用於抗炎性和過敏性疾病的新的大環內酯類的製作方法

2023-09-19 05:17:30 2

專利名稱：用於抗炎性和過敏性疾病的新的大環內酯類的製作方法
專利說明用於抗炎性和過敏性疾病的新的大環內酯類 本發明涉及新的大環內酯類化合物、所述化合物作為藥物的用途、尤其是用於治療或預防炎性和過敏性疾病的用途、含有所述化合物的藥物組合物以及它們的製備方法。本發明尤其涉及具有主要通過抑制磷酸二酯酶4(PDE4)介導的抗炎活性的大環內酯類化合物，所述的活性使得它們可用於治療和/或預防炎性和過敏性疾病諸如慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、類風溼性關節炎、變應性溼疹或炎性腸病。
環腺苷酸(cAMP)是細胞中的關鍵的第二信使。已知增加環狀AMP的水平可抑制在各種類型的炎性和免疫細胞中的細胞應答，所述的細胞包括淋巴細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞和肺上皮細胞。cAMP的細胞內濃度通過腺苷酸環化酶和環狀核苷酸磷酸二酯酶(PDE)進行調節。PDE是通過將環狀核苷酸cAMP和cGMP水解成AMP和GMP而使其失活的酶的家族。cAMP-特異性酶PDE4是前炎性細胞中佔主導地位的酶。已顯示了PDE4與炎症性過程有關(參見例如Lipworth B.J.，Lancet(2005)365，167頁或Giembycz M.A.，Curr.Opin.Pharmacol.(2005)，5,238頁)。因此，認為PDE4的抑制劑可用於治療和/或預防炎性和過敏性疾病諸如哮喘、慢性支氣管炎、肺氣腫、特應性皮炎、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、銀屑病、類風溼性關節炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、膿毒性休克、潰瘍性結腸炎、局限性迴腸炎、成人呼吸窘迫綜合症和多發性硬化。
文獻中公開了為數眾多的PDE4抑制劑(參見例如J.O.Odingo，Expert.Opin.Ther.Patents，2005，15(7)，773；M.Hendrix，C.Kallus，Methods and Principles in Medicinal Chemistry(2004)，22卷(Chemogenomics in Drug Discovery)，243-288(Wiley-VCH))。許多已知的PDE4抑制劑表現出劑量限制性副作用諸如嘔吐和頭痛。
具有稠合到大環內酯環的11，12-位上的5-元內酯環的紅黴素衍生物已公開在例如WO 02/16380、WO 03/004509、WO 03/042228、WO 03/072588、WO 03/024986、US 2004/0038915和WO 2005067919中。文獻WO02/16380、WO 03/072588、WO 03/024986和US 2004/0038915專門描述了在紅黴素骨架的3位上具有羰基的所謂的酮內酯類。WO 03/042228、WO03/004509和WO 2005067919公開了具有11，12內酯環並且在紅黴素骨架的3位上具有克拉定糖取代基的大環內酯類衍生物。然而，這些衍生物在結構上與以下所公開的本發明的化合物不同。
紅黴素骨架的9位上的羰基的還原也已經記載在例如Tetrahedron，2003，59，7033頁或J.Med.Chem.2003，46，2706頁中。
在上述文獻中所述的所有大環內酯類化合物用於治療細菌感染性疾病已被公開。由紅黴素衍生的大環內酯類也被報導具有抗炎活性(例如Journal of Antimicrobial Chemotherapy，1998，41，增刊B，37-46)。此外，已知由紅黴素衍生的大環內酯類可在炎性細胞中累積。
現已令人驚奇地發現，某些具有稠合到紅黴素骨架上的5元內酯環的大環內酯類化合物選擇性地抑制PDE4，這是對於該類分子而言到目前為止未曾闡述過的新發現的活性。因此這些大環內酯類可用於治療和/或預防炎性和過敏性疾病。本文所述的分子與目前已知的PDE4抑制劑在結構上不同，因此有可能克服上述的副作用。
因此，本發明涉及式I的大環內酯類化合物
其中 R1是基團-Y-X-Q； Y是S、SO或SO2； X是鍵或由氫原子和最多9個選自C、N、O和/或S的原子組成的直鏈基團，其中最多2個原子可以是N並且一個原子可以是O或S，一個碳原子可以以CO基團的形式出現，並且硫原子可以以SO2基團的形式出現，並且兩個相鄰的C原子可以以-CH＝CH-或-C≡C-的形式存在，並且該基團X是未取代的或被-COO-W或-CONH-W所取代； Q是基團-V-A1-L-A2-W，或者，如果X不代表鍵的話，其還可以是-NR6R7； V是二價芳族或雜環基團； W是芳基或雜環基；或者在基團-V-A1-L-A2-W中，其中存在基團A1、L或A2中的至少一個，W還可以是具有由C、N、O和/或S組成的最多5個原子的單價的取代的或未取代的、飽和或不飽和的直鏈基團，其中一個碳原子可以以CO基團的形式存在，一個硫原子可以以SO2基團的形式存在， A1、A2彼此獨立地不存在或者是C1-C4亞烷基； L是-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-、-NH(CO)O-，或者如果A1和/或A2存在的話L還可以不存在； R2是氫，並且 R3是OR4或 R2、R3一起形成C＝O基團； R4在式I中每次出現時獨立地是氫或具有1至6個碳原子的飽和或不飽和的脂族基； R6、R7獨立地選自芳基；芳烷基；雜環基和雜環基烷基；並且R6和R7之一還可以是基團-L-W；並且 ＊表示為(R)或(S)構型的手性中心； 排除在外的是如下式I化合物，其中 R2、R3一起形成C＝O基團， R4是甲基並且 R1是
對於本發明的目的而言，本文所用的術語大環內酯類化合物應理解成包括該化合物的單獨的立體異構形式以及非對映異構體混合物。
此外，本文所用的術語大環內酯類化合物在本發明內應理解成包括式(I)化合物的可藥用鹽和N-氧化物以及在體內可裂解的酯。
本發明化合物對人的磷酸二酯酶(PDE)、尤其是對PDE4表現出明顯的抑制活性，已顯示PDE4與炎性過程有關(參見例如Lipworth B.J.，Lancet(2005)365，167頁或Giembycz M.A.，Curr.Opin.Pharmacol.(2005)，5,238頁)。這在實施例中進行了證實。因此，本發明化合物用於治療通過抑制人的磷酸二酯酶、尤其是磷酸二酯酶4可改善或減輕的人的疾病或病症的用途是本發明的另一個方面。本發明的化合物基於該活性尤其可用於預防和/或治療炎性疾病以及用於治療和/或預防過敏性疾病。
這些疾病的重要實例是慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、類風溼性關節炎、特應性皮炎或炎性腸病。
對於本發明的目的而言，術語「芳族基團」和「芳基」是指具有一個或多個優選6-元的母核並且具有6至14個碳原子的芳族基團。其實例尤其是苯基、萘基、蒽基和菲基。這些基團可進一步被1、2、3或4個選自例如下列的取代基所取代烷基諸如以下所定義的烷基、低級烷氧基諸如C1-C4烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基或正丁氧基、C3-C7環烷基氧基或C3-C7環烷基-C1-C4烷氧基如環戊氧基、環丙基甲氧基、滷素諸如以下所定義的滷素、滷素取代的烷基諸如二氟甲基或三氟甲基、三氯乙基、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、巰基、羥基、氨基甲醯基、羧基、氧代基團。在一個以上的取代基連接到芳基上的情況下，這些取代基可彼此相同或不同。還包括在本發明範圍內的是具體基團的不同的可能的區域異構體，例如「二甲氧基-苯基」是指兩個甲氧基取代基可連接到苯環的2，3-位、2，4-位、2，5-位、2，6-位、3，4-位、3，5-位和3，6-位上。
本文所用的術語「雜環基團」或「雜環基」是指不飽和或飽和、未取代的或取代的5-至10-元(單-或二環)雜環環系，其含有至少一個選自硫、氧、和/或優選氮的雜原子。雜環取代基的實例包括但不限於例如下列基團哌啶基、嗎啉基、2-、3-或4-吡啶基、吡咯烷基、哌嗪基、1H-吡唑-1-基、1H-咪唑-1-基、1H-咪唑-2-基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吡唑基、三嗪基、噻唑基、噻二唑基、噁二唑基、三唑基，例如1H-[1，2，4]-三唑-1-基、1H-四唑基、2H-四唑基；噻吩基、呋喃基(2-呋喃基或3-呋喃基)、1H-氮雜

基、四氫噻吩基、3H-1，2，3-氧雜噻唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，5-氧雜二硫雜環戊二烯基、異噁唑基、異噻唑基、4H-1，2，4-噁二嗪基、1，2，5-噁噻嗪基、1，2，3，5-噁噻二嗪基、1，3，4-硫雜二氮雜

基、1，2，5，6-氧雜三氮雜

基、噁唑烷基、四氫噻吩基等，或稠合的雜環環系諸如喹啉基例如喹啉-8-基、喹啉-5-基、喹啉-2-基、喹啉-6-基、喹啉-3-基、異喹啉基(6-異喹啉基)、喹唑啉基、1H-苯並三唑基、1H-咪唑並[4，5-c]吡啶基、5H-咪唑並[4，5-c]吡啶基、1H-咪唑並[4，5-b]吡啶-1-基、3H-咪唑並[4，5-b]吡啶-3-基、1H-吡唑並[3，4-b]吡啶基、1，2，3，4-四氫-喹啉基、1，2，3，4-四氫-異喹啉基、噻吩並[2，3-b]吡啶基、苯並噻唑基(例如2-苯並噻唑基)、1H-苯並咪唑基、1H-吲哚基、1，2，3，4-四氫喹啉基、嘌呤基、例如9H-嘌呤-9-基、6-氨基-9H-嘌呤-9-基、2，6-二氨基-9H-嘌呤-9-基、1H-嘌呤-6-基、1H-2，3-二氫吲哚-1-基、2，1，3-苯並噁二唑-5-基、2，1，3-苯並噁二唑-4-基、1，3-苯並間二氧雜環戊烯-5-基、2，3-苯並噁唑烷基、1，2-二氫-噁唑並[5，4-c]吡啶基、6-喹喔啉基、2-苯並[b]噻吩-3-基、3，4-二氫-1H-2-氧代-喹啉-6-基。
雜環基可進一步被一個或多個取代基所取代。所述的取代基包括例如烷基諸如下文所定義的烷基、低級烷氧基諸如C1-C4烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基或正丁氧基、C3-C7環烷基氧基或C3-C7環烷基-C1-C4烷氧基如環戊氧基、環丙基甲氧基、滷素諸如下文所定義的滷素、滷素取代的烷基諸如三氟甲基、三氯乙基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、巰基、羥基、氨基甲醯基、羧基、氧代基團。在一個以上的取代基連接到雜環基上的情況下，這些取代基可彼此相同或不同。不同的區域異構體也包括在本定義的範圍內，例如「二甲基吡啶基」是指兩個甲基取代基可在所有的化學上可能的位置上連接到吡啶基上。例如兩個甲基取代基可連接到2-吡啶基上的3，4-位、4，5-位、5，6-位、3，5-位、3，6-位和4，6-位上。兩個甲基取代基可連接到3-吡啶基上的2，4-位、2，5-位、2，6-位、4，5-位、4，6-位和5，6-位上。兩個甲基取代基可連接到4-吡啶基上的2，3-位、2，5-位、2，6-位和3，5-位上。
對雜環基而言特別優選的取代基是烷基、烷氧基、氧代、滷素、氨基、烷基氨基或二烷基氨基，其中烷基和烷氧基如上文所定義。
優選的取代的雜環的實例是1H-嘧啶-2，4-二酮、1H，3H-嘧啶-2，4-二酮-5-甲基、1H-嘧啶-4-氨基-2-酮、6-氨基-9H-嘌呤、6-二甲基氨基-9H-嘌呤、2，6-二氨基-9H-嘌呤、6-氨基-8-[(3-吡啶基甲基)氨基]-9H-嘌呤、4-氨基-咪唑並[4，5-c]吡啶、4-甲氧基-咪唑並[4，5-c]吡啶、1-乙基-吡唑並[3，4-b]吡啶、4-苯基-1H-吡唑、3-(吡啶-3-基)-1H-吡唑、3-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基、3-(吡啶-3-基)-1H-咪唑-1-基、3-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-1-基、3-(吡啶-3-基)-1H-[1，2，4]三唑、3-(吡啶-4-基)-1H-[1，2，4]三唑和2-氧代-1，2，3，4-四氫-喹啉。
本文所用的術語「烷基」是指優選具有1至6個碳原子的支鏈或優選直鏈的飽和烴基。所述的基團是例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、戊基、己基等。所述烷基可進一步被一個或多個選自例如下列的取代基所取代低級烷氧基諸如C1-C4烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基或正丁氧基、C3-C7環烷基氧基或C3-C7環烷基-C1-C4烷氧基如環戊基氧基、環丙基甲氧基、滷素諸如以下所定義的滷素、滷素取代的烷基諸如二氟甲基或三氟甲基、三氯乙基、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、巰基、羥基、氨基甲醯基、羧基或氧代。一個以上的取代基可彼此相同或不同。
本文所用的術語脂族基是指優選具有1至6個碳原子的支鏈或優選直鏈的飽和烴基，其可以是飽和或不飽和的。實例包括關於烷基所述的那些基團、乙烯基、正丙烯基、正丙炔基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基等。
本文所用的術語「滷素」是指氟、氯、溴或碘。
在組合詞「雜環基烷基」和「芳烷基」中，單一部分的「雜環基」、「芳」(芳基)和「烷基」具有以上所示的含義。
本文所用的術語C1-C4亞烷基是指例如亞甲基、亞乙基、亞正丙基和亞正丁基。
R1是式-Y-X-Q的基團。
在該式中，Y通常可以是S、SO或SO2；優選的是S和SO2，尤其是S。
X是鍵；即，是「不存在」的，或者是由氫原子和最多9個選自C、N、O和/或S的原子組成的直鏈基團，其中最多2個原子可以是N並且一個原子可以是O或S、一個碳原子可以CO基團的形式存在，並且硫原子可以SO2基團的形式存在。兩個相鄰的C原子還可以以-CH＝CH-或-C＝C-的形式存在。基團X可以是未取代的或被式-COO-W或-CONH-W的取代基所取代，其中W具有本文所定義的含義。正如已指明的那樣，具有最多9個原子的間隔基團X可帶有另外的氫原子以使C原子飽和從而形成亞甲基，或使N原子飽和以形成氨基。優選該間隔基團由2至5個選自C、N、O和/或S的原子所組成。
優選的基團X是(CH2)n、(CH2)mOCH2、(CH2)2NCH3(CH2)2、CH2CH2NH、(CH2)pCOO、(CH2)pCONH或HN(CH2)p，其中n和p是1-3並且m是0或者優選1-3。
特別優選的基團X是乙基和丙基。
Y和X的適當組合是例如下列基團 對於Y＝S，X是乙基、丙基、CH2CO、CH2COCH2、CH2CONR、CH2CONRCH2、CH2CONRCH2CH2、CH2CH2CONR、CH2CH2CONRCH2、CH2CH2NR、CH2CH2NRCO、CH2CH2NRSO2、CH2CH2NRCOO、CH2CH2OCH2、CH2SO2NR、CH2SO2NRCH2、CH2CH2OCONR、CH2CH＝CH或CH2C≡C；其中在以上表達式中的R是氫或甲基。
在式I中，Q是式-V-A1-L-A2-W的基團。或者，如果X不代表鍵的話，式I中的Q還可以是-NR6R7。
V可以是二價芳族或雜環基團，例如以上具體提到的基團之一。
在另一組優選的式I化合物中，V是下式的二價基團
其中
是亞苯基環或x-元飽和或不飽和的二價雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8、優選5或6，R8和R9獨立地選自氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C7環烷基氧基、C3-C7環烷基-C1-C4烷氧基、滷素、滷素-取代的C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、C1-C4烷硫基、巰基、羥基、氨基甲醯基、羧基、氧代基團；或芳基或雜環基，它們是未取代的或被一個或多個以上所述的除芳基或雜環基之外的取代基所取代，或者當兩個取代基R8和R9位於環

的相鄰碳原子上時，這兩個取代基可以與所述的相鄰碳原子一起形成5-或6-元芳環或x-元飽和或不飽和雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8，優選5或6，其中V可以總共具有1至4個如對R8和R9定義的這類取代基，並且自由價可位於基團V的一個或兩個環上。
V的特別優選的含義包括
式I中的W可以是以上所述的芳基或雜環基。
在基團-V-A1-L-A2-W中，其中至少一個基團A1；L或A2是存在的，W還可以是單價的取代的或未取代的、飽和或不飽和的直鏈基團，該基團具有最多5個由C、N、O和/或S組成的原子，其中一個碳可以以CO基團的形式存在，一個硫原子可以以SO2基團的形式存在。在這種情況下，W還可以帶有另外的氫原子以飽和C或N原子，正如以上對基團X所述的那樣。
在式I的優選實施方案中，W代表下式的基團
其中
是苯基環或x-元飽和或不飽和的雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8、優選5或6，R10和R11獨立地選自氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C7環烷基氧基、C3-C7環烷基-C1-C4烷氧基、滷素、滷素-取代的C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、C1-C4烷硫基、巰基、羥基、氨基甲醯基、羧基和氧代基團；或當兩個取代基R10和R11位於環

的相鄰碳原子上時，這兩個取代基可以與所述的相鄰碳原子一起形成5-或6-元芳環或x-元飽和或不飽和雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8，優選5或6，其中W可以總共具有1至4個如對R10和R11所定義的這類取代基，並且自由價可位於基團W的任何一個環上。
W的特別優選的實例是下列基團
W的其它具體實例包括

或
其中R12是氫或C1-C4烷基，尤其是甲基。
在基團-V-A1-L-A2-W中，基團A1和A2通常彼此獨立地不存在或者是C1-C4亞烷基。L通常選自-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-、和-NH(CO)O-，但是，如果A1和/或A2存在的話L還可以是不存在的。
在本發明的大環內酯類化合物的優選實例中，A1和A2彼此獨立地不存在或代表C1-C2亞烷基；並且L選自-NH-、-(CO)NH-和-NH(CO)-；或者是不存在的。
特別優選的是如下式(I)化合物，其中 A1、A2彼此獨立地不存在或者是C1-C2亞烷基； L是-NH-、-(CO)NH-或-NH(CO)-； V是下式的二價基團

並且， W是下式的基團
還優選的是本發明化合物，尤其是前面的段落中提到的本發明化合物，其中 Y是-S-，並且 X是-CH2-CH2-CH2-，或優選的，是通過NH基團或-CH2-CH2-連接到基團Q上的-CH2-CH2-NH-，最優選-CH2-CH2-。
如果X在式I中不代表鍵，則Q還可以是-NR6R7。在這種情況下，R6、R7可獨立地選自芳基、芳烷基、雜環基和雜環基烷基，例如如以上所解釋的那樣，並且R6和R7之一還可以是基團-L-W；其中L和W具有以上所述的含義。
本發明的相應的大環內酯類化合物的優選實例是其中的Q是基團-NR6R7並且具有下列結構式之一的式I化合物
如果式I中的R2代表氫原子、尤其是如果R3同時是羥基或乙烯基氧基的話，也是優選的。
還優選的是其中的R2和R3一起形成C＝O基團的式I化合物。
還優選的是其中式I中的R4是氫或更優選甲基的本發明化合物。
本發明化合物的某些具體實例是以下化合物
以及下式的化合物
和下式的化合物
最優選的化合物是下列化合物
如上所述，如果需要的話，式I的大環內酯類化合物還可以以可藥用酸加成鹽的形式存在和使用。不僅考慮與無機酸形成的鹽，而且要考慮與有機酸形成的鹽。鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、檸檬酸鹽、乙酸鹽、三氟乙酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽等是所述鹽的實例。
此外，式I化合物還可以是在體內可裂解的酯的形式，例如與糖部分的2′-羥基形成的酯。適當的酯通常是乙酸酯、新戊酸酯、酒石酸酯、馬來酸酯、琥珀酸酯等。
包括其可藥用酸加成鹽或其在體內可裂解的酯在內的本發明化合物可用於預防和/或治療疾病諸如慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、類風溼性關節炎、特應性皮炎或炎性腸病。
本發明化合物及其可藥用酸加成鹽或其在體內可裂解的酯可用於預防和/或治療疾病諸如慢性支氣管炎、肺氣腫、蕁麻疹、過敏性鼻炎、過敏性結膜炎、銀屑病、膿毒性休克、成人呼吸窘迫綜合症和多發性硬化。
本發明化合物可用作藥物。它們具有良好的口服吸收性。本發明的另一個實施方案因此是用於治療和預防感染性疾病的包含式I化合物、其可藥用酸加成鹽、N-氧化物或在體內可裂解的酯的藥物，例如以用於腸內(口服)給藥的藥物製劑的形式。本發明的產物可例如以如片劑、薄膜衣片劑、糖衣片劑、硬和軟膠囊劑、溶液劑、乳劑或混懸劑的形式經口給藥，或以如栓劑的形式直腸給藥，或例如通過注射來胃腸外給藥，或經鼻給藥，或通過吸入或透皮給藥，或例如通過在局部施用來局部給藥，優選將所述化合物局部或口服給藥。
含這些化合物的藥物組合物可利用本領域技術人員熟悉的常規方法製得，例如通過將各組分與適當的、無毒的、惰性、治療上相容的固體或液體載體物質和如果需要的話常用的藥用輔料一起混合成劑型來製得。
應理解的是最終將該化合物製成適於口服、胃腸外或局部劑型的組合物。本發明的組合物可含有作為任選組分的任何的在藥物製劑的製備中通常使用的各種輔料。因此，例如，在將該組合物配製成所需的口服劑型的過程中，可以使用作為任選的組分的填充劑諸如微晶纖維素、磷酸鈣或乳糖；崩解劑諸如澱粉、交聯的羧甲基纖維素鈉或交聯的聚乙烯吡咯烷酮；和潤滑劑諸如滑石、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣等。然而，應該充分理解的是本文所述的任選組分僅通過例子的形式給出並且本發明不限於其所用的這些例子。本領域已知的其它輔料也可用於本發明。
適當的載體物質不僅可以是無機的載體物質，而且也可以是有機的載體物質。因此，對於片劑、薄膜衣片劑、糖衣片劑和硬膠囊劑來說，其中可使用例如乳糖、玉米澱粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽。用於軟膠囊劑的適宜載體是例如植物油、石蠟、脂肪和半固體和液體多元醇(取決於活性物質的性質)。用於製備溶液劑和糖漿劑的適宜載體物質是例如水、醇、多元醇、蔗糖、轉化糖和葡萄糖。用於栓劑的適宜載體是例如天然的或硬化油、石蠟、脂肪和半液體或液體多元醇。
作為藥用輔料，涉及到的是常規的防腐劑、增溶劑、穩定劑、潤溼劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、矯味劑、用於調節滲透壓的鹽、緩衝劑、包衣材料和抗氧化劑。
式I化合物及其酸加成鹽、N-氧化物或其在體內可裂解的酯可用於胃腸外給藥，對於該目的而言，優選將其製成需要用常規物質如水或等滲的常規鹽溶液稀釋的冷凍乾燥物或乾粉形式的注射用製劑。
式I化合物及其酸加成鹽、N-氧化物或其在體內可裂解的酯可用於局部給藥，對於該目的而言，優選將其製成軟膏劑、霜劑或凝膠劑形式的製劑。
對於哺乳動物、人類和非人類的炎性和過敏性疾病的治療和/或預防來說，常用的日劑量是約10mg至約2000mg、特別是約50mg至約1000mg，本領域的普通技術人員知道，該劑量還取決於哺乳動物的年齡、狀況或正在預防或治療的疾病的種類。日劑量可以以單一劑量的形式給藥，或可分成數次劑量。可預期的平均的單一劑量約為10mg、100mg、250mg、500mg和1000mg。
式I化合物的製備按照流程1-5進行。

流程1 本發明化合物可用紅黴素A、克拉黴素或任何其它6-O-烷基-紅黴素A、6-O-鏈烯基-紅黴素A或6-O-炔基-紅黴素A作為原料製得。其中的Rp1和Rp2是H、乙醯基、苯甲醯基或任何其它適當的羥基保護基的式II、III和IV化合物可通過本領域已知的方法製得(流程1)。為了得到其中的Rp1和Rp2如以上所定義的式II化合物，將原料大環內酯的2』-和4」-羥基相繼或同時通過與適當的酸酐或醯氯反應來保護，如例如Baker等人，J.Org.Chem.1988，53，2340-2345和Kashimura等人，J.Antibiotics，2001，54，664-678所描述的那樣。然後將式II化合物例如按照與Baker等人，J.Org.Chem.1988，53，2340-2345所述的相類似的方法轉化成式IV化合物。
將式IV化合物的12位上的羥基通過用2-氯乙酸、DCC和DMAP或用2-氯乙酸酐、吡啶、DMAP在氯化溶劑諸如二氯甲烷中處理而酯化。然後將中間體V用適當的親核試劑R1H在丙酮中在鹼諸如DBU的存在下處理得到式VI化合物，其中R1、Rp1和Rp2如以上所定義。根據R1的性質，式VI化合物還可通過將式IV化合物與適當的羧酸(R1CH2COOH)、DCC和DMAP在氯化溶劑諸如二氯甲烷中反應來合成，以得到式VI化合物。將式VI化合物用鹼金屬鹼諸如NaH或叔丁醇鉀或LDA在非質子溶劑諸如DMF或THF中處理得到式VII化合物，為各種比率的非對映異構體的混合物(流程1)。
將其中的R1、Rp1和Rp2如以上所定義的式VII化合物在2′-位上用甲醇在20℃至60℃下脫保護2-5天以得到式VIII化合物(流程2)。通過將該化合物用DBU在回流甲醇中處理3至12小時(J.Antibiotics，2001，54(8)，664)或通過用胍/硝酸胍在甲醇/二氯甲烷中處理(TetrahedronLetters 1997，38(9)，1627)或用碳酸鉀在甲醇中或用MeONa的甲醇混合物、優選用DBU在回流甲醇中處理5至7小時來將4」-羥基脫保護以得到式Ia化合物。
另外還可將式VII化合物用以上關於」-羥基的脫保護所述的方法之一同時在2』-和4」-位上脫保護以得到式Ia化合物(流程2)。

流程2 在其中R1是S-Rp3且Rp3是硫保護基例如苄基、4-甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基或4-硝基-苄基、優選4-甲氧基苄基的情況下，將中間體VIIa在分子篩的存在下按照類似於WO03/072588所述的方法轉化成二硫化物衍生物IX，其中Rp1和Rp2如以上所定義，並且Rp4是例如3-硝基-2-吡啶基或甲基。
將式IX化合物用還原劑諸如三烷基膦、優選三丁基膦或三芳基膦、優選三苯基膦在溶劑諸如含水的丙酮、含水的二甲基甲醯胺、含水的二噁烷或含水的四氫呋喃、優選含水的二甲基甲醯胺中在0℃至60℃、優選在室溫下處理1分鐘至1小時、優選15分鐘以得到化合物X。將化合物X、優選未經分離的化合物X直接在相同的溶劑體系中用式Q-X-Lg的化合物處理，其中Q和X如前所定義，Lg是離去基團，例如氯、溴、碘、甲磺醯基氧基、對甲苯磺醯基氧基、三氟甲磺醯基氧基，或在X代表羰基或磺醯基的情況下為乙烯基，從而得到式VII化合物。反應優選在鹼諸如鹼金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽、例如碳酸鉀、碳酸銫或碳酸氫鈉或有機鹼例如三乙胺、N-乙基N，N-二異丙基胺、1，8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯或1，5-二氮雜二環[4.3.0]壬-5-烯、優選1，8-二氮雜二環[5.4.0]十一-7-烯的存在下在0℃至50℃、優選20℃下進行。將催化量的碘鹽、優選碘化鈉加入到反應混合物中可能是有利的(流程3)。

流程3 或者，其中的R2和R3一起形成基團C＝O並且R4具有以上所述的含義並且R1是基團-Y-X-Q、其中X和Q具有以上所述的相同含義並且Y是S的式I化合物還可通過以下所述的方法製得 a)將具有下式的大環內酯類化合物
按照本身已知的方式轉化成式IV化合物，例如按照以上關於流程1所述的方法轉化，
其中Rp1和Rp2均是羥基保護基並且R4如以上所定義， b1)將所述的式IV化合物在活化的氯乙酸衍生物例如二(氯乙酸)酸酐的存在下按照本身已知的方式轉化成式V化合物，例如按照以上流程1中所述的方法轉化，
其中Rp1和Rp2以及R4具有以上所述的含義； b2)將所述的式V化合物進一步與其中M代表鹼金屬原子並且X和Q具有以上所述的含義的式MS-X-Q化合物反應以形成式VI化合物
其中R1是-S-X-Q並且X、Q、Rp1和Rp2以及R4具有以上所述的含義， c)將所述的式VI化合物在非質子溶劑中與鹼金屬鹼反應以形成式VII化合物
其中R1與Rp1和Rp2以及R4具有以上所述的含義，然後 同時或相繼地除去羥基保護基Rp1和Rp2以形成式I化合物。
如果需要的話，這些化合物可按照本身已知的方式例如按照流程5所述轉化成式I化合物，其中R2是氫並且R3選自羥基或-O-(脂族基)，所述的脂族基代表具有1至6個碳原子的飽和或不飽和的脂族基。
式Ic化合物例如可通過將式Ib化合物(其中的Y＝S的式I化合物)用2至2.5當量3-氯過苯甲酸(mCPBA)和4至5當量NaHCO3在溶劑諸如二氯甲烷中在0℃至室溫下優選0℃下處理1小時至3小時來製得。將在反應過程中在糖殘基的二甲基氨基上形成的N-氧化物在後處理時通過將有機相用焦亞硫酸鈉水溶液在室溫下處理5分鐘至24小時來還原，以得到所需的式Ic化合物，為非對映異構體混合物。或者，如果適當的話，將N-氧化物按照標準方法通過催化加氫還原。式Ic化合物還可按照以上所述的方法但是在室溫下處理1至48小時而進一步氧化，在還原N-氧化物之後得到式Id化合物。化合物Id還可從式Ib化合物通過利用3.5至10當量氧化劑和7至20當量NaHCO3在0℃至室溫下處理5至48小時、然後通過以上所述的方法進行後處理而一步得到(流程4)。
在其中的Q進一步被對氧化敏感的取代基如氨基取代的情況下，在將硫化物Ia進行氧化之前可能需要對這些取代基進行保護。可將本領域通常已知的適當保護基按照T.W.Green等，Protective Groups in OrganicSynthesis，John Wiley & Sons，1999所述的標準方法引入。氧化後，可將保護基按照T.W.Green等人所述的標準方法除去。

流程4
流程5 式XI化合物例如可通過將式VII化合物用還原劑諸如NaBH4在溶劑諸如甲醇、乙醇、異丙醇、THF、THF/水或乙醚中在0℃至室溫、優選0℃下處理1小時至24小時來製得。然後將式XI化合物按照以上所述的方法脫保護以得到式Ie化合物。另外，式Ie化合物還可用式Ia化合物作為原料按照關於式VII化合物的還原所述的方法製得。在其中的Rp1是乙醯基的情況下，保護基可能會在還原過程中在溶劑諸如甲醇中被部分地除去，這需要在將新形成的羥基烷基化之前重新保護2′-羥基。
將式XI化合物的羥基按照有關羥基的烷基化的已知的標準方法進行烷基化以得到式XII化合物。在其中的Q進一步被在用於將XI轉化成XII的條件下會發生烷基化的取代基所取代的情況下，在將XI化合物進行烷基化之前可能需要對這些取代基進行保護。將本領域通常已知的適當保護基按照T.W.Green等，Protective Groups in Organic Synthesis，JohnWiley & Sons，1999所述的標準方法引入。烷基化後，將保護基按照T.W.Green等人所述的標準方法除去。將式XII化合物按照以上所述的方法脫保護以得到式If化合物。
給出下列實施例以進一步解釋說明本發明，並且不能將其解釋為以任何方式對本發明範圍的限制。
A.實施例 一般注釋MS譜利用(A)帶有Masslynx軟體的Micromass Waters ZQ系統和(B)利用配備有Waters Cap-LC的Q-Tof-Ultima(沃特世公司)進行測定。對於精確質量的測定，使用納升鎖定質量ESI源。給出的精確質量精確到小數點後四位。分析型HPLC系統Aa儀器Varian Prostar 210；柱Inertsil ODS-3V、5μm、250 x 4mm；流速1.0mL/min；檢測254nm；流動相A水；流動相B乙腈；梯度0-5分鐘，恆定5％乙腈；5-25分鐘，線性地從5％至95％乙腈。系統Ba儀器Varian Prostar 210；柱Inertsil ODS-3V、5μm、250 x 4mm；流速1.0mL/min；檢測254nm；柱溫35℃；流動相A水+0.1％ HCOOH；流動相B乙腈+0.1％ HCOOH；梯度0-5分鐘恆定5％ B；5-20分鐘，線性地從5％至95％ B。終產物的HPLC純化利用下列系統完成系統Ap柱YMC ODS-AQ、120A、5μm、50 x 20mm；預柱YMC ODS-AQ、120A、5μm、10 x 20mm；流速30ml/min；進樣500μl；檢測ELSD；流動相A水+0.1％ HCOOH；流動相B乙腈；梯度線性地從10至95％乙腈，4分鐘。系統Bp柱Purospher STAR RP8e、5μm、125 x 25mm；流速25mL/min；檢測254nm；流動相A水25mM甲酸銨；流動相B甲醇；梯度線性地從60％至90％甲醇，10分鐘。系統Cp柱Purospher STAR RP8e、5μm、125 x 25mm；流速25mL/min；檢測254nm；流動相A水25mM甲酸銨；流動相B乙腈；梯度線性地從20％至50％乙腈，10分鐘。
縮寫詞HPLC高效液相色譜；DMSO二甲基亞碸；DBU二氮雜二環十一烷；DCM二氯甲烷；DIPEA二異丙基乙基胺(Huenig’s鹼)；DMF二甲基甲醯胺；THF四氫呋喃；DCC二環己基碳二亞胺；DMAP4-二甲基氨基吡啶；EDC·HClN-(3-二甲基氨基丙基)-N』-乙基碳二亞胺鹽酸鹽；HOBt1-羥基-苯並三唑；HATU2-(1H-氮雜苯並三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽；mCPBA間氯過苯甲酸；KOtBu叔丁醇鉀；TBDMSCl叔丁基-二甲基-甲矽烷基氯；TBAF氟化四丁基銨；MS質譜；NMR核磁共振；ESI電噴霧離子化。



1星號(＊)表示R1與分子的其餘部分相連接的點 2在R2和R3的合併欄中的「＝O」是指R2和R3與它們所連接的碳一起形成羰基。
實施例1 其中的R1是[2-[6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-1)的製備 A]2-(6-氨基-8-溴-嘌呤-9-基)乙醇的製備 向10g 2-(6-氨基-嘌呤-9-基)乙醇的200ml 0.5M AcONa/AcOH緩衝液pH 4中加入4ml Br2。將形成的混合物在室溫下攪拌8小時。將沉澱析出的產物分離，用水洗滌並用乙醇結晶得到6.13g(43％)所需化合物。
B]2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙炔基)-嘌呤-9-基)乙醇的製備 向258mg 2-(6-氨基-8-溴-嘌呤-9-基)乙醇的Et3N和DMF的混合物的溶液中在氬氣氛下加入35mg Pd(PPh)3Cl2、19mg CuI和150mg 3-乙炔基吡啶。將混合物在氬氣下在60℃下攪拌3小時，然後在室溫下攪拌過夜。將沉澱物分離，用水和熱乙醇洗滌並乾燥得到150mg(53％)所需產物。
C]2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基)乙醇的製備 向1.1g 2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙炔基)-嘌呤-9-基)乙醇的400ml甲醇懸浮液中加入2.0g阮內鎳並將混合物在80℃下氫化(4個大氣壓)6小時。反應完成後除去催化劑並蒸發溶劑。將粗產物通過矽膠柱色譜純化(CHCl3:MeOH 9:1)得到0.45g(41％)所需產物。
D]6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤的製備 將0.45g 2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基)乙醇冷卻至-20℃並加入6ml SOCl2。將溫度逐漸升至50℃並將混合物在該溫度下攪拌12小時。蒸發過量的SOCl2並將殘餘物溶於二氯甲烷，用飽和NaHCO3水溶液洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(CHCl3:MeOH 50:1)得到40mg(8％)所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)8.65(s，1H)；8.4(s，1H)；8.1(s，1H)；7.75(d，1H)；7.30(m，1H)；6.95(s，2H，-NH2)；4.45(t，2H)；4.0(t，2H)。
E]其中的Rp1和Rp2是乙醯基並且R4是甲基的式II化合物(II-1)的製備 向25g(33.4mmol)克拉黴素和1.63g(13.4mmol)DMAP的50mlDCM溶液中一次性加入11ml(117mmol)乙酸酐並將混合物在室溫下攪拌20小時。將反應混合物倒入足夠的0.2N NaOH中以使得pH值為8-9，然後萃取。將合併的有機層用水和鹽水洗滌，用MgSO4乾燥並減壓蒸發。將粗產物用熱乙酸乙酯結晶得到24.3g(87％)無色結晶。MS(ESI)832.5[MH]+。
F]其中的Rp1和Rp2是乙醯基並且R4是甲基的式III化合物(III-1)的製備 將24.3g(29.2mmol)2』，4」-二-O-乙醯基-6-O-甲基紅黴素A(II-1)在-45℃下在氬氣下溶於500ml THF並在15分鐘內滴加29.2ml1M二(三甲基甲矽烷基)氨基鈉的四氫呋喃溶液(29.2mmol)。在-45℃下20分鐘後在5分鐘內分三批加入16.24g(100.1mmol)羰基二咪唑。將反應混合物在-45℃下攪拌30分鐘，然後在15分鐘內升溫至0℃並在0℃下保持2.5小時。
將反應混合物用飽和NaHCO3水溶液和水(1:1)處理並用乙酸乙酯萃取2次。將合併的有機層用10％氨水溶液洗滌兩次，然後用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥並減壓蒸發得到23.57g(94％)無色固體。MS(ESI)858.6[MH]+。
G]其中的Rp1和Rp2是乙醯基並且R4是甲基的式IV化合物(IV-1)的製備 將溶於500ml甲苯的23.5g(27.47mmol)化合物III-1和10.25ml(68.7mmol)DBU在回流溫度下加熱1.5小時，冷卻至室溫並倒入0.5MNaH2PO4水溶液中。將水層用乙酸乙酯萃取兩次。將合併的有機萃取液用0.5M NaH2PO4、鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並濃縮得到18.43g(86％)無色固體。MS(ESI)814.5[MH]+。
H]其中的Rp1和Rp2是乙醯基並且R4是甲基的式V化合物(V-1)的製備 向64.0g(78.6mmol)化合物IV-1、3.84g(31.4mmol)4-二甲基氨基吡啶和12.5g吡啶的600ml二氯甲烷溶液中在氮氣下於2小時內滴加26.9g氯乙酸酐(157.3mmol)的250ml二氯甲烷溶液。將溶液在室溫下攪拌3.5小時。將反應混合物倒入0.2N NaOH中以使pH值為8-9並用二氯甲烷萃取兩次。將合併的有機層依次用水、兩次0.5N NaH2PO4、水和兩次鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並蒸發得到粗產物。將石油醚加入到粗產物中，將混合物在室溫下攪拌3小時並過濾得到淺棕色固體狀標題化合物(57.5g，82％)。MS(ESI)890.3。
I]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基、Rp1和Rp2是乙醯基並且R4是甲基的式VI化合物(VI-1)的製備 將10.5g化合物V-1在氬氣下溶於180ml丙酮並一次性加入2.42gDBU、20mg碘化鈉和2.20g(4-甲氧基苯基)甲硫醇。將反應混合物在氬氣下在室溫下攪拌2.5小時。將250ml DCM加入到反應混合物中。將有機層用5％ NaHCO3洗滌三次，用Na2SO4乾燥並真空蒸發得到11.7g(98.4％)淺棕色泡沫。MS(ESI)1008.4。
K]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基、Rp1和Rp2是乙醯基並且R4是甲基的式VII化合物(VII-1)的製備 將6.00g化合物VI-1在氮氣下溶於60ml DMF並用冰浴冷卻。加入0.39g氫化鈉的油分散液(60％)並將混合物在0-5℃下攪拌3小時。此時加入KH2PO4 0.5N水溶液並將混合物用100ml乙醚萃取。將有機層用60ml3％ NaHCO3水溶液洗滌三次，然後用80ml鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發得到4.65g粗產物。MS(ESI)1008.4[MH]+。
L]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物的製備 將21.8g(21.6mmol)粗化合物VII-1溶於290ml甲醇並加入16.2ml(108.3mmol)DBU。將混合物在氬氣下加熱回流5小時。減壓蒸發溶劑並將殘餘物溶於580ml DCM。將有機層用水洗滌兩次，然後用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物用石油醚/乙醚5/1洗滌。將殘餘物溶於150ml甲醇並加入55ml水。將混合物攪拌2小時，將產物通過過濾分離得到11.1g(41％)固體狀標題化合物。MS(ESI)924.4。
M]其中的Rp3是(4-甲氧基苯基)甲基、Rp1是乙醯基、Rp2是氫並且R4是甲基的式VIIa(VIIa-1)化合物的製備 將2.0g(2.16mmol)實施例1步驟L的產物溶於50ml DCM並加入0.22ml(2.4mmol)乙酸酐。將混合物在室溫下攪拌48小時。將溶液用NaHCO3水溶液(5％)和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，過濾並真空濃縮得到2.17g淺棕色泡沫。該粗產物不經純化即可用於下一步驟。MS(ESI)967.3[MH]+。
N]其中的Rp4是甲基、Rp1是乙醯基、Rp2是氫並且R4是甲基的式IX化合物(IX-1)的製備 將2.17g(2.25mmol)VIIa-I溶於50ml DCM並加入分子篩。將880mg(4.49mmol)二甲基(甲硫基)鋶四氟硼酸鹽加入到混合物中並將反應液在室溫下攪拌5小時。將反應混合物過濾並用20ml NaHCO3水溶液(5％)和鹽水洗滌兩次，用Na2SO4乾燥，過濾並真空濃縮得到1.62g淺棕色泡沫。該粗產物不經純化即可用於下一步驟。MS(ESI)893.1[MH]+。
O]其中的R1是[2-[6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、Rp1是乙醯基、Rp2是氫並且R4是甲基的式VII化合物(VII-1)的製備 向溶於4ml DMF和1滴水的0.120g(0.13mmol)實施例1步驟N的產物的溶液中加入66.4μl(0.27mmol)三丁基膦並將混合物在室溫下攪拌30分鐘。然後將44.8mg(0.15m mol)6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤和40.2μlDBU(0.27mmol)加入到溶液中。將反應液在室溫下攪拌過夜並真空濃縮，將殘餘物溶於DCM。將有機層用NaHCO3水溶液(5％)和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，過濾並真空濃縮得到粗產物。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(DCM/MeOH/NH3 99:1:0.01→95:5:0.01)得到57mg(38％)所需產物。MS(ESI)1112.6([MH]+)，577.0([MH2]++)。
P]其中的R1是[2-[6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-1)的製備 將實施例1步驟O的產物(54mg)溶於2ml甲醇並在室溫下攪拌96小時。然後將反應混合物真空濃縮並將殘餘物通過HPLC純化得到白色固體狀所需產物。MS精確質量(ESI)1069.5792Da。
實施例2 其中的R1是[2-[6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-2)的製備 A]6-氨基-8-溴-9-[2-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-乙基]-嘌呤的製備 向3.0g2-(6-氨基-8-溴-嘌呤-9-基)乙醇(實施例1，步驟A)的30ml DMF溶液中加入2.8g TBDMSCl和1.1g咪唑並將混合物在氬氣下在20℃下攪拌24小時。濾出沉澱物，用水洗滌並乾燥得到3.6g(84％)所需產物。
B]6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-9-[2-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)乙基]-嘌呤的製備 向0.372g實施例2步驟A的產物和0.23g 3-氨基吡啶的10ml甲苯溶液中加入0.091g Pd2(dba)3、0.14g t-BuONa和0.087g 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦)呫噸(Xantphos)。將混合物在100℃下在氬氣氛下攪拌16小時。反應完成後將混合物用水稀釋並用DCM萃取。將有機層濃縮並將粗產物通過快速矽膠色譜純化(CHCl3:MeOH 20:1)得到0.1g(26％)所需產物。
C]2-(6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基)乙醇的製備 向0.46g實施例2步驟B的產物的10ml THF溶液中加入0.12gTBAF＊3H2O並將混合物在20℃下攪拌16小時。將反應混合物隨後濃縮並將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯:甲醇 20:1)得到0.19g(59％)所需產物。
D]6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤的製備 將0.11g 2-(6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基)乙醇冷卻至-20℃並加入2ml SOCl2。將溫度逐漸地升至50℃並將混合物在該溫度下攪拌12小時。蒸發過量的SOCl2並將氨水加入到殘餘物中。將混合物用乙酸乙酯萃取。將有機層分離並蒸發。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯:MeOH 20:1)得到30mg(27％)所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)9.10(s，1H)；9.0(s，1H)；8.35(d，1H)；8.20(d，1H)；8.05(s，1H)；7.30(m，1H)；6.65(s，2H，-NH2)；4.55(t，2H)；4.0(t，2H)。
E]其中的R1是[2-[6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-2)的製備 該標題化合物I-2用6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤和IX-1作為原料按照實施例1的步驟O-P所述的方法製得。MS精確質量(ESI)1056.5548Da。
實施例3 其中的R1是[2-[(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基-羰基)-氨基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-3)的製備 A]N-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-異煙醯胺的製備 將7.0g(33.8mmol)3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基胺(Garcia等，JOC，2005，70，1050頁)溶於150ml DCM。將溶液冷卻至0℃並將5.74g(40.5mmol)異煙醯氯的50ml DCM溶液加入到該溶液中。形成沉澱物。隨後將反應混合物在室溫下攪拌2小時。將2.7g NaOH的100ml水溶液加入到淺紅色反應混合物中。分離出有機層，用Na2SO4乾燥並蒸發。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 2:1)得到7.2g(62％)所需產物。MS(ESI)313.1。
B]N-(2-氯乙基)-N-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-異煙醯胺的製備 將3.0g(9.6mmol)實施例3步驟A的產物溶於50ml1-溴-2-氯乙烷並將5.33g(95mmol)氫氧化鉀加入到溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後在60℃下加熱4小時。將反應混合物冷卻至室溫並加入50ml水。將混合物用50ml DCM萃取。將有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並蒸發。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:1)得到黃色油狀的1.3g(43％)所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)8.45(d，2H)；7.21(d，2H)；6.8(m，3H)；4.63(m，1H)；4.13(t，2H)；3.76(t，2H)；3.66(s，3H)；1.4-1.8(m，8H)。
C]其中的R1是[2-[(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基-羰基)-氨基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-3)的製備 該標題化合物I-3用N-(2-氯乙基)-N-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-異煙醯胺和IX-1作為原料按照實施例1的步驟O-P所述的方法製得。MS精確質量(ESI)1141.6073Da。
實施例4 其中的R1是[2-[(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-4)的製備 A](3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-胺 將0.5g(1.6mmol)實施例3步驟A的產物在氮氣下溶於20ml無水THF並在室溫下加入0.24g(6.4mmol)氫化鋁鋰。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，然後冷卻至0℃並加入2ml水。將混合物用3 x 20ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發得到油狀粗產物。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:1)得到油狀的0.4g(84％)所需產物。MS(ESI)299.2([MH]+)。
B](2-氯-乙基)-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-胺的製備 將3.85g(12.9mmol)實施例4步驟A的產物在25℃下溶於50ml甲醇並加入5.1ml氯乙醛溶液(40％的水溶液；77.4mmol，6當量)、4.86g(77.4mmol，6當量)氰基硼氫化鈉和0.74ml(12.9mmol)乙酸。將混合物在25℃下攪拌16小時。然後減壓除去溶劑並將殘餘物溶於100ml二氯甲烷。將混合物用3x50ml鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:4)得到油狀的1.66g(35％)所需產物。MS(ESI)361.2，363.1([MH]+)。1H-NMR(CDCl3)8.52(d，2H)；7.17(d，2H)；6.75(d，1H)；6.18-6.24(m，2H)；4.6(m，1H)；4.52(s，2H)；3.75(s，3H)；3.64-3.73(m，4H)；1.5-1.9(m，br，8H)。
C]其中的Rp4是甲基、Rp1和Rp2是氫並且R4是甲基的式IX化合物(IX-4)的製備 將3.1g(3.35mmol)實施例1步驟L的產物溶於80ml DCM並加入分子篩。將1.0g(4.94mmol)二甲基(甲硫基)鋶四氟硼酸鹽加入到混合物中並將反應液在室溫下攪拌20小時。將反應混合物過濾並將濾液用80mlNaHCO3水溶液(5％)、80ml水和80ml鹽水洗滌兩次，用Na2SO4乾燥，過濾並真空濃縮得到3.04g淺棕色泡沫。該粗產物不經純化即可用於下一步驟。MS(ESI)850.2[MH]+。
D]其中的R1是[2-[(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-4)的製備 向溶於7.5ml DMF和35μl水的0.136g(0.16mmol)實施例4步驟C的產物的溶液中加入80μl(0.32mmol)三丁基膦並將混合物在室溫下攪拌至沒有原料剩餘(3小時)。然後將45mg(0.24mmol)實施例4步驟B的產物和36μl DBU(0.24mmol)加入到溶液中。將反應液在室溫下攪拌13小時，然後加入15ml水並將混合物用3 x 20ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機層濃縮，用Na2SO4乾燥，過濾並真空濃縮得到黃色油狀粗產物。將產物通過快速矽膠色譜初步純化(乙酸乙酯/己烷5/1)。將該化合物進一步通過製備型HPLC純化(柱Xterra C18(5μm)100mm x 10mm；流動相A水+0.02％ NH4OH，流動相BMeOH；流速10ml/min；檢測254nm；梯度0min/90％A/10％B，10min/40％A/60％B，10.1min/0％A/100％B)。MS精確質量(ESI)1128.6423Da。
保留時間10.8min。(柱Prontosil 120-3-C18 SH 3μm，75 x 4.6mm；流速1.0mL/min；檢測254nm；柱溫室溫；流動相A水+0.1％ TFA；流動相B甲醇；梯度0-5min是恆定的30％B；5-25min線性地從30％至95％B)。
實施例5 其中的R1是[2-[(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-5)的製備 A]N-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-煙醯胺的製備 將3.2g(14.3mmol)3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基胺(Garcia等，JOC，2005，70，1050頁)溶於120ml DCM。將溶液冷卻至0℃並將15ml(107.6mmol，7.5當量)三乙胺和3.7g(26.1mmol；1.8當量)煙醯氯的50ml DCM溶液加入到反應混合物中。將反應混合物攪拌2小時，然後將1.3g NaOH的50ml水溶液加入到混合物中。分離出有機相併用水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:1)得到4g(85％)白色固體狀所需產物。MS(ESI)313.0([MH]+)。
1H-NMR(DMSO-d6)10.24(s，1H)；9.07(s，1H)；8.73(d，1H)；8.25(d，1H)；7.54(dd，1H)；7.42(s，1H)；7.29(d，1H)；6.91(d，1H)；4.70(m，1H)；3.71(s，3H)；1.56-1.90(m，8H)。
B](3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-胺的製備 將0.5g(1.6mmol)實施例5步驟A的產物在氮氣下溶於20ml無水THF並在0℃下加入0.24g(6.4mmol)氫化鋁鋰。將反應混合物在15℃下攪拌2小時，然後冷卻至0℃並加入2ml水。將混合物用3x20ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發得到油狀粗產物。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:1)得到180mg(38％)所需產物，為淺黃色油。MS(ESI)299.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)8.54(s，1H)；8.41(d，1H)；7.72(d，1H)；7.32(dd，1H)；6.64(d，1H)；6.22(d，1H)；6.02(dd，1H)；4.60(m，1H)；4.21(s，2H)；3.56(s，3H)；1.50-1.76(m，8H)。
C](2-氯-乙基)-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-胺的製備 將150mg(0.51mmol)實施例5步驟B的產物在25℃下溶於10ml甲醇並加入0.5ml氯乙醛溶液(40％的水溶液；7.74mmol，15當量)、0.25g(3.98mmol，7.8當量)氰基硼氫化鈉和0.05ml(0.87mmol)乙酸。將混合物在15℃下攪拌4小時。然後減壓除去溶劑並將殘餘物溶於100ml二氯甲烷。將混合物用3 x 50ml鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:4)得到140mg(35％)淺黃色油狀所需產物。MS(ESI)361.2，363.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)8.45(s，1H)；8.39(d，1H)；7.58(d，1H)；7.29(dd，1H)；6.72(d，1H)；6.25(s，1H)；6.20(d，1H)；4.62(m，1H)；4.60(s，2H)；3.74(t，2H)；3.71(t，2H)；3.58(s，3H)；1.46-1.67(m，8H)。
D]其中的R1是[2-[(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-5)的製備 該標題化合物I-5用(2-氯-乙基)-(3-環戊氧基-4-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基-胺(實施例5步驟C)和IX-4作為原料按照實施例4的步驟D所述的方法製得。
將產物首先通過製備型HPLC用系統Bp純化。將分離出的產物溶於DCM並用稀釋的NaOH水溶液洗滌。將有機層乾燥並蒸發。將該產物進一步通過HPLC純化(系統Ap)。MS精確質量(ESI)1128.6434Da。保留時間(系統Aa)16.7min。
實施例6 其中的R1是[2-[(5-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-1-乙基-1H-吡唑並[3，4-b]吡啶-4-基氨基)-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-6)的製備 A]4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑並[3，4-b]吡啶-5-甲酸乙酯的製備 將2.54g(10mmol)4-氯-1-乙基-1H-吡唑並[3，4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(J.Med.Chem.2001，44，1025)和1.28g(11mmol)2-氯乙基胺鹽酸鹽加入到40ml無水乙醇中。然後加入7ml(50mmol)三乙胺。將混合物加熱回流至反應完成(4小時)。將反應混合物減壓濃縮並加入20ml飽和碳酸鈉水溶液。將混合物用3 x 20ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用15ml水和15ml鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物(2.88g)首先通過快速矽膠色譜純化(石油醚/乙酸乙酯 5:1)，然後用20ml己烷/乙酸乙酯＝1/1結晶得到1.24g(42％)所需產物，為白色結晶固體。MS(ESI)297.1([M+H]+)。
1H-NMR(CDCl3)9.70(寬峰，1H)，8.90(s，1H)，8.04(s，1H)，4.54(q，2H)，4.36(q，2H)，4.03(t，2H)，3.87(t，2H)，1.50(t，3H)，1.40(t，3H)。
B]4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑並[3，4-b]吡啶-5-甲酸的製備 將1.17g(4.0mmol)實施例6步驟A的產物的15ml乙醇溶液加入到0.64g(16.0mmol)NaOH的2ml水溶液中。將形成的混合物加熱回流3小時。減壓除去乙醇並將10ml水加入到殘餘物中。將溶液用2N HCl酸化至pH 5，導致產物沉澱。將沉澱物通過過濾分離並乾燥得到0.5g(44％)白色固體狀所需產物。MS(ESI)269.1([M+H]+)。1H-NMR(CDC13)12.75(b，1H)，9.54(s，1H)，8.68(s，1H)，8.19(s，1H)，4.36(q，2H)，4.05(t，2H)，3.93(t，2H)，1.34(t，3H)。
C]4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑並[3，4-b]吡啶-5-甲酸(3，5-二氯-吡啶-4-基)-醯胺的製備 將0.8g(3.0mmol)實施例6步驟B的產物、0.8g(6mmol)HOBt和1.14g(6mmol)EDC·HCl懸浮在25ml THF中並加入2.1g(21mmol)三乙胺。將混合物在15℃下攪拌至原料消失(24小時)。減壓除去溶劑並將粗產物通過柱色譜純化(石油醚/乙酸乙酯 4:1)得到0.64g白色固體。將131mgNaH(60％，5.7mmol)懸浮在15ml THF中並在15℃下將3，5-二氯-4-氨基吡啶的5ml THF溶液滴加到該懸浮液中。1小時後將570mg(1.42mmol)上述白色固體的5ml THF溶液緩慢加入到該混合物中並繼續攪拌30分鐘。將0.1ml水加入到反應混合物中並蒸發溶劑。將殘餘物通過快速矽膠色譜純化(石油醚/乙酸乙酯 4:1)得到92mg所需產物。將該產物用丙酮/己烷1/2重結晶得到68mg(11.6％)所需產物，為淺黃色固體。MS(ESI)413.0([M+H]+)。1H-NMR(CDCl3)9.68(s，1H)，8.77(s，1H)，8.56(s，2H)，8.06(s，1H)，7.91(s，1H)，4.53(q，2H)，4.03(t，2H)，3.82(t，2H)，1.52(t，3H)。
D]其中的R1是[2-[(5-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-1-乙基-1H-吡唑並[3，4-b]吡啶-4-基氨基)-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-6)的製備 該標題化合物I-6用4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑並[3，4-b]吡啶-5-甲酸(3，5-二氯-吡啶-4-基)-醯胺(實施例6步驟C的產物)和IX-1作為原料按照實施例1的步驟O-P所述的方法製得。將產物通過HPLC純化(系統Ap)。MS精確質量(ESI)1180.5134Da。
實施例7 其中的R1是[3-[2，3-二甲氧基-6-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-苯基]-丙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-7)的製備 A]1-(3-苄氧基-丙基)-2，3-二甲氧基-苯的製備 將2.50g(62.5mmol)NaH(60％的油分散液)在氮氣下懸浮在70ml無水THF中，然後在18℃下滴加7.1g(36.2mmol)3-(2，3-二甲氧基-苯基)-丙-1-醇(J.Org.Chem.，1987，52，1072)的50ml THF溶液。將形成的混合物攪拌30分鐘，然後滴加6.81g(39.8mmol)苄基溴的30ml THF溶液並將混合物在18℃下攪拌過夜。用10ml水終止反應並將有機溶劑減壓蒸發。將殘餘物溶於200ml乙酸乙酯並將有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物通過矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:40)得到8g(77％)無色油狀所需產物。1H-NMR(CDCl3)7.36-7.27(m，5H)；6.99-6.95(m，1H)；6.78-6.76(m，2H)；4.52(s，2H)；3.86(s，3H，)；3.81(s，3H)；3.52(t，2H)；2.73(t，2H)；1.93(m，2H)。
B]1-(3-苄氧基-丙基)-6-溴-2，3-二甲氧基-苯的製備 將8.0g(27.9mmol)實施例7步驟A的產物在氮氣下溶於120ml DCM並加入5.47g(30.7mmol)N-溴丁二醯亞胺和0.48g(2.8mmol)。將混合物在18℃下攪拌過夜。將反應混合物真空濃縮並將粗產物通過矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯/正己烷 1:40)得到9.7g(95％)無色油狀所需產物。1H-NMR(CDCl3)7.38-7.27(m，5H)；7.24(d，1H)；6.67(d，1H)；4.54(s，2H)；3.84(s，3H)；3.81(s，3H)；3.58(t，2H)；2.86(t，2H)；1.875(m，2H)。
C]2-(3-苄氧基-丙基)-3，4-二甲氧基-苯甲酸的製備 將9.7g(26.7mmol)實施例7步驟B的產物在氮氣下溶於40ml無水THF。將溶液冷卻至-78℃並加入18ml丁基-鋰溶液(2.2M的正己烷溶液)。30分鐘後加入400g固體CO2並將反應混合物緩慢升溫至室溫。將反應混合物倒入水中並將混合物用己烷萃取。將20ml 3M HCl水溶液加入到水層中並用2 x 100ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發得到9g白色固體狀粗產物。1H-NMR(CDCl3)7.86(d，1H)；7.37-7.24(m，5H)；6.82(d，1H)；4.53(s，2H)；3.92(s，3H)；3.82(s，3H)；3.59(t，2H)；3.13(t，2H)；1.92(m，2H)。
D]2-(3-苄氧基-丙基)-N-(3，5-二氯-吡啶-4-基)-3，4-二甲氧基-苯甲醯胺的製備 將10.8g(52.4mmol)DCC和5.0g(37mmol)HOBt在氮氣氛下加入到8.7g(26.3mmol)實施例7步驟C的產物的150ml DCM溶液中並將混合物在40℃下攪拌2小時。將懸浮液過濾並將濾液真空濃縮。將形成的產物通過矽膠柱色譜純化(己烷/乙酸乙酯8/1)得到8.5g白色固體。將4g該白色固體(8.9mmol)的40ml無水THF溶液滴加到1.6g(9.8mmol)4-氨基-3，5-二氯-吡啶和822mg(35.8mmol)NaH(60％的油分散液)的THF懸浮液中，將其在室溫下攪拌1.5小時。將形成的混合物在30℃下攪拌2小時，然後用水終止反應。將混合物用2 x 100ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發。將粗產物通過矽膠柱色譜純化得到4.1g(96％)白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)8.47(s，2H)；8.39(s，1H)；7.43(d，1H)；7.26-7.17(m，5H)；6.88(d，1H)；4.38(s，2H)；3.92(s，3H)；3.84(s，3H)；3.54(t，2H)；3.08(t，2H)；2.09(q，2H)。
E]2-(3-羥基-丙基)-3，4-二甲氧基-N-吡啶-4-基-苯甲醯胺的製備 將1.0g(2.1mmol)實施例7步驟D的產物溶於200ml乙醇並加入230mg Pd/C(10％)。將混合物在室溫下在氫氣下(40磅/平方英寸)攪拌36小時。濾出催化劑並將濾液減壓濃縮。將粗產物通過矽膠柱色譜純化得到280mg白色固體狀所需產物。MS(ESI)317.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)11.58(s，1H)；8.71(d，2H)；8.18(d，2H)；7.37(d，1H)；7.04(d，1H)；3.86(s，3H)；3.74(s，3H)；3.36(t，2H)；2.75(t，2H)；1.61(q，2H)。
F]2-(3-氯-丙基)-3，4-二甲氧基-N-吡啶-4-基-苯甲醯胺的製備 將200mg(0.63mmol)實施例7步驟E的產物和163mg(0.76mmol)PCl5溶於4ml DCM並將形成的混合物在20℃下攪拌30分鐘。將混合物濃縮並將粗產物通過矽膠柱色譜純化(DCM/MeOH 10:1)得到160mg(75％)白色固體狀所需產物。MS(ESI)335.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)11.54(s，1H)；8.69(d，2H)；8.15(d，2H)；7.391(d，1H)；7.09(d，1H)；3.87(s，3H)；3.76(s，3H)；3.61(t，2H)；2.84(t，2H)；1.934(q，2H)。
G]其中的R1是[3-[2，3-二甲氧基-6-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-苯基]-丙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-7)的製備 該標題化合物I-7用2-(3-氯-丙基)-3，4-二甲氧基-N-吡啶-4-基-苯甲醯胺(實施例7步驟F)和IX-4作為原料按照實施例4步驟D所述的方法製得。將該產物通過製備型HPLC純化(系統Ap)得到白色固體。MS精確質量(ESI)1102.5927Da。
實施例8 其中的R1是[3-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-8)的製備 A]4，6-二羥基-煙酸乙酯的製備 將5.0g(24.73mmol)1，3-丙酮二甲酸二乙酯、5.05g(49.45mmol)乙酸酐和3.7g(24.73mmol)原甲酸乙酯的混合物在120℃下加熱2小時。減壓除去揮發性組分並將剩餘的混合物用10ml氨水(25％)處理。將混合物在室溫下攪拌30分鐘。隨後將混合物的pH用HCl水溶液(2N)調節至pH 2。濾出固體，用冷水洗滌並乾燥。將8ml甲苯加入到粗產物中，將混合物在0℃下攪拌30分鐘，然後過濾並乾燥得到2.26g(50％)紅色固體。1H-NMR(DMSO-d6)11.77(s，br，1H)；10.74(s，br，1H)；8.01(s，1H)；5.60(s，1H)；4.26(q，2H)；1.28(t，3H)。
B]4，6-二羥基-5-硝基-煙酸乙酯的製備 向2.34g(12.78mmol)實施例8步驟A的產物的9ml乙酸溶液中在60℃下滴加1.24g硝酸(65％；12.78mmol)。將混合物在90℃下攪拌20小時。將反應混合物冷卻至0℃，過濾並將濾餅用冷水洗滌。將固體乾燥得到2.2g(75％)淺黃色結晶狀所需產物。MS(ESI)229.0([MH]+)。
C]4，6-二氯-5-硝基-煙酸乙酯的製備 將2.0g(8.77mmol)實施例8步驟B的產物的8.0ml(86mmol)磷醯氯溶液在80℃下攪拌74小時。然後真空除去大約一半的磷醯氯並將剩餘的混合物倒在冰上。將混合物用3 x 30ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機相用30ml碳酸鈉水溶液(10％)、2 x 30ml水和30ml鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發得到棕色油狀粗產物，將其通過矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯/己烷 1:20)得到1.67g(72％)淺黃色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)9.08(s，1H)；4.40(q，2H)；1.35(t，3H)。
D]3-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-丙基胺的製備 將7.4g(98mmol)3-氨基丙醇的10ml THF溶液在室溫下加入到4.12g氫化鈉(60％；103.2mmol)的140ml THF懸浮液中。將混合物攪拌1小時，然後加入16.28g(108mmol)叔丁基-二甲基甲矽烷基氯並繼續劇烈攪拌1小時。將混合物用300ml乙醚稀釋，依次用100ml K2CO3水溶液(10％)、100ml水和100ml鹽水洗滌，用MgSO4乾燥並蒸發得到17g淺黃色粗產物。將該產物溶於乙酸乙酯/己烷1/10並通過矽膠墊過濾。將濾液真空濃縮得到13g(70％)無色油狀所需產物。1H-NMR(CDCl3)3.67(t，2H)；2.78(t，2H)；1.83(s，br，2H)；1.64(m，2H)；0.87(s，9H)；0.33(s，6H)。
E]4-[3-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-丙基氨基]-6-氯-5-硝基-煙酸乙酯的製備 將6.0g(22.6mmol)實施例8步驟C的產物和2.3g(22.6mmol)三乙胺的75ml乙醇溶液加熱回流。將4.0g(22.6mmol)實施例8步驟D的產物加入到該溶液中並將混合物在回流下繼續攪拌1小時。減壓除去溶劑並將形成的殘餘物通過矽膠柱色譜純化(己烷/乙酸乙酯 80:1)得到9g(95％)黃色油狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)8.96(t，1H)；8.70(s，1H)；4.36(q，2H)；3.70(t，2H)；3.22(td，2H)；1.84(m，2H)；1.39(t，3H)；0.88(s，9H)；0.02(s，H)。
F]5-氨基-4-[3-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-丙基氨基]-6-氯-煙酸乙酯的製備 將8.5g(26.5mmol)實施例8步驟E的產物溶於100ml乙醇並加入2.5g阮內鎳。將反應混合物在氫氣下(1個大氣壓)在室溫下攪拌16小時。通過矽膠墊濾出催化劑並將濾液減壓濃縮。將粗產物通過矽膠柱色譜純化(己烷/乙酸乙酯 20:1)得到5.6g(58％)棕色油狀所需產物。MS(ESI)388.1；390.1([MH]+)。
G]1-[3-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-丙基]-4-氯-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的製備 將5.6g(15.5mmol)實施例8步驟F的產物溶於45ml原甲酸三乙酯並將混合物加熱回流44小時。將混合物減壓濃縮並補加45ml原甲酸三乙酯，然後將混合物繼續加熱回流24小時。將混合物減壓濃縮並將殘餘物通過矽膠柱色譜純化，用己烷/乙酸乙酯(20/1→5/1)洗脫得到2.7g(40％；純度～62％)淺黃色固體狀所需化合物。1H-NMR(CDCl3)8.27(t，1H)；7.90(s，1H)；4.25(q，2H)；3.60(t，2H)；3.40(td，2H)；1.65(m，2H)；1.30(t，3H)；0.80(s，9H)；0.01(s，6H)。
H]4-氨基-1-[3-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-丙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的製備 將約20g氨氣溶於100ml高壓釜中的40ml乙醇並加入2.7g(6.28mmol；純度～62％)實施例8步驟G的產物。將混合物在100℃下攪拌20小時。將反應液冷卻並減壓蒸發溶劑。將殘餘物通過矽膠柱色譜純化(DCM/MeOH 100:1然後50:1)得到1.5g(83％)深棕色固體。
I]4-氨基-1-[3-羥基-丙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的製備 將1.5g(3.4mmol)實施例8步驟H的產物溶於30ml無水THF並加入1.17g(～4.5mmol)氟化叔丁基銨·H2O。將混合物在室溫下攪拌1小時。減壓除去溶劑並將殘餘物通過矽膠柱色譜純化(乙酸乙酯，然後是乙酸乙酯/MeOH 50:1，然後是乙酸乙酯/MeOH 20:1)得到750mg(69％)白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)8.31(s，1H)；8.08(s，1H)；7.00(s，2H)；4.59(t，2H)；4.26(q，2H)；3.22(t，2H)；1.72(m，2H)；1.29(t，3H)。
K]4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的製備 將750mg(2.36mmol)實施例8步驟I的產物的22ml亞硫醯氯懸浮液在50℃下攪拌0.5小時。加入0.275ml三乙胺並在50℃下繼續攪拌11小時。反應完成後將30ml乙醚加入到冷的反應混合物中，導致形成沉澱。通過過濾分離出固體得到640mg(91％)淺黃色粉末狀所需產物。MS(ESI)283.0([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)9.00(s，br，2H)；8.52(s，1H)；8.30(s，1H)；4.68(t，2H)；4.35(q，2H)；3.40(t，2H)；2.15(m，2H)；1.32(t，3H)。
L]4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸的製備 向100mg(0.35mmol)實施例8步驟K的產物和0.7ml 2M LiOH水溶液的混合物中加入2ml THF和4ml MeOH。將混合物在室溫下攪拌過夜，然後補加0.7ml 2M LiOH水溶液並將混合物在45℃下攪拌過夜。將混合物的pH用2N HCl水溶液調節至pH＝7並減壓蒸發溶劑。將殘餘物通過製備型HPLC純化(柱Purospher STAR RP18e、5μm、125 x 25mm；流速25mL/min；檢測254nm；流動相A水+0.1％甲酸；流動相B乙腈；梯度在10分鐘內線性地從20％至60％乙腈)得到30mg(33％)白色固體狀所需產物。
M]4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基醯胺的製備 將60mg(0.24mmol)實施例8步驟L的產物、108mg(0.28mmol)HATU、72mg(0.77mmol)4-氨基-吡啶和0.048ml(0.28mmol)DIPEA的4.5ml DMF懸浮液在30℃下攪拌3小時。反應混合物變得澄清。將90mg(0.24mmol)HATU、22mg(0.24mmol)4-氨基-吡啶和0.040ml(0.24mmol)DIPEA加入到反應混合物中並繼續攪拌21小時。將混合物濃縮並將粗產物通過製備型HPLC純化得到白色固體狀所需產物(含一些甲酸鹽)。MS(ESI)331.1；333.1(IMH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)10.76(s，1H)；8.44(d，2H)；8.15(s，1H)；8.13(s，1H)；7.21(d，2H)；6.93(s，2H)；4.51(t，2H)；3.42(t，2H)；2.03(m，2H)。
N]其中的R1是[3-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-8)的製備 該標題化合物I-8用4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基醯胺(實施例8步驟M的產物)和IX-1作為原料按照實施例1步驟O-P所述的方法製得。將產物I-8通過HPLC純化(系統Ap)。1H-NMR(CDCl3)(僅特徵性信號)8.97(s，br，1H)；8.56(d，2H)；8.27(s，1H)；8.15(s，1H)；7.72(d，br，2H)；5.82(s，br，2H)；5.40(dd，1H)；4.91(d，1H)；4.60-4.77(m，2H)；4.51(d，1H)；4.18(s，1H)；3.98-4.05(m，1H)；3.79(d，1H)；3.69(d，1H)；3.5-3.6(m，1H)；3.35(s，3H)；3.08(s，3H)；1.42(s，3H)；1.37(s，3H)；1.15(d，3H)；1.08(d，3H)；1.01(d，3H)；0.85(t，3H)。
實施例9 其中的R1是[3-[4-氨基-7-([甲氧基羰基甲基]-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-9)的製備 A]{[4-氨基-1-(3-氯-丙基)-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-羰基]-氨基}-乙酸甲酯 將60mg(0.24mmol)實施例8步驟L的產物、54mg(0.28mmol)EDC、38mg(0.28mmol)HOBt和89mg(0.71mmol)甘氨酸甲酯HCI鹽的6mlDMF混合物在室溫下攪拌2小時。將混合物濃縮並將粗產物通過製備型HPLC純化得到72mg白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)9.32(m，1H)；8.66(s，br，2H)；8.47(s，1H)；7.89(s，1H)；4.52(t，2H)；4.04(d，2H)；3.67(s，3H)；3.52(t，2H)；2.11(m，2H)。
B]其中的R1是[3-[4-氨基-7-([甲氧基羰基甲基]-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-9)的製備 該標題化合物I-9用{[4-氨基-1-(3-氯-丙基)-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-羰基]-氨基}-乙酸甲酯(實施例9步驟A的產物)和IX-1作為原料按照實施例1的步驟O-P所述的方法製得。將產物I-8通過HPLC純化(系統Ap)得到白色固體狀所需產物。MS精確質量(ESI)1093.5698Da。
實施例10 其中的R1是[2-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-10)的製備 A]4-[2-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-乙基氨基]-6-氯-5-硝基-煙酸乙酯的製備 將362mg(1.37mmol)實施例8步驟C的產物和138mg(1.37mmol)三乙胺的4ml乙醇溶液加熱回流。將240mg(1.37mmol)2-(叔丁基-二甲基-矽烷基氧基)-乙基胺滴加到該溶液中並將混合物在回流下繼續攪拌1小時。減壓除去溶劑並將形成的殘餘物通過矽膠柱色譜純化(己烷/乙酸乙酯80:1)得到430mg(79％)黃色油狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)9.05(m，1H)；8.66(s，1H)；4.33(q，2H)；3.75(t，2H)；3.11(t，2H)；1.32(t，3H)；0.84(s，9H)；0.04(s，6H)。
B]4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的製備 4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯用實施例10步驟A的產物作為原料按照實施例8步驟F至K所述的方法製得。分離得到淺黃色粉末狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)9.00(s，br，2H)；8.53(s，1H)；8.31(s，1H)；4.96(t，2H)；4.33(q，2H)；4.00(t，2H)；1.32(t，3H)。
C]4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸的製備 向50mg(0.19mmol)4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯(實施例10步驟B)和1.1ml 2M NaOH水溶液的混合物中加入0.3ml THF和0.8ml MeOH。將混合物在室溫下攪拌2.5小時。減壓蒸發MeOH和THF並將剩餘混合物的pH用2N HCl水溶液調節至pH＝2。將產物沉澱並通過過濾分離。將甲苯加入到產物中並蒸發溶劑。該過程重複三次。最後分離得到淺灰色固體狀的24mg(53％)所需產物。MS(ESI)241.0([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)8.35(s，1H)；8.14(s，1H)；7.06(s，br，2H)；4.93(m，2H)；3.89(m，1H)。
D]4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基醯胺的製備 將48mg(0.20mmol)實施例10步驟C的產物、114mg(0.30mmol)HATU、61mg(0.65mmol)4-氨基-吡啶和0.051ml(0.30mmol)DIPEA的15ml DMF混合物在30℃下攪拌過夜。將產物直接通過製備型HPLC純化得到47mg(74％)白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)10.79(s，1H)；8.43(d，2H)；8.29(s，1H)；8.17(s，1H)；7.69(d，2H)；6.94(s，2H)；4.77(t，2H)；3.86(t，2H)。
E]其中的R1是[2-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-10)的製備 該標題化合物I-10用4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑並[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基醯胺(實施例10步驟D)和IX-4作為原料按照實施例4的步驟D所述的方法製得。將該產物通過製備型HPLC純化(系統Cp)得到白色固體。MS精確質量(ESI)1084.5637Da。
實施例11 其中的R1是[2-[4-氨基-7-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-11)的製備 A]其中的R1是[2-[4-氨基-7-乙氧基羰基-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物的製備 向1.6g(1.9mmol)實施例4步驟C的產物(IX-4)和0.5ml水的40mlDMF溶液中加入765mg(3.8mmol)三丁基膦並將混合物在室溫下攪拌3小時。加入400mg(1.39mmol)實施例10步驟B的產物和290mg(1.9mmol)DBU並將混合物在20℃下攪拌20小時。然後將60ml水加入到反應液中並將混合物用3 x 80ml乙酸乙酯萃取。將合併的有機層用水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發溶劑。將粗產物通過矽膠柱色譜純化(DCM/MeOH 40/1，20/1，10/1)得到895mg(46％)淺黃色粉末狀所需產物。MS(ESI)518.8([M+2H]++/2)。
B]其中的R1是[2-[4-氨基-7-羧基-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物的製備 將300mg(0.3mmol)實施例11步驟A的產物、3ml LiOH水溶液(2N)、8ml THF和6ml MeOH的混合物在18℃下攪拌20小時。將反應混合物減壓濃縮並將殘餘物用3 x 50ml DCM萃取。將合併的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發溶劑得到0.172g粗產物。將粗產物通過製備型HPLC純化(柱Purospher Star RP-18e、5μm、125 x 25mm；流速25mL/min；檢測254nm；流動相A水+0.1％甲酸；流動相B乙腈；梯度線性地從10％至40％乙腈，8min；然後是100％乙腈)得到白色固體。MS(ESI)504.8([M+2H]++/2)。保留時間(系統Ba)12.9min。
C]其中的R1是[2-[4-氨基-7-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑並[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-11)的製備 將153mg(4.46mmol)NaH(60％的油分散液)懸浮在1ml DMF中並加入873mg(5.3mmol)4-氨基-3，5-二氯吡啶的2ml DMF溶液。將懸浮液在25℃下攪拌3小時。同時將260mg(0.26mmol)實施例11步驟B的產物、153mg(0.8mmol)EDC和78mg(0.58mmol)HOBt的5ml DMF溶液在25℃下攪拌1小時。然後將該溶液在-5至0℃下加入到以上製備的4-氨基-3，5-二氯吡啶的溶液中。將混合物在該溫度下攪拌10分鐘並用1ml水終止反應，然後將混合物的pH用2N HCI水溶液調節至pH 7-8。將混合物濃縮並將殘餘物通過製備型HPLC純化(柱Purospher Star RP-18e、5μm、125 x 25mm；流速25mL/min；檢測254nm；流動相A水+0.01％甲酸；流動相B乙腈；梯度線性地從20％至60％乙腈，10min；60％乙腈，5min)得到210mg(70％)白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)10.68(s，1H)；8.70(t，2H)；8.31(s，1H)；8.24(s，1H)；6.97(t，2H)；5.15(m，1H)；4.85(m，1H)；4.72(m，1H)；4.62(m，1H)；4.40(m，3H)；4.00(m，1H)；3.66(m，1H)；3.58(t，2H)；2.40(s，6H)；1.80(m，2H)；1.65(m，2H)；1.51(m，3H)；1.40(s，3H)；1.29(s，3H)；1.05-1.20(m，16H)；1.00(d，3H)；0.93(d，3H)；0.73(t，3H)。MS精確質量(ESI)1152.4906Da。
實施例12 其中的R1是[2-[6-氨基-2-[[(3-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-12)的製備 A]9-(2-氯乙基)-2，6-二氨基-嘌呤的製備 將10g(66.6mmol)2，6-二氨基嘌呤在氬氣下懸浮在300ml DMF中並加入21.6g(156.5mmol)碳酸鉀和24ml1-溴-2-氯乙烷。將混合物在室溫下攪拌64小時。將淺黃色懸浮液過濾，將固體用30ml DMF洗滌，隨後用100ml水研製30分鐘。將混合物過濾，將固體用50ml水洗滌並真空乾燥得到10.15g(72％)白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)7.72(s，1H)；6.67(s，br，2H)；5.81(s，br，2H)；4.30(t，2H)；3.99(t，2H)。
B]6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(3-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤的製備 將100mg(0.47mmol)9-(2-氯乙基)-2，6-二氨基-嘌呤(實施例12，步驟A)溶於10ml MeOH並加入3g分子篩(4A)、0.044ml(0.47mmol)3-吡啶甲醛和0.135ml(2.35mmol)乙酸。將混合物在室溫下攪拌2小時。加入23.6mg(0.38mmol)氰基-硼氫化鈉並繼續攪拌4小時。補加0.044ml(0.47mmol)3-吡啶甲醛並在3天內於室溫下分三批加入72mg氰基-硼氫化鈉。蒸發溶劑並將殘餘物溶於50ml乙酸乙酯。將有機層用飽和碳酸鈉水溶液和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥並真空蒸發溶劑得到0.254g黃色油狀粗產物。將粗產物通過快速矽膠色譜純化(DCM/MeOH 99.5/0.5→80:20)得到88mg白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)8.57(s，1H)；8.40(m，1H)；7.74(s，br，1H)；7.73(s，1H)；7.30(m，1H)；6.99(m，1H)；6.75(s，br，2H)；4.45(d，2H)；4.30(t，2H)；3.95(t，2H)。
C]其中的R1是[2-[6-氨基-2-[[(3-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-12)的製備 該標題化合物I-12用6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(3-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤(實施例12步驟B的產物)和IX-1作為原料按照實施例1的步驟O-P所述的方法製得。將粗產物通過HPLC純化(系統Ap)得到白色固體狀所需產物。MS精確質量(ESI)1071.5826Da。
實施例13 其中的R1是[2-[6-氨基-2-[[(4-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基式I化合物(I-13)的製備 A]6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤的製備 6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤從4-吡啶甲醛和9-(2-氯乙基)-2，6-二氨基-嘌呤按照實施例12的步驟B所述的方法製得。將粗產物通過快速色譜純化(DCM/MeOH 99.5/0.5→80:20)得到白色固體狀所需產物。1H-NMR(DMSO-d6)8.44(d，2H)；7.73(s，1H)；7.31(d，2H)；7.01(t，1H)；6.75(s，br，2H)；4.46(d，2H)；4.27(t，2H)；3..91(t，2H)。
B]其中的R1是[2-[6-氨基-2-[[(4-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基團並且R4是甲基的式I化合物(I-13)的製備 該標題化合物I-13用6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤(實施例13步驟A的產物)和IX-1作為原料按照實施例1的步驟O-P所述的方法製得。將粗產物通過HPLC純化(系統Ap)得到白色固體狀所需產物。MS精確質量(ESI)1071.5826Da。
B.生物學活性 本發明化合物對人的磷酸二酯酶(PDE)、尤其是對PDE4表現出重要的抑制活性。以下試驗用於測定所述化合物的抑制活性。
試驗 PDE4特異性地水解cAMP並且釋放產物AMP。所述活性劑抑制PDE的能力在體外的酶試驗中進行測定。該試驗是商業上可得的(IMApTM FP試驗Molecular Devices Corp.)並且將其優化來用於人的PDE4。將螢光標記的cAMP通過PDE4水解，然後在第二個步驟中，將標記的產物結合到較大的結合夥伴上，從而可以通過螢光極化(FP)測定法檢測產物。
將PDE4從未分化的人單核細胞(U-937)按照Thorpy等1992(J.Pharmacol.Exp.Ther.2631195)所述的方法部分地純化。最終的製備物對於cAMP是特異性的，並且在該試驗的檢測限之上不水解cGMP。另外，通過利用PDE4-特異性和非特異性PDE抑制劑的抑制試驗來確認PDE4的製備物。
在DMSO中製備待測化合物的儲備溶液，然後在試驗緩衝液(10mMTris-HCl、10mM MgCl2、0.1％ BSA、0.05％ NaN3、pH 7.2)中稀釋至所需的濃度。用於該試驗的溶液含有在具有2％ DMSO的試驗緩衝液中的待測化合物。
將10μl底物(以廠商推薦的濃度)與5μl適當稀釋的PDE和5μl待測化合物溶液相混合。將含有2％ DMSO的5μl反應緩衝液用於對比反應。試驗中DMSO的終濃度為0.5％，該濃度不會明顯地改變PDE的活性。在室溫下孵育90分鐘後按照廠商的說明加入60μl結合劑。進行結合30分鐘，然後測定螢光極化作用。PDE抑制的劑量依賴性通過一式兩份地測定系列稀釋的待測化合物來測定。IC50值從測定的活性通過曲線擬合來確定。
結果 如實施例所示的本發明化合物的PDE4-抑制活性是特別令人驚奇的，因為所列舉的化合物的具有下式的基本的大環內酯在高達50μM的濃度下在實施例所用的試驗中沒有表現出任何的PDE4-抑制活性
並且，即使在本發明化合物之一中連接到所述基本的大環內酯上的取代基當以游離形式使用時在所述的試驗中表現出一定的PDE4-抑制活性，例如下列化合物
其IC50(PDE4)值為3.6μM，本發明的各化合物(其中由這兩種化合物連接在一起形成式(I)的分子)的PDE4-抑制活性通常表現出比其各局部組分相應的活性以及比對所述局部組分的混合物合理預期的活性要顯著改善的PDE4-抑制活性。在本發明的情況下，例如對於具有下式的實施例11的化合物來說，IC50(PDE4)為0.008μM
它僅僅是游離形式的大環內酯取代基IC50(PDE4)的五百分之一。
權利要求
1、式I的大環內酯類化合物
其中
R1是基團-Y-X-Q；
Y是S、SO或SO2；
X是鍵或由氫原子和最多9個選自C、N、O和/或S的原子組成的直鏈基團，其中最多2個原子可以是N並且一個原子可以是O或S，一個碳原子可以以CO基團的形式出現，並且硫原子可以以SO2基團的形式出現，並且兩個相鄰的C原子可以以-CH＝CH-或-C≡C-的形式存在，並且該基團X是未取代的或被-COO-W或-CONH-W所取代；
Q是基團-V-A1-L-A2-W，或者，如果X不代表鍵的話，其還可以是-NR6R7；
V是二價芳族或雜環基團；
W是芳基或雜環基；或者在基團-V-A1-L-A2-W中，其中存在基團A1、L或A2中的至少一個，W還可以是具有由C、N、O和/或S組成的最多5個原子的單價的取代的或未取代的、飽和或不飽和的直鏈基團，其中一個碳原子可以以CO基團的形式存在，一個硫原子可以以SO2基團的形式存在，
A1、A2彼此獨立地不存在或者是C1-C4亞烷基；
L是-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-、-NH(CO)O-，或者如果A1和/或A2存在的話L還可以不存在；
R2是氫，並且
R3是OR4或
R2、R3一起形成C＝O基團；
R4在式I中每次出現時獨立地是氫或具有1至6個碳原子的飽和或不飽和的脂族基；
R6、R7獨立地選自芳基；芳烷基；雜環基和雜環基烷基；並且R6和R7之一還可以是基團-L-W；並且
＊表示為(R)或(S)構型的手性中心；
排除在外的是如下式I化合物，其中
R2、R3一起形成C＝O基團，
R4是甲基並且
R1是
2、根據權利要求1所述的化合物，其中Y是SO2，或優選S。
3、根據權利要求1或2所述的化合物，其中R3是羥基或烯丙氧基，或優選R2、R3一起形成C＝O基團。
4、根據權利要求1至3中的任何一項所述的化合物，其中尤其在大環內酯環的6位上的R4是氫，或優選甲基。
5、根據權利要求1至4中的任何一項所述的化合物，其中Q是基團-V-A1-L-A2-W。
6、根據權利要求1至4中的任何一項所述的化合物，其中Q是-NR6R7。
7、根據權利要求1至6中的任何一項所述的化合物，其中W是芳基，或優選雜環基。
8、根據權利要求1至7中的任何一項所述的化合物，其中，V是下式的二價基團
其中
是亞苯基環或x-元飽和或不飽和的二價雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8、優選5或6，R8和R9獨立地選自氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C7環烷基氧基、C3-C7環烷基-C1-C4烷氧基、滷素、滷素-取代的C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、C1-C4烷硫基、巰基、羥基、氨基甲醯基、羧基、氧代基團；或芳基或雜環基，它們是未取代的或被一個或多個以上所述的除芳基或雜環基之外的取代基所取代，或者當兩個取代基R8和R9位於環
的相鄰碳原子上時，這兩個取代基可以與所述的相鄰碳原子一起形成5-或6-元芳環或x-元飽和或不飽和雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8，優選5或6，其中V可以總共具有1至4個如對R8和R9定義的這類取代基，並且自由價可位於基團V的一個或兩個環上。
9、根據權利要求1至5或7至8中的任何一項、尤其是權利要求5所述的化合物，其中V是下式的二價基團
10、根據權利要求1至9中的任何一項所述的化合物，其中W是下式的基團
其中
是苯基環或x-元飽和或不飽和的雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8、優選5或6，R10和R11獨立地選自氫、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C7環烷基氧基、C3-C7環烷基-C1-C4烷氧基、滷素、滷素-取代的C1-C4烷基、氰基、硝基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、C1-C4烷硫基、巰基、羥基、氨基甲醯基、羧基和氧代基團；或當兩個取代基R10和R11位於環
的相鄰碳原子上時，這兩個取代基可以與所述的相鄰碳原子一起形成5-或6-元芳環或x-元飽和或不飽和雜環脂族或雜芳族環，其含有2至(x-1)個碳原子和1至3個選自硫與優選的氧和氮的雜原子，x是5至8，優選5或6，其中W可以總共具有1至4個如對R10和R11定義的這類取代基，並且自由價可位於基團W的任何一個環上。
11、根據權利要求1至10中的任何一項所述的化合物，其中W是下式的基團之一
或者是下式的基團
或
其中R12是氫或C1-C4烷基。
12、根據權利要求1至5或7至11中的任何一項、尤其是權利要求5所述的化合物，其中
A1、A2彼此獨立地不存在，或者是C1-C2亞烷基；並且
L是-NH-、-(CO)NH-或-NH(CO)-或不存在。
13、根據權利要求9、11或12所述的化合物，其中
A1、A2彼此獨立地不存在，或者是C1-C2亞烷基；
L是-NH-、-(CO)NH-或-NH(CO)-；
V是下式的二價基團
並且，
W是下式的基團
14、根據權利要求1至13中的任何一項、尤其是權利要求13所述的化合物，其中
Y是-S-，並且
X是-CH2-CH2-NH-，其通過NH基團連接到基團Q上，或優選-CH2-CH2-。
15、根據權利要求6所述的化合物，其中-NR6R7是下式之一的基團
16、根據權利要求1至15中的任何一項、尤其是權利要求9、11、12、13、14或15所述的化合物，其中
R2、R3一起形成C＝O基團，並且
在大環內酯環的6位上的R4是甲基。
17、根據權利要求1至16中的任何一項所述的具有下式的化合物
18、根據權利要求1至16中的任何一項所述的具有下式的化合物
19、根據權利要求1至16中的任何一項所述的具有下式的化合物
20、包含權利要求1至19中的任何一項所述的化合物和可藥用載體的藥物。
21、用於主要通過抑制人磷酸二酯酶、尤其是人磷酸二酯酶4治療病症的權利要求20所述的藥物。
22、用於預防和/或治療炎性和過敏性疾病的權利要求20或21所述的藥物。
23、用於預防和/或治療慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、類風溼性關節炎、特應性皮炎或炎性腸病的權利要求20至22中的任何一項所述的藥物。
24、用於醫學治療、尤其用於預防或治療炎性和/或過敏性疾病的權利要求1至19中的任何一項所述的化合物。
25、用於治療或預防需要所述治療的個體的炎性或過敏性疾病的方法，其中以有效預防或治療所述炎性或過敏性疾病的量將權利要求1至19中的任何一項所述的化合物施用於所述的個體。
26、根據權利要求25所述的用於治療或預防個體的慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、類風溼性關節炎、特應性皮炎或炎性腸病的方法。
27、用於治療患有可通過抑制人磷酸二酯酶、尤其是人磷酸二酯酶4而得到緩解的病症或疾病的人的方法，其中以有效緩解所述病症或疾病的量將權利要求1至19中的任何一項所述的化合物施用於所述的人。
28、根據權利要求27所述的方法，其中所述的疾病或病症是炎性或過敏性疾病或病症。
29、根據權利要求1至19中的任何一項所述的化合物在製備用於預防和治療炎性或過敏性疾病的藥物中的用途。
30、根據權利要求1至19中的任何一項所述的化合物在製備用於治療可通過抑制人磷酸二酯酶、尤其是人磷酸二酯酶4而得到緩解的病症或疾病的藥物中的用途。
31、用於製備權利要求1至19中的任何一項所述的式I化合物的方法，該方法包括
a)將具有下式的大環內酯類化合物
其中R4如權利要求1所定義，
按照本身已知的方式轉化成式IV化合物
其中Rp1和Rp2均為羥基保護基並且R4如以上所定義，
b)將所述的式IV化合物按照本身已知的方式轉化成式VI化合物
其中R1如權利要求1所定義或是式-S-Rp3的基團，其中Rp3是硫保護基並且Rp1和Rp2與R4具有以上所述的含義；
c)將所述的式VI化合物在非質子溶劑中與鹼金屬鹼反應以形成式VII化合物
其中R1與Rp1和Rp2以及R4具有以上所述的含義，然後
同時或依次除去羥基保護基Rp1和Rp2以形成式I化合物，其中R2和R3一起形成C＝O基團，並且，如果需要的話，將所述的化合物按照本身已知的方式轉化成其中R2是氫並且R3選自羥基或-O-(脂族基)的式I化合物，所述的脂族基代表含有1至6個碳原子的飽和或不飽和的脂族基；
條件是，在R1是S-Rp3的情況下，將式VII化合物在分子篩的存在下轉化成式IX的二硫化物衍生物，然後除去羥基保護基Rp1和Rp2
其中Rp4是C1-C4烷基，尤其是甲基，或3-硝基-2-吡啶基，
將該化合物用還原劑、尤其是三烷基膦或三芳基膦在溶劑、尤其是含水的丙酮、DMF、二噁烷或THF中處理以得到式X化合物
其中Rp1和Rp2具有以上所述的含義，
然後將該化合物與式Q-X-Lg的化合物反應，其中Q和X如權利要求1所定義並且Lg是離去基團，或者，當X代表羰基或磺醯基時，Lg是乙烯基，以得到式VII化合物，其中R1如權利要求1所定義。
32、用於製備權利要求1至19中的任何一項所述的式I化合物的方法，其中R1是基團-Y-X-Q，其中X和Q具有與權利要求1所述的相同的含義並且Y是S；該方法包括
a)將具有下式且R4如權利要求1所定義的大環內酯類化合物
按照本身已知的方式轉化成式IV化合物
其中Rp1和Rp2均為羥基保護基並且R4如以上所定義，
b1)將所述的式IV化合物在活化的氯乙酸衍生物、尤其是二(氯乙酸)酐的存在下按照本身已知的方式轉化成式V化合物
其中Rp1和Rp2與R4具有以上所述的含義；
b2)將所述的式V化合物進一步與其中M代表鹼金屬原子的式MS-X-Q的化合物反應以形成式VI化合物
其中R1是-S-X-Q並且X、Q、Rp1和Rp2以及R4具有以上所述的含義，
c)將所述的式VI化合物在非質子溶劑中與鹼金屬鹼反應以形成式VII化合物
其中R1與Rp1和Rp2以及R4具有以上所述的含義，然後
同時或依次除去羥基保護基Rp1和Rp2以形成式I化合物，其中R2和R3一起形成C＝O基團，並且，如果需要的話，將所述的化合物按照本身已知的方式轉化成其中R2是氫並且R3選自羥基或-O-(脂族基)的式I化合物，所述的脂族基代表含有1至6個碳原子的飽和或不飽和的脂族基。
全文摘要
本發明描述了具有PDF4抑制活性的式I的大環內酯類化合物，其中R1是基團-Y-X-Q；Y是S、SO或SO2；X是鍵或由氫原子和最多9個選自C、N、O和/或S的原子組成的直鏈基團，其中最多2個原子可以是N並且一個原子可以是O或S，一個碳原子可以以CO基團的形式出現，並且硫原子可以以SO2基團的形式出現，並且兩個相鄰的C原子可以-CH＝CH-或-C≡C-的形式存在，並且基團X是未取代的或被-COO-W或-CONH-W所取代；Q是基團-V-A1-L-A2-W，或者，如果X不代表鍵的話，其還可以是-NR6R7；V是二價芳族或雜環基團；W是芳基或雜環基；或者在基團-V-A1-L-A2-W中，其中存在基團A1、L或A2中的至少一個，W還可以是具有由C、N、O和/或S組成的最多5個原子的單價的取代的或未取代的、飽和或不飽和的直鏈基團，其中一個碳原子可以以CO基團的形式存在，一個硫原子可以以SO2基團的形式存在，A1、A2彼此獨立地不存在或者是C1-C4亞烷基；L是-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-、-NH(CO)O-，或者，如果A1和/或A2存在的話其還可以不存在；R2是氫，並且R3是OR4或R2、R3一起形成C＝O基團；R4是氫或具有1至6個碳原子的飽和或不飽和的脂族基；R6、R7獨立地選自芳基；芳烷基；雜環基和雜環基烷基；並且R6和R7之一還可以是基團-L-W；並且*表示為(R)或(S)構型的手性中心。
文檔編號C07H17/08GK101511855SQ200780032846
公開日2009年8月19日 申請日期2007年8月8日 優先權日2006年8月9日
發明者J·L·克倫貝熱, J·德雷耶, S·B·賴內爾特 申請人:巴斯利爾藥物股份公司