用於使化合物靶向多種選定器官、組織或腫瘤細胞的分子的製作方法

2023-09-21 23:05:30 3

專利名稱：：用於使化合物靶向多種選定器官、組織或腫瘤細胞的分子的製作方法
技術領域：
：本發明涉及體內靶向領域，並提供了歸巢於、結合於多種器官或組織或腫瘤細胞並被多種器官或組織或腫瘤細胞攝取的分子。
背景技術：
：大多數治療性化合物通過循環遞送至耙器官或組織。然而，在大多數情況下，藥物或其它治療不僅靶向患病器官或組織，而且會被體內的其它器官和組織吸收。這由於例如遍及患者身體的普遍毒性效應而導致不期望的副作用。因此，選擇性靶向特定器官或組織或特定類型的腫瘤細胞是理想的。另外，將治療性化合物與靶向分子偶聯能夠改善被靶向的組織或細胞對化合物的攝取性質，這產生更有效的分子。因此，與靶向分子偶聯獲得相比於母體化合物更有效且毒性更低的化合物，參見Curnisetal.，2000，NatureBiotechnol.18，1185-1190。這能夠應用於多種化合物，例如肽、蛋白質、細胞抑制劑、抗菌素和抗病毒劑。在諸如強直性肌營養不良(MD)或脊髓性肌萎縮(SMA)的神經肌肉疾病的情況下，轉運穿過血腦屏障並攝入神經元細胞對於有效治療是必須的。神經元特異性肽能夠與例如反義寡核苷酸(A0N)和小幹擾RNA(siRNA)結合。A0N和siRNA通過阻斷不期望基因的轉錄而具有用作治療特定疾病的新型藥品的高效能。在SMA治療領域中，反義誘導的外顯子增加(antisense-inducedexoninclusion)作為用於校正SMN2(運動神經存活2)轉錄的翻譯讀碼框的新穎且有前景的工具而備受關注。其目的是以增加被靶向的外顯子(通過將A0N與前體mRNA結合)的方式操縱剪接。這允許校正翻譯讀碼框，並誘導合成全長SMN蛋白。已有若干報導顯示出外顯子增加策略用於恢復全長S麗蛋白生成的治療作用(Huaetal.，2007，PLoSBiol.5，e73;Baughanetal.，2006，Mol.Ther.14，54-62)。然而，要克服的最大障礙是這些AON體內神經元攝取差和穿過血腦屏障的轉運障礙。對於其它神經元疾病或腦疾病(例如阿爾茨海默病、帕金森病等)，問題非常相似，即治療性或診斷化合物體內攝取差。在神經元或神經外胚層腫瘤(例如神經母細胞瘤、膠質母細胞瘤等)的情況下，耙向作用對於產生無副作用的有效治療也是很重要的。化學治療藥物能夠作用於正常組織和癌組織，這導致對這種靶向作用的需求。對於基於反義寡核苷酸(A0N-)或小幹擾(si)RNA的藥品，已知藥代動力學性質不利於游離藥物在腫瘤部位達到足夠的水平，因為大多數被肝臟和腎臟吸收。遞送化學治療劑的載體必須顯示出足夠的半衰期以有效遞送治療劑至期望細胞，還越過血腦屏障。鑑於以上所述，進一步改善遞送系統是實現諸如A0N的藥劑的體內特異性攝取明顯所需的。發明概述本發明的目的是提供化合物，優選肽或模擬肽(p印tidomimetic)，其歸巢於感興趣的器官或組織或細胞型，特別是腦細胞或神經元細胞，或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞。通過將診斷部分或具有生物活性的部分與這樣的歸巢化合物(homingcompound)偶聯，使所述部分靶向特定器官或組織或細胞。在廣泛研究後，本發明人已經鑑定出兩種與腦細胞、神經元細胞以及神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞選擇性結合併被其攝取的肽。因此本發明通過將這樣的寡核苷酸與這些特異性肽結合而滿足了改善例如(反義)寡核苷酸體內攝取的需要。分子有利地用於治療神經肌肉疾病、腦疾病或神經元或神經外胚層來源的腫瘤的反義治療方法、以及將多種診斷或藥物穿過血腦屏障遞送至腦細胞或神經元細胞或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞。因此，本發明涉及包含選自THRPP麗SPVWP(SEQIDNO:1)和LPWKPLG(SEQIDNO:2)的序列或由選自THRPP麗SPVWP(SEQIDN0:1)和LPWKPLG(SEQIDNO:2)的序列組成的肽或模擬肽。而且，本發明涉及肽或模擬肽與選自與其連接的生物活性部分和診斷部分的部分的偶聯物，所述肽或模擬肽包含選自THRPP麗SPVWP(SEQIDN0:1)和LPWKPLG(SEQIDNO:2)的序列或由選自THRPP麗SPVWP(SEQIDN0:1)和LPWKPLG(SEQIDNO:2)的序列組成。上述偶聯物用作藥物是本發明的一方面。發明詳述本發明提供了用於使診斷部分或生物活性部分靶向感興趣的器官或組織或細胞型的肽或模擬肽，特別是穿過血腦屏障靶向腦細胞或神經元細胞或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞。本發明範圍內的肽至少包含上文確定的SEQIDNO:l或SEQIDNO:2。在一個實施方案中，本發明範圍內的肽包含部分SEQIDNO:l，所述部分SEQIDNO:l與SEQIDNO:1中的11、10、9、8或7個胺基酸等同。在一個實施方案中，本發明範圍內的肽包含SEQIDNO:3-12或由SEQIDNO:3-12組成。在一個實施方案中，本發明範圍內的肽包含SEQIDN0:1的變異體，所述變異體包含SEQIDN0:1中的任何胺基酸被其他任何胺基酸或其衍生物取代的一個取代。在一個實施方案中，本發明範圍內的肽包含SEQIDNO:13-23或由SEQIDNO:13-23組成。肽能夠完全由天然存在的L_胺基酸構建，或能夠包含一種或多種對主鏈和/或側鏈的修飾。可以通過摻入胺基酸模擬物來引入這些修飾，所述胺基酸模擬物顯示出與天然胺基酸的類似性。。上述包含一種或多種胺基酸模擬物的肽序列被稱為模擬肽。在本發明範圍內，胺基酸模擬物包括但不限於P2-禾PP3-胺基酸、I32，2-I32，3和P3，3-二取代胺基酸、a，a-二取代胺基酸、胺基酸的抑制素(statine)衍生物、D-胺基酸、a-羥基酸、a-氨基腈J-烷基胺基酸等。此外，肽的C-末端可以是羧酸或羧胺，或由摻入一種上述胺基酸模擬物生成的其它物質。此外，上述肽可以包含一個或多個天然肽鍵由下述基團取代的取代，所述基團包括但不限於磺醯胺、逆醯胺(retroamide)、含氨氧基的鍵、酯、烷基酮、a，a_二氟酮、a_氟酮、類肽(p印toid)鍵(N_烷基化甘氨醯醯胺鍵)。此外，上述肽可以包含胺基酸側鏈(是指相應天然胺基酸的側鏈)的取代，例如4-氟苯丙氨酸、4_羥賴氨酸、3_氨基脯氨酸、2_硝基酪氨酸、N-烷基組氨酸、或者在13-側鏈碳原子處具有與天然手性相反的手性的P-支鏈胺基酸或P-支鏈胺基酸模擬物(例如別蘇氨酸、別異亮氨酸及其衍生物)。在一個其它實施方案中，以上提及的肽序列可以包含胺基酸相似結構類似物或胺基酸模擬物，例如取代賴氨酸的鳥氨酸、取代苯丙氨酸的高苯丙氨酸或苯基甘氨酸、取代甘氨酸的|3-丙氨酸、取代穀氨酸的焦穀氨酸、取代亮氨酸的正亮氨酸或者甲硫氨酸和/或半胱氨酸的硫氧化形式。本專利包括上述肽的線性或環狀形式，以及它們的逆向、反向和/或逆反類似物。本領域技術人員已知更多的類似變異體，但是本文並未提及這些，這並不限制本發明的範圍。在一個實施方案中，本發明的肽或模擬肽長度至多為30個胺基酸，或者長度至少為25個胺基酸或20個胺基酸或19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8或7個胺基酸。生物活性部分是發揮(直接或間接)生物學功能優選治療功能的化合物，因此優選治療活性化合物。治療活性化合物能夠是本領域已知的任何化合物，並優選為通過調節細胞間過程而具有治療作用的化合物。具有(直接)調節作用或(直接)生物學功能的治療活性化合物能夠為例如任何蛋白、酶抑制劑、寡核苷酸、siRNA、基因、或藥物。能夠使用任何生物活性化合物或治療活性化合物，只要它能夠與本發明的肽或模擬肽連接或能夠使其適於與本發明的肽或模擬肽連接。生物活性化合物或治療活性化合物因此成為本發明化合物中的部分。本領域技術人員能夠鑑定適當的生物活性或治療活性化合物。在一個實施方案中，生物活性化合物是細胞抑制藥，例如抗癌化合物，例如蒽環類(包括柔紅黴素、阿黴素、表柔比星、伊達比星、米託蒽醌)、烷化劑(包括順鉑、卡鉑、奧沙利鉑、苯丁酸氮芥、白消安、美法侖、氮芥、環磷醯胺、異環磷醯胺)、抗代謝物(包括咪唑硫嘌呤、巰嘌呤)、植物鹼和/或萜類(包括長春鹼類和紫杉醇類，例如長春新鹼、長春鹼、長春瑞濱、長春地辛鬼臼毒素、依託泊苷、紫杉醇、多西紫杉醇)、替尼泊苷)、拓樸異構酶抑制劑(包括喜樹鹼、依立替康、拓撲特肯、安吖啶)、更生黴素、達卡巴嗪、吉西他濱、替莫唑胺、mAbs(包括曲妥珠單抗、西妥昔單抗、貝伐單抗、利妥昔單抗)。在一個實施方案中，生物活性化合物或治療活性化合物是包含核酸或其類似物或由核酸或其類似物組成的化合物。這樣的化合物可以被認為通過特別是在蛋白生成水平調節細胞內遺傳機構來發揮(間接)生物學功能，優選治療功能。核酸可以是DNA、RNA或其類似物，諸如包含例如2'-0-甲基-、2'-0-甲氧基乙基-(MOE)和2'-O-烯丙基核苷酸的2'-0-烷基或2'-0-烯基(烯丙基)或2'-0-炔基核苷酸的化合物，鎖定核酸(LNA)，肽核酸(PNA)，乙烯橋聯核酸(ENA)，硫代磷酸修飾的核苷酸例如2'-0-甲氧基乙基硫代磷酸RNA核苷酸或2'-0-甲基硫代磷酸RNA核苷酸，基於嗎啉代的核苷酸及其組合等。包含核酸或其類似物或由核酸或其類似物組成的化合物也可以包含多種核酸或其類似物的混合物。該化合物例如可以是2'0-甲基RNA和RNA混合物的嵌合體、DNA和LNA混合物的嵌合體，等等。該化合物也可以是例如具有末端2'0-甲基RNA核苷酸和內部DNA核苷酸的g即mer。所述化合物可以是基因、質粒、多核苷酸或寡核苷酸、小幹擾RNA等等。所述化合物可以是單鏈或雙鏈。在一個實施方案中，診斷部分與本發明的肽或模擬肽連接。診斷部分可以用於體內或體外診斷目的。常用的成像標記、放射標記或螢光標記例如Cy3、Cy5、Cy5.5等等，或者綠色螢光蛋白(GFP)或可能經由重組表達的其它診斷蛋白可以用作診斷部分。為了製備本發明的偶聯物，通過將化合物與胺基酸或肽偶聯的已知方法，將生物活性部分或診斷部分與本發明的肽或模擬肽進行偶聯。常規方法是將部分與肽或模擬肽中的自由氨基或自由羥基或自由羧酸基團或自由硫醇基連接。常用的結合方法包括硫醇/馬來醯亞胺偶聯、醯胺或酯鍵形成，或混合二硫化物形成。本領域技術人員熟知能夠用於產生所需偶聯的標準化學方法。生物活性部分或診斷部分可以與肽或模擬肽直接偶聯或經由間隔子或連接子肽分子偶聯。生物活性或診斷部分並不必然與本發明的肽或模擬肽共價連接。它還可以通過靜電相互作用軛合。在一個實施方案中，本發明還涉及包含本發明的肽或模擬肽以及連接部分的分子，所述連接部分不是肽，用於將分子與生物活性部分或診斷部分連接。連接部分例如可以是與生物活性多-或寡核苷酸配合的(聚)陽離子基團。這樣的(聚)陽離子基團可以是精胺或聚乙烯亞胺、聚乙二醇、聚-L-賴氨酸等等。如在一個實施方案中提及的，本發明的肽或模擬肽與生物活性部分連接。例如，肽或模擬肽能夠與生物活性或治療性肽連接，並且在一個實施方案中，肽或模擬肽甚至能夠是肽或模擬肽基礎結構的一部分。例如，治療性肽的氨基_或羧基_末端能夠用包含上述肽或由上述肽構成的序列延伸。應當理解，這種用本發明的肽或模擬肽延伸的肽包含在本發明的偶聯物中。製備這樣的肽能夠通過標準胺基酸或肽偶聯步驟實現。在一個實施方案中，本發明的肽或模擬肽與核定位信號(NLS)結合。在一個實施方案中，本發明的偶聯物與NLS結合。在本發明範圍內，NLS作用為引導本發明的偶聯物例如生物活性部分或診斷部分進入細胞核，大概是通過它被胞質核轉運受體識別發揮作用的。NLS可以是本發明的肽或模擬肽的一部分，例如NLS的氨基或羧基末端能夠用包含上述肽或由上述肽組成的序列延伸。NLS還可以在不同於本發明的肽或模擬肽的位置與生物活性部分或診斷部分偶聯。NLS序列在本領域是已知的。通常NLS信號由帶正電荷的賴氨酸和/或精氨酸的(幾個)短序列組成或包含帶正電荷的賴氨酸和/或精氨酸的(幾個)短序列，例如NLS由(K)KKR(K)、(K)KRS(K)、(K)(S)RK(R)(K)組成或包含(K)KKR(K)、(K)KRS(K)、(K)(S)RK(R)(K)。已知的NLS是PKKKRKV、GKKRSKV、KSRKRKL。在一個實施方案中，本發明的肽或模擬肽與選自SEQIDNO:24-39的NLS結合。在一個實施方案中，通過肽或模擬肽與生物活性蛋白的重組表達來製備本發明的偶聯物，在所述偶聯物中，生物活性部分是蛋白或多肽且肽或模擬肽包含在所述蛋白或多肽骨架中。優選製備DNA構建體使得本發明的肽或模擬肽在生物活性肽的末端表達，優選在生物活性肽的C-末端表達。通過重組DNA方法製備這樣的DNA構建體並在適當宿主中表達是本領域技術人員的常規實踐。因此，在一個實施方案中，本發明的偶聯物是本發明的肽與治療活性蛋白(例如抗體)或診斷(例如螢光)蛋白或兩者的融合蛋白，任選地還包含NLS，所述本發明的肽為例如SEQIDN0:1或SEQIDNO:2的肽。這樣的融合蛋白能夠通過適當DNA構建體的表達來製備。在一個實施方案中，本發明涉及本發明的偶聯物用於製備使生物活性部分或診斷部分穿過血腦屏障靶向腦細胞、神經元細胞或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞的藥物的用途。在一個實施方案中，所述藥物用於治療腦病症。在一個實施方案中，所述藥物用於治療神經元或神經肌肉疾病。在一個實施方案中，藥物用於治療神經元或神經外胚層來源的腫瘤。腦病症的實例是涉及神經變性和/或神經炎症事件的那些病症，例如中風、阿爾茨海默病、帕金森病和多發性硬化。本發明中還包括受益於神經營養因子，包括GDNF、BDNF、EPO(紅細胞生成素)和抗炎抗體(例如，Enbrel⑧和Remicade⑧)的(CNS-)的病症的治療。本發明中還包括受益於用於治療遺傳性溶酶體貯積症(Cerezyme、AlduraZymeTM、6Farbrazyme)和龐貝氏症(Myozyme)的酶替代療法的病症的治療。本發明中還包括轉移至腦的腫瘤的治療，例如能夠用治療性抗癌抗體(例如Rituxan⑧、Herceptin和ErbituxTM)和抗癌化合物(例如GleevecTM和Iressa)治療的那些腫瘤。神經元或神經肌肉疾病的實例是強直性肌營養不良(MD)或脊髓性肌萎縮(SMA)、DNA重複疾病，例如但不限於具有聚穀氨醯胺(CAG)重複的編碼區重複疾病亨廷頓病、HRS症候群(HawRiversyndrome)、甘迺迪病/脊髓延髓肌萎縮、脊髓小腦共濟失調，或具有聚丙氨酸(GCG)重複的疾病例如嬰兒期痙攣症候群、鎖骨顱骨發育不全、瞼裂狹小/上瞼下垂/內眥贅皮症候群、手-足-生殖器症候群、並指多指、眼咽型肌營養不良、前腦發育畸形症。本發明治療的基因非編碼區重複的疾病包括三核苷酸重複病症(主要是CTG和/或CAG重複)強直性肌營養不良1型、強直性肌營養不良2型、弗裡德賴希共濟失調、脊髓小腦共濟失調、孤獨症。此外，本發明偶聯物能夠用於治療與脆性位點相關的重複病症，包括多種脆性X-症候群、Jacobsen症候群，以及其它不穩定重複性元件病症，例如肌陣攣性癲癇、面肩肱型肌營養不良和2型糖尿病的某些形式。神經元或神經外胚層來源的腫瘤的實例包括CNS和PNS的所有瘤，例如但不限於神經母細胞瘤、髓母細胞瘤、膠質母細胞瘤、少突神經膠質瘤、少突星形細胞瘤、星形細胞瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、MPNST(惡性外周神經鞘膜瘤)、神經節瘤或神經鞘瘤。神經外胚層來源的腫瘤例如橫紋肌肉瘤、視網膜母細胞瘤、小細胞肺癌、腎上腺嗜鉻細胞瘤、原始PNET(外周神經外胚層瘤)、尤文肉瘤和黑色素瘤。在一個實施方案中，藥物用於治療神經母細胞瘤、髓母細胞瘤、膠質母細胞瘤、少突神經膠質瘤、少突星形細胞瘤、星形細胞瘤、神經纖維瘤、室管膜瘤、MPNST(惡性外周神經鞘膜瘤)、神經節瘤、神經鞘瘤、橫紋肌肉瘤、視網膜母細胞瘤、小細胞肺癌、腎上腺嗜鉻細胞瘤、原始PNET(外周神經外胚層瘤)、尤文肉瘤和黑色素瘤。在一個實施方案中，生物活性部分是與重複伸展序列(r印etitivestretch)互補和/或能夠與其雜交的寡核苷酸，所述重複伸展序列選自(CAG)n、(GCG)n、(CUG)n、(CGG)n和(CCUG)n，其中n選自1-50，優選2_20。選擇的整數n使得在優選實施方案中寡核苷酸包含至少10個至約50個與重複元件互補的連續核苷酸，更優選包含12-45個核苷酸，還更優選包含12-30個核苷酸，最優選包含12-25個與重複伸展序列互補的核苷酸。與轉錄子中的聚穀氨醯胺(CAG)n序列互補的寡核苷酸的用途特別用於診斷、治療和/或預防由HD、HDL2/JPH3、SBMA/AR、SCA1/ATX1、SCA2/ATX2、SCA3/ATX3、SCA6/CACNAIA、SCA7、SCA17或DRPLA人類基因的重複擴增導致的人類病症亨廷頓病、若干形式的脊髓小腦共濟失調或HRS症候群。與轉錄子中的聚丙氨酸(GCG)n序列互補的寡核苷酸的用途特別用於診斷、治療和/或預防由ARX、CBFA1、F0XL2、H0XA13、H0XD13、0PDM/PABP2、TCFBR1或ZIC2人類基因的重複擴增導致的人類病症嬰兒期痙攣症候群、鎖骨顱骨發育不全、瞼裂狹小、手-足-生殖器疾病、並指多指、眼咽型肌營養不良和/或前腦發育畸形症。與轉錄子中的(CUG)n重複序列互補的寡核苷酸的用途特別用於診斷、治療和/或預防分別由匿1/匿PK或SCA8人類基因的重複擴增導致的人類遺傳性病症強直性肌營養不良1型、脊髓小腦共濟失調。與轉錄子中(CCUG)n重複序列互補的寡核苷酸的用途特別用於診斷、治療和/或7預防由DM2/ZNF9基因的重複擴增導致的人類遺傳性病症強直性肌營養不良2型。與轉錄子中(CGG)n重複序列互補的寡核苷酸的用途特別用於診斷、治療和/或預防由FRAXA/FMR1、FRAXE/FMR2和FRAXF/FAM11A基因的重複擴增導致的人類脆性X症候群。與轉錄子中(CCG)n重複序列互補的寡核苷酸的用途特別用於診斷、治療和/或預防由FRA11B/CBL2基因的重複擴增導致的人類遺傳性病症Jacobsen症候群。在一個實施方案中，本發明的肽或模擬肽中的生物活性部分是包含來自下表中的序列的反義寡核苷酸或siRNA。在一個實施方案中，本發明的肽或模擬肽偶聯物用於調控選自下表l的耙基因和/或蛋白(的表達)和/或用於治療，特別是治療選自下表的疾病。tableseeoriginaldocumentpage8tableseeoriginaldocumentpage9tableseeoriginaldocumentpage10本領域技術人員容易認識到，可以對上表中的序列作出變化，同時保留與靶序列的互補性。尿嘧啶核苷酸和胸腺嘧啶核苷酸可互換，同時保留與靶序列的互補性。關鍵是寡核苷酸應該能夠充分有效地與預定靶序列結合。類似地，肌苷(即包含能形成擺動鹼基對的鹼基的核苷酸)能夠置換核苷酸，同時保留互補性。在其它包含(三聯體)核苷酸重複序列的實施方案中，容易認識到，對於有效地結合互補性，寡核苷酸能夠以重複序列的任何核苷酸開始並以重複序列的任何核苷酸結束，並且寡核苷酸不需要是重複序列的精確倍數。例如，上表中的(CUG)n也能夠由(UGC)n或(CTG)n或(CIG)n或(CUG)nCU或(CUG)n(CTG)m(CUG)p(n、m、p是整數)等表示。本發明的一個實施方案是將病毒或病毒顆粒靶向細胞。在本發明的偶聯物中，病毒或病毒顆粒是生物活性部分。在一個實施方案中，本發明的肽或模擬肽與病毒生物活性部分如下連接在病毒基因組中包括肽或模擬肽的DNA/RNA序列使得肽或模擬肽在病毒或病毒顆粒的外表面處表達。產生這樣的表達的重組方法學是本領域技術人員熟知的。因此，肽或模擬肽使病毒或病毒顆粒靶向特定細胞/組織。這對於靶向接種、基因治療、基因替代或病毒夕卜顯子增力口構建體(AAVvectorsexpressingantisensesequencesfusedtoeitherUlorU7small皿clearRNA(表達與Ul或U7小核RNA融合的反義序列的AAV載體);Baughanetal.，2006，Mol.Ther.14,54-62)特別有用。在一個實施方案中，本發明的肽或模擬肽是THRPP麗SPVWP。在另一實施方案中，本發明的肽或模擬肽是LPWKPLG。本發明還包括DNA和其互補DNA序歹lj，以及DNA序列的RNA轉錄子及其互補RNA序列，所述DNA由編碼本發明的肽的序列組成或包含編碼本發明的肽的序列，所述DNA序列由編碼本發明的肽的序列組成或包含編碼本發明的肽的序列。本發明還涉及藥物組合物，其包含本發明的偶聯物和藥物可接受的載體。此外，還發現肽THRPP麗SPVWP能夠用於監測特別是用於識別並測量神經元或神經分化細胞的軸突生長。此外，發現肽THRPP麗SPVWP(SEQIDNO:1)及其某些截短變異體特別是HRPP麗SPVWP(SEQIDNO:3)、THRPP麗S(SEQIDNO:10)和HRPP麗SPVW(SEQIDNO:11)被肌細胞選擇性攝取，很可能還被神經母細胞瘤細胞選擇性攝取。因此，這些可以用於使診斷部分或生物活性部分靶向感興趣的器官或組織或細胞型，特別是肌細胞或者穿過血腦屏障至腦細胞、神經元細胞或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞。因此，本發明另一方面還涉及連接到選自生物活性部分和診斷部分的部分的肽或模擬肽的偶聯物，所述肽或模擬肽包含選自下述的序列或由選自下述的序列組成HRPP麗SPVWP(SEQIDNO:3)、THRPP麗S(SEQIDNO:10)和HRPP麗SPVW(SEQIDNO:11)。在一個實施方案中，生物活性部分選自DNA、RNA或其類似物，例如包含2'_0_烷基特別是2'-0-甲氧基乙基-和2'-0-甲基或2'-0-烯基(烯丙基)或2'-0-炔基核苷酸的化合物、鎖核酸(LNA)、肽核酸(PNA)、乙烯橋聯核酸(ENA)、硫代磷酸修飾的核苷酸、基於嗎啉代的核苷酸及其組合等。偶聯物可以是SEQIDN0:l、3、10或ll的肽與治療活性蛋白和/或診斷蛋白的融合蛋白。偶聯物還可以包含核定位信號。這樣的偶聯物可以有利地用於製備使生物活性部分或診斷部分靶向肌細胞的藥物。因此，藥物可以有利地用於治療與肌細胞相關的病症，包括心臟病。藥物可以例如用於治療肌病、肌營養不良或肌萎縮症或可以用於治療II型糖尿病或肥胖。預期本文涉及的SEQIDNO:3、10和11的肽也可以被神經母細胞瘤細胞選擇性攝取。由於它們被肌細胞和神經母細胞瘤細胞特異性攝取，它們可以有利地用於使生物活性部分或診斷部分靶向神經肌肉細胞以治療神經肌肉疾病。上文已經描述了與SEQIDNO:l和2的肽相關的神經元或神經肌肉疾病的實例。實施例實施例1:神經母細胞瘤和神經分化細胞的體外攝取合成選擇的肽並提供以螢光標記(FAM)，基於體外神經母細胞瘤細胞的攝取進行篩選。N1E-115小鼠神經母細胞瘤細胞用FAM-標記的肽孵育並在不預先固定的情況下用倒置螢光顯微鏡拍照。如照片中所示，僅有肽LPWKPLG和THRPP麗SPVWP被神經母細胞瘤細胞有效攝取。結果表明攝取使細胞質以及細胞核均勻染色。將通過添加神經生長因子(NGF)分化為神經元細胞型的大鼠神經元嗜鉻細胞瘤PC12細胞用FAM-標記的肽THRPP麗SPVWP孵育，並在不預先固定的情況下用倒置螢光顯微鏡拍照。照片顯示了大鼠神經元細胞中攝取的肽。有趣的是，在該實驗中觀察到肽不僅使細胞質和細胞核染色，而且使這些神經元分化PC12細胞中的NGF-誘導的軸突生長有效地染色。實施例2:體內靶向腦細胞肽THRPP麗SPVWP用Cy5螢光標記來標記，並將7nmo1通過靜脈注射入至裸鼠的尾靜脈。使用用於Cy5檢測的濾光器用Maestro成像系統採集圖像。圖1顯示20分鐘後(圖1A)和24小時後(圖IB)肽的攝取。在圖1A和IB的右側，小鼠的亮光圖象與顯示為淺藍染色的檢測到的Cy5標記結合。在圖1A和IB的左側，檢測到的Cy5圖案分別以紅色顯示用於定量。左側的數表明檢測到的Cy5標記的量。將小鼠面朝下平臥並在注射20分鐘後能夠在腦中檢測到清楚的信號。這表明肽THRPP麗SPVWP能夠穿過血腦屏障並隨後被腦細胞攝取。實施例3:在Nl15神經母細胞瘤細胞中通過肽-AON偶聯物下調DCL將肽THRPP麗SPVWP和LPWKPLG與siRNA分子或DNA硫代磷酸反義寡核苷酸(AON)偶聯。該siRNA和A0N已經顯示出能夠在N115神經母細胞瘤細胞中下調DCL(雙皮質素樣)基因(未公布的觀察結果)。N115神經母細胞瘤細胞用500nM偶聯物孵育。48小時後收穫細胞，並通過描述的蛋白質印跡分析(Vreugdenhiletal.，2007，Eur.J.Neurosci.25,635-648)檢測基因沉默。表1中示出了不同濃度的各偶聯物的DCL下調百分比。所有偶聯物均能夠在N115細胞中誘導DCL下調。表1:通過不同濃度肽-AON偶聯物下調N115細胞中的DCLtableseeoriginaldocumentpage12實施例4:THRPP麗SPVWP變異體的攝取選擇肽THRPP麗SPVWP(見表2)的幾種變異體，與螢光標記合成並測試KM109細胞的攝取。測試肽3、7、8、9、10和11。肽HRPP麗SPVWP(SEQIDNO:3)被細胞非常有效地攝取。月太THRPP麗S(SEQIDNO:10)和HRPP麗SPVW(SEQIDNO:11)也被攝取，儘管水平較低。還要測試下表中所示的其他肽被KM109細胞的攝取。此夕卜，以類似方式測試所有肽被神經母細胞瘤細胞的攝取。表2:用於篩選的所選THRPP麗SPVWP的變異體(SEQIDNO:3-23)tableseeoriginaldocumentpage12tableseeoriginaldocumentpage131:nle=正亮氨酸實施例5:全身遞送後THRPP麗SPVWP-AON偶聯物的體內攝取將肽THRPP麗SPVWP與20_mer2'0_甲基硫代磷酸反義寡核苷酸(A0N)M23偶聯。將單獨的AONM23和THRPP麗SPVWP-A0NM23偶聯物靜脈內注射入mdx小鼠。小鼠接受50mg/kg單獨的AON或偶聯物3次注射，間隔為48小時，並在10天後處死。然後，用A0NM23特異性雜交_連接ELISA測量AONM23在四頭肌和在心臟中的水平。在表3中，四頭肌和心肌中AONM23-肽偶聯物的攝取顯示為單獨的AONM23的攝取的百分比(將單獨的AONM23攝取設為100%)。結果表明，四頭肌和心肌中攝入的偶聯物比單獨的M23A0N高40%-50%。表3:全身遞送後四頭肌和心肌中THRPP麗SPVWP-AON偶聯物的攝取，相對於裸AON的攝取(設為100%)tableseeoriginaldocumentpage13權利要求與選自生物活性部分和診斷部分的部分連接的肽或模擬肽的偶聯物，所述肽或模擬肽包含選自LPWKPLG(SEQIDNO2)和THRPPMWSPVWP(SEQIDNO1)的序列或由選自LPWKPLG(SEQIDNO2)和THRPPMWSPVWP(SEQIDNO1)的序列組成。2.如權利要求1所述的偶聯物，其中所述生物活性部分選自DNA、RNA或其類似物，諸如包含2'_0-烷基特別是2'-0-甲氧基乙基-和2'-0-甲基、或2'-O-烯基(烯丙基)或2'-O-炔基核苷酸的化合物，鎖核酸(LNA)，肽核酸(PNA)，乙烯橋聯核酸(ENA)，硫代磷酸修飾的核苷酸，基於嗎啉代的核苷酸及其組合。3.如權利要求1所述的偶聯物，所述偶聯物是SEQIDNO:2或SEQIDNO:1的肽與治療活性蛋白和/或診斷蛋白的融合蛋白。4.如權利要求3所述的偶聯物，其還包含核定位信號。5.權利要求1-4中任一項所述的偶聯物用於製備使生物活性部分或診斷部分穿過血腦屏障靶向腦細胞、神經元細胞或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞的藥物的用途。6.如權利要求5所述的用途，其中所述藥物用於治療腦病症。7.如權利要求5所述的用途，其中所述藥物用於治療神經元或神經肌肉疾病。8.如權利要求5所述的用途，其中所述藥物用於治療神經元或神經外胚層來源的腫瘤。9.分子，其包含肽或模擬肽以及用於將所述分子與生物活性部分或診斷部分連接的連接部分，所述肽或模擬肽包含選自LPWKPLG和THRPP麗SPVWP的序列或由選自LPWKPLG和THRPP麗SPVWP的序列組成，所述連接部分不是肽。10.包含肽或模擬肽的偶聯物用於製備監測神經元細胞中軸突生長的組合物的用途，所述肽或模擬肽包含序列THRPP麗SPVWP或由序列THRPP麗SPVWP組成。全文摘要本發明提供了包含與部分連接的器官、組織或腫瘤細胞歸巢分子的偶聯物。這樣的部分例如能夠是寡核苷酸、小幹擾RNA、基因、病毒、蛋白、藥物或可檢測劑。此外，本發明提供了通過給予患有或疑似患有病變的個體分子或偶聯物以診斷或治療神經元或神經肌肉疾病、或腦病變、或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤的方法，所述分子或偶聯物歸巢於、結合於腦細胞或神經元細胞或者神經元或神經外胚層來源的腫瘤細胞並被其攝取。本發明還提供了識別和測量神經元細胞中軸突生長的方法。文檔編號A61P25/00GK101790385SQ200880101820公開日2010年7月28日申請日期2008年7月11日優先權日2007年7月12日發明者傑勒德·約翰尼斯·普拉滕伯格,皮特拉·萬庫伊克-羅梅恩申請人:普羅森那技術公司