一種同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法

2023-09-19 21:01:15 2

一種同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法
【專利摘要】本發明公開了一種同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵在於，該方法是將菸草樣品中加入無水硫酸鈉、內標和酸化乙腈後，渦旋提取，離心分層，取一定量萃取液過固相萃取小柱淨化，用體積比3：1的乙腈/甲苯混合液洗脫，將洗脫液濃縮，並以正己烷進行溶劑交換，過有機相濾膜，用氣相色譜-質譜聯用儀進行檢測。本發明簡化了菸草樣品前處理方法，縮短了樣品分析時間，同時得到乾淨的上機溶液，減少儀器的維護頻率和使用成本。
【專利說明】一種同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於農藥殘留分析檢測【技術領域】，涉及的農藥殘留分析檢測方法，尤其涉 及一種同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法。

【背景技術】
[0002] 農業產業化的發展，農產品的生產越來越依賴於農藥、抗生素和激素等化學、生物 製品。而這些物質的不合理使用必將導致農產品中的殘留超標，影響消費者食用安全，嚴重 時會造成消費者致病、發育不正常，甚至直接導致中毒死亡。控制農藥殘留對人體的危害， 最為有效的方法之一是加強對化學、生物製品使用的監管，為保障監管必須提高食品中農 藥殘留檢測的能力水平和效率。當今世界農藥殘留檢測向多殘留、快速分析發展，多殘留 檢測是農殘分析的一個重要趨勢，具有"多"、"快"、"準"三大優勢。國內自2006年開始到 2008年止，水果和蔬菜、糧谷、茶葉、果蔬汁和果酒、牛奶和奶粉、食用菌等農產品相繼制訂 了同時測定100種以上農藥的多殘留檢測標準。
[0003] 菸草作為特殊的經濟作物，在生產過程中為了有效的控制病蟲害常使用各種類型 的農藥，經常發生農藥殘留超標現象，菸葉農藥殘留已經成為影響菸葉安全性的一個重要 因素，菸草行業於2011年發布了 3個菸草多農殘檢測行業標準，該系列標準使用4種前處 理方法,3種分析方法，可以檢測146種農藥。其中極性較大的73種農藥採用QuEChERS淨 化後，使用LC/MS/MS進行分析，非極性或中等極性的38種農藥用QuEChERS方法處理後，過 矽膠和弗洛裡矽土小柱進行淨化，使用GC/MS和GC/ECD進行分析，而有機氯及擬除蟲菊酯 類35種農藥單獨作為一類，過固相萃取小柱後，使用GC/ECD進行分析。使用上述行業標準 分析菸草中使用範圍較廣的幾種農藥，如甲霜靈、仲丁靈、二甲戊靈、氟節胺、高效氯氟氰菊 酯、菌核淨（以上3個標準不含菌核淨）6種農藥，同樣需要採用4種前處理方法，耗時耗力， 效率低下。
[0004] 為了縮短分析時間，提高檢測效率，中國菸草總公司在2014年又發布了一項菸草 及菸草製品多農殘檢測的企業標準，使用氣相色譜-串聯質譜儀和液相色譜-串聯質譜儀 檢測，其中氣質串聯方法檢測169種農藥，液質串聯方法檢測141種農藥。兩種方法均採用 QuEChERS方法進行樣品前處理，串聯質譜方法進行分析。與之前的行業標準相比可大大提 高工作效率，減輕勞動負擔。
[0005]QuEChERS方法是目前世界上公認的簡單、快速的樣品前處理技術，在水果蔬菜上 的應用較廣。QuEChERS方法中PSA具有一定的去除色素能力，但是相對偏弱，淨化後的上機 溶液中仍存在大量色素和其他雜質，尤其是對一些基質複雜的樣品如茶葉、菸草等，其淨化 效果還存在一定的局限性，只能使用抗幹擾能力強的GC/MS/MS和LC/MS/MS串聯質譜進行 檢測，隨著進樣次數的增多，色素會汙染襯管、色譜柱和檢測器，使得後期結果失真，增加維 護儀器的頻率，尤其是對活性農藥檢測結果的準確性影響更大。因此在菸草的多農殘檢測 工作中，尤其是大批量樣品分析時，乾淨的上機溶液對於保證檢測結果的準確性尤為重要。


【發明內容】

[0006] 鑑於現有技術的不足，本發明的目的在於進一步簡化菸草樣品前處理方法，縮短 樣品分析時間，同時得到乾淨的上機溶液，減少儀器的維護頻率和使用成本，從而提供一種 準確度高、重現性好、適用範圍更廣的多農殘同時檢測方法。
[0007] 為了實現本發明的目的，發明人通過大量試驗研究並不懈探索，最終獲得了如下 技術方案：
[0008] -種同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵在於，該方法是 將菸草樣品中加入無水硫酸鈉、內標和酸化乙腈後，渦旋提取，離心分層，取一定量萃取液 過固相萃取小柱淨化，用體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗脫，將洗脫液濃縮，並以正己烷 進行溶劑交換，過有機相濾膜，用氣相色譜-質譜聯用儀進行檢測。
[0009] 優選地，如上所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其具體的 操作步驟如下：
[0010] ⑴內標混合溶液的配製：配製滅蟻靈和氯唑磷濃度均為5 y g/mL的正己烷內標 混合溶液；
[0011] (2)農藥目標物提取：稱取2. 000g煙末於50mL離心管中，加入5g無水硫酸鈉、 100UL步驟⑴配製的內標混合溶液，以及20mL 1%甲酸的乙腈溶液，渦旋震蕩3分鐘，以 4000r/min離心10分鐘，吸取5mL上清液到10mL離心管中，待淨化；
[0012] (3)固相萃取小柱活化：TPT固相萃取小柱中加入2cm高無水硫酸鈉，用5mL體積 比3 :1的乙腈/甲苯混合液活化柱子，棄去流出液；
[0013] (4)提取液的淨化：將步驟⑵得到的提取液轉移到步驟⑶活化後的固相萃取 小柱中，用2mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌試管，重複兩次，並將洗滌液轉移至小 柱中，用10mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌小柱，收集流出液至平底燒瓶中；
[0014] (5)洗脫液的濃縮、溶劑置換：將步驟⑷得到的流出液在40°C水浴的旋轉蒸發儀 中濃縮近幹，用5mL正己烷進行溶劑置換，重複兩次，加入lmL正己烷，轉動燒瓶使壁上殘 留農藥充分溶解，渦旋混勻，過〇.45 y m有機相濾膜，待測GC/MS ;
[0015] (6)標準儲備液配製：將待測的101種農藥分成9組，每組10-13種農藥，分別稱 取0. 0100g農藥標準品，用體積比為9:1的正己烷/丙酮溶液定容於10mL容量瓶中，配製 成9組濃度為1000 ii g/mL的101種農藥的標準儲備液；
[0016] (7)混合標準溶液配製：將步驟（6)中標準儲備液各取0. lmL，等比例稀釋到10mL 容量瓶中，用正己烷定容，得到濃度為10Ug/mL的101種農藥的混合標準溶液；
[0017] (8)空白菸草樣品基質的製備：稱量2. 0g不含目標農藥的菸草樣品，共五份，除不 添加內標溶液外，其他均按照步驟（2)、（3)、（4)和（5)進行操作，製備空白菸草樣品基質提 取液；
[0018] (9)基質混合標準溶液配製：準確移取步驟（7)中濃度為10yg/mL的混合標準溶 液2mL，置於10mL容量瓶中，用正己烷定容，配製成各農藥濃度為2yg/mL的混合標準溶液 I;準確移取〇.〇125、0. 025、0. 0625、0. 125、0. 2mL的混合標準溶液I，準確移取50 iiL步驟 (1)中內標溶液，加到l.OmL的空白菸草樣品基質提取液中，混勻，配成具有濃度梯度的目 標農藥的基質混合標準工作溶液，配製的系列標準溶液的濃度分別為：〇. 025、0. 05、0. 125、 0. 25>0. 4 u g/mL；
[0019] (10)GC/MS測定：將步驟（9)中的基質混合標準溶液，過0.45ilm有機濾膜後，進 GC/MS進行測定；
[0020] (11)農藥殘留結果計算：採用內標法進行農藥目標物的定量分析，即以農藥和內 標物的定量離子峰面積比對其相應濃度進行回歸分析，得到標準曲線，對提取後的樣品進 行測定，測得檢出農藥和內標物定量離子峰面積比值，代入標準曲線，求的樣品中農藥的含 量。
[0021] 進一步優選地，如上所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其 中步驟（10)中GC/MS測定時採用的色譜條件為：色譜柱DB-5MS彈性毛細管色譜柱，規格為 30mX0. 25_X0. 25iim;進樣口 ：250°C;初始溫度 50°C，保持 5min，以 25°C/min速率升至 150°C，保持Omin，以3°C速率升至200°C，保持Omin，以8°C速率升至280°C，保持5min，以 10°C/min速率升至300°C，保持lOmin，總運行時間為52-53min。
[0022] 進一步優選地，如上所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其 中步驟（10)中GC/MS測定時採用的質譜條件為：電子轟擊離子源，70ev，離子源溫度300°C; 接口溫度：280°C，四級杆溫度：180°C;溶劑延遲6min;掃描模式：選擇離子監測。
[0023] 再進一步優選地，如上所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法， 其中所述的101種農藥包括：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內吸磷、滅線磷、二溴 磷、氟樂靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗、a-HCH、林丹、0-HCH、S-HCH、 op〃-DDE、pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、op〃-DDT、pp〃-DDT、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環氧 七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、硫丹、硫丹硫酸酯、樂果、 克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫 磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷、乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除 芽通、丁草胺、氟節胺、敵草胺、除草醚、異稻瘟淨、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核淨、戊菌唑、 毒蟲畏、噻菌靈、滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈、七氟菊酯、聯苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、順式_氯菊酯、反式_氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯、順式-氟 氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、 溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨、水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍 硫磷、乙基對硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
[0024] 再進一步優選地，如上所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法， 其中步驟（6)中將101種農藥分成如下9組：
[0025] 第1組13種：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂 靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗；
[0026]第 2 組 10 種a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、op//-DDE、pp//-DDE、op//-DDD、pp//_DDD、 op"-DDT、pp〃-DDT;
[0027] 第3組11種：五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環氧七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反 式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、3 -硫丹、硫丹硫酸酯；
[0028] 第4組13種：樂果、克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、 皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷；
[0029] 第5組11種：乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁 草胺、氟節胺、敵草胺、除草醚；
[0030] 第6組12種：異稻瘟淨、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核淨、戊菌唑、毒蟲畏、噻菌靈、 滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、 11 惡霜靈；
[0031] 第7組10種：七氟菊酯、聯苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、順式-氯 菊酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯；
[0032] 第8組10種：順式-氟氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反 式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨；
[0033] 第9組11種：水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、乙基對 硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
[0034] 再進一步優選地，如上所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法， 其中第1組農藥以氯唑磷為內標進行校正，第2-9組農藥以滅蟻靈為內標進行校正。
[0035] 本發明方法的檢測限：將不同濃度目標農藥的基質混合標準溶液進GC/MS，以3倍 信噪比（S/N)計算檢測限（L0D)，檢測限在0.001-0. 060iig/mL之間。
[0036] 與現有技術相比，本發明方法具有如下優點和進步性：
[0037] (1)前處理中使用兩種不同極性的內標進行校正，可以滿足極性差異大的目標物 如有機氯、菊酯類農藥和有機磷農藥的同時分析需求，保證了非極性和極性目標物的回收 率。
[0038] (2)選用1%甲酸的乙腈作為提取溶劑，可以降低一些農藥的降解（如N-三滷代 乙基硫農藥滅菌丹），增加目標農藥在乙腈中的穩定性，提高回收率。
[0039] (3)採用本發明方法淨化後的上機溶液清澈透明，與現有技術得到的上機溶液相 t匕，共萃取基質中色素等幹擾組分大大減少（見圖4、5,兩種處理方法上機溶液的紫外-可 見吸收光譜圖，QuECHERS方法上機溶液在400-500nm和650nm處的可見區均有較強的吸收 峰，而本發明上機溶液無明顯吸收峰），減少了儀器的維護頻率，更適用於大批量樣品分析。
[0040] (4)本發明方法使用氣相色譜-質譜聯用儀進行檢測，可以降低菸草多農殘檢測 業務門檻。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0041]圖1:ioi種農藥標準品snu普圖；
[0042] 圖2:菸葉空白樣本添加101種農藥標準品SM譜圖；
[0043] 圖3:菸葉空白樣本SM譜圖；
[0044] 圖4:本發明上機溶液紫外-可見吸收光譜圖；
[0045] 圖5 :QuECHERS方法上機溶液紫外-可見吸收光譜圖。

【具體實施方式】
[0046] 實施例1:樣品A煙末中101種農藥殘留量檢測
[0047] 1、儀器與試劑：
[0048] 農藥標準品：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂 靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗、a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、op〃-DDE、 pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、op〃-DDT、pp〃-DDT、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環氧七氯、順 式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、硫丹、硫丹硫酸酯、樂果、克百威、 磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫 磷、滅芽磷、亞胺硫磷、乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁 草胺、氟節胺、敵草胺、除草醚、異稻瘟淨、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核淨、戊菌唑、毒蟲畏、 噻菌靈、滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈、七氟菊酯、聯苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯 氟氰菊酯、順式-氯菊酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯、順式-氟氰菊 酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰 菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨、水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、 乙基對硫憐、付殺硫憐、谷硫憐、乙基谷硫憐，
[0049] 內標：滅蟻靈、氯唑磷，均為標準品；乙腈、甲酸、丙酮、正己烷、甲苯、均為色譜純， 無水硫酸鈉為分析純；蒸餾水，符合GB/T6682中一級水的要求。
[0050] 美國安捷倫7890A-5975C氣相色譜-質譜儀；旋轉蒸發儀（瑞士步琦公司）； BS214S分析天平（德國Sartorius公司）；上海安亭高速離心機。
[0051] 2、樣品處理：
[0052] (1)稱取2. 0g煙末（樣品A:精確至0? 001g)於50mL離心管中，加入5g無水硫 酸鈉、100yL內標（滅蟻靈、氯唑磷混標），20mL1 %甲酸乙腈溶液，渦旋震蕩3分鐘，以 4000r/min離心10分鐘，吸取5mL上清液到10mL離心管中，待淨化。
[0053] (2)固相萃取小柱活化：TPT固相萃取小柱中加入2cm高無水硫酸鈉，用5mL乙腈 /甲苯（體積比3:1)活化柱子，棄去流出液。
[0054] (3)提取液的淨化：將步驟2中提取液轉移到活化後的固相萃取小柱中，用2mL乙 腈/甲苯（體積比3 :1)洗滌試管，重複兩次，並將洗滌液轉移至小柱中，用10mL乙腈/甲 苯（體積比3 :1)洗滌小柱，收集流出液至平底燒瓶中。
[0055] (4)洗脫液的濃縮、溶劑置換：將步驟3中流出液在40°C水浴的旋轉蒸發儀中濃縮 近幹，用5mL正己烷進行溶劑置換，重複兩次，加入lmL正己烷，轉動燒瓶使壁上殘留農藥 充分溶解，渦旋混勻，過〇. 45iim有機相濾膜，待測（GC/MS)。
[0056] 採用上述樣品處理方法淨化後的上機溶液清澈透明，與現有技術得到的上機溶液 相比，共萃取基質中色素等幹擾組分大大減少（見圖4、圖5,兩種處理方法上機溶液的紫 外-可見吸收光譜圖，QuECHERS方法上機溶液在400-500nm和650nm處的可見區均有較強 的吸收峰，而本發明上機溶液無明顯吸收峰），減少了儀器的維護頻率，更適用於大批量樣 品分析。
[0057] 3、準備混合標準溶液：
[0058] 將本發明涉及101種農藥分成如下9組：
[0059] 第1組13種：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂 靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗；
[0060]第 2 組 10 種a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、op"-DDE、pp"-DDE、op"-DDD、pp"-DDD、 op"-DDT、pp〃-DDT;
[0061] 第3組11種：五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環氧七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反 式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、3 -硫丹、硫丹硫酸酯；
[0062] 第4組13種：樂果、克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、 皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷；
[0063] 第5組11種：乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁 草胺、氟節胺、敵草胺、除草醚；
[0064] 第6組12種：異稻瘟淨、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核淨、戊菌唑、毒蟲畏、噻菌靈、 滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、 11 惡霜靈；
[0065] 第7組10種：七氟菊酯、聯苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、順式-氯 菊酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯；
[0066] 第8組10種：順式-氟氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反 式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨；
[0067] 第9組11種：水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、乙基對 硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
[0068] 分別稱取0. 010g農藥標準品（結果精確至0.lmg)，用體積比為9:1的正己烷/丙 酮溶液定容於10mL容量瓶中，配製成9組濃度為1000yg/mL的農藥的標準儲備液。標準 儲備液避光〇°C-4°C保存，可使用1年。
[0069] 將上述9組標準儲備液各取0.lmL，等比例稀釋到10mL容量瓶中，用正己烷定容， 得到濃度為10ug/mL的101種農藥的混合標準溶液。混合標準溶液避光0°C-4°C保存，可 使用1個月。
[0070] 第1組農藥以氯唑磷為內標進行校正，第2-9組農藥以滅蟻靈為內標進行校正。 101種目標農藥和內標的保留時間和質譜參數見附表1。101種農藥標準品SIM色譜圖見 圖1，菸葉空白樣本SM色譜圖見圖2,菸葉空白樣本添加101種農藥標準品SM色譜圖見 圖3。
[0071] 表1 :1〇1種農藥及內標的保留時間及質譜參數
[0072]

【權利要求】
1. 一種同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵在於，該方法是將 菸草樣品中加入無水硫酸鈉、內標和酸化乙腈後，渦旋提取，離心分層，取一定量萃取液過 固相萃取小柱淨化，用體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗脫，將洗脫液濃縮，並以正己烷進 行溶劑交換，過有機相濾膜，用氣相色譜-質譜聯用儀進行檢測。
2. 根據權利要求1所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵在 於，其具體的操作步驟如下： (1) 內標混合溶液的配製：配製滅蟻靈和氯唑磷濃度均為5 y g/mL的正己烷內標混合 溶液； (2) 農藥目標物提取：稱取2. 000g煙末於50mL離心管中，加入5g無水硫酸鈉、100ii L 步驟（1)配製的內標混合溶液，以及20mL 1%甲酸的乙腈溶液，渦旋震蕩3分鐘，以4000r/ min離心10分鐘，吸取5mL上清液到10mL離心管中，待淨化； ⑶固相萃取小柱活化：TPT固相萃取小柱中加入2cm高無水硫酸鈉，用5mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液活化柱子，棄去流出液； (4) 提取液的淨化：將步驟（2)得到的提取液轉移到步驟（3)活化後的固相萃取小柱 中，用2mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌試管，重複兩次，並將洗滌液轉移至小柱中， 用10mL體積比3 :1的乙腈/甲苯混合液洗滌小柱，收集流出液至平底燒瓶中； (5) 洗脫液的濃縮、溶劑置換：將步驟⑷得到的流出液在40°C水浴的旋轉蒸發儀中濃 縮近幹，用5mL正己烷進行溶劑置換，重複兩次，加入lmL正己烷，轉動燒瓶使壁上殘留農 藥充分溶解，渦旋混勻，過〇. 45 ii m有機相濾膜，待測GC/MS ; (6) 標準儲備液配製：將待測的101種農藥分成9組，每組10-13種農藥，分別稱取 0. 0100g農藥標準品，用體積比為9:1的正己烷/丙酮溶液定容於10mL容量瓶中，配製成9 組濃度為1000 U g/mL的101種農藥的標準儲備液； (7) 混合標準溶液配製：將步驟（6)中標準儲備液各取0. lmL，等比例稀釋到10mL容量 瓶中，用正己烷定容，得到濃度為10 U g/mL的101種農藥的混合標準溶液； (8) 空白菸草樣品基質的製備：稱量2. 0g不含目標農藥的菸草樣品，共五份，除不添加 內標溶液外，其他均按照步驟（2)、（3)、（4)和（5)進行操作，製備空白菸草樣品基質提取 液； (9) 基質混合標準溶液配製：準確移取步驟（7)中濃度為10 y g/mL的混合標準溶液 2mL，置於10mL容量瓶中，用正己烷定容，配製成各農藥濃度為g/mL的混合標準溶液 I ;準確移取〇. 〇125、0. 025、0. 0625、0. 125、0. 2mL的混合標準溶液I，準確移取50 ii L步驟 (1)中內標溶液，加到l.OmL的空白菸草樣品基質提取液中，混勻，配成具有濃度梯度的目 標農藥的基質混合標準工作溶液，配製的系列標準溶液的濃度分別為：〇. 025、0. 05、0. 125、 0.25>0.4 u g/mL ； (10) GC/MS測定：將步驟（9)中的基質混合標準溶液，過0.45iim有機濾膜後，進GC/MS 進行測定； (11) 農藥殘留結果計算：採用內標法進行農藥目標物的定量分析，即以農藥和內標物 的定量離子峰面積比對其相應濃度進行回歸分析，得到標準曲線，對提取後的樣品進行測 定，測得檢出農藥和內標物定量離子峰面積比值，代入標準曲線，求的樣品中農藥的含量。
3. 根據權利要求2所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵在 於，步驟（10)中GC/MS測定時採用的色譜條件為：色譜柱DB-5MS彈性毛細管色譜柱，規格 為3011^0.25111111\0.2511111;進樣口：2501：;初始溫度501：，保持5111111，以251：/111111速率升 至150°C，保持Omin，以3°C速率升至200°C，保持Omin，以8°C速率升至280°C，保持5min， 以10°C /min速率升至300°C，保持lOmin，總運行時間為52-53min。
4. 根據權利要求2所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵 在於，步驟（10)中GC/MS測定時採用的質譜條件為：電子轟擊離子源，70ev，離子源溫度 300°C ;接口溫度：280°C，四級杆溫度：180°C ;溶劑延遲6min ;掃描模式：選擇離子監測。
5. 根據權利要求1或2所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特 徵在於，所述的101種農藥包括：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內吸磷、滅線磷、二 溴磷、氟樂靈、氟草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗、a-HCH、林丹、P-HCH、S-HCH、 op〃-DDE、pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、op〃-DDT、pp〃-DDT、五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環氧 七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、狄試劑、異狄試劑、￠-硫丹、硫丹硫酸酯、樂果、 克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫 磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷、乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除 芽通、丁草胺、氟節胺、敵草胺、除草醚、異稻瘟淨、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核淨、戊菌唑、 毒蟲畏、噻菌靈、滅菌丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈、七氟菊酯、聯苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、 高效氯氟氰菊酯、順式_氯菊酯、反式_氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯、順式-氟 氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、 溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨、水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍 硫磷、乙基對硫磷、付殺硫磷、谷硫磷、乙基谷硫磷。
6. 根據權利要求5所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵在 於，步驟（6)中將101種農藥分成如下9組： 第1組13種：葉蟬散、庚烯磷、仲丁威、殘殺威、甲基內吸磷、滅線磷、二溴磷、氟樂靈、氟 草胺、特丁硫磷、敵蟲硫磷、乙拌磷、敵稗； 第 2 組 10 種 a -HCH、林丹、0 -HCH、S -HCH、op〃-DDE、pp〃-DDE、op〃-DDD、pp〃-DDD、 op"-DDT、pp〃-DDT ; 第3組11種：五氯硝基苯、七氯、艾氏劑、環氧七氯、順式-氯丹、a-硫丹、反式-氯丹、 狄試劑、異狄試劑、3 -硫丹、硫丹硫酸酯； 第4組13種：樂果、克百威、磷胺E、磷胺Z、甲基毒死蜱、乙烯菌核利、甲基對硫磷、皮蠅 硫磷、殺螟硫磷、馬拉硫磷、溴硫磷、滅芽磷、亞胺硫磷； 第5組11種：乙草胺、甲草胺、異丙甲草胺、敵草索、草乃敵、異丙樂靈、除芽通、丁草胺、 氟節胺、敵草胺、除草醚； 第6組12種：異稻瘟淨、三唑酮、三唑醇、稻瘟靈、菌核淨、戊菌唑、毒蟲畏、噻菌靈、滅菌 丹、殺蟲畏、豐索磷、噁霜靈； 第7組10種：七氟菊酯、聯苯菊酯、甲氧DDT、甲氰菊酯、高效氯氟氰菊酯、順式-氯菊 酯、反式-氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、四溴菊酯； 第8組10種：順式-氟氰菊酯、反式-氟氰菊酯、氰戊菊酯、順式-氟胺氰菊酯、反式-氟 胺氰菊酯、s-氰戊菊酯、溴氰菊酯、異菌脲、硫線磷、氯硝銨； 第9組11種：水胺硫磷、苯霜靈、仲丁靈、二嗪磷、甲霜靈、毒死蜱、倍硫磷、乙基對硫磷、 付殺硫憐、谷硫憐、乙基谷硫憐。
7.根據權利要求6所述同時測定菸草或菸草製品中101種農藥殘留的方法，其特徵在 於，第1組農藥以氯唑磷為內標進行校正，第2-9組農藥以滅蟻靈為內標進行校正。
【文檔編號】G01N30/02GK104458947SQ201410714665
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月28日 優先權日:2014年11月28日
【發明者】曹建敏, 郭承芳, 於衛松, 邱軍, 方松, 魯世軍, 王允白 申請人:中國農業科學院菸草研究所