藥物多肽乾粉氣溶膠製劑及製備方法

2023-09-21 13:44:15

專利名稱：藥物多肽乾粉氣溶膠製劑及製備方法
背景 發明領域 本發明一般涉及用於治療包括過敏性疾病如哮喘的肺部(呼吸性)病症的方法和組合物，更具體地說，包括人IL-4的突變蛋白的乾粉氣溶膠組合物。
背景信息 白細胞介素-4(IL-4)和白細胞介素-13(IL-13)是對在幾種肺病的發病中重要的幾種靶細胞具有廣譜的類似生物效應的多效性細胞因子。與這兩種細胞因子的結合和信號傳導有關的效應的過剩能夠通過它們共有共同的受體組分來解釋。最近，在突變的人IL-4(mIL-4)蛋白中已經觀察到了某些拮抗和部分拮抗特性，其中在野生型的120、121、122、123、124、125、126、127或128位的一個或多個位置上天然存在的胺基酸已經被一個或多個天然胺基酸替換。因此，這些mIL-4蛋白已經被描述為有價值的治療劑，用作治療過調的或錯誤調節的免疫反應和自身免疫疾病的藥物。
為了充分地獲得這種突變蛋白的所希望的生理效應，需要以其活性形式施用該蛋白的製劑和方法。雖然全身遞送而非口服遞送是可行的，但mIL-4蛋白具有短半衰期，需要頻繁注射。因為使用這些突變蛋白全身遞送是不理想的，所以應該嘗試肺部藥物遞送系統。此外，遞送藥物到疾病部位可以具有選擇性優點。
概述 根據本發明的實施方案，提供了包括mIL-4突變蛋白的藥物組合物，其適合於長期吸入施用於需要它的患者。在一些實施方案中，提供了適合被需要它的患者吸入的可分散的粉劑組合物，該組合物包括人白細胞介素突變蛋白(mIL-4)，其中該組合物的玻璃化轉變溫度比儲存組合物的儲存溫度高至少50℃。該組合物的總儲存期是至少兩年，且該組合物在儲存溫度儲存三個月的期間之後，該組合物保持其初始比活性的至少80％。
根據本發明的其它實施方案，除了mIL-4以外，該組合物還包括緩衝劑，例如檸檬酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽或琥珀酸鹽、馬來酸鹽或酒石酸鹽，和穩定劑如糖類，例如蔗糖、甘露醇或海藻糖。該組合物還可以任選地包括賦形劑，例如胺基酸(如亮氨酸)或聚(胺基酸)；該組合物還可以任選地包括鎂的鹽，例如硫酸鎂。
根據本發明的其它實施方案，提供了製造方法，其允許生產可容易分散的足夠純度的和可吸入粒度的藥物組合物，使得該藥物在肺部具有高沉積百分率，該方法允許保持高的藥物活性百分率。
根據本發明的其它實施方案，可以將該組合物裝入藥盒中以便被需要該組合物的患者使用，該藥盒包括該組合物、用於由患者吸入的吸入裝置和用於儲存該組合物的儲存裝置。在一些實施方案中，該儲存裝置包括適於配合該吸入裝置的初級膠囊以及二級儲存容器。該藥盒還可任選地包括貼附於該儲存裝置且提供患者使用說明書的標籤。
附圖簡述

圖1A顯示了wt IL-4的核酸和胺基酸序列。
圖1B顯示了突變mIL-4的核酸和胺基酸序列。
圖2示意性地顯示了根據本發明的一些實施方案的遞送藥盒。
圖3顯示了根據本發明的一些實施方案的一種製劑的高壓液相色譜法的色譜圖。
圖4顯示了用於根據本發明的一些實施方案的製劑的原料溶液和噴霧乾粉的SDS PAGE凝膠。
圖5顯示了根據本發明的一些實施方案的噴霧乾燥的mIL-4製劑的差示掃描量熱法(DSC)的熱分析圖。
圖6顯示了根據本發明的一些實施方案的噴霧乾燥的mIL-4製劑的DSC熱分析圖。
圖7顯示了根據本發明的一些實施方案的製劑的粒度分布。
圖8是可用於施用根據本發明的一些實施方案的粉劑製劑的吸入器裝置的分解透視圖。
圖9是可用於施用根據本發明的一些實施方案的粉劑製劑的吸入器裝置的另一透視圖，其中該吸入器裝置在其打開狀態即在其裝載膠囊的位置顯示。
圖10是類似於圖9的圖，但圖示了在使用其的過程中的根據本發明的吸入器裝置。
圖11是可用於施用根據本發明的一些實施方案的粉劑製劑的吸入器裝置的正視橫剖面圖，其中顯示了具有布置在其中的膠囊的吸入器裝置，但是在非穿孔狀態下。
圖12是類似於圖11的圖，但圖示了在膠囊穿孔操作過程中的根據本發明的吸入器裝置。
圖13是可用於施用根據本發明的一些實施方案的粉劑製劑的吸入器裝置的部分剖開的俯視圖。
圖14是IL-4突變蛋白乾粉組合物的血漿濃度與時間的曲線。
發明詳述 術語肺部和呼吸的被定義為與肺有關。術語「突變蛋白」被定義為作為對由本領域技術人員產生的對任何蛋白的定點胺基酸替代的結果所得到的任何蛋白。「糖基化」是指將糖基添加到蛋白上以形成糖蛋白。這樣，該術語包括天然存在的糖基化和合成糖基化，例如將碳水化合物骨架連接於天冬醯胺殘基的側鏈(「N-糖基化」)或者將糖，優選N-乙醯基半乳糖胺、半乳糖或木糖偶聯於絲氨酸、蘇氨酸、4-羥基脯氨酸或5-羥基賴氨酸(O-糖基化)。
用作激動劑的人IL-4的突變體在本領域中是已知的。術語「IL-4突變蛋白」、「IL-4突變體」、「mIL-4」、「突變的人IL-4蛋白」、「mhIL-4」，「修飾的人IL-4受體拮抗劑」、「IL-4RA」、「IL-4拮抗劑」以及它們的等同物可互換地施用，並且是在本發明的範圍內。這些多肽可選擇地包括超出野生型蛋白的「N」和「C」端的其它殘基。這些多糖及其功能片段是指其中已經對野生型人IL-4蛋白(「wt IL-4」；圖1A)作出了特定胺基酸替代的多肽。這些多肽包括本發明的mhIL-4組合物，其被施用於例如需要治療哮喘的受治療者。尤其，本發明的示例性mhIL-4，包括至少如圖1B所示的用N-端甲硫氨酸替代的R121D/Y124D對(「IL-4RA」或「met-R121D/Y124D」)。
為了本申請的目的，術語「功能片段」被定義為具有IL-4拮抗活性的多肽，包括較小的肽。mIL-4的修飾的mIL-4的這些和其它方面在美國專利第6,313,272號和第6,208,176號中被描述，這些專利的全部內容在此處通過引用併入。
為了本申請的目的，術語「野生型IL-4」或「wtIL-4」及其等同物互換地使用，且表示具有如在美國專利第5,017,691號中所公開的天然人IL-4的129個正常存在的胺基酸序列的天然或重組的人白細胞介素-4，所述專利的全部內容在此處通過引用併入。此外，修飾的人mIL-4受體拮抗劑不引起在如本文所述的它結合的同源受體的信號傳導，其可以具有各種插入和/或刪除和/或與非蛋白聚合物的偶聯，並且根據wtIL-4編號，這意味著，選擇的特定胺基酸是天然存在於wtIL-4中的相同胺基酸。因此，本領域技術人員將理解，在例如121位(精氨酸)、124位(酪氨酸)和/或125位(絲氨酸)的正常存在的胺基酸可以在突變蛋白中移位。因此，半胱氨酸殘基在例如38、102和/或104的胺基酸部位的插入在突變蛋白中可以移位。然而，移位的Ser(S)、Arg(R)、Tyr(Y)或插入的Cys(C)的位置可以通過將側翼胺基酸與wtIL-4中側翼Ser、Arg、Tyr或Cys的胺基酸的檢查和關聯來確定。
為了本申請的目的，術語「初級粒度」被定義為通過各種技術如雷射衍射、掃描電子顯微鏡檢查和沉降所測定的顆粒的粒度。
為了本申請的目的，術語「空氣動力學」被定義為在空氣中具有與要測量的氣溶膠顆粒相同的沉降速度的單位密度的球體的直徑。空氣動力學直徑通過階式碰撞取樣器(cascade impactor)來測定。術語「質量中值空氣動力學直徑」或「MMAD」被定義為相對於空氣動力學直徑的質量分布的中值。使用中值空氣動力學直徑和幾何標準差來基於顆粒的質量和粒度描述氣溶膠的粒度分布。根據這種描述，按質量計50％的顆粒將小於所述中值空氣動力學直徑，且50％的顆粒將大於所述中值空氣動力學直徑。
此外，編碼人mIL-4的DNA序列可以包括或不包括編碼信號序列的DNA序列。這種信號序列如果存在應該是被選擇用於表達mIL-4突變蛋白的細胞所識別的信號序列。它可以是原核生物的、真核生物的或者二者的組合。它還可以是天然IL-4的信號序列。信號序列的包含取決於是否需要從重組細胞中分泌mIL-4突變蛋白，在所述重組細胞中mIL-4突變蛋白被製備。如果選擇的細胞是原核生物的，通常優選DNA序列不編碼信號序列，但包括N端甲硫氨酸以指導表達。如果選擇的細胞是真核生物的，通常優選信號序列被編碼，最優選使用野生型IL-4信號序列，如在此處通過引用併入的美國專利第6,208,176號中所公開的。
在一個示例性實施例中，本發明的突變的人mIL-4蛋白包括具有修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列，其中第一修飾是用其它天然胺基酸對存在於野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一個或多個胺基酸的替代，且還任選地包括N-端甲硫氨酸。在另一個實施例中，突變蛋白進一步包括選自由以下組成的組中的第二修飾 i)其中的C端的修飾； ii)其中的潛在的糖基化部位的刪除； iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯； iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代，使mIL-4蛋白成為野生型hIL-4的拮抗劑，且還任選地包含N-端甲硫氨酸。
還在又一個實施例中，所述突變蛋白包括含有根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D的蛋白的第一修飾。
這裡使用的術語「受治療者」或「患者」是指對其實施所試方法的任何個體或患者。通常，受治療者是人，但如本領域技術人員所理解的，該受治療者可以是動物。因此，非人靈長類動物(包括猴、黑猩猩、猩猩、大猩猩)均包括在受治療者的定義內。
術語「施用(administration)」或「施用(administering)」被定義為包括將本發明的化合物或藥物組合物提供給需要治療的受治療者的行動。術語「治療有效量」或「有效量」是指將引起研究人員、獸醫、醫生或其它臨床醫生所尋求的組織、系統、動物或人的生物學或醫學反應的化合物或藥物組合物的量。
為了本申請的目的，術語「粉劑」被定義為被配製為尺寸小於約10微米的細碎的固體顆粒的固體物質，例如被配製為尺寸小於約6微米的細碎的乾燥固體顆粒的固體物質。
為了本申請的目的，術語「玻璃化轉變溫度」被定義為當被加熱到一定溫度且經歷從玻璃樣狀態到彈性體狀態的轉變時在物質中發生的可逆改變的溫度範圍的近似中點。使用差示掃描量熱法(DSC)來測定玻璃化轉變(Tg)。Tg的定義總是隨意的，目前沒有國際慣例。
哮喘是一種氣道的慢性炎症或過敏性病症，其中許多細胞和細胞基本組分發揮作用，特別是肥大細胞，嗜酸性粒細胞，T淋巴細胞，氣道巨噬細胞，中性粒細胞和上皮細胞。在易感個體中，該炎症引起了哮鳴、呼吸暫停、胸悶和咳嗽的反覆發作，尤其在夜間或凌晨。這些發作通常與廣泛但可變的氣流阻塞有關，該氣流阻塞常常自發或用治療可逆轉。該炎症還引起了過量的粘液分泌和對各種刺激的現有的支氣管高反應性的相關增高。
根據本發明的實施方案，提供了表現良好的溫度和結構穩定性(包括耐水分和聚集性)的藥學可分散的乾粉組合物。該組合物含有包括人白細胞介素-4突變蛋白(mIL-4)的治療劑。通過通常具有小於約10μm的，例如在約2μm和約6μm之間的，例如在約2μm和約4μm之間的初級粒度和/或空氣動力學直徑粒度的平均值的顆粒來形成該粉劑。粒度分布的幾何標準差是在約1和3之間，例如在約1.5和2.5之間。
多個實施方案一般能夠表徵和說明本發明的特徵。在一個實施方案中，提供了一種適合被需要其的受治療者吸入的可分散的粉劑組合物，該組合物含有包括人白細胞介素突變蛋白(mIL-4)的治療劑，其中該組合物的玻璃化轉變溫度比該組合物被儲存的儲存溫度高至少50℃，且其中在該組合物在所述儲存溫度下儲存三個月的期間之後，該組合物保持初始比活性的至少80％。
根據另一個實施方案，提供了一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，該組合物含有包括突變的人白細胞介素-4(mIL-4)蛋白的治療劑，所述蛋白由具有兩種修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列組成，其中第一修飾選自由存在於野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一個或多個胺基酸被其它天然胺基酸的替代組成的組，且第二修飾是選自由以下組成的組中的至少一個修飾其中的C端的修飾；其中的潛在的糖基化位點的刪除；和/或蛋白與非蛋白聚合物的偶聯，以及它們的任意組合；選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代，使得mIL-4蛋白成為野生型hIL-4的拮抗劑且還任選地包含N-端甲硫氨酸。這種組合物可以進一步具有比儲存組合物的儲存溫度高至少50℃的玻璃化轉變溫度，其中在該組合物在所述儲存溫度下儲存三個月的期間之後，該組合物保持初始比活性的至少80％。
在一些實施方案中，上述任意組合物，除了上述mhIL-4或mIL-4以外，還可以包括緩衝劑，如檸檬酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽或馬來酸鹽，以及穩定劑，如碳水化合物，例如蔗糖、甘露醇或海藻糖，或者鎂鹽，例如硫酸鎂。在一些實施方案中，任何組合物，不管它包括或不包括緩衝劑和/或穩定劑，可以除了上述mhIL-4以外進一步包括選自由胺基酸如亮氨酸或聚(胺基酸)組成的組的賦形劑。
上述任何實施方案的組合物具有比所述儲存溫度(即，該組合物被儲存的溫度，它可以是室溫或更低，例如在約2℃和8℃之間，可選擇地，在儲存期的第一部分儲存溫度是在約2℃和8℃之間，且儲存溫度在儲存期的第二部分期間為室溫)高至少75℃的組合物的玻璃化轉變溫度，例如比所述儲存溫度高至少100℃，且在至少兩年的總儲存期之後，上述任何實施方案的組合物在總儲存期到期之後保持初始比活性的至少95％，例如保持初始比活性的至少98％。
上述任意實施方案的組合物具有在約10％和約98％之間，例如在約10％和約75％之間，例如在約10％和約60％之間的治療活性材料在組合物中的質量濃度。
上述任意實施方案的組合物具有在約1％和約10％之間，例如在約1％和約5％之間，例如在約1％和約3％之間的水分含量。
上述任意實施方案的組合物在至少兩年的總儲存期到期之後具有約3％或更低的，例如約1％或更低的，或約0％的聚集度。
上述任意實施方案的組合物在組合物的總儲存期到期之後具有相對於原料藥約5％或更低的治療活性材料的氧化度，其中所述總儲存期是至少兩年。例如，這種氧化度可以是約3％或更低，或約2％。
上述任意實施方案的組合物是用具有小於約10μm，例如在約2μm和約6μm之間，例如在約2μm和約4μm之間的直徑平均值的顆粒所形成的粉劑。
上述任意實施方案的組合物包括具有在約1和3之間，例如在約1.5和2.5之間的粒度的幾何標準差的顆粒。
上述任意實施方案的組合物當被患者吸入時提供了該組合物的噴射量為約70質量％或更高，例如約80質量％或更高，例如約90質量％或更高。
上述任意實施方案的組合物當被患者吸入時提供了具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的沉積百分率，其是在約25質量％和約60質量％之間，例如在約40質量％和約60質量％之間，例如在約50質量％和約60質量％之間。
上述任意實施方案的組合物具有在約3和6之間，例如在約4和5之間的pH值。
上述任意實施方案的組合物具有在約0.3mg和30mg之間，例如在約0.3mg和5mg之間，例如在約0.5mg和3mg之間的活性物質的額定劑量。
在上述任意實施方案的組合物中，IL-4突變蛋白包括具有修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列，其中第一修飾是存在於野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一個或多個胺基酸被其它天然胺基酸的替代，且還可任選地含有N-端甲硫氨酸。而且，IL-4突變蛋白可以包括選自由以下組成的組中的第二修飾其中的C端的修飾；其中的潛在的糖基化位點的刪除；和/或蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代。所述第一修飾可以包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D，或者根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
上述任意實施方案的組合物可以通過冷凍乾燥、噴霧乾燥和冷凍噴霧乾燥來製備，且還可任選地包括研磨或凍幹與研磨。
還提供了治療疾病的方法，包括將治療有效量的上述任意實施方案的組合物施用於需要這種治療的患者。
在一些實施方案中，提供了吸入器裝置，其包括吸入器主體，所述吸入器主體界定了凹槽用於在其中容納含有上述任意實施方案的可分散的粉劑組合物的膠囊，以及與所述膠囊連通的噴嘴，其中所述吸入器裝置還包括穿孔裝置，所述穿孔裝置與吸入器主體結合且適合於將所述膠囊穿孔以允許外部空氣流與可分散的粉劑組合物混合，用於通過所述噴嘴吸入。這種裝置被設計成確保，當適當配製的乾粉組合物被患者吸入時，該組合物的噴射劑量為約70質量％或更高。在一些實施方案中，吸入器裝置中的穿孔裝置包括穿孔針，用於橫向滑動對抗彈性元件的偏置並且在用所述吸入器主體固定的對接元件和相應的操作按鈕元件之間操作，每一個穿孔針具有包括有斜面的尖頭的外形，用於促進膠囊包衣的穿孔。
在另外的實施方案中，在吸入器裝置中的噴嘴相對於吸入器主體可移動，以提供至少兩種操作狀態，該兩種操作狀態包括開放狀態和關閉使用狀態，在開放狀態中，用於膠囊的凹槽可容易達到在其中接合新的膠囊或者由此退出用過的膠囊，在關閉使用狀態中，所述吸入器噴嘴被彈簧鎖鎖定。噴嘴可以進一步在其關閉位置被彈簧鎖裝置鎖定，所述彈簧鎖裝置包括噴嘴的凸緣的鉤部分，具有在吸入器主體中形成的閉鎖座位內部形成的相應的脊。在另外的實施方案中，吸入器噴嘴的凸緣可以包括可接合在吸入器主體中形成的孔內的插腳。在其它實施方案中，所述孔可以界定縱向狹槽，所述縱向狹槽適於允許所述插腳的橫向齒通過狹槽，且所述孔包括底部環形凹槽，所述底部環形凹槽適於允許所述齒滑入，從而允許所述插腳接合到所述孔中。在其它實施方案中，所述銷可以在所述孔中可旋轉，且所述噴嘴相對於所述吸入器主體可旋轉。在另外的實施方案中，所述裝置的吸入器主體的用於膠囊的凹槽可以通過在所述凸緣的吸入器噴嘴中提供的穿孔板或柵格與外部連通，且適於將膠囊凹槽與噴嘴的導管分開，所述膠囊凹槽具有通過一個或多個進氣孔與外部連通的底部。
在一些實施方案中，提供了藥盒，其包括上述任意實施方案的可分散的粉劑組合物、用於被患者吸入的吸入裝置和用於儲存該組合物的儲存裝置，所述儲存裝置包括初級容器和二級儲存容器，且還可任選地包括在所述儲存裝置中含有、貼附且提供患者使用說明書的標籤，且進一步的附帶條件是所述初級膠囊適合於配合所述吸入裝置。在另外的實施方案中，與藥盒一起使用的組合物為膠囊的形式，各膠囊含有在約5mg和25mg之間的組合物，例如在約5mg和約20mg之間的組合物，例如在約10mg和約20mg之間的組合物。
本發明的乾粉組合物中的活性物質的量正常是在約0.3和30mg之間，例如在約0.3和5mg之間，例如在約0.5和3mg之間。在一個實施方案中，在本發明的乾粉組合物中的活性物質的最少量能夠是約0.3mg；在其它實施方案中，這種最少量能夠是約0.5mg、約0.7mg、約0.75mg、約1mg、約1.5mg或約2mg。在一個實施方案中，本發明的乾粉組合物中的活性物質的最大量能夠是約3mg；在其它實施方案中，這種最大量能夠是約5mg、約7.5mg、約10mg、約12mg、約15mg或約30mg。總之，該組合物中的mIL-4的質量濃度能夠是在約10％和約98％之間，例如在約10％和約75％之間，例如在約10％和約60％之間。在另一實施方案中，該組合物中的mIL-4的質量濃度能夠是在約5％和約98％之間，例如在約5％和約75％之間，例如在約5％和約60％之間，或者在約5％和約50％之間，或者約5％，或者約10％，或者約15％，或者約30％。在本上下文中，m-IL4化合物的百分率(按重量計)是指自由化合物的量，排除可以存在的抗衡離子的重量。
本發明的乾粉組合物通常、但不必包括至少一種生理學上可接受的載體。例如，乾粉組合物可以包括一種或多種賦形劑和/或改進mIL-4化合物的效力的任何其它組分。這種賦形劑可以在希望減低遞送到患者的粉劑中的活性劑濃度的時候簡單用作增量劑。這種賦形劑還可以改進粉末在粉劑分散裝置內的粉劑分散性，以便提供更有效和可再現的活性劑的遞送以及改進活性劑的處理特性(例如流動性和稠度)，從而有利於製造和粉劑填充。尤其，該賦形劑材料通常能夠起到改進mIL-4的物理和化學穩定性的作用，使殘留水分含量最小化以及阻止水分吸收，以及增強粒度、聚集度、表面性能(例如粗糙度)、吸入的方便和將顆粒向深處肺部的靶向。
可用於實施本發明的藥物賦形劑和添加劑包括但不限於蛋白、肽、胺基酸、脂質、聚合物和碳水化合物(例如糖，包括單糖、二糖、三糖、四糖和寡糖；衍生糖如醛糖醇、醛糖酸、酯化糖；和多糖或糖聚合物)，它們可以單獨或組合存在。示例性蛋白賦形劑包括血清白蛋白如人血清白蛋白(HSA)、重組人白蛋白(rHA)、明膠和酪蛋白。代表性胺基酸/多肽組分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜鹼、組氨酸、穀氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、亮氨酸、脯氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜。代表性胺基酸的聚胺基酸如二亮氨酸和三亮氨酸也適合用於本發明。
適合用於本發明的碳水化合物賦形劑包括例如單糖如果糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖和山梨糖；二糖如乳糖、蔗糖、海藻糖、纖維二糖；多糖如棉子糖、松三糖、麥芽糊精、右旋糖酐和澱粉；以及醛糖醇如甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、乳糖醇、木糖醇、山梨醇(葡萄糖醇)和肌醇。
mIL-4乾粉組合物還可以包括緩衝劑或pH調節劑；通常，該緩衝劑是由有機酸或鹼製備的鹽。代表性緩衝劑包括有機酸鹽如檸檬酸、抗壞血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、醋酸或鄰苯二甲酸的鹽；Tris、氨基丁三醇鹽酸鹽或磷酸鹽緩衝劑。
另外，可用於實施本發明的mIL-4乾粉組合物可以包括聚合賦形劑/添加劑如聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、Ficolls(聚合糖)、右旋糖酐、葡萄糖結合劑(例如環糊精類如2-羥丙基-β-環糊精、羥乙基澱粉)、聚乙二醇、果膠、鹽(例如氯化鈉)、抗氧化劑、抗靜電劑、表面活性劑(例如聚山梨醇酯如「吐溫20」和「吐溫80」、卵磷脂、油酸、苯扎氯銨和脫水山梨醇酯)、脂質(例如磷脂、脂肪酸)、類固醇(例如膽固醇)和螯合劑(例如EDTA)。適合用於mIL-4乾粉組合物的藥物賦形劑和/或添加劑的其它例子列舉在「RemingtonThe Science&Practice of Pharmacy(雷明頓藥物科學與實踐)」，第19版，Williams&Williams，(1995)以及「Physician′s Desk Reference(內科醫生案頭參考資料)」，第52版，Medical Economics，Montvale，N.J.(1998)中，它們的公開內容在此處通過引用併入。
本發明的乾粉組合物進一步包括其它組分，例如緩衝劑、穩定劑和/或增量劑。實施例提供了這些試劑的一些優選的量和/或組合。
所述緩衝劑典型地選自檸檬酸鹽、醋酸鹽、乳酸鹽和/或酒石酸鹽的至少一種。根據本發明的實施方案，穩定劑典型地包括至少一種碳水化合物，例如蔗糖、甘露醇和/或海藻糖，且所述賦形劑是胺基酸，例如亮氨酸或聚(胺基酸)，或者穩定劑可以是鎂鹽，例如硫酸鎂、氯化鎂和醋酸鎂。
在一個優選實施方案中，所述乾粉組合物將包括約5％至約50％mIL-4，更優選約10％至約30％。所述穩定劑在該實施方案中以約10％至約85％，優選約15％至約80％的範圍存在。在一些實施方案中，所述穩定劑以約15％至約50％的範圍存在。增量劑，優選以胺基酸的形式，在該實施方案中是任選的。如果加入，它是以約10％至約25％的範圍被包括。以約10％至約85％的範圍包括緩衝劑，約20％至約50％是優選的。緩衝劑與穩定劑的比率是從約1∶8.5至約8.5∶1，更優選是約1∶8.5至約4∶1。實施方案包括約1∶4至約4∶1、約1∶4至約2∶1、約1∶2至約2∶1和約2∶3至約1∶1的緩衝劑與穩定劑比率。在本實施方案中，優選的膠囊或泡罩的填充範圍是約5mg至約25mg乾粉組合物，更優選約6mg至約15mg。在該實施方案中，任選量的鎂離子可以作為穩定劑添加。該離子可以從約1mM至約220mM，更優選從約10mM至約200mM的量存在。鎂離子與緩衝劑的化學計量在該實施方案中可以是1、2、4、6、8或10。在該實施方案中的優選的mIL-4分子是圖1B中所示的分子。有效量的該實施方案的組合物的劑量可以是一天一次、一天兩次或一天三次。
本發明的乾粉組合物可以通過某些特性來表徵，包括組合物的玻璃化轉變溫度、能夠儲存組合物的溫度、儲存持續時間以及它們保持初始比活性的能力和在組合物儲存之後的蛋白完整性。
在一些實施方案中，本發明的乾粉組合物具有在下述任何儲存溫度下比儲存組合物的儲存溫度高至少50℃的，優選比儲存溫度高至少75℃的，甚至更優選比儲存溫度高至少100℃的玻璃化轉變溫度。
對於推薦的儲存溫度，在一些實施方案中，本發明的乾粉組合物的儲存溫度是大約室溫(15℃-25℃)或更低，例如在約2℃和8℃之間。在一些實施方案中，本發明的乾粉組合物可以在儲存期的第一初始部分期間在約2℃和8℃之間儲存，隨後在儲存期的第二部分期間在室溫下儲存。本領域技術人員能夠確定儲存期的第一部分和第二部分的持續時間。
本發明的實施方案進一步提供了在藥品的製造期之後至少兩年的本發明的乾粉組合物的總儲存期，在此期間，該組合物的儲存保持在組合物於儲存溫度下儲存三個月之後的初始比活性的至少80％，例如至少90％。在一些實施方案中，在總儲存期到期之後組合物保持至少95％的初始比活性，例如保持至少98％的初始比活性。
表徵本發明的乾粉組合物的一些其它特性包括水分含量、pH值、蛋白的聚集度以及蛋白的氧化度。在一些實施方案中，水分含量是在約1％和約10％之間，例如在約1％和約5％之間，例如在約1％和約3％之間。在一個實施方案中，水分含量低於1％。本發明的乾粉組合物的pH值一般是在約3和6之間，例如在約4和5之間。在可選擇的實施方案中，pH範圍可以是在約3和7之間，例如在約6和7之間的pH範圍。對於蛋白的聚集度，該組合物一般顯示在總儲存期到期之後顯示了約3％或更低的聚集，例如約1％或更低，例如低於約1％。
在一些實施方案中，在本發明的乾粉組合物中的治療活性材料的氧化度在組合物的總儲存期到期之後相對於藥品為約10％或更低，例如約5％或更低，例如約3％。
可以使用任何適當的方法來製備本發明的乾粉組合物。優選的方法包括例如含有mIL-4的治療活性材料的水溶液經受諸如冷凍乾燥、噴霧乾燥或冷凍噴霧乾燥的過程，並且還能夠任選地包括研磨或凍幹與研磨。在一個優選工序中，製備具有在約1和5％之間固體的固體質量濃度的溶液，在該溶液中，活性組分(即mIL-4)的百分率如上所述。固體的剩餘百分率包括其它組分，例如緩衝劑、穩定劑和/或增量劑，視具體情況而定。
該溶液然後被引導通過噴嘴，該噴嘴設定在特定壓力和溫度下以產生液滴。液滴進入建立在規定溫度下的室中以乾燥。在旋流器中收集特定粒度範圍的乾燥顆粒。該粉劑然後在規定填充重量下填充到初級容器內。該初級容器可以是是提供用於在規定填充重量下儲存且提供用於釋放其中含有的材料到吸入器中的任何適當的容器。初級儲存容器的一個特別優選實施方案是能夠在其已經插入到吸入器中之後被刺穿或弄破的膠囊。本領域普通技術人員能夠確定用於形成液滴的壓力和溫度以及乾燥溫度。
可以使用適合的吸入器裝置例如從RS01Model 7吸入器吸入該粉劑，如在美國專利申請第2003-0000523號和相應的歐洲專利申請第EP1270034號中所述的。所述吸入器被設計成確保，當根據本發明的任何實施方案的粉劑被患者吸入時，該組合物的噴射劑量為約70質量％或更高。該吸入器可以更詳細地參考如下所示的圖8-13來描述。
如圖8所示，該吸入器裝置1包括吸入器噴嘴3，其包括凸緣4，所述凸緣4具有插腳5，所述插腳5能夠接合在吸入器主體2中形成的相應孔6中。如圖9所示，孔6備有縱向狹槽，在所述縱向狹槽中能夠接合插腳5的正交齒8；以及底部環狀凹槽(未顯示)，其中齒8能夠滑入。因此，通過使齒8通過縱向狹槽可以將插腳5接合到孔6中，在達到底部時，可以使插腳5在其孔6中完全地旋轉，從而也相對於吸入器主體2旋轉吸入器噴嘴3。
通過彈簧型的鎖定裝置可將吸入器噴嘴3鎖定在其關閉狀態，如進一步在圖8-13中所示，所述彈簧型的鎖定裝置包括具有小脊(未顯示)的凸緣4的鉤部分18(圖10)，用於接合在吸入器主體2中界定的閉鎖凹槽19(圖8)內部形成的相應脊20(圖8)。所述吸入器主體2還配有用於膠囊的凹槽，所述凹槽向上開放並通過穿孔板或柵格11與外部連通(圖11-13)，所述穿孔板或柵格11包括在凸緣4的吸入器噴嘴3中並設計用於將膠囊凹槽9(圖9)與噴嘴3的導管12(圖9)分開。
膠囊13(圖12)可以接合在凹槽9中，所述膠囊是已知類型的且適於被穿孔以允許保持在其中的藥物內容物容易地被進入，其中穿孔操作通過任何適合的穿孔裝置來進行。在所示吸入器1中，穿孔裝置包括一對穿孔針14(圖8和11-13)，如由彈性元件所反向推動的，所述穿孔針14能夠橫向滑動，所述彈性元件在該實施方案中包括與穿孔針14同軸的螺旋彈簧15(圖8和11-13)並且在用吸入器主體2固定的各自對接元件16(圖11-13)和中空的按鈕元件17(圖8-13)之間操作。穿孔針14類似於皮下注射器針頭且具有有斜面的尖頭，以有利於所述穿孔針頭14將膠囊13的包衣穿孔。
吸入器裝置1的操作可以進一步描述如下。在開放狀態下，如圖9所示，膠囊接合到膠囊凹槽9中且噴嘴3鎖扣在吸入器主體2上。通過按壓按鈕元件17，施壓於穿孔針14使穿孔膠囊13，從而它的內容物如本發明的乾粉將與膠囊凹槽連通。通過對噴嘴3應用抽吸，將產生通過孔10來自於外部的空氣流，該空氣流進入膠囊凹槽，從而與膠囊內容物混合，通過柵格11和導管12，允許產品被吸入。
如果需要，吸入器裝置1可以使用皮下注射器針頭作為穿孔針14。因為該類型的針提供了非常小的耐穿孔性和非常精確的操作，所以可能使用具有較大直徑的針頭，不損壞膠囊，從而提供非常簡單的穿孔操作。少量的穿孔針的使用，例如僅僅兩個，允許減少針頭和膠囊之間的接觸表面，穿孔截面是相同的，結果減少了摩擦和影響現有吸入器的問題。
本發明的乾粉組合物經由吸入施用而施用於需要它的患者，例如遭受如下的患者哮喘或其它阻塞性肺病如支氣管炎、肺氣腫、支氣管擴張症和囊性纖維變性；纖維化肺疾病如肺間質纖維化及其他來源不明的間質性肺病；結節病及混合呼吸道疾患如鼻息肉、肺嗜酸性粒細胞增多症和嗜酸細胞肉芽腫。可以通過當被患者吸入時該組合物的噴射劑量以及具有特定粒度的顆粒的沉積百分率來表徵施用的效率。根據本發明的實施方案，當本發明的乾粉組合物這樣被吸入時，該組合物的噴射劑量是約70質量％或更高，例如約80質量％或更高，例如約90質量％或更高。由於實際限制，噴射劑量通常不超過90質量％或95質量％。根據本發明的實施方案，當本發明的乾粉組合物這樣被吸入時，進入肺部且具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的沉積百分率是在約25質量％和約60質量％之間，例如在約40質量％和約60質量％之間，例如在約50質量％和約60質量％之間。在一個實施方案中，具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的最小沉積百分率能夠是約25質量％；在其它實施方案中，這種最小沉積百分率能夠是約40質量％，或者約50質量％。在一個實施方案中，具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的最大沉積百分率能夠是約60質量％；在其它實施方案中，這種最大沉積百分率能夠是約70質量％，或者約80質量％。為了提供進一步的指導，在以下本申請的「實施例」部分中描述了製造本發明的乾粉組合物的一些方法。
本發明的乾粉組合物適用於需要其的患者，用於治療和/或預防各種病症(包括過敏性疾病症)、疾病和病變。這種病症的優選例子是哮喘。其它病症的例子包括其它阻塞性肺病如如支氣管炎、肺氣腫、支氣管擴張症和囊性纖維變性；纖維化肺疾病如肺間質纖維化及其他來源不明的間質性肺病；結節病及混合呼吸道疾病如鼻息肉、肺嗜酸性粒細胞增多症和嗜酸細胞肉芽腫。使用的遞送的類型是吸入。
雖然本發明描述了各種劑量，本領域技術人員應該理解，對於需要治療的任何特定受治療者的具體劑量水平和劑量頻率可以改變且將取決於各種因素。這些因素包括具體多肽或其功能片段的活性、該化合物的代謝穩定性和作用時間長度、年齡、體重、一般健康、性別、飲食、施用方式和時間、排洩率、藥物組合、特定疾患的嚴重性和主體經歷的治療。
然而，通常，mIL-4的典型劑量將是大約0.005-1mg/kg。例如，為了施用mIL-4，通過氣溶膠吸入的近似的額定劑量將是約0.3mg至60mg，例如約0.3mg至約0.7mg，或約0.6mg至約1.1mg，或約0.9mg至約1.6mg，或約1.4mg至約1.9mg，或約1.8mg至約2.3mg，或約2.2mg至約2.8mg，或約2.7mg至約3.2mg，或約3.1mg至約4.2mg，或約4.1mg至約5.2mg，或約5.1mg至約7.7mg，或約7.4mg至約10.2mg，或約10.1mg至約15.2mg，或約15.1mg至約20.2mg，或約20.1mg至約25.2mg，或約25.1mg至約30.2mg，或約30.1mg至約35.2mg，或約35.1mg至約40.2mg，或約40.1mg至約45.2mg，或約45.1mg至約50.2mg，或約50.1mg至約55.2mg，或約55.1mg至約60mg。
近似劑量包括，但不限於對受治療者的約0.3mg、約0.5mg、約1.0mg、約1.5mg、約2mg、約2.5mg、約3.0mg、約4mg、約5mg、約7.5mg、約10mg、約15mg、約20mg、約25mg、約30mg、約35mg、約40mg、約45mg、約50mg、約55mg或約60mg。劑量可以一天施用三次，每日兩次，每兩天一次，每三天一次，每周兩次，每周一次或視需要。施用mIL-4的治療可以跨越數天、數周、數年，或者當症狀持續時無限期地持續。
為了有效施用本發明的組合物，可以使用圖2中示意性顯示的遞送藥盒。藥盒100包括用於被患者吸入的吸入元件和用於儲存乾粉組合物的儲存容器。該儲存容器進一步包括初級膠囊和二級儲存容器，且進一步包括貼附於儲存容器以提供患者使用說明書的任選的標籤。初級膠囊被配置成配合吸入元件。
在圖2所示的藥盒100中，本發明的乾粉組合物可以是未顯示的膠囊形式，各膠囊含有額定在約5mg和25mg之間的組合物的，例如在約5mg和約20mg之間的，例如在約10mg和約20mg之間的組合物的填充重量。
可以使用多種規格和材料作為藥物產品的初級包裝。在藥盒100中，優選的容器是#3規格膠囊。然而，還能夠使用其它規格膠囊，例如規格1、2和4膠囊。能夠由多種材料例如羥丙基甲基纖維素(HPMC)或明膠來製備任何膠囊。而且，可以使用其它形式的初級包裝，例如泡罩包裝。泡罩包裝布置包括，其中形成泡罩的底箔連接於具有在泡罩內含有的藥物的基本上平坦的蓋箔的類型的單獨可打開的泡罩的混合。
吸入裝置的選擇對於粉劑的解剖沉積、乾粉製劑遞送的穩定性和效率也是關鍵的，以確保在使用該裝置時患者的順從性。該優選的實施方案是上述RS01Model 7吸入器。然而，可以使用將產生不同的特性的各種其它吸入裝置。
可以應用象RS01一樣的使用膠囊的單一劑量裝置，例如Aventis

Boehringer Ingelheim

或

此外，泡罩包裝裝置如Vectura

或GSK

或Diskus可以替代。另外，儲器裝置如Orion Pharma

Inovata Biomed

或Sofotec

可以容納多個mIL-4劑量。對於所有吸入裝置，分配約30天供應量以最小化患者誤用、減低患者的成本、保持藥物的穩定性和安全使用。
以下實施例用於進一步說明但不限制本發明的範圍。
實施例1.製劑的製備 通過如表1所示將組分組合成溶液來製備各自包括活性成分mIL-4的四種製劑。在下面的實施例中論述的隨後的試驗和評價將它們稱為製劑1-4，如表1所示。
表1.含有mIL-4的製劑的概述 實施例2.製備乾粉的方法 在表2中總結了用於製造製劑1-4的噴霧乾燥參數。
表2.用於噴霧乾燥mIL-4製劑的參數 實施例3.組合物中的活性組分的質量和蛋白聚集的研究 通過用RP-HPLC測定方法分析約20mg的粉劑來測定各製劑的含量和純度。每一粉劑進行三次測定，計算重量百分率。表3顯示了每一製劑的測定結果。結果與理論值一致。
表3mIL-4製劑獲得的測定數據的總結 1基於製備的水溶液的約2％mIL-4固體含量。
2通過在位點1的HPLC分析(n＝3次測定)。
3通過在位點2的HPLC分析(n＝3次測定)。
在製劑4中觀察到了最大偏差，其中測量濃度比預計濃度低大約8％。使用反相HPLC降解方法來表徵降解特性。除了製劑4以外，對於噴霧乾燥粉劑沒有觀察到明顯的降解跡象，該製劑4顯示了指示在約7.6分鐘的聚集的附加峰。獲得的色譜圖在圖1中提供。
SDS PAGE(蛋白的聚集) 用陰離子洗滌劑十二烷基硫酸鈉孵育樣品。在非還原條件下在具有規定孔徑的聚丙烯醯胺凝膠(例如ExcelGel SDS，15％聚丙烯醯胺，Pharmacia)中分離所述蛋白。該分離與蛋白的分子量成比例。在用考馬斯亮蘭染色之後，將凝膠掃描(例如Scanner JX-330，Sharp)，測定單個帶的數目。對所有四種製劑進行蛋白的SDS PAGE評價。獲得的結果在圖2中提供。在噴霧乾燥製劑4中觀察到弱帶，表明某些最少的蛋白分解。
水分含量 使用卡爾-費歇爾(Karl Fisher)滴定法來測定每一製劑的水分含量。將大約10mg的各製劑溶解在10mL的卡爾-費歇爾試劑中。通過將1mL樣品溶液注入到庫侖池(coulometric cell)中來分析樣品。典型地，對每一製劑分析三個樣品，重複三次注射樣品溶液。使用由卡爾-費歇爾試劑組成的空白。
表4提供了關於每一製劑的水分含量的數據。
表4.mIL-4製劑的水分含量
實施例4.生物活性TF1功能生物測定的評價 使用TF-1細胞對IL-4或IL-13的增殖反應來評價mIL-4的功能拮抗劑活性。TF-1系由非粘附紅白血病獲得，且廣泛用作模型系統，因為所述細胞響應包括IL-4和IL-13的許多炎症細胞因子來增殖。用和不用IL-4、IL-13和mIL-4培養TF-1細胞。繪製mIL-4的濃度(log nM)對平均相對螢光單位的圖，且提取數據來測定50％拮抗劑效應。用於IL-4和IL-13的mIL-4的EC50(50％抑制效果)作為平均值報告，且報告95％置信區間。
在表5中提供TF1功能生物測定的結果。結果指示在噴霧乾燥粉劑樣品中沒有由於噴霧乾燥帶來的活性損失。
表5TF1數據噴霧乾燥粉劑的總結 實施例5.玻璃化轉變溫度測量 使用差示掃描量熱法(DSC)測量玻璃化轉變溫度，該差示掃描量熱法使用10℃/分鐘的N2流速、用TA Instruments DSC2920儀器來進行。
通過圖3和4示出了用於四種製劑和凍幹起始原料的DSC熱分析數據。在約75℃和125℃之間的範圍，在指示玻璃轉化溫度的熱流中具有變化(在儲存溫度以上50度)。
如能夠從圖4中進一步觀察的，獲得了從25℃到300℃的熱分析圖。結果指示，製劑1和2在它們的熱行為上不同，因為在具有蔗糖的製劑中在約140℃發現了基線的改變(圖3)。
實施例6.通過雷射衍射測定初級粒度分布 使用溼分散體、雷射衍射法來測定噴霧乾燥的製劑的幾何粒度分布。使用Malvern Mastersizer 2000與Hydro2000S溼池(wet cell)的組合。
通過將大約10mg-25mg的製劑稱量到20mL玻璃瓶內來製備樣品。添加10毫升的分散劑以產生懸浮液。樣品使用探頭超聲波破碎儀在10％幅度(40瓦)下超生破碎2分鐘，以促進顆粒分散。對於每一種製劑製備三份樣品。
然後使用Malvern Mastersizer 2000在表6所示的設置下分析樣品。
表6.用於測定幾何粒度分布的參數 在表7中總結對於製劑1到4的測量結果。儘管製劑組成的差別，但觀察到了僅僅很小的粒度分布差別。中值直徑是在從2.3μm到2.8μm的範圍內。平均D90值是在從4.4μm到4.9μm的範圍內。平均跨度(SPAN)值，即顆粒分布的寬度的度量，小於或等於1.4，指示顆粒是相對單分散的。
表7.製劑1-4的平均(％RSD)Malvern結果
圖5顯示了用在正辛烷中的0.1％v/v卵磷脂作為分散劑製備的製劑2(mIL-4/檸檬酸鹽/蔗糖)的結果，其中在將樣品遞送到溼池中之後立即通過雷射衍射來進行測定。圖5顯示了3次測定的疊加。
實施例7.通過下一代衝擊器測定空氣動力學粒度分布 使用下一代衝擊器(Next Generation Impactor)(NGI)測定每一種製劑的空氣動力學性能。為了實現製劑的氣溶膠化，使用Plastiape RS01Model 7，低抗耐性膠囊裝置。將製劑填充到出自Shinogi的規格3的羥丙基甲基纖維素(HPMC)膠囊中。
通常，將約5mg的製劑稱量到每一膠囊中。在調節的手套箱中進行(低於5％相對溼度，在15℃和25℃之間的溫度下)膠囊填充和稱量。將膠囊在製備之後立即裝載到裝置中，穿刺並取樣到NGI中。
使用體積流量計測定對應4kPa壓降的流速。將吸入器連接到USP IP的改良適配器允許直接測量壓降。不用預分離器安裝NGI。安裝Copley臨界流量控制器，通過該裝置在試驗期間吸引4升空氣。使用RP HPLC測定方法分析NGI樣品。需要大約100L/min的空氣流速來產生穿越吸入器裝置的4kPa壓降。該流速在所有NGI試驗中使用。
表8列舉了對於這些實驗計算的性能參數。由於在這些製劑之間的mIL-4濃度差，平均細顆粒劑量(FPD)改變。當作為細顆粒百分率(FPF)標準化時，製劑2具有在96％的最高FPF，隨後是製劑1和3，分別是在85％和83％。平均MMAD估計由Malvern測定的D50值(參見表7)。這些結果指示，與該吸入器裝置組合的製劑1、2和4適合於吸入遞送。
表8製劑1、2和4的NGI結果的總結 a作為每製劑的膠囊填充wt×mIL-4濃度測定的理論質量。
實施例8.測定噴射劑量和細顆粒劑量 在表9中總結了使用不同填充重量在兩種不同初級粒度下製造的製劑1(具有4.8μm的平均粒度的批料1和具有3.3μm的平均粒度的批料2)的噴射劑量和細顆粒劑量(沉積)結果的數據。在表10中總結了使用不同填充重量在兩種不同初級粒度下製造的製劑2(具有2.9μm的平均粒度的批料1和具有4.2μm的平均粒度的批料2)的噴射劑量和細顆粒劑量(沉積)結果的數據。如在這些結果中所能看到的，填充重量影響了噴射質量和細顆粒百分率二者。
表9、不同填充重量的沉積結果(製劑1批料)
表10、不同填充重量的沉積結果(製劑2批料)

實施例9.儲存條件和穩定性的研究 在類似條件下噴霧乾燥之後評價四種製劑的物理和化學性能。所有製劑具有對於吸入遞送來說滿意的通過雷射衍射測定的幾何粒度分布。平均粒徑(D50)值是在從2.3μm到2.8μm的範圍，且平均第90百分位直徑(D90)值是在從4.4μm到4.9μm的範圍。所有製劑的水分含量低於按質量計2％。然而，製劑3的水分吸收曲線顯示了在30-40％相對溼度(RH)時明顯重量損失，指示了結晶。該製劑在進一步測試中被排除。
製劑1、2和4的空氣動力學性能看起來適合於吸入遞送。然而，製劑4通過RP-HPLC的化學分析顯示了未知峰的存在。因此，製劑1和2被考慮用於在5℃和30℃/65％RH下的三個月穩定性試驗。
表11中的穩定性數據結果涉及類似於製劑2的乾粉的新批料，即75％mIL-4、15％蔗糖和10％檸檬酸鹽，pH5.0。
表11mIL-4散裝吸入乾粉-穩定性結果


NT-不能測試的 實施例10.藥盒內容物和包裝 對噴霧乾燥的材料進行動態溼氣吸附分析(DVS)以評價水分吸收。使用以0.001％的dM/dT值從0％上升至90％RH的SMS DVS 2000系統分析樣品。還表徵凍幹的mIL-4用於參考。四種IL-4的噴霧乾燥製劑的動態溼氣吸附(DVS)研究指示，製劑1、2和4的水分吸收性能相互一致且與mIL-4凍幹餅一致。這些顯示水分隨相對溼度增加而增加且沒有其它水分誘導的事件。
製劑3顯示了在30-40％RH下的明顯重量損失事件，這能夠歸因於對於該製劑的結晶和潛在不穩定性。表12和13提供了DVS數據的總結。
表12.mIL-4噴霧乾燥製劑的DVS性能的對比 表13吸溼性數據的總結
這些製劑的水分吸收要求使用的包裝結構必須使進入產品的水分最小化。這些乾粉的不適當的包裝和水分進入導致了如表14和15中見到的不穩定性。
表14和15顯示了由在箔外包裝中包裝且在5℃、25℃/60％RH和40℃/75％RH下儲存12周的製劑1和2獲得的散裝粉劑和填充膠囊的穩定性數據。還有，對於每一製劑，將一組膠囊樣品在玻璃瓶內儲存，但暴露於(無外包裝，無乾燥劑)25℃和60％相對溼度8周。在兩種製劑中，在箔外包裝中儲存12周的時間的散裝粉劑和膠囊顯示了水分的明顯增加，證明箔外包裝不保護藥物產品免遭水分進入。該數據顯示，RP-HPLC和SDSPAGE代表了水分誘發的降解特性。膠囊樣品不保護儲存8周顯示了水分的最大增加和顯著的降解。用改進的包裝，如表11所示，在加速儲存條件下(30℃/65％RH)在相同時間範圍內沒有水分增加的證據和無蛋白降解。
表14.製劑1不適當的包裝對蛋白完整性的效果

表15.製劑2不適當的包裝對蛋白完整性的效果

實施例11.用乾粉製劑對哮喘患者的治療 由臨床研究確定IL-4/IL-13拮抗劑乾粉組合物的吸入的藥代動力學(PK)和局部耐受性。方法十名具有輕度至中度哮喘(FEV1％預計73-105％，沙丁胺醇可逆性≥10％)的受治療者經由圖10的吸入器施用單劑量的10mg IL-4突變蛋白乾粉組合物。該乾粉組合物包括75％圖1B中的mIL-4的藥物裝載、15％蔗糖和10％檸檬酸鹽(以7∶3檸檬酸鈉與檸檬酸的近似比率)。在給藥後24小時的期間採集PK和肺功能(FEV1)的系列測量。結果達到峰血濃度的時間為2.0小時。血液中的半衰期(3-4小時)不受製劑和劑量水平的影響。總全身暴露((AUC0-∞；範圍12-39nghr/mL)和受治療者間變異性(關於AUCO-∞的幾何變異係數(geometricCV)，48％)與基於體外粉劑和裝置特徵的預測一致。經過24小時的FEV1的典型變化≤10％，與在藥物吸入遞送之後的肺功能改變的先前報告一致(Wilkinson，J.等人，BMJ 1992；305931-932)。該乾粉組合物在哮喘受治療者中充分耐受，沒有局部刺激的證據。圖14示出了用於吸入的乾粉組合物的平均(±SD)IL-4突變蛋白血漿濃度對時間曲線。
雖然參考以上實施例描述了本發明，但應該理解，改造和變化包括在本發明的精神和範圍內。因此，本發明僅受以下權利要求的限制。
AERO1250-1WO_ST25
序列表
艾羅文斯公司
C.B.萊勒
J.S.泰珀
W.A.弗勒蘭德
藥物多肽乾粉氣溶膠製劑
及製備方法
AERO1250-1WO
US 60/959,267
2007-07-11
4
PatentIn版本3.4
1
129
PRT
智人
1
His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser
1 5 10 15
Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile
20 25 30
Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala
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DNA
智人
2
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人工序列

合成構建物
3
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50 55 60
Arg Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln Phe His Arg His Lys Gln Leu
65 70 75 80
Ile Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly
85 90 95
Leu Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn
100 105 110
Phe Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met Asp Glu Lys Asp Ser Lys Cys
115 120 125
Ser Ser
130
4
396
DNA
人工序列

合成構建物
4
atgcacaaat gcgatatcac cctgcaggaa atcatcaaaa ccctgaattc tctgaccgaa 60
cagaaaaccc tgtgcaccga actgaccgtt accgacatct tcgctgcttc gaaaaacacc120
accgaaaaag aaaccttctg ccgtgctgct accgttctgc gtcagttcta ctctcaccac180
gaaaaagaca cccgttgcct gggtgctacc gctcagcagt tccaccgtca caaacagctg240
atccgtttcc tgaaacgtct ggaccgtaac ctgtggggtc tggctggtct gaacagctgc300
ccggttaaag aagctaacca gtctaccctg gaaaacttcc tggaacgtct gaaaaccatc360
atggacgaaa aagactctaa atgctcttct taataa 39權利要求
1.一種適合於由需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括人白細胞介素突變蛋白(mhIL-4)的治療劑，
其中所述組合物的玻璃化轉變溫度比儲存所述組合物的儲存溫度高至少50℃，且
其中在將所述組合物在所述儲存溫度下儲存三個月的時間之後，所述組合物保持初始比活性的至少80％。
2.根據權利要求1所述的組合物，還包括緩衝劑和穩定劑。
3.根據權利要求2所述的組合物，其中所述緩衝劑是檸檬酸鹽。
4.根據權利要求2所述的組合物，其中所述緩衝劑是醋酸鹽。
5.根據權利要求2所述的組合物，其中所述緩衝劑是乳酸鹽。
6.根據權利要求2所述的組合物，其中所述緩衝劑是酒石酸鹽。
7.根據權利要求2-6的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑選自由碳水化合物組成的組。
8.根據權利要求2-7的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑是蔗糖。
9.根據權利要求2-7的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑是甘露醇。
10.根據權利要求2-7的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑是海藻糖。
11.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，還包括選自由胺基酸或聚(胺基酸)組成的組的賦形劑。
12.根據權利要求11所述的組合物，其中所述胺基酸是亮氨酸。
13.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物的玻璃化轉變溫度比所述儲存溫度高至少75℃。
14.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物的玻璃化轉變溫度比所述儲存溫度高至少100℃。
15.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中在總儲存期到期之後，所述組合物保持初始比活性的至少95％，其中所述總儲存期為至少兩年。
16.根據權利要求15所述的組合物，其中所述組合物保持初始比活性的至少98％。
17.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中治療活性材料在所述組合物中的質量濃度是在約10％和約98％之間。
18.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中治療活性材料在所述組合物中的質量濃度是在約10％和約75％之間。
19.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中治療活性材料在所述組合物中的質量濃度是在約10％和約60％之間。
20.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物包括水分且其中所述水分含量是在約1％和約10％之間。
21.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物中的水分含量是在約1％和約5％之間。
22.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物中的水分含量是在約1％和約3％之間。
23.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中在總儲存期到期之後，所述組合物具有約3％或更低的聚集度，其中所述總儲存期是至少兩年。
24.根據權利要求23所述的組合物，其中所述聚集度是約1％或更低。
25.根據權利要求23或24的任一項所述的組合物，其中所述組合物的聚集度是約0％。
26.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度為室溫或更低。
27.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度為室溫。
28.根據權利要求1-26的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度是在約2℃和8℃之間。
29.根據權利要求1-26的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度在儲存期的第一部分期間是在約2℃和8℃之間，且在儲存期的第二部分期間為室溫。
30.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中在所述組合物的總儲存期到期之後，治療活性材料相對於藥品的氧化度是約5％或更低，其中所述總儲存期是至少兩年。
31.根據權利要求30所述的組合物，其中所述氧化度是約3％或更低。
32.根據權利要求30或31的任一項所述的組合物，其中所述氧化度是約2％。
33.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中通過具有小於約10μm的平均直徑值的顆粒來形成所述粉劑。
34.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述平均直徑值是在約2μm和約6μm之間。
35.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述平均直徑值是在約2μm和約4μm之間。
36.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中粒度的幾何標準差是在約1和3之間。
37.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述幾何標準差是在約1.5和2.5之間。
38.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中當被患者吸入時，所述組合物的噴射劑量是約70質量％或更高。
39.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物的噴射劑量是約80質量％或更高。
40.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物的噴射劑量是約90質量％或更高。
41.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中，當所述組合物被患者吸入時，具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的沉積百分率是在約25質量％和約60質量％之間。
42.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約40質量％和約60質量％之間。
43.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約50質量％和約60質量％之間。
44.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物的pH是在約3和6之間。
45.根據前述權利要求的任一項所述的組合物，其中所述組合物的pH值是在約4和5之間。
46.一種藥盒，其包括根據前述權利要求的任一項所述的可分散的粉劑組合物、用於患者吸入的吸入裝置和用於儲存所述組合物的儲存裝置，所述儲存裝置包括初級膠囊和二級儲存容器，且還包括貼附於所述儲存裝置且提供患者使用說明書的標籤，進一步的前提是所述初級膠囊適於配合所述吸入裝置。
47.根據權利要求46所述的藥盒，其中所述組合物為膠囊的形式，各膠囊含有在約5mg和25mg之間的所述組合物。
48.根據權利要求46或權利要求47的任一項所述的藥盒，其中各膠囊含有在約5mg和約20mg之間的所述組合物。
49.根據權利要求46-48的任一項所述的藥盒，其中各膠囊含有在約10mg和約20mg之間的組合物。
50.一種製備根據權利要求1-45的任一項所述的組合物的方法，包括將治療活性材料的水溶液經歷選自由冷凍乾燥、噴霧乾燥和冷凍噴霧乾燥組成的組的過程。
51.根據權利要求50所述的方法，還包括研磨。
52.根據權利要求50或權利要求51的任一項所述的方法，其中所述過程是噴霧乾燥。
53.根據權利要求1-45的任一項所述的組合物，其中所述治療活性材料包括活性物質，其中所述活性物質的額定劑量是在約0.3mg和30mg之間。
54.根據權利要求1-45或53的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.3mg和5mg之間。
55.根據權利要求1-45、53或54的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.5mg和3mg之間。
56.根據權利要求1-46或53-554的任一項所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白包括具有修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列，其中第一修飾是用其它天然胺基酸對存在於野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一個或多個胺基酸的替代，且還可任選地包括N-端甲硫氨酸。
57.根據權利要求56所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白還包括選自由以下組成的組中的第二修飾
(i)其中的C端的修飾；
(ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；
(iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
(iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代。
58.根據權利要求56或權利要求57的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D。
59.根據權利要求56-58的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
60.一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括突變的人白細胞介素-4(mIL-4)蛋白的治療劑，所述蛋白由具有兩種修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列組成，其中第一修飾選自由存在於野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一個或多個胺基酸被其它天然胺基酸的替代組成的組，且第二修飾是選自由以下組成的組中的至少一個修飾
i)其中的C端的修飾；
ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；和/或
iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗劑且還任選地包含N-端甲硫氨酸，
其中所述組合物的玻璃化轉變溫度比儲存所述組合物的儲存溫度高至少50℃，且
其中在將所述組合物在所述儲存溫度下儲存三個月的時間之後，所述組合物保持初始比活性的至少80％。
61.一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括人白細胞介素突變蛋白(mhIL-4)的治療劑、緩衝劑和穩定劑。
62.根據權利要求61所述的組合物，其中所述緩衝劑是檸檬酸鹽。
63.根據權利要求61所述的組合物，其中所述緩衝劑是醋酸鹽。
64.根據權利要求61所述的組合物，其中所述緩衝劑是乳酸鹽。
65.根據權利要求61所述的組合物，其中所述緩衝劑是酒石酸鹽。
66.根據權利要求61-65的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑選自由碳水化合物組成的組。
67.根據權利要求61-66的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑是蔗糖。
68.根據權利要求61-66的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑是甘露醇。
69.根據權利要求61-66的任一項所述的組合物，其中所述穩定劑是海藻糖。
70.根據權利要求61-69的任一項所述的組合物，還包括選自由胺基酸或聚(胺基酸)組成的組的賦形劑。
71.根據權利要求70所述的組合物，其中所述胺基酸是亮氨酸。
72.根據權利要求61-71的任一項所述的組合物，其中所述組合物的玻璃化轉變溫度比所述儲存溫度高至少75℃。
73.根據權利要求61-72的任一項所述的組合物，其中所述組合物的玻璃化轉變溫度比所述儲存溫度高至少100℃。
74.根據權利要求61-73的任一項所述的組合物，其中在總儲存期到期之後，所述組合物保持初始比活性的至少95％，其中所述總儲存期為至少兩年。
75.根據權利要求74所述的組合物，其中所述組合物保持初始比活性的至少98％。
76.根據權利要求61-75的任一項所述的組合物，其中治療活性材料在所述組合物中的質量濃度是在約10％和約98％之間。
77.根據權利要求61-76的任一項所述的組合物，其中治療活性材料在所述組合物中的質量濃度是在約10％和約75％之間。
78.根據權利要求61-77的任一項所述的組合物，其中治療活性材料在所述組合物中的質量濃度是在約10％和約60％之間。
79.根據權利要求61-78的任一項所述的組合物，其中所述組合物包括水分且其中所述水分含量是在約1％和約10％之間。
80.根據權利要求61-79的任一項所述的組合物，其中所述組合物中的水分含量是在約1％和約5％之間。
81.根據權利要求61-80的任一項所述的組合物，其中所述組合物中的水分含量是在約1％和約3％之間。
82.根據權利要求61-81的任一項所述的組合物，其中在總儲存期到期之後，所述組合物具有約3％或更低的聚集度，其中總儲存期是至少兩年。
83.根據權利要求82所述的組合物，其中所述聚集度是約1％或更低。
84.根據權利要求82或83的任一項所述的組合物，其中所述組合物的聚集度是約0％。
85.根據權利要求61-84的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度為室溫或更低。
86.根據權利要求61-85的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度為室溫。
87.根據權利要求61-85的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度是在約2℃和8℃之間。
88.根據權利要求61-85的任一項所述的組合物，其中所述儲存溫度在儲存期的第一部分期間是在約2℃和8℃之間，且在儲存期的第二部分期間為室溫。
89.根據權利要求61-88的任一項所述的組合物，其中在所述組合物的總儲存期到期之後，治療活性材料相對於藥品的氧化度是約5％或更低，其中所述總儲存期是至少兩年。
90.根據權利要求89所述的組合物，其中所述氧化度是約3％或更低。
91.根據權利要求89或90的任一項所述的組合物，其中所述氧化度是約2％。
92.根據權利要求61-91的任一項所述的組合物，其中通過具有小於約10μm的平均直徑值的顆粒來形成所述粉劑。
93.根據權利要求61-92的任一項所述的組合物，其中所述平均直徑值是在約2μm和約6μm之間。
94.根據權利要求61-93的任一項所述的組合物，其中所述平均直徑值是在約2μm和約4μm之間。
95.根據權利要求61-94的任一項所述的組合物，其中粒度的幾何標準差是在約1和3之間。
96.根據權利要求61-95的任一項所述的組合物，其中幾何標準差是在約1.5和2.5之間。
97.根據權利要求61-96的任一項所述的組合物，其中當被患者吸入時，所述組合物的噴射劑量是約70質量％或更高。
98.根據權利要求61-97的任一項所述的組合物，其中所述組合物的噴射劑量是約80質量％或更高。
99.根據權利要求61-98的任一項所述的組合物，其中所述組合物的噴射劑量是約90質量％或更高。
100.根據權利要求61-99的任一項所述的組合物，其中當所述組合物被患者吸入時，具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的沉積百分率是在約25質量％和約60質量％之間。
101.根據權利要求61-100的任一項所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約40質量％和約60質量％之間。
102.根據權利要求61-101的任一項所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約50質量％和約60質量％之間。
103.根據權利要求61-102的任一項所述的組合物，其中所述組合物的pH是在約3和6之間。
104.根據權利要求61-103的任一項所述的組合物，其中所述組合物的pH值是在約4和5之間。
105.一種藥盒，其包括根據權利要求61-104的任一項所述的可分散的粉劑組合物、用於受治療者吸入的吸入裝置和用於儲存所述組合物的儲存裝置，所述儲存裝置包括初級容器和二級儲存容器，且還任選地包括在所述儲存裝置中含有的或貼附於所述儲存裝置的患者使用說明書，進一步的前提是所述初級膠囊適於配合所述吸入裝置。
106.根據權利要求105所述的藥盒，其中所述初級容器能夠被所述吸入裝置刺破，且各初級容器含有在約5mg和25mg之間的所述組合物。
107.根據權利要求105或權利要求106的任一項所述的藥盒，其中所述初級容器是含有約5mg和約20mg之間的所述組合物的膠囊。
108.根據權利要求105-107的任一項所述的藥盒，其中各初級容器含有在約10mg和約20mg之間的組合物。
109.一種製備根據權利要求61-104的任一項所述的組合物的方法，包括將治療活性材料的水溶液經歷選自由冷凍乾燥、噴霧乾燥和冷凍噴霧乾燥組成的組的過程。
110.根據權利要求109所述的方法，還包括研磨。
111.根據權利要求109或權利要求110的任一項所述的方法，其中所述過程是噴霧乾燥。
112.根據權利要求61-104的任一項所述的組合物，其中所述治療活性材料包括活性物質，其中所述活性物質的額定劑量是在約0.3mg和30mg之間。
113.根據權利要求61-104或112的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.3mg和5mg之間。
114.根據權利要求61-104、112或113的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.5mg和3mg之間。
115.根據權利要求61-104或112-114的任一項所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白包括具有修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列，其中第一修飾是用其它天然胺基酸對存在於野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一個或多個胺基酸的替代，且還任選地包括N-端甲硫氨酸。
116.根據權利要求115所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白還包括選自由以下組成的組的第二修飾
(i)其中的C端的修飾；
(ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；
(iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
(iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代。
117.根據權利要求115或權利要求116的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D。
118.根據權利要求115-117的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
119.一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括突變的人白細胞介素-4(mIL-4)蛋白的治療劑、緩衝劑和穩定劑，所述mIL-4蛋白由具有兩種修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列組成，其中第一修飾選自由存在於野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一個或多個胺基酸被其它天然胺基酸的替代組成的組，且第二修飾是選自由以下組成的組中的至少一個修飾
i)其中的C端的修飾；
ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；和/或
iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗劑且還任選地包含N-端甲硫氨酸。
120.一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括人白細胞介素突變蛋白(mhIL-4)的治療劑，其中當被患者吸入時，所述組合物的噴射劑量是約70質量％或更高。
121.根據權利要求120所述的組合物，其中所述組合物的噴射劑量是約80質量％或更高。
122.根據權利要求120或權利要求121的任一項所述的組合物，其中所述組合物的噴射劑量是約90質量％或更高。
123.根據權利要求120-122的任一項所述的組合物，其中當所述組合物被患者吸入時，具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的沉積百分率是在約25質量％和約60質量％之間。
124.根據權利要求120-123的任一項所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約40質量％和約60質量％之間。
125.根據權利要求120-124的任一項所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約50質量％和約60質量％之間。
126.一種藥盒，其包括根據權利要求119-124的任一項所述的可分散的粉劑組合物、用於患者吸入的吸入裝置和用於儲存所述組合物的儲存裝置，所述儲存裝置包括初級容器和二級儲存容器，且還任選地包括在所述儲存裝置中含有的、貼附於所述儲存裝置且提供患者使用說明書的標籤，進一步的前提是所述初級膠囊適於配合所述吸入裝置。
127.根據權利要求126所述的藥盒，其中所述組合物為膠囊的形式，各膠囊含有在約5mg和25mg之間的所述組合物。
128.根據權利要求126或權利要求127的任一項所述的藥盒，其中各膠囊含有約5mg和約20mg之間的所述組合物。
129.根據權利要求126-128的任一項所述的藥盒，其中各膠囊含有在約10mg和約20mg之間的組合物。
130.一種製備根據權利要求120-125的任一項所述的組合物的方法，包括將治療活性材料的水溶液經歷選自由冷凍乾燥、噴霧乾燥和冷凍噴霧乾燥組成的組的過程。
131.根據權利要求130所述的方法，還包括研磨。
132.根據權利要求130或權利要求131的任一項所述的方法，其中所述過程是噴霧乾燥。
133.根據權利要求120-125的任一項所述的組合物，其中所述治療活性材料包括活性物質，其中所述活性物質的額定劑量是在約0.3mg和30mg之間。
134.根據權利要求120-125或133的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.3mg和5mg之間。
135.根據權利要求120-125、133或134的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.5mg和3mg之間。
136.根據權利要求120-125或133-135的任一項所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白包括具有修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列，其中第一修飾是用其它天然胺基酸對存在於野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一個或多個胺基酸的替代，且還任選地包括N-端甲硫氨酸。
137.根據權利要求136所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白還包括選自由以下組成的組的第二修飾
(i)其中的C端的修飾；
(ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；
(iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
(iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代。
138.根據權利要求136或權利要求137的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D。
139.根據權利要求136-138的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
140.一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括突變的人白細胞介素-4(mIL-4)蛋白的治療劑，所述mIL-4蛋白由具有兩種修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列組成，其中第一修飾選自由存在於野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一個或多個胺基酸被其它天然胺基酸的替代組成的組，且第二修飾是選自由以下組成的組的至少一個修飾
i)其中的C端的修飾；
ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；和/或
iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗劑且還任選地包含N-端甲硫氨酸，
其中當被患者吸入時，所述組合物的噴射劑量是約70質量％或更高。
141.一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括人白細胞介素突變蛋白(mhIL-4)的治療劑，其中當所述組合物被患者吸入時，具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的沉積百分率是在約25質量％和約60質量％之間。
142.根據權利要求141所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約40質量％和約60質量％之間。
143.根據權利要求141或權利要求142的任一項所述的組合物，其中所述沉積百分率是在約50質量％和約60質量％之間。
144.一種藥盒，其包括根據權利要求141-143的任一項所述的可分散的粉劑組合物、用於患者吸入的吸入裝置和用於儲存所述組合物的儲存裝置，所述儲存裝置包括初級膠囊和二級儲存容器，且還包括貼附於所述儲存裝置且提供患者使用說明書的標籤，進一步的前提是所述初級膠囊適於配合所述吸入裝置。
145.根據權利要求144所述的藥盒，其中所述組合物為膠囊的形式，各膠囊含有在約5mg和25mg之間的所述組合物。
146.根據權利要求144或權利要求145的任一項所述的藥盒，其中各膠囊含有在約5mg和約20mg之間的所述組合物。
147.根據權利要求143-145的任一項所述的藥盒，其中各膠囊含有在約10mg和約20mg之間的所述組合物。
148.一種製備根據權利要求141-143的任一項所述的組合物的方法，包括將治療活性材料的水溶液經歷選自由冷凍乾燥、噴霧乾燥和冷凍噴霧乾燥組成的組的過程。
150.根據權利要求149所述的方法，還包括研磨。
151.根據權利要求149或權利要求150的任一項所述的方法，其中所述過程是噴霧乾燥。
152.根據權利要求141-143的任一項所述的組合物，其中所述治療活性材料包括活性物質，其中所述活性物質的額定劑量是在約0.3mg和30mg之間。
153.根據權利要求141-143或152的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.3mg和5mg之間。
154.根據權利要求141-143、152或153的任一項所述的組合物，其中所述額定劑量是在約0.5mg和3mg之間。
155.根據權利要求141-143或152-154的任一項所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白包括具有修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列，其中第一修飾是用其它天然胺基酸對存在於野生型hIL-4蛋白中121、124或125位上的一個或多個胺基酸的替代，且還任選地包括N-端甲硫氨酸。
156.根據權利要求155所述的組合物，其中所述IL-4突變蛋白還包括選自由以下組成的組的第二修飾
(i)其中的C端的修飾；
(ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；
(iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
(iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代。
157.根據權利要求155或權利要求156的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D。
158.根據權利要求155-157的任一項所述的組合物，其中所述第一修飾包括根據野生型hIL-4編號的替代R121D和Y124D以及N-端甲硫氨酸。
159.一種適合被需要其的患者吸入的可分散的粉劑組合物，所述組合物含有包括突變的人白細胞介素-4(mIL-4)蛋白的治療劑，所述蛋白由具有兩種修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列組成，其中第一修飾選自由存在於野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一個或多個胺基酸被其它天然胺基酸的替代組成的組，且第二修飾是選自由以下組成的組的至少一個修飾
i)其中的C端的修飾；
ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；和/或
iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗劑且還任選地包含N-端甲硫氨酸，
其中，當所述組合物被患者吸入時，具有不超過約5μm的直徑值的顆粒的沉積百分率是在約25質量％和約60質量％之間。
160.一種治療疾病的方法，其包括將治療有效量的根據權利要求1-45、53-104、112-125、133-143和152-159的任一項所述的組合物施用於需要這種治療的患者，從而治療所述疾病。
161.根據權利要求160所述的方法，其中所述疾病是哮喘。
162.根據權利要求160或權利要求161的任一項所述的方法，其中所述施用是吸入。
163.一種治療疾病的方法，其包括將在根據權利要求46-49、105-108、126-129和144-147的任一項所述的藥盒中所含有的治療有效量的組合物施用於需要這種治療的患者，從而治療所述疾病。
164.一種吸入器裝置，其包括吸入器主體，所述吸入器主體界定了用於在其中容納含有根據權利要求1-45、53-104、112-125、133-143和152-159的任一項所述的可分散的粉劑組合物的膠囊的凹槽，以及與所述膠囊連通的噴嘴，其中所述吸入器裝置還包括穿孔裝置，所述穿孔裝置與吸入器主體結合且適合於將所述膠囊穿孔以允許外部空氣流與可分散的粉劑組合物混合，用於通過所述噴嘴吸入，其中當被患者吸入時，所述組合物的噴射劑量為約70質量％或更高。
165.根據權利要求164所述的吸入器裝置，其中所述穿孔裝置包括穿孔針，所述穿孔針用於橫向滑動對抗彈性元件的偏置並且在與所述吸入器主體固定的對接元件和相應的操作按鈕元件之間操作，每一個穿孔針具有包括有斜面的尖頭的外形，用於促進膠囊包衣的穿孔。
166.根據權利要求164所述的吸入器裝置，其中所述噴嘴相對於所述吸入器主體可移動，以提供至少兩種操作狀態，該兩種操作狀態包括開放狀態和關閉使用狀態，在開放狀態中，用於膠囊的凹槽可容易達到在其中接合新的膠囊或者由此退出用過的膠囊，在關閉使用狀態中，所述吸入器噴嘴被彈簧鎖鎖定。
167.根據權利要求166所述的吸入器裝置，其中所述吸入器噴嘴在其關閉位置被彈簧鎖裝置鎖定，所述彈簧鎖裝置包括噴嘴的凸緣的鉤部分，具有在吸入器主體中形成的閉鎖座位內部形成的相應的脊。
168.根據權利要求167所述的吸入器裝置，其中所述吸入器噴嘴的凸緣包括可接合在吸入器主體中形成的孔內的插腳。
169.根據權利要求168所述的吸入器裝置，其中所述孔界定縱向狹槽，所述縱向狹槽適於允許所述插腳的橫向齒通過所述狹槽，且所述孔包括底部環形凹槽，所述底部環形凹槽適於允許所述齒滑入，從而允許所述插腳接合到所述孔中。
170.根據權利要求169所述的吸入器裝置，其中銷在孔中可旋轉，且所述噴嘴相對於所述吸入器主體可旋轉。
171.根據權利要求164所述的吸入器裝置，其中所述吸入器主體的用於膠囊的凹槽通過在所述凸緣的吸入器噴嘴中提供的穿孔板或柵格與外部連通，且適於將膠囊凹槽與噴嘴的導管分開，所述膠囊凹槽具有通過一個或多個進氣孔與外部連通的底部。
172.一種乾粉藥物組合物，其包括有效量的mIL-4、穩定劑和緩衝劑。
173.根據權利要求172所述的藥物組合物，其包括在約5％和約50％之間的mIL-4、在約10％和約85％之間的穩定劑和在約10％和約85％之間的緩衝劑。
174.根據權利要求172或權利要求173的任一項所述的藥物組合物，其中所述緩衝劑與穩定劑的比率是在約1∶8.5和約8.5∶1之間。
175.根據權利要求172或權利要求173的任一項所述的藥物組合物，其中所述穩定劑還包括鎂離子源。
176.根據權利要求175所述的藥物組合物，其中所述鎂離子源選自由硫酸鎂、氯化鎂和醋酸鎂組成的組。
177.根據權利要求172-176的任一項所述的藥物組合物，其中所述mIL-4由具有兩種修飾的野生型hIL-4的胺基酸序列組成，其中第一修飾選自由存在於野生型hIL-4蛋白的121、124或125位的一個或多個胺基酸被其它天然胺基酸的替代組成的組，且第二修飾是選自由以下組成的組的至少一個修飾
i)其中的C端的修飾；
ii)其中的潛在的糖基化位點的刪除；和/或
iii)蛋白與非蛋白聚合物的偶聯；
iv)選自由在13、16、81和89位及它們的任意組合的替代組成的組中的至少一個胺基酸替代，使得mIL-4蛋白是野生型hIL-4的拮抗劑且還任選地包含N-端甲硫氨酸。
178.根據權利要求172-177的任一項所述的藥物組合物，其中所述mIL-4是根據圖1B中序列的mIL-4。
179.一種藥盒，其包括含有約5mg和約25mg之間的根據權利要求172-177的任一項所述的藥物組合物的膠囊或泡罩。
全文摘要
公開了適合於吸入的可分散的粉劑組合物，該組合物包括人白細胞介素突變蛋白(mhIL-4)。
文檔編號A61K38/00GK101784280SQ200880103277
公開日2010年7月21日 申請日期2008年7月11日 優先權日2007年7月11日
發明者C·B·萊勒, J·S·泰珀, W·A·弗勒蘭德 申請人:艾羅文斯公司