高γ-亞麻酸紅花的製作方法

2023-06-09 15:49:21 2

專利名稱：高γ-亞麻酸紅花的製作方法
相關申請
本申請參考2005年5月23日遞交的60/684,134號和2005年11月10日遞交的60/735,984號美國臨時專利申請，這些臨時申請併入本文作為參考。
背景技術：
γ-亞麻酸(GLA)是ω-6族的一種必須脂肪酸，主要存在於基礎植物油中。GLA是亞油酸(LA)在Δ6去飽和酶作用下合成的。GLA的作用就在於它能作為許多其它必須脂肪酸的前體，如精氨琥珀酸，精氨琥珀酸是前列腺素和其它一些生理上重要分子的前體。
不飽和脂肪酸，如LA(C18Δ9，12)，α-亞麻酸(C18Δ9，12，15)是基本的食物組成成分，脊椎動物本身並不能合成這些脂肪酸，這是因為，當脊椎動物細胞將雙鍵引入脂肪酸Δ9時，它不能額外在脂肪酸鏈的Δ9和甲基末端之再引入一個雙鍵。因為它們需要合成其它產物，亞油酸和α-亞麻酸是必須脂肪酸，通常從植物中獲得。哺乳動物可將LA轉化成GLA(C18Δ6，9，12)，GLA又可轉化為精氨琥珀酸(20:4)，精氨琥珀酸是一種重要的脂肪酸，因為它是大多數前列腺素的基礎前體物質。
由於LA要經由酶轉化形成GLA然後再轉化為精氨琥珀酸，通過食物供應的LA可以滿足對GLA和精氨琥珀酸的需要。然而，這些非高不飽和的脂肪酸如LA的消耗與健康風險相互關聯，如血膽固醇過多，動脈硬化等其它可增加冠心病冠狀動脈硬化性心臟病患病可能性的臨床疾病都與這些非高不飽和脂肪酸有關。相比之下，大多數高不飽和脂肪酸的消耗，與降低血膽固醇濃度和降低患動脈硬化的風險有關。不飽和脂肪酸GLA的消耗已顯示出特別的益處。因此，更多的不飽和GLA的消耗比起LA的消耗更有益處。所以，產生另外的GLA的來源供人們的GLA消耗是我們所希望的。
GLA是形成包括前列腺素等類花生酸類物質的一種前體物質。前列腺素是一種非常重要的類激素化合物，可以加固細胞膜，並作為一種細胞信號分子。已經發現GLA對人類和動物有益。GLA可以調節血壓，退燒，調節免疫。GLA的補充給藥法對於治療許多疾病，包括狼瘡，癌症，過敏，關節炎潰瘍性結腸炎都是很有作用的。GLA可以改善治療癌症的藥物的功效。GLA可以幫助減少月經前期症候群和更年期的症狀；改善皮膚健康，可以治療溼疹，痤瘡，紅斑痤瘡，牛皮癬，皮屑；改善治療精神病和神經障礙等疾病，包括阿耳茨海默氏病，杭廷頓氏舞蹈病，多發性硬化症，注意缺陷障礙，抑鬱症，雷諾氏現象疾病；可以防止糖尿病性神經病變，治療肝硬化，改善治療乾眼病，包括口腔乾燥-風溼性關節炎症候群等疾病，治療心血管疾病，骨質疏鬆症，高脂血症等其它由衰老引起的症狀。此外，GLA還作為一種刺激劑來消耗人體內的褐色脂肪。褐色脂肪是人體內包圍在重要器官周圍的一種脂肪，充當一個脂肪燃燒的工廠，利用卡路裡產熱，而不是把它們作為白色脂肪儲存起來。褐色脂肪的消耗對於維持理想體重是非常重要的。GLA的消耗因此可以幫助加快褐色脂肪的代謝過程。
目前GLA的補給一般來源於天然含有高GLA植物，如報春花油，黑加侖油，琉璃苣油。然而，GLA只佔這些天然來源中總脂肪酸中相對很小的一部分。這些來源中只有7-10％(報春花油)，14-19％(黑加侖油)，20-26％(琉璃苣油)的脂肪酸可用作GLA。儘管GLA的用途廣泛，但由於它的價格昂貴，而且目前的GLA濃度較低，所以，它的應用目前還有一定局限性。一個成人需要消耗10個以上的GLA膠囊補給物來獲得最佳的健康效益。所以，獲得一種價格不高，容易獲得，且比起天然含有GLA的油，含有更高含量GLA的油的來源是非常有用的。這種來源使得消費者花很少的錢在補充物上，攝取少量的油和卡路裡，就可以獲得GLA帶來的最佳健康益處。
紅花是一種商業上重要的農業作物。紅花第一次種植是在數千年以前的近東，是作為染料和從植物衍生出的一些其它產物的一種來源。本世紀，紅花油被用作一種食用油的來源。20世紀30年代的美國，紅花作為一種食用油的來源首次用於農業生產。從那以後，多種多樣改進這種油成分的研究開始發展起來。紅花油最初由棕櫚酸(C16:0)，硬脂酸(C18:0)，油酸(C18:1)，亞油酸(C18:2)組成。棕櫚酸，硬脂酸是飽和脂肪酸，油酸，亞油酸是不飽和脂肪酸。然而，紅花植物天然產生的GLA含量很小可忽略不計。
這樣來說，轉基因紅花植物種子將有非常大的用處，比天然產生的紅花種子，轉基因紅花植物種子含有更高含量GLA。


發明內容
本發明提供了產生GLA的紅花植物。第一方面提供了一種紅花植物，該植物能產生重量百分含量至少1％的GLA的紅花植物，以及其的種子和油。在一個較佳實施例中，這種油將含有重量百分含量約1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～-45，45～50，50～55，55～60％或更高含量的GLA。
本發明的第二個方面，提供了一種紅花植物，該植物含有能直接表達一個或多個去飽和酶核苷酸序列的遺傳構建序列。本發明的第三個方面，Δ6去飽和酶是唯一能在產生原始LA的植物中產生GLA的酶。本發明的第四個方面，Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶共同作用產生油酸(OA)而不是LA。這個構建序列包括這些酶的編碼序列，啟動子和終止序列。在一個優選實施例中，啟動子是一個種子特異啟動子。
在一個實施例中，提供了一種轉基因紅花植物，該植物含有作用於紅花植物的重組啟動子，可連接編碼Δ6去飽和酶重組體DNA序列，該植物產生的種子含有重量百分含量至少1％的GLA。Δ6去飽和酶編碼序列可以從任何植物和真菌中獲得。這些植物和真菌包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚等等。這個啟動子可以是一個種子特異啟動子，如油質蛋白啟動子或核絲啟動子。這個實施例還提供了來源於這些轉基因植物的種子，種子中含有重量百分含量至少佔總脂肪酸含量1％的GLA。還提供了由這些轉基因植物種子製備的油。這種油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另一個實施例中，提供了一種轉基因紅花植物，包含第一個編碼Δ6去飽和酶重組體DNA序列和第二個編碼Δ12去飽和酶DNA重組體序列，這序列可連接至少一個啟動子，該植物產生的種子含有重量百分含量至少1％的GLA。在一些實施例中，第一個和第二個DNA序列只能連接到唯一的啟動子。在另外的一些實施例中，第一個和第二個DNA序列可連接不同的啟動子。Δ6和Δ12去飽和酶編碼序列可來源於任何植物和真菌。這些植物和真菌包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚等等。這個啟動子可以是一個種子特異啟動子，如油質蛋白啟動子或核絲啟動子。這個實施例還提供了來源於這些轉基因植物的種子，種子中含有重量百分含量至少佔總脂肪酸含量1％的GLA。還提供了由這些轉基因植物種子製備的油。這種油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另一個實施例中，提供了一種在紅花種子中產生GLA的方法。這個方法包括的步驟有，含有作用於轉基因紅花植物的重組體啟動子的紅花植物的生長，它可以連接到一個編碼Δ6去飽和酶重組體DNA序列；以及在Δ6去飽和酶序列表達條件下紅花植物的生長。Δ6去飽和酶編碼序列可以從任何植物和真菌中獲得。這些植物和真菌包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚等等。這個啟動子可以是一個種子特異啟動子，如油質蛋白啟動子或核絲啟動子。這個實施例還提供了來源於這些轉基因植物的種子，種子中含有重量百分含量至少佔總脂肪酸含量1％的GLA。還提供了由這些轉基因植物種子製備的油。這種油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另外一個實施例中，提供了一種在紅花種子中產生GLA的方法。這個方法包括的步驟有，含有第一個編碼Δ6去飽和酶重組體DNA序列和第二個編碼Δ12去飽和酶重組體DNA序列紅花植物的生長，這序列可連接到至少一個啟動子；以及在Δ6和Δ12去飽和酶序列表達條件下紅花植物的生長。在這個實施例中，Δ6和Δ12去飽和酶編碼序列可來源於任何植物和真菌。這些植物和真菌包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚等等。這個啟動子可以是一個種子特異啟動子，如油質蛋白啟動子或核絲啟動子。這個實施例還提供了來源於這些轉基因植物的種子，種子中含有重量百分含量至少佔總脂肪酸含量1％的GLA。還提供了由這些轉基因植物種子製備的油。這種油含有重量百分含量1-60％或更高含量的GLA。
在另一些實施例中，來源於轉基因紅花植物的紅花油含有重量百分含量1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～5，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高含量的GLA。
在另一些實施例中，提供了一些含有紅花油的營養品和個人調理產品，這些產品含有重量百分含量1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～5，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高含量的GLA。
在另一些實施例中，提供了一種通過給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些狀況和疾病折磨的病人，治療和預防精神病，神經病，或其它中樞或末梢神經系統狀況或疾病的方法。
在另一些實施例中，提供了一種通過給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些狀況和疾病折磨的病人，治療和預防免疫性狀況或疾病的方法。
在另一些實施例中，提供了一種通過給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些狀況和疾病折磨的病人，治療和預防炎症性狀況或疾病的方法。
在另一些實施例中，提供了一種通過給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些狀況和疾病折磨的病人，治療和預防癌症狀況或疾病的方法。
在另一些實施例中，提供了一種通過給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些狀況和疾病折磨的病人，治療和預防皮膚狀況或疾病的方法。
在另一些實施例中，提供了一種通過給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些狀況和疾病折磨的病人，治療和預防心血管的狀況或疾病的方法。
在另一些實施例中，提供了一種通過給藥有效量的紅花油給嬰兒提供營養的方法。



圖1顯示的是GLA生物合成的途徑，在Δ6和Δ12去飽和酶的連續作用下，OA轉化為LA，然後再轉化為GLA，GLA可轉化為精氨琥珀酸，精氨琥珀酸是許多前列腺素，白細胞三烯和其它生理有效分子的前體物質； 圖2顯示的是含有一致序列的不同植物Δ6去飽和酶的序列對比(SEQ ID NO4-6)； 圖3顯示的是含有一致序列的不同真菌的Δ6去飽和酶的序列對比(SEQ ID NO4-11)； 圖4顯示的是Δ6去飽和酶保守區域的線性表示； 圖5顯示的是包含有共有序列的不同植物Δ12去飽和酶的序列對比(SEQ ID NO12-15)； 圖6顯示的是含有一致序列的不同真菌的Δ12去飽和酶的序列對比，(SEQ ID NO16-19)； 圖7顯示的是Δ12去飽和酶的保守區域線性表示； 圖8顯示的是來源於M.alpina生物體中表達Δ6，Δ12去飽和酶的pSBS4766質粒。如圖所示了表達構建序列的幾個特徵，包括啟動子，終止序列，抗性基因和標記基因，植物質粒的可選標記是pat，pat來源於綠色產色鏈黴菌。細菌標記是SpecR； 圖9顯示的是來源於S.diclina生物體中表達Δ6去飽和酶的pSBS4119質粒，如圖所示了表達構建序列的幾個特徵，包括啟動子，終止序列，抗性基因和標記基因，植物質粒的可選標記是pat，pat來源於綠色產色鏈黴菌，細菌標記是SpecR； 圖10顯示的是從M.alpina生物體中表達Δ6去飽和酶的pSBS4763質粒，如圖所示了表達構建序列的幾個特徵，包括啟動子，終止序列，抗性基因和標記基因，植物質粒的可選標記是pat，pat來源於綠色產色鏈黴菌，細菌標記是SpecR； 為了確保能完整的理解本發明，提供下列非限制性定義。
Δ6去飽和酶是在脂肪酸分子羧基末端的碳6和碳7之間引入一個雙鍵的酶。
Δ12去飽和酶是在脂肪酸分子羧基末端的碳12和碳13之間引入一個雙鍵的酶。
此處，縮寫″GLA″指的是γ-亞麻酸。
重量百分數就是種子或是種子裡的油中一特定脂肪酸基於重量的含量。因此，「GLA的重量百分數」或「GLA按重量計算」是以總脂肪酸重量含量為100％，根據GLA的重量所佔比例來計算的。例如，″按重量計算的5％的GLA″或″5％按重量計算的GLA″指的是種子或種子中的油100克的總脂肪酸含有5克的GLA。
如圖1所示，GLA是由生物化學途徑產生的，在這個過程中OA轉化為LA，由能在脂肪酸碳鏈的特定位置引入一個雙鍵的脂肪酸去飽和酶的連續作用下，LA依次轉化為GLA。當這些酶轉移到產生OA或LA的細胞中來時，GLA就產生了。
紅花是一種商業上重要的農作物，也是植物油的一種有價值的來源。因為紅花植物不能天然產生一定量的GLA，所以，它顯然不是製備這種脂肪酸的候選植物。由於紅花植物不能天然產生GLA，有人就會認為這種高含量非內源性脂肪酸的表達也許會對植物有害，因為引入外源性GLA將會干擾內源性脂肪酸的功能。令人驚訝的發現，GLA在紅花種子中是可以表達的，而且比起其它表達轉基因的植物(免於上述相關討論)，這種表達產生了令人意想不到的高濃度。
去飽和酶的特性 去飽和酶的催化反應 R1-CH2-CH2-R2+O2+2e-+2H+→R1-CH＝CH-R2+2H2O. 許多脂肪酸去飽和酶都是膜相連金屬酶。大多數酶在它們的活性位點都含有兩個鐵原子。如圖2，3，5，6所示，Δ6，Δ12去飽和酶在其各自種類酶中有一定程度的序列相同或相似。如圖4和7所示，在去飽和酶的保守區域內，有三個含豐富組氨酸的保守序列(組氨酸盒子)和一般序列HXXXJH，HXXHH，HXXHH，QXXHH，這些盒子對於酶的活力是必需的，它們由跨膜域分隔開，跨膜域對於它們在活性位點的正確定向是必需的。許多酶包括Δ5，Δ6去飽和酶都含有一種類似細胞色素b5的氨基末端。這通常會伴隨著第三個組氨酸盒子轉變為QXXHH。從NADH細胞色素B5還原酶中獲得的電子轉移到去飽和酶的細胞色素b5或細胞色素b5區域中，再轉移到去飽和酶的活性位點上。氧化還原反應由通過保守的組氨酸盒子相互作用來維持穩定的兩個鐵原子開始進行。正如下面所述，這些結構特徵，特別是填補金屬結合部位的保守殘基是保守的交叉作用的，主要負責這種酶的酶功能。
去飽和酶的來源 對於GLA的製備，一種或多種去飽和酶對於宿主細胞和底物的利用是必需的。例如，在天然含有豐富LA的植物中，Δ6去飽和酶對於催化LA轉化為GLA是必需的。
選擇一種特異的去飽和酶多肽需要考慮的因素包括正確的定位和細胞微粒體/內質網隔間中多肽的功能(這些酶受膜約束的，只有與細胞中生物合成的甘油酯結合才能發揮作用)，多肽是否是限速酶或是限速酶的組成部分，採用去飽和酶對於目標多不飽和脂肪酸的合成和多肽所需的輔助因子是否是必需的。表達的多肽與宿主細胞的特定區域內的生物化學環境有較好的相容性。例如，多肽和其它酶在宿主細胞中競爭底物。多肽的米氏常數和比活性的分析因此被考慮用於決定給定多肽是否適合來修飾宿主細胞裡GLA的製備。在特定情況下採用的多肽能在目標宿主細胞裡發揮功能，但是，另外一些多肽具有去飽和酶的活性，能夠修飾GLA的相關產物。
許多Δ6，Δ12去飽和酶都是已知的，包括下面文獻中描述的U.S.Patent No.6,635,451，WO02/081668，U.S.Patent No.6,635,451，U.S.Patent App.No.2003/0167525，U.S.Patent No.6,459,018，U.S.Patent No.5,972,644，U.S，Patent No.6,432,684，U.S.Patent No.5,968,809，U.S.Patent No.5,972,664，U.S.Patent No.6,051,754，U.S.Patent No.6,075,183，U，S，Patent No.6,136,574，U.S.Patent No.5,552,306，U.S.Patent No.5,614,393，5,663,068，U.S.Patent No.5,689,050，U.S.Patent No.5,789,220，U.S.Patent No.6,355,861 andU.S.Patent No.6,492,108。這些文獻通過引用而被合併於此來說明這種特異序列。本發明實踐所用的Δ6，Δ12去飽和酶來源於植物和真菌。例如，來源於白黴，異枝水黴，高山被孢黴，Conidiolus，腐黴，疫酶，青黴，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴菌，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，大戟，Dimorphoteca，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，玻璃苣，櫻草的Δ6，Δ12去飽和酶對於這個發明的實踐是有用的，來源於向日葵，芸苔，稻，苔蘚，C.elegans的去飽和酶對於本發明的實踐也是有用的。這個序列包括含有豐富組氨酸的盒子，這些序列也可用作已知技術中基於不同排列方法的至少80％，85％，90％或95％一致的序列來應用。在高度或中度嚴格性條件下，也可將以上序列雜交。允許與去飽和酶序列相應的附加序列一致的雜化洗滌條件在技術中也是已知的，其中一部分下面會有討論。
序列比對方法中的編程和排列算法在技術中已知的，在下面的文獻中有描述Smith and Waterman，J Mol Biol147195，1981；Needleman and Wunsch，J Mol Biol 48443，1970；Pearson and Lipman，PNAS 852444，1988；Higgins and Sharp，Gene 73237，1988；Higginsand Sharp，Comput Appl Biosci 5151，1989；Corpet，Nucl Acids Res格性計算的條件可以參考下列文獻。Sambrook et al.(MolecularCloning--A Laboratory Manual 2nd Edition，Cold SpringHarbor Laboratory Press，New York，1989)and Tijssen(Hybridizationwith Nucleic Acid Probes，Elsevier Science Ltd.，Amsterdam，1993)。影響核酸雜交的因素包括溫度，鹽的條件，雜交混合物中有機溶劑的量，雜交序列的長度和基本組成，鹼基錯配的程度。例如，將探針和濾波DNA雜交的高嚴格條件為5X SSC，2％十二烷基硫酸鈉(SDS)，100μg/ml單鏈DNA在55-65℃條件下放置20分鐘，60-65℃在含0.1％SDS的0.1X SSC中洗滌20分鐘。
另外，如果去飽和酶cDNA的序列是已知的，可以設計PCR引物來放大特定的去飽和酶。此外，PCR引物還可設計成去飽和酶的保守區域，來分離另外的序列。進行PCR反應的實驗設計在技術中是已知的，在一些手冊有詳細描述，如PCR ProtocolsA Guide toMethods and Applications by M.Innes et al.，Academic Press，1989。
一旦序列經由序列鑑定，雜交，保守組氨酸盒子鑑定，或其它適合方法的鑑定後，去飽和酶的活性就可採用一些不同測定方法來測試。例如酵母的應用，在U.S.Pat.No.5,968,809中5到7的例子中和Knutzon，et al.J.Biol.Chem.273(45)29360-29366(1998)的例子中有所描述。這些文獻通過引用而被合併於此。這裡的酵母可以是酒釀酵母或產油酵母。目的序列被克隆到酵母表達載體中並轉化為酵母。這個重組酵母菌株在含有不同底物介質中生長，油脂成分的脂肪酸含量用來分析估算去飽和酶的活性。Δ6去飽和酶活性可採用由亞油酸作為底物探測γ-亞麻酸來監測。Δ12去飽和酶可採用通過探測內源性油酸到亞油酸的轉化來監測。
去飽和酶還可利用Arabidopsis來測試。目的序列克隆到適合載體中，移入Arabidopsis，通過估算轉基因植物的表現型來檢測活性。1610881，1988；Huang，Genomics 14I8，1992；and Pearson，MethodsMol Biol24307，1994.Altschul et al.，(Nature Genetics 6119，1994)，這些文獻在序列比對和同源性計算方面，均有細節上的考慮。
NCBI(美國國立生物技術信息中心)BLAST(一套在蛋白質資料庫或DNA資料庫中進行相似性比較的分析工具)分析工具對於一些包括國家生物技術中心(NCBI，Bethesda，MD)，網際網路的序列分析是很有用的，它是與序列分析程序blastp，blastn，blastx，tblastnand tblastx聯合起來應用。可以進入NCBI主頁，在主頁上有如何運用這個程序來確定序列相似性的說明。
Vector NTI(序列綜合分析軟體)軟體中AlignX程序如圖2，3，5，6所示。圖2顯示的是來源於不同植物種類的Δ6去飽和酶的序列比對。圖3顯示的是來源於不同真菌種類的去飽和酶的序列比對。圖5和圖6分別顯示的是來源於不同植物和真菌種類的Δ6，Δ12去飽和酶的序列比對。這些圖顯示的是在它們各自種類酶中，不同Δ6，Δ12去飽和酶結構和功能的關係。任何在這些圖中顯示的Δ6，Δ12去飽和酶都可用於發明的實踐中，和其它酶一樣，這些酶也可採用本發明的方法或技術中其它與Δ6，Δ12去飽和酶相應的有效的方法來鑑定。本發明還包括仍然保留活性或通過隨機或定向變異能提高強酶活的去飽和酶的修飾，。
熟練的技工都知道，此處顯示的任何序列以及技術中的其它已知序列，和未知的去飽和酶序列都能採用傳統克隆方法來分離，如用於本發明的核酸雜交或PCR技術。
用於分離去飽和酶序列的雜交條件的例子如下。序列依靠的嚴格條件根據採用的實驗參數的不同而不同。一般來說，對於在確定離子強度和PH條件下的特定序列來說，選擇的嚴格條件為低於熱溶解點(Tm)的5～20℃。Tm(在確定離子強度和PH條件下)是指50％的靶序列雜化與探針完全配對雜交時的溫度。核酸雜交和嚴另外，含有假去飽和酶序列的載體可在葉子中表達或使轉基因植物中產生冠癭生長。
採用如上所述方法鑑定和分離產生的去飽和酶序列再被克隆到植物載體中表達，採用的分子生物學上的已知方法，如以下文獻所述Sambrook，Fritsch and Maniatis，Molecular CloningALaboratory Manual，2nd edition(1989)，Current Protocols in MolecularBiology，F.M.Ausubel et al.，eds.(1987)。
去飽和酶基因的表達 對於去飽和酶多肽的表達來說，功能的轉錄和翻譯的起始和終止區域可連接編碼去飽和酶多肽的DNA。轉錄和翻譯的起始和終止區域有許多種來源，包括要表達的DNA，已知基因，目的體系下可能表達的基因，表達型載體，化學合成或來自宿主細胞的內源基因。在植物組織和器官中的表達具有一定優勢，特別是在容易獲得組織和器官的地方，如種子，葉子，果實，花朵，根等等。利用特異調節序列，可在植物中定向表達，可參考下列文獻U.S.Patent No.5,463,174，U.S.Patent No.4,943,674，U.S.Patent No.5,I06,739，U.S.Patent No.5,175,095，U.S.Patent No.5,420,034，U.S.Patent No.5,188,958and U.S.Patent No.5,589,379。這些文獻通過整體上引用而被合併於此，針對此特異序列展示於此。本發明產生的GLA的一個特別有用的區域是在宿主植物細胞的種子組織中。為了在種子中直接表達，種子特異啟動子可用於適和去飽和酶的直接表達。這種種子特異啟動子包括如下文獻所述，U.S.Patent No.5,623,067，U.S.Patent No.6,342,657，U.S.Patent No.6,642,437。這些文獻通過整體上引用而被合併於此，為此特異序列作參考。
宿主細胞的表達可以是瞬時表達或穩定表達。瞬時表達可由引入構建序列實現，該序列含有在宿主細胞內作用的表達信號，這裡的構建序列在宿主細胞中不能複製，也不能和宿主細胞整合到一起或者說宿主細胞在這裡是不增殖的。瞬時表達也可通過誘導連接到目的基因調節啟動子的活性來實現，但這種可誘導的系統經常會出現低水平的表達。穩定表達可由整合到宿主基因或在宿主細胞可自主複製的構建序列的引入來實現。在技術的其它已知基因中，適合的選擇標記包括由pat(phosphothricin acetyl transferase)基因提供的除草劑抗性和由nptII(neomycin phosphotransferase)基因提供的卡那黴素抗性。目的基因的穩定表達可通過利用位於或轉染表達構建序列的選擇標記來選擇，之後表達標記細胞的選擇。當穩定表達由整合引起時，構建序列的整合就在宿主細胞基因中隨機產生，還可以通過採用含有和宿主基因具有同源性區域的構建序列來定向產生，其中，構建序列是定位於內源性基因，全部或一部分轉錄和翻譯調節區域可由內源性基因提供。
對於種子中去飽和酶多肽的表達，需要一個種子特異啟動子。例如，這個啟動子包括油質蛋白或核絲啟動子。油質蛋白啟動子在U.S.Patent No.5,792,922中有描述，核絲啟動子U.S.Patent No.6,777,591中有描述。
當要表達超過一個以上的不同基因時，基因必需包含在一個單獨構建序列或基因必需在分離的載體上。例如，技術中的一個技能就是練習選調節區域，選擇方法，引入構建序列的增殖方法的正確選擇，來獲得目標產物合成所需所有酶的最佳的表達水平。
包含目的基因的構建序列可由標準技術操作引入宿主細胞。這些技術包括轉染，傳染，基因槍，電穿孔術，微注射，刮術和其它一些向宿主細胞中引入目的基因的方法。(參見U.S.Patent No.4,743,548，U.S.Patent No.4,795,855，U.S.Patent No.5,068,193，U.S.Patent No.5,188,958，U.S.Patent No.5,463,174，U.S.Patent No.5,565,346，U.S.Patent No.5,565,347)。簡而言之，宿主細胞經由任何方法處理接受一個DNA序列或構建序列都涉及到此處的「轉化」或「重組」。目的宿主需至少有一個表達構建序列的拷貝，或有兩個以上，取決於基因是否能整合到基因中一個以上位點上，且在一個位點上有多個的拷貝，是否被放大或出現在有多個拷貝數的染色體外因子中。
許多種植物轉化方法都是已知的。Δ6，Δ12去飽和酶基因可通過葉盤轉化再生過程Agrobacterium共培養引入植物。如文獻Horsch et al，Science 2271229，1985中所描述的。Agrobacterium介導轉化的其它方法還有如原生物的共培養(Horsch et al.，Science223496，1984；DeB iock et al，EMBO J.22143，1984)，變異細胞的懸浮培養(Barton et al.，Cell 321033，1983)，花卉的真空侵入(Bechtoldet al.，CR Aead Scie III，Sci Vie 3161194，1993；Wang et al.，Plant CeilRep 22274，2003)，這些方法在本發明的範圍中也可採用。首先來說，植物是由衍生Agrobacterium或固定化Agrobacterium載體轉化而來，如文獻Klee et al.，Annu Rev Plant Physio138467，1987中所描述的。然而，在植物細胞中插入本發明的Δ6，Δ12去飽和酶基因的其它方法也是有用的。這些可選的方法包括，基因槍法(Klein et al.，Nature32770，1987)，原生質體法(Shillito and Potrykus，Recombinant DNAMethodology 687，1989；Davey et al.，Plant Mol Biol 13273，I989)，化學誘導DNA攝取法(ToSpfer et al.，Plant Cell 1133，1989)，採用病毒或花粉(Ohta，PNAS 83715，1986)作為載體的方法等。
當需要採用轉化方法時，本發明的Δ6，Δ12去飽和酶基因就可被插入植物轉化載體中，如雙元載體，在文獻Bevan(1984)NucleicAcids Res.12，8111中有描述。植物轉化載體可由Agrobacteriumtumefacians固有的基因轉化系的修飾得到。這個固有的系統包含有大片段T-DNA的Ti(誘導腫瘤)質粒，這個T-DNA被轉移到轉化植物中。Ti質粒的另一個片段，Vir區，主要負責T-DNA的轉運。T-DNA的邊界含有末端重複序列。在修飾的雙元載體中，Ti基因被刪除，利用Vir區的功能轉移以T-DNA邊界序列為邊界的外源DNA來。T區域還包括一個抗菌素抗性的可選標記和轉移的插入序列的多克隆位點。這種工程菌被稱為″disarmed″A.tumefaciens菌株，它允許以T-區域作為邊界的序列有效轉化進入植物核基因。
表面消毒的葉盤由含有A.tumefaciens的″disarmed″外源基因接種，培養兩天，然後轉移到含有抗生素的培養基中。在含有適量抗生素的培養基中植根後，選擇轉化的芽並轉移到土壤中生長。
轉化的宿主細胞可由含有引入構建序列的可選標記來鑑別。另外，正如許多轉化技術將許多DNA分子引入宿主細胞，分離的標記構建序列可由目標構建序列引入。典型的，具有在選擇培養基生長能力的宿主被選擇出來。選擇培養基可加入一種抗生素或缺乏一種不轉化宿主生長所需的必需因素，例如，營養因子和生長因子。當其在轉化的宿主細胞中表達時，引入的標記基因可以產生抗菌素抗性或編碼必需生長因子或酶，使其能在選擇培養基中生長。卡那徽素抗性和氨基糖苷G418的抗性是我們期望獲得的(參見U.S.Patent No.5,034,322)。當表達的蛋白質標記直接或間接的被檢測出時，也可對轉化的宿主進行選擇。這個標記蛋白可以單獨表達或和其它蛋白結合起來表達。標記蛋白可通過它的酶活性來檢測。例如，1，3-半乳糖苷酶可將底物X-gal轉化為顏色產物，螢光酶可將螢光轉化為發光產物。標記蛋白可由它的發光產物或修飾特性檢測出來，例如當有藍光照射時，Aequorea victoria綠色螢光蛋白會發螢光。抗體可用於檢測標記蛋白或分子標記蛋白，例如，目的蛋白。可通過視覺上或採用如FACS，抗體淘洗等技術來選擇表達標記蛋白或分子標記蛋白的細胞。
紅花的轉化 至少有兩種紅花植物轉化的基本方法(1)由共培養的子葉誘導，愈傷組織中芽的再生，(2)由離體分生組織共培養直接產生的多芽再生。
方法1包括接下來由Agrobacterium共培養的子葉外植體的愈傷組織的誘導(Ying el al.，Plant Ceil Rep 11581，1992)；Orlikowska etal.，PCTOC 4085，1995)。這方法包括將離體子葉在愈傷誘導培養基(MS鹽B5維他命)中共培養3天。外植體轉移到芽形成培養基中(MS鹽，B5維他命，羧苄青黴素)培養兩天，然後轉移到含有卡那黴素的相同培養基中。2到3周後，再生的葉結構和下面的外植體組織一起轉移到含有Geneticin的芽伸長培養基中。(1/2MS鹽和MS維他命)。再過2到3周，延長的芽從原來的外植體組織中分離，轉移到相同的培養基中，此處未轉化芽或嵌合芽的切割末端迅速變成褐色，而轉基因芽仍然是健康的。健康的芽被轉移到生根的培養基中(MS鹽類和MS維他命)，長度至少為10mm。一個外植體平均能再生2到3個芽。
方法2中，多個芽在Agrobacterium的共培養之前，暫時由離體分生組織誘導(Rao and Rohini，PIant Bioteehnol 16201，1999)；Rohini and Rao，Annals Bet 861043，2000)。這包括用針來刺穿發芽種子的胚軸，該發芽種子的子葉節中有一個子葉已被移除。在28-30℃下，將這個胚胎浸漬在Winans′AB培養基的Agrobacterium的混懸液中並輕輕攪拌10分鐘。接下來在半固體MS基本培養基中共培養24小時，胚軸在含500μg/ml頭孢噻肟液體的MS基本培養基中輕輕攪拌(80rpm)充分清洗1小時，放置在裝有水的高壓滅菌器Soilrite(vermioulite equivalent)(Chowgule Industries Ltd.Bangalore，India)中滅菌，使其在在生長室無菌條件下發芽生長。5到6天後，在幼體被轉移到溫室之前將其轉移到植物盆罐的Soilrite中，使其在生長室條件下至少生長10天。植物盆罐開始由聚乙烯袋覆蓋來維持溼度。生長室維持在26-28℃，螢光周期為14小時的條件下。與方法1對比，這個方法生長的大多數芽一般沒有玻璃化現象。生長的植物可能是嵌合體的，在這點上，成功的轉化基於T-DNA是否整合到產生生殖器官的分生細胞層中。這個方法大體上需要比方法1更多的原材料(成熟的種子)和生長室空間。
本發明一個優先的方面是提供了能表達過量生產GLA的編碼去飽和酶DNA的轉基因植物或其後代。紅花作為植物油的來源被廣泛採用，是一種有優勢的宿主植物。紅花植物細胞可通過上述任何一種植物轉化方法，由編碼Δ6去飽和酶或編碼Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶的分離DNA轉化。通常在愈傷組織培養或葉盤中的轉化紅花植物細胞可通過已知方法再生到完整的轉基因植物中(例，Horsch et al.，Science 2271129，1985)。因為轉化紅花植物的子代遺傳編碼去飽和酶基因的DNA，所以種子或轉化植物的剪枝被用來維持轉基因植物系。
其中一個特別的方面，這個方法包括將編碼Δ6去飽和酶的DNA引入無GLA或有少量GLA產生但有LA產生的紅花植物的過程。另一方面，這方法還包括將一個或多個表達型載體引入到GLA和LA缺乏的紅花植物中，該表達型載體是含有編碼Δ12去飽和酶和Δ6去飽和酶DNA。相應的，缺乏GLA和LA的紅花植物通過Δ12去飽和酶的表達誘導產生LA，然後由Δ6去飽和酶的表達產生GLA。包含編碼Δ12去飽和酶或Δ12去飽和酶和Δ6去飽和酶DNA的表達載體可由所屬技術領域的一般技術人士(Sambrook et al.，1989)已知的重組技術方法和公開的Δ12去飽和酶的序列(Wada etal.，Nature(London)347200，1990)來構建。有關這個載體通過例子在此予以說明。
含有GLA的油 紅花植物中產生的GLA可利用如上所述的技術中已知方法從紅花植物的不同器官特別是種子中獲得。特別的是，可收穫種子並且通過壓榨種子的方法從種子中提取油，然後採用傳統方法精煉。從紅花植物種子中提取油的方法在技術領域中是已知的，可參考文獻Smith，J，R.Safflower，AOCS Press，pp.I85-212(1996)。
採用本發明和文獻中的方法製備的GLA可作為游離脂肪酸或酯化形式，如醯基甘油，磷脂，硫脂，糖脂的形式存在於宿主植物組織和植物器官中，並可通過技術中的多種已知方法從宿主細胞提取出來。這些方法包括有機溶劑提取法，超聲法，利用二氧化碳或如壓力以及它們相結合的物理方法的超臨界流體提取法。可採用己烷，丙烷，丙酮或乙醇來提取。
此處的GLA作為營養和個人護理品組分。有關營養組分發明的例子包括嬰兒配方奶粉，營養保健品，飲食替代品，補水成分等等。例如，這些組分可以添加到任何類型的食物中，包括人造奶油，改性黃油，乳酪，牛奶，酸奶，巧克力，糖果，點心，色拉油，烹調油，烹調用脂肪，肉，魚和飲料等等。有關個人護理品組分的例子包括面霜，香水，保溼乳，防曬和曬後修復乳，洗髮水，護髮素和唇膏等等。本發明的GLA的應用實例在如下專利中有描述U.S.Patent Nos.6,635,451和5,709,888，這些例子通過整體上引用而被合併於此，針對於這些特殊的應用在此列舉。
在此引用的專利通過整體上引用而被合併於此。通過圖解提供下面的例子，目的不是限制發明的範圍。
實施例1質粒pSBS4766和表達這個質粒的轉基因植物 圖8顯示的是高山被孢黴中Δ6，Δ12去飽和酶共同表達的構建序列圖。這個構建序列的植物可選標記是pat，pat對應於綠色產色鏈黴菌中的pat基因。構建序列的細菌標記是SpecR。該構建這個載體的基本雙元載體為pPZP200的衍生物。參見Hajduklewicz et al.Plant Mol Biol25989，1994。含於pPZP200質粒邊界序列中的插入序列如下所述。
質粒PSBS4766(帶有pat標記的MalpinaΔ6，Δ12去飽和酶雙表達盒子)(SEQ ID NO1) ctgcaggaattcgatctctattgattcaaattacgatctgatactgataacgtctagatttttagggt taaagcaatcaatcacctgacgattcaaggtggttggatcatgacgattccagaaaacatcaagcaagc tctcaaagctacactctttgggatcatactgaactctaacaacctcgttatgtcccgtagtgccagtacag acatcctcgtaactcggattgtgcacgatgccatgactatacccaacctcggtcttggtcacaccagga actctctggtaagctagctccactccccagaaacaaccggcgccaaattgcgcgaattgctgacctga agacggaacatcatcgtcgggtccttgggcgattgcggcggaagatgggtcagcttgggcttgagga cgagacccgaatccgagtctgttgaaaaggttgttcattggggatttgtatacggagattggtcgtcgag aggtttgagggaaaggacaaatgggtttggctctggagaaagagagtgcggctttagagagagaatt gagaggtttagagagagatgcggcggcgatgagcggaggagagacgacgaggacctgcattatca aagcagtgacgtggtgaaatttggaacttttaagaggcagatagatttattatttgtatccattttcttcattg ttctagaatgtcgcggaacaaattttaaaactaaatcctaaatttttctaattttgttgccaatagtggatatg tgggccgtatagaaggaatctattgaaggcccaaacccatactgacgagcccaaaggttcgttttgcgt tttatgtttcggttcgatgccaacgccacattctgagctaggcaaaaaacaaacgtgtctttgaatagact 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脂肪酸濃度的測量是在轉基因植物的種子中完成的。從轉基因植物中收集種子，採用″Official Methods and Recommended Practicesofthe AOCS″，5th Ed.，Method Ce 1-62，American Oil Chemists SocietyChampaign，Illinois(1997)中所描述方法的改進方法，由氣相色譜法確定脂肪酸組分。在這個方法中，油是由正己烷從種子中提取出來的，再經鹽酸水解，與甲醇反應形成甲酯。甲酯由氣相色譜內標法來定量。
表達pSBS4766構建序列的轉基因植物T1種子的10個種子庫的脂肪酸組分由表1給出。Δ6去飽和酶基因的活性由轉基因植物系中GLA的存在來表明。在表1S317對照系中GLA的濃度範圍0.03％～0.04％時，在T1種子庫中的濃度範圍0.5％～30.8％。這裡GLA的濃度增加了超過50倍。在GLA含量最高的系中，可以看到18:4有小的但是很顯著的增加。我們希望，Δ6去飽和酶基因可作用於由18:2來產生GLA和作用於18:3(ALA)來產生18:3。Δ12去飽和酶的活性可由18:1中脂肪酸的減少來表明。在表1中S317對照系中，OA的濃度範圍73.76％～75.8％，在轉基因系的濃度範圍3.68％～73.51％。總之，這個數據顯示的是本發明獲得的紅花產生GLA的濃度的一個廣泛的範圍。
表1S317中表達的pSBS4766構建序列的T1種子的10個種子庫中的脂肪酸組成(百分數表示)。由棕櫚酸(C16:0)，硬脂酸(C18:0)，油酸(C18:1)，亞油酸(C18:2)組成. S317對照系中單粒種子樣品的脂肪酸組成由表2給出。其中有四個重複(S0-1，S0-2，S0-3，S0-4)。單粒種子數據與10個種子庫數據相似。
表2對照系(S317，S0表示)中四個單粒種子樣品中的脂肪酸組成。
表達pSBS4766構建序列的轉基因植物的5個系(S1，S4，S5，S24，S27)的單粒種子的脂肪酸組成由表3～7給出。提供了8～9個重複種子數據。若有需要，可提供每個轉基因序列的NULL對照系的單粒種子來作對照。











下面的單粒種子數據可在種子庫數據中看到。因為T1系是分離的，所以由於無效的插入雜合型和插入純合型，單粒種子樣品中可出現一些差異。可以看出GLA的濃度範圍是1.4％(表3種子1，1系，S1-1)～50.8％(表7種子2，27系，S27-2)。有種子油的系與從單粒種子數據或種子庫數據獲得的數據相似。這個系不能結實。能結實的系已被選擇用於研究。
pSBS4766構建序列表達系的T1和T2代種子的脂肪酸組成由下面表8給出。
表8S317中表達pSBS4766構建序列的T1和T2單系脂肪酸組成(百分數表示)。
T2種子與測定的T1種子的脂肪酸組成一致。這些數據說明，轉基因是穩定的，可遺傳的，在GLA代際中GLA濃度產生了相同程度的提高。
例2質粒pSBS4119和表達這個質粒的轉基因植物 圖9顯示的是Saprolegnia diclina中表達Δ6去飽和酶的構建序列圖。這個構建序列的植物可選標記是pat，pat對應於綠色產色鏈黴菌中的pat基因。構建序列的細菌標記是SpecR。該構建這個載體的基本雙元載體為pPZP200的衍生物。參見Hajduklewicz et al.PlantMol Biol25989，1994。含於pPZP200質粒邊界序列中的插入序列如下所述。
質粒PSBS4119(帶有pat標記的S.diclinaΔ6去飽和酶表達盒子)(SEQ ID NO2) ctgcaggaattcgatctctattgattcaaattacgatctgatactgataacgtctagatttttagggt taaagcaatcaatcacctgacgattcaaggtggttggatcatgacgattccagaaaacatcaagcaagc tctcaaagctacactctttgggatcatactgaactctaacaacctcgttatgtcccgtagtgccagtacag acatcctcgtaactcggattgtgcacgatgccatgactatacccaacctcggtcttggtcacaccagga actctctggtaagctagctccactccccagaaacaaccggcgccaaattgcgcgaattgctgacctga agacggaacatcatcgtcgggtccttgggcgattgcggcggaagatgggtcagcttgggcttgagga cgagacccgaatccgagtctgttgaaaaggttgttcattggggatttgtatacggagattggtcgtcgag aggtttgagggaaaggacaaatgggtttggctctggagaaagagagtgcggctttagagagagaatt gagaggtttagagagagatgcggcggcgatgagcggaggagagacgacgaggacctgcattatca aagcagtgacgtggtgaaatttggaacttttaagaggcagatagatttattatttgtatccattttcttcattg ttctagaatgtcgcggaacaaattttaaaactaaatcctaaatttttctaattttgttgccaatagtggatatg tgggccgtatagaaggaatctattgaaggcccaaacccatactgacgagcccaaaggttcgttttgcgt tttatgtttcggttcgatgccaacgccacattctgagctaggcaaaaaacaaacgtgtctttgaatagact cctctcgttaacacatgcagcggctgcatggtgacgccattaacacgtggcctacaattgcatgatgtct ccattgacacgtgacttctcgtctcctttcttaatatatctaacaaacactcctacctcttccaaaatatatac acatctttttgatcaatctctcattcaaaatctcattctctctagtaaacaagaacaaaaaaccatggtccag gggcaaaaggccgagaagatctcgtgggcgaccatccgtgagcacaaccgccaagacaacgcgtg gatcgtgatccaccacaaggtgtacgacatctcggcctttgaggaccacccgggcggcgtcgtcatgt tcacgcaggccggcgaagacgcgaccgatgcgttcgctgtcttccacccgagctcggcgctcaagct cctcgagcagtactacgtcggcgacgtcgaccagtcgacggcggccgtcgacacgtcgatctcgga cgaggtcaagaagagccagtcggacttcattgcgtcgtaccgcaagctgcgccttgaagtcaagcgc ctcggcttgtacgactcgagcaagctctactacctctacaagtgcgcctcgacgctgagcattgcgctt gtgtcggcggccatttgcctccactttgactcgacggccatgtacatggtcgcggctgtcatccttggcc tcttttaccagcagtgcggctggctcgcccatgactttctgcaccaccaagtgtttgagaaccacttgttt ggcgacctcgtcggcgtcatggtcggcaacctctggcagggcttctcggtgcagtggtggaagaaca agcacaacacgcaccatgcgatccccaacctccacgcgacgcccgagatcgccttccacggcgacc cggacattgacacgatgccgattctcgcgtggtcgctcaagatggcgcagcacgcggtcgactcgcc cgtcgggctcttcttcatgcgctaccaagcgtacctgtactttcccatcttgctctttgcgcgtatctcgtg ggtgatccagtcggccatgtacgccttctacaacgttgggcccggcggcacctttgacaaggtccagt acccgctgctcgagcgcgccggcctcctcctctactacggctggaacctcggccttgtgtacgcagcc aacatgtcgctgctccaagcggctgcgttcctctttgtgagccaggcgtcgtgcggcctcttcctcgcg atggtctttagcgtcggccacaacggcatggaggtctttgacaaggacagcaagcccgatttttggaa gctgcaagtgctctcgacgcgcaacgtgacgtcgtcgctctggatcgactggttcatgggcggcctca actaccagatcgaccaccacttgttcccgatggtgccccggcacaacctcccggcgctcaacgtgctc gtcaagtcgctctgcaagcagtacgacatcccataccacgagacgggcttcatcgcgggcatggccg aggtcgtcgtgcacctcgagcgcatctcgatcgagttcttcaaggagtttcccgccatgtaagcttgtta ccccactgatgtcatcgtcatagtccaataactccaatgtcggggagttagtttatgaggaataaagtgtt tagaatttgatcagggggagataataaaagccgagtttgaatctttttgttataagtaatgtttatgtgtgttt ctatatgttgtcaaatggtcccatgtttttcttcctctctttttgtaacttgcaagtgttgtgttgtactttatttgg cttctttgtaagttggtaacggtggtctatatatggaaaaggtcttgttttgttaaacttatgttagttaactgg attcgtctttaaccacaaaaagttttcaataagctacaaatttagacacgcaagccgatgcagtcattagt acatatatttattgcaagtgattacatggcaacccaaacttcaaaaacagtaggttgctccatttagtaacc tgaattgcctcctgattctagttgatcccggtaccgaattcgaatccaaaaattacggatatgaatatagg catatccgtatccgaattatccgtttgacagctagcaacgattgtacaattgcttctttaaaaaaggaaga aagaaagaaagaaaagaatcaacatcagcgttaacaaacggccccgttacggcccaaacggtcatat agagtaacggcgttaagcgttgaaagactcctatcgaaatacgtaaccgcaaacgtgtcatagtcagat cccctcttccttcaccgcctcaaacacaaaaataatcttctacagcctatatatacaacccccccttctatc tctcctttctcacaattcatcatctttctttctctacccccaattttaagaaatcctctcttctcctcttcattttca aggtaaatctctctctctctctctctctctgttattccttgttttaattaggtatgtattattgctagtttgttaatct gcttatcttatgtatgccttatgtgaatatctttatcttgttcatctcatccgtttagaagctataaatttgttgat ttgactgtgtatctacacgtggttatgtttatatctaatcagatatgaatttcttcatattgttgcgtttgtgtgta ccaatccgaaatcgttgatttttttcatttaatcgtgtagctaattgtacgtatacatatggatctacgtatca attgttcatctgtttgtgtttgtatgtatacagatctgaaaacatcacttctctcatctgattgtgttgttacata catagatatagatctgttatatcatttttttattaattgtgtatatatatatgtgcatagatctggattacatgatt gtgattatttacatgattttgttatttacgtatgtatatatgtagatctggactttttggagttgttgacttgattg tatttgtgtgtgtatatgtgtgttctgatcttgatatgttatgtatgtgcagccaaggctacgggcgatccac catgtctccggagaggagaccagttgagattaggccagctacagcagctgatatggccgcggtttgtg atatcgttaaccattacattgagacgtctacagtgaactttaggacagagccacaaacaccacaagagt ggattgatgatctagagaggttgcaagatagatacccttggttggttgctgaggttgagggtgttgtggc tggtattgcttacgctgggccctggaaggctaggaacgcttacgattggacagttgagagtactgtttac gtgtcacataggcatcaaaggttgggcctaggttccacattgtacacacatttgcttaagtctatggagg cgcaaggttttaagtctgtggttgctgttataggccttccaaacgatccatctgttaggttgcatgaggctt tgggatacacagcccggggtacattgcgcgcagctggatacaagcatggtggatggcatgatgttgg tttttggcaaagggattttgagttgccagctcctccaaggccagttaggccagttacccagatctgagtc gaccgaatgagttccaagatggtttgtgacgaagttagttggttgtttttatggaactttgtttaagctagct tgtaatgtggaaagaacgtgtggctttgtggtttttaaatgttggtgaataaagatgtttcctttggattaact agtatttttcctattggtttcatggttttagcacacaacattttaaatatgctgttagatgatatgctgcctgctt tattatttacttacccctcaccttcagtttcaaagttgttgcaatgactctgtgtagtttaagatcgagtgaaa gtagattttgtctatatttattaggggtatttgatatgctaatggtaaacatggtttatgacagcgtacttttttg gttatggtgttgacgtttccttttaaacattatagtagcgtccttggtctgtgttcattggttgaacaaaggca cactcacttggagatgccgtctccactgatatttgaacaaa 採用這個構建序列的紅花的轉化由SemBioSys Genetics Inc.(Calgary，Canada)公司完成。SemBioSys Genetics Inc.公司採用的技術可參考WO 2004/111244，這個專利因為整體被引用而被合併於此。轉基因植物是生長的，是收穫種子的。
從轉基因植物中收集種子，採用″Official Methods andRecommended Practices of the AOC S″，5th Ed.，Method Ce 1-62，American Oil Chemists SocietyChampaign，Illinois(1997)中所描述方法的改進方法，由氣相色譜法確定脂肪酸組分。
如表9所示，S.diclina中表達Δ6去飽和酶的pSBS4119轉基因系的T1種子中GLA 濃度範圍是11.41％(4119-23-1)～72.89％(4119-21-3)。在轉基因系中可獲得60％以上濃度的GLA。因為T1系是分離的，由於無效的插入雜合型和插入純合型，單粒種子樣品的測量可出現一些差異。在Centennialcontrols和零控系中不存在GLA。Centennial中天然含有高濃度的LA，Centennial中的GLA濃度只能通過Δ6去飽和酶的表達來提高 表9Centennial中表達pSBS4119構建序列的T1種子的單粒種子脂肪酸組成(百分數表示)。
實施例3質粒pSBS4763和表達這個質粒的轉基因植物 圖10顯示的是Mortierella alpina中用於表達Δ6去飽和酶的構建序列圖。這個構建序列的植物可選標記是pat，pat對應於綠色產色鏈黴菌中的pat基因。構建序列的細菌標記是SpecR。該構建這個載體的基本雙元載體為pPZP200的衍生物。參見Hajduklewicz et al.Plant Mol Biol25989，1994。含於pPZP200質粒邊界序列中的插入序列如下所述。
質粒PSBS4763(帶有pat標記的M.diclinaΔ6去飽和酶表達盒子)(SEQ ID NO3) ctgcaggaattcgatctctattgattcaaattacgatctgatactgataacgtctagatttttagggt taaagcaatcaatcacctgacgattcaaggtggttggatcatgacgattccagaaaacatcaagcaagc tctcaaagctacactctttgggatcatactgaactctaacaacctcgttatgtcccgtagtgccagtacag acatcctcgtaactcggattgtgcacgatgccatgactatacccaacctcggtcttggtcacaccagga actctctggtaagctagctccactccccagaaacaaccggcgccaaattgcgcgaattgctgacctga agacggaacatcatcgtcgggtccttgggcgattgcggcggaagatgggtcagcttgggcttgagga cgagacccgaatccgagtctgttgaaaaggttgttcattggggatttgtatacggagattggtcgtcgag aggtttgagggaaaggacaaatgggtttggctctggagaaagagagtgcggctttagagagagaatt gagaggtttagagagagatgcggcggcgatgagcggaggagagacgacgaggacctgcattatca aagcagtgacgtggtgaaatttggaacttttaagaggcagatagatttattatttgtatccattttcttcattg ttctagaatgtcgcggaacaaattttaaaactaaatcctaaatttttctaattttgttgccaatagtggatatg tgggccgtatagaaggaatctattgaaggcccaaacccatactgacgagcccaaaggttcgttttgcgt tttatgtttcggttcgatgccaacgccacattctgagctaggcaaaaaacaaacgtgtctttgaatagact cctctcgttaacacatgcagcggctgcatggtgacgccattaacacgtggcctacaattgcatgatgtct ccattgacacgtgacttctcgtctcctttcttaatatatctaacaaacactcctacctcttccaaaatatatac acatctttttgatcaatctctcattcaaaatctcattctctctagtaaacaagaacaaaaaaccatggctgct gctcccagtgtgaggacgtttactcgggccgaggttttgaatgccgaggctctgaatgagggcaagaa ggatgccgaggcacccttcttgatgatcatcgacaacaaggtgtacgatgtccgcgagttcgtccctga tcatcccggtggaagtgtgattctcacgcacgttggcaaggacggcactgacgtctttgacacttttcac cccgaggctgcttgggagactcttgccaacttttacgttggtgatattgacgagagcgaccgcgatatc aagaatgatgactttgcggccgaggtccgcaagctgcgtaccttgttccagtctcttggttactacgattc ttccaaggcatactacgccttcaaggtctcgttcaacctctgcatctggggtttgtcgacggtcattgtgg ccaagtggggccagacctcgaccctcgccaacgtgctctcggctgcgcttttgggtctgttctggcag cagtgcggatggttggctcacgactttttgcatcaccaggtcttccaggaccgtttctggggtgatctttt cggcgccttcttgggaggtgtctgccagggcttctcgtcctcgtggtggaaggacaagcacaacactc accacgccgcccccaacgtccacggcgaggatcccgacattgacacccaccctctgttgacctggag tgagcatgcgttggagatgttctcggatgtcccagatgaggagctgacccgcatgtggtcgcgtttcat ggtcctgaaccagacctggttttacttccccattctctcgtttgcccgtctctcctggtgcctccagtccatt ctctttgtgctgcctaacggtcaggcccacaagccctcgggcgcgcgtgtgcccatctcgttggtcga gcagctgtcgcttgcgatgcactggacctggtacctcgccaccatgttcctgttcatcaaggatcccgtc aacatgctggtgtactttttggtgtcgcaggcggtgtgcggaaacttgttggcgatcgtgttctcgctcaa ccacaacggtatgcctgtgatctcgaaggaggaggcggtcgatatggatttcttcacgaagcagatca tcacgggtcgtgatgtccacccgggtctatttgccaactggttcacgggtggattgaactatcagatcga gcaccacttgttcccttcgatgcctcgccacaacttttcaaagatccagcctgctgtcgagaccctgtgc aaaaagtacaatgtccgataccacaccaccggtatgatcgagggaactgcagaggtctttagccgtct gaacgaggtctccaaggctgcctccaagatgggtaaggcgcagtaagcttgttaccccactgatgtca tcgtcatagtccaataactccaatgtcggggagttagtttatgaggaataaagtgtttagaatttgatcag ggggagataataaaagccgagtttgaatctttttgttataagtaatgtttatgtgtgtttctatatgttgtcaa atggtcccatgtttttcttcctctctttttgtaacttgcaagtgttgtgttgtactttatttggcttctttgtaagtt ggtaacggtggtctatatatggaaaaggtcttgttttgttaaacttatgttagttaactggattcgtctttaac cacaaaaagttttcaataagctacaaatttagacacgcaagccgatgcagtcattagtacatatatttattg caagtgattacatggcaacccaaacttcaaaaacagtaggttgctccatttagtaacctgaattgcctcct gattctagttgatcccggtaccgaattcgaatccaaaaattacggatatgaatataggcatatccgtatcc gaattatccgtttgacagctagcaacgattgtacaattgcttctttaaaaaaggaagaaagaaagaaaga aaagaatcaacatcagcgttaacaaacggccccgttacggcccaaacggtcatatagagtaacggcg ttaagcgttgaaagactcctatcgaaatacgtaaccgcaaacgtgtcatagtcagatcccctcttccttca ccgcctcaaacacaaaaataatcttctacagcctatatatacaacccccccttctatctctcctttctcaca attcatcatctttctttctctacccccaattttaagaaatcctctcttctcctcttcattttcaaggtaaatctctc tctctctctctctctctgttattccttgttttaattaggtatgtattattgctagtttgttaatctgcttatcttatgta tgccttatgtgaatatctttatcttgttcatctcatccgtttagaagctataaatttgttgatttgactgtgtatct acacgtggttatgtttatatctaatcagatatgaatttcttcatattgttgcgtttgtgtgtaccaatccgaaat cgttgatttttttcatttaatcgtgtagctaattgtacgtatacatatggatctacgtatcaattgttcatctgttt gtgtttgtatgtatacagatctgaaaacatcacttctctcatctgattgtgttgttacatacatagatatagat ctgttatatcatttttttattaattgtgtatatatatatgtgcatagatctggattacatgattgtgattatttacat gattttgttatttacgtatgtatatatgtagatctggactttttggagttgttgacttgattgtatttgtgtgtgtat atgtgtgttctgatcttgatatgttatgtatgtgcagccaaggctacgggcgatccaccatgtctccggag aggagaccagttgagattaggccagctacagcagctgatatggccgcggtttgtgatatcgttaaccat tacattgagacgtctacagtgaactttaggacagagccacaaacaccacaagagtggattgatgatcta gagaggttgcaagatagatacccttggttggttgctgaggttgagggtgttgtggctggtattgcttacg ctgggccctggaaggctaggaacgcttacgattggacagttgagagtactgtttacgtgtcacataggc atcaaaggttgggcctaggttccacattgtacacacatttgcttaagtctatggaggcgcaaggttttaag tctgtggttgctgttataggccttccaaacgatccatctgttaggttgcatgaggctttgggatacacagc ccggggtacattgcgcgcagctggatacaagcatggtggatggcatgatgttggtttttggcaaaggg attttgagttgccagctcctccaaggccagttaggccagttacccagatctgagtcgaccgaatgagttc caagatggtttgtgacgaagttagttggttgtttttatggaactttgtttaagctagcttgtaatgtggaaag aacgtgtggctttgtggtttttaaatgttggtgaataaagatgtttcctttggattaactagtatttttcctattg gtttcatggttttagcacacaacattttaaatatgctgttagatgatatgctgcctgctttattatttacttaccc ctcaccttcagtttcaaagttgttgcaatgactctgtgtagtttaagatcgagtgaaagtagattttgtctata tttattaggggtatttgatatgctaatggtaaacatggtttatgacagcgtacttttttggttatggtgttgac gtttccttttaaacattatagtagcgtccttggtctgtgttcattggttgaacaaaggcacactcacttggag atgccgtctccactgatatttgaaca 採用這個構建序列的紅花的轉化由SemBioSys Genetics Inc.(Calgary，Canada)公司完成。SemBioSys Genetics Inc.公司採用的技術可參考WO 2004/111244，這個專利因為整體被引用而被合併於此。轉基因植物是生長的，且可以收穫種子。
從轉基因植物中收集種子，採用″Official Methods andRecommended Practices of the AOCS″，5th Ed.，Method Ce 1-62，American Oil Chemists SocietyChampaign，Illinois(1997)中所描述方法的改進方法，由氣相色譜法確定脂肪酸組分。
如表10所示，M.diclina中表達Δ6去飽和酶的pSBS4763轉基因系的T1種子中GLA 濃度範圍是7.8％(4763-13-2)～50.19％(4763-28-1)。因為T1重複片段是分離的，由於無效的插入雜合型和插入純合型，單粒種子樣品的測量可出現一些差異。在Centennial controls和零控系中，GLA的濃度為0.05或更低。Centennial中天然含有高濃度的LA，Centennial中的GLA濃度只能通過Δ6去飽和酶的表達來提高。
表10Centennial中表達的pSBS4763構建序列的T1種子的單粒種子的脂肪酸組成。
這些數據表明多種來源的Δ6去飽和酶可用於增加紅花中GLA的產量。天然含有高含量LA的植物如Centennial中Δ6去飽和酶的轉基因表達對於增加GLA的含量是有效的。
序列表
阿凱迪亞生物科學公司
可耐福·維克·C
克裡斯廷·休梅克
弗利德·弗蘭克·J
艾姆雷·唐納德
雷·埃裡克
高γ-亞麻酸紅花
595792000840
US 60/684,134
2005-05-23
US 60/735,984
2005-11-10
19
FastSEQ for Windows Version 4.0
1
7803
DNA
Artificial Sequence

Plasmid pSBS4766
1
ctgcaggaat tcgatctcta ttgattcaaa ttacgatctg atactgataa cgtctagatt 60
tttagggtta aagcaatcaa tcacctgacg attcaaggtg gttggatcat gacgattcca 120
gaaaacatca agcaagctct caaagctaca ctctttggga tcatactgaa ctctaacaac 180
ctcgttatgt cccgtagtgc cagtacagac atcctcgtaa ctcggattgt gcacgatgcc 240
atgactatac ccaacctcgg tcttggtcac accaggaact ctctggtaag ctagctccac 300
tccccagaaa caaccggcgc caaattgcgc gaattgctga cctgaagacg gaacatcatc 360
gtcgggtcct tgggcgattg cggcggaaga tgggtcagct tgggcttgag gacgagaccc 420
gaatccgagt ctgttgaaaa ggttgttcat tggggatttg tatacggaga ttggtcgtcg 480
agaggtttga gggaaaggac aaatgggttt ggctctggag aaagagagtg cggctttaga 540
gagagaattg agaggtttag agagagatgc ggcggcgatg agcggaggag agacgacgag 600
gacctgcatt atcaaagcag tgacgtggtg aaatttggaa cttttaagag gcagatagat 660
ttattatttg tatccatttt cttcattgtt ctagaatgtc gcggaacaaa ttttaaaact 720
aaatcctaaa tttttctaat tttgttgcca atagtggata tgtgggccgt atagaaggaa 780
tctattgaag gcccaaaccc atactgacga gcccaaaggt tcgttttgcg ttttatgttt 840
cggttcgatg ccaacgccac attctgagct aggcaaaaaa caaacgtgtc tttgaataga 900
ctcctctcgt taacacatgc agcggctgca tggtgacgcc attaacacgt ggcctacaat 960
tgcatgatgt ctccattgac acgtgacttc tcgtctcctt tcttaatata tctaacaaac 1020
actcctacct cttccaaaat atatacacat ctttttgatc aatctctcat tcaaaatctc 1080
attctctcta gtaaacaaga acaaaaaacc atggctgctg ctcccagtgt gaggacgttt 1140
actcgggccg aggttttgaa tgccgaggct ctgaatgagg gcaagaagga tgccgaggca 1200
cccttcttga tgatcatcga caacaaggtg tacgatgtcc gcgagttcgt ccctgatcat 1260
cccggtggaa gtgtgattct cacgcacgtt ggcaaggacg gcactgacgt ctttgacact 1320
tttcaccccg aggctgcttg ggagactctt gccaactttt acgttggtga tattgacgag 1380
agcgaccgcg atatcaagaa tgatgacttt gcggccgagg tccgcaagct gcgtaccttg 1440
ttccagtctc ttggttacta cgattcttcc aaggcatact acgccttcaa ggtctcgttc 1500
aacctctgca tctggggttt gtcgacggtc attgtggcca agtggggcca gacctcgacc 1560
ctcgccaacg tgctctcggc tgcgcttttg ggtctgttct ggcagcagtg cggatggttg 1620
gctcacgact ttttgcatca ccaggtcttc caggaccgtt tctggggtga tcttttcggc 1680
gccttcttgg gaggtgtctg ccagggcttc tcgtcctcgt ggtggaagga caagcacaac 1740
actcaccacg ccgcccccaa cgtccacggc gaggatcccg acattgacac ccaccctctg 1800
ttgacctgga gtgagcatgc gttggagatg ttctcggatg tcccagatga ggagctgacc 1860
cgcatgtggt cgcgtttcat ggtcctgaac cagacctggt tttacttccc cattctctcg 1920
tttgcccgtc tctcctggtg cctccagtcc attctctttg tgctgcctaa cggtcaggcc 1980
cacaagccct cgggcgcgcg tgtgcccatc tcgttggtcg agcagctgtc gcttgcgatg 2040
cactggacct ggtacctcgc caccatgttc ctgttcatca aggatcccgt caacatgctg 2100
gtgtactttt tggtgtcgca ggcggtgtgc ggaaacttgt tggcgatcgt gttctcgctc 2160
aaccacaacg gtatgcctgt gatctcgaag gaggaggcgg tcgatatgga tttcttcacg 2220
aagcagatca tcacgggtcg tgatgtccac ccgggtctat ttgccaactg gttcacgggt 2280
ggattgaact atcagatcga gcaccacttg ttcccttcga tgcctcgcca caacttttca 2340
aagatccagc ctgctgtcga gaccctgtgc aaaaagtaca atgtccgata ccacaccacc 2400
ggtatgatcg agggaactgc agaggtcttt agccgtctga acgaggtctc caaggctgcc 2460
tccaagatgg gtaaggcgca gtaagcttgt taccccactg atgtcatcgt catagtccaa 2520
taactccaat gtcggggagt tagtttatga ggaataaagt gtttagaatt tgatcagggg 2580
gagataataa aagccgagtt tgaatctttt tgttataagt aatgtttatg tgtgtttcta 2640
tatgttgtca aatggtccca tgtttttctt cctctctttt tgtaacttgc aagtgttgtg 2700
ttgtacttta tttggcttct ttgtaagttg gtaacggtgg tctatatatg gaaaaggtct 2760
tgttttgtta aacttatgtt agttaactgg attcgtcttt aaccacaaaa agttttcaat 2820
aagctacaaa tttagacacg caagccgatg cagtcattag tacatatatt tattgcaagt 2880
gattacatgg caacccaaac ttcaaaaaca gtaggttgct ccatttagta acctgaattg 2940
cctcctgatt ctagttgatc ccggtaccga attccaggaa ttcgatctct attgattcaa 3000
attacgatct gatactgata acgtctagat ttttagggtt aaagcaatca atcacctgac 3060
gattcaaggt ggttggatca tgacgattcc agaaaacatc aagcaagctc tcaaagctac 3120
actctttggg atcatactga actctaacaa cctcgttatg tcccgtagtg ccagtacaga 3180
catcctcgta actcggattg tgcacgatgc catgactata cccaacctcg gtcttggtca 3240
caccaggaac tctctggtaa gctagctcca ctccccagaa acaaccggcg ccaaattgcg 3300
cgaattgctg acctgaagac ggaacatcat cgtcgggtcc ttgggcgatt gcggcggaag 3360
atgggtcagc ttgggcttga ggacgagacc cgaatccgag tctgttgaaa aggttgttca 3420
ttggggattt gtatacggag attggtcgtc gagaggtttg agggaaagga caaatgggtt 3480
tggctctgga gaaagagagt gcggctttag agagagaatt gagaggttta gagagagatg 3540
cggcggcgat gagcggagga gagacgacga ggacctgcat tatcaaagca gtgacgtggt 3600
gaaatttgga acttttaaga ggcagataga tttattattt gtatccattt tcttcattgt 3660
tctagaatgt cgcggaacaa attttaaaac taaatcctaa atttttctaa ttttgttgcc 3720
aatagtggat atgtgggccg tatagaagga atctattgaa ggcccaaacc catactgacg 3780
agcccaaagg ttcgttttgc gttttatgtt tcggttcgat gccaacgcca cattctgagc 3840
taggcaaaaa acaaacgtgt ctttgaatag actcctctcg ttaacacatg cagcggctgc 3900
atggtgacgc cattaacacg tggcctacaa ttgcatgatg tctccattga cacgtgactt 3960
ctcgtctcct ttcttaatat atctaacaaa cactcctacc tcttccaaaa tatatacaca 4020
tctttttgat caatctctca ttcaaaatct cattctctct agtaaacaag aacaaaaaac 4080
catggcacct cccaacacta tcgatgccgg tttgacccag cgtcatatca gcacctcggc 4140
cccaaactcg gccaagcctg ccttcgagcg caactaccag ctccccgagt tcaccatcaa 4200
ggagatccga gagtgcatcc ctgcccactg ctttgagcgc tccggtctcc gtggtctctg 4260
ccacgttgcc atcgatctga cttgggcgtc gctcttgttc ctggctgcga cccagatcga 4320
caagtttgag aatcccttga tccgctattt ggcctggcct gtttactgga tcatgcaggg 4380
tattgtctgc accggtgtct gggtgctggc tcacgagtgt ggtcatcagt ccttctcgac 4440
ctccaagacc ctcaacaaca cagttggttg gatcttgcac tcgatgctct tggtccccta 4500
ccactcctgg agaatctcgc actcgaagca ccacaaggcc actggccata tgaccaagga 4560
ccaggtcttt gtgcccaaga cccgctccca ggttggcttg cctcccaagg agaacgctgc 4620
tgctgccgtt caggaggagg acatgtccgt gcacctggat gaggaggctc ccattgtgac 4680
tttgttctgg atggtgatcc agttcttgtt cggatggccc gcgtacctga ttatgaacgc 4740
ctctggccaa gactacggcc gctggacctc gcacttccac acgtactcgc ccatctttga 4800
gccccgcaac tttttcgaca ttattatctc ggacctcggt gtgttggctg ccctcggtgc 4860
cctgatctat gcctccatgc agttgtcgct cttgaccgtc accaagtact atattgtccc 4920
ctacctcttt gtcaactttt ggttggtcct gatcaccttc ttgcagcaca ccgatcccaa 4980
gctgccccat taccgcgagg gtgcctggaa tttccagcgt ggagctcttt gcaccgttga 5040
ccgctcgttt ggcaagttct tggaccatat gttccacggc attgtccaca cccatgtggc 5100
ccatcacttg ttctcgcaaa tgccgttcta ccatgctgag gaagctacct atcatctcaa 5160
gaaactgctg ggagagtact atgtgtacga cccatccccg atcgtcgttg cggtctggag 5220
gtcgttccgt gagtgccgat tcgtggagga tcagggagac gtggtctttt tcaagaagta 5280
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tttatgagga ataaagtgtt tagaatttga tcagggggag ataataaaag ccgagtttga 5400
atctttttgt tataagtaat gtttatgtgt gtttctatat gttgtcaaat ggtcccatgt 5460
ttttcttcct ctctttttgt aacttgcaag tgttgtgttg tactttattt ggcttctttg 5520
taagttggta acggtggtct atatatggaa aaggtcttgt tttgttaaac ttatgttagt 5580
taactggatt cgtctttaac cacaaaaagt tttcaataag ctacaaattt agacacgcaa 5640
gccgatgcag tcattagtac atatatttat tgcaagtgat tacatggcaa cccaaacttc 5700
aaaaacagta ggttgctcca tttagtaacc tgaattgcct cctgattcta gttgatcccg 5760
gtgaatccaa aaattacgga tatgaatata ggcatatccg tatccgaatt atccgtttga 5820
cagctagcaa cgattgtaca attgcttctt taaaaaagga agaaagaaag aaagaaaaga 5880
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cgttaagcgt tgaaagactc ctatcgaaat acgtaaccgc aaacgtgtca tagtcagatc 6000
ccctcttcct tcaccgcctc aaacacaaaa ataatcttct acagcctata tatacaaccc 6060
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gaaatcctct cttctcctct tcattttcaa ggtaaatctc tctctctctc tctctctctg 6180
ttattccttg ttttaattag gtatgtatta ttgctagttt gttaatctgc ttatcttatg 6240
tatgccttat gtgaatatct ttatcttgtt catctcatcc gtttagaagc tataaatttg 6300
ttgatttgac tgtgtatcta cacgtggtta tgtttatatc taatcagata tgaatttctt 6360
catattgttg cgtttgtgtg taccaatccg aaatcgttga tttttttcat ttaatcgtgt 6420
agctaattgt acgtatacat atggatctac gtatcaattg ttcatctgtt tgtgtttgta 6480
tgtatacaga tctgaaaaca tcacttctct catctgattg tgttgttaca tacatagata 6540
tagatctgtt atatcatttt tttattaatt gtgtatatat atatgtgcat agatctggat 6600
tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt atgtatatat gtagatctgg 6660
actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta tatgtgtgtt ctgatcttga 6720
tatgttatgt atgtgcagcc aaggctacgg gcgatccacc atgtctccgg agaggagacc 6780
agttgagatt aggccagcta cagcagctga tatggccgcg gtttgtgata tcgttaacca 6840
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tgatgatcta gagaggttgc aagatagata cccttggttg gttgctgagg ttgagggtgt 6960
tgtggctggt attgcttacg ctgggccctg gaaggctagg aacgcttacg attggacagt 7020
tgagagtact gtttacgtgt cacataggca tcaaaggttg ggcctaggtt ccacattgta 7080
cacacatttg cttaagtcta tggaggcgca aggttttaag tctgtggttg ctgttatagg 7140
ccttccaaac gatccatctg ttaggttgca tgaggctttg ggatacacag cccggggtac 7200
attgcgcgca gctggataca agcatggtgg atggcatgat gttggttttt ggcaaaggga 7260
ttttgagttg ccagctcctc caaggccagt taggccagtt acccagatct gagtcgaccg 7320
aatgagttcc aagatggttt gtgacgaagt tagttggttg tttttatgga actttgttta 7380
agctagcttg taatgtggaa agaacgtgtg gctttgtggt ttttaaatgt tggtgaataa 7440
agatgtttcc tttggattaa ctagtatttt tcctattggt ttcatggttt tagcacacaa 7500
cattttaaat atgctgttag atgatatgct gcctgcttta ttatttactt acccctcacc 7560
ttcagtttca aagttgttgc aatgactctg tgtagtttaa gatcgagtga aagtagattt 7620
tgtctatatt tattaggggt atttgatatg ctaatggtaa acatggttta tgacagcgta 7680
cttttttggt tatggtgttg acgtttcctt ttaaacatta tagtagcgtc cttggtctgt 7740
gttcattggt tgaacaaagg cacactcact tggagatgcc gtctccactg atatttgaac 7800
aaa 7803
2
5003
DNA
Artificial Sequence

Plasmid pSBS4119
2
ctgcaggaat tcgatctcta ttgattcaaa ttacgatctg atactgataa cgtctagatt 60
tttagggtta aagcaatcaa tcacctgacg attcaaggtg gttggatcat gacgattcca 120
gaaaacatca agcaagctct caaagctaca ctctttggga tcatactgaa ctctaacaac 180
ctcgttatgt cccgtagtgc cagtacagac atcctcgtaa ctcggattgt gcacgatgcc 240
atgactatac ccaacctcgg tcttggtcac accaggaact ctctggtaag ctagctccac 300
tccccagaaa caaccggcgc caaattgcgc gaattgctga cctgaagacg gaacatcatc 360
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gaatccgagt ctgttgaaaa ggttgttcat tggggatttg tatacggaga ttggtcgtcg 480
agaggtttga gggaaaggac aaatgggttt ggctctggag aaagagagtg cggctttaga 540
gagagaattg agaggtttag agagagatgc ggcggcgatg agcggaggag agacgacgag 600
gacctgcatt atcaaagcag tgacgtggtg aaatttggaa cttttaagag gcagatagat 660
ttattatttg tatccatttt cttcattgtt ctagaatgtc gcggaacaaa ttttaaaact 720
aaatcctaaa tttttctaat tttgttgcca atagtggata tgtgggccgt atagaaggaa 780
tctattgaag gcccaaaccc atactgacga gcccaaaggt tcgttttgcg ttttatgttt 840
cggttcgatg ccaacgccac attctgagct aggcaaaaaa caaacgtgtc tttgaataga 900
ctcctctcgt taacacatgc agcggctgca tggtgacgcc attaacacgt ggcctacaat 960
tgcatgatgt ctccattgac acgtgacttc tcgtctcctt tcttaatata tctaacaaac 1020
actcctacct cttccaaaat atatacacat ctttttgatc aatctctcat tcaaaatctc 1080
attctctcta gtaaacaaga acaaaaaacc atggtccagg ggcaaaaggc cgagaagatc 1140
tcgtgggcga ccatccgtga gcacaaccgc caagacaacg cgtggatcgt gatccaccac 1200
aaggtgtacg acatctcggc ctttgaggac cacccgggcg gcgtcgtcat gttcacgcag 1260
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tcggacgagg tcaagaagag ccagtcggac ttcattgcgt cgtaccgcaa gctgcgcctt 1440
gaagtcaagc gcctcggctt gtacgactcg agcaagctct actacctcta caagtgcgcc 1500
tcgacgctga gcattgcgct tgtgtcggcg gccatttgcc tccactttga ctcgacggcc 1560
atgtacatgg tcgcggctgt catccttggc ctcttttacc agcagtgcgg ctggctcgcc 1620
catgactttc tgcaccacca agtgtttgag aaccacttgt ttggcgacct cgtcggcgtc 1680
atggtcggca acctctggca gggcttctcg gtgcagtggt ggaagaacaa gcacaacacg 1740
caccatgcga tccccaacct ccacgcgacg cccgagatcg ccttccacgg cgacccggac 1800
attgacacga tgccgattct cgcgtggtcg ctcaagatgg cgcagcacgc ggtcgactcg 1860
cccgtcgggc tcttcttcat gcgctaccaa gcgtacctgt actttcccat cttgctcttt 1920
gcgcgtatct cgtgggtgat ccagtcggcc atgtacgcct tctacaacgt tgggcccggc 1980
ggcacctttg acaaggtcca gtacccgctg ctcgagcgcg ccggcctcct cctctactac 2040
ggctggaacc tcggccttgt gtacgcagcc aacatgtcgc tgctccaagc ggctgcgttc 2100
ctctttgtga gccaggcgtc gtgcggcctc ttcctcgcga tggtctttag cgtcggccac 2160
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tcgacgcgca acgtgacgtc gtcgctctgg atcgactggt tcatgggcgg cctcaactac 2280
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ctcgtcaagt cgctctgcaa gcagtacgac atcccatacc acgagacggg cttcatcgcg 2400
ggcatggccg aggtcgtcgt gcacctcgag cgcatctcga tcgagttctt caaggagttt 2460
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cggggagtta gtttatgagg aataaagtgt ttagaatttg atcaggggga gataataaaa 2580
gccgagtttg aatctttttg ttataagtaa tgtttatgtg tgtttctata tgttgtcaaa 2640
tggtcccatg tttttcttcc tctctttttg taacttgcaa gtgttgtgtt gtactttatt 2700
tggcttcttt gtaagttggt aacggtggtc tatatatgga aaaggtcttg ttttgttaaa 2760
cttatgttag ttaactggat tcgtctttaa ccacaaaaag ttttcaataa gctacaaatt 2820
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acccaaactt caaaaacagt aggttgctcc atttagtaac ctgaattgcc tcctgattct 2940
agttgatccc ggtaccgaat tcgaatccaa aaattacgga tatgaatata ggcatatccg 3000
tatccgaatt atccgtttga cagctagcaa cgattgtaca attgcttctt taaaaaagga 3060
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aaacgtgtca tagtcagatc ccctcttcct tcaccgcctc aaacacaaaa ataatcttct 3240
acagcctata tatacaaccc ccccttctat ctctcctttc tcacaattca tcatctttct 3300
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tttttttcat ttaatcgtgt agctaattgt acgtatacat atggatctac gtatcaattg 3660
ttcatctgtt tgtgtttgta tgtatacaga tctgaaaaca tcacttctct catctgattg 3720
tgttgttaca tacatagata tagatctgtt atatcatttt tttattaatt gtgtatatat 3780
atatgtgcat agatctggat tacatgattg tgattattta catgattttg ttatttacgt 3840
atgtatatat gtagatctgg actttttgga gttgttgact tgattgtatt tgtgtgtgta 3900
tatgtgtgtt ctgatcttga tatgttatgt atgtgcagcc aaggctacgg gcgatccacc 3960
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ggcctaggtt ccacattgta cacacatttg cttaagtcta tggaggcgca aggttttaag 4320
tctgtggttg ctgttatagg ccttccaaac gatccatctg ttaggttgca tgaggctttg 4380
ggatacacag cccggggtac attgcgcgca gctggataca agcatggtgg atggcatgat 4440
gttggttttt ggcaaaggga ttttgagttg ccagctcctc caaggccagt taggccagtt 4500
acccagatct gagtcgaccg aatgagttcc aagatggttt gtgacgaagt tagttggttg 4560
tttttatgga actttgttta agctagcttg taatgtggaa agaacgtgtg gctttgtggt 4620
ttttaaatgt tggtgaataa agatgtttcc tttggattaa ctagtatttt tcctattggt 4680
ttcatggttt tagcacacaa cattttaaat atgctgttag atgatatgct gcctgcttta 4740
ttatttactt acccctcacc ttcagtttca aagttgttgc aatgactctg tgtagtttaa 4800
gatcgagtga aagtagattt tgtctatatt tattaggggt atttgatatg ctaatggtaa 4860
acatggttta tgacagcgta cttttttggt tatggtgttg acgtttcctt ttaaacatta 4920
tagtagcgtc cttggtctgt gttcattggt tgaacaaagg cacactcact tggagatgcc 4980
gtctccactg atatttgaac aaa 5003
3
5013
DNA
Artificial Sequence

Plasmid pSBS4763
3
ctgcaggaat tcgatctcta ttgattcaaa ttacgatctg atactgataa cgtctagatt 60
tttagggtta aagcaatcaa tcacctgacg attcaaggtg gttggatcat gacgattcca 120
gaaaacatca agcaagctct caaagctaca ctctttggga tcatactgaa ctctaacaac 180
ctcgttatgt cccgtagtgc cagtacagac atcctcgtaa ctcggattgt gcacgatgcc 240
atgactatac ccaacctcgg tcttggtcac accaggaact ctctggtaag ctagctccac 300
tccccagaaa caaccggcgc caaattgcgc gaattgctga cctgaagacg gaacatcatc 360
gtcgggtcct tgggcgattg cggcggaaga tgggtcagct tgggcttgag gacgagaccc 420
gaatccgagt ctgttgaaaa ggttgttcat tggggatttg tatacggaga ttggtcgtcg 480
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aaatcctaaa tttttctaat tttgttgcca atagtggata tgtgggccgt atagaaggaa 780
tctattgaag gcccaaaccc atactgacga gcccaaaggt tcgttttgcg ttttatgttt 840
cggttcgatg ccaacgccac attctgagct aggcaaaaaa caaacgtgtc tttgaataga 900
ctcctctcgt taacacatgc agcggctgca tggtgacgcc attaacacgt ggcctacaat 960
tgcatgatgt ctccattgac acgtgacttc tcgtctcctt tcttaatata tctaacaaac 1020
actcctacct cttccaaaat atatacacat ctttttgatc aatctctcat tcaaaatctc 1080
attctctcta gtaaacaaga acaaaaaacc atggctgctg ctcccagtgt gaggacgttt 1140
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agcgaccgcg atatcaagaa tgatgacttt gcggccgagg tccgcaagct gcgtaccttg 1440
ttccagtctc ttggttacta cgattcttcc aaggcatact acgccttcaa ggtctcgttc 1500
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ctcgccaacg tgctctcggc tgcgcttttg ggtctgttct ggcagcagtg cggatggttg 1620
gctcacgact ttttgcatca ccaggtcttc caggaccgtt tctggggtga tcttttcggc 1680
gccttcttgg gaggtgtctg ccagggcttc tcgtcctcgt ggtggaagga caagcacaac 1740
actcaccacg ccgcccccaa cgtccacggc gaggatcccg acattgacac ccaccctctg 1800
ttgacctgga gtgagcatgc gttggagatg ttctcggatg tcccagatga ggagctgacc 1860
cgcatgtggt cgcgtttcat ggtcctgaac cagacctggt tttacttccc cattctctcg 1920
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aaccacaacg gtatgcctgt gatctcgaag gaggaggcgg tcgatatgga tttcttcacg 2220
aagcagatca tcacgggtcg tgatgtccac ccgggtctat ttgccaactg gttcacgggt 2280
ggattgaact atcagatcga gcaccacttg ttcccttcga tgcctcgcca caacttttca 2340
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tccaagatgg gtaaggcgca gtaagcttgt taccccactg atgtcatcgt catagtccaa 2520
taactccaat gtcggggagt tagtttatga ggaataaagt gtttagaatt tgatcagggg 2580
gagataataa aagccgagtt tgaatctttt tgttataagt aatgtttatg tgtgtttcta 2640
tatgttgtca aatggtccca tgtttttctt cctctctttt tgtaacttgc aagtgttgtg 2700
ttgtacttta tttggcttct ttgtaagttg gtaacggtgg tctatatatg gaaaaggtct 2760
tgttttgtta aacttatgtt agttaactgg attcgtcttt aaccacaaaa agttttcaat 2820
aagctacaaa tttagacacg caagccgatg cagtcattag tacatatatt tattgcaagt 2880
gattacatgg caacccaaac ttcaaaaaca gtaggttgct ccatttagta acctgaattg 2940
cctcctgatt ctagttgatc ccggtaccga attcgaatcc aaaaattacg gatatgaata 3000
taggcatatc cgtatccgaa ttatccgttt gacagctagc aacgattgta caattgcttc 3060
tttaaaaaag gaagaaagaa agaaagaaaa gaatcaacat cagcgttaac aaacggcccc 3120
gttacggccc aaacggtcat atagagtaac ggcgttaagc gttgaaagac tcctatcgaa 3180
atacgtaacc gcaaacgtgt catagtcaga tcccctcttc cttcaccgcc tcaaacacaa 3240
aaataatctt ctacagccta tatatacaac ccccccttct atctctcctt tctcacaatt 3300
catcatcttt ctttctctac ccccaatttt aagaaatcct ctcttctcct cttcattttc 3360
aaggtaaatc tctctctctc tctctctctc tgttattcct tgttttaatt aggtatgtat 3420
tattgctagt ttgttaatct gcttatctta tgtatgcctt atgtgaatat ctttatcttg 3480
ttcatctcat ccgtttagaa gctataaatt tgttgatttg actgtgtatc tacacgtggt 3540
tatgtttata tctaatcaga tatgaatttc ttcatattgt tgcgtttgtg tgtaccaatc 3600
cgaaatcgtt gatttttttc atttaatcgt gtagctaatt gtacgtatac atatggatct 3660
acgtatcaat tgttcatctg tttgtgtttg tatgtataca gatctgaaaa catcacttct 3720
ctcatctgat tgtgttgtta catacataga tatagatctg ttatatcatt tttttattaa 3780
ttgtgtatat atatatgtgc atagatctgg attacatgat tgtgattatt tacatgattt 3840
tgttatttac gtatgtatat atgtagatct ggactttttg gagttgttga cttgattgta 3900
tttgtgtgtg tatatgtgtg ttctgatctt gatatgttat gtatgtgcag ccaaggctac 3960
gggcgatcca ccatgtctcc ggagaggaga ccagttgaga ttaggccagc tacagcagct 4020
gatatggccg cggtttgtga tatcgttaac cattacattg agacgtctac agtgaacttt 4080
aggacagagc cacaaacacc acaagagtgg attgatgatc tagagaggtt gcaagataga 4140
tacccttggt tggttgctga ggttgagggt gttgtggctg gtattgctta cgctgggccc 4200
tggaaggcta ggaacgctta cgattggaca gttgagagta ctgtttacgt gtcacatagg 4260
catcaaaggt tgggcctagg ttccacattg tacacacatt tgcttaagtc tatggaggcg 4320
caaggtttta agtctgtggt tgctgttata ggccttccaa acgatccatc tgttaggttg 4380
catgaggctt tgggatacac agcccggggt acattgcgcg cagctggata caagcatggt 4440
ggatggcatg atgttggttt ttggcaaagg gattttgagt tgccagctcc tccaaggcca 4500
gttaggccag ttacccagat ctgagtcgac cgaatgagtt ccaagatggt ttgtgacgaa 4560
gttagttggt tgtttttatg gaactttgtt taagctagct tgtaatgtgg aaagaacgtg 4620
tggctttgtg gtttttaaat gttggtgaat aaagatgttt cctttggatt aactagtatt 4680
tttcctattg gtttcatggt tttagcacac aacattttaa atatgctgtt agatgatatg 4740
ctgcctgctt tattatttac ttacccctca ccttcagttt caaagttgtt gcaatgactc 4800
tgtgtagttt aagatcgagt gaaagtagat tttgtctata tttattaggg gtatttgata 4860
tgctaatggt aaacatggtt tatgacagcg tacttttttg gttatggtgt tgacgtttcc 4920
ttttaaacat tatagtagcg tccttggtct gtgttcattg gttgaacaaa ggcacactca 4980
cttggagatg ccgtctccac tgatatttga aca 5013
4
448
PRT
Borago officinalis
4
Met Ala Ala Gln Ile Lys Lys Tyr Ile Thr Ser Asp Glu Leu Lys Asn
15 10 15
His Asp Lys Pro Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile Gln Gly Lys Ala Tyr
20 25 30
Asp Val Ser Asp Trp Val Lys Asp His Pro Gly Gly Ser Phe Pro Leu
35 40 45
Lys Ser Leu Ala Gly Gln Glu Val Thr Asp Ala Phe Val Ala Phe His
50 55 60
Pro Ala Ser Thr Trp Lys Asn Leu Asp Lys Phe Phe Thr Gly Tyr Tyr
65 70 75 80
Leu Lys Asp Tyr Ser Val Ser Glu Val Ser Lys Asp Tyr Arg Lys Leu
85 90 95
Val Phe Glu Phe Ser Lys Met Gly Leu Tyr Asp Lys Lys Gly His Ile
100105110
Met Phe Ala Thr Leu Cys Phe Ile Ala Met Leu Phe Ala Met Ser Val
115 120125
Tyr Gly Val Leu Phe Cys Glu Gly Val Leu Val His Leu Phe Ser Gly
130 135 140
Cys Leu Met Gly Phe Leu Trp Ile Gln Ser Gly Trp Ile Gly His Asp
145150 155 160
Ala Gly His Tyr Met Val Val Ser Asp Ser Arg Leu Asn Lys Phe Met
165 170 175
Gly Ile Phe Ala Ala Asn Cys Leu Ser Gly Ile Ser Ile Gly Trp Trp
180185 190
Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys Asn Ser Leu Glu Tyr
195 200 205
Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Phe Leu Val Val Ser Ser Lys Phe
210 215 220
Phe Gly Ser Leu Thr Ser His Phe Tyr Glu Lys Arg Leu Thr Phe Asp
225 230 235 240
Ser Leu Ser Arg Phe Phe Val Ser Tyr Gln His Trp Thr Phe Tyr Pro
245 250 255
Ile Met Cys Ala Ala Arg Leu Asn Met Tyr Val Gln Ser Leu Ile Met
260 265 270
Leu Leu Thr Lys Arg Asn Val Ser Tyr Arg Ala His Glu Leu Leu Gly
275 280285
Cys Leu Val Phe Ser Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Val Ser Cys Leu Pro
290 295 300
Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Val Ile Ala Ser Leu Ser Val Thr
305 310 315 320
Gly Met Gln Gln Val Gln Phe Ser Leu Asn His Phe Ser Ser Ser Val
325330 335
Tyr Val Gly Lys Pro Lys Gly Asn Asn Trp Phe Glu Lys Gln Thr Asp
340 345 350
Gly Thr Leu Asp Ile Ser Cys Pro Pro Trp Met Asp Trp Phe His Gly
355 360365
Gly Leu Gln Phe Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Lys Met Pro Arg
370 375 380
Cys Asn Leu Arg Lys Ile Ser Pro Tyr Val Ile Glu Leu Cys Lys Lys
385390 395 400
His Asn Leu Pro Tyr Asn Tyr Ala Ser Phe Ser Lys Ala Asn Glu Met
405 410 415
Thr Leu Arg Thr Leu Arg Asn Thr Ala Leu Gln Ala Arg Asp Ile Thr
420 425 430
Lys Pro Leu Pro Lys Asn Leu Val Trp Glu Ala Leu His Thr His Gly
435 440445
5
453
PRT
Primula farinosa
5
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1 5 10 15
Ser Asp Leu Lys Ser His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
20 25 30
His Gly Gln Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Ala Leu His Pro Gly
35 40 45
Gly Thr Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
50 55 60
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65 70 75 80
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
85 90 95
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu Asp Asn Phe His Lys His Gly Leu Phe Arg
100105 110
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Phe Met Ile Ala Met
115 120 125
Phe Leu Met Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
130 135 140
His Leu Ala Ser Gly Gly Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145 150 155160
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
165 170175
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Ile Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
180 185 190
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
195 200 205
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
210 215 220
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225 230 235240
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
245 250 255
Trp Thr Phe tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Leu Ala
260 265 270
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Cys His Arg Ala
275 280 285
Gln Glu Val Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
290 295 300
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Gly Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305310 315 320
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
325 330335
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Gly Asn Asp Trp Phe
340 345350
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
355 360 365
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
370 375 380
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385 390 395400
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
405 410 415
Lys Ala Asn Val Phe Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
420 425 430
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Leu Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
435 440445
Leu Lys Thr Leu Gly
450
6
453
PRT
Primula vialli
6
Met Ala Asn Lys Ser Pro Pro Asn Pro Lys Thr Gly Tyr Ile Thr Ser
1 5 10 15
Ser Asp Leu Lys Gly His Asn Lys Ala Gly Asp Leu Trp Ile Ser Ile
20 25 30
His Gly Glu Val Tyr Asp Val Ser Ser Trp Ala Gly Leu His Pro Gly
35 40 45
Gly Ser Ala Pro Leu Met Ala Leu Ala Gly His Asp Val Thr Asp Ala
50 55 60
Phe Leu Ala Tyr His Pro Pro Ser Thr Ala Arg Leu Leu Pro Pro Leu
65 70 7580
Ser Thr Asn Leu Leu Leu Gln Asn His Ser Val Ser Pro Thr Ser Ser
85 90 95
Asp Tyr Arg Lys Leu Leu His Asn Phe His Lys Ile Gly Met Phe Arg
100105 110
Ala Arg Gly His Thr Ala Tyr Ala Thr Phe Val Ile Met Ile Val Met
115 120 125
Phe Leu Thr Ser Val Thr Gly Val Leu Cys Ser Asp Ser Ala Trp Val
130 135 140
His Leu Ala Ser Gly Ala Ala Met Gly Phe Ala Trp Ile Gln Cys Gly
145 150 155 160
Trp Ile Gly His Asp Ser Gly His Tyr Arg Ile Met Ser Asp Arg Lys
165 170175
Trp Asn Trp Phe Ala Gln Val Leu Ser Thr Asn Cys Leu Gln Gly Ile
180 185 190
Ser Ile Gly Trp Trp Lys Trp Asn His Asn Ala His His Ile Ala Cys
195 200205
Asn Ser Leu Asp Tyr Asp Pro Asp Leu Gln Tyr Ile Pro Leu Leu Val
210 215220
Val Ser Pro Lys Phe Phe Asn Ser Leu Thr Ser Arg Phe Tyr Asp Lys
225 230 235 240
Lys Leu Asn Phe Asp Gly Val Ser Arg Phe Leu Val Cys Tyr Gln His
245250 255
Trp Thr Phe Tyr Pro Val Met Cys Val Ala Arg Leu Asn Met Ile Ala
260265 270
Gln Ser Phe Ile Thr Leu Phe Ser Ser Arg Glu Val Gly His Arg Ala
275 280 285
Gln Glu Ile Phe Gly Leu Ala Val Phe Trp Val Trp Phe Pro Leu Leu
290 295 300
Leu Ser Cys Leu Pro Asn Trp Ser Glu Arg Ile Met Phe Leu Leu Ala
305 310 315 320
Ser Tyr Ser Val Thr Gly Ile Gln His Val Gln Phe Ser Leu Asn His
325330 335
Phe Ser Ser Asp Val Tyr Val Gly Pro Pro Val Ala Asn Asp Trp Phe
340 345350
Lys Lys Gln Thr Ala Gly Thr Leu Asn Ile Ser Cys Pro Ala Trp Met
355 360 365
Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Phe Gln Val Glu His His Leu Phe
370 375 380
Pro Arg Met Pro Arg Gly Gln Phe Arg Lys Ile Ser Pro Phe Val Arg
385 390 395 400
Asp Leu Cys Lys Lys His Asn Leu Pro Tyr Asn Ile Ala Ser Phe Thr
405 410415
Lys Ala Asn Val Leu Thr Leu Lys Thr Leu Arg Asn Thr Ala Ile Glu
420 425 430
Ala Arg Asp Leu Ser Asn Pro Thr Pro Lys Asn Met Val Trp Glu Ala
435 440445
Val His Thr His Gly
450
7
457
PRT
Mortierella alpina
7
Met Ala Ala Ala Pro Ser Val Arg Thr Phe Thr Arg Ala Glu Val Leu
1 5 10 15
Asn Ala Glu Ala Leu Asn Glu Gly Lys Lys Asp Ala Glu Ala Pro Phe
20 25 30
Leu Met Ile Ile Asp Asn Lys Val Tyr Asp Val Arg Glu Phe Val Pro
35 40 45
Asp His Pro Gly Gly Ser Val Ile Leu Thr His Val Gly Lys Asp Gly
50 55 60
Thr Asp Val Phe Asp Thr Phe His Pro Glu Ala Ala Trp Glu Thr Leu
6570 75 80
Ala Asn Phe Tyr Val Gly Asp Ile Asp Glu Ser Asp Arg Asp Ile Lys
85 90 95
Asn Asp Asp Phe Ala Ala Glu Val Arg Lys Leu Arg Thr Leu Phe Gln
100 105110
Ser Leu Gly Tyr Tyr Asp Ser Ser Lys Ala Tyr Tyr Ala Phe Lys Val
115 120 125
Ser Phe Asn Leu Cys Ile Trp Gly Leu Ser Thr Val Ile Val Ala Lys
130135 140
Trp Gly Gln Thr Ser Thr Leu Ala Asn Val Leu Ser Ala Ala Leu Leu
145 150 155160
Gly Leu Phe Trp Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His
165 170175
His Gln Val Phe Gln Asp Arg Phe Trp Gly Asp Leu Phe Gly Ala Phe
180185190
Leu Gly Gly Val Cys Gln Gly Phe Ser Ser Ser Trp Trp Lys Asp Lys
195 200 205
His Asn Thr His His Ala Ala Pro Asn Val His Gly Glu Asp Pro Asp
210 215 220
Ile Asp Thr His Pro Leu Leu Thr Trp Ser Glu His Ala Leu Glu Met
225 230 235 240
Phe Ser Asp Val Pro Asp Glu Glu Leu Thr Arg Met Trp Ser Arg Phe
245 250255
Met Val Leu Asn Gln Thr Trp Phe Tyr Phe Pro Ile Leu Ser Phe Ala
260 265 270
Arg Leu Ser Trp Cys Leu Gln Ser Ile Leu Phe Val Leu Pro Asn Gly
275 280 285
Gln Ala His Lys Pro Ser Gly Ala Arg Val Pro Ile Ser Leu Val Glu
290 295 300
Gln Leu Ser Leu Ala Met His Trp Thr Trp Tyr Leu Ala Thr Met Phe
305310315320
Leu Phe Ile Lys Asp Pro Val Asn Met Leu Val Tyr Phe Leu Val Ser
325330335
Gln Ala Val Cys Gly Asn Leu Leu Ala Ile Val Phe Ser Leu Asn His
340345 350
Asn Gly Met Pro Val Ile Ser Lys Glu Glu Ala Val Asp Met Asp Phe
355360 365
Phe Thr Lys Gln Ile Ile Thr Gly Arg Asp Val His Pro Gly Leu Phe
370 375 380
Ala Asn Trp Phe Thr Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu
385 390 395400
Phe Pro Ser Met Pro Arg His Asn Phe Ser Lys Ile Gln Pro Ala Val
405 410415
Glu Thr Leu Cys Lys Lys Tyr Asn Val Arg Tyr His Thr Thr Gly Met
420425 430
Ile Glu Gly Thr Ala Glu Val Phe Ser Arg Leu Asn Glu Val Ser Lys
435440445
Ala Ala Ser Lys Met Gly Lys Ala Gln
450 455
8
523
PRT
Mucor circinielloides
8
Met Pro Pro Asn Thr Ala Ala Asp Arg Leu Leu Ser Ser Thr Ser Thr
1 510 15
Arg Ser Ser Asn Ile Val Thr Glu Glu Lys Phe Gln Glu Leu Ile Lys
20 25 30
Gln Gly Asp Ser Val Phe Ile Tyr Glu Gln Lys Val Tyr Arg Val Asn
35 40 45
Asn Phe Met Ala Lys His Pro Gly Gly Glu Ala Ala Leu Arg Ser Ala
50 55 60
Leu Gly Arg Asp Val Thr Asp Glu Ile Arg Thr Met His Pro Pro Gln
65 707580
Val Tyr Glu Lys Met Ile Asn Leu Tyr Cys Ile Gly Asp Tyr Met Pro
85 9095
Asp Val Ile Arg Pro Ala Ser Met Lys Gln Gln His Thr Phe Thr Lys
100105 110
Pro Lys Glu Asp Lys Pro Val Leu Thr Ala Thr Trp Glu Gly Gly Phe
115120 125
Thr Val Gln Ala Tyr Asp Asp Ala Ile Gln Asp Leu His Lys His His
130 135 140
Ser His Asp Leu Ile Lys Asp Ala Val Leu Gln Lys Asp Leu Asn Gly
145 150 155160
Asp Gln Ile Arg Asn Ala Tyr Arg Lys Leu Glu Ala Glu Leu Tyr Ala
165170175
Lys Gly Leu Phe Lys Cys Asn Tyr Trp Lys Tyr Ala Arg Glu Gly Cys
180 185190
Arg Tyr Thr Leu Leu Ile Phe Leu Ser Leu Trp Phe Thr Leu Lys Gly
195200 205
Thr Glu Thr Trp His Tyr Met Ala Gly Ala Ala Phe Met Ala Met Phe
210 215 220
Trp His Gln Leu Val Phe Thr Ala His Asp Ala Gly His Asn Glu Ile
225230235240
Thr Gly Lys Ser Glu Ile Asp His Val Ile Gly Val Ile Ile Ala Asn
245 250255
Phe Ile Gly Gly Leu Ser Leu Gly Trp Trp Lys Asp Asn His Asn Val
260 265 270
His His Ile Val Thr Asn His Pro Glu His Asp Pro Asp Ile Gln His
275 280 285
Val Pro Phe Met Ala Ile Thr Thr Lys Phe Phe Asn Asn Ile Tyr Ser
290 295 300
Thr Tyr Tyr Lys Arg Val Leu Pro Phe Asp Ala Ala Ser Arg Phe Phe
305 310315320
Val Arg His Gln His Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ile Leu Ser Phe Gly Arg
325 330335
Phe Asn Leu His Arg Leu Ser Phe Ala Tyr Leu Leu Thr Cys Lys Asn
340 345350
Val Arg Thr Arg Thr Leu Glu Leu Val Gly Ile Thr Phe Phe Phe Val
355360 365
Trp Phe Gly Ser Leu Leu Ser Thr Leu Pro Thr Trp Asn Ile Arg Ile
370375380
Ala Tyr Ile Met Val Ser Tyr Met Leu Thr Phe Pro Leu His Val Gln
385 390 395400
Ile Thr Leu Ser His Phe Gly Met Ser Thr Glu Asp Arg Gly Pro Asp
405410415
Glu Pro Phe Pro Ala Lys Met Leu Arg Thr Thr Met Asp Val Asp Cys
420425 430
Pro Glu Trp Leu Asp Trp Phe His Gly Gly Leu Gln Tyr Gln Ala Val
435 440 445
His His Leu Phe Pro Arg Leu Pro Arg His Asn Leu Arg Gln Cys Val
450 455460
Pro Leu Val Lys Lys Phe Cys Asp Glu Val Gly Leu His Tyr Tyr Met
465470475480
Tyr Asn Phe Ser Thr Gly Asn Gly Val Val Leu Gly Thr Leu Lys Ser
485490 495
Val Ala Asp Gln Val Gly Phe Met Asn Glu Val Ala Lys Ser Asn Ala
500505 510
Glu Ile Trp Ala Asn Asp Lys Glu His Ala His
515520
9
456
PRT
Thraustochytrium aureum
9
Met GlyArg Gly Gly Glu Lys Ser Glu Val Asp Gln Val Gln Pro Gln
15 10 15
Lys Thr Glu Gln Leu Gln Lys Ala Lys Trp Glu Asp Val Val Arg Ile
20 25 30
Asn Gly Val Glu Tyr Asp Val Thr Asp Tyr Leu Arg Lys His Pro Gly
35 40 45
Gly Ser Val Ile Lys Tyr Gly Leu Ala Asn Thr Gly Ala Asp Ala Thr
50 55 60
Ser Leu Phe Glu Ala Phe His Met Arg Ser Lys Lys Ala Gln Met Val
6570 7580
Leu Lys Ser Leu Pro Lys Arg Ala Pro Val Leu Glu Ile Gln Pro Asn
85 90 95
Gln Leu Pro Glu Glu Gln Thr Lys Glu Ala Glu Met Leu Arg Asp Phe
100 105 110
Lys Lys Phe Glu Asp Glu Ile Arg Arg Asp Gly Leu Met Glu Pro Ser
115 120125
Phe Trp His Arg Ala Tyr Arg Leu Ser Glu Leu Val Gly Met Phe Thr
130 135 140
Leu Gly Leu Tyr Leu Phe Ser Leu Asn Thr Pro Leu Ser Ile Ala Ala
145 150155160
Gly Val Leu Val His Gly Leu Phe Gly Ala Phe Cys Gly Trp Cys Gln
165170175
His Glu Ala Gly His Gly Ser Phe Phe Tyr Ser Leu Trp Trp Gly Lys
180185 190
Arg Val Gln Ala Met Leu Ile Gly Phe Gly Leu Gly Thr Ser Gly Asp
195 200205
Met Trp Asn Met Met His Asn Lys His His Ala Ala Thr Gln Lys Val
210215220
His His Asp Leu Asp Ile Asp Thr Thr Pro Phe Val Ala Phe Phe Asn
225 230 235240
Thr Ala Phe Glu Lys Asn Arg Trp Lys Gly Phe Ser Lys Ala Trp Val
245250255
Arg Phe Gln Ala Phe Thr Phe Ile Pro Val Thr Ser Gly Met Ile Val
260 265 270
Met Leu Phe Trp Leu Phe Phe Leu His Pro Arg Arg Val Val Gln Lys
275280 285
Lys Asn Phe Glu Glu Gly Phe Trp Met Leu Ser Ser His Ile Val Arg
290 295 300
Thr Tyr Leu Phe His Leu Val Thr Gly Trp Glu Ser Leu Ala Ala Cys
305 310 315320
Tyr Leu Val Gly Tyr Trp Ala Cys Met Trp Val Ser Gly Met Tyr Leu
325330335
Phe Gly His Phe Ser Leu Ser His Thr His Met Asp Ile Val Glu Ala
340 345 350
Asp Val His Lys Asn Trp Val Arg Tyr Ala Val Asp His Thr Val Asp
355360365
Ile Ser Pro Ser Asn Pro Leu Val Cys Trp Val Met Gly Tyr Leu Asn
370 375380
Met Gln Thr Ile His His Leu Trp Pro Ala Met Pro Gln Tyr His Gln
385 390 395400
Val Glu Val Ser Arg Arg Phe Ala Ile Phe Ala Lys Lys His Gly Leu
405 410415
Asn Tyr Arg Val Val Ser Tyr Phe Glu Ala Trp Arg Leu Met Leu Gln
420 425430
Asn Leu Ala Asp Val Gly Ser His Tyr His Glu Asn Gly Val Lys Arg
435 440 445
Ala Pro Lys Lys Ala Lys Ala Gln
450 455
10
453
PRT
Saprolegnia diclina
10
Met Val Gln Gly Gln Lys Ala Glu Lys Ile Ser Trp Ala Thr Ile Arg
1 5 10 15
Glu His Asn Arg Gln Asp Asn Ala Trp Ile Val Ile His His Lys Val
20 25 30
Tyr Asp Ile Ser Ala Phe Glu Asp His Pro Gly Gly Val Val Met Phe
35 40 45
Thr Gln Ala Gly Glu Asp Ala Thr Asp Ala Phe Ala Val Phe His Pro
50 55 60
Ser Ser Ala Leu Lys Leu Leu Glu Gln Tyr Tyr Val Gly Asp Val Asp
65 707580
Gln Ser Thr Ala Ala Val Asp Thr Ser Ile Ser Asp Glu Val Lys Lys
859095
Ser Gln Ser Asp Phe Ile Ala Ser Tyr Arg Lys Leu Arg Leu Glu Val
100 105110
Lys Arg Leu Gly Leu Tyr Asp Ser Ser Lys Leu Tyr Tyr Leu Tyr Lys
115 120 125
Cys Ala Ser Thr Leu Ser Ile Ala Leu Val Ser Ala Ala Ile Cys Leu
130 135 140
His Phe Asp Ser Thr Ala Met Tyr Met Val Ala Ala Val Ile Leu Gly
145 150 155160
Leu Phe Tyr Gln Gln Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Phe Leu His His
165170175
Gln Val Phe Glu Asn His Leu Phe Gly Asp Leu Val Gly Val Met Val
180185190
Gly Asn Leu Trp Gln Gly Phe Ser Val Gln Trp Trp Lys Asn Lys His
195 200 205
Asn Thr His His Ala Ile Pro Asn Leu His Ala Thr Pro Glu Ile Ala
210 215220
Phe His Gly Asp Pro Asp Ile Asp Thr Met Pro Ile Leu Ala Trp Ser
225 230 235240
Leu Lys Met Ala Gln His Ala Val Asp Ser Pro Val Gly Leu Phe Phe
245 250255
Met Arg Tyr Gln Ala Tyr Leu Tyr Phe Pro Ile Leu Leu Phe Ala Arg
260 265 270
Ile Ser Trp Val Ile Gln Ser Ala Met Tyr Ala Phe Tyr Asn Val Gly
275 280 285
Pro Gly Gly Thr Phe Asp Lys Val Gln Tyr Pro Leu Leu Glu Arg Ala
290295300
Gly Leu Leu Leu Tyr Tyr Gly Trp Asn Leu Gly Leu Val Tyr Ala Ala
305 310315320
Asn Met Ser Leu Leu Gln Ala Ala Ala Phe Leu Phe Val Ser Gln Ala
325 330 335
Ser Cys Gly Leu Phe Leu Ala Met Val Phe Ser Val Gly His Asn Gly
340345 350
Met Glu Val Phe Asp Lys Asp Ser Lys Pro Asp Phe Trp Lys Leu Gln
355 360 365
Val Leu Ser Thr Arg Asn Val Thr Ser Ser Leu Trp Ile Asp Trp Phe
370 375 380
Met Gly Gly Leu Asn Tyr Gln Ile Asp His His Leu Phe Pro Met Val
385 390 395400
Pro Arg His Asn Leu Pro Ala Leu Asn Val Leu Val Lys Ser Leu Cys
405 410415
Lys Gln Tyr Asp Ile Pro Tyr His Glu Thr Gly Phe Ile Ala Gly Met
420 425 430
Ala Glu Val Val Val His Leu Glu Arg Ile Ser Ile Glu Phe Phe Lys
435 440 445
Glu Phe Pro Ala Met
450
11
467
PRT
Mucor circinelloides
11
Met Ser Ser Asp Val Gly Ala Thr Val Pro His Phe Tyr Thr Arg Ala
1 5 10 15
Glu Leu Ala Asp Ile His Gln Asp Val Leu Asp Lys Lys Pro Glu Ala
20 2530
Arg Lys Leu Ile Val Val Glu Asn Lys Val Tyr Asp Ile Thr Asp Phe
35 40 45
Val Phe Asp His Pro Gly Gly Glu Arg Val Leu Leu Thr Gln Glu Gly
50 55 60
Arg Asp Ala Thr Asp Val Phe His Glu Met His Pro Pro Ser Ala Tyr
6570 7580
Glu Leu Leu Ala Asn Cys Tyr Val Gly Asp Cys Glu Pro Lys Leu Pro
85 90 95
Ile Asp Ser Thr Asp Lys Lys Ala Leu Asn Ser Ala Ala Phe Ala Gln
100 105110
Glu Ile Arg Asp Leu Arg Asp Lys Leu Glu Lys Gln Gly Tyr Phe Asp
115 120 125
Ala Ser Thr Gly Phe Tyr Ile Tyr Lys Val Ser Thr Thr Leu Leu Val
130 135 140
Cys Ile Val Gly Leu Ala Ile Leu Lys Ala Trp Gly Arg Glu Ser Thr
145 150 155160
Leu Ala Val Phe Ile Ala Ala Ser Leu Val Gly Leu Phe Trp Gln Gln
165 170175
Cys Gly Trp Leu Ala His Asp Tyr Ala His Tyr Gln Val Ile Lys Asp
180 185 190
Pro Asn Val Asn Asn Leu Phe Leu Val Thr Phe Gly Asn Leu Val Gln
195200205
Gly Phe Ser Leu Ser Trp Trp Lys Asn Lys His Asn Thr His His Ala
210 215 220
Ser Thr Asn Val Ser Gly Glu Asp Pro Asp Ile Asp Thr Ala Pro Ile
225 230 235240
Leu Leu Trp Asp Glu Phe Ala Val Ala Asn Phe Tyr Gly Ser Leu Lys
245 250 255
Asp Asn Ala Ser Gly Phe Asp Arg Phe Ile Ala Glu His Ile Leu Pro
260 265 270
Tyr Gln Thr Arg Tyr Tyr Phe Phe Ile Leu Gly Phe Ala Arg Thr Ser
275 280 285
Trp Ala Ile Gln Ser Ile Ile Tyr Ser Phe Lys Asn Glu Thr Leu Asn
290 295 300
Lys Ser Lys Leu Leu Ser Trp Cys Glu Arg Ile Phe Leu Ile Val His
305 310 315320
Trp Val Phe Phe Thr Tyr Cys Thr Ile Ala Trp Ile Ser Ser Ile Arg
325 330335
Asn Ile Ala Met Phe Phe Val Val Ser Gln Ile Thr Thr Gly Tyr Leu
340 345 350
Leu Ala Ile Val Phe Ala Met Asn His Asn Gly Met Pro Val Tyr Ser
355360365
Pro Glu Glu Ala Asn His Thr Glu Phe Tyr Glu Leu Gln Cys Ile Thr
370375380
Gly Arg Asp Val Asn Cys Thr Val Phe Gly Asp Trp Leu Met Gly Gly
385 390 395400
Leu Asn Tyr Gln Ile Glu His His Leu Phe Pro Glu Met Pro Arg His
405 410415
His Leu Ser Lys Val Lys Ser Met Val Lys Pro Ile Ala Gln Lys Tyr
420 425 430
Asn Ile Pro Tyr His Asp Thr Thr Val Ile Gly Gly Thr Ile Glu Val
435 440 445
Leu Gln Thr Leu Asp Phe Val Gln Lys Ile Ser Gln Lys Phe Ser Lys
450 455 460
Lys Met Leu
465
12
383
PRT
Borago officinalis
12
Met Gly Gly Gly Gly Arg Met Pro Val Pro Thr Lys Gly Lys Lys Ser
1 5 10 15
Lys Ser Asp Val Phe Gln Arg Val Pro Ser Glu Lys Pro Pro Phe Thr
20 25 30
Val Gly Asp Leu Lys Lys Val Ile Pro Pro His Cys Phe Gln Arg Ser
35 40 45
Val Leu His Ser Phe Ser Tyr Val Val Tyr Asp Leu Val Ile Ala Ala
50 55 60
Leu Phe Phe Tyr Thr Ala Ser Arg Tyr Ile His Leu Gln Pro His Pro
65707580
Leu Ser Tyr Val Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Phe Cys Gln Gly Ser Val
85 9095
Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe
100 105 110
Ser Asp Tyr Gln Typ Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Leu Leu His Ser
115120125
Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His
130 135 140
His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys
145 150 155160
Lys Arg Ser Gly Ile Ser Trp Ser Ser Glu Tyr Leu Asn Asn Pro Pro
165 170 175
Gly Arg Val Leu Val Leu Leu Val Gln Leu Thr Leu Gly Trp Pro Leu
180 185 190
Tyr Leu Met Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Asp Arg Phe Ala Cys
195 200 205
His Phe Asp Pro Lys Ser Pro Ile Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Leu Gln
210 215 220
Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Ile Val Ala Val Met Tyr Gly Leu Tyr
225 230 235240
Arg Leu Val Ala Ala Lys Gly Val Ala Trp Val Val Cys Tyr Tyr Gly
245 250255
Val Pro Leu Leu Val Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Tyr Leu
260 265 270
Gln His Thr Gln Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp Asp
275 280 285
Trp Leu Lys Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Phe Leu
290 295 300
Asn Lys Val Leu His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His Leu
305 310 315320
Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile
325 330335
Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr Gln Cys Asp Arg Thr Pro Val Phe
340345 350
Lys Ala Met Tyr Arg Glu Val Lys Glu Cys Ile Tyr Val Glu Ala Asp
355 360 365
Glu Gly Asp Asn Lys Lys Gly Val Phe Trp Tyr Lys Asn Lys Leu
370375380
13
382
PRT
Helianthus annuus
13
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Ser Ser Pro Asn Gly Lys Glu Lys Asp
1 5 10 15
Gly Pro Lys Pro Leu Glu Arg Ala Leu His Glu Lys Pro Pro Phe Thr
20 25 30
Val Gly Asp Ile Lys Lys Val Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser
35 40 45
Val Ile Arg Ser Phe Ser Tyr Val Val Tyr Asp Leu Thr Ile Ala Ser
50 55 60
Ile Phe Tyr Tyr Leu Ala Asn Asn Tyr Ile Pro Leu Leu Pro Asn Ser
65 70 7580
Leu Ala Tyr Val Ala Trp Pro Val Tyr Trp Ile Phe Gln Gly Cys Val
85 90 95
Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe
100 105 110
Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Ile Leu His Ser
115 120125
Ala Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His
130 135 140
His Ser Asn Thr Gly Ser Ile Glu His Asp Glu Val Phe Val Pro Lys
145 150 155160
Leu Lys Ser Ser Val Arg Ser Thr Ala Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Pro
165 170175
Gly Arg Ile Leu Thr Leu Leu Val Thr Leu Thr Met Gly Trp Pro Leu
180 185190
Tyr Leu Met Phe Asn Val Ser Gly Arg Tyr Tyr Asp Arg Phe Ala Cys
195 200 205
His Phe Asp Pro Asn Ser Pro Ile Tyr Ser Asn Arg Glu Arg Ala Gln
210 215 220
Ile Phe Ile Ser Asp Ala Gly Ile Leu Thr Val Phe Tyr Ile Leu Phe
225 230 235240
Arg Leu Ala Ser Thr Lys Gly Leu Val Trp Val Leu Thr Met Tyr Gly
245250255
Gly Pro Leu Leu Val Val Asn Gly Phe Leu Val Leu Ile Thr Phe Leu
260 265 270
Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Thr Glu Trp Asp
275 280 285
Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu
290 295 300
Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Thr His His Leu
305 310 315320
Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile
325 330335
Lys Pro Ile Leu Gly Asp Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Ser Ile Phe
340345 350
Lys Ala Met Tyr Arg Glu Thr Lys Glu Cys Ile Tyr Val Asp Lys Asp
355360 365
Glu Asp Val Lys Asp Gly Val Tyr Trp Tyr Arg Asn Lys Ile
370 375 380
14
384
PRT
Brassica napus
14
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Gln Val Ser Pro Pro Ser Ser Ser Pro
1 5 10 15
Gly Thr Asn Thr Leu Lys Arg Val Pro Cys Glu Thr Pro Pro Phe Thr
20 25 30
Val Gly Glu Leu Lys Lys Ala Ile Pro Pro His Cys Phe Lys Arg Ser
35 40 45
Ile Pro Arg Ser Phe Ser Tyr Leu Ile Trp Asp Ile Ile Ile Ala Ser
50 5560
Cys Phe Tyr Tyr Val Ala Thr Thr Tyr Phe Pro Leu Leu Pro His Pro
65 70 7580
Leu Ser Tyr Phe Ala Trp Pro Leu Tyr Trp Ala Cys Gln Gly Cys Val
85 90 95
Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His Glu Cys Gly His His Ala Phe
100 105 110
Ser Asp Tyr Gln Trp Leu Asp Asp Thr Val Gly Leu Ile Phe His Ser
115120 125
Phe Pro Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Tyr Ser His Arg Arg His
130 135 140
His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg Asp Glu Val Phe Val Pro Lys
145 150155160
Lys Lys Ser Asp Ile Lys Trp Tyr Gly Lys Tyr Leu Asn Asn Pro Leu
165 170175
Gly Arg Thr Val Met Leu Thr Val Gln Phe Thr Leu Gly Trp Pro Leu
180185190
Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly Arg Pro Tyr Ser Asp Gly Phe Ala
195 200 205
Cys His Phe His Pro Asn Ala Pro Ile Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Leu
210 215 220
Gln Ile Tyr Ile Ser Asp Ala Gly Val Leu Ser Val Cys Tyr Gly Leu
225 230 235240
Tyr Arg Tyr Ala Gly Ser Arg Gly Val Ala Ser Met Val Cys Val Tyr
245 250255
Gly Val Pro Leu Met Ile Val Asn Cys Phe Leu Val Leu Ile Thr Tyr
260 265 270
Leu Gln His Thr His Pro Ser Leu Pro His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp
275 280 285
Asp Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile
290 295 300
Leu Ser Lys Val Phe His Asn Ile Thr Asp Thr His Val Ala His His
305 310315 320
Leu Phe Ser Thr Met Pro His Tyr Asn Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala
325 330 335
Ile Lys Pro Ile Leu Gly Glu Tyr Tyr Gln Phe Asp Gly Thr Pro Val
340345 350
Val Lys Ala Met Trp Ary Glu Ala Lys Glu Cys Ile Tyr Val Glu Pro
355 360 365
Asp Arg Gln Gly Glu Lys Lys Gly Val Phe Trp Tyr Asn Asn Lys Leu
370 375 380
15
388
PRT
Oriza sativa
15
Met Gly Ala Gly Gly Arg Met Thr Glu Lys Glu Arg Glu Glu Gln Gln
1 5 10 15
Lys Leu Leu Gly Arg Ala Gly Asn Gly Ala Ala Val Gln Arg Ser Pro
20 25 30
Thr Asp Lys Pro Pro Phe Thr Leu Gly Gln Ile Lys Lys Ala Ile Pro
35 40 45
Pro His Cys Phe Gln Arg Ser Val Ile Lys Ser Phe Ser Tyr Val Val
50 55 60
His Asp Leu Val Ile Val Ala Ala Leu Leu Tyr Phe Ala Leu Val Met
65 70 7580
Ile Pro Val Leu Pro Ser Gly Met Glu Phe Ala Ala Trp Pro Leu Tyr
8590 95
Trp Ile Ala Gln Gly Cys Val Leu Thr Gly Val Trp Val Ile Ala His
100 105 110
Glu Cys Gly His His Ala Phe Ser Asp Tyr Ser Val Leu Asp Asp Ile
115 120 125
Val Gly Leu Val Leu His Ser Ser Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp
130 135 140
Lys Tyr Ser His Arg Arg His His Ser Asn Thr Gly Ser Leu Glu Arg
145 150 155160
Asp Glu Val Phe Val Pro Lys Gln Lys Ser Ala Met Ala Trp Tyr Thr
165 170 175
Pro Tyr Val Tyr His Asn Pro Ile Gly Arg Leu Val HisIle Phe Val
180 185 190
Gln Leu Thr Leu Gly Trp Pro Leu Tyr Leu Ala Phe Asn Val Ser Gly
195 200205
Arg Pro Tyr Pro Arg Phe Ala Cys His Phe Asp Pro Tyr Gly Pro Ile
210 215 220
Tyr Asn Asp Arg Glu Arg Val Gln Ile Phe Ile Ser Asp Val Gly Val
225 230 235240
Val Ser Ala Gly Leu Ala Leu Phe Lys Leu Ser Ser Ala Phe Gly Phe
245 250 255
Trp Trp Val Val Arg Val Tyr Gly Val Pro Leu Leu Ile Val Asn Ala
260 265 270
Trp Leu Val Leu Ile Thr Tyr Leu Gln His Thr His Pro Ala Leu Pro
275 280 285
His Tyr Asp Ser Ser Glu Trp Asp Trp Leu Arg Gly Ala Leu Ala Thr
290 295 300
Val Asp Arg Asp Tyr Gly Ile Leu Asn Lys Val Phe His Asn Ile Thr
305 310 315 320
Asp Thr His Val Ala His His Leu Phe Ser Thr Met Pro His Tyr His
325 330 335
Ala Met Glu Ala Thr Lys Ala Ile Arg Pro Ile Leu Gly Glu Tyr Tyr
340 345 350
Gln Phe Asp Pro Thr Pro Val Ala Lys Ala Thr Trp Arg Glu Ala Lys
355 360 365
Glu Cys Ile Tyr Val Glu Pro Glu Asp Asn Lys Gly Val Phe Trp Tyr
370 375 380
Asn Asn Lys Phe
385
16
399
PRT
Mortierella alpina
16
Met Ala Pro Pro Asn Thr Ile Asp Ala Gly Leu Thr Gln Arg His Ile
1 5 10 15
Ser Thr Ser Ala Pro Asn Ser Ala Lys Pro Ala Phe Glu Arg Asn Tyr
20 25 30
Gln Leu Pro Glu Phe Thr Ile Lys Glu Ile Arg Glu Cys Ile Pro Ala
35 40 45
His Cys Phe Glu Arg Ser Gly Leu Arg Gly Leu Cys His Val Ala Ile
50 5560
Asp Leu Thr Trp Ala Ser Leu Leu Phe Leu Ala Ala Thr Gln Ile Asp
65 7075 80
Lys Phe Glu Asn Pro Leu Ile Arg Tyr Leu Ala Trp Pro Val Tyr Trp
85 90 95
Ile Met Gln Gly Ile Val Cys Thr Gly Val Trp Val Leu Ala His Glu
100 105 110
Cys Gly His Gln Ser Phe Ser Thr Ser Lys Thr Leu Asn Asn Thr Val
115 120 125
Gly Trp Ile Leu His Ser Met Leu Leu Val Pro Tyr His Ser Trp Arg
130 135140
Ile Ser His Ser Lys His His Lys Ala Thr Gly His Met Thr Lys Asp
145 150 155 160
Gln Val Phe Val Pro Lys Thr Arg Ser Gln Val Gly Leu Pro Pro Lys
165 170 175
Glu Asn Ala Ala Ala Ala Val Gln Glu Glu Asp Met Ser Val His Leu
180 185 190
Asp Glu Glu Ala Pro Ile Val Thr Leu Phe Trp Met Val Ile Gln Phe
195 200 205
Leu Phe Gly Trp Pro Ala Tyr Leu Ile Met Asn Ala Ser Gly Gln Asp
210 215 220
Tyr Gly Arg Trp Thr Ser His Phe His Thr Tyr Ser Pro Ile Phe Glu
225 230 235 240
Pro Arg Asn Phe Phe Asp Ile Ile Ile Ser Asp Leu Gly Val Leu Ala
245 250 255
Ala Leu Gly Ala Leu Ile Tyr Ala Ser Met Gln Leu Ser Leu Leu Thr
260 265 270
Val Thr Lys Tyr Tyr Ile Val Pro Tyr Leu Phe Val Asn Phe Trp Leu
275 280 285
Val Leu Ile Thr Phe Leu Gln His Thr Asp Pro Lys Leu Pro His Tyr
290 295 300
Arg Glu Gly Ala Trp Asn Phe Gln Arg Gly Ala Leu Cys Thr Val Asp
305 310 315 320
Arg Ser Phe Gly Lys Phe Leu Asp His Met Phe His Gly Ile Val His
325 330 335
Thr His Val Ala His His Leu Phe Ser Gln Met Pro Phe Tyr His Ala
340 345 350
Glu Glu Ala Thr Tyr His Leu Lys Lys Leu Leu Gly Glu Tyr Tyr Val
355 360 365
Tyr Asp Pro Ser Pro Ile Val Val Ala Val Trp Arg Ser Phe Arg Glu
370 375 380
Cys Arg Phe Val Glu Asp Gln Gly Asp Val Val Phe Phe Lys Lys
385 390 395
17
424
PRT
Aspergillus furnigatus
17
Met Ala Ser Asp Ala Glu Lys Thr Ser Ser Lys Met Ile Asp Thr Tyr
1 5 10 15
Gly Asn Glu Phe Lys Ile Pro Asp Tyr Thr Ile Lys Gln Ile Arg Asp
20 25 30
Ala Ile Pro Ala His Cys Tyr Gln Arg Ser Ala Ala Thr Ser Leu Tyr
35 40 45
Tyr Val Phe Arg Asp Met Ala Ile Leu Ala Ser Val Phe Tyr Val Phe
50 55 60
His Asn Tyr Val Thr Pro Glu Thr Val Pro Ser Met Pro Val Arg Val
65 70 75 80
Val Leu Trp Thr Ile Tyr Thr Val Val Gln Gly Leu Val Gly Thr Gly
85 90 95
Val Trp Val Leu Ala His Glu Cys Gly His Gln Ala Phe Ser Thr Ser
100 105 110
Lys Val Leu Asn Asp Thr Val Gly Trp Ile Cys His Ser Leu Leu Leu
115 120 125
Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Ile Ser His Gly Lys His His Lys Ala
130 135 140
Thr Gly Asn Ile Ala Arg Asp Met Val Phe Val Pro Lys Thr Arg Glu
145 150 155 160
Glu Tyr Ala Thr Arg Ile Gly Arg Ala Ala His Glu Leu Ser Glu Leu
165 170 175
Met Glu Glu Thr Pro Ile Leu Thr Ala Thr Asn Leu Val Leu Gln Gln
180 185 190
Leu Phe Gly Trp Pro Met Tyr Leu Leu Thr Asn Val Thr Gly His Asn
195200205
Asn His Glu Arg Gln Pro Glu Gly Arg Gly Lys Gly Lys Arg Asn Gly
210 215 220
Tyr Phe Gly Gly Val Asn His Phe Asn Pro Ser Ser Pro Leu Tyr Glu
225 230235240
Ala Lys Asp Ala Lys Leu Ile Val Leu Ser Asp Leu Gly Leu Phe Leu
245 250 255
Val Gly Ser Leu Leu Tyr Tyr Ile Gly Ser Thr Tyr Gly Trp Leu Asn
260 265270
Leu Leu Val Trp Tyr Gly Ile Pro Tyr Leu Trp Val Asn His Trp Leu
275 280285
Val Ala Ile Thr Phe Leu Gln His Thr Asp Pro Thr Leu Pro His Tyr
290 295 300
Gln Pro Glu Ala Trp Asp Phe Thr Arg Gly Ala Ala Ala Thr Ile Asp
305310 315 320
Arg Asp Phe Gly Phe Val Gly Arg His Ile Phe His Gly Ile Ile Glu
325 330 335
Thr His Val Leu His His Tyr Val Ser Thr Ile Pro Phe Tyr His Ala
340 345 350
Asp Glu Ala Ser GluAla Ile Gln Lys Val Met Gly Pro His Tyr Arg
355360 365
Ser Glu Ala His Thr Gly Trp Thr Gly Phe Leu Lys Ala Leu Trp Thr
370 375 380
Ser Ala Arg Thr Cys Gln Trp Val Glu Pro Thr Glu Gly Ala Lys Gly
385 390 395 400
Glu Ser Gln Tyr Val Leu Phe Tyr Arg Asn Ile Asn Gly Ile Gly Val
405 410 415
Pro Pro Ala Lys Ile Pro Ala Lys
420
18
436
PRT
Candida albicans
18
Met Ala Ala Ala Thr Thr Ser Phe Ser Ser Gly Phe Asn Asn Asn Asn
1 5 10 15
Asn Ala Asp Gln Ser Thr Asp Ser Ser Ala Thr Ile Ser Lys Ser Gly
20 25 30
Asn Val Ala Ser Phe Lys Thr Thr Ser Thr Thr Ser Thr Tyr Gln Thr
35 40 45
Asn Leu Thr Ala Ile Asp Thr Tyr Gly Asn Glu Phe Lys Val Pro Asp
50 55 60
Tyr Thr Ile Lys Asp Ile Leu Ser Ala Ile Pro Thr His Cys Tyr Glu
65 707580
Arg Arg Leu Leu Gln Ser Leu Ser Tyr Val Phe Arg Asp Ile Phe Cys
85 90 95
Met Val Val Leu Gly Phe Ile Ala Asn Asn Tyr Ile His Leu Ile Pro
100 105 110
Asn Gln Phe Ile Arg Phe Ala Ala Trp Thr Gly Tyr Val Trp Cys Gln
115 120 125
Gly Leu Phe Gly Thr Gly Ile Trp Val Leu Ala His Glu Cys Gly His
130 135 140
Gln Ala Phe Ser Asp Tyr Gly Ser Val Asn Asp Phe Val Gly Trp Val
145 150 155 160
Leu His Ser Tyr Leu Leu Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Phe Ser His
165170 175
Gly Lys His His Lys Ala Thr Gly His Leu Thr Arg Asp Met Val Phe
180 185190
Val Pro Lys Thr Lys Glu Glu Phe Leu Gln Asn Arg Gly Val Lys Asp
195 200205
Leu Asp Asp Leu Leu Gly Asp Ser Pro Met Tyr Ser Leu Leu Thr Leu
210 215 220
Ile Phe Gln Gln Thr Phe Gly Trp Ile Ser Tyr Leu Val Ala Asn Val
225 230 235 240
Ser Gly Gln Lys Tyr Pro Gly Val Ser Phe Leu Lys Leu Asn His Phe
245250 255
Asn Pro Asn Ser Leu Ile Phe Asp Lys Lys Asp Tyr Trp Tyr Ile Leu
260 265 270
Leu Ser Asp Leu Gly Ile Leu Leu Gln Phe Phe Asn Leu Tyr Val Trp
275280285
Tyr Gln Ser Phe Gly Gly Phe Asn Leu Leu Val Asn Tyr Val Leu Pro
290 295300
Tyr Phe Leu Val Asn His Trp Leu Val Phe Ile Thr Tyr Leu Gln His
305310 315 320
Ser Asp Pro Gln Met Pro His Tyr Glu Ala Ser Gln Trp Thr Phe Ala
325 330 335
Arg Gly Ala Ala Ala Thr Ile Asp Arg Glu Phe Gly Phe Val Gly Lys
340 345350
His Ile Phe His Asp Ile Ile Glu Thr His Val Leu His His Tyr Val
355 360 365
Ser Arg Ile Pro Phe Tyr Asn Ala Arg Glu Ala Ser Glu Ala Ile Lys
370 375 380
Lys Val Met Gly Ile His Tyr Gln His Ser Asp Glu Asn Met Trp Val
385 390 395 400
Ser Leu Trp Lys Ser Ala Arg Trp Cys Gln Phe Val Asp Gly Asn Asn
405 410 415
Gly Val Leu Met Tyr Arg Asn Thr Asn Gly Phe Gly Val Asp Pro Lys
420 425430
Lys Gln Thr His
435
19
433
PRT
Candida albicans
19
Met Ser Val Val Glu Ala Ser Ser Ser Ser Val Val Glu Asp Ser Thr
1 5 10 15
Ala Ser Asn Val Val Gln Arg Gly Asn Ile Ser Ser Phe Ala Ser Thr
20 25 30
Thr Ala Ser Ser Asn Leu Thr Thr Ile Asp Thr Asn Gly Lys Val Phe
35 40 45
Lys Val Pro Asp Tyr Ser Ile Lys Asp Ile Leu Gln Ala Ile Pro Lys
50 55 60
His Cys Tyr Glu Arg Ser Leu Ile Arg Ser Leu Gly Tyr Val Val Arg
65 70 75 80
Asp Ile Thr Met Met Val Ile Ile Gly Tyr Val Gly His Thr Phe Ile
8590 95
Pro Met Val Gln Ile Pro Glu Tyr Pro Ser Leu Ala Tyr Gly Leu Arg
100 105110
Gly Ala Leu Trp Met Val Gln Ser Tyr Cys Ile Gly Leu Phe Gly Phe
115 120 125
Gly Leu Trp Ile Leu Ala His Glu Cys Gly His Gly Ala Phe Ser Asp
130 135140
Tyr Gln Asn Ile Asn Asp Phe Ile Gly Trp Val Leu His Ser Tyr Leu
145 150 155 160
Ile Val Pro Tyr Phe Ser Trp Lys Phe Ser His Ala Lys His His Lys
165 170 175
Ala Thr Gly His Leu Thr Lys Asp Met Val Phe Ile Pro Tyr Thr Lys
180185 190
Glu Glu Tyr Leu Glu Lys Asn Lys Val Glu Lys Val Ala Asp Leu Met
195200 205
Glu Glu Ser Pro Ile Tyr Ser Phe Leu Val Leu Val Phe Gln Gln Leu
210 215 220
Gly Gly Leu Gln Leu Tyr Leu Ala Thr Asn Ala Thr Gly Gln Val Tyr
225 230235240
Pro Gly Tyr Ser Lys Ile Ala Lys Ser His Tyr Thr Pro Thr Ser Pro
245 250 255
Val Phe Asp Lys His Gln Tyr Trp Tyr Ile Val Leu Ser Asp Ile Gly
260 265 270
Ile Ile Leu Ala Phe Thr Thr Val Tyr Gln Trp Tyr Lys Asn Phe Gly
275 280 285
Leu Phe Asn Met Met Ile Asn Trp Phe Val Pro Trp Leu Trp Val Asn
290295 300
His Trp Leu Val Phe Val Thr Phe Leu Gln His Thr Asp Pro Thr Met
305 310 315320
Pro His Tyr Thr Ser Lys Glu Trp Thr Phe Ala Arg Gly Ala Ala Ala
325 330335
Thr Ile Asp Arg Asn Phe Gly Phe Val Gly Gln His Ile Phe His Asp
340 345 350
Ile Ile Glu Thr His Val Leu His His Tyr Val Ser Arg Ile Pro Phe
355 360 365
Tyr Asn Ala Arg Glu Ala Thr Asp Ala Ile Arg Lys Val Met Gly Glu
370 375 380
His Tyr Arg Tyr Glu Gly Glu Ser Met Trp Tyr Ser Leu Trp Lys Cys
385390 395 400
Met Arg Met Cys Gln Phe Val Asp Asp Asp Lys Glu Asp Ala Lys Gly
405 410 415
Val Met Met Phe Arg Asn Val Asn Gly Trp Gly Pro Val Lys Pro Lys
420 42 5430
Asp
權利要求
1.紅花植物，其產生的種子含有重量百分含量至少1％的γ-亞麻酸。
2.權利要求1中所述植物的種子。
3.權利要求2中所述植物的種子油。
4.權利要求3中所述的油，其中含有重量百分含量1～5，5～10，0～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55-60％或更高含量的γ-亞麻酸。
5.含有能在所述紅花植物中作用的重組體啟動子的轉基因紅花植物，其中所述的啟動子可連接編碼Δ6去飽和酶的重組DNA序列，所述的紅花植物產生種子，所述的種子含有重量百分數至少1％的γ-亞麻酸。
6.根據權利要求5中所述的含有能在所述紅花植物中作用的重組體啟動子的轉基因紅花植物，其中編碼序列的去飽和酶是植物或真菌去飽和酶。
7.根據權利要求6中所述的含有能在所述紅花植物中作用的重組體啟動子的轉基因紅花植物，其中編碼序列的去飽和酶來源於包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚菌屬的Δ6去飽和酶。
8.根據權利要求5中所述的含有能在所述紅花植物中作用的重組體啟動子的轉基因紅花植物，其中啟動子是種子特異啟動子。
9.根據權利要求8中所述的含有能在所述紅花植物中作用的重組體啟動子的轉基因紅花植物，其中種子特異啟動子是油脂蛋白啟動子或核絲啟動子。
10.來源於權利要求5或6或7或8或9中所述的轉基因紅花植物的種子，其中種子中的γ-亞麻酸重量百分含量至少佔所述種子總脂肪酸含量的1％。
11.由權利要求10所述種子製備的油。
12.根據權利要求11中所述的油，其中油含有重量百分含量為1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或以上的γ-亞麻酸。
13.轉基因紅花植物，包括第一個編碼Δ6去飽和酶的重組DNA序列和第二個編碼Δ12去飽和酶重組DNA序列，其中所述的重組DNA序列可連接至少一個啟動子，其中所述的紅花植物產生的種子含有重量百分含量至少為1％的γ-亞麻酸。
14.根據權利要求13所述的轉基因紅花植物，其中所述的編碼序列的Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶是植物或真菌的去飽和酶。
15.根據權利要求14所述的轉基因紅花植物，其中編碼序列的去飽和酶來源於包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚菌屬的Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶。
16.根據權利要求13所述的轉基因紅花植物，其中所述的啟動子是種子特異啟動子。
17.根據權利要求16所述的轉基因紅花植物，其中所述的種子特異啟動子是油脂蛋白啟動子或核絲啟動子。
18.來源於權利要求13或14或15或16或17中所述的轉基因紅花植物的種子，其中種子中的γ-亞麻酸重量百分含量至少佔所述種子總脂肪酸含量的1％。
19.由權利要求18所述種子製備的油。
20.權利要求19所述種子製備的油，其中所述油包括重量百分含量約1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高的γ-亞麻酸。
21.一種在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，所述方法包括含有在所述紅花植物中作用的重組體啟動子的紅花植物的生長，其中所述的啟動子可連接一個編碼Δ6去飽和酶重組DNA序列，其中所述的紅花植物所述在Δ6去飽和酶序列被表達的條件下生長。
22.根據權利要求21所述在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的編碼序列的Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶是植物或真菌去飽和酶。
23.根據權利要求22所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中編碼序列去飽和酶來源於包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚菌屬的Δ6去飽和酶。
24.根據權利要求21所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的啟動子是種子特異啟動子。
25.根據權利要求24所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的種子特異啟動子是油脂蛋白啟動子或核絲啟動子。
26.根據權利要求21或22或23或24或25所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的方法進一步包括來源於所述紅花植物的單粒種子。
27.根據權利要求26所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的種子中γ-亞麻酸重量百分含量至少佔所述種子總脂肪酸含量的1％。
28.根據權利要求26所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的方法進一步包括來自於紅花植物種子的提取油。
29.權利要求26所述的油，其中含有約1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或重量百分含量更高的γ-亞麻酸。
30.一種在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，所述方法包括紅花植物的生長第一個編碼Δ6去飽和酶的重組DNA序列和第二個編碼Δ12去飽和酶重組DNA序列，其中所述的重組DNA序列可連接至少一個啟動子，其中所述的紅花植物在所述Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶序列被表達的條件下生長。
31.權利要求30所述的方法，其中所述的編碼序列Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶是植物或真菌去飽和酶。
32.根據權利要求31所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中編碼序列去飽和酶來源於包括白黴，水黴，異枝水黴，被孢黴屬，高山被孢黴，耳黴，腐黴，疫酶，青黴菌，紫球藻，Coidosporium，卷枝毛黴，鐮孢菌黴，麴黴，念珠菌，紅酵母，蟲黴，破囊壺菌，水黴，琉璃苣，櫻草屬，芸苔，稻，苔蘚菌屬的Δ6去飽和酶和Δ12去飽和酶。
33.根據權利要求30所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的啟動子是種子特異啟動子。
34.根據權利要求33所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的種子特異啟動子是油脂蛋白啟動子或核絲啟動子。
35.根據權利要求30或31或32或33或34所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的方法進一步包括來自源於所述紅花植物的單粒種子。
36.根據權利要求35所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的種子中γ-亞麻酸重量百分含量至少佔所述種子總脂肪酸含量的1％。
37.根據權利要求35所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中所述的方法進一步包括來源於紅花植物種子的提取油。
38.根據權利要求37所述的在紅花植物中生產γ-亞麻酸的方法，其中含有重量百分含量約1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55～60％或更高的γ-亞麻酸。
39.來源於轉基因紅花植物的紅花油，其中所述的紅花油含有重量百分含量高於1％的γ-亞麻酸。
40.來源於轉基因紅花植物的紅花油，其中所述的紅花油含有重量百分含量高於5％的γ-亞麻酸。
41.來源於轉基因紅花植物的紅花油，其中所述的紅花油含有重量百分含量高於10％的γ-亞麻酸。
42.來源於轉基因紅花植物的紅花油，其中所述的紅花油含有重量百分含量高於1～5，5～10，10～15，15～20，20～25，25～30，30～35，35～40，40～45，45～50，50～55，55-60的γ-亞麻酸。
43.一種治療或預防精神病，神經或其它中樞或末梢神經系統狀況和疾病的方法，其中包括根據權利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些疾病折磨的病人。
44.一種治療或預防免疫狀況或疾病的方法，其中包括根據權利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些疾病折磨的病人。
45.一種治療或預防炎症狀況和疾病的方法，其中包括根據權利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些疾病折磨的病人。
46.一種治療或預防癌症狀況和疾病的方法，其中包括根據權利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些疾病折磨的病人。
47.一種治療或預防皮膚狀況和疾病的方法，其中包括根據權利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些疾病折磨的病人。
48.一種治療或預防心血管狀況和疾病的方法，其中包括根據權利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，給藥有效量的紅花油給這些傾向於或是已經受這些疾病折磨的病人。
49.一種給嬰兒提供營養的方法，其中包括根據權利要求3或11或19或29或38或39或40或41或42所述的方法，給藥有效量的紅花油給嬰兒。
全文摘要
本發明涉及從紅花植物中特別是紅花種子中製備γ-亞麻酸的合成方法。編碼一個或多個脂肪酸去飽和酶序列的核苷酸序列和構建序列用來產生含有表達一個或多個這種序列的轉基因紅花植物，在紅花種子中產生高含量的γ-亞麻酸。本發明提供了高含量γ-亞麻酸的轉基因紅花植物和種子，還提供了和本發明的紅花種子產生的油。本發明還涉及採用此本發明產生的油來治療包括神經系統疾病，炎症，癌症，心血管病症等許多疾病的方法。
文檔編號A01H5/00GK101321872SQ200680024359
公開日2008年12月10日 申請日期2006年5月22日 優先權日2005年5月23日
發明者維克·C·可耐福, 克裡斯廷·休梅克, 弗蘭克·J·弗利德, 唐納德·艾姆雷, 埃裡克·雷 申請人:阿凱迪亞生物科學公司