5化合物(2)的合成向雜環季鹽化合物Q3(4.7g)中加入甲醇(25ml)、三乙胺(2.8ml)、dianyl化合物A5(1.5g)和乙酸酐(2.4ml)，混合物在室溫下攪拌1小時。向其中另外加入三乙胺(3.5ml)和乙酸酐(1.5ml)，混合物在室溫下攪拌3.5小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(3g)在少量甲醇中的溶液。混合物在室溫下攪拌1小時。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加入水(15ml)溶解晶體。然後加入甲醇(15ml)。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到化合物(2)。實施例6化合物(43)的合成向雜環季鹽化合物Q3(3.75g)中加入甲醇(25ml)、三乙胺(3.5ml)、dianyl化合物A6(1.95g)和乙酸酐(2.4ml)，混合物在室溫下攪拌1小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(3.9g)在少量甲醇中的溶液。混合物在室溫下攪拌1小時。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加入水(10ml)溶解晶體。加入乙酸鈉(2g)，然後加入甲醇(10ml)。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到1.8g化合物(43)。得到的化合物(43)在焰色試驗中顯示黃色。
最大吸收波長(H2O)773nm
摩爾吸光係數(H2O)204000最大螢光發射波長(H2O)789nm實施例7化合物(4)的合成向雜環季鹽化合物Q3(3.5g)中加入甲醇(20ml)、三乙胺(3.5ml)、dianyl化合物A7(1.2g)和乙酸酐(1.9ml)，混合物在室溫下攪拌10小時，然後放置過夜。混合物在加熱下在50℃攪拌5小時。加水(2ml)並濾除不溶物。向濾液中加入乙酸鈉(5g)在少量水中的溶液。混合物在室溫下攪拌30分鐘。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到化合物(4)。實施例8化合物(31)的合成向雜環季鹽化合物Q4(3.5g)中加入甲醇(35ml)、三乙胺(3.5ml)和乙酸酐(2ml)，攪拌下分批加入dianyl化合物A2(1.8g)，混合物在室溫下另外攪拌1小時。加入乙酸酐(2ml)，混合物在室溫下攪拌5小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(4g)在少量甲醇中的溶液。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加入水(10ml)溶解晶體。加入甲醇(10ml)，混合物在室溫下攪拌2小時。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到1.3g化合物(31)。得到的化合物(31)在焰色試驗中顯示黃色。最大吸收波長(H2O)755nm摩爾吸光係數(H2O)228000最大螢光發射波長(H2O)774nm使用傅利葉變換紅外光譜儀(VALOR-III，JASCO製造)，用溴化鉀壓片法測定得到的化合物(31)的紅外吸收光譜。檢測到以下峰。光譜如圖12所示。
IR(νmax(KBr))1518，1183，1149，1111，995cm-1實施例9化合物(41)的合成向雜環季鹽化合物Q1(12g)中加入甲醇(120ml)、三乙胺(13.6ml)、dianyl化合物A8(4.4g)和乙酸酐(2.4ml)，混合物攪拌30分鐘。加入乙酸酐(2.4ml)，混合物攪拌1.5小時，然後加入乙酸酐(2.4ml)，混合物在室溫下攪拌6小時。另外加入雜環季鹽化合物Q1(1g)、三乙胺(3ml)和乙酸酐(3ml)，混合物在室溫下攪拌2小時。混合物放置過夜。加入乙酸鈉(5g)，過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。加水(200ml)溶解得到的粗晶體。濾除不溶物並向濾液中加入乙酸鈉(10g)。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。向晶體中加入水(200ml)和三乙胺(10ml)，加入乙酸鈉(10g)在甲醇(100ml)中的溶液以生成晶體。重複該步驟兩次。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到9.7g化合物(41)。得到的化合物(41)在焰色試驗中顯示黃色。最大吸收波長(H2O)811nm摩爾吸光係數(H2O)230000最大螢光發射波長(H2O)822nm實施例10化合物(3)的合成根據實施例5，使用雜環季鹽化合物Q3和相應的dianyl化合物，得到化合物(3)。實施例11除了使用乙酸鉀(2g)而不是乙酸鈉(2g)以外，用與實施例1中化合物(29)的合成的相同方式合成與化合物(29)相同的化合物，除了其抗衡離子是鉀而不是鈉。在下文中，這一化合物稱為化合物(29)K鹽。獲得的化合物(29)K鹽在焰色試驗中顯示紫色。最大吸收波長(H2O)780nm摩爾吸光係數(H2O)254000最大螢光發射波長(H2O)800nm其它前面提到的化合物用與該實施例相同的方式處理，得到具有鉀抗衡離子而不是鈉的化合物。
這些具有鉀抗衡離子的化合物通過在相應化合物序號後附加「K鹽」來與上述化合物區分開。實施例12用與實施例11相同的方式，得到化合物(6)K鹽。得到的化合物(6)K鹽在焰色試驗中顯示紫色。最大吸收波長(H2O)788nm摩爾吸光係數(H2O)226000最大螢光發射波長(H2O)806nm實施例13用與實施例11相同的方式，得到化合物(2)K鹽。得到的化合物(2)K鹽在焰色試驗中顯示紫色。最大吸收波長(H2O)743nm摩爾吸光係數(H2O)266000最大螢光發射波長(H2O)762nm實施例14用與實施例11相同的方式，得到化合物(4)K鹽。得到的化合物(4)K鹽在焰色試驗中顯示紫色。最大吸收波長(H2O)753nm摩爾吸光係數(H2O)212000最大螢光發射波長(H2O)767nm實施例15用與實施例11相同的方式，得到化合物(3)K鹽。得到的化合物(3)K鹽在焰色試驗中顯示紫色。最大吸收波長(H2O)751nm摩爾吸光係數(H2O)241000最大螢光發射波長(H2O)767nm實施例16將化合物(6)K鹽(50mg)溶於少量水中，並通過離子交換樹脂將化合物(6)K鹽的鉀轉化成質子。向其中加入用乙酸鈉飽和的甲醇以沉澱晶體。重複該過程兩次。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到化合物(6)(32mg)。得到的化合物(6)在焰色試驗中顯示黃色。
使用傅利葉變換紅外光譜儀(VALOR-III，JASCO製造)，用溴化鉀壓片法測定得到的化合物(6)的紅外吸收光譜。檢測到以下峰。光譜如圖13所示。
IR(νmax(KBr))1395，1372，1188，1102，1020cm-1實施例17化合物(54)的合成向雜環季鹽化合物Q4(3.5g)中加入甲醇(20ml)、三乙胺(3.5ml)和乙酸酐(2ml)，攪拌下分批加入dianyl化合物A1(1.4g)，混合物另外攪拌20分鐘。加入乙酸酐(1ml)，混合物在室溫下攪拌1.5小時。濾除不溶物，向濾液中加入乙酸鈉(4g)在少量甲醇中的溶液。過濾收集生成的晶體並用少量甲醇洗滌。將晶體溶於少量水中。然後溶液用甲醇(10ml)稀釋，混合物在室溫下攪拌1小時。過濾收集生成的晶體，用少量甲醇洗滌並乾燥，得到1.5g化合物(54)。得到的化合物(54)在焰色試驗中顯示黃色。最大吸收波長(H2O)743nm摩爾吸光係數(H2O)244000最大螢光發射波長(H2O)766nm使用傅利葉變換紅外光譜儀(VALOR-III，JASCO製造)，用溴化鉀壓片法測定得到的化合物(54)的紅外吸收光譜。檢測到以下峰。光譜如圖14所示。
IR(νmax(KBr))1511，1421，1099，1004，926cm-1實驗例1測定了化合物(29)、化合物(43)、化合物(45)、化合物(31)、化合物(3)K鹽、化合物(11)[NK-3261，來自Nippon Kankoh-ShikisoKenkyusho CO.，LTD.]、化合物(6)K鹽、化合物(2)K鹽、化合物(4)K鹽、化合物(34)和化合物(54)的正丁醇/水分配係數(log Po/w)。
作為對照化合物，所用的是分子中只具有2個磺酸基的NK-1967(Nippon Kankoh-Shikiso Kenkyusho CO.，LTD.)和ICG(TokyoKasei Kogyo)。結果列於表4。表4 實驗例2螢光成像試驗(1)將小鼠結腸癌(結腸26癌)的腫瘤組織碎片皮下移植到BALB/c裸鼠(5周大，Clea Japan，Inc.)左肺。10天後當腫瘤長到直徑約8釐米時，此裸鼠用於試驗。
鈦藍寶石雷射被用作螢光激發光源。使用環形光導向設備(Sumita Optical Glass Co.)，試驗小鼠被均勻地暴露於雷射中，其中光照的分散作用在10％以內。光照功率輸出被調節到在小鼠皮膚表面附近約為40μW/cm2。在各化合物的最大激發波長下激發螢光，來自小鼠的螢光發射通過短波長截止濾光片(IR84，IR86，IR88，FujiPhoto Film CO.，LTD)用CCD相機(C4880，Hamamatsu Photonics K.K.)檢測並照相。選擇截止濾光片以適合於化合物的激發波長。暴露時間依賴於各化合物的螢光強度而調節。
所用的測試化合物是本發明的化合物(29)、化合物(31)和化合物(6)K鹽，以及作為對照化合物的分子中只具有2個磺酸基的NK-1967和ICG。將各測試化合物(0.5mg/ml)溶於蒸餾水中並經尾靜脈給予小鼠。化合物(31)、化合物(6)K鹽、NK-1967和ICG的劑量是5.0mg/Kg，化合物(29)的劑量是0.5mg/Kg。給予化合物24小時後，小鼠用乙醚麻醉，小鼠整個身體的螢光影像被拍攝下來。結果如圖1到5所示。
與具有2個磺酸基的對照化合物(具有苯並三羰花青結構的NK-1967和具有三羰花青結構的ICG)相比，具有苯並三羰花青結構和6個磺酸基的化合物(29)和兩者均具有三羰花青結構和4個磺酸基的化合物(6)K鹽和化合物(31)明顯產生清楚的腫瘤影像。特別地，化合物(29)即使在低劑量時也能清楚的描繪出腫瘤並顯著地有效。實驗例3螢光成像試驗(2)本試驗使用裸鼠。在用七氟醚連續吸入麻醉下，本發明的化合物(29)和對照化合物ICG以5.0mg/Kg的劑量從尾靜脈被注入。同時，開始間歇地拍攝螢光影像。為了拍攝螢光影像，進行暴露於激發雷射並通過濾光片提取螢光，其中暴露時間是1秒鐘。給予化合物20秒後，血管被適當地成像。拍攝螢光影像直到給藥5分鐘後。圖6到9顯示了小鼠給藥20秒和5分鐘後的整個身體的螢光影像。
ICG不能在5分鐘後選擇性地顯示血管，而化合物(29)能夠使血管成像的時間長於ICG。實驗例4在血管中的停留用與實驗例2中相同的方式，將腫瘤組織碎片移植到CDF1小鼠(雌性，5周大，Japan SLC，Inc.)，約2周後當腫瘤長到直徑約1釐米時，小鼠接受測試。
測試的化合物是具有苯並三羰花青結構和6個磺酸基的化合物(29)K鹽和化合物(41)K鹽，具有三羰花青結構和4-5個磺酸基的化合物(6)K鹽、化合物(4)K鹽、化合物(45)K鹽、化合物(31)、化合物(31)K鹽、化合物(3)K鹽、化合物(2)K鹽、化合物(43)K鹽和化合物(11)，以及對照化合物ICG和NK-1967。將各測試化合物溶於蒸餾水中(0.5mg/ml)使用。得到的各化合物的溶液從小鼠尾靜脈給予(5.0mg/Kg)。在給藥0.5、1、4和24小時後從小鼠取血並離心出血漿。
血漿的螢光強度通過螢光分光光度計(RF 5300 PC，SHIMADZUCORPORATION)測定。作出各化合物的校正曲線，計算血漿中化合物的濃度。結果如圖10所示。
本發明的化合物長時間高濃度地保留在血漿中。實驗例5急性毒性研究了通過引入磺酸基和轉化成鈉鹽降低毒性。
測試化合物列於表5中。
將各化合物溶於蒸餾水中得到化合物的溶液。該溶液從尾靜脈靜脈注射入有知覺的小鼠。給藥後，小鼠被監測3天，評估急性毒性[LD50(mg/Kg體重)]。結果列於表5。表5

分子中磺酸基數目的增加或轉化為鈉鹽導致急性毒性明顯下降。
本發明的近紅外螢光造影劑被激發光激發並發射近紅外螢光。該近紅外螢光在穿透生物組織方面較為優越。因而，使測定活體深層部分的損傷成為可能。另外，本發明的造影劑在水溶性和低毒性方面較為優越，因而它能被安全地使用。
權利要求
1.近紅外螢光造影劑，其包含至少一種選自分子式如下的化合物的化合物
2.近紅外螢光造影劑，其包含分子式如下的化合物
3.近紅外螢光造影劑，其包含分子式如下的化合物
4.近紅外螢光造影劑，其包含分子式如下的化合物
5.近紅外螢光造影劑，其包含分子式如下的化合物
6.近紅外螢光造影劑，其包含分子式如下的化合物
7.近紅外螢光造影劑，其包含分子式如下的化合物
8.近紅外螢光造影劑，其包含分子式如下的化合物
全文摘要
本發明涉及一種近紅外螢光造影劑,以及一種螢光成像方法,所述造影劑包括分子中具有三個或更多個磺酸基的化合物,所述方法包括將本發明的近紅外螢光造影劑引入活體中,將活體暴露於激發光,並檢測來自造影劑的近紅外螢光。本發明的近紅外螢光造影劑被激發光激發而發射近紅外螢光。該近紅外螢光在穿透生物組織的傳輸方面較為優越。因而,使檢測活體深層部位的損傷成為可能。另外,本發明的造影劑在水溶性和低毒性方面較為優越,因而它能夠被安全地使用。
文檔編號A61K49/00GK1384760SQ99817043
公開日2002年12月11日 申請日期1999年12月15日 優先權日1999年12月15日
發明者三輪直人, 稻垣陸史, 江口博明, 奧村正文, 稻垣由夫, 原田徹 申請人:舍林股份公司, 富士膠片株式會社