華蟾素注射乳劑及其製備方法
2023-06-14 19:53:06
專利名稱：華蟾素注射乳劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及華蟾素注射乳劑的製備方法，屬於醫藥製劑的生產及加工。
背景技術：
華蟾素為蟾蜍科動物中華大蟾蜍(Bufo bufogargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)皮的乙醇提取物。主要含有蟾素內脂等吲哚類生物鹼的有效成分(參見張愛萍，劉明蕊，康建麗等，華蟾素靜脈應用的臨床護理，醫藥論壇雜質，2004，25(23)75～76)。以乾燥品計，華蟾素中所含的脂蟾酥配基不得少於4％，華蟾酥毒基不得少於5％。
華蟾素注射液是中華大蟾蜍皮的水製劑。基礎藥理學研究表明華蟾素注射液對肝癌、胃癌和結腸癌細胞有直接殺滅作用；臨床研究證明華蟾素注射液主治惡性腫瘤，對消化系統腫瘤、肺癌、宮頸癌及乳癌療效尤為顯著；對慢性B型肝炎及慢性B型肝炎病毒攜帶者亦有明顯療效。水針製劑在臨床應用時，用量過大或兩次用藥間隔時間較短病患出現發冷發熱現象，少數病人出現局部刺激，甚至靜脈炎。(參見季海寧，李成建。華蟾素的不良反應，醫藥導報，2002，5(21)157)，該品的不良反應的發生率高達43.28％(參見龔愛平，劉金秀，倪蓓等，華蟾素的不良反應(附201例臨床觀察)，徐州醫學院學報，1998，18(3)418～421)，該不良反應可能為製劑質量欠佳所致的變態反應。
發明內容
本發明擬解決的技術問題針對華蟾素水針製劑所致藥物靶向性較弱的不足，研究出一種華蟾素注射乳劑，在發揮其藥效同時減少或避免其變態反應。本發明提供了一種製備工藝簡單、使用方便、刺激性低、穩定性好的華蟾素注射乳劑，以滿足市場上對該藥物的需求。
在本發明的華蟾素注射乳劑中用一種或一種以上的注射用油溶解華蟾素，並可選擇性地加入一種或一種以上的注射用乳化劑、助溶劑、抗氧劑、等滲調節劑和pH調節劑等藥用輔料製備成符合注射要求的乳劑。
本發明華蟾素注射乳劑配方如下
本發明華蟾素注射乳劑是由華蟾素、注射用油、乳化劑、助溶劑、抗氧劑等滲調節劑、pH調節劑和注射用水組成。
本發明所用的華蟾素為蟾蜍科動物中華大蟾蜍(Bufo bufogargarizansCantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictus Schneider)皮的提取物。優選長江以南地處溫帶至亞熱帶產中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍。以乾燥品計，華蟾素中所含的脂蟾酥配基不得少於4％(優選脂蟾酥配基含量大於7％)，華蟾酥毒基不得少於5％(優選華蟾酥毒基含量大於7.5％)。
本發明乳劑中採用的注射用油選自大豆油，魚油、亞麻籽油、葵花子油、月見草油、沙棘油、花生油、精煉米糠油、小麥胚芽油、芝麻油、紫蘇油、紅花油、青刺果油，深海魚油、油酸、棕櫚油、硬脂酸、α-亞麻酸、γ-亞麻酸、去氧膽酸、泛酸鈉、煙醯胺、油酸、多不飽和脂肪酸、二十五碳五烯酸及其酯、二十六碳五烯酸及其酯、甘油或薏仁油中一種或一種以上的混合物。優選自大豆油，魚油、亞麻籽油、葵花子油、月見草油、沙棘油、花生油、精煉米糠油、小麥胚芽油、芝麻油一種或一種以上的混合物。
本發明乳劑中採用的乳化劑選自於大豆磷脂、蛋黃磷脂、波洛沙姆、卵磷脂、腦磷脂、黃原膠、蔗糖酯、低酯果膠、阿拉伯膠、人參皂苷、西洋參皂苷、三七皂苷、絞股藍皂苷、單油酸甘油酯一種或一種以上的混合物。優選自大豆磷脂、蛋黃磷脂、波洛沙姆、卵磷脂、腦磷脂一種或一種以上的混合物。
本發明乳劑中採用的助溶劑選自於尿素、煙醯胺、乙醇胺、丙二醇、PEG4000、甘草酸、水楊酸、琥珀酸鈉、磷酸鈉、蛋氨酸、醋酸酯、PEG 4000、甘氨酸酯一種或一種以上的混合物。優選於尿素、煙醯胺、乙醇胺、丙二醇、PEG4000一種或一種以上的混合物。
本發明乳劑中採用的抗氧劑選自生育酚、二丁基羥基甲苯、D-木糖、次磷酸、穀胱肝肽、蛋氨酸、梔子黃、L-酒石酸、氫醌、聚丙烯酸、沒食子酸、植酸、琥珀酸(鈉)、麝香草油一種或一種以上的混合物。優選於生育酚、二丁基羥基甲苯、D-木糖、次磷酸、穀胱肝肽一種或一種以上的混合物。
本發明乳劑中採用的等滲調節劑選自於甘油、山梨醇、氯化鈉、氯化鉀、蔗糖、甘露醇、葡萄糖一種或一種以上的混合物。
本發明乳劑中採用的pH調節劑優選選自於不同濃度的無機酸包括鹽酸、稀硝酸、磷酸、稀硫酸、NH4Cl等，或有機酸包括醋酸、琥珀酸、草酸等，優選鹽酸、稀硝酸、稀硫酸；或不同濃度的無機鹼包括NaOH、KOH等，或有機鹼包括鹼性胺基酸、醋酸鈉、乳酸鈉、乙二胺等；或不同pH的磷酸鹽、醋酸鹽、氨的緩衝溶液。
本發明所述華蟾素注射乳劑的製備方法包括下列步驟(請分清楚哪些是必須的，哪些是優選的)①油相的製備按處方量取華蟾素、注射用油及可選擇的助溶劑，在10～95℃加熱攪拌溶解，得油相。
②水相的製備按處方量取注射用水及可選擇的等滲調節劑，在10～95℃加熱攪拌溶解，得水相。
③選擇性地在油相或在水相中加入乳化劑或抗氧劑。
④華蟾素乳劑的製備將油相和水相在10～95℃溫度混合(優選混合溫度50～70℃)，用剪切乳化或攪拌乳化1～200分鐘(優選乳化30～200分鐘)，轉速為20～8000轉/分(優選轉速為100～8000轉/分)，使油相和水相混合均勻。用pH調節劑調節其pH為3.0～11.0(優選pH為4.0～10.0)，得初乳。將初乳進一步乳化，進一步乳化是選自於高壓勻質機均化乳化(壓力為500～25000psi，優選1000～25000psi，溫度為10～95℃，優選50～95℃)、超聲乳化(溫度為20～95℃，優選30～95℃，乳化時間1～200分鐘，優選20～200分鐘)、機械攪拌乳化、或者膠體磨乳化(轉速為500～50000轉/分，優選1000～50000轉/分，乳化時間1～200分鐘，優選20～200分鐘)，分裝，滅菌，乳劑的平均粒徑為10nm～5μm(優選10nm～2μm)，得華蟾素乳劑產物。
該乳劑為無色、白色或類白色乳狀液體，有時有乳光出現，優選華蟾素在乳劑中的含量為0.03～8％，優選含量為0.03～8％，平均粒徑為10nm～5μm(優選10nm～2μm)，pH為3.0～11.0，優選pH為4.0～11.0。
本發明提供的華蟾素注射乳劑載藥量大，穩定性好，儲藏期可達2年以上。利用本發明的技術方案可製備不同華蟾素含量的乳劑，所述乳劑可直接用於注射，亦可稀釋後肌注或滴注，使用方便，既提高了華蟾素的給藥靶向性，又保障了輸液體運輸和使用中的藥物穩定性。該製劑毒副作用低，刺激性低，具有良好的生物利用度。本發明的乳劑製備工藝方法簡單易行，適用於大量製備和工業化生產華蟾素注射乳劑。
根據本發明的華蟾素注射乳劑的靜脈滴注劑量為0.01～1mg/kg體重，優選為0.04～0.5mg/kg體重，1日1～3次；或肌肉注射，1日1～3次。小兒稍減。
具體實施例方式
實施例1製備含有0.03％華蟾素的華蟾素注射乳劑取華蟾素0.5g，大豆油600g，大豆磷脂90g，水浴加熱至75℃，攪拌溶解，得油相。量取注射用水1000ml，加入甘油20g，加熱至75℃攪拌溶解，得水相。將油相和水相在75℃混合，剪切乳化50分鐘(轉速8000轉/分)，使油相和水相混合。用氫氧化鈉溶液(0.1mol/ml)調節其pH為11.0，得初乳。將初乳用高壓勻質機勻化乳化(壓力1000psi，溫度75℃)分裝、充氮，高壓蒸汽消毒，115℃滅菌30分鐘，得產物華蟾素注射乳劑1625ml。該乳劑平均粒徑200.6nm，華蟾素含量為0.0028％為標識量的93.3％。按體重0.5mg/kg緩慢滴注，1日3次。小兒稍減。
實施例2製備含有0.1％華蟾素的華蟾素注射乳劑稱取華蟾素1.0g，月見草油和芝麻油各200g，氫醌10g，水浴加熱至45℃，攪拌溶解得油相。量取注射用水770ml，加入蔗糖和氯化鈉各10g，蛋黃磷脂50g和醋酸酯50g加熱至45℃溶解攪拌，得水相。將油相和水相在45℃下混合，剪切乳化90分鐘(轉速20轉/分)，使油相和水相混勻。用乙二胺溶液(5％)調節其pH值為7.5，得初乳。將初乳用機械攪拌乳化(轉速為2000轉/分)100分鐘，分裝，充氮，高壓蒸汽消毒，115℃滅菌30分鐘，得產物華蟾素注射乳劑1050ml。該乳劑平均粒徑3.0μm，華蟾素含量為0.095％，為標識量的95％。按體重1.0mg/kg緩慢滴注，1日1次。小兒稍減。
實施例3製備含有1.0％華蟾素的華蟾素注射乳劑稱取華蟾素10g，紅花油400g，大豆磷脂12g和人參皂苷46g以及梔子黃4.5g和D-木糖0.5g，水浴加熱至25℃，攪拌溶解得油相。量取注射用水870ml，加入丙二醇0.9g和山梨醇8g，加熱至25℃攪拌，得水相。將油相和水相在25℃下混合，攪拌器乳化40分鐘(轉速2000轉/分)，使油相和水相混勻。用乳酸鈉溶液(2.0mol/ml)調節其pH值為8.0，得初乳。將初乳用超聲乳化50分鐘。分裝，充氮，高壓蒸汽消毒，115℃滅菌30分鐘，得產物華蟾素注射乳劑1010ml。該乳劑平均粒徑9.5μm，華蟾素含量為0.0099％，為標識量的99.0％。按體重0.6mg/kg緩慢肌肉注射或靜脈推注，1日2次。小兒稍減。
實施例4製備含有2％華蟾素的華蟾素注射乳劑稱取華蟾素20g，油酸290g、深海魚油190g和二十五碳烯酸10g，PEG40000 80g和蛋氨酸0.50g，以及二丁基羥基甲苯0.5g，水浴加熱至95℃，攪拌溶解得油相。量取注射用水670ml，加入山梨醇和葡萄糖各5g，波洛沙姆5g、絞股藍皂苷5g和阿拉伯膠6g，加熱至95℃溶解攪拌，得水相。將油相和水相在95℃下混合，剪切乳化200分鐘(轉速6000轉/分)，使油相和水相混勻。用磷酸緩衝溶液(pH＝3.0)調節其pH值為3.9，得初乳。將初乳用膠體磨乳化4分鐘(轉速為50 000轉/分)，分裝，充氮，高壓蒸汽消毒，115℃滅菌30分鐘，得產物華蟾素注射乳劑990ml。該乳劑平均粒徑10nm，華蟾素含量為2.02％，為標識量的101.0％。按體重0.8mg/kg緩慢滴注或靜脈推注，1日3次。小兒稍減。
實施例5製備含有5％華蟾素的華蟾素注射乳劑稱取華蟾素5.0g，魚油5g、葵花子油5g、青刺果油5g，蔗糖酯10g、腦磷脂1.0g和穀胱幹肽0.9g一起混合後，水浴加熱至65℃，攪拌溶解得油相。量取注射用水75ml，加入甘油2.5g，甘草酸1.5g和水楊酸6.0g，低酯果膠10g加熱至65℃溶解攪拌，得水相。將油相和水相在65℃下混合，攪拌器乳化30分鐘(轉速5000轉/分)，使油相和水相混勻。用NH4Cl溶液(1.5mol/ml)調節其pH值為6.5，得初乳。將初乳用高壓勻質機勻化乳化(壓力50psi，溫度65℃)攪拌30分鐘，分裝，充氮，高壓蒸汽消毒，115℃滅菌30分鐘，得產物華蟾素注射乳劑101ml。該乳劑平均粒徑489.1nm，華蟾素含量為4.95％，為標識量的99.0％。按體重1.0mg/kg緩慢滴注或靜脈推注，1日1次。小兒稍減。
實施例6製備含有8.0％華蟾素的華蟾素注射乳劑稱取華蟾素70g、沙棘油20g、紫蘇油1.6g、大豆磷脂1.5g、卵磷脂9.0g混合物水浴加熱至37℃，攪拌溶解得油相。量取注射用水700ml，加入氯化鈉18g和氯化鉀1.9g，甘氨酸酯6.0g，沒食子酸0.5g和麝香草油2.9g加熱至37℃溶解攪拌，得水相。將油相和水相在37℃下混合，攪拌乳化30分鐘(轉速200轉/分)，使油相和水相混勻。醋酸鈉(3.0mol/ml)調節其pH值為10.0，得初乳。將初乳用超聲乳化(溫度90℃)30分鐘，分裝，充氮，高壓蒸汽消毒，100℃滅菌100分鐘，得產物華蟾素注射乳劑875ml。該乳劑平均粒徑147.7nm，華蟾素含量為7.91％，為標識量的98.9％。按體重0.01mg/kg緩慢肌肉或靜脈注射，1日3次。小兒稍減。
試驗實施例華蟾素注射乳劑質量考察1、華蟾素注射乳劑18個月常溫穩定性試驗依據中國藥典2005版，考察華蟾素注射乳劑在室溫25℃±2℃，相對溼度60％±10％條件下放置18個月，分別在放置的1、3、6、9、12、18個月取樣一次，考察樣品的外觀、粒徑和含量。外觀、粒徑和含量三者皆合格者，記錄為合格，否則記錄為不合格。結果見表1。
表1、華蟾素注射乳劑18個月常溫穩定性試驗
注實施例1～6的華蟾素注射乳劑的華蟾素濃度分別為0.028％～7.91％。
結果顯示依照上述實施例所製備的華蟾素注射乳劑的穩定性較好。產品穩定。
2、華蟾素注射乳劑對H22肝癌肉瘤的抑制作用隨機取ICR小鼠84隻，單性別，右前腋皮下接種H22小鼠腹水，每鼠0.2ml，細胞濃度為1×107個ml-1。接種24小時後按體重分層隨機分為6組，除對照組24隻外，其餘每組12隻①對照組(蒸餾水)，②5-Fu 15mg·kg-1組，③～⑥華蟾素注射乳劑(實施例1、3、4和5)0.028％、0.095％、2.02％和7.91％組。每日1次，連續7天，容積均為10ml·kg-1。結果見表2。
最好有華蟾素注射水針的數據結果顯示，華蟾素注射乳劑0.028％～7.91％對H22實體瘤有顯著的抑制作用，與對照組比較，華蟾素注射乳劑各組瘤重顯著減小(P＜0.05或P＜0.01)，抑瘤率隨劑量增加而增大。
表2、華蟾素注射乳劑對小鼠移植H22實體瘤的治療作用(x±s)
t檢驗，與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.013、華蟾素注射乳劑的刺激試驗取家兔4隻，體重2.0～2.5kg，雌雄各半，分為兩組，分別在其作左右腿股四頭肌注射華蟾素注射乳劑1ml(實施例6，濃度為7.91％)，藥後48h，處死剖檢股四頭肌，縱向切開觀察注射局部肌肉刺激反應，按表3換算反應級別。
表3、注射液肌肉刺激反應和反應級別
肉眼觀察顯示，7.91％的華蟾素注射乳劑刺激反應為0級。即無刺激性。
4、華蟾素注射乳劑的過敏試驗取豚鼠12隻，按無菌操作，6隻為給藥組，隔日每隻腹腔注射華蟾素注射乳劑(實施例6，濃度為7.91％)0.5ml，共3次，後將其均分兩組，一組於首次注射後第14日，靜脈注射同樣濃度的華蟾素注射乳劑2ml/只進行攻擊；另一組於首次注射後的21日同法攻擊。蛋清陽性對照組的6隻豚鼠隔日每隻腹腔注射濃度為(1∶5)的雞蛋清0.5ml，共3次，後將其隨機分兩組，於首次(末次)注射後的第14天和第21天，靜脈注射濃度為1∶5稀釋的雞蛋清2ml/只進行攻擊。於注射後15min內觀察是否出現過敏性反應，並按表4確定過敏反應級數。
表4、7.91％華蟾素注射乳劑豚鼠的過敏反應與反應級數
靜脈注射結果顯示，7.91％的華蟾素注射乳劑過敏性試驗合格。
權利要求
1.本發明提供一種華蟾素注射乳劑及其製備方法。即一種用注射用油來溶解華蟾素並用適當乳化劑等藥用輔料製備成符合注射要求的乳劑。本發明華蟾素注射乳劑是由下列配方組成組成 含量(重量份數)華蟾素0.5～70注射用油 200～600(優選100～500)乳化劑0～90(優選1～90)助溶劑0～90抗氧劑0～10(優選0.05～10)等滲調節劑適量(優選1～20)pH調節劑 適量(優選0.01～20)注射用水 700～1000
2.如權利要求1所述的華蟾素注射乳劑，其特徵在於所述的華蟾素為蟾蜍科動物中華大蟾蜍(Bufo bufogargarizans Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo melanostictusSchneider)皮的提取物。優選長江以南地處溫帶至亞熱帶產中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍。以乾燥品計，華蟾素中所含的脂蟾酥配基不得少於4％(優選脂蟾酥配基含量大於7％)，華蟾酥毒基不得少於5％(優選華蟾酥毒基含量大於7.5％)。
3.如權利要求1所述的華蟾素注射乳劑，其特徵在於所述注射用油是選自於大豆油、魚油、亞麻籽油、葵花子油、月見草油、沙棘油、花生油、精煉米糠油、小麥胚芽油、芝麻油、紫蘇油、紅花油、青刺果油，深海魚油、油酸、棕櫚油、硬脂酸、α-亞麻酸、γ-亞麻酸、去氧膽酸、泛酸鈉、煙醯胺、油酸、多不飽和脂肪酸、二十五碳五烯酸及其酯、二十六碳五烯酸及其酯、甘油或薏仁油中中一種或一種以上的混合物。優選自大豆油，魚油、亞麻籽油、葵花子油、月見草油、沙棘油、花生油、精煉米糠油、小麥胚芽油、芝麻油一種或一種以上的混合物。
4.如權利要求1所述的華蟾素注射乳劑，其特徵在於所述乳化劑是選自大豆磷脂、蛋黃磷脂、波洛沙姆、卵磷脂、腦磷脂、黃原膠、蔗糖酯、低酯果膠、阿拉伯膠、人參皂苷、西洋參皂苷、三七皂苷、絞股藍皂苷或單油酸甘油酯中的一種或一種以上的混合物。優選自大豆磷脂、蛋黃磷脂、波洛沙姆、卵磷脂、腦磷脂一種或一種以上的混合物。
5.如權利要求1所述的華蟾素注射乳劑，其特徵在於所述的助溶劑是選自尿素、煙醯胺、乙醇胺、丙二醇、甘草酸、水楊酸、琥珀酸鈉、磷酸鈉、蛋氨酸、醋酸酯、PEG 4000、甘氨酸酯中的一種或一種以上的混合物。優選自尿素、煙醯胺、乙醇胺、丙二醇、PEG 4000一種或一種以上的混合物。
6.如權利要求1所述的華蟾素注射乳劑，其特徵在於所述的抗氧劑是生育酚、二丁基羥基甲苯、D-木糖、次磷酸、穀胱肝肽、蛋氨酸、梔子黃、L-酒石酸、氫醌、聚丙烯酸、沒食子酸、植酸、琥珀酸(鈉)和麝香草油中的一種或一種以上的混合物。優選自生育酚、二丁基羥基甲苯、D-木糖、次磷酸、穀胱肝肽一種或一種以上的混合物。
7.如權利要求1所述的華蟾素注射乳劑，其特徵在於所述的等滲調節劑是選自甘油、山梨醇、氯化鈉、氯化鉀、蔗糖、甘露醇、葡萄糖中的一種或者一種以上的混合物。
8.如權利要求1所述的華蟾素注射乳劑，其特徵在於所述的pH調節劑是選自於不不同濃度的無機酸包括鹽酸、稀硝酸、磷酸、稀硫酸、NH4Cl等或有機酸包括醋酸、琥珀酸、草酸等；或為不同濃度的無機鹼包括NaOH、KOH等或有機鹼包括鹼性胺基酸、醋酸鈉、乳酸鈉、乙二胺等；或為不同pH的磷酸鹽、醋酸鹽、氨的緩衝溶液。
9.如權利要求1所述的的華蟾素注射乳劑的製備方法，其特徵在於包括下列步驟①油相的製備 按處方量取華蟾素、注射用油、助溶劑在10～95℃加熱攪拌溶解，得油相。②水相的製備 按處方量取注射用水和等滲調節劑，在10～95℃加熱攪拌溶解，得水相。③乳化劑或抗氧劑可同時或分別在油相或水相中加入。④華蟾素注射乳劑的製備 將油相和水相在10～95℃溫度混合，用剪切乳化或攪拌乳化1～200分鐘，轉速為20～8000轉/分，使油相和水相混合均勻。用pH調節劑調節其pH為3.0～11.0，得初乳。將初乳進一步乳化，進一步乳化是選自於高壓均化乳化(壓力為500～25000psi，溫度為10～95℃)、超聲乳化(溫度為20～95℃，乳化時間1～200分鐘)、機械攪拌乳化、或者膠體磨乳化(轉速為500～50000轉/分，乳化時間1～200分鐘)，分裝，滅菌，乳劑的平均粒徑為10nm～10μm，得華蟾素乳劑產物。
全文摘要
本發明提供一種華蟾素注射乳劑及其製備方法，即用一種或一種以上的注射用油來溶解華蟾素並用適當乳化劑、助溶劑、抗氧劑、等滲調節劑、pH調節劑等藥用輔料製備成乳劑。將華蟾素、注射用油和助溶劑在水浴中攪拌得油相，將注射用水、等滲調節劑加熱攪拌得水相，乳化劑和抗氧劑可同時或分別在油相或水相中加入，將油相和水相混合進行乳化得初乳，再進一步乳化，通過攪拌，高壓均化等工藝製備出符合注射要求的華蟾素乳劑。該乳劑穩定，可抑制腫瘤的生長，無明顯的刺激作用，可以直接用於注射或稀釋後注射。華蟾素注射乳劑既可作為抗癌藥華蟾素的載體，又能作為一種能量補充劑。產品載藥量大、性質穩定、儲存期長、使用方便、製備工藝快速簡便，可適用於大量製備和工藝化生產。
文檔編號A61P35/00GK1846712SQ20061003287
公開日2006年10月18日 申請日期2006年1月16日 優先權日2006年1月16日
發明者傅衛國, 王偉, 王佩賢 申請人:廣州安健實業發展有限公司