一種黨參藥材的質量控制方法
2023-09-21 11:46:25 1
專利名稱：一種黨參藥材的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥材的質量控制方法，特別是涉及黨參藥材的質量控制方法。
背景技術：
黨參(Codonopsis pilosula)，屬桔梗科(Platycodon)植物，古代以產於中國上黨郡的為最名貴，故稱黨參。幾十年來，在原有研究基礎上，國內外對黨參化學成分進行了深入研究，從黨參中分離鑑定了10種甾醇類，21種糖苷類，5種生物鹼類及含氮成分，34種揮髮油成分，13種三萜類及其他類成分，還有多種人體必需的無機元素和胺基酸。
中藥指紋圖譜是指某種中藥材或中成藥中所共有的、具有特徵性的某類或數類成分的色譜或光譜的圖譜。在現階段中藥的有效成分絕大多數沒有明確的情況下，中藥指紋圖譜對於有效控制中藥材或中成藥的質量具有重要的意義。日本漢方藥主要生產企業在20世紀80年代就已經在企業內部採用高效液相指紋圖譜控制質量。德國、法國在對銀杏葉提取物聯合開發的過程中，發現銀杏葉提取物的醫療作用是提取物所得物質群的整體作用結果，而對這樣一個整體的質量控制，亦採用高效液相指紋圖譜方法。美國FDA最近幾年制定的植物草藥指南中已經明確把指紋圖譜作為混合物質群的質量控制方法(FDA.Guidance of IndustryBotanical Drug(Draft).2000August)。隨著研究的深入，人們發現，作為中醫理論的實踐產物，中藥，尤其是複方中藥，其中所含的任一成分都不能代表其整體療效。人們逐漸認識到，現行的參照西藥(合成藥)質量控制模式的質量標準不能恰當地反映中藥內在的質量。從發展趨勢看，從現行的質量控制模式向一種綜合的、宏觀的、可量化的鑑別與主要有效成分含量測定結合已是發展的趨勢。
中藥質量評價的現行標準是利用光譜或色譜手段鑑別和測定某一種或幾種有效成分、活性成分或指標成分，以及藥典規定的常規檢查項目。如中國藥典2000年版[一部]共收載602種藥材及成藥品種。其中有992個薄層色譜鑑別，308個品種有含量測定〔容量法、光譜法、液相色譜法、氣相色譜法及薄層色譜掃描法〕，大多數品種有一般的檢查項目。顯然.這些質量標準的設置是模仿了化學藥品的模式。其它國家如英國、印度、美國草藥典、日本藥局方中的漢藥及德國CommissionE編輯的德國草藥專論等也採用了基本相同的內容。對於化學藥品而言，其藥效成分為結構清晰的單一化合物，構效關係明確，其含量和純度直接表達其有效及安全性。然而，中醫用藥的特點是複方配伍，任何單一的有效或活性成分的含量高低均不能表達其整體的療效。例如，黃芪所含的黃芪甲苷(aastraga losideIV)是當前被選擇為質量標準的鑑別和含量測定的最為常見的目標，但並沒有依據證明黃芪甲苷與黃芪的功能主治的明確聯繫。同樣，黃連、黃柏、三棵針均含小梁鹼，一般都以它作為檢測的目標，但是三者的功能主治卻截然不同。複方製劑的情況就更加複雜。中醫這種不是一對一的非線性的理論和實踐說明中藥質量應該採用某種宏觀的綜合的質量評價手段。
發明內容
本發明的目的在於提供一種能夠綜合評價黨參藥材的質量控制方法。
本發明的目的是通過以下技術方案實現的一種黨參藥材的質量控制方法，包括如下步驟(a).黨參對照指紋圖譜的建立黨參藥材對照樣品溶液的製備稱取藥材細粉，加入甲醇溶液，超聲處理，放冷，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過；黨參藥材對照指紋圖譜的測定吸取上述對照樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到黨參藥材對照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相為乙腈磷酸水溶液；檢測波長200～210nm；(b).黨參藥材待測產品指紋圖譜的測定取黨參藥材待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c).將所述黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
所述(a)步驟中優選的色譜條件是流動相的流速0.500～1.500ml/min，檢測波長200～205nm，柱溫20～40℃。
優選的黨參藥材指紋圖譜的建立採用如下方法(a).黨參藥材對照樣品溶液的製備方法精密稱取藥材細粉，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇溶液，精密稱定，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；黨參藥材對照指紋圖譜的測定色譜條件流動相A為0.02％磷酸水溶液；流動相B為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；梯度洗脫程序如下表所示
(b).黨參藥材待測產品指紋圖譜的測定取黨參藥材待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c).將所述黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的黨參藥材的對照指紋圖譜中有11個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有2個，分別為10號峰，平均保留時間RT為84.452min，RSD為0％，峰面積為1275.39，RSD為3％；11號峰，平均保留時間RT為94.316min，RSD為0％，峰面積為3319.528，RSD為3.42％。
在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的黨參藥材的對照指紋圖譜中有11個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有4個，分別為2號峰，平均保留時間RT為12.068min，RSD為0.53％，峰面積為381.699，RSD為11.9％；3號峰，平均保留時間RT為12.711min，RSD為0.4％，峰面積為634.231，RSD為14.32％；10號峰，平均保留時間RT為84.452min，RSD為0％，峰面積為1275.39，RSD為3％；11號峰，平均保留時間RT為94.316min，RSD為0％，峰面積為3319.528，RSD為3.42％。在對照指紋圖譜的建立中，使用高效液相色譜法測定所獲得的黨參藥材的對照指紋圖譜中有11個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有11個，分別為1號峰，平均保留時間RT為7.308，RSD為0.34，峰面積為289.896，RSD為8.942號峰，平均保留時間RT為12.068，RSD為0.53，峰面積為381.699，RSD為11.93號峰，平均保留時間RT為12.711，RSD為0.4，峰面積為634.231，RSD為14.324號峰，平均保留時間RT為14.148，RSD為0.32，峰面積為355.482，RSD為2.2
5號峰，平均保留時間RT為21.677，RSD為0.35，峰面積為270.857，RSD為35.466號峰，平均保留時間RT為35.544，RSD為0.17，峰面積為227.295，RSD為25.297號峰，平均保留時間RT為36.097，RSD為0.21，峰面積為293.056，RSD為10.038號峰，平均保留時間RT為39.207，RSD為0.17，峰面積為228.713，RSD為2.749號峰，平均保留時間RT為45.348，RSD為0，峰面積為282.564，RSD為4.4610號峰，平均保留時間RT為84.452，RSD為0，峰面積為1275.39，RSD為311號峰，平均保留時間RT為94.316，RSD為0，峰面積為3391.528，RSD為3.42。
本發明採用如下方法控制黨參藥材的質量，取待黨參藥材，採用與黨參藥材對照樣品的製備方法、色譜條件、測定方法完全相同的方法進行測定，獲取指紋圖譜，將黨參藥材待測產品指紋圖譜與黨參藥材照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個或3個以上相同的吸收峰時，便認為黨參藥材待測產品是合格產品。
優選地，黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個或5個以上相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
較為優選地，黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個或7個以上相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
最為優選地，被測的黨參藥材產品指紋圖譜與對照黨參藥材指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有8個相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
本發明把黨參藥材中的各種成分指紋圖形作為一個整體看待，注重各個構成指紋特徵峰的前後順序和相互關係，注重整體面貌特徵，避免了因只測定一、二個化學成分而判定複方丹參滴丸整體質量的片面性，為完整、準確評價黨參藥材的質量提供了新的對照標準。
本發明具有方法簡便、穩定、精密度高、重現性好、易於掌握的特點。
穩定性試驗(S1～S5分別表示同一批次的樣品5份)
精密度試驗(S1～S5分別表示同一批次的樣品5份)
重現性試驗(S1～S5分別表示同一批次的樣品5份)
對於本領域技術人員而言，根據本發明所公開的技術內容，本領域技術人員將很清楚本發明的其它實施方案，本發明實施例僅作為示例。在不違反本發明主旨及範圍的情況下，可對本發明進行各種改變和改進。例如，使用不同的檢測儀器所獲得的測定結果可能有所不同，但只要使用本發明所述的質量控制方法，均在本發明保護範圍之內。
黨參藥材的指紋圖譜具體實施方式
(一)測定方法照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄VID)，結合指紋圖譜的要求進行測定。
儀器和試劑Waters 600E泵，Waters 996PDA檢測器，M32工作站，717自動進樣器。超聲波清洗儀(寧波科生儀器廠，功率250W)。
乙腈(色譜純，美國產)；密裡博超純水；其它的溶劑為分析純。
色譜條件和系統適用性試驗Diamonsil C18柱(迪馬公司)，粒度5μm，體積250×4.6mm；流動相乙腈-0.05％磷酸線性梯度洗脫(見下表)；柱溫30℃；流速1.0ml/min；檢測波長為203nm；記錄時間100分鐘。理論板數按最大峰計算不低於3000。積分條件最小峰高0；最小峰面積0；閾值250；最小半峰寬30。且7分鐘之前禁止積分。
線性梯度洗脫流動相配比變化程序
測定法精密吸取供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定。供試品指紋圖譜與對照用指紋圖譜比較，並經計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」(中國藥典會出版，版本2004A)計算相似度。
檢測波長的選擇照前述色譜條件，精密吸取供試品溶液進樣，從200nm-400nm波長範圍內測定，顯示本品的203nm、210nm、220nm、230nm、250nm、270nm、290nm、310nm、330nm、360nm色譜圖，220nm、230nm、250nm、270nm、290nm、310nm、330nm、360nm色譜圖靈敏度低，峰數目少，指紋性差， 200nm～210nm波長下，色譜圖的基線平，分離較好，峰形漂亮，相對來說，203nm更好。
指紋圖譜從2小時色譜圖可知，100分鐘後已無色譜峰出現，因此100分鐘的圖譜已能反映本品的主要成分。
精密度試驗取批次為040517-4的樣品，按供試品溶液製備方法製備供試品，連續進樣5次，檢測指紋圖，以第1張圖作為參照模板，時間窗為1.0，以46、84、94分鐘的幾個峰作為多點校正峰，自動匹配後，處理結果表明各指紋圖譜的相似度均大於0.90，符合指紋圖的要求。
穩定性試驗取批號為040517-4的樣品，按供試品溶液製備方法製備供試品，分別在0，9，19，48，60小時檢測指紋圖，以第1張圖作為參照模板，時間窗為1.0，以46、84、94分鐘的幾個峰作為多點校正峰，自動匹配後，處理結果表明各指紋圖譜的相似度均大於0.90，符合指紋圖的要求。
重現性試驗取批次為040517-4的樣品5份，按供試品溶液製備方法製備供試品，檢測指紋圖，以第1張圖作為譜峰匹配的模板，時間窗為1.0，以46、84、94分鐘的幾個峰作為多點校正峰，自動匹配後，處理結果表明各指紋圖譜的相似度均大於0.90，符合指紋圖的要求。
五、色譜指紋圖譜的建立和辨認計算機模擬相似度計算軟體「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」的選用選用中國藥典會的「中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統」。
色譜指紋圖譜的建立和辨認照前述方法，對本品十批藥材的樣品進行指紋圖譜的測定，以第1批圖譜作為參照模板，時間窗為1.0，以46、84、94分鐘的幾個峰作為多點校正峰，自動匹配後，處理結果表明各指紋圖譜的相似度均在0.90-1.00之間，符合指紋圖的要求。
權利要求
1.一種黨參藥材的質量控制方法，其特徵在於包括如下步驟(a).黨參對照指紋圖譜的建立黨參藥材對照樣品溶液的製備稱取藥材細粉，加入甲醇溶液，超聲處理，放冷，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過；黨參藥材對照指紋圖譜的測定吸取上述對照樣品溶液注入液相色譜儀，使用高效液相色譜法進行測定，得到黨參藥材對照指紋圖譜，色譜條件色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相為乙腈磷酸水溶液；檢測波長200～210nm；(b).黨參藥材待測產品指紋圖譜的測定取黨參藥材待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c).將所述黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
2.如權利要求1所述的黨參藥材的質量控制方法，其特徵在於所述(a)步驟中流動相的流速0.500～1.500ml/min，檢測波長200～205nm，柱溫20～40℃。
3.如權利要求1所述的黨參藥材的質量控制方法，其特徵在於所述(a)步驟中黨參藥材對照樣品溶液的製備方法為，精密稱取藥材細粉，置具塞三角瓶中，精密加入甲醇溶液，精密稱定，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，0.45μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為供試品溶液；色譜條件流動相A為0.02％磷酸水溶液；流動相B為80％乙腈0.02％的磷酸水溶液；梯度洗脫程序如下表所示
。
4.如權利要求3所述的質量控制方法，其特徵在於，所述的對照指紋圖譜中有11個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積10％的吸收峰有2個，分別為10號峰，平均保留時間RT為84.452min，RSD為0％，峰面積為1275.39，RSD為3％；11號峰，平均保留時間RT為94.316min，RSD為0％，峰面積為3319.528，RSD為3.42％。
5.如權利要求4所述的質量控制方法，其特徵在於，所述的對照指紋圖譜中有11個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積5％的吸收峰有4個，分別為2號峰，平均保留時間RT為12.068min，RSD為0.53％，峰面積為381.699，RSD為11.9％；3號峰，平均保留時間RT為12.711min，RSD為0.4％，峰面積為634.231，RSD為14.32％；10號峰，平均保留時間RT為84.452min，RSD為0％，峰面積為1275.39，RSD為3％；11號峰，平均保留時間RT為94.316min，RSD為0％，峰面積為3319.528，RSD為3.42％。
6.如權利要求5所述的質量控制方法，其特徵在於，所述的對照指紋圖譜中有11個吸收峰，其中單峰面積超過總峰面積2％的吸收峰有11個，分別為1號峰，平均保留時間RT為7.308，RSD為0.34，峰面積為289.896，RSD為8.942號峰，平均保留時間RT為12.068，RSD為0.53，峰面積為381.699，RSD為11.93號峰，平均保留時間RT為12.711，RSD為0.4，峰面積為634.231，RSD為14.324號峰，平均保留時間RT為14.148，RSD為0.32，峰面積為355.482，RSD為2.25號峰，平均保留時間RT為21.677，RSD為0.35，峰面積為270.857，RSD為35.466號峰，平均保留時間RT為35.544，RSD為0.17，峰面積為227.295，RSD為25.297號峰，平均保留時間RT為36.097，RSD為0.21，峰面積為293.056，RSD為10.038號峰，平均保留時間RT為39.207，RSD為0.17，峰面積為228.713，RSD為2.749號峰，平均保留時間RT為45.348，RSD為0，峰面積為282.564，RSD為4.4610號峰，平均保留時間RT為84.452，RSD為0，峰面積為1275.39，RSD為311號峰，平均保留時間RT為94.316，RSD為0，峰面積為3391.528，RSD為3.42。
7.如權利要求4、5或6所述的黨參藥材的質量控制方法，其特徵在於，所述黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有3個或3個以上相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
8.如權利要求7所述的黨參藥材的質量控制方法，其特徵在於，所述黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有5個或5個以上相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
9.如權利要求8所述的黨參藥材的質量控制方法，其特徵在於，所述黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有7個或7個以上相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
10.如權利要求9所述的黨參藥材質量控制方法，其特徵在於被測的黨參藥材產品指紋圖譜與對照黨參藥材指紋圖譜比較，二者指紋圖譜有8個相同的吸收峰時，認為所述黨參藥材待測產品的質量合格。
全文摘要
本發明涉及一種中藥材的質量控制方法，特別是涉及黨參藥材的質量控制方法，包括如下步驟(a)黨參對照指紋圖譜的建立首先製備黨參藥材對照樣品溶液的製備，然後測定黨參藥材對照指紋圖譜；(b)黨參藥材待測產品指紋圖譜的測定取黨參藥材待測產品，按照上述(a)中所述步驟及條件測定該待測產品的指紋圖譜；(c)將所述黨參藥材待測產品指紋圖譜與所述黨參藥材對照指紋圖譜進行比較，識別二者所具有的共同的吸收峰的數量，以確定產品質量是否合格。
文檔編號G01N30/86GK101084974SQ20061001420
公開日2007年12月12日 申請日期2006年6月8日 優先權日2006年6月8日
發明者葉正良, 鄭永鋒, 夏忠庭, 李學敏 申請人:天津天士力之驕藥業有限公司