促創傷修復生物海綿材料及其製備方法
2023-06-15 16:55:11
專利名稱：促創傷修復生物海綿材料及其製備方法
技術領域：
本發明涉及促進傷口，特別是皮膚組織大面積損傷修復的海綿材料及其製備方法。
背景技術：
當人或動物身體遭受各種外科手術以及灼傷在內的各種物理創傷時，常常造成軟組織及神經組織的破壞和斷裂及缺損，並可造成出血和感染的機會。在正常的情況下，傷口可以自然癒合並修復。傷口自然癒合和修復的過程包括封閉傷口以限制血液流失並阻止感染；然後去除受損的組織並通過細胞吞噬作用消滅病原微生物；繼之周圍組織中各種類型的細胞侵入傷口部位並形成肉芽和瘢痕；最後重建瘢痕組織並改變細胞群體，以導致傷口的完全癒合。在大多數情況下，自然癒合過程是很有效的。但由於組織發生學上的原因，某些組織，特別是脊髓和/或外周神經組織，則很難甚至不能自然修復和癒合。另外，有些傷口往往因病人身體素質、創傷大小和嚴重程度及並發感染等因素的影響，大多數情況下的傷口癒合需要醫療幹預。例如，某些帶有實質性組織損傷的嚴重燒傷往往難於完全癒合而需要進行植皮修復，另外多數涉及脊髓神經組織和大的外周神經組織的損傷如不投用某些促進神經組織修復的藥物則很難修復。需要醫療幹預的其他創傷包括軟骨、韌帶和肌腱等難以自然癒合和修復的傷口。促進傷口癒合和組織修復的一種方法是在局部投用包括各種生長因子的傷口癒合促進劑。然而，這種方法不能保證藥物在傷口部位以有效量長時間緩慢釋放並發揮作用，而且單純使用生長因子也往往不能真正有效地促進整個損傷組織的全面修復。某些具有良好組織修復活性的藥物，例如多種生長因子，如果不藉助適當的局部投藥載體，使藥物從固體或半固體載體材料中以長時間持續投用的有效量釋放到傷口部位，則將不能發揮其治療價值。因此，特別希望建立並不斷改進有效地局部投用這些治療劑的配方和材料。
現有技術中對促使傷口癒合的方法已有所揭示，例如，美國專利第5,489,304及5,716,411號公開了一種傷口或燒燙傷的皮膚再生方法，該方法是先將膠原蛋白-葡糖胺基葡聚糖混合後製成的基質覆蓋於傷口表面，使得該基質經由健康組織的血管及間充質細胞滲入，再塗覆一層經培養的動物或人類的表皮細胞層，以促使皮膚再生。美國專利第4,614,794號公開了一種將植物性多糖(如褐藻酸)與生物可分解的蛋白質(如膠原蛋白)形成多孔性的蛋白質/多糖複合物的方法，該複合物可作為傷口敷料。美國專利第5,689,228號公開了一種用於覆蓋傷口的皮膚替代物，其是烏賊的甲殼素與魚皮膠原蛋白的層合物。此外，美國專利第5,977,088號公開了一種含有治療或緩解皮膚疾病的藥劑及透明質酸的醫藥組合物，該醫藥組合物是利用透明質酸促進或引起藥劑輸送至患者的皮膚內，其還可累積藥劑及延長藥劑停留在該部位的時間。上述的現有技術中使傷口癒合的方法或敷料，並無法使傷口癒合的時間能更有效地縮短，且在用於大面積及較深的傷口時，無法避免留下疤痕。
發明內容
本發明目的在於為克服現有技術的不足而提供一種能夠快速促損傷修復、特別是大面積組織損傷修復的的可生物降解和可吸收的生物海綿材料。
本發明的另一目的是提供製備上述生物海綿材料的方法。
為達到上述目的，本發明提供了一種促創傷修復生物海綿材料，包括主要由用殼聚糖、糖胺多糖等改性的膠原蛋白組成的生物活性海綿材料，其特徵在於所述的每克生物活性海綿材料中含有不少於10ng的生長因子，其中生長因子可以是成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、神經生長因子和結締組織生長因子中的的一種或多種生長因子，成纖維細胞生長因子也可以是鹼性成纖維細胞生長因子或酸性成纖維細胞生長因子，而所述的糖胺多糖可以為透明質酸、6-硫酸軟骨素、4-硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、肝素、硫酸肝素的一種或多種。
促創傷修復生物海綿材料的製備方法包括以下步驟(1)從動物的皮膚、軟骨、肌腱等含有豐富膠原蛋白的組織中提取出較純的膠原蛋白，並製備成具有一定粘度的水溶液；(2)配製一定濃度的殼聚糖或糖胺多糖水溶液，殼聚糖為膠原蛋白量的10％-70％，糖胺多糖為膠原蛋白量的5％-10％(均為質量分數)；(3)配置交聯劑水溶液，與(1)和(2)所得溶液混合攪勻，混合溶液放置一段時間使膠原蛋白充分交聯，交聯劑佔混合溶液總質量的5％-50％。
(4)取生長因子按每克生物海綿中不少於10ng的生長因子配製成水溶液，在溫和的攪拌條件下將生長因子溶液加入到(3)所得混合溶液中；(5)將(4)所得的混合液分裝在模具內冷凍乾燥；(6)無菌封裝在醫用包裝袋內；(7)用20-40KGy的γ射線照射滅菌。
其中交聯劑可以是但不限定於戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基瞵、京尼平。
製備促創傷修復生物海綿材料的另一種方法可以是包括以下步驟(1)從動物的皮膚、軟骨、肌腱等含有豐富膠原蛋白的組織中提取出較純的膠原蛋白，並製備成具有一定粘度的水溶液；(2)配置交聯劑水溶液，與上述膠原溶液混合使充分交聯，交聯劑佔混合溶液總質量的5％-50％；(3)配製一定濃度的殼聚糖或糖胺多糖水溶液，殼聚糖為膠原蛋白量的10％-70％，糖胺多糖為膠原蛋白量的5％-10％(均為質量分數)；(4)取生長因子按每克生物海綿中不少於10ng的生長因子配製成水溶液與(3)所得殼聚糖或糖胺多糖溶液混合制生長因子溶液；(5)在溫和的攪拌條件下將(4)所得混合溶液加入到(2)所得混合溶液中；(6)將(5)所得的混合液分裝在模具內冷凍乾燥；
(7)無菌封裝在醫用包裝袋內；(8)用20-40KGy的γ射線照射滅菌。
其中交聯劑可以是但不限定於戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基瞵、京尼平。
促創傷修復生物海綿材料的製備方法還可以是包括以下步驟(1)從動物的皮膚、軟骨、肌腱等含有豐富膠原蛋白的組織中提取出膠原蛋白，並製備成具有一定粘度的溶液；(2)將製得的膠原溶液冷凍乾燥，然後將乾燥產物在pH5.4的0.05M的MES(2N-嗎啡啉-乙磺酸)溶液中用EDC(1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基-碳化二亞氨)/NHS交聯，交聯後用0.1M的Na2HPO4溶液衝洗，然後用軟化水洗；(3)將(2)所得交聯後的膠原蛋白海綿再次浸潤到pH5.6的0.05M的MES溶液中，然後在MES溶液中使交聯的膠原蛋白海綿與用EDC/NHS活化的肝素溶液反應，反應結束後用0.1M的Na2HPO4溶液衝洗，然後用軟化水洗反應後的膠原蛋白海綿；再將此膠原蛋白海綿浸潤在PBS(磷酸鹽緩衝液)溶液中過夜，用濾紙吸除多餘的水份，把膠原片置於含有BSA(小牛血清)的適量生長因子磷酸緩衝溶液中，每克生物海綿中不少於10ng的生長因子，在室溫下反應，然後樣品用PBS溶液衝洗兩次(5min)除去沒有結合上的生長因子，最後將結合上生長因子的膠原蛋白海綿再次冷凍乾燥；(4)無菌封裝在醫用包裝袋內；(5)用20-40KGy的γ射線照射滅菌。
本發明的促創傷修復生物海綿材料包括生長因子，同時還可進一步包括其他的藥用成分，包括但不限於生長因子、消炎藥劑、抗生素或抗感染藥劑，或其他可促進組織修復和癒合的活性物質。
本發明提供的促創傷修復生物海綿材料具有疏鬆狀結構，決定了其能夠充分吸收傷口滲出液，起到良好的引流作用，同時由於溼潤創面的自溶作用，其癒合可以簡化清創術，促進傷口的潔淨、溼潤環境有利於創面癒合表現在(1)炎症擴散消退；(2)傷口疼痛減輕；(3)滲出物減少；(4)出現纖維蛋白膜；(5)因形成封閉的局部乏氧微環境，破壞細菌生存條件，使細菌生長減少病原體消失；(6)利於局部生長因子的釋放；此外促創傷修復生物海綿材料適當的局部投藥載體，使藥物從載體材料中以長時間持續投用的有效量釋放到傷口部位，充分發揮生長因子的誘導作用，可明顯縮短傷口癒合的時間，並可使癒合後的新生組織與周圍組織的外觀接近，可避免留下明顯的疤痕，因此可以應用於各類手術中止血，急性外傷止血，各類手術後殘腔填塞，燒燙傷，美容整形術以及潰瘍、瘻道、褥瘡、婦科宮頸糜爛等肉芽創面。
下面實施例旨在進一步舉例說明本發明促進損傷修復生物活性海綿材料的製備方法以及其應用，但這些實施例並不以任何方式限制本發明待批權利要求的範圍。
具體實施例方式
實施例1在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg戊二醛充分反應後，在攪拌的情況下緩慢滴加2％的殼聚糖溶液70ml，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加鹼性成纖維細胞生長因子10ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例2在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg己異二氰酸酯充分反應後，在攪拌的情況下緩慢滴加2％的殼聚糖溶液10ml，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加酸性成纖維細胞生長因子、表皮生長因子各10ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例3在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg碳化二亞胺充分反應後，在攪拌的情況下緩慢滴加2％的6-硫酸軟骨素溶液5ml，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加表皮生長因子和結締組織生長因子各15ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例4在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg疊氮二苯基瞵充分反應後，在攪拌的情況下緩慢滴加2％的4-硫酸軟骨素溶液10ml，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加表皮生長因子30ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例5在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg京尼平充分反應後，在攪拌的情況下緩慢滴加2％的硫酸皮膚素溶液8ml，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加結締組織生長因子10ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例6在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg戊二醛充分反應後，在攪拌的情況下緩慢滴加2％的硫酸肝素溶液7ml，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加神經生長因子30ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例7在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg碳化二亞胺充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％殼聚糖，使最後溶液中殼聚糖的質量為膠原蛋白質量的10％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加神經生長因子20ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例8在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與80mg戊二醛充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％殼聚糖，使最後溶液中殼聚糖的質量為膠原蛋白質量的70％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加結締組織生長因子15ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例9在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與90mg碳化二亞胺充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％殼聚糖，使最後溶液中殼聚糖的質量為膠原蛋白質量的50％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加鹼性成纖維細胞生長因子20ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例10在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與100mg碳化二亞胺充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％ 6-硫酸軟骨素，使最後溶液中6-硫酸軟骨素的質量為膠原蛋白質量的8％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加表皮生長因子和結締組織生長因子各25ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例11在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與80mg戊二醛充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％透明質酸，使最後溶液中透明質酸的質量為膠原蛋白質量的5％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加酸性成纖維細胞生長因子18ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例12在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與10mg己異二氰酸酯充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％ 4-硫酸軟骨素，使最後溶液中4-硫酸軟骨素的質量為膠原蛋白質量的10％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加酸性成纖維細胞生長因子25ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例13在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與60mg疊氮二苯基瞵充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％硫酸皮膚素，使最後溶液中硫酸皮膚素的質量為膠原蛋白質量的6％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加表皮生長因子15ng、神經生長因子10ng和結締組織生長因子各15ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例14在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與50mg京尼平充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％肝素，使最後溶液中肝素的質量為膠原蛋白質量的8％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加生長因子15ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例15在10攝氏度以下，無菌條件下取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml與75mg碳化二亞胺充分反應後，在高速攪拌的情況下滴加2％肝素和硫酸肝素，使最後溶液中肝素和硫酸肝素的總質量為膠原蛋白質量的8％，然後再在緩慢的攪拌情況下滴加成纖維細胞生長因子和結締組織生長因子各15ng，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。
實施例16在10攝氏度以下，無菌條件下在10ml 2％的殼聚糖溶液裡面緩慢的滴加入經肝素保護的神經生長因子和結締組織生長因子，生長因子加入量為各25ng，然後把這種含有生長因子的殼聚糖溶液在攪拌的情況下緩慢的滴加到經100mg戊二醛交聯的0.4％ 100ml的膠原蛋白海綿溶液中，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。此操作步驟得到的產品具有比實施例1中所得到的產品能夠使生長因子更加緩慢釋放的效果。
實施例17在10攝氏度以下，無菌條件下首先在2％硫酸軟骨素中滴加經肝素保護的酸性成纖維細胞生長因子和表皮生長因子，硫酸軟骨素的質量為膠原蛋白質量的8％，生長因子加入量為各20ng，然後把這種含有生長因子的硫酸軟骨素溶液在攪拌的情況下緩慢滴加到經100mg戊二醛交聯的0.4％ 100ml的膠原蛋白海綿溶液中，攪拌均勻後放置12h，然後分裝在適宜的模具裡，冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。此操作步驟得到的產品具有比實施例2中所得到的產品能夠使生長因子更加緩慢釋放的效果。
實施例18取0.4％的膠原蛋白海綿溶液100ml，分裝在適宜的模具內，冷凍乾燥得到純的膠原蛋白海綿，然後將膠原海綿放入MES緩衝溶液中浸潤至少30min，隨後將膠原海綿浸入到含有EDC(1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基-碳化二亞氨)與NHS的0.05MMES(2N-嗎啡啉-乙磺酸)緩衝溶液中(pH5.40)並輕輕搖蕩。每1g膠原放入到215ml含有1.731g的EDC與0.415g的NHS的MES緩衝溶液中，在此條件下，交聯反應4h，然後用0.1M的Na2HPO4溶液衝洗(2h)軟化水洗30min洗4次。然後將交聯後的膠原蛋白海綿再次浸潤到0.05M的MES溶液中(pH5.6)，在MES溶液中使交聯的膠原蛋白海綿與用EDC/NHS活化的肝素溶液反應2h，反應結束後用0.1M的Na2HPO4溶液衝洗，然後用軟化水洗反應後的膠原蛋白海綿。再將此膠原蛋白海綿浸潤在PBS溶液中過夜，用濾紙吸除多餘的水份，把膠原海綿置於含有BSA的20ng表皮生長因子和15ng結締組織生長因子的確磷酸緩衝溶液中，在室溫下充分反應，然後樣品用PBS溶液衝洗兩次(5min)除去沒有結合上的生長因子，最後將結合上生長因子的膠原蛋白海綿再次冷凍乾燥，醫用包裝袋無菌封裝，20-40KGy的γ射線照射滅菌，得到所需的生物活性蛋白海綿。此活性海綿比上述幾種製法具有更加好的緩釋作用。
促創傷修復生物海綿材料的應用實驗選2.0～3.0Kg的紐西蘭白兔3隻，在其背脊兩側用電擊法製備4個燙傷模型，然後在燙傷部位分別用活性生物海綿、膠原海綿、生長因子、生理鹽水處理。用活性生物海綿與膠原海綿處理的傷口無滲出液，而用生長因子與生理鹽水處理的傷口部位有液體滲出。在整個的治療過程當中只有當活性生物海綿或膠原海綿被吸收或降解後才需要覆蓋新的海綿片，而用生長因子與生理鹽水處理的傷口卻要每天上藥直到創面結痂為止。在治療的第三天，用活性生物海綿、膠原海綿處理的傷口明顯縮小，第九天，用活性生物海綿處理的傷口完全癒合，且創面只有很小的疤痕；用膠原海綿處理的傷口在第11天時完全癒合，傷口部位有小疤痕。而用生長因子處理的傷口在第12天時完全癒合，創面的疤痕比較小，用生理鹽水處理的傷口在第15天時癒合，創面有較大的疤痕組織。
本實驗的結果初步證明，使用本發明的活性生物海綿不僅可以減少上藥的次數，而且可以保護創面、快速的創面的癒合。
權利要求
1.一種促創傷修復生物海綿材料，包括主要由用殼聚糖、糖胺多糖等改性的膠原蛋白組成的生物活性海綿材料，其特徵在於所述的每克生物活性海綿材料中含有不少於10ng的生長因子。
2.根據權利要求1所述的促創傷修復生物海綿材料，其特徵在於所述生長因子為成纖維細胞生長因子、表皮生長因子、神經生長因子和結締組織生長因子的一種或多種生長因子。
3.根據權利要求2所述的促創傷修復生物海綿材料，其特徵在於所述的成纖維細胞生長因子是鹼性成纖維細胞生長因子或酸性成纖維細胞生長因子。
4.根據權利要求1或2或3的促創傷修復生物海綿材料，其特徵在於所述糖胺多糖為透明質酸、6-硫酸軟骨素、4-硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、肝素、硫酸肝素的一種或多種。
5.一種權利要求1所述的促創傷修復生物海綿材料的製備方法，其特徵在於所述製備方法包括(1)從動物的皮膚、軟骨、肌腱等含有豐富膠原蛋白的組織中提取出較純的膠原蛋白，並製備成具有一定粘度的水溶液；(2)配製一定濃度的殼聚糖或糖胺多糖水溶液，殼聚糖質量為膠原蛋白量的10％-70％，糖胺多糖質量為膠原蛋白量的5％-10％；(3)配置交聯劑水溶液，與(1)和(2)所得溶液混合攪勻，混合溶液放置一段時間使膠原蛋白充分交聯，交聯劑佔混合溶液總質量的5％-50％；(4)取生長因子按每克生物海綿中不少於10ng的生長因子配製成水溶液，在溫和的攪拌條件下將生長因子溶液加入到(3)所得混合溶液中；(5)將(4)所得的混合液分裝在模具內冷凍乾燥；(6)無菌封裝在醫用包裝袋內；(7)用20-40KGy的γ射線照射滅菌。
6.根據權利要求5所述的製備方法，其特徵在於所述交聯劑可以是但不限定於戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基瞵、京尼平。
7.一種權利要求1所述的促創傷修復生物海綿材料的製備方法，其特徵在於所述製備方法包括(1)從動物的皮膚、軟骨、肌腱等含有豐富膠原蛋白的組織中提取出較純的膠原蛋白，並製備成具有一定粘度的水溶液；(2)配置交聯劑水溶液，與上述膠原溶液混合使充分交聯，交聯劑佔混合溶液總質量的5％-50％；(3)配製一定濃度的殼聚糖或糖胺多糖水溶液，殼聚糖質量為膠原蛋白量的10％-70％，糖胺多糖質量為膠原蛋白量的5％-10％；(4)取生長因子按每克生物海綿中不少於10ng的生長因子配製成水溶液與(3)所得殼聚糖或糖胺多糖溶液混合製成生長因子溶液；(5)在溫和的攪拌條件下將(4)所得混合溶液加入到(2)所得混合溶液中；(6)將(5)所得的混合液分裝在模具內冷凍乾燥；(7)無菌封裝在醫用包裝袋內；(8)用20-40KGy的γ射線照射滅菌。
8.根據權利要求7所述的製備方法，其特徵在於所述交聯劑可以是但不限定於戊二醛、己異二氰酸酯、碳化二亞胺、疊氮二苯基瞵、京尼平。
9.一種權利要求1所述的促創傷修復生物海綿材料的製備方法，其特徵在於所述製備方法包括(1)從動物的皮膚、軟骨、肌腱等含有豐富膠原蛋白的組織中提取出膠原蛋白，並製備成具有一定粘度的溶液；(2)將製得的膠原溶液冷凍乾燥，然後將乾燥產物在pH5.4的0.05M的MES(2N-嗎啡啉-乙磺酸)溶液中用EDC(1-乙基-3-3-二甲基氨基丙基-碳化二亞氨)/NHS交聯，交聯後用0.1M的Na2HPO4溶液衝洗，然後用軟化水洗；(3)將(2)所得交聯後的膠原蛋白海綿再次浸潤到pH5.6的0.05M的MES溶液中，然後在MES溶液中使交聯的膠原蛋白海綿與用EDC/NHS活化的肝素溶液反應，反應結束後用0.1M的Na2HPO4溶液衝洗，然後用軟化水洗反應後的膠原蛋白海綿；再將此膠原蛋白海綿浸潤在PBS溶液中過夜，用濾紙吸除多餘的水份，把膠原片置於含有BSA的生長因子磷酸緩衝溶液中，每克生物海綿中不少於10ng的生長因子，在室溫下反應，然後樣品用PBS溶液衝洗兩次(5min)除去沒有結合上的生長因子，最後將結合上生長因子的膠原蛋白海綿再次冷凍乾燥；(4)無菌封裝在醫用包裝袋內；(5)用20-40KGy的γ射線照射滅菌。
全文摘要
本發明涉及促進傷口，特別是皮膚組織大面積損傷修復的海綿材料及其製備方法。促創傷修復生物海綿材料包括主要由用殼聚糖、糖胺多糖等改性的膠原蛋白組成的生物活性海綿材料，其特徵在於所述的每克生物活性海綿材料中含有不少於10ng的生長因子。本促創傷修復生物海綿材料可以使藥物從載體材料中以長時間持續投用的有效量釋放到傷口部位，充分發揮生長因子的誘導作用，可明顯縮短傷口癒合的時間，並可使癒合後的新生組織與周圍組織的外觀接近，可避免留下明顯的疤痕，因此可以應用於各類手術中止血，急性外傷止血，各類手術後殘腔填塞，燒燙傷，美容整形術以及潰瘍、瘻道、褥瘡、婦科宮頸糜爛等肉芽創面。
文檔編號A61L27/44GK1788802SQ20051002258
公開日2006年6月21日 申請日期2005年12月14日 優先權日2005年12月14日
發明者黃志鋒, 李校堃, 丁珊, 鄭青, 許華, 譚毅, 潘建春 申請人:溫州醫學院