Egcg磷脂複合物的製備方法
2023-09-13 11:54:40
專利名稱：Egcg磷脂複合物的製備方法
技術領域：
本發明涉及表沒食子兒茶素沒食子酸酯磷脂複合物的製備方法。
背景技術：
表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是茶葉中兒茶素的重要單體，佔兒茶素80%， 是兒茶素中抗氧化作用最強的一種成分，具有明顯的清除體內自由基、抗癌、抗炎、抗突變、 抗衰老及改善肝功能等藥理作用，現已成為兒茶素分離、純化與臨床應用研究的焦點。但由於EGCG具多酚羥基，是極性較大的物質，易溶於水，難溶於油中，而限制了其在油脂類等產品中的應用和發揮更好的人體生理活性作用。另外，由於EGCG有很強的苦澀味，而且在使用過程中穩定性較差，特別是在鹼性環境中，極易被氧化，而失去其特有的抗氧化作用，更限制了其在食品中的廣泛使用。再者，由於EGCG因其水溶性較強，在生物體內難以吸收利用，而大大降低了其特有生物活性的生物利用度。磷脂是一種含磷的類脂物質，主要有磷脂醯膽鹼(PC)、磷脂醯乙醇胺(PE)、磷脂醯肌醇(PD、絲氨酸磷脂(PS)和磷脂酸(PA)等。磷脂是動植物細胞中細胞膜、核膜和類脂膜的基本成份，也是神經細胞的組成成份之一，有保護、營養神經細胞，加快其興奮傳遞作用，並可修復受損腦細胞與神經鞘細胞。磷脂複合物(Phytosome或Phospholipid complex)係指在非質子傳遞溶劑中，藥物與磷脂以一定配比，通過電荷遷移或極性相互作用而形成的較為穩定的化合物或絡合物。磷脂複合物的形成能改善母體藥物的脂溶性，增強藥物吸收，提高其生物利用度；且製備簡單，成本低廉。經文獻檢索，目前尚未見有關製備與應用EGCG磷脂複合物的報導。
發明內容
本發明的目的在於提供EGCG磷脂複合物及其製備方法，通過EGCG的磷脂包埋，以改變EGCG的理化性質並保持或增強其在不同環境中抗氧化性能，與提高其生物利用度，以擴大EGCG的應用領域。本發明的技術方案如下步驟步驟A :將原料磷脂按比例加入到非質子性反應溶劑中，並室溫攪拌、溶解。步驟B =EGCG 磷脂=I : I 3的摩爾比逐漸加EGCG至磷脂溶液中，接冷凝回流裝置，加熱保溫的同時不斷攪拌反應I 4小時。步驟C :停止反應，拆除回流裝置，真空乾燥，得黃色乾燥物，即為EGCG磷脂複合物。上述步驟中溶劑與磷脂比例5-200 1(V/W)。所述的EGCG磷脂複合物製備方法，其特徵在於所述的非質子性反應溶劑是石油醚、氯仿、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇、甲醇的一種，或兩種以上混合溶劑。所述的EGCG磷脂複合物製備方法，其特徵在於步驟A中將原料磷脂置於帶攪拌子，回流冷凝管的燒瓶中，按比例加入非質子性反應溶劑中，並在磁力攪拌水浴鍋中常溫攪拌、溶解。所述的EGCG磷脂複合物製備方法，其特徵在於步驟B中所述的保溫溫度在25°C 60°C，反應溫度高於60°C原料不穩定，有效成分含量下降，抗氧化能力下降，因此，溫度越低，原料越穩定，但低於25°C反應溶劑溶解度大大下降，反應時間大大延長。
圖IEGCG磷脂複合物紅外圖譜分析圖2EGCG磷脂複合物紫外掃描鑑定圖譜分析
具體實施例方式下面通過實施例，對本發明作進一步描述。實施例一取大豆卵磷脂4. 9克置圓底燒瓶中，加100毫升乙醇室溫攪拌溶解後，邊攪拌邊逐漸加入EGCGl克，逐漸升溫至40°C，持續攪拌冷凝回流反應4小時。真空乾燥，得EGCG磷脂複合物產品。實施例二取EGCGl克溶於5毫升乙醇中。另取大豆卵磷脂I. 8克置圓底燒瓶中，加35毫升氯仿室溫攪拌溶解後，邊攪拌邊逐漸加入EGCG乙醇溶液，逐漸升溫至30°C，持續攪拌冷凝回流反應2小時。真空乾燥，得EGCG磷脂複合物產品。實施例三取EGCGl克溶於5毫升乙醇中。另取大豆卵磷脂3. 4克置圓底燒瓶中，加70毫升乙酸乙酯室溫攪拌溶解後，邊攪拌邊逐漸加入EGCG乙醇溶液，逐漸升溫至40°C，持續攪拌冷凝回流反應3小時。真空乾燥，得EGCG磷脂複合物產品。綜上所述僅為本發明的較佳施例而已，並非用來限定本發明的實施範圍。即凡依本發明申請專利範圍的內容所做的等效變化與修飾都應為本發明的技術範疇。EGCG磷脂複合物的結構、紫外吸收和表觀油水分配係數I、EGCG磷脂複合物與EGCG、磷脂的紅外光譜(IR)比較本發明所得複合物與EGCG、磷脂在紅外光譜比較中(見圖I)，EGCG的特徵吸收峰σ 0_H(3357. 86,3478. 25)，磷脂的特徵吸收峰σρ = 0(1234. 61)，混合物的特徵吸收峰 oQ_H(3356. 18)，op = Q(1224. 37)，形成複合物後特徵吸收峰σ Q_H移向低波數，且峰形較寬而鈍，op = q(1200. 19)，說明EGGC的OH可能與磷脂的P = O鍵發生了一定程度的締合，但並沒有形成新的化合物。2、EGCG磷脂複合物和EGCG紫外吸收差值比較磷脂複合物是磷脂的極性基團部分與活性成分發生了較強的相互作用而形成的， 因此有紫外吸收的活性成分的光譜特徵會有所改變，即原活性成分的吸收值會有一定程度的降低。將EGCG和EGCG磷脂複合物分別溶於乙醇溶液中，製成以等EGCG濃度的乙醇溶液。同時按複合物溶液中磷脂的濃度條件再製備的等濃度磷脂乙醇溶液。三種溶液的紫外全掃描圖譜表明(見圖2)，EGCG和EGCG磷脂複合物在300nm處有最強吸收峰，而大豆磷脂溶液在300nm處無吸收峰。由於磷脂的屏蔽作用，EGCG磷脂複合物中EGCG的吸收值明顯降低。3、脂溶性能-表觀油水分配係數藥物的親脂性是影響生物膜透過性的重要因素，直接影響藥物吸收的速度和程度，是評價藥物透膜性的重要指標。化合物的親脂性強，即脂溶性強，對細胞膜的滲透性增加，而親水性強的化合物對細胞膜滲透性降低。油水分配係數是表示藥物親脂特性的重要理化參數之一。如果溶質被加到兩種不相互混合的液體中，它將會分別在兩相中溶解，在一定溫度下，最終達到溶解平衡。利用兩相中的藥物濃度比即可計算藥物的油水分配係數。測定藥物的油水分配係數時，水相除了用純水外也可使用不同PH值的溶液或緩衝液。此時測定的油水分配係數稱為表觀油水分配係數。正辛醇是一種長鏈脂肪醇，在結構上與生物體內的碳水化合物和脂肪類似，因此， 化合物的油水分配係數通常以正辛醇-水為分配體系。活性成分經磷脂複合後，通常脂溶性增強，表觀油水分配係數將這種脂溶性增強性質數據化。精密稱取EGCG和EGCG磷脂複合物適量分別溶於正辛醇飽和的磷酸鹽緩衝液和磷酸鹽緩衝液飽和的正辛醇中，配成以EGCG濃度為基準的lmg/ml的溶液(EGCG的質量濃度為C。)，取該溶液2ml於IOml具塞試管中，分別加入2ml磷酸鹽緩衝液飽和的正辛醇和正辛醇飽和的磷酸鹽緩衝液。37°C搖床振搖4h，離心，取下層水相高效液相色譜儀檢測，記錄峰面積，由標準曲線計算EGCG的濃度為Cw，按照公式計算表觀油水分配係數。370C時EGCG和EGCG磷脂複合物的正辛醇-水錶觀油水分配係數P在不同PH值的磷酸鹽緩衝液中表觀正辛醇-緩衝液分配係數見表I、表2。根據生物藥劑學分類系統，同時具有良好水溶性和透膜性的被動吸收的藥物有較好吸收，所以一般認為IgP >5(即親脂性特別強的藥物不易吸收)，這主要是由於它們的水溶性太差，IgP < 1(即親水性特別強的藥物不易吸收)，這主要是由於它們的脂溶性太差， 而適合吸收的藥物的表觀油水分配係數在IgP在I 4範圍內較為理想。根據表觀油水分配係數實驗結果可知，EGCG的IgP < 1，而EGCG磷脂複合物的IgP在I 2之間，因此， EGCG磷脂複合物為適合吸收的藥物。表137°C時EGCG在正辛醇-緩衝液體系中的表觀油水分配係數
權利要求
1.一種EGCG磷脂複合物的製備方法，由EGCG與磷脂複合而成，其中EGCG與磷脂的摩爾比為I : I 3。
2.如權利要求I所述EGCG磷脂複合物，其特徵是，所述複合物由EGCG與磷脂複合而成，其中EGCG與磷脂的的摩爾比為I : I。
3.如權利要求I或2所述EGCG磷脂複合物，其特徵是，所述磷脂是平均分子量700 800的憐脂。
4.如權利要求I或2或3所述EGCG磷脂複合物，其特徵是，所述磷脂是主要成分為磷脂醯膽鹼的蛋黃磷脂或大豆磷脂，或是主要成分為磷脂醯乙醇胺的腦磷脂，或是主要成分為磷脂醯肌醇的肌醇磷脂，或是主要成分為磷脂醯絲氨酸的絲氨酸磷脂，或是主要成分為溶血磷脂醯膽鹼的溶血磷脂，或是包括上述各種磷脂在內的混合體。
5.如權利要求I或2或3所述EGCG磷脂複合物，其特徵在於它以EGCG和磷脂為原料，通過EGCG的磷脂包埋，以改變EGCG的理化性質並保持或增強其在不同環境中的抗氧化性能。
6.權利要求I或2或3所述EGCG磷脂複合物的製備方法，包括下述順序的步驟步驟A :將原料磷脂按比例加入到非質子性反應溶劑中，並室溫攪拌、溶解。步驟B:EGCG :磷脂=1 I 3的摩爾比逐漸加EGCG至磷脂溶液中，接冷凝回流裝置，加熱保溫的同時不斷攪拌反應I 4小時。步驟C :停止反應，拆除冷凝回流裝置，真空乾燥，得黃色乾燥物，即為EGCG磷脂複合物。上述步驟中溶劑與磷脂比例5-200 1(V/W)。
7.如權利要求6所述的EGCG磷脂複合物的製備方法，其特徵是，步驟A所述的非質子性反應溶劑是石油醚、氯仿、四氫呋喃、乙酸乙酯、乙醇、甲醇的一種，或兩種以上混合溶劑。
8.如權利要求7所述的EGCG磷脂複合物的製備方法，其特徵是，步驟A所述的非質子性反應溶劑是指無水乙醇。
9.如權利要求6所述EGCG磷脂複合物的製備方法，其特徵是，步驟B所述磷脂是指平均分子量為750的大豆磷脂。
10.如權利要求6所述EGCG磷脂複合物的製備方法，其特徵是，步驟B所述保溫溫度是 25 6(TC。
全文摘要
本發明公開一種EGCG磷脂複合物的製備方法。EGCG磷脂複合物由EGCG與磷脂複合而成，其中EGCG與磷脂的摩爾比為1∶1～3。利用本發明方法製備的EGCG磷脂複合物可以有效的改變EGCG的理化性質並保持或增強其在不同環境中抗氧化性能，提高EGCG的生物利用度，以擴大EGCG的應用領域。
文檔編號A23L1/30GK102580112SQ20121004777
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月28日 優先權日2012年2月28日
發明者曾曉雄, 續斐, 胡冰, 雷時成 申請人:南京農業大學