治療動脈粥樣硬化、血脂異常及相關病症的方法和藥物組合物的製作方法

2023-06-05 03:08:31

專利名稱：治療動脈粥樣硬化、血脂異常及相關病症的方法和藥物組合物的製作方法
背景技術：
煙酸(吡啶-3-羧酸)是以其升高高密度脂蛋白(HDL)的血清濃度的作用而普遍聞名的藥物。然而，煙酸常常伴隨著皮膚的血管擴張，有時稱作潮紅。這一副作用是由煙酸誘發前列腺素D2在皮膚中釋放造成的，而且嚴重得很多患者中斷煙酸治療。本發明涉及通過聯合服用煙酸或另一種煙酸受體激動劑與一種能減少或消除否則會發生的皮膚血管擴張的化合物，治療動脈粥樣硬化、血脂異常、糖尿病及相關病症，使得治療能夠進行而沒有顯著的潮紅。對於人類，這是通過服用煙酸或煙酸受體激動劑與一種拮抗DP受體的化合物來實現的。
有各種不同的受體亞型與前列腺素D2相互作用。一種前列腺素D2受體稱作「DP」，另一種前列腺素D2受體稱作「CRTH2」。本發明利用DP受體的拮抗作用來防止、減小或降低否則可能發生的潮紅。
因此，本發明的一個目的是消除或者減少在用煙酸或其它煙酸受體激動劑治療人類的動脈粥樣硬化、血脂異常、糖尿病及相關病症期間作為副作用的顯著的潮紅(頻率和/或嚴重性)。
本發明的另一目的是提供將副作用一般減至極小的動脈粥樣硬化聯合療法。
再一目的是提供一種用於口服的固定的聯合藥物組合物。
這些及其它目的將在本申請提供的說明中顯而易見。

發明內容
提供了一種對需要治療的人類患者治療動脈粥樣硬化的方法，該方法包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，其數量能有效地治療動脈粥樣硬化而不產生明顯的潮紅。
附圖簡介本發明將聯繫附圖進行說明，其中

圖1表示化合物D抑制小鼠內前列腺素D2誘發的血管擴張；圖2表示化合物D抑制小鼠內煙酸誘發的血管擴張。
圖3表示所選擇的其它化合物抑制小鼠內煙酸誘發的血管擴張。
發明詳述煙酸或尼克酸(吡啶-3-羧酸)是一種藥物，通常以其提高高密度脂蛋白(HDL)含量及脂質分布的其它有利變化(降低極低密度脂蛋白(VLDL)，低密度脂蛋白(LDL)，甘油三酯，游離脂肪酸(FFA)和脂蛋白(a)[Lp(a)])等作用而聞名。當對人施以治療有效劑量，例如每天約50mg至高達約8g時，煙酸使HDL水平升高。然而，煙酸常伴有皮膚血管擴張，也稱作潮紅。潮紅通常帶來皮膚變紅，並伴有發熱、發癢或刺痛。它會極其令人不快，而且能嚴重得使很多患者中斷煙酸治療。本發明涉及用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，治療、預防或逆轉動脈粥樣硬化及本申請中描述的其它疾病和症狀，而沒有明顯的潮紅。對於人類，這是通過服用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，與一種拮抗DP受體的化合物而實現的，從而防止、降低或減小了潮紅現象的頻率和/或嚴重性。
至少有兩種與前列腺素D2相互作用的受體，稱作「DP」或「CRTH2」。本發明主要涉及用來與DP受體拮抗劑聯合使用的煙酸或煙酸受體激動劑。
本發明的一個有意義的方面是一種對於有治療需要的人類患者治療動脈粥樣硬化的方法，該方法包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，其數量能有效地治療動脈粥樣硬化而不發生明顯的潮紅。
本發明的另一個有意義的方面是一種提高有治療需要的人類患者的血清HDL水平的方法，該方法包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，這一組合能有效地提高患者的血清HDL水平而不發生明顯的潮紅。
本發明的另一個有意義的方面涉及治療有治療需要的人類患者的血脂異常的方法，該方法包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，其數量能有效治療血脂異常而不發生明顯的潮紅。
本發明的另一個有意義的方面涉及一種對於有治療需要的人類患者降低血清VLDL或LDL水平的方法，包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，其數量能有效降低患者的血清VLDL或LDL水平而不發生明顯的潮紅。
本發明的另一個有意義的方面涉及一種對於有治療需要的人類患者降低血清甘油三酯水平的方法，包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，其數量能有效降低患者的血清甘油三酯水平而不發生明顯的潮紅。
本發明的另一個有意義的方面涉及一種對於有治療需要的患者降低血清Lp(a)水平的方法，包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，其數量能有效降低患者的血清Lp(a)水平而不發生明顯的潮紅。這裡所說的Lp(a)是指脂蛋白(a)。
本發明的一個特別有意義的方面涉及上述的各種方法中使用煙酸或其鹽或溶劑化物。尤其有意義的是使用煙酸。在另一個有意義的方面，該DP受體拮抗劑以能有效減少或防止患者潮紅現象的數量選擇性地調製PD受體。
本發明的另一個特別有意義的方面涉及上述的各個方法，其中使用煙酸，而且DP受體拮抗劑選擇性地調製DP受體，而基本上不調製CRTH2受體。
本發明的另一個特別有意義的方面涉及一種治療有治療需要的人類患者的動脈粥樣硬化、血脂異常、糖尿病或相關病症的方法，包括對患者施用煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，該聯合藥物以能夠有效治療動脈粥樣硬化、血脂異常、糖尿病或相關病症的數量給藥而不引起明顯潮紅。
本發明的一個方面是DP受體拮抗劑化合物與煙酸或其鹽或溶劑化物、或與另一種煙酸受體激動劑，聯合用於治療人類的動脈粥樣硬化而不發生明顯的潮紅。
本發明的另一個特別有意義的方面涉及上述方法，其中DP受體拮抗劑是選自化合物A至AJ及其可藥用鹽和溶劑化物。
特別適用於選擇性拮抗DP受體和抑制潮紅現象的化合物實例包括以下化合物及其可藥用鹽和溶劑化物


這裡所說的動脈粥樣硬化是血管疾病的一種形式，其特點是在大和中等尺寸的動脈壁的最內層上沉積含有膽固醇和脂質的粥樣斑塊。動脈粥樣硬化包括在相關醫學領域工作的醫師認識和了解的血管疾病的症狀。粥樣硬化心血管病(包括血運重建手術後的再狹窄、冠心病(也稱作冠狀動脈病或缺血性心臟病))，腦血管病(包括多發性腦梗塞痴呆)以及外周血管病(包括勃起動能障礙)，都是動脈粥樣硬化的臨床表現，因此都包括在術語「動脈粥樣硬化」和「粥樣硬化病」之中。
「血脂異常」是在常規意義上使用，指血漿脂類的含量反常，例如HLD(低)、LDL(高)、VLDL(高)、甘油三酯(高)、脂蛋白(a)(高)、FFA(高)和其它血清脂類含量反常，或它們的組合。它可以是無併發症的疾病，或是某種特定的相關疾病或症狀例如糖尿病(糖尿病血脂異常)、代謝綜合症等的一部分。因此，無併發症的血脂異常及與基礎病症相聯繫的血脂異常都包括在本發明之內。
「患者」一詞包括使用本發明活性藥物預防或治療醫學病症的哺乳動物，尤其是人。對患者給藥包括自身服藥和由他人對患者給藥。患者可以是需要治療現有的疾病或醫學症狀，也可以是希望防止或減少發生動脈粥樣硬化風險的預防性治療。
「治療有效量」一詞是指引起所期望的生物或醫學響應的藥物數量。例如，煙酸常以每天約50mg至約8g的劑量給藥。
術語「預防有效量」和「對於防止有效的數量」是指將會防止或降低要防止的生物或醫學事件的發生風險的藥物數量。在很多情形，預防有效量與治療有效量相同。
這裡描述的本發明包括服用本文所述的化合物和組合物以防止或降低冠心病、腦血管病和/或間歇性跛行的發生風險，或可能存在的復發風險。冠心病事件包括CHD死亡、心肌梗死(即心臟病發作)，和冠狀血管重建。腦血管事件包括缺血性或出血性卒中(也稱作腦血管意外)和暫時性缺血發作。間歇性跛行是外周血管病的臨床表現。這裡使用的術語「粥樣硬化病事件」包括冠心病事件、腦血管事件和間歇性跛行。對於先前已經歷過一次或多次非致命性粥樣硬化病事件的人，存在著再發生此類事件的可能性。
因此，本發明還提供了一種防止或降低首次或後繼發生動脈粥樣硬化事件的方法，包括對有發生此類病症的患者服用預防有效量的本文所述化合物，同時又防止或減小明顯的潮紅。患者可以是在服藥時已經患有粥樣硬化病，也可以是有發生該病的危險。
該方法還涉及防止或減緩新的粥樣硬化損傷或斑塊形成，防止或減緩現有的損傷或斑塊的發展，以及使現有的損傷或斑塊消退，同時又防止或減小明顯的潮紅。
因此，本發明的一個方面涉及一種阻停或減緩動脈粥樣硬化的發展，包括阻停或減緩動脈粥樣硬化斑塊的發展的方法，該方法包括對需要這一治療的患者聯合施用治療有效量的本文所述任何DP拮抗劑和煙酸或其它煙酸受體激動劑。這一方法還包括阻停或減緩在開始本治療方法時已存在的粥樣硬化斑塊(即，「已有的粥樣硬化斑塊」)的發展，以及阻停或減緩患有動脈粥樣硬化的患者的新的粥樣硬化斑塊的形成。
本發明的另一方面涉及一種防止或降低粥樣硬化斑塊破裂的危險，該方法包括對有治療需要的患者服用預防有效量的本文所述任何化合物及煙酸或其它煙酸受體激動劑。這裡所說的破裂，是指斑塊的破裂鬆動，它可能卡在血管裡。本發明的另一方面涉及一種防止或降低發生動脈粥樣硬化的方法，包括對需要治療的患者施用預防有效量的本文所述化合物。
本發明的另一方面涉及一種治療或預防動脈粥樣硬化、血脂異常或相關病症的方法，包括用抑制或減小潮紅有效數量的DP受體拮抗劑對需要這種治療的患者進行預治療，然後用煙酸、其鹽或溶劑化物或另一種煙酸受體激動劑，以能有效治療或預防動脈粥樣硬化、血脂異常或相關病症而不引起明顯潮紅的數量治療患者。
本發明的另一方面涉及以上所述的方法，其中還包括用HMG Co-A還原酶抑制劑對患者進行預治療或治療。
本發明的另一方面涉及一種治療或預防以上所述病症的方法，其中HMG Co-A還原酶抑制劑是辛伐他汀。
本文所述方法的一個方面涉及使用數量能實現所述效果的煙酸或其它煙酸受體激動劑化合物，以及選擇性調製DP受體而基本上不調製CRTH2受體的DP受體拮抗劑。例如，該DP受體拮抗劑體在DP受體上的親合性(即Kj)比在CRTH2受體上的親合性至少高約10倍(Kj數值較低)。與DP按照這些原則選擇性相互作用的任何化合物均被認為是「DP選擇性的」。
短語「不發生明顯潮約」是指在服用治療數量的煙酸時常常看到的副作用。煙酸的潮紅作用常常隨患者對治療劑量的藥物產生耐藥性而變得不太頻繁和不太嚴重，但潮紅現象仍有某種程度的發生。因此，「不發生明顯潮紅」是指當發生潮紅時其嚴重程度降低，或者較原來的發生次數減少。優選的是，潮紅的發生減少至少約三分之一，更優選減少一半，最好是減少約三分之二或更多。類似地，嚴重性優選減少約三分之一，更優選減少至少一半，最好是至少約三分之二。顯然最優選的是潮紅的發生和嚴重性減少100％，但並不要求這樣。
對於任何特定的患者，具體的劑量方案和水平取決於多種因素，包括年齡、體重、一般健康情況、性別、飲食、用藥時間、用藥途徑、排洩速度、藥物聯合和患者症狀的嚴重程度。對這些因素的考慮完全在普通的專業臨床醫師的權限之內，以便確定為了防止、對抗或減緩症狀的發展所需要的治療有效劑量或預防有效劑量。預期所述化合物將每日服用一段適當的時間，以便治療或防止與患者相關的醫學症狀，包括治療過程持續幾個月、幾年甚至患者的一生。
可以與本發明化合物一起服用一種或多種其它活性藥物。這些另外的活性藥物可以是脂質調節化合物或具有其它藥物活性的藥劑，或既具有調脂作用、又有其它藥物活性的藥劑。可以使用的另外這些活性藥物的實例包括但不限於HGM-CoA還原酶抑制劑，這包括其內酯化的或二羥基開鏈酸型的他汀類藥物及其可藥用的鹽和酯，包括但不限於洛伐他汀(見美國專利4,342,767)，辛伐他汀(見美國專利4,444,784)，二羥基開鏈酸或辛伐他汀，特別是其銨或鈣鹽，普伐他汀，特別是其鈉鹽(見美國專利4,346,227)，氟伐他汀，特別是其鈉鹽(見美國專利5,354,772)，阿託伐他汀，特別是其鈣鹽(見美國專利5,273,995)，匹伐他汀，也稱作NK-104(見PCT國際專利WO97/23200)，以及羅蘇伐他汀，也稱作ZD-4522(CRESTOR；見美國專利5,260,440)；HMG-CoA合成酶抑制劑；角鯊烯環氧酶抑制劑；角鯊烯合成酶抑制劑；脂醯輔酶A膽固醇醯基轉移酶(ACAT)抑制劑，包括ACAT-1或ACAT-2的選擇性抑制劑，以及ACAT-1和2的雙重抑制劑；微粒體甘油三酯轉移蛋白(MTP)抑制劑；內皮脂肪酶抑制劑；膽酸螯合劑；LDL受體誘導物；血小板聚集抑制劑，例如糖蛋白IIb/IIIa血纖蛋白原受體拮抗劑和阿斯匹林；人過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)激動劑，包括通常稱作格列酮例如吡格列酮和羅西格列酮的化合物，並包括稱作為噻唑烷二酮的結構類別內的那些化合物及在噻唑烷二酮結構類別外的那些PPARγ激動劑；PPARα激動劑，例如，氯貝特、非諾貝特(包括微粒化非諾貝特)和吉非貝齊；PPAR雙重α/γ激動劑；維生素B6(也稱作pyridoxine)及其可藥用鹽如HCl鹽；維生素B12(也稱作氰鈷胺)，葉酸或其可藥用鹽或酯，例如鈉鹽和甲基葡糖胺鹽；抗氧化維生素，例如維生素C和E和β胡羅卜素；β-阻斷劑；血管緊張素II拮抗劑，如氯沙坦；血管緊張素轉化酶抑制劑，例如依那普利和卡託普利；腎素抑制劑，鈣通道阻斷劑如硝苯地平和地爾硫；內皮素拮抗劑；增強ABCA1基因表達的試劑；膽固醇酯轉移蛋白(CETP)抑制化合物，5-脂氧合酶活化蛋白(FLAP)抑制化合物，5-脂氧合酶(5-LO)抑制化合物，類法尼醇X受體(FXR)配體，包括拮抗劑和激動劑；肝X受體(LXR)-α配體，LXR-β配體，二膦酸鹽化合物如阿侖膦酸鈉；環加氧酶-2抑制劑，如羅非考昔和塞來考昔；以及消退血管發炎的化合物。
膽固醇吸收抑制劑也可用於本發明。這些化合物阻斷膽固醇從腸腔向小腸壁的腸細胞內的運動，從而降低血清膽固醇含量。膽固醇吸收抑制劑的實例描述於US 5,846,966、5,631,365、5,767,115、6,133,001、5,886,171、5,856,473、5,756,470、5,739,321、5,919,672和PCT申請NO.WO 00/63703、WO 00/60107、WO 00/38725、WO 00/34240、WO 00/20623、WO 97/45406、WO 97/16424、WO 97/16455和WO 95/08532。最值得指出的膽固醇吸收抑制劑是伊澤替米貝，也稱作1-(4-氟苯基)-3(R)-[3(S)-(4-氟苯基)-3-羥基丙基)1-4(S)-(4-羥基苯基)-2-吖丁啶酮，描述於美國專利5,767,115和5,846,966。
膽固醇吸收抑制劑的治療有效量包括劑量從每天約0.01/mg/kg至約30mg/kg體重，優選為約0.1mg/kg至約15mg/kg體重。
對於糖尿病患者，本發明中使用的化合物可以與常用的糖尿病藥物一起服用。例如，按受本文所述治療的糖尿病患者還可以服用胰島素或口服的抗糖尿病藥物。適合本發明的口服抗糖尿病藥物的一個實例是二甲雙胍。
劑量信息本發明中使用的煙酸是指吡啶-3-羧酸。然而，對於在本發明中使用，還包括煙酸的鹽和溶劑化物，而且煙酸的許多可藥用鹽和溶劑化物可用於本發明。鹼金屬鹽，特別是鈉鹽和鉀鹽，是適用的鹽。同樣，鹼土金屬鹽，特別是鈣和鎂鹽，也是適用的鹽。各種胺鹽，例如銨和取代的銨化合物，也構成了適用的鹽。類似地，煙酸的溶劑化形式在本發明範圍內適用。其實例包括半水合物，一、二、三和倍半水合物。對於在本發明中使用，最有意義的是游離酸，吡啶-3-羧酸。
這裡所述的DP拮抗劑可用於減小或防止哺乳動物患者，特別是人的潮紅現象，其劑量從低至約0.01mg/kg/天直至高達約100mg/kg/天，以單劑量或分劑量逐日給藥。優選該劑量為約0.1mg/天至高達約1.0g/天，以單劑量或分劑量每日給藥。
本發明所述的可用的煙酸劑量範圍是從低至約50mg/天直至高達約8g/天，每日單劑量或分劑量給藥。最初可採用較低的劑量並增加劑量以進一步減小潮紅作用。
煙酸之外的煙酸受體激動劑的劑量在很寬的範圍內變化。一般，可用於治療動脈粥樣硬化的煙酸受體激動劑是以低至約0.01mg/kg/天至高達約100mg/kg/天的範圍，按單劑量或分劑量給藥。代表性的劑量是約0.1mg/天到約2g/天。
本發明中使用的化合物可以通過任何常規的給藥途徑給藥。優選的給藥途徑是口服。
煙酸，其鹽或溶劑化物，若其它的煙酸受體激動劑以及DP拮抗劑，可以一起或順序地按每日單次或多次(例如每日二、三或四次)給藥而不背離本發明。如果希望特別長的持續釋放，可以每隔一天服用例如釋放型或超過24小時的持久釋放產口。然而，優選每日單次給藥。同樣，可以早晨或晚上用藥。
藥物組合物這裡描述的藥物組合物一般含有煙酸或另一種煙酸受體激動劑，一種DP受體拮抗劑和一種可藥用的載體。
合適的口服組合物的實例包括片劑、膠囊、含片、錠劑、混懸劑、可分散粉劑或粒劑、乳劑、糖漿劑或酏劑。載體成分的實例包括稀釋劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、著色劑、防腐劑等。稀釋劑的實例包括例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣和磷酸鈉。成粒和崩解劑的實例，包括玉米澱粉和藻酸。粘合劑的實例包括澱粉、明膠和阿拉伯膠。潤滑劑的實例包括硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、硬脂酸和滑石。片劑可以是不包衣的或用已知技術包衣。這種包衣可以延遲崩解並從而延遲在胃腸道中的吸收，提供較長一般時間的持久作用。
在本發明的一項實施方案中，煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，與DP受體拮抗劑及載體組合，形成一種固定的組合產品。這種固定的組合產品可以是用於口服的藥片或膠囊。
更具體地說，在本發明的另一實施方案中，煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑(約1-1000mg)，和DP拮抗劑(約1-500mg)，與藥用載體相結合，形成用於口服的藥片或膠囊。
持續釋放較長時間在煙酸藥物製劑中可能特別重要。特別優選地是持久釋放的片劑。例如，可以使用一種延時材料例如甘油單硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。該劑型也可以用US 4,256,108、4,166,452和4,265,874中所述的技術包衣，以形成用於控制釋放的滲透治療片劑。
還有其它的可控釋放技術可供利用並包括在本發明中。可用來減慢持久釋放片劑中煙酸釋放速度的典型成分包括各種纖維素化合物，例如甲基纖維素、乙基纖維素、丙基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、微晶纖維素、澱粉等。各種天然和合成物質也可用於持久釋放製劑中。實例包括藻酸和各種藻酸鹽、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠、剌槐豆膠、瓜爾膠、明膠、各種長鏈醇(例如十六烷醇)和蜂蠟。
一種特別有意義的持久釋放片劑使用煙酸與一種或多種上述纖維素化合物組合，壓製成持久釋放的片劑以形成聚合物基質。DP拮抗劑化合物可以在壓制前摻加到摻混物中，或者包覆在該基質的外表面。
在更有意義的一項實施方案中，將煙酸和形成基質的物質組合併壓製成持久釋放的核心，DP拮抗劑化合物與一種或多種包衣劑混合，包覆在該核心的外表面上。
任選地並且更有意義的是上述的一種片劑，它還包覆著一種HMGCo-A還原酶抑制劑，例如，辛伐他汀。於是這一具體方案包含三種活性成分，可以在攝入時大量釋放的HMG Co-A還原酶抑制劑和DP拮抗劑，以及如上所述可以在更長一般時間釋放的煙酸。
對於符合本發明的持久釋放片劑，典型的釋放時間是從約1小時到長至約48小時，優選為約4小時至約24小時，更優選為約8-16小時。
硬明膠膠囊構成用於口服的另一類固體劑型。這種膠囊類似地也包含與上述載體物質混合的活性成分。軟明膠膠囊包括與水混溶性溶劑如丙二醇、PEG和乙醇，或與油類如花生油、液體石蠟或橄欖油，混合的活性成分。
水基混懸劑也在考慮之內，它在具有適合製備水基混懸劑的賦形劑的混合物中含有活性物質。這些賦形劑包括懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或潤溼劑，例如，卵磷脂；防腐劑，例如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯；著色劑，香味劑，甜味劑等。
適合通過加水製備水基混懸劑的可分散粉劑和粒劑提供了與分散劑或潤溼劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑混合的活性成分。合適的分散或潤溼劑及懸浮劑是以上已經舉例說明的那些。
也可以配製成漿劑或酏劑特別有意義的藥物組合物是持久釋放的片劑，其中含有與可藥用的載體組合的煙酸或其鹽或溶劑化物及一種DP受體拮抗劑。
特別有意義的另一種藥物組合物是一種持久釋放的片劑，其中含有與可藥用載體組合的煙酸或其鹽或溶劑化物，一種DP受體拮抗劑，及一種HMG Co-A還原酶抑制劑。
更有意義的另一種藥物組合是一種持久釋放的片劑，其中含有與可藥用載體組合的煙酸，一種DP受體拮抗劑和辛伐他汀。
特別有意義的另一種藥物組合物是一種持久釋放的片劑，其中含有與可藥用載體組合的煙酸和一種選自化合物A至AJ的DP受體拮抗劑。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用載體組合的煙酸和選自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的一種DP拮抗劑化合物。
特別有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物A。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物B。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物D。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物E。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物X。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物AA。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物AF。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物AG。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物AH。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物AI。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸和DP拮抗劑化合物AJ。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸，上述的一種DP拮抗劑和辛伐他汀。
更有意義的另一種藥物組合物含有與可藥用的載體組合的煙酸，選自化合物A至AJ的一種DP受體拮抗劑和辛伐他汀。
更有意義的另一種藥物組合物含有和可藥用的載體組合的煙酸，選自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ的一種DP拮抗劑和辛伐他汀。
術語「組合物」除了包括上述的藥物組合物以外，還包括直接或間接地由任何兩種或多種成分(活性成分或賦形劑成分)的組合、複合或聚集，或由一種或多種成分的解離，或由一種或多種成分的其它類型的反應或相互作用，形成的任何產物。因此，本發明的藥物組合物包括通過將化合物、任何附加的活性成分和可藥用賦形劑混合或者組合製成的任何組合物。
本發明的另一方面涉及煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP拮抗劑，在製造藥物中的應用。該藥物具有本文所述的用途。
更具體地說，本發明涉及煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，一種DP拮抗劑和一種HMG Co-A還原酶抑制劑如辛伐他汀，在製造藥物中的應用。該藥物具有本文所述的用途。
除了作為煙酸受體激動劑的基準的煙酸，已經提到許多種煙酸受體激動劑。以下出版物公開了作為煙酸受體激動劑的化合物Lorenzen，A.et al.Molecular Pharmacology 59349-357(2001)，Lorenzen，A.et al.Biochemical Pharmacology 64645-648(2002)，Soga，T.et al.Biochemical and Biophysical Research Comm.303364-369(2003)，Tunaru，S.et al.Nature Medicine 9352-355(2003)，Wise，A.et al.Journal of Biological Chemistry 2789869-9874(2003)，和Van Herk，T.et al Journal of Medicinal Chemistry 463945-3951(2003).
應該指出，煙酸受體的部分激動劑，例如在van Herk等的文獻中公開的那些，也打算包括在本發明組合物和治療方法中。
另外，在WO 02/084298A2(2002年10月24日公布)和Soga，T.等、Tunaru，S等和Wise，A等的文獻(上面引用的)中確認和鑑定了煙酸受體。
許多DP受體拮抗劑化合物已經公布，它們適用於並被包括在本發明的方法中。例如DP受體拮抗劑可以根據以下專利文獻得到2001年10月25日公布的WO 01/79169，2003年5月2日公布的EP 1305286，2002年11月28日公布的WO 02/094830，和2003年7月31日公布的WO 03/062200。化合物AB可以根據2001年9月13日公布的WO01/66520A1中的說明來合成；化合物AC可以根據2003年3月20日公布的WO 03/022814A1中的描述來合成，化合物AD和AE可以根據2003年9月25日公布的WO 03/078409中的說明來合成。本發明中使用的其它代表性的DP拮抗劑化合物可以根據下面提供的實施例合成。
實施例1[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物G) 步驟14-氯菸鹼醛此標題化合物按照F.Marsais等，J.Heterocyclic Chem.，25，81(1988)中所述製備。
步驟24-(甲硫基)菸鹼醛向NaSMe(9.5g.135mmol)在MeOH(250ml)中的溶液加入步驟1的40氯菸鹼醛(13.5g，94.4mmol)在MeOH(250ml)中的溶液。將反應混合物在60℃保持15分鐘，然後倒在NH4Cl和EtOAc上。分離出有機相，用水洗，用Na2SO4乾燥。然後將化合物在矽膠上用50％ EtOAc/己烷純化，得到標題化合物。
步驟3(2Z)-2-疊氮基-3-[4-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯在-12℃將4-(甲硫基)菸鹼醛(4.8g，31mmol)和疊氮乙酸甲酯(9.0g，78mmol)在MeOH(50ml)中的溶液加到25％ NaOMe甲醇溶液(16.9ml，78mmol)中。監測內溫並在30分鐘的加料期間保持-10℃至-12℃。然後將形成的混合物在冰浴中攪拌幾小時，隨後在冷室內於冰浴中過夜。將該懸浮液倒在冰和NH4Cl的混合物上，攪拌10分鐘後將漿體過濾。產物用冷水洗，然後真空乾燥，得到標題化合物，為棕灰色固體(7.4g)，其中含一些鹽。然後將該化合物在矽膠上用EtOAc純化。
步驟44-(甲硫基)-1H-吡咯並[2，3-b]吡啶-2-羧酸甲酯將步驟3的化合物(0.40g，1.6mmol)在二甲苯(16ml)中的懸浮液慢慢加熱至140℃。在140℃15分鐘後，將該黃色溶液冷卻至室溫。由於形成氮而可能放熱，必須小心。將懸浮液冷卻至0℃，過濾，用二甲苯洗，得到標題化合物。
步驟54-(甲硫基)-6-氧代-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-7-羧酸乙酯在0℃下向步驟4化合物(0.35g，1.6mmol)在DMF(20ml)中的溶液加入NaH(1.2eq)。5分鐘後加入碘化四正丁銨(0.10g)和4-溴丁酸乙酯(0.40ml)。室溫下1小時後，將反應混合物倒在飽和NH4Cl和EtOAc上。分離出有機相，用水洗，用Na2SO4乾燥。蒸發後將粗產物用快速色譜法純化。然後將該二酯溶於THF(7.0ml)在0℃下加入1.06M的叔丁醇鉀THF溶液(2.2ml)。室溫下1小時後，將反應混合物倒在飽和NH4Cl和EtOAc上。分離出有機相，用Na2SO4乾燥，減壓蒸發，得到標題化合物，為乙酯和甲酯的混合物。
步驟64-(甲硫基)-8，9-二氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6(7H)-酮向步驟5化合物(0.32g)加入EtOH(8.0ml)和濃鹽酸(2.0ml)。形成的懸浮液回流5小時。將反應混合物分配在EtOAc和Na2CO3之中。分離有機相，蒸發後得到標題化合物。
步驟7(2E，2Z)-[4-(甲硫基)-8，9-二氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6(7H)-亞基]乙酸乙酯向膦醯乙酸三乙酯(0.45g，2.17mmol)的DMF溶液(12ml)中加入80％ NaH(0.06g，2.00mmol)和步驟6化合物(0.22g，1.00mmol)。在55℃4小時後，將反應混合物倒在飽和NH4Cl和EtOAc上。分離出有機相併減壓蒸發。粗產物用快速色譜法純化，得到標題化合物。
步驟8[4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯將步驟7化合物加熱溶解在MeOH-THF中。在室溫下向前面的冷卻溶液加入PtO2，將形成的混合物在一大氣壓的氫氣下維持18小時。反應混合物用CH2Cl2經硅藻土小心地過濾。將濾液減壓蒸發，得到標題化合物。或者，步驟7的化合物可以在EtOAc中用Pd(OH)2在40psi的H2下氫化18小時。
步驟9[4-(甲磺醯基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向步驟8化合物(0.08g，0.27mmol)在MeOH(3.0mL)中的溶液加入Na2WO4(0.10g)和30％ H2O2(600μL)。1小時後將反應混合物分配在水和EtOAc之中。有機相用水洗，分離和蒸發。標題化合物用快速色譜法純化。
步驟10[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向4，4』二氯二苯基二硫醚(0.24g)的1，2-二氯乙烷溶液加入SO2Cl2(50μL)。向在DMF(2.0mL)中的步驟9化合物(0.05g)加入前面的混合物(≈180μL)。用1H NMR跟隨反應並保持在室溫，直至不再殘留起始物。將反應混合物倒在飽和的NaHCO3和EtOAc上。分離有機相，蒸發，標題化合物用快速色譜法純化。
步驟11[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺醯基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸向溶在1∶1的THF-MeOH混合物中的步驟10化合物加入1N NaOH。室溫下18小時後，將反應混合物倒在NH4Cl和EtOAc之中。分離有機相，用Na2SO4乾燥，蒸氣，得到標題化合物。
1HNMR(500MHz，丙酮-d6)δ11.00(bs，1H)，8.60(d，1H)，7.80(d，1H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.75(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).
實施例2[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物H) 標題化合物可以由實施例1步驟8的化合物，按照與實施例1步驟10和11中所述的類似方式製備。
實施例3[5-[(3，4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺醯基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物I)
標題化合物按照實施例1中所述，用步驟10的二(3，4-二氯二苯基)二硫醚製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.35(d，1H)，7.15(s，1H)，6.95(d，1H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).m/z 484.
對映體在一隻Chiralecel OD柱(25cm×20mm)上分離，使用含30％異丙醇、17％乙醇和0.2％乙酸的己烷，流速8ml/分。其純度用ChiralecelOD柱(25cm×4.6mm)證實，使用含30％異丙醇和0.2％乙酸的己烷，流速1.0ml/分。流出快的對映體Tr＝9.7分，流出慢的對映體Tr＝11.1分。
實施例4[5-(4-氯苯甲醯)-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物J) 步驟1[5-(4-氯苯甲醯)-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向4-氯苯甲醯氯(0.30g，1.7mmol)在1，2-二氯乙烷(6.0mL)中的溶液加入AlCl3(0.24g，1.8mmol)。5分鐘後，向前面的混合物加入實施例1步驟8的[4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯(0.15g，0.47mmol)在1，2-二氯乙烷(6.0mL)中的溶液。在80℃4小時後，將反應混合物分配在EtOAc和NaHNO3之中。分離有機相，用Na2SO4乾燥，蒸發。標題化合物用快速色譜法純化。
步驟2[5-(4-氯苯甲醯)-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯向[5-(4-氯苯甲醯)-4-(甲硫基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯(0.12g，0.27mmol)在MeOH(5.0mL)中的溶液加入Na2WO4(0.1g)和30％H2O2(300μL)反應混合物在55℃攪拌1小時，然後分配在水和EtOAc中。在機相用水洗，用Na2SO4乾燥，蒸發。標題化合物用快速色譜法純化。
步驟3[5-(4-氯苯甲醯)-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸按照實施例1步驟11中所述，處理[5-(4-氯苯甲醯)-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸乙酯，得到標題化合物。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.90(d，2H)，7.65(d，1H)，7.45(d，2H)，4.55(m，1H)，4.25(m，1H)，3.45(m，1H)，3.20(s，3H)，2.05至3.00(m，6H).m/z 446.
實施例5[5-(4-溴苯基)硫代]-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物K) 標題化合物按實施例1中所述，用4，4』-二溴二苯基二硫醚製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.60(d，1H)，7.80(d，1H)，7.35(d，2H)，7.00(d，2H)，4.65(m，1H)，4.20(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80至2.10(m，6H).
實施例6方法-1[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺醯)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸(化合物L)
步驟12-(甲硫基)菸鹼醛此標題化合物由2-溴菸鹼醛(A.Numata Synthesis 1999 p.306)按照實施例1步驟2中所述製備，只是將溶液在55℃加熱2小時。
步驟2(2Z)-2-疊氮基-3-[2-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯標題化合物按照實施例1步驟3中所述製備。
步驟34-(甲硫基)-1H-吡咯並[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯將(2Z)-2-疊氮基-3-[2-(甲硫基)吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯(1.00g，4.00mmol)在1，3，5-三甲基苯(50mL)中於160℃加熱1小時。將反應混合物冷卻至室溫，然後至0℃，濾出沉澱，用冷的1，3，5-三甲苯洗，得到標題化合物。
步驟41-(甲硫基)-8-氧代-7，8-二氫-6H-吡澱並[3，4-b]吡呤-7-羧酸甲酯向4-(甲硫基)-1H-吡咯並[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯(0.30g，1.35mmol)在THF(3mL)/甲苯(12.0mL)中的懸浮液加入1.06M的叔丁醇鉀THF溶液(1.42mL/1.41mmol)和丙烯酸甲酯(300μL)。將形成的混合物在80℃加熱18小時。將混合物分配在EtOAc和NH4Cl之中，經硅藻土過濾。分離有機相，用Na2SO4乾燥，過濾，得到標題化合物。
步驟51-(甲硫基)-6，7-二氫-8H-吡澱並[3，4-b]吡呤-8-酮按實施例1步驟6中所述，將1-(甲硫基)-8-氧代-7，8-二氫-6H-吡澱並[3，4-b]吡呤-7-羧酸甲酯轉化成標題化合物。
步驟6[8-羥基-1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡澱並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯將1-(甲硫基)-6，7-二氫-8H-吡澱並[3，4-b]吡呤-8-酮(0.15g，0.68mmol)、溴乙酸甲酯(0.34mL)、Zn-Cu(0.226g)在THF(3.0mL)中的混合物超聲2小時。然後將混合物在60℃加熱5分鐘直至反應完全。將反應混合物分配在EtOAc和NH4Cl之中。分離有機相，用Na2SO4乾燥，過濾並減壓蒸發，得到標題化合物。該化合物用快速色譜法純化。
步驟7[1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡澱並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯向在3.2mL CH3CN內的NaI(0.300g)加入TMSCL(0.266mL)。將此混合物加到在水浴內的[8-羥基-1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡澱並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯(0.15g，0.515mmol)於CH3CN(1.5mL)中的懸浮液裡。0.5小時後將反應混合物分配在EtOAct和NaHCO3中。分離出有機相，用硫代硫酸鈉洗，用MgSO4乾燥並蒸發。標題化合物用快速色譜法純化。
步驟8[1-(甲基磺醯)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸乙酯按實施例1步驟9中所述將[1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯轉化成標題化合物。
步驟9[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺醯)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸按照實施例1步驟10和11中所述，使用步驟10中的二(3，4-二氯苯基)二硫醚，將[1-(甲基磺醯)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯轉化成標題化合物。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.35(d，1H)7.80(d，1H)，7.35(d，1H)，7.15(s，1H)，6.95(d，1H)，4.55(m，1H)，4.35(m，1H)，3.90(m，1H)，3.30(s，3H)，3.15(m，1H)，3.05(m，1H)，2.80(m，1H)，2.50(m，1H).
實施例6方法-2[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺醯)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸步驟1 1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡咯並[3，4-b]吡呤-8-醇在0℃下向實施例6方法-1步驟5的1-(甲硫基)-6，7-二氫-8H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-酮(0.55g，0.22mmol)在EtOH(10ml)/THF(1ml)中的懸浮液加入NaBH4(0.10g，2.6mmol)。室溫下30分鐘後，加入丙酮猝滅反應。將溶劑減壓蒸發，向殘留物中加入EtOAc和水。分離有機相，用MgSO4乾燥後蒸發。標題化合物用EtOAc/己烷洗並過濾。
步驟2 2-[1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]丙二酸二甲酯在-78℃向1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-醇(0.54g，2.1mmol)在THF(10ml)中的懸浮液加入1M的NaHMDS/THF溶液(2.35ml，2.4mmol)和氯磷酸二苯酯(0.53mL，2.6mmol)。30分鐘後加入丙二酸二甲酯(0.73mL，6.4mmol)和1M的NaHMDS/THF溶液(6.8mL，6.8mmol)。將反應混合物升至0℃，然後至室溫。將混合物分配在ETOAc和NH4Cl中，有機相用MgSO4乾燥，過濾和蒸發。標題化合物用快速色譜法純化。
步驟3[1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯向2-[1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]丙二酸二甲酯(0.59g，2.17mmol)和DMSO(4ml)的混合物中加入NaCl/水(0.45ml)。在150℃ 18小時後，將反應混合物分配在EtOAc和水之中。分離有機相，用Na2SO4乾燥，蒸發。標題化合物隨後用快速色譜法純化。
步驟4[9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-(甲基磺醯)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸標題化合物由[1-(甲硫基)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸甲酯，按照實施例6方法-1步驟8至9中所述得到。
實施例7[10-[(3，4-二氯苯基)硫烷基]-1-(甲基磺醯基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，4-b]吲嗪-9-基]乙酸(化合物M) 步驟1[1-(甲基磺醯基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，4-b]吲嗪-9-基]乙酸乙酯標題化合物由實施例6步驟3的產物按照與實施例1步驟5至9中所述的相同方式製備步驟2[10-[(3，4-二氯苯基)硫烷基]-1-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，4-b]吲嗪-9-基]乙酸步驟1的產物按照與實施例1步驟10-11的相同方式，使用步驟10中的二(3，4-二氯苯基)二硫醚，轉化成標題化合物。
MS M+1＝485實施例8(4-(甲基磺醯基)-5-{[4-(三氟甲基)苯基]硫代}-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基)乙酸(化合物N) 標題化合物按照實施例1中所述用二[4-(三氟甲基)苯基]二硫醚製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.75(d，1H)，7.45(d，2H)，7.15(d，2H)，4.55(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.30(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
m/z 513(M+1)。
實施例9[5-[(2-氯-4-氟苯基)硫代]-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物0) 此標題化合物按照實施例1中所述，用二(2-氯-4-氟苯基)二硫醚製備。
m/z 469(M+1)。
實施例10[4-(甲基磺醯基)-5-(2-萘硫基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物P) 此標題化合物按照實施例1中所述，用二(2-萘基)二硫醚製備。
m/z 467(M+1)。
實施例11[5-[(2，3-二氯苯基)硫代]-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物Q) 標題化合物按照實施例1中所述，用二(2，3-二氯苯基)二硫醚製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.85(d，1H)，7.80(d，1H)，7.30(d，1H)，7.00(t，1H)，6.60(d，1H)，4.60(m，1H)，4.20(m，1H)，3.80(m，1H)，3.40(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
實施例12[5-[(4-甲基苯基)硫代]-4-(甲基磺醯)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物R) 標題化合物按照實施例1中所述，用對甲苯基二硫醚製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.80(d，1H)，6.95(m，4H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
實施例13[4-(甲基磺醯基)-5-(苯硫基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物S) 標題化合物按實施例1中所述，用二苯基二硫醚製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.80(d，1H)，7.15to 6.90(m，5H)，4.60(m，1H)，4.15(m，1H)，3.75(m，1H)，3.30(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
實施例14[5-[(2，4-二氯苯基)硫代]-4-(甲基磺醯基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[3，2-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物T) 標題化合物按實施例1中所述，用二(2，4-二氯苯基)二硫醚製備。該二硫醚由2，4-二氯苯硫酚用Br2在乙醚中製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.55(d，1H)，7.85(d，1H)，7.35(s，1H)，7.00(d，1H)，6.65(d，1H)，4.55(m，1H)，4.15(m，1H)，3.80(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
實施例15[5-[(4-氯苯基)硫代]-4-(甲基磺醯基)-6，7，8，9-四氫吡啶並[4，3-b]吲嗪-6-基]乙酸(化合物U) 標題化合物按實施例1所述，由3-氯菸鹼醛(Heterocycles，p.151，1993)製備，但是熱環化作用通過在回流下向十氫萘中加入疊氮化物來進行。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ9.20(s，1H)，8.85(s，1H)，7.20(d，2H)，7.00(d，2H)，4.70(m，1H)，4.30(m，1H)，3.75(m，1H)，3.35(s，3H)，2.80 to 2.10(m，6H).
實施例16[9-[(4-氯苯基)硫代]-1-(甲基磺醯基)-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸(化合物V) 標題化合物由實施例6方法1步驟8的產物，按照實施例1步驟10和11中概述的步驟，使用步驟10中的二(4-氯苯基)二硫醚製備。
1H NMR(500MHz，丙酮-d6)δ8.25-8.3(m，1H)，7.71-7.75(m，1H)，7.12-7.17(m，2H)，6.97-7.04(m，2H)，4.45-4.51(m，1H)，4.32-4.39(m，1H)，3.73-3.80(m，1H)，3.29(s，3H)，3.15-3.21(m，1H)，2.99-3.08(m，1H)，2.66-2.73(m，1H)，2.46-2.54(m，1H).
實施例17(一)-[(4-氯苄基)-7-氟-5-甲基磺醯基)-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基]乙酸(化合物E) 步驟1(+/-)-(7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基)乙酸乙酯 將10.00g 4-氟-2-碘苯胺、6.57g 2-(2-氧代環戊基)乙酸乙酯和121mg對甲苯磺酸在100ml苯中的溶液用Dean-Stark分水器在N2氣氛下回流24小時。隨後蒸餾除去苯。然後向溶液中加60ml DMF，脫氣，再依次加入19mL Hunig鹼和405mg Pd(OAc)2。將溶液在115℃加熱3小時，然後冷卻至室溫。為猝滅反應，加入300ml 1N HCl和200ml乙酸乙酯，將混合物經硅藻土過濾。分離兩相，酸性相用200ml乙酸乙酯萃取2次。將有機層合併，用鹽水洗，用無水Na2SO4乾燥，經硅藻土過濾後濃縮。粗產物用快速色譜法純化，用100％甲苯洗脫，得到標題化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ9.76(br s，1H)，7.34(dd，1H)，7.03(d，1H)，6.78(td，1H)，4.14(q，2H)，3.57(m，1H)，2.85-2.55(m，5H)，2.15(m，1H)，1.22(t，3H).
步驟2(+/-)-(7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基)乙酸 室溫下向1.24g步驟1的酯在14mL四氫呋喃(THF)中的溶液依次加入7mL MeOH和7mL 2N NaOH。2.5小時後，將反應混合物倒入裝有乙酸乙酯(EtOAc)/1N HCl的分液漏鬥中。分離兩相，酸相用EtOAc萃取2次。將有機相合併，用鹽水洗，用無水Na2SO4乾燥後蒸發至幹，得到粗製的油狀物，將其原樣用於下一步驟(純度＞90％)。
1H NMR(丙酮-d6)δ10.90(br s，1H)，9.77(br s，1H)，7.34(dd，1H)，7.04(dd，1H)，6.79(td，1H)，3.56(m，1H)，2.90-2.50(m，5H)，2.16(m，1H).MS(-APCI)m/z 232.2(M-H)-.
步驟3(+/-)-(5-溴-7-氟-1，2，3，4-四氫環茂二烯並[b]吲哚-3-基)乙酸 在-40℃向2.20g步驟2的酸(純度＞90％)在30ml吡啶中的溶液加入6.85g三溴化吡啶鎓(90％純度)。在0℃下攪拌該懸浮液10分鐘，溫熱至室溫30分鐘。然後不加熱，在高真空下除去溶劑。將粗產物溶於40ml AcOH中，向冷卻至0℃的溶液分批加入2.88g Zn粉。將該懸浮液在15℃攪拌15分鐘，溫熱至室溫再保持15分。此時加入1N HCl猝滅反應，將該混合物倒入裝有鹽水/EtOAc的分液漏鬥中。分離各層，有機層用水、鹽水洗，用無水Na2SO4乾燥後濃縮。該物質不經純化直接用於下一步驟。
1H NMR(丙酮-d6)δ10.77(br s，1H)，9.84(br s，1H)，7.09(m，2H)，3.60(m，1H)，2.95-2.65(m，4H)，2.56(dd，1H)，2.19(m，1H).
步驟4(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基]乙酸 向2.13g步驟3的酸在10mL THF中的溶液加入過量的重氮甲烷乙醚溶液，直到TLC監測到酸已完全消耗。然後減壓除去溶劑。在-78℃向這樣形成的甲基酯粗品在20ml DMF中的溶液加入539mg NaH懸浮液(60％在油中)。將該懸浮液在0℃攪拌10分鐘，再次冷卻至-78℃，用1.70g 4-氯苄基溴處理。5分鐘後，將溫度升至0℃，攪拌該混合物20分。此時加入2mL AcOH以猝滅反應，將混合物倒入裝有1N HCl/EtOAc的分液漏鬥中。分離各層，有機層用鹽水洗，用無水Na2SO4乾燥並濃縮。該烷基化物用步驟2中所述的步驟水解。粗物質用EtOAc/己烷研製來進一步純化，得到標題化合物。
1H NMR(丙酮-d6)δ10.70(br s，1H)，7.31(d，2H)，7.18(d，1H)，7.06(d，1H)，6.92(d，2H)，5.90(d，1H)，5.74(d，1H)，3.61(m，1H)，3.00-2.70(m，3H)，2.65(dd，1H)，2.39(dd，1H)，2.26(m，1H).MS(-APCI)m/z 436.3，434.5(M-H)-.
步驟5(+)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基]乙酸 在80℃向2.35g步驟4的酸在130ml EtOH中的溶液加入780μL(S)-(-)-1-(1-萘基)乙胺。將溶液冷卻至室溫並攪拌過夜。回收的鹽(1.7g)用200ml EtOH重結晶。過濾後，將得到的白色固體鹽用1N HCl中和，產物用EtOAc萃取。有機層用鹽水洗，用無水Na2SO4乾燥後濃縮。將該物質在SiO2墊上過濾，用EtOAc洗脫，得到標題對映體。兩種對映體的保留時間分別是7.5分和9.4分[chiralPak AD柱，己烷/2-丙醇/乙酸(95∶5∶0.1)]。更為極性的對映體為98％ ee。ee＝98％；保留時間＝9.4分[ChiralPak AD柱250×4.6mm，己烷/2-丙醇/乙酸(75∶25∶0.1)]；[α]D21＝+39.2°(c 1.0，MeOH)。
步驟6(-)-[4-(4-氯苄基)-7-氟-5-(甲基磺醯)-1，2，3，4-四環戊二烯並[b]-吲哚-3-基]乙酸和鈉鹽步驟5的酸(15.4g)先用重氮甲烷酯化。將這樣形成的酯與16.3g甲磺酸鈉鹽和30.2g CuI(I)在N-甲基吡咯烷酮中混合，進行磺化。將該懸浮液在N2氣流下脫氣，加熱至150℃並攪拌3小時，然後冷卻至室溫。為猝滅反應，加入500ml乙酸乙酯和500ml己烷，將混合物經SiO2墊過濾，用EtOAc洗脫。將有機相濃縮。粗製的油狀物溶於EtOAc中，用水洗3次，鹽水洗1次，用無水Na2SO4乾燥，過濾後濃縮。該粗物質進一步用快速色譜法純化，用100％甲苯至50％甲苯/EtOAc。進行梯度洗脫，得到14g磺化酯。將其按著步驟2所述步驟水解。在兩次連續重結晶(乙酸異丙酯/庚烷，隨後用CH2Cl2/己烷)後得到標題化合物。
1H NMR(500MHz丙酮-d6)δ10.73(br s，1H)，7.57(d，2H，J＝8.8Hz)，7.31(m，1H)，7.29(m，1H)，6.84(d，2H，J＝8.8Hz)，6.29(d，1H，JAB＝17.8Hz)，5.79(d，1H，JAB＝17.8Hz)，3.43(m，1H)，2.98(s，3H)，2.94(m，1H)，2.85-2.65(m，3H)，2.42(dd，1H，J1＝16.1Hz，J2＝10.3Hz)，2.27(m，1H).13C NMR(125MHz丙酮-d6)δ173.0，156.5(d，JCF＝237Hz)，153.9，139.2，133.7，133.3，130.0(d，JCF＝8.9Hz)，129.6，128.2，127.5(d，JCF＝7.6Hz)，122.2(d，JCF＝4.2Hz)，112.3(d，JCF＝29.4Hz)，111.0(d，JCF＝22.6Hz)，50.8，44.7，38.6，36.6，36.5，23.3.MS(-APCI)m/z 436.1，434.1(M-H)-.
ee＝97％；保留時間＝15.3分[Chiral Cel OD柱250×4.6mm，己烷/2-丙醇/乙醇/乙酸(90∶5∶5∶0.2)]；[α]D21＝-29.3°(C1.0，MeOH)。Mp 175.0℃。
將6.45g(14.80mmol)以上的酸式化合物在EtOH(100ml)中用14.80ml 1N NaOH水溶液處理，製備成鈉鹽。減壓除去有機溶劑，粗製的固體在回流下溶於1.2L異丙醇中。蒸餾溶劑至最終體積為500ml。冷卻至室溫使鈉鹽結晶。將晶態的鈉鹽懸浮在水中，用於冰浴冷凍並在高真空下冷凍乾燥，得到鈉鹽形式的標題化合物。
1H NMR(500MHz DMSO-d6)δ7.63(dd，1H，J1＝8.5Hz，J2＝2.6Hz)，7.47(dd，1H，J1＝9.7Hz，J2＝2.6Hz)，7.33(d，2H，J＝8.4Hz)，6.70(d，2H，J＝8.4Hz)，6.06(d，1H，JAB＝17.9Hz)，5.76(d，1H，JAB＝17.9Hz)，3.29(m，1H)，3.08(s，3H)，2.80(m，1H)，2.69(m，1H)，2.55(m，1H)，2.18(m，2H)，1.93(dd，1H，J1＝14.4Hz，J2＝9.7Hz).
實施例17A另一製備(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基]乙酸(實施例17，步驟4)的方法步驟1(+/-)-7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基乙酸二環己胺(DCHA)鹽將0.526M的2-溴-4-氟苯胺在二甲苯中的溶液與(2-氧代環戊基)乙酸乙酯(1.5eq)及硫酸(0.02eq)一起加熱回流20小時。用Dean-Stark分水器共沸蒸餾除去水。用NMR跟蹤反應，20小時後通常會觀察到有80-85％轉化成所要的亞胺中間體。反應混合物用1M碳酸氫鈉(0.2體積)洗15分鐘，蒸除有機級分。將剩餘的漿體真空蒸餾(0.5mmHg)。殘留的二甲苯在30℃蒸餾，多餘的酮和未反應的苯胺在50-110℃回收；亞胺則回收110-180℃組分，為淺棕色透明液體，純度83％。
然後將該亞胺中間體加到乙酸鉀(3eq)、氯化四正丁銨-水合物(1eq)、乙酸鈀(0.03eq)和N，N-二甲基乙醯胺的脫氣混合物中(亞胺的最終濃度＝0.365M)。將該反應混合物在115℃加熱5小時，隨後冷卻至室溫。加入3N KOH(3eq)，將混合物在室溫下攪拌1小時。反應混合物用水(1.0體積)稀釋，用甲苯(3×0.75體積)洗。水相用3N HCl酸化至pH 1，用叔丁基甲基醚(2×0.75體積)萃取。合併的有機級分用水(0.75體積)洗。向該透明的淺棕色溶液加入二環己基胺(1eq)，將溶液在室溫下攪拌16小時。將鹽濾出，用乙酸乙酯，叔丁基甲基醚洗，乾燥後得到標題化合物。分析結果94A％。
1H NMR(500mHz，CDCl3)δ9.24(s，1H)，7.16-7.08(m，2H)，6.82(t，1H)，6.2(br，2H)，3.6-3.5(m，1H)，3.04-2.97(m，2H)，2.88-2.70(m，3H)，2.66(dd，1H)，2.45-2.37(m，1H)，2.13-2.05(m，2.05)，1.83(d，4H)，1.67(d，2H)，1.55-1.43(m，4H)，1.33-1.11(m，6H).
步驟2(+/-)-(5-溴-7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基)乙酸將以上步驟1中的DCHA在二氯甲烷中的漿體(0.241M溶液)冷卻至-20至-15℃。將吡啶(2eq)一次加入，然後於30-45分鐘內向漿體中逐滴加入溴(2.5eq)並保持溫度為-20℃至-15℃(在加入約1/3溴時，反應混合物變粘，需要有效地攪拌。最終，在加完約1/2溴時，混合物又變「松」)。加完後，將反應混合物在-15℃再老化1小時。然後在5分鐘內加入乙酸(3.04eq)並分批加入鋅粉(3.04eq)。(一部分鋅在-15℃加入並將混合物老化約5分鐘以保證該放熱反應進行(約-15至-10℃))。重複這一操作，在約30分鐘內約投入5批鋅。當不再放熱時，較快地加入餘下的鋅。整個操作約費時30-45分。
加完後，將該批料溫熱至室溫，老化1小時並濃縮。將反應混合物轉移至甲基叔丁基醚(MTBE，0.8體積)中，加入10％乙酸水溶液(0.8體積)。將混合物在室溫下老化1小時(鹽的晶化，例如吡啶鎓)，經solka-floc(一種微晶纖維素)過濾。用MTBE(約0.2倍體積)衝洗solka-floc墊，將濾液(兩相，MTBE/水)轉移到萃取器中。有機相用水(0.8體積)洗。將MTBE萃取液濃縮並轉移到異丙醇(IPA，0.25體積)中使化合物結晶。加水(0.25體積)，使該批料老化1小時。在1小時內再加水(0.33體積)。加完後將批料再老化一小時，過濾，用30/70的異丙醇/水(0.15體積)衝洗。將晶化的溴代酸在烘箱中於+45℃乾燥。
步驟3(+/-)-[5-溴-4-(4-氯苄基)-7-氟-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基]乙酸將步驟2中的溴代酸溶於二甲基乙醯胺(0.416M溶液)中，一次加入2.5eq的碳酸銫。向該漿體中一次加入4-氯苄基氯(2.5eq)，在50℃加熱20小時。該批料冷卻至室溫，於5分鐘內加入5N NaOH(4.00eq)，溫度升至+40℃。將反應混合物在50℃老化約3小時，冷卻至室溫，轉移到一隻L萃取器中。將溶液用乙酸異丙酯(IPAc，2體積)稀釋並冷卻至+15℃。用5N HCl將溶液酸化至pH～2。分離各層，有機層用水洗(2×2體積)。將IPAc溶液濃縮，轉移至IPA(0.8體積)中使產物結晶。於2小時內加水(8L)，將批料過濾，得到標題化合物。該批料可以在烘箱中於+40℃乾燥24小時。
實施例18(+/-)-{4-[1-(4-氯基基)乙基]-7-氟-5-甲磺醯-1，2，3，4-四氫環茂二烯並[b]吲哚-3-基}乙酸(化合物X) 標題化合物按照2003年7月30日公布的PCT WO 03/062200中提供的說明合成。
實施例19(+/-)[9-(4-氯苄基)-6-氟甲磺醯-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸(化合物Y) 標題化合物按照PCT WO 03/062200(2003年7月30日公布)中提供的說明合成。
實施例20[4-(4-氯苄基)-7-氟-5-甲磺醯-1-氧代-1，2，3，4-四氫環戊二烯並[b]吲哚-3-基]乙酸(化合物Z) 標題化合物按照2003年7月30日公布的PCT WO 03/062200中提供的說明合成。
實施例21{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-異丙基-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基}乙酸(對映體A和對映體B)(化合物AA) 步驟1 2-氯菸鹼醛在-40℃向二異丙基胺(110ml，780mmol)在THF(500ml)中的溶液加入2.5M的正丁基鋰(300ml，750mmol)/己烷溶液。5分鐘後將反應混合物冷卻至-95℃，然後依次加入DMPU(15ml)和2-氯吡啶(50ml，532mmol)，將形成的混合物溫熱並在-78℃攪拌4小時。在這之後，將該黃色懸浮液再次冷卻至-95℃，然後加入DMF(70ml)。將最終的反應混合物溫熱至-78℃並在該溫度下攪拌1.5小時。將反應混合物倒入冷的鹽酸水溶液(3N，800ml)中，攪拌5分鐘。加入濃氨水將pH調節至7.5。水層用EtOAc萃取3次。合併的有機層用NH4Cl水溶液和鹽水洗，用無水Na2SO4乾燥，過濾後濃縮。粗物質用矽膠墊進一步純化，用100％己烷至100％EtOAc進行梯度洗脫，產物在冷的己烷中結晶，得到淺黃色固體的標題化合物。
步驟2(2Z)-2-疊氯基-3-(2-氯吡啶-3-基)丙-2-烯酸甲酯在-20℃向25％的甲醇鈉/甲醇溶液(80ml，349mmol)加入2-氯菸鹼醛(20.0g，139.9mmol)和疊氮基乙酸甲酯(32.2ml，349.7mmol)在甲醇(168ml)中的溶液。監測內溫並在30分鐘的加料期間保持約-20℃。然後將形成的混合物在冰浴中攪拌幾小時，隨後於冷室內在冰浴中過夜。將懸浮液倒在冰和NH4Cl的混合物上，10分鐘後將該漿體過濾。產物用冷水洗，然後在真空下乾燥。將粗產物溶於CH2Cl2中，加入MgSO4。將該懸浮液經矽膠墊過濾，用CH2Cl2洗。將濾液減壓濃縮，得到棕灰色標題化合物沉澱(20g)。
步驟3 4-氯-1H吡咯並[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯將(2Z)-2-疊氮基-3-[2-氯吡啶-3-基]丙-2-烯酸甲酯(21g，88mmol)在1，3，5-三甲基苯(880ml)中的溶液加熱回流1小時。將反應混合物冷卻至室溫，然後至0℃，過濾出沉澱，用冷己烷洗。將該物質在1∶20的乙酸乙酯/己烷中攪拌過夜，過濾後得到淺黃色固體的標題化合物(13.2g)。
步驟4 1-氯-8-氧代-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-7-羧酸甲酯向4-氯-1H-吡咯並[3，2-c]吡啶-2-羧酸甲酯(12.5g，59mmol)在THF(116ml)/甲苯(460ml)中的懸浮液裡加入1.0M的叔丁醇鉀/THF溶液(64ml，64mmol)和丙烯酸甲酯(55ml，611mmol)。將形成的混合物在100℃加熱18小時。在這之後將懸浮液冷卻至室溫，倒入NH4Cl飽和水溶液(400ml)和己烷(400ml)的混合物。傾析出固體，過濾並用水和己烷洗，得到標題化合物。
步驟5 1-氯-6，7-二氫-8H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-酮向前一步驟的化合物中加入異丙醇(8.0ml)和濃鹽酸(2.0ml)並在100℃加熱1小時。將反應混合物分配在EtOAc和Na2CO3之中。分離有機相，蒸發，得到標題化合物。
步驟6 1-異丙烯基-6，7-二氫-8H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-酮向1-氯-6，7-二氫-8H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-酮(5.0g，24.3mmol)、三(二亞苄基丙酮)合二鈀(0)(1.0g，1.09mmol)和三苯胂(2.70g，8.82mmol)在DMF(100ml)中的混合物加入三丁基異丙烯基錫烷(9.60g，29.00mmol)。將形成的混合物脫氣並在78℃加熱18小時。減壓蒸除溶劑。向形成的混合物中加入CH2Cl2和硅藻土，然後經硅藻土過濾。標題化合物用快速色譜法純化(50％至100％的EtOAc/己烷)。
步驟7(2E)-(1-異丙烯基-6，7-二氫-8H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-亞基)乙酸乙酯在-78℃下向1-異丙烯基-6，7-二氫-8H吡咯並[3，4-b]吡呤-8-酮(0.60g，2.8mmol)和膦醯乙酸三乙酯(1.00g，4.46mmol)在THF(24ml)中的溶液加入80％NaH(0.12g，4.00mmol)，將反應混合物溫熱至0℃，然後至室溫。將反應混合物倒在飽和NH4Cl和EtOAc上。分離出有機相，用Na2SO4乾燥並蒸發。標題化合物用快速色譜法純化(40％EtOAc/己烷)。
步驟8(1-異丙基-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基)乙酸乙酯向(2E)-(1-異丙烯基-6，7-二氫-8H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-亞基)乙酸乙酯(0.40g，1.4mmol)在MeOH(20ml)中的溶液加入Pd(OH)2(0.20g)。將混合物在1大氣壓H2下攪拌3小時。混合物經硅藻土過濾，蒸發，得到標題化合物。
步驟9{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-異丙基-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基}乙酸乙酯向二(3，4-二氯苯基)二硫醚(0.24g，0.67mmol)在CH2Cl2(5.6ml)中的溶液加入SO2Cl2(0.036ml)。形成的黃色混合物在室溫攪拌1小時。將此溶液在0℃下加到(1-異丙基-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基)乙酸乙酯(0.15g，0.52mmol)在DMF(5.6ml)中的溶液。在0℃下1.5小時後，將反應混合物倒在飽和的NaHCO3溶液和EtOAc上。分離有機相，用Na2SO4乾燥，過濾並蒸發。標題化合物用快速色譜法(30％至40％EtOAc/己烷)純化。
步驟10{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-異丙基-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基]乙酸向{9-[(3，4-二氯苯基)硫代]-1-異丙基-7，8-二氫-6H-吡啶並[3，4-b]吡呤-8-基}乙酸乙酯(0.23g，0.50mmol)在THF(5ml)和MeOH(2.5ml)中的溶液加入1.0M NaOH(1.5ml，1.5mmol)。室溫下攪拌18小時後，加入HOAc(0.25ml)，蒸除溶劑。殘餘物置於EtOAc/水中，有機層用水和鹽水洗。用Na2SO4乾燥後，將溶液過濾並蒸發。殘餘物用1∶1的乙酸乙酯/己烷攪拌，過濾後得到白色固體標題化合物。
1H NMR(MeOH-d4)δ1.14-1.26(m，6H)，2.47-2.56(m，1H)，2.56-2.64(m，1H)，2.94-3.05(m，2H)，3.81-3.89(m，1H)，4.22-4.30(m，1H)，4.33-4.44(m，2H)，6.93-6.99(m，1H)，7.14-7.19(m，1H)，7.33-7.39(m，1H)，7.54-7.59(m，1H)，8.16-8.21(m，1H).
將步驟10的產物用CH2N2轉化成其甲酯，該酯在手性固定相(Chiralcel OD柱2×25cm)上進行HPLC分離，用12％的2-丙醇/己烷洗脫，流速6ml/分。對映體A(極性小)的保留時間為31.9分，對映體B(極性強)的保留時間為35.5分。A和B都如實施例17步驟10一樣水解，得到標題化合物的對映體A和B。
實施例22((1R)-6-氟-8-(甲磺醯)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基)乙酸(化合物AJ) 步驟1氯化2-(2-溴-4-氟苯基)肼鎓在-10℃下向2-溴-4-氟苯胺在濃鹽酸中的懸浮液(1.5M)慢慢加入10.0M的NaNO2水溶液(1.1eq)。將該混合物在0℃攪拌2.5小時。然後慢慢加入SnCl2在濃鹽酸中的冷(-30℃)溶液(3.8M)，同時保持內溫低於10℃。形成的混合物在10℃下機械攪20分鐘，然後在室溫下攪拌1小時。將該濃稠的漿體過濾，將固體空氣乾燥過夜。重新懸浮在冷鹽酸中，再次過濾。將乾物質懸浮在乙醚中，攪拌10分鐘，過濾，空氣乾燥過夜，得到棕灰色固體標題化合物。
步驟2(+/-)(8-溴-6-氟-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基)乙酸乙酯向步驟1化合物(1eq)在AcOH中的懸浮液(0.5M)加入(2-氧代環己基)乙酸乙酯(1eq)。將混合物在回流下攪拌16小時，冷卻，減壓蒸發除去AcOH。殘餘物用EtOAc稀釋，用水和飽和NaHCO3水溶液洗。有機層用Na2SO4乾燥並濃縮。殘餘物隨後在矽膠墊上純化，用甲苯洗脫。將濾液濃縮，在己烷中攪拌，過濾後得到白色固體標題化合物。MS(+APCI)m/z 354.2(M+H)+。
步驟3(+/-)-[6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯向步驟2化合物(1eq)在無水DMSO中的溶液(0.28M)加入甲基亞磺酸鈉(3eq)和碘化銅(3eq)。向混合物中鼓入N2氣5分鐘，然後在100℃於氮氣氛下攪拌。12小時後，再加入甲基亞磺酸鈉(2eq)和碘化酮(2eq)。將混合物於100℃再攪拌12小時，冷卻，用EtOAc稀釋，加入1N HCl將混合物酸化。將懸浮液攪拌30分鐘，經硅藻土過濾。該濾液用水洗，用Na2SO4乾燥並濃縮。殘餘物經矽膠墊過濾，先用甲苯洗脫以除去非極性雜質，然後用2∶1的己烷/EtOAc混合物洗脫所要的產物。將用己烷/EtOAc混合物洗脫得到的濾液濃縮成淺黃色固體標題化合物。MS(-APCI)m/z 352.1(M-H)-。
步驟4[(1R)-6-氟-8-(甲基磺醯基)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯將步驟3的外消旋混合物用製備型HPLC在一隻Chiralpak AD製備柱上拆解，用15％的異丙醇/己烷混合物洗脫。根據最終產物的活性，確定極性高的對映體(保留時間長)為標題化合物。
步驟5[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯在10分鐘內，向步驟4化合物(1eq)、三苯膦(1.5eq)和(1R)-1-(4-氯苯基)乙醇(1.5eq，按照參考實施例1中所述的通用步驟製備)在THF中的溶液(0.175M)加入偶氮二羧酸二叔丁酯(2.1M THF溶液，1.5eq)。室溫下攪拌該混合物2小時並濃縮之。殘餘物用矽膠快速色譜法純化，用7％EtOAc/甲苯洗脫，得到所要的產物(純度～90％)，將其原樣用於下一反應。
步驟6[(1R)-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸和[(1S)-9-[(1S)-1)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸向步驟5化合物在2∶1的THF/甲醇混合物中的溶液(0.1M)加入1N LiOH水溶液(3eq)。室溫下攪拌該混合物2小時，加入AcOH，蒸發除去溶劑。殘餘物置於EtOAc/水中，有機層用鹽水洗，用Na2SO4乾燥，過濾後濃縮。殘餘物在30％的EtOAc/己烷中搖動，將該產物懸浮在乙醚中超聲45分鐘，過濾，在50℃真空乾燥24小時，得到白色固體標題化合物。MS(-APCI)m/z 462.1(M-H)。
或者是，在步驟5中使用(+/-)[6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯進行烷基化反應，得到兩種非對映異構體的混合物[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氯-8-(甲磺醯)-2，3，4.9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯。該非對映體混合物利用以下步驟進行選擇性水解，得到所要的[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸。
拆解將[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯的非對映體混合物(1eq)溶在3.5∶1的THF/MeOH混合物中(0.25M)並在0℃冷卻。慢慢加入LiOH 1N水溶液(1eq)，將混合物在0℃攪拌12小時或者到[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯幾乎完全水解，另一非對映體在這些條件下僅輕微水解。加入AcOH，蒸發除去溶劑，殘餘物置於EtOAc/水中，有機層用鹽水洗，用Na2SO4乾燥，過濾並濃縮。利用快速色譜法將[(1S)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸乙酯和[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸分離，用EtOAc在含1％AcOH的己烷中的40％溶液洗脫，得到所要的[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸，de＞90％，將其在30％的EtOAc/己烷中攪動，得到所要的化合物，為白色固體，de＞95％。
步驟7[(1R)-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸甲酯向[(1R)-9-[(1S)-1-(4-氯苯基)乙基]-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸([α]D＝-226°，MeOH中)在MeOH中的溶液(0.1M)加入10％的鈀/碳(10％wt/wt)。向混合物中鼓入N2氣流5分鐘。在室溫和H2氣氛(氣瓶)下攪拌該反應混合物24小時，經硅藻土墊過濾，用CH2Cl2洗脫。減壓蒸發除去溶劑，殘餘物轉移至MeOH中，得到化合物[(1R)-6-氟-8-(甲磺醯)-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基]乙酸甲酯。
步驟8((1R)-6-氟-8-(甲磺醯)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基)乙酸(化合物AJ)在20分鐘內，向步驟7化合物(1eq)、三苯膦(1.5eq)和(1R)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙醇(1.5eq)在THF中的溶液(0.2M)加入偶氮二羧酸二叔丁酯溶液(1M THF溶液，1.5eq)。室溫下攪拌該混合物2小時並濃縮之。殘餘物用矽膠快速色譜法純化，用10％EtOAc/甲苯洗脫，得到((1R)-6-氟-8-(甲磺醯)-9-{(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基}-2，3，4，9-四氫-1H-咔唑-1-基)乙酸甲酯(純度～90％)，將其原樣用於下一反應。
向以上的酯(1eq)在3.5/1的THF/MeOH混合物中的0℃溶液(0.25M)慢慢加入1N的LiOH水溶液(1eq)，將混合物在0℃攪拌16小時或直到該酯幾乎完全水解。在這些條件下，另一個較少的非對映體的水解速度要慢得多。加入AcOH，減壓除去溶劑。殘餘物置於EtOAc/水中，有機層用鹽水洗，用Na2SO4乾燥，過濾和濃縮。為除去未反應的甲基酯，將殘餘物經矽膠墊過濾，先用10％EtOAc/甲苯、然後用含1％AcOH的60％EtOAc/甲苯洗脫。將殘餘物在EtOAc/己烷中攪動，於50℃和高真空下乾燥16小時，得到標題化合物，為白色固體，de和ee＞95％(用手性HPLC檢驗)。MS(-APCI)m/z 496.0(M-H)-。[α]D＝-181°(在MeOH中)。
生物學在本發明中使用的作為選擇性DP拮抗劑起作用的化合物通常對DP的親合性(Ki)比對CRTH2受體的親合性(Ki)至少高約10倍。在本發明中使用的典型的DP拮抗劑對於DP受體的選擇性比對CRTH2受體至少高約10倍。更特別的是，該選擇性DP受體拮抗劑對DP受體的選擇性至少是對CRTH2受體的選擇性的100倍。尤其特別的是，該選擇性DP拮抗劑化合物對DP受體的選擇性高於對CRTH2受體的至少約800-1000倍，也就是說，對DP受體的親合性(Ki)比對CRTH2受體的親合性(Ki)高800-1000倍。
正如本文中所使用的，當一個化合物「選擇性地調製DP受體」時，該化合物在某個治療劑量可達到的濃度結合併拮抗DP受體，而在這樣一個治療上可達到的濃度下對CRTH2基本上無調製作用。
一般來說，本發明中使用的DP拮抗劑對於CRTH2受體的親合性(Ki)約為0.5微摩爾或更高。對於CRTH2受體的結合親合性為約0.5微摩爾或更高，而且對DP受體的選擇性高於對CRTH2受體至少約10倍的那些化合物，可用於抑制在服用煙酸而不加這種選擇性DP拮抗劑時見到的潮紅現象。
化合物在重組人DP和CRTH2受體上的親合性和選擇性測定化合物在DP和CRTH2上的受體親合性和選擇性用Abramovitz M等，Biochem.Biophys.Acta(2000)1483285-293和Sawyer N等，Br.J.pharmacol.(2002)1371163-1172中所描述的放射性配體結合性分析來測定。簡言之，用人胚胎腎(HEK)293 EBNA(EB病毒核抗原)細胞(稱作HEK 293E細胞系)建立各自表達DP和CRTH2受體的穩定細胞系。將從這些重組細胞系製備的膜級分用在平衡競爭放射性配體結合性分析中以確定化合物在DP和CRTH2受體上的親合性和選擇性。
將對應於全長編碼序列的DP和CRTH2 cDNAs亞克隆到哺乳動物表達載體pCEP4(Invitrogen)的適當部位中並表達在HEK 293E細胞內。利用差速離心(1000xg 10分鐘，然後160,000xg 30分鐘，全在4℃)，隨後在冰上於蛋白酶抑制劑(2mM AEBSF，10μM亮抑蛋白酶肽和0.05mg/ml抑胃酶肽)存在下通過在800psi下氮氣空腔化30分鐘將細胞裂解，製備細胞膜。將160,000xg的沉澱按照約5-10mg/ml蛋白質利用Dounce均化作用(Dounce A；10次衝擊)重新懸浮在含1mM EDTA的10mM HEPES/KOH(pH7.4)中，在液氮中冷凍並在-80℃貯存。受體結合性分析是在含1mM EDTA、10mM MnCl2和0.7nM[3H]PGD2(200Ci/mmol)的10mM HEPES/KOH(pH7.4)中進行，最終培養體積0.2ml。通過加入從160,000xg級分得到的膜蛋白(對於DP約30μg，對於CRTH2約10μg)引發反應。將配體加在二甲基亞碸(DMSO)中，在所有培養樣中均恆定在1％(v/v)。在10μM非放射性PGD2存在下測定非特異性結合。在微型軌道式搖蕩器上於室溫下培養60分鐘。使用一臺Tomtec MachIII96孔半自動細胞收穫器，快速濾過預先在不含EDTA的分析培養緩衝液中潤溼(在4℃)的96孔Unifilter GF/C(Canberra Packard)以結束親合性分析。過濾器用3至4ml的同一緩衝液洗，在55℃乾燥90分鐘。加入50μL Ultima Gold F(Canberra Packard)，使用一臺1450 MicroBeta(Wallac)計數器，用閃爍計數法測定各過濾器結合的殘留放射性。
最大比結合性定義為總結合量減去競爭劑不存在時的非特異結合量。在化合物的各個濃度測定特異結合併表示成最大特異結合的百分數。將最大特異結合的百分數表示成試驗化合物濃度的函數構成S形平衡競爭曲線，使用定製設計的軟體包進行分析以確定轉折點(InPt)，該軟體包採用以四參數方程為基礎的單向驅動的非線性最小二乘方曲線擬合例行程序。由方程Ki＝InPt/1+([放射性配體]/Kd)計算平衡抑制常數(Ki)，確定試驗化合物的結合親合性，其中Kd是放射性配體-受體相互作用的平衡解離常數。當InPt無法確定時，使用IC50(即，抑制50％最大特異結合所需的試驗化合物濃度)。
本發明中使用的化合物一般對於DP受體的Ki是從低至約0.4nM到高至約16.3nM。而且，本發明中使用的化合物一般對於CRCH2受體的Ki是從低至約180nM到高至約22,000nM甚至更高。
化合物對煙酸誘發的小鼠血管擴張的作用本發明描述的選擇性DP拮抗劑的效力可以利用人類的煙酸誘發潮紅的鼠模型，通過測定抑制潮紅作用來證實。在對用載體(作為對照樣)或DP拮抗劑進行過預處理的小鼠施用煙酸後，測定鼠耳中的血液流動(人類潮紅的重要成分血管擴張的量度)。具體地說，該研究中使用雄性C57BL/6小鼠。每個試驗組內評價5隻鼠。將戊巴比妥用水稀釋至最終濃度為5mg/ml，每隻鼠腹腔內注射0.3ml。將DP拮抗劑溶於5％羥丙基β-環糊精中，最終濃度5mg/ml。該化合物以0.2ml/鼠的體積腹腔內施用(～40mpk)。煙酸溶於5％羥丙基β環糊精內，最終濃度12.5mg/ml。用αN NaOH將該煙酸貯備液調節至pH7.4，按0.2ml/鼠皮下注射(～100mpk)。
用雷射Doppler灌流成像儀(PeriScan PIM II，Perimed，Sweden)，從施用煙酸之前5分鐘開始，每30秒監測鼠耳皮膚的灌流共30分鐘。計算施用載體或煙酸後的10分鐘期間內的平均灌流的變化百分數，對每隻動物畫出平均灌流變化百分數隨時間的變化。對每個圖計算平均灌流的曲線下面積(AVC，％Δx分)，將結果對各組表示成平均AVC±SEM。
化合物D抑制PGD-2在小鼠中誘發的血管擴張(圖1)。試驗的DP拮抗劑抑制煙酸在小鼠中誘發的血管擴張。所選擇的化合物的數據提供在圖2和圖3中。
本文中引用的所有專利、專利申請和出版物均全文引用作為參考。雖然已詳細描述了一些優選的實施方案，但在本發明的範圍內有許多可供選擇的其它實施方案。
權利要求
1.一種治療有治療需要的人類患者的動脈粥樣硬化的方法，包括對患者施用煙酸或其可藥用鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，其數量能有效治療動脈粥樣硬化而不引起明顯的潮紅。
2.一種提高有治療需要的人類患者的血清HDL水平的方法，包括對患者施用煙酸或其可藥用鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體激動劑，以及一種DP受體拮抗劑，所述的組合能有效提高患者的血清HDL水平而不引起明顯的潮紅。
3.權利要求1或2的一種方法，其中施用煙酸或其可藥用鹽或溶劑化物，該DP受體拮抗劑選擇性調製DP受體，而基本上不調製CRTH2受體。
4.權利要求1或2的方法，其中DP受體拮抗劑是選自以下化合物或其可藥用鹽或溶劑化物
5.一種藥物組合物，其中含有煙酸或其鹽或溶劑化物，或另一種煙酸受體拮抗劑，及一種DP受體拮抗劑，與一種可藥用的載體相組合。
6.權利要求5的一種藥物組合物，其中含有煙酸和一種DP受體拮抗劑與一種可藥用的載體組合。
7.權利要求6的一種藥物組合物，其中該DP拮抗劑是選自以下化合物或其可藥用鹽或溶劑化物
8.權利要求7的藥物組合物，其中DP拮抗劑是選自化合物A、B、D、E、X、AA、AF、AG、AH、AI和AJ。
9.權利要求5、6、7或8的一種藥物組合物，其中還含有一種HMGCo-A還原酶抑制化合物。
10.權利要求9的一種藥物組合物，其中該HMG Co-A還原酶化合物是辛伐他汀。
全文摘要
公開了一種治療動脈粥樣硬化的方法，其中將煙酸或另一種煙酸受體激動劑與DP受體拮抗劑聯合施用於患者。施用該DP受體拮抗劑是為了減小、防止或消除否則會發生的潮紅。
文檔編號A61K31/538GK1787819SQ200480012853
公開日2006年6月14日 申請日期2004年5月13日 優先權日2003年5月15日
發明者K·程, M·G·沃特斯, K·M·梅特斯, G·奧內爾 申請人:麥克公司, 麥克弗羅斯特加拿大有限公司