清開靈注射製劑的質量控制方法

2023-09-18 12:13:35

專利名稱：清開靈注射製劑的質量控制方法
技術領域：
本發明涉及一種清開靈注射製劑的質量控制方法，屬於對藥品進行質量控制的技術領域。
背景技術：
清開靈製劑由我國傳統名貴中成藥「安宮牛黃丸」的改劑而得，由膽酸、珍珠母、豬去氧膽酸、梔子、水牛角、板藍根、黃芩苷和金銀花組成；具有清熱解毒、避穢通竅、鎮靜安神的功能，主治熱邪內陷、神昏譫語、身熱煩躁、抽搐驚劂及小兒急驚風等症；現代醫學主要用於治療上呼吸道感染、多種熱病和急性病等，其療效顯著；於文勇於2003年4月10日申請了專利名稱為清開靈注射液或注射粉針劑的製備方法及其質量控制方法，申請號為03109422.8的專利，該專利公開了清開靈注射液或注射用粉針劑中黃芩苷、膽酸、豬去氧膽酸、梔子苷、綠原酸的含量測定方法，以及清開靈注射液或注射用粉針劑的鑑別方法。雖然該專利公開的質量控制方法對清開靈製劑的質量控制起到一定作用，但在我們的研究過程中發現，用以上方法控制清開靈製劑的質量，仍然存在一定的問題。具體表現為該專利申請在鑑別梔子的方法中，採用GF254預製板，同時以乙酸乙酯-無水乙醇-冰醋酸作為展開劑，以香夾蘭醛-濃硫酸溶液作顯色劑；我們研究發現，用該方法的鑑別出來的結果專屬性不夠強，斑點顯色不夠好；且一般情況下使用GF254螢光板，是指在紫外光燈，254nm條件下觀察結果，而該專利申請卻未對此進行清楚的說明，故該專利申請中梔子苷的鑑別方法還具有不清楚的地方；另外在梔子苷的含量測定方法中，梔子苷對照品採用甲醇-水溶解，使得梔子苷溶解效果不夠好，且所得梔子苷對照品溶液不易保存；另外在該專利申請中，膽酸和豬去氧膽酸的含量測定方法中採用高效液相色譜法，使用紫外檢測器，由於膽酸和豬去氧膽酸僅有紫外末端吸收，使得測定結果不夠準確。

發明內容
本發明的目的在於提供一種清開靈注射製劑的質量控制方法。
該注射製劑包括凍乾粉、注射液和大輸液製劑。
本發明中，梔子苷的鑑別方法中，我們採用矽膠G薄層板，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水作為展開劑，用該方法鑑別的結果專屬性強，斑點顯色好，肉眼容易觀察；在梔子苷的含量測定方法中，梔子苷對照品採用甲醇溶解，其溶解效果好，且所得梔子苷對照品溶液容易保存；本發明中，膽酸和豬去氧膽酸的含量測定方法中採用高效液相色譜法，使用蒸發光散色檢測器，其檢測結果準確，因為膽酸和豬去氧膽酸僅有紫外末端吸收，使用紫外檢測器，其測定結果不夠準確，而蒸發光散色檢測器對於無紫外吸收或僅有紫外末端吸收的大分子有機化合物具有極大的優越性；在產品研究過程中，我們發現膽酸和豬去氧膽酸採用高效液相色譜法，使用蒸發光散色檢測器是目前測定膽酸和豬去氧膽酸較先進的檢測方法；由於清開靈製劑中含有有效成分胺基酸，故本發明還對清開靈製劑中所含氮氣進行含量測定，作為控制清開靈製劑中胺基酸含量的指標，這是現有技術中不曾有的，另外在產品研究過程中我們發現，本發明所用含量測定方法還具有重現性好的優點。
本發明中所述清開靈注射製劑均為市售產品，包括凍乾粉、注射液和大輸液製劑。
所述質量控制方法主要包括性狀、鑑別、檢查、含量測定等項目的部分或全部；其中鑑別包括糠醛反應、以梔子苷為對照品的薄層鑑別的部分或全部；檢查包括不溶性微粒、PH值、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、重金屬、砷鹽、鉀離子、異常毒性、溶血與凝聚、鋇離子、熾灼殘渣檢查、水分以及其他應符合注射劑項下的各項規定中的部分或全部；含量測定包括以梔子苷對照品、黃芩苷對照品、綠原酸對照品、膽酸對照品、豬去氧膽酸對照品作為該製劑含量測定方法的檢測指標，以及含氮量測定的部分或全部。
所述質量控制方法為性狀對於凍乾粉產品為淺黃色至棕黃色疏鬆塊狀物。
對於注射液產品為棕黃色或棕紅色的澄明液體。
對於大輸液產品為黃色至棕黃色的澄明液體。
鑑別(1)分別取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉用水溶解，加入糠醛溶液與硫酸溶液混勻，水浴加熱，溶液顯灰紫色。
(2)取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉供試品溶液的製備方法為取凍乾粉的內容物，加乙醇溶解，取上清液即得；注射液或大輸液供試品溶液的製備方法為取注射液5-20ml或大輸液50-200ml，置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加乙醇使溶解，取上清液即得。另取梔子苷對照品，加乙醇溶解，作為對照品溶液。將對照品溶液和供試品溶液分別點於同一矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯或磷酸∶丙酮∶甲酸∶水＝2-10∶2-10∶0.5-2∶0.5-2為展開劑，以10％硫酸乙醇溶液為顯色劑，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查不溶性微粒 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加淨化水50-100ml使溶解，用淨化水做空白，照中國藥典2005年版一部附錄「不溶性微粒檢查法」第一法測定，應符合規定。
PH值 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別測其PH值，其PH值均應為5-9。
蛋白質 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別取1ml置試管中，滴加鞣酸試液1-5滴，不得產生渾濁。
鞣質 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，取1ml，加新配製的含1-5％雞蛋清的生理鹽水1-10ml，放置5-20分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
樹脂 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別取上述溶液5ml，置分液漏鬥中，加氯仿5-20ml振搖提取，分取氯仿液，蒸乾，殘渣加冰醋酸1-5ml使溶解，置具塞試管中，加水1-5ml，混勻，放置20-50分鐘，應無絮狀物析出。
草酸鹽 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別取上述溶液5ml，用稀鹽酸調節PH值至1～3，30-70℃保溫5-20分鐘，保溫濾去沉澱，調節PH值至4～7，取1-5ml，加1-5％氯化鈣溶液1～5滴，放置5-20分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
重金屬 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別吸取1-2ml，蒸乾，緩緩烘至約完全灰化，放冷，對照管取標準鉛溶液1ml，照中國藥典2005年版一部附錄「重金屬檢查法」第二法測定，1ml水溶液中含重金屬不得過百萬分之十。
砷鹽 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水l-l0ml使溶解，分別吸取1ml，蒸乾，加1-5％硝酸鎂乙醇溶液1-5ml，點燃，燃盡後，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸1-10ml與水10-30ml使溶解，照中國藥典2005年版一部附錄「砷鹽檢查法」第一法測定，1ml水溶液中含砷量不得過百萬分之二。
鉀離子 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別吸取1-5ml，蒸乾，照中國藥典2005年版一部附錄「注射劑有關物質檢查法」測定，應符合規定。
異常毒性 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉加氯化鈉注射液製成每1ml中含30-50mg的溶液，照中國藥典2005年版二部附錄「異常毒性檢查法」檢查，按靜脈注射法給藥，應符合規定。
溶血與凝聚 2％紅細胞混懸液的製備 取兔血或羊血，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖5-20分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加5-20倍量的生理氯化鈉溶液洗滌1-5次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得。

試驗方法 取試管6支，按上表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻後，於37℃恆溫箱中放置10-60分鐘，分別加入不同量的藥液，其中凍乾粉取200mg，用生理氯化鈉溶液溶解並稀釋成5-40ml，以編號為6的第6管為對照管；搖勻後，置37℃恆溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時後，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。
試驗方法 取試管6支，按上表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻後，於37℃恆溫箱中放置10-60分鐘，分別加入不同量的藥液，其中凍乾粉取200mg，用生理氯化鈉溶液溶解並稀釋成5-40ml，以編號為6的第6管為對照管；搖勻後，置37℃恆溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時後，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。
按上法檢查，以編號為3的第3管為準，本品在2小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚。
由於鋇離子對人體有害，本發明檢查項目中還對鋇離子進行檢查，避免其進入人體，鋇離子的檢查方法為鋇離子 方法1取鉑絲，用鹽酸溼潤後，蘸取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，在無色火焰中燃燒，火焰未顯黃綠色，通過綠色玻璃透視，火焰未顯藍色。
方法2取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg用注射用水1-5ml溶解，分別取藥液，滴加稀硫酸，即生成白色沉澱，分離，沉澱在鹽酸或硝酸中均溶解。
本發明為避免清開靈注射製劑與血漿中鈣離子發生反應而導致不良反應產生，還可檢查以下項目取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg用注射用水1-10ml注射用水溶解，分別取藥液，滴加1-50滴0.01-0.2％的CaCl2溶液或Ca(OH)2溶液，不得出現混濁或沉澱。
本發明為了對清開靈製劑中無機物雜質含量進行控制，還對熾灼殘渣進行檢查，其檢查方法為熾灼殘渣檢查 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg用1-10ml注射用水溶解，分別取藥液1-5ml，照中國藥典灼殘渣檢查法檢查，應小於2％。
另外本發明針對凍乾粉還進行水分檢查，其檢測方法為水分 取凍乾粉，照中國藥典2005年版一部附錄「水分測定法」第三法測定，不得過5.0％。
其他 應符合中國藥典2005年版一部附錄注射劑項下有關的各項規定含量測定梔子苷 採用高效液相色譜法，色譜柱為C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝20～40∶80～60為流動相，流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，檢測波長為205～350nm；精密稱取梔子苷對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或清開靈大輸液，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，或以氯仿提取，放冷，提取液蒸乾，殘渣加甲醇-水溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中梔子苷含量應不得少於0.8％、注射液中梔子苷含量應不得少於0.4mg/ml、大輸液中梔子苷含量應不得少於0.04mg/ml。
黃芩苷 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，以乙腈或甲醇0.3～0.5％磷酸＝10～40∶90～60為流動相，流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，檢測波長為205～350nm；精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或清開靈大輸液，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，或以乙酸乙酯和甲醇的混合溶液提取，放冷，提取液蒸乾，殘渣加甲醇-水溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中黃芩苷含量應為5％～17.5％、注射液中黃芩昔含量應為2～7mg/ml、大輸液中黃芩苷含量應為0.24～2.1mg/ml。
綠原酸 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，以乙腈或甲醇0.2～0.7％磷酸＝5～25∶95～75為流動相，流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，檢測波長為245～600nm；精密稱取綠原酸對照品，加甲醇-水溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉，用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或大輸液，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中綠原酸含量應不得少於0.4％、注射液中綠原酸含量應不得少於0.15mg/ml、大輸液中綠原酸含量應不得少於0.018mg/ml。
膽酸 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，流動相為甲醇或乙腈∶水＝40-85∶60-15，或為甲醇或乙腈∶水∶冰醋酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.99，或為甲醇或乙腈∶水∶甲酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.5，流動相流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為25-115℃，霧化氣體為空氣或氮氣，氣體流速為1.0-4.0L/min；取膽酸對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉，加甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或大輸液，以甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定，按外標兩點法對數方程計算含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中膽酸含量應為2.5％-10％、注射液中膽酸含量應為1-4mg/ml、大輸液中膽酸含量應為0.12-1.2mg/ml。
豬去氧膽酸 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，流動相為甲醇或乙腈∶水＝40-85∶60-15，或為甲醇或乙腈∶水∶冰醋酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.99，或為甲醇或乙腈∶水∶甲酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.5，流動相流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為25-115℃，霧化氣體為空氣或氮氣，氣體流速為1.0-4.0L/min；取豬去氧膽酸對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉，加甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或大輸液，以甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定，按外標兩點法對數方程計算含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中豬去氧膽酸含量應為2.5％-10％、注射液中豬去氧膽酸含量應為1-4mg/ml、大輸液中豬去氧膽酸含量應為0.12-1.2mg/ml。
含氮量 取清開靈製劑，照中國藥典氮測定法測定，其中凍乾粉含氮量為4％-10％、注射液含氮量為1.6-4mg/ml、大輸液含氮量為0.18-1.2mg/ml。
與現有技術比較，本發明中，梔子苷的鑑別方法中，我們採用矽膠G薄層板，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水作為展開劑，其鑑別結果專屬性強，斑點顯色好，肉眼容易觀察；在梔子苷的含量測定方法中，梔子苷對照品採用甲醇溶解，溶解效果好，且所得梔子苷對照品溶液容易保存；另外在產品研究過程中發現，蒸發光散色檢測器對於膽酸和豬去氧膽酸的檢測具有極大的優越性，是目前檢測膽酸和豬去氧膽酸較先進的檢測方法，所以本發明中膽酸和豬去氧膽酸的含量測定方法中採用高效液相色譜法，使用蒸發光散色檢測器，其檢測結果準確；本發明還對清開靈製劑中所含氮氣進行含量測定，作為控制清開靈製劑中胺基酸含量的指標；同時，本發明還對清開靈注射製劑的不溶性微粒、PH值、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、重金屬、砷鹽、鉀離子、異常毒性、溶血與凝聚、鋇離子、熾灼殘渣檢查、水分等項目進行檢查，有效控制清開靈中製劑中雜質的含量，避免不良反應產生，故用本發明方法控制清開靈製劑的質量，不僅鑑別方法專屬性強，含量測定方法重現性好；同時，本發明檢查方法全面，能有效避免藥物不良反應產生，含量測定項目能確保藥物的療效，達到了有效控制藥物的質量的發明目的。
具體實施例本發明實施例1本發明所述凍乾粉的質量控制方法為性狀產品為淺黃色至棕黃色疏鬆塊狀物。
鑑別取市售清開靈凍乾粉200mg加水10ml溶解，取1ml加新制的糠醛溶液(1→100)2ml與硫酸溶液(取硫酸50ml，加水50ml，混合)10ml，混勻，在60℃水浴中加熱，溶液顯灰紫色。
檢查不溶性微粒 取清開靈凍乾粉200mg加淨化水50ml使溶解，用淨化水做空白，照中國藥典2005年版一部附錄「不溶性微粒檢查法」第一法測定，應符合規定。
PH值 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，測其PH值，其PH值應為5.0～8.0。
蛋白質 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，取1ml置試管中，滴加鞣酸試液2-5滴，不得產生渾濁。
鞣質 取清開靈凍乾粉200mg加水1ml使溶解，取1ml，加新配製的含5％雞蛋清的生理鹽水1ml，放置5分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
樹脂 取清開靈凍乾粉200mg加水1ml使溶解，取上述溶液5ml，置分液漏鬥中，加氯仿5ml振搖提取，分取氯仿液，蒸乾，殘渣加冰醋酸1ml使溶解，置具塞試管中，加水1ml，混勻，放置20分鐘，應無絮狀物析出。
草酸鹽 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，取上述溶液5ml，用稀鹽酸調節PH值至1～3，30℃保溫20分鐘，保溫濾去沉澱，調節PH值至4～6，取5ml，加5％氯化鈣溶液1～3滴，放置20分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
重金屬 取清開靈凍乾粉200mg加水1ml使溶解，吸取1ml，蒸乾，緩緩烘至約完全灰化，放冷，對照管取標準鉛溶液1ml，照中國藥典2005年版一部附錄「重金屬檢查法」第二法測定，1ml水溶液中含重金屬不得過百萬分之十。
砷鹽 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，分別吸取1ml，蒸乾，加1％硝酸鎂乙醇溶液5ml，點燃，燃盡後，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸10ml與水30ml使溶解，照中國藥典2005年版一部附錄「砷鹽檢查法」第一法測定，1ml水溶液中含砷量不得過百萬分之二。
異常毒性 取清開靈凍乾粉加氯化鈉注射液製成每1ml中含50mg的溶液，照中國藥典2005年版二部附錄「異常毒性檢查法」檢查，按靜脈注射法給藥，應符合規定。
取清開靈凍乾粉200mg用注射用水10ml注射用水溶解，滴加30-50滴0.01％的CaCl2溶液，不得出現混濁或沉澱。
水分 取凍乾粉，照中國藥典2005年版一部附錄「水分測定法」第三法測定，不得過5.0％。
其他 應符合中國藥典2005年版一部附錄注射劑項下有關的各項規定。
含量測定梔子苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱為C4柱，以乙腈∶水＝20∶80為流動相，流速為0.6ml/min，柱溫20℃，檢測波長為350nm；理論塔板數按梔子苷峰計算應不低於1500。
對照品溶液的製備 精密稱取梔子苷對照品，加甲醇溶解製成每1ml含30μg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉30mg，加80％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，清開靈凍乾粉中梔子苷含量應不得少於0.8％。
綠原酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C8柱，以甲醇∶0.2％磷酸＝5∶95為流動相，流速為0.6ml/min，柱溫50℃，檢測波長為245nm；理論塔板數按綠原酸峰計算應不低於1000。
對照品溶液的製備 精密稱取綠原酸對照品，加20％甲醇溶解製成每1ml含綠原酸10μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉200mg，加20％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，清開靈凍乾粉中綠原酸含量應不得少於0.4％。
黃芩苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C4柱，以甲醇∶0.4％磷酸＝30∶70為流動相，流速為0.8ml/min，柱溫35℃，檢測波長為285nm；理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低於2500。
對照品溶液的製備 精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇溶解製成每1ml含黃芩苷100μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉15mg，用60％甲醇溶液溶解並稀釋至20ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀測定，清開靈凍乾粉中黃芩苷含量應為5％～17.5％。
膽酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C4柱，乙腈∶水∶冰醋酸＝85∶15∶0.99為流動相；流速為0.8ml/min，柱溫40℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為75℃，霧化氣體為氮氣，氣體流速為3.0L/min，理論塔板數按膽酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取膽酸對照品，加甲醇溶解製成每1ml含0.2mg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉20mg，加10％甲醇溶液5ml超聲處理20分鐘，放冷，加70％甲醇稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl與供試品溶液10μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法對數方程計算含量，清開靈凍乾粉中膽酸含量應為2.5％-10％。
含氮量 取清開靈凍乾粉，照中國藥典2005年版一部附錄「含氮量」第二法測定，凍乾粉含氮量為4％-10％。
所述清開靈凍乾粉為貴州益佰製藥股份有限公司生產。
本發明實施例2本發明所述注射液的質量控制方法為性狀產品為棕黃色或棕紅色的澄明液體；鑑別取清開靈注射液1ml，加新制的糠醛溶液(1→100)1ml與硫酸溶液(取硫酸10ml，加水15ml，混合)10ml，混勻，在50℃水浴中加熱，溶液顯灰紫色。
檢查PH值 取清開靈注射液，測其PH值，其PH值應為6.0～9.0。
蛋白質 取清開靈注射液1ml置試管中，滴加鞣酸試液1-3滴，不得產生渾濁。
鞣質 取清開靈注射液1ml，加新配製的含3％雞蛋清的生理鹽水7ml，放置15分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
草酸鹽 取清開靈注射液5ml，用稀鹽酸調節PH值至2～3，70℃保溫5分鐘，保溫濾去沉澱，調節PH值至5～7，取1ml，加1％氯化鈣溶液3～5滴，放置5分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
鉀離子 取清開靈注射液1ml，蒸乾，照中國藥典2005年版一部附錄「注射劑有關物質檢查法」測定，應符合規定。
異常毒性 取清開靈注射液，照中國藥典2005年版二部附錄「異常毒性檢查法」檢查，按靜脈注射法給藥，應符合規定。
取清開靈注射液1ml，滴加1-10滴0.2％的Ca(OH)2溶液，不得出現混濁或沉澱。
熾灼殘渣檢查 取清開靈注射液1ml，照中國藥典2005年版一部附錄「熾灼殘渣檢查法」測定，應小於2％。
其他 應符合中國藥典2005年版一部附錄注射劑項下有關的各項規定。
含量測定梔子苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱為C18柱，以乙腈∶水＝40∶60為流動相，流速為1.2ml/min，柱溫50℃，檢測波長為350nm；理論塔板數按梔子苷峰計算應不低於1500。
對照品溶液的製備 精密稱取梔子苷對照品，加甲醇溶解製成每1ml含100μg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈注射液20ml，置分液漏鬥中，用氯仿提取三次，每次20ml，合併氯仿提取液，置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加20％甲醇溶解並稀釋至10ml，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，清開靈注射液中梔子苷含量應不得少於0.4mg/ml。
黃芩苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C4柱，以甲醇∶0.3％磷酸＝10∶90為流動相，流速為0.6ml/min，柱溫20℃，檢測波長為205nm；理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低於2500。
對照品溶液的製備 精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇溶解製成每1ml含黃芩苷40μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈注射液20ml，以乙酸乙酯20ml和甲醇5ml的混合溶液超聲處理10分鐘，提取液蒸乾，殘渣加20％甲醇溶液溶解，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液；測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，清開靈注射液中黃芩苷含量應為2～7mg/ml。
綠原酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C4柱，以乙腈∶0.5％磷酸＝25∶75為流動相，流速為1.2ml/min，柱溫20℃，檢測波長為600nm；理論塔板數按綠原酸峰計算應不低於1500。
對照品溶液的製備 精密稱取綠原酸對照品，加70％甲醇溶解製成每1ml含綠原酸30μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈注射液5ml，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加70％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，清開靈注射液中綠原酸含量應不得少於0.15mg/ml。
膽酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C4柱，甲醇∶水＝75∶25為流動相；流速為0.6ml/min，柱溫20℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為25℃，霧化氣體為氮氣，氣體流速為1.0L/min，理論塔板數按膽酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取膽酸對照品，加甲醇溶解製成每1ml含1mg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈注射液5ml，加20％甲醇溶液5ml超聲處理15分鐘，放冷，加80％甲醇稀釋至10ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法對數方程計算含量，清開靈注射液中膽酸含量應為1-4mg/ml。
豬去氧膽酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C4柱，乙腈∶水＝85∶15為流動相；流速為0.6ml/min，柱溫20℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為25℃，霧化氣體為空氣，氣體流速為4.0L/min，理論塔板數按膽酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取豬去氧膽酸對照品，加甲醇溶解製成每1ml含2mg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈注射液2ml，加10％甲醇溶液5ml超聲處理15分鐘，放冷，加70％甲醇稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法對數方程計算含量，清開靈注射液中豬去氧膽酸含量應為1-4mg/ml。
所述清開靈注射液為石家莊神威藥業生產。
本發明實施例3本發明所述大輸液的質量控制方法為性狀產品為黃色至棕黃色的澄明液體。
鑑別取大輸液200ml，置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加乙醇2.5ml使溶解，取上清液即得供試品溶液；另取梔子苷對照品，加乙醇製成每1ml含10mg的溶液，作為對照品溶液；吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以磷酸-丙酮-甲酸-水＝10∶2∶0.5∶2為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約15分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查不溶性微粒 取大輸液，照中國藥典2005年版一部附錄「不溶性微粒檢查法」第一法測定，應符合規定。
樹脂 取清開靈大輸液5ml，置分液漏鬥中，加氯仿10ml振搖提取，分取氯仿液，蒸乾，殘渣加冰醋酸3ml使溶解，置具塞試管中，加水4ml，混勻，放置40分鐘，應無絮狀物析出。
草酸鹽 取清開靈大輸液5ml，用稀鹽酸調節PH值至1～2，50℃保溫10分鐘，保溫濾去沉澱，調節PH值至5～6，取2ml，加3％氯化鈣溶液2～3滴，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
重金屬 取清開靈大輸液2ml，蒸乾，緩緩烘至約完全灰化，放冷，對照管取標準鉛溶液1ml，照中國藥典2005年版一部附錄「重金屬檢查法」第二法測定，1ml水溶液中含重金屬不得過百萬分之十。
砷鹽 取清開靈大輸液1ml，蒸乾，加5％硝酸鎂乙醇溶液1ml，點燃，燃盡後，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸1ml與水10ml使溶解，照中國藥典2005年版一部附錄「砷鹽檢查法」第一法測定，1ml水溶液中含砷量不得過百萬分之二。
溶血與凝聚 2％紅細胞混懸液的製備 取兔血或羊血數毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖5分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加5倍量的生理氯化鈉溶液洗滌1～3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得。

試驗方法 取試管6支，按上表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻後，於37℃恆溫箱中放置10分鐘，分別加入不同量的藥液，第6管為對照管；搖勻後，置37℃恆溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時後，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。
按上法檢查，以第3管為準，本品在2小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚。
鋇離子 取鉑絲，用鹽酸溼潤後，蘸取清開靈大輸液，在無色火焰中燃燒，火焰未顯黃綠色，通過綠色玻璃透視，火焰未顯藍色。
取清開靈大輸液10ml，滴加10-30滴0.15％的CaCl2溶液，不得出現混濁或沉澱。
其他 應符合中國藥典2005年版一部附錄注射劑項下有關的各項規定。
含量測定綠原酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C18柱，以甲醇∶0.7％磷酸＝20∶80為流動相，流速為1.0ml/min，柱溫40℃，檢測波長為500nm；理論塔板數按綠原酸峰計算應不低於1000。
對照品溶液的製備 精密稱取綠原酸對照品，加85％甲醇溶解製成每1ml含綠原酸50μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈大輸液20ml，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加50％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，清開靈大輸液中綠原酸含量應不得少於0.018mg/ml。
豬去氧膽酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C8柱，甲醇∶水∶甲酸＝40∶60∶0.01為流動相；流速為1.2ml/min，柱溫50℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為115℃，霧化氣體為氮氣，氣體流速為1.0L/min，理論塔板數按膽酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取豬去氧膽酸對照品，加甲醇溶解製成每1ml含1mg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈大輸液20ml，加3％甲醇溶液10ml超聲處理5分鐘，放冷，加20％甲醇稀釋至10ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法對數方程計算含量，清開靈大輸液中豬去氧膽酸含量應為0.12-1.2mg/ml。
含氮量 取清開靈大輸液，照中國藥典2005年版一部附錄「含氮量」第二法測定，大輸液含氮量為0.18-1.2mg/ml。
所述清開靈大輸液按照已經申請的專利，名稱為清開靈凍乾粉製劑的製備方法，申請號200510003126.5所述方法製備。
本發明實施例4本發明所述凍乾粉的質量控制方法為性狀產品為淺黃色至棕黃色疏鬆塊狀物。
鑑別取凍乾粉的內容物200mg，加乙醇5ml使溶解，取上清液即得供試品溶液；另取梔子苷對照品，加乙醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水＝2∶10∶1∶0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約10分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查不溶性微粒 取清開靈凍乾粉200mg加淨化水100ml使溶解，用淨化水做空白，照中國藥典2005年版一部附錄「不溶性微粒檢查法」第一法測定，應符合規定。
蛋白質 取清開靈凍乾粉200mg加水1ml使溶解，取1ml置試管中，滴加鞣酸試液1-5滴，不得產生渾濁。
鞣質 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，取1ml，加新配製的含2％雞蛋清的生理鹽水10ml，放置20分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
樹脂 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，分別取上述溶液5ml，置分液漏鬥中，加氯仿20ml振搖提取，分取氯仿液，蒸乾，殘渣加冰醋酸5ml使溶解，置具塞試管中，加水5ml，混勻，放置50分鐘，應無絮狀物析出。
重金屬 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，分別吸取1ml，蒸乾，緩緩烘至約完全灰化，放冷，對照管取標準鉛溶液1ml，照中國藥典2005年版一部附錄「重金屬檢查法」第二法測定，1ml水溶液中含重金屬不得過百萬分之十。
鉀離子 取清開靈凍乾粉200mg加水10ml使溶解，分別吸取5ml，蒸乾，照中國藥典2005年版一部附錄「注射劑有關物質檢查法」測定，應符合規定。
溶血與凝聚 2％紅細胞混懸液的製備 取兔血或羊血數毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖20分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加20倍量的生理氯化鈉溶液洗滌3～5次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得。

試驗方法 取試管6支，按上表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻後，於37℃恆溫箱中放置60分鐘，分別加入不同量的藥液，其中凍乾粉取200mg，用生理氯化鈉溶液溶解並稀釋成40ml，第6管為對照管；搖勻後，置37℃恆溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時後，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。
按上法檢查，以第3管為準，本品在2小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚。
鋇離子 取清開靈凍乾粉200mg用注射用水1ml溶解，取藥液，滴加稀硫酸，即生成白色沉澱，分離，沉澱在鹽酸或硝酸中均溶解。
熾灼殘渣檢查 取清開靈凍乾粉200mg用10ml注射用水溶解，分別取藥液5ml，照中國藥典2005年版一部附錄「熾灼殘渣檢查法」測定，應小於2％。
水分 取凍乾粉，照中國藥典2005年版一部附錄「水分測定法」第三法測定，不得過5.0％。
其他 應符合中國藥典2005年版一部附錄注射劑項下有關的各項規定。
含量測定梔子苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱為C8柱，以甲醇∶水＝25∶75為流動相，流速為0.8ml/min，柱溫30℃，檢測波長為300nm；理論塔板數按梔子苷峰計算應不低於1500。
對照品溶液的製備 精密稱取梔子苷對照品，加甲醇溶解製成每1ml含80μg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉50mg，加40％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，清開靈凍乾粉中梔子苷含量應不得少於0.8％。
黃芩苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C8柱，以甲醇∶0.5％磷酸＝40∶60為流動相，流速為1.2ml/min，柱溫50℃，檢測波長為350nm；理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低於2500。
對照品溶液的製備 精密稱取黃芩昔對照品，加甲醇溶解製成每1ml含黃芩苷100μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉50mg，用80％甲醇溶液溶解並稀釋至50ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀測定，清開靈凍乾粉中黃芩苷含量應為5％～17.5％。
膽酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C8柱，甲醇∶水∶甲酸＝75∶25∶0.01為流動相；流速為1.2ml/min，柱溫50℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為115℃，霧化氣體為空氣，氣體流速為4.0L/min，理論塔板數按膽酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取膽酸對照品，加甲醇溶解製成每1ml含0.3mg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉100mg，加50％甲醇溶液10ml超聲處理5min，放冷，加50％甲醇稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法對數方程計算含量，清開靈凍乾粉中膽酸含量應為2.5％-10％。
所述清開靈凍乾粉按照已經申請的專利，名稱為清開靈凍乾粉製劑的製備方法，申請號；200510003126.5所述方法生產。
本發明實施例5所述清開靈注射製劑的質量控制方法為性狀對於凍乾粉產品為淺黃色至棕黃色疏鬆塊狀物。
對於注射液產品為棕黃色或棕紅色的澄明液體。
對於大輸液產品為黃色至棕黃色的澄明液體。
鑑別(1)分別取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml溶解，取0.5ml加新制的糠醛溶液(1→100)1ml與硫酸溶液(取硫酸50ml，加水65ml，混合)10ml，混勻，在70℃水浴中加熱，溶液顯灰紫色。
(2)取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉供試品溶液的製備方法為取凍乾粉的內容物400mg，加乙醇2.5ml使溶解，取上清液即得；注射液或大輸液供試品溶液的製備方法為取注射液5ml或大輸液50ml，置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加乙醇1.25ml使溶解，取上清液即得。另取梔子苷對照品，加乙醇製成每1ml含4mg的溶液，作為對照品溶液。吸取對照品溶液和供試品溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水＝5∶5∶1∶1為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃烘約10分鐘。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
檢查不溶性微粒 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加淨化水80ml使溶解，用淨化水做空白，照中國藥典2005年版一部附錄「不溶性微粒檢查法」第一法測定，應符合規定。
PH值 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，分別測其PH值，其PH值均應為6.5～8.0。
蛋白質 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，分別取1ml置試管中，滴加鞣酸試液1-3滴，不得產生渾濁。
鞣質 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，取1ml，加新配製的含1％雞蛋清的生理鹽水5ml，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
樹脂 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，分別取上述溶液5ml，置分液漏鬥中，加氯仿10ml振搖提取，分取氯仿液，蒸乾，殘渣加冰醋酸2ml使溶解，置具塞試管中，加水3ml，混勻，放置30分鐘，應無絮狀物析出。
草酸鹽 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，分別取上述溶液5ml，用稀鹽酸調節PH值至1～2，50℃保溫10分鐘，保溫濾去沉澱，調節PH值至5～6，取2ml，加3％氯化鈣溶液2～3滴，放置10分鐘，不得出現渾濁或沉澱。
重金屬 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，分別吸取1ml，蒸乾，緩緩烘至約完全灰化，放冷，對照管取標準鉛溶液1ml，照中國藥典2005年版一部附錄「重金屬檢查法」第二法測定，1ml水溶液中含重金屬不得過百萬分之十。
砷鹽 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，分別吸取1ml，蒸乾，加2％硝酸鎂乙醇溶液3ml，點燃，燃盡後，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸5ml與水21ml使溶解，照中國藥典2005年版一部附錄「砷鹽檢查法」第一法測定，1ml水溶液中含砷量不得過百萬分之二。
鉀離子 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg加水5ml使溶解，分別吸取2ml，蒸乾，照中國藥典2005年版一部附錄「注射劑有關物質檢查法」測定，應符合規定。
異常毒性 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉加氯化鈉注射液製成每1ml中含40mg的溶液，照中國藥典2005年版二部附錄「異常毒性檢查法」檢查，按靜脈注射法給藥，應符合規定。
溶血與凝聚 2％紅細胞混懸液的製備 取兔血或羊血數毫升，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加約10倍量的生理氯化鈉溶液洗滌2～3次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得。

試驗方法 取試管6支，按上表中配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻後，於37℃恆溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液，其中凍乾粉取200mg，用生理氯化鈉溶液溶解並稀釋成20ml，第6管為對照管；搖勻後，置37℃恆溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時後，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。
按上法檢查，以第3管為準，本品在2小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚。
鋇離子 取鉑絲，用鹽酸溼潤後，蘸取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，在無色火焰中燃燒，火焰未顯黃綠色，通過綠色玻璃透視，火焰未顯藍色。
取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg用注射用水5ml注射用水溶解，分別取藥液，滴加5-10滴0.1％的CaCl2溶液或Ca(OH)2溶液，不得出現混濁或沉澱。
熾灼殘渣檢查 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉200mg用5ml注射用水溶解，分別取藥液2ml，照中國藥典2005年版一部附錄「熾灼殘渣檢查法」測定，應小於2％。
水分 取凍乾粉，照中國藥典2005年版一部附錄「水分測定法」第三法測定，不得過5.0％。
其他 應符合中國藥典2005年版一部附錄注射劑項下有關的各項規定。
含量測定梔子苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件和系統適用性試驗 色譜柱為C18柱，以甲醇∶水＝30∶70為流動相，流速為1ml/min，柱溫40℃，檢測波長為237nm；理論塔板數按梔子苷峰計算應不低於1500。
對照品溶液的製備 精密稱取梔子苷對照品，加甲醇溶解製成每1ml含60μg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉30mg，加50％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得；或取清開靈注射液0.75ml或清開靈大輸液2.5ml，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加50％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，該清開靈製劑中，凍乾粉中梔子苷含量應不得少於0.8％、注射液中梔子苷含量應不得少於0.4mg/ml、大輸液中梔子苷含量應不得少於0.04mg/ml。
黃芩苷 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C18柱，以乙腈∶0.4％磷酸＝26∶74為流動相，流速為1ml/min，柱溫40℃，檢測波長為277nm；理論塔板數按黃芩苷峰計算應不低於2500。
對照品溶液的製備 精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇溶解製成每1ml含黃芩苷60μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉12.5mg，用50％甲醇溶液溶解並稀釋至25ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液；或取清開靈注射液1.25ml或清開靈大輸液4ml，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣用50％甲醇溶液溶解並稀釋至100ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀測定，該清開靈製劑中，凍乾粉中黃芩苷含量應為5％～17.5％、注射液中黃芩苷含量應為2～7mg/ml、大輸液中黃芩苷含量應為0.24～2.1mg/ml。
綠原酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C18柱，以乙腈∶0.4％磷酸＝10∶90為流動相，流速為1.0ml/min，柱溫40℃，檢測波長為327nm；理論塔板數按綠原酸峰計算應不低於1000。
對照品溶液的製備 精密稱取綠原酸對照品，加50％甲醇溶解製成每1ml含綠原酸20μg的溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉150mg，加50％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得；或取清開靈注射液3.75ml或大輸液12.5ml，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加50％甲醇溶解並稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，該清開靈製劑中，凍乾粉中綠原酸含量應不得少於0.4％、注射液中綠原酸含量應不得少於0.15mg/ml、大輸液中綠原酸含量應不得少於0.018mg/ml。
膽酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C18柱，甲醇∶水∶冰醋酸＝80∶20∶0.01為流動相；流速為1.0ml/min，柱溫40℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為105℃，霧化氣體為空氣，氣體流速為2.2L/min，理論塔板數按膽酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取膽酸對照品，加甲醇溶解製成每1ml含0.5mg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉50mg，加5％甲醇溶液3ml超聲處理10分鐘，放冷，加50％甲醇稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液；或取清開靈注射液1.25ml或大輸液10ml，加5％甲醇溶液3ml超聲處理10分鐘，放冷，加50％甲醇稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法對數方程計算含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中膽酸含量應為2.5％-10％、注射液中膽酸含量應為1-4mg/ml、大輸液中膽酸含量應為0.12-1.2mg/ml。
豬去氧膽酸 照高效液相色譜法測定。
色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱為C18柱，甲醇∶水∶冰醋酸＝80∶20∶0.01為流動相；流速為1.0ml/min，柱溫40℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為105℃，霧化氣體為空氣，氣體流速為2.2L/min，理論塔板數按膽酸峰計算應不低於2000。
對照品溶液的製備 取豬去氧膽酸對照品，加甲醇溶解製成每1ml含0.5mg的對照品溶液，搖勻，即得。
供試品溶液的製備 取清開靈凍乾粉50mg，加5％甲醇溶液3ml超聲處理10分鐘，放冷，加50％甲醇稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液；或取清開靈注射液1.25ml或大輸液10ml，加5％甲醇溶液3ml超聲處理10分鐘，放冷，加50％甲醇稀釋至5ml，搖勻，0.45μm濾膜濾過，即得供試品溶液。
測定法 分別精密吸取對照品溶液5μl、10μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法對數方程計算含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中豬去氧膽酸含量應為2.5％-10％、注射液中豬去氧膽酸含量應為1-4mg/ml、大輸液中豬去氧膽酸含量應為0.12-1.2mg/ml。
含氮量 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，照中國藥典2005年版一部附錄「含氮量」第二法測定，其中凍乾粉含氮量為4％-10％、注射液含氮量為1.6-4mg/ml、大輸液含氮量為0.18-1.2mg/ml。
所述清開靈製劑按照已經申請的專利，名稱為清開靈凍乾粉製劑的製備方法，申請號200510003126.5所述方法製備。
權利要求
1.一種清開靈注射製劑的質量控制方法，所述注射製劑包括凍乾粉、注射液和大輸液，其特徵在於所述質量控制方法包括性狀、鑑別、檢查、含量測定；其中鑑別包括糠醛反應、以梔子苷為對照品的薄層鑑別的部分或全部；檢查包括不溶性微粒、PH值、蛋白質、鞣質、樹脂、草酸鹽、重金屬、砷鹽、鉀離子、異常毒性、溶血與凝聚、鋇離子、熾灼殘渣檢查、水分以及其他應符合注射劑項下的各項規定中的部分或全部；含量測定包括以梔子苷對照品、黃芩苷對照品、綠原酸對照品、膽酸對照品、豬去氧膽酸對照品作為該製劑含量測定方法的檢測指標，以及含氮量測定的部分或全部。
2.按照權利要求1所述清開靈注射製劑的質量控制方法，其特徵在於含量測定方法包括以下項目的部分或全部梔子苷 採用高效液相色譜法，色譜柱為C18或C4或C8柱，以甲醇或乙腈∶水＝20～40∶80～60為流動相，流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，檢測波長為205～350nm；精密稱取梔子苷對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或清開靈大輸液，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，或以氯仿提取，放冷，提取液蒸乾，殘渣加甲醇-水溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中梔子苷含量應不得少於0.8％、注射液中梔子苷含量應不得少於0.4mg/ml、大輸液中梔子苷含量應不得少於0.04mg/ml；黃芩苷 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，以乙腈或甲醇∶0.3～0.5％磷酸＝10～40∶90～60為流動相，流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，檢測波長為205～350nm；精密稱取黃芩苷對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或清開靈大輸液，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，或以乙酸乙酯和甲醇的混合溶液提取，放冷，提取液蒸乾，殘渣加甲醇-水溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中黃芩苷含量應為5％～17.5％、注射液中黃芩苷含量應為2～7mg/ml、大輸液中黃芩苷含量應為0.24～2.1mg/ml綠原酸 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，以乙腈或甲醇∶0.2～0.7％磷酸＝5～25∶95～75為流動相，流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，檢測波長為245～600nm；精密稱取綠原酸對照品，加甲醇-水溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉，用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或大輸液，先置水浴上蒸乾，放冷，殘渣用甲醇-水溶液溶解，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中綠原酸含量應不得少於0.4％、注射液中綠原酸含量應不得少於0.15mg/ml、大輸液中綠原酸含量應不得少於0.018mg/ml；膽酸 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，流動相為∶甲醇或乙腈∶水＝40-85∶60-15，或為甲醇或乙腈∶水∶冰醋酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.99，或為甲醇或乙腈∶水∶甲酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.5，流動相流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為25-115℃，霧化氣體為空氣或氮氣，氣體流速為1.0-4.0L/min；取膽酸對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉，加甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或大輸液，以甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定，按外標兩點法對數方程計算含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中膽酸含量應為2.5％-10％、注射液中膽酸含量應為1-4mg/ml、大輸液中膽酸含量應為0.12-1.2mg/ml；豬去氧膽酸 照高效液相色譜法測定，色譜柱為C18或C4或C8柱，流動相為甲醇或乙腈∶水＝40-85∶60-15，或為甲醇或乙腈∶水∶冰醋酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.99，或為甲醇或乙腈∶水∶甲酸＝40-85∶60-15∶0.01-0.5，流動相流速為0.6-1.2ml/min，柱溫20-50℃，蒸發光散射檢測器漂移管溫度為25-115℃，霧化氣體為空氣或氮氣，氣體流速為1.0-4.0L/min；取豬去氧膽酸對照品，加甲醇溶解，搖勻，即得對照品溶液；取清開靈凍乾粉，加甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液，或取清開靈注射液或大輸液，以甲醇-水溶液超聲處理5-30分鐘，放冷，加甲醇-水溶液溶解，搖勻，濾膜濾過，即得供試品溶液；精密吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀測定，按外標兩點法對數方程計算含量，該清開靈製劑中，凍乾粉中豬去氧膽酸含量應為2.5％-10％、注射液中豬去氧膽酸含量應為1-4mg/ml、大輸液中豬去氧膽酸含量應為0.12-1.2mg/ml；含氮量取清開靈製劑，照中國藥典氮測定法測定，其中凍乾粉含氮量為4％-10％、注射液含氮量為1.6-4mg/ml、大輸液含氮量為0.18-1.2mg/ml。
3.按照權利要求1所述清開靈注射製劑的質量控制方法，其特徵在於鑑別方法包括以下項目的部分或全部(1)分別取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，凍乾粉用水溶解，加入糠醛溶液與硫酸溶液混勻，水浴加熱，溶液顯灰紫色；(2)取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉供試品溶液的製備方法為取凍乾粉的內容物，加乙醇溶解，取上清液即得；注射液或大輸液供試品溶液的製備方法為取注射液5-20ml或大輸液50-200ml，置水浴上蒸乾，放冷，殘渣加乙醇使溶解，取上清液即得；另取梔子苷對照品，加乙醇溶解，作為對照品溶液；將對照品溶液和供試品溶液分別點於同一矽膠G薄層板上，以醋酸乙酯或磷酸∶丙酮∶甲酸∶水＝2-10∶2-10∶0.5-2∶0.5-2為展開劑，以10％硫酸乙醇溶液為顯色劑，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
4.按照權利要求1所述清開靈注射製劑的質量控制方法，其特徵在於所述性狀為凍乾粉產品為淺黃色至棕黃色疏鬆塊狀物注射液產品為棕黃色或棕紅色的澄明液體；大輸液製劑產品為黃色至棕黃色的澄明液體。
5.按照權利要求1所述清開靈注射製劑的質量控制方法，其特徵在於檢查方法包括以下項目的部分或全部不溶性微粒 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加淨化水50-100ml使溶解，用淨化水做空白，照中國藥典2005年版一部附錄「不溶性微粒檢查法」第一法測定，應符合規定；PH值 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別測其PH值，其PH值均應為5-9；蛋白質 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別取1ml置試管中，滴加鞣酸試液1-5滴，不得產生渾濁；鞣質 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，取1ml，加新配製的含1-5％雞蛋清的生理鹽水1-10ml，放置5-20分鐘，不得出現渾濁或沉澱；樹脂 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別取上述溶液5ml，置分液漏鬥中，加氯仿5-20ml振搖提取，分取氯仿液，蒸乾，殘渣加冰醋酸1-5ml使溶解，置具塞試管中，加水1-5ml，混勻，放置20-50分鐘，應無絮狀物析出；草酸鹽 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別取上述溶液5ml，用稀鹽酸調節PH值至1～3，30-70℃保溫5-20分鐘，保溫濾去沉澱，調節PH值至4～7，取1-5ml，加1-5％氯化鈣溶液1～5滴，放置5-20分鐘，不得出現渾濁或沉澱；重金屬 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別吸取1-2ml，蒸乾，緩緩烘至約完全灰化，放冷，對照管取標準鉛溶液1ml，照中國藥典2005年版一部附錄「重金屬檢查法」第二法測定，1ml水溶液中含重金屬不得過百萬分之十；砷鹽 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別吸取1ml，蒸乾，加1-5％硝酸鎂乙醇溶液1-5ml，點燃，燃盡後，先用小火熾灼使炭化，再在500～600℃熾灼至完全灰化，放冷，加鹽酸1-10ml與水10-30ml使溶解，照中國藥典2005年版一部附錄「砷鹽檢查法」第一法測定，1ml水溶液中含砷量不得過百萬分之二；鉀離子 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg加水1-10ml使溶解，分別吸取1-5ml，蒸乾，照中國藥典2005年版一部附錄「注射劑有關物質檢查法」測定，應符合規定；異常毒性 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉加氯化鈉注射液製成每1ml中含30-50mg的溶液，照中國藥典2005年版二部附錄「異常毒性檢查法」檢查，按靜脈注射法給藥，應符合規定；溶血與凝聚 2％紅細胞混懸液的製備取兔血或羊血，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖5-20分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血，加5-20倍量的生理氯化鈉溶液洗滌1-5次，至上清液不顯紅色為止，將所得紅細胞用生理氯化鈉溶液配成2％的混懸液，即得；試管編號1、2％紅血球混懸液2.5ml，生理氯化鈉溶液2.0ml，藥液0.5ml；編號2、2％紅血球混懸液2.5ml，生理氯化鈉溶液2.1ml，藥液0.4ml；編號3、2％紅血球混懸液2.5ml，生理氯化鈉溶液2.2ml，藥液0.3ml；編號4、2％紅血球混懸液2.5ml，生理氯化鈉溶液2.3ml，藥液0.2ml；編號5、2％紅血球混懸液2.5ml，生理氯化鈉溶液2.4ml，藥液0.1ml；編號6、2％紅血球混懸液2.5ml，生理氯化鈉溶液2.5ml，藥液0ml；試驗方法 取試管6支，按上述配比量依次加入2％紅細胞混懸液和生理氯化鈉溶液，混勻後，於37℃恆溫箱中放置10-60分鐘，分別加入不同量的藥液，其中凍乾粉取200mg，用生理氯化鈉溶液溶解並稀釋成5-40ml，編號6的第6管為對照管；搖勻後，置37℃恆溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時後，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時；按上法檢查，以編號3的第3管為準，本品在2小時內不得出現溶血和紅細胞凝聚；鋇離子 取鉑絲，用鹽酸溼潤後，蘸取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，在無色火焰中燃燒，火焰未顯黃綠色，通過綠色玻璃透視，火焰未顯藍色；取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg用注射用水1-10ml注射用水溶解，分別取藥液，滴加1-50滴0.01-0.2％的CaCl2溶液或Ca(OH)2溶液，不得出現混濁或沉澱；熾灼殘渣檢查 取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg用1-10ml注射用水溶解，分別取藥液1-5ml，照中國藥典灼殘渣檢查法檢查，應小於2％；水分 取凍乾粉，照中國藥典2005年版一部附錄「水分測定法」第三法測定，不得過5.0％其他 應符合中國藥典2005年版一部附錄注射劑項下有關的各項規定。
6.按照權利要求5所述清開靈注射製劑的質量控制方法，其特徵在於鋇離子的檢查方法為取清開靈凍乾粉、注射液或大輸液，其中凍乾粉200mg用注射用水1-5ml溶解，分別取藥液，滴加稀硫酸，即生成白色沉澱，分離，沉澱在鹽酸或硝酸中均溶解。
全文摘要
本發明提供了一種清開靈注射製劑的質量控制方法，包括性狀、鑑別、檢查、含量測定，其中，梔子苷的鑑別方法採用矽膠G薄層板，以醋酸乙酯－丙酮－甲酸－水作為展開劑；在梔子苷的含量測定方法中，梔子苷對照品採用甲醇溶解；膽酸和豬去氧膽酸的含量測定方法中採用高效液相色譜法，使用蒸發光散色檢測器，其檢測結果準確；本發明還對清開靈製劑中所含氮氣及不溶性微粒等項目進行檢查，避免不良反應產生；採用本發明方法控制清開靈製劑的質量，不僅鑑別方法專屬性強，含量測定方法重現性好；同時，本發明檢查方法全面，能有效避免藥物不良反應產生，含量測定項目能確保藥物的療效，達到了有效控制藥物質量的發明目的。
文檔編號G01N33/15GK1739655SQ20051020053
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月14日 優先權日2005年9月14日
發明者葉湘武, 湯瓊, 張梅 申請人:貴州益佰製藥股份有限公司