用α7受體結合類膽鹼激動劑抑制炎症的製作方法

2023-09-20 02:33:20

專利名稱：：用α7受體結合類膽鹼激動劑抑制炎症的製作方法相關申請本申請要求2002年12月6日提交的美國臨時申請序列號60/431,650的權利。在此引入上述申請的全文作為參考。政府資助本發明的全部或部分受到國家衛生研究院的資助，許可號GM57226。政府對於本發明具有一定的權利。
背景技術：
：本發明涉及減少炎症的方法。特別是，本發明涉及用α7受體結合的類膽鹼激動劑減少炎症的方法。脊椎動物在感染或者損傷期間可以通過平衡促炎性和抗炎性途徑獲得體內動態平衡。但是，在許多疾病狀況下，這種體內動態平衡會變得不平衡。例如，所有革蘭氏陰性細菌產生的內毒素(脂多糖，LPS)可以激活巨噬細胞釋放可能是致命的細胞因子(Traceyetal.，1986；Wangetal.，1999；Nathan，1987；Dinarello，1994)。炎症和其它有害的情況(例如由內毒素引起的膿毒性休克)通常是由促炎性細胞因子，例如腫瘤壞死因子(TNF；也稱為TNFα或惡病質素)，白介素(IL)-1α，IL-1β，IL-6，IL-8，IL-18，幹擾素γ，血小板激活因子(PAF)，巨噬細胞遷移抑制因子(MIF)，和其它化合物誘導的(Thompson，1998)。某些其它化合物，例如高遷移率族蛋白1(HMG-1)，是在不同的情況例如膿毒症中被誘導的，也可作為促炎性細胞因子(PCT公開號WO00/47104)。這些促炎性細胞因子是由幾種不同的細胞類型產生的，最重要的是免疫細胞(例如單核細胞，巨噬細胞和嗜中性粒細胞)，也包括非免疫細胞例如成纖維細胞，成骨細胞，平滑肌細胞，上皮細胞，和神經細胞(ZhangandTracey，1998)。促炎性細胞因子通過在炎性細胞因子級聯中的釋放可導致各種疾病，特別是膿毒症。炎性細胞因子級聯可導致有害的症狀，包括多種疾病的炎症和細胞凋亡(Pulkki，1997)。所包括的具有局部和系統反應的疾病包括但不限於涉及胃腸道以及相關組織的疾病(例如闌尾炎，消化器官，胃和十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，潰瘍性結腸炎，偽膜性腸炎，急性和缺血性結腸炎，憩室炎，會厭炎，弛緩不能，膽管炎，乳糜洩，膽囊炎，肝炎，克羅恩氏病，腸炎，和惠普爾病)；系統或局部炎性疾病和狀況(例如哮喘，變態反應，過敏性休克，免疫複合體疾病，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒症，敗血病，內毒素性休克，惡病體質，高燒，嗜伊紅細胞肉芽腫，肉芽腫，和肉樣瘤)；涉及泌尿生殖系統和相關組織的疾病(例如膿毒性流產，附睪炎，陰道炎，前列腺炎和尿道炎)；涉及呼吸系統和相關組織的疾病(例如支氣管炎，肺氣腫，鼻炎，囊腫性纖維化，成人呼吸窘迫綜合症，肺炎，黑肺病(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis)，alvealitis，細支氣管炎，咽炎，胸膜炎，和竇炎)；各種病毒(例如流行性感冒，呼吸道合胞病毒，HIV，B型肝炎病毒，C型肝炎病毒，皰疹)，細菌(例如散播菌血症，登革熱)，真菌(例如念珠菌病)和原生動物和多細胞寄生蟲(例如瘧疾，絲蟲病，阿米巴病，和水泡囊)感染引起的疾病；皮膚病和皮膚狀況(例如燒傷，皮炎，皮肌炎，曬斑，風疹疣，和水皰)；涉及心血管系統和相關組織的疾病(例如angiitis，血管炎，心內膜炎，動脈炎，動脈硬化症，血栓性靜脈炎，心包炎，心肌炎，心肌缺血，充血性心力衰竭，動脈周炎，和風溼熱)；涉及中樞或外周神經系統和相關組織的疾病(例如阿爾茨海默病，腦膜炎，腦炎，多發性硬化，大腦梗塞，大腦栓塞，guillame-barre綜合症，神經炎，神經痛，脊髓損傷，癱瘓，和葡萄膜炎)；骨骼，關節，肌肉和結締組織疾病(例如各種關節炎和關節痛，骨髓炎，筋膜炎，佩吉特式病，痛風，牙周疾病，風溼性關節炎，和滑膜炎)；其它自體免疫和炎性失調(例如重症肌無力，甲狀腺炎，系統性紅斑狼瘡，古德帕斯丘症候群，白塞氏綜合症，和同種異體移植物排斥，移植物抗宿主症，I型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，I型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，和瑞特綜合症)；以及各種癌症，腫瘤和增殖性失調(例如何杰金氏病)；以及對任何原發性疾病的任何炎性或免疫宿主反應(Gattornoetal.，2000；YehandSchuster，1999；McGuinnessetal.，2000；Hsuetal.，1999；PrystowskyandRege，1997；Kimmingsetal.，2000；Hirano，1999；Leeetal.，1995；Wasermanetal.，2000；Katagirietal.，1997；BumgardnerandOrosz，1999；Dibbsetal.，1999；BlumandMiller，1998；BlackwellandChristman，1996；Fox，2000；Carteron，2000；HommesandvanDeventer，2000；Gracieetal.，1999；Kanaietal.，2001；JanderandStoll，2001；Watanabeetal.，1997；Rayneretal.，2000；Amranietal.，2000)。哺乳動物對由炎性細胞因子級聯引起的炎症的反應部分通過中樞神經系統的調控。這種反應具體涉及對內毒素的炎性反應過程中的體液反應機制(Besedovskyetal.，1986；Woiciechowskyetal.，1998；Huetal.，1991；LiptonandCatania，1997)。在反應的一開始，傳入迷走神經纖維被內毒素或細胞因子激活，通過糖皮質激素的釋放刺激體液抗炎性反應(WatkinsandMaier，1999；Sternberg，1997；Scheinmanetal.，1995)。早先的研究闡述了迷走神經信號傳導作為輸入環中的重要組成調節對於系統性內毒素血症和細胞因子血症的促腎上腺皮質激素和發熱反應(Gaykemaetal.，1995；Fleshneretal.，1998；Watkinsetal.，1995；Romanovskyetal.，1997)另一系列反應是通過傳出迷走神經信號傳導，稱為「類膽鹼抗炎性途徑」(Borovikovaetal.，2000)。傳出迷走神經的刺激減少了系統炎性反應並抑制TNF的釋放(Id.；Berniketal.，2002；Traceyetal.，2001；美國專利申請序列號09/855,446)。乙醯膽鹼，迷走神經的主要神經遞質，能夠通過α-銀環蛇毒素-敏感的菸鹼乙醯膽鹼受體的信號傳導減少巨噬細胞細胞因子的合成，但是還未識別出基本的巨噬細胞受體。煙酸乙醯膽鹼受體是一類配體門控的五聚離子通道家族。在人中，已識別了16個不同的亞基(α1-7，α9-10，β1-4，δ，ε，和γ)，形成具有不同結構和藥學性質的大量的同五聚或異五聚受體(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001；LeNovereandChangeux，1995)。這個受體家族的主要的已知功能是在神經肌肉連接處以及中樞和外周神經系統中傳遞信號給神經遞質乙醯膽鹼(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001；LeNovereandChangeux，1995；MarubioandChangeux，2000；Steinlein，1998)。我們先前的工作表明在初級人巨噬細胞中存在α-銀環蛇毒素-敏感的菸鹼受體(Borovikovaetal.，2000)，但是還未識別出特異的受體亞基。對能夠抑制炎症的特定菸鹼受體的認識有助於識別能夠抑制炎症的受體的特異性激動劑。這種激動劑與目前已鑑別的相對非特異性的激動劑相比可能具有較小的副作用。也更容易鑑別抗炎性受體的其它生理學效果。相關技術描述引用的參考文獻Amrany，Y.etal.Respir.Res.149-53(2000).Bernik，T.R.etal.Pharmacologicalstimulationofthecholinergicanti-inflammatorypathway.J.Exp.Med.195781-788(2002).Besedovsky，H.etal.Science233652-54(1986).Bianchi，M.etal.Aninhibitorofmacrophageargininetransportandnitricoxideproduction(CNI-1493)preventsacuteinflammationandendotoxinlethality.Mol.Med.1254-266(1995).Blackwell，T.S.andChristman，J.W.Br.J.Anaesth.77110-17(1996).Blum，A.andMiller，H.Am.HeartJ.135181-86(1998).Borovikova，L.V.，Ivanova，S.，Zhang，M.，Yang，H.，Botchkina，G.I.，Watkins，L.R.，Wang，H.，Abumrad，N.，Eaton，J.W.Tracey，K.J.Vagusnervestimulationattenuatesthesystemicinflammatoryresponsetoendotoxin.Nature405458-462(2000).Bumgardner，G.L.andOrosz，C.G.Semin.LiverDis.19189-204(1999).Carteron，N.L.Mol.Med.Today6315-23(2000).Cohen，P.S.etal.Thecriticalroleofp38MAPkinaseinTcellHIV-1replication.MolecularMedicine3339-346(1997).Dibbs，Z.etal.Proc.Assoc.Am.Physicians111423-28(1999).Dinarello，C.A.FASEBJ.81314-25(1994).Drisdel，R.C.andGreen，W.N.Neuronala-bungarotoxinreceptorsarea7subunithomomers.J.Neurosci.20133-139(2000).Feng，G，Steinbach，J.H.andSanes，J.R.Rapsynclustersneuronalacetylcholinereceptorsbutisinessentialforformationofaninterneuronalcholinergicsynapse.J.Neurosci.184166-4176(1998).Fleshner，M.etal.J.Neuroimmunol.86134-41(1998).Fox，D.A.Arch.Intern.Med.28437-444(2000).Franceschini，D.etal.Alteredbaroreflexresponsesind7deficientmice.BehaviouralBrainRes.1133-10(2000).Francis，M.M.etal.Mol.Pharmacol.6071-79(2001).Gattorno，M.etal.J.Rheumatol.272251-2255(2000).Gault，J.etal.Genomicorganizationandpartialduplicationofthehumanof7neuronalnicotinicacetylcholinereceptorgene(CHRNA7).Genomics52173-185(1998).Gaykema，R.P.etal.Endocrinology1364717-4720(1995).Gracie，J.A.etal.J.Clin.Invest.1041393-1401(1999).Holladayetal.NeuronalNicotinicAcetylcholineReceptorsasTargetsforDrugDiscovery.JournalofMedicinalChemistry404169-4194(1997).Hommes，D.W.andvanDeventer，S.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相同的意義。附圖不必需按比例繪製，其重點在於舉例說明本發明的原理。圖1是螢光圖，表明α-銀環蛇毒素結合的菸鹼受體在巨噬細胞表面成簇分布。初級人巨噬細胞用FITC標記的α-銀環蛇毒素(α-bgt，1.5μg/ml)染色，然後用螢光共焦顯微鏡觀察。1a和b顯示了較低放大倍數的顯微圖。a.細胞單獨用α-銀環蛇毒素染色。b.在加入α-銀環蛇毒素之前加入500μM菸鹼。1c和1d顯示了較高放大倍數的顯微圖，顯示出受體簇。c.聚焦面在靠近細胞中間(三簇較下面的細胞)或靠近細胞表面(上面的細胞)的內層上。d.聚焦面在細胞的上表面上。圖2是在初級人巨噬細胞中α7和α1菸鹼受體的mRNA和蛋白表達的凝膠和westernblot的照片。a是α7特異性引物的RT-PCR結果，產生一個843bp的α7條帶。PCR產物通過測序驗證(數據未顯示)。MAC1和MAC2來自兩個無關供體的巨噬細胞。b顯示了westernblot的結果。將PC12細胞或人巨噬細胞(MAC)的細胞溶解物與對照Sepharose珠或與α-銀環蛇毒素結合的Sepharose珠培育。然後用α7特異的多克隆和單克隆抗體分析結合蛋白。圖3顯示了菸鹼乙醯膽鹼受體的α7亞基的反義寡核苷酸抑制菸鹼對於TNF釋放的作用的圖和顯微圖。a-c是用不同菸鹼受體亞基的反義寡核苷酸預處理的初級人巨噬細胞中LPS刺激的TNF釋放的圖。菸鹼(Nic，1μM)在LPS誘導(100ng/ml)之前5-10分鐘加入。細胞培養基中的TNF水平用L929檢測來測定。CT對照(未刺激的)巨噬細胞培養物。ASα7，ASα1和ASα10分別是α7，α1和α10亞基的反義寡核苷酸。d和e是用α7反義寡核苷酸(ASα7)處理的(e)或未處理的(d)初級人巨噬細胞用FITC-α-銀環蛇毒素染色並用螢光共焦顯微鏡觀察的螢光顯微圖。圖4是實驗總結圖，證明了α7缺陷的小鼠在內毒素血症期間細胞因子的產生增加。向α7亞基缺陷的小鼠(-/-)或年齡和性別匹配的野生型小鼠(+/+)中注射LPS(0.1mg/kg，i.p.)。LPS刺激後1小時(對於TNF)或4小時(對於IL-1β和IL-6)獲取血液和器官。血清或器官中TNF，IL-1β和IL-6的水平用ELISA測定。a血清中TNF水平。每組n＝10。b肝中TNF水平。每組n＝6。c脾中TNF水平。每組n＝6。d血清中IL-1β水平。每組n＝8。e血清中IL-6水平。每組n＝9。*＝P＜0.05，相對於野生型對照。圖5顯示了迷走神經刺激不能抑制菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基缺陷型小鼠中的TNF。α7亞基缺陷的小鼠(-/-)或年齡和性別匹配的野生型小鼠(+/+)進行假手術(SHAM)或迷走神經刺激(VNS，左迷走神經，1伏，2ms，1Hz)；給予LPS後2小時收集血液。用ELISA測定血清TNF水平。n＝10(SHAMα7+/+).n＝11(VNSα7+/+，SHAMα7-/-，VNSα7-/-).*＝P＜0.05vsSHAMα7+/+。圖6顯示了用盲腸結紮和穿刺模型誘導膿毒症之後進行化合物(V)或化合物(VI)給藥的過程中小鼠的死亡率(存活百分率)。圖7是用遞增濃度的化合物(V)或菸鹼處理的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導的TNF-α釋放的測定量隨這些化合物濃度變化的比較圖。圖8A顯示了用遞增濃度的化合物(VI)處理的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導的TNF-α釋放的抑制百分率隨預培育時間的變化圖。圖8B顯示了用遞增濃度的化合物(VI)處理的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導的TNF-α釋放的抑制百分率隨化合物(VI)濃度的變化圖。圖9是給預先給予了化合物(VI)的小鼠給予LPS後檢測的血管中TNF-α濃度的條形圖。圖10是用右旋糖苷硫酸鈉誘導結腸炎後給予化合物(VI)的小鼠的結腸重量(A)和結腸長度(B)的條形圖的比較圖。圖11是用遞增量的化合物(VII)預培育後LPS刺激的鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中釋放的TNF-α的檢測濃度的條形圖。發明詳述下面是對本發明優選實施方案的描述。取代基的定義這裡所說的術語「烷基」，除非另外指出，包括具有直鏈或枝鏈部分的飽和的單價烴基，典型地是C1-C10，優選是C1-C6。烷基基團的實例包括但不限於甲基，乙基，丙基，異丙基，和t-丁基。這裡所說的術語「烯基」，除非另外指出，包括具有至少一個碳-碳雙鍵的烷基部分，其中烷基如上所定義。烯基的實例包括但不限於乙烯基和丙烯基。這裡所說的術語「炔基」，除非另外指出，包括具有至少一個碳-碳三鍵的烷基部分，其中烷基如上所定義。炔基基團的實例包括但不限於乙炔基和2-丙炔基。這裡所說的術語「烷氧基」是指「烷基-O-」基團，其中烷基如上所定義。這裡所說的術語「環烷基」，除非另外指出，包括非芳香族的飽和環狀烷基部分，其中烷基如上所定義。環烷基的實例包括但不限於環丙基，環丁基，環戊基，環己基，和環庚基。「雙環烷基」基團是非芳香族的具有兩個環的飽和碳環基團。雙環烷基的實例包括但不限於，雙環-[2.2.2]-辛基和降莰烷基。術語「環烯基」和「雙環烯基」是指如上所述的非芳香族的碳環環烷基和雙環烷基分子，除了含有一個或多個連接碳環成分的碳-碳雙鍵(「內環」雙鍵)和/或一個或多個連接碳環成分和相鄰的非環碳的碳-碳雙鍵(「外環」雙鍵)。環烯基的實例包括但不限於環戊烯基和環己烯基。雙環烯基基團的一個非限制性實例是降莰烯基。環烷基，環烯基，雙環烷基，和雙環烯基基團還包括與上述每個類別相似的，但是被一個或多個氧取代的基團。這些具有氧的基團的實例包括但不限於氧代環戊基，氧代環丁基，氧代環戊烯基和降莰醯基。這裡所說的術語「環烷氧基」，除非另外指出，包括「環烷基-O-」基團，其中環烷基如上定義。這裡所說的術語「芳基」指碳環基團。芳基基團的實例包括但不限於苯基和萘基。這裡所說的術語「雜芳基」指含有一個或多個雜原子(O，S，或N)的芳香基團。雜芳基可以是單環的或是雙環的。本發明的雜芳基還可以包括被一個或多個氧分子取代的環系統。雜芳基基團的實例包括但不限於吡啶基，噠嗪基，咪唑基，吡啶基，吡唑基，三唑基，吡嗪基，喹啉基，異喹啉基，四唑基，呋喃基，噻吩基，異惡唑基，噻唑基，惡唑基，異噻唑基，吡咯基，喹啉基，異喹啉基，吲哚基，苯並咪唑基，苯並呋喃基，噲啉基，吲唑基，氮茚基，酞嗪基，噠嗪基，三嗪基，異氮雜茚基，嘌呤基，惡二唑基，噻唑基，噻二唑基，呋咱基，苯並呋咱基，苯並噻吩基，苯並三唑，苯並噻唑基，苯並惡唑基，喹唑啉基，喹喔啉基，萘啶基，二氫喹啉基，四氫喹啉基，二氫異喹啉基，四氫異喹啉基，苯並呋喃基，呋喃並吡啶基，pyrolopyrimidinyl，和氮雜吲哚基。上述雜芳基基團可以是C連接或是N連接的(如果可能的話)。例如吡咯的基團可以是吡咯-1-基(N連接的)或是吡咯-3-基(C連接的)。在本發明中，雙環碳環化合物是其中碳僅作為環原子的雙環化合物。環結構特別可是芳香族的，飽和的，或部分飽和的。這種化合物的實例包括但不限於，茚滿基，萘基，甘菊環基。在本發明中，氨基基團可以是基本的(-NH2)，二級的(-NHRa)，或三級的(-NRaRb)，其中Ra和Rb可以是烷基，烯基，炔基，烷氧基，環烷基，環烷氧基，芳基，雜芳基，和雙環碳環基團中的任一種。本發明可以使用，除非另外指出，傳統的細胞培養，分子生物學，微生物，細胞生物學，和免疫學技術，這些都是本領於技術人員公知的。這些技術在文獻中已有詳細描述。參見，例如Sambrooketal.，1989，″MolecularCloningALaboratoryManual″，ColdSpringHarborLaboratoryPress；Ausubeletal.(1995)，″ShortProtocolsinMolecularBiology″，JohnWileyandSons；MethodsinEnzymology(幾卷)；MethodsinCellBiology(幾卷)，和MethodsinMolecularBiology(幾卷)。本文公開的化合物的藥學可接收的鹽可以用於實施本發明。這裡所說的所公開的化合物的「藥學可接收的鹽」是將本發明的化合物與酸或鹼反應形成的含有離子鍵的產物，適合於給受試體施用。例如含有氨基或其它鹼性基團的化合物的酸式鹽可以通過使所述化合物與適當的有機或無機酸，例如氯化氫，溴化氫，乙酸，過氯酸等反應獲得。這種鹽的其它實例包括鹽酸鹽，氫溴酸鹽，硫酸鹽，甲基磺酸鹽，硝酸鹽，馬來酸鹽，醋酸鹽，檸檬酸鹽，延胡索酸鹽，酒石酸鹽(例如(+)-酒石酸鹽，(-)-酒石酸鹽或其含有外消旋混合物的混合物)，琥珀酸鹽，安息香酸鹽以及胺基酸例如穀氨酸鹽。當所述化合物含有酸性功能基團如-COOH或-SO3H的時候可以與適當的有機鹼形成鹽。適合於與本發明的化合物形成藥學可接收的鹼加成鹽的鹼包括無毒的並且足以和酸性功能基團反應的有機鹼。這種有機鹼是本領域公知的，包括胺基酸例如精氨酸和賴氨酸，單-，二-，和三乙醇胺，膽鹼，單-，二-和三烷基胺，例如甲胺，二甲胺，和三甲胺，胍，N-苯甲基苯乙基氨基，N-甲基葡糖胺，N-甲基哌嗪，嗎啉，乙烯二胺，三(羥甲基)氨基甲烷等。這裡所說的「藥物組合物」是含有本文公開的化合物和藥學可接收的稀釋劑或載體的製劑，製備成適合於給受試體施用的形式。所述藥物組合物可以是散裝的或者製成單位劑量形式。單位劑量形式可以是任何不同的形式，包括，例如，膠囊，IV袋，片劑，噴霧劑中的單向泵，或小瓶。單位劑量的組合物中的活性成分(即所公開的化合物或其鹽的製劑)的量是有效量，根據特定的治療可以不同。應當認識到有必要根據受試體的年齡和情況對劑量進行常規的變化。劑量還取決於給藥的方式。預期的不同方式包括局部，口服，肺部，直腸，陰道，腸胃外，包括經皮，皮下，靜脈內，肌肉內，腹膜內和鼻內。這裡所說的所述組合物，和其藥學可接收的鹽可以與藥學可接收的載體或稀釋劑一起用於製備藥物製劑。合適的藥學可接收的載體包括惰性固體填充劑或稀釋劑以及無菌水溶液或有機溶劑。所述化合物在這種藥物組合物中的量足以提供本文所述範圍內的所需劑量。本發明的所述化合物的製備方法和給藥方法如RerziragtontlaeScienceandPracticeofPlaarmacy，19thedition，MackPublishingCo.，Easton，PA(1995)所述。這裡所說的「受試體」包括哺乳動物，例如人，伴侶動物(例如狗，貓，鳥等)，畜養動物(例如牛，羊，豬，馬，家禽等)和實驗室動物(例如大鼠，小鼠，豚鼠等)。在本發明的方法的優選實施方案中，所述受試體是人。本文所述的本發明的化合物的「治療有效量」是指當給予需要治療的受試體的時候，可以促進受試體的預後，例如延遲與真菌感染有關的一種或多種受試體症狀的發作和/或降低其嚴重性的量。給予受試體的所述化合物的量取決於特定的疾病，給藥的模式，受試體的特徵，例如一般健康狀況，其它疾病，年齡，性別，基因型，體重和藥物耐受性。技術人員可以根據這些因素和其它因素確定合適的劑量。所述化合物的有效量典型地在每天大約0.1mg/kg體重到每天大約1000mg/kg體重之間，優選在每天大約1mg/kg體重到每天大約100mg/kg體重之間。本發明是基於發現了α-銀環蛇毒素敏感的受體，當它暴露於該受體的激動劑的時候，可以抑制巨噬細胞釋放促炎性細胞因子，否則所述巨噬細胞受到刺激會釋放炎性細胞因子。具有這種抑制作用的受體是α7受體。因此，如果巨噬細胞受到例如細菌脂多糖(LPS)的刺激可以釋放促炎性細胞因子，那麼用α7受體的激動劑處理巨噬細胞可以抑制巨噬細胞釋放促炎性細胞因子，特別是TNF。相應地，在一些實施方案中，本發明涉及抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的方法。所述方法包括用足量的能減少所述細胞釋放的促炎性細胞因子的量的類膽鹼激動劑處理細胞，其中所述類膽鹼激動劑對α7菸鹼受體是選擇性的。這裡所說的細胞因子是一種由哺乳動物細胞天然產生的可溶性蛋白或肽，其在體內可以微摩爾到皮摩爾量級作為體液調節劑。細胞因子在正常情況或病理情況下可以調節單個細胞或組織的功能活性。促炎性細胞因子是一種能引起任何下述與炎症有關的生理反應的細胞因子血管舒張，充血，脈管滲透性增加並伴隨水腫，粒細胞與單核吞噬細胞的積聚，或者纖維蛋白沉澱。在一些情況下，所述促炎性細胞因子還可引起細胞凋亡，例如慢性心力衰竭，其中TNF刺激了心肌細胞的凋亡(Pulkki，1997；Tsutsuietal.，2000)。促炎性細胞因子的非限制性實例是腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1α，IL-1β，IL-6，IL-8，IL-18，幹擾素γ，HMG-1，血小板激活因子(PAF)，和巨噬細胞移動抑制因子(MIF)。在本發明的優選實施方案中，所述能通過類膽鹼激動劑處理受到抑制的促炎性細胞因子是TNF，IL-1，IL-6，IL-18，這是由於這些細胞因子是由巨噬細胞產生的並介導多種重要疾病的有害狀況，所述疾病例如內毒素性休克，哮喘，風溼性關節炎，炎性膽囊疾病，心力衰竭，和同種異體移植物排斥。在最優選的實施方案中，所述促炎性細胞因子是TNF。促炎性細胞因子與抗炎性細胞因子如IL-4，IL-10，和IL-13不同，後者不能介導炎症。在優選的實施方案中，抗炎性細胞因子的釋放不受到類膽鹼激動劑的抑制。在一些例子中，在炎性細胞因子級聯中產生促炎性細胞因子，在本文中稱為在哺乳動物體內釋放至少一種促炎性細胞因子，其中所述細胞因子的釋放影響所述哺乳動物的生理狀況。因此，在本發明的實施方案中，在促炎性細胞因子的釋放引起嚴重的生理狀況的情況下，炎性細胞因子級聯被抑制。任何能產生促炎性細胞因子的哺乳動物細胞都可用於本發明。非限制性實例是單核細胞，巨噬細胞，肥大細胞，嗜中性粒細胞，上皮細胞，成骨細胞，成纖維細胞，平滑肌細胞，和神經細胞。在優選的實施方案中，所述細胞是巨噬細胞。這裡所說的「α7類膽鹼受體」是含有α7亞基的受體。所述受體可以只含有α7亞基；或者所述受體可以含有α7亞基和其它類膽鹼受體亞型的亞基。在一個實施方案中，所述受體是同五聚體。在另一個實施方案中，所述受體是異五聚體。這裡所說的「α7類膽鹼受體激動劑」是一種能與含有α7亞基的受體在體內或體外結合的化合物，其能誘導所述受體行使其生理學功能。在一個實施方案中，類膽鹼受體激動劑抑制能表達含有α7亞基的類膽鹼受體的細胞釋放促炎性細胞因子，否則所述細胞受到刺激可釋放所述促炎性細胞因子。技術人員可以用任何公知的方法確定任何特定的化合物是否是α7受體激動劑，例如下述實施例1中所提供的方法。在意指類膽鹼激動劑對於促炎性細胞因子的釋放或炎性細胞因子劑量的作用，或者迷走神經刺激對於炎性細胞因子級聯的作用的時候，使用術語「抑制」或「減少」包括至少少量但是可檢測到的促炎性細胞因子釋放的減少。在優選的實施方案中，所述促炎性細胞因子的釋放與未處理的對照相比被抑制至少20％；在更優選的實施方案中，所述抑制至少是50％；在更優選的實施方案中，所述抑制至少是70％，在最優選的實施方案中，所述抑制至少是80％。在體內實施方案中，這種促炎性細胞因子釋放的減少能夠減少炎性細胞因子劑量的有害作用。任何α7激動劑，現在已知的或是以後發現的，應當能夠抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子。在優選的實施方案中，所述類膽鹼激動劑在可用濃度對細胞沒有毒性。在更優選的實施方案中，所述類膽鹼激動劑在體內用於治療，或者由哺乳動物細胞天然產生。非限制性實例包括乙醯膽鹼，蕈毒鹼，菸鹼，3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(DMXB-A，也稱為GTS-21)(Kemetal.，1997；Simoskyetal.，2001)，膽鹼，甲碘化古柯鹼(Francisetal.，2001)。在最優選的實施方案中，所述類膽鹼激動劑是對α7選擇性或特異性的激動劑，這種激動劑對於正在進行炎症治療的受試體來說比非特異性的類膽鹼激動劑(例如菸鹼)引起的副作用較小。如這裡所說的，如果該激動劑是一種比激活至少一種其它菸鹼受體更大程度地激活α7的激動劑，那麼該激動劑是對α7選擇性的。這種激活上的差別可以通過比較用任何已知方法對各種受體的激活來檢測，例如用體外受體結合檢測，例如由NovaScreenBiosciencesCorporation(Hanover，MD)生產的，或者用WO02/44176(α4β2檢測)，美國專利序列號6,407,095(所述神經節受體的外周菸鹼受體)，美國專利申請序列號2002/0086871(標記配體與由所述受體轉染的GH4Cl細胞製備而得的膜結合)，美國專利申請序列號2002/0086871(α1和α4)，和WO97/30998中所述的方法。確定對α7受體選擇性的激動劑的方法見參考文獻美國專利5,977,144(表1)，WO02/057275(p41-42)和Holladayetal.(1997)。在此引入其全文作為參考。其它菸鹼受體的檢測是所述領域技術人員公知的。在優選的方法中，在給予激動劑以後表達α7受體亞型或另一種受體亞型(例如α4β2)的爪蟾卵母細胞的結合或活性(電流反應)。能導致更強激活α7受體亞型的激動劑確定為α7選擇性激動劑。用任何上述方法或等同的方法，優選所述選擇性α7激動劑激活α7受體比至少一種其它菸鹼受體強至少兩倍，更優選至少五倍，更優選至少10倍，最優選至少50倍。如果激動劑對α7受體的激活與任何其它菸鹼受體相比達到最大程度(即至少10倍，優選至少20倍，更優選至少50倍)，那麼該激動劑是對α7特異性的。最優選地，所述特異性激動劑不以任何可檢測到的程度(即在良好控制的對照種相對於未處理的受體顯著性為P＝0.05)激活另一種菸鹼受體。特異性α7激動劑的非限制性實例是DMXB-A(化合物(V)和甲碘化古柯鹼)。在一些實施方案中，所述菸鹼類膽鹼激動劑是一種具有通式I的化合物其中R代表氫或甲基，n代表0或1；或其藥學可接收的鹽。在特別優選的實施方案中所述菸鹼類膽鹼激動劑是(-)-螺[1-氮雜雙環[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑啉-2′-酮](化合物(VII))。通式I的化合物的製備方法如美國專利序列號5,902,814中所述，在此引入其全文作為參考。在其它實施方案中所述菸鹼類膽鹼激動劑是通式II的化合物其中m是1或2；n是0或1；Y是CH，N或NO；X是氧或硫；W是氧，H2或F2；A是N或C(R2)；G是N或C(R3)；D是N或C(R4)；條件是A，G和D中不超過一個是氮，但是Y，A，G和D中至少一個是氮或NO；R1是氫或C1-C4烷基；R2，R3和R4獨立地是氫，滷素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3，或者R2和R3，R3和R4分別一起形成另一個六元芳香環或者共同具有A和G，或G和D，分別含有零到兩個氮原子，並被一種或兩種下述取代基取代的雜芳環獨立地氫，滷素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3；R5和R6獨立地是氫，C1-C4烷基，C(O)R7，C(O)NHR8，C(O)OR9，SO2R10或一起構成(CH2)jQ(CH2)k，其中Q是O，S，NR11，或一個鍵；j是2到7；k是0到2；R7，R8，R9，R10，R11獨立地是C1-C4烷基，芳基，或雜芳基，或其對映異構體。或其藥學可接收的鹽。在優選的實施方案中，類膽鹼激動劑是一種具有通式II的化合物，其中m是1；n是0；p是0；x是氧；A是C(R2)；G是C(R3)；D是C(R4)。在特別優選的實施方案中，所述菸鹼類膽鹼激動劑是(R)-(-)-5′-苯基螺[1-氮雜雙環[2.2.2]辛烷-3，2′-(3′H)-呋喃並[2，3-b]吡啶]。通式II的化合物的製備方法如美國專利序列號6,110,914所述，在此引入其全文作為參考。在另外的實施方案中所述菸鹼類膽鹼激動劑是通式III的化合物其中R1，R6和R7是氫或C1-C4烷基；R2選自下組和其中R3，R4和R5選自氫，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C4烷基，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C6烷氧基，在烷氧基上具有1到4個碳的烷氧羰基，氨基，在醯基上具有1到4個碳的醯氨基，氰基，和在每個烷基上具有1到4個碳的二烷基氨基，滷素，羥基或硝基。在優選的實施方案中，激動劑是通式III的化合物，其中R2與四氫吡啶環的3-位置相連，進一步其中與苯環的4-或2-位置相連的R3選自下組氨基，羥基，氯，氰，二甲基氨基，甲基，甲氧基，乙醯氨基，乙醯氧基，和硝基。在一個特別優選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是羥基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是乙醯氨基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是乙醯氧基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是甲氧基，其中R1，R4和R5是氫。在另一個特別優選的實施方案中，所述激動劑是通式III的化合物，其中R3是甲氧基，其中R1和R4是氫，進一步其中R3與苯環的2-位置相連，與苯環的4-位置相連的R5是甲氧基或羥基。在特別優選的實施方案中，所述菸鹼類膽鹼激動劑選自3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(DMXB-A，化合物(V))，3-(4-羥基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-甲氧基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-氨基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)anabaseine(化合物(VI))，3-(4-甲氧基-2-羥基苯亞甲基)anabaseine，反-3-亞肉桂基anabaseine，反-3-(2-甲氧基-亞肉桂基)anabaseine和反-3-(4-甲氧基亞肉桂基)anabaseine。製備通式III的化合物的方法如美國專利序列號5,977,144所述，在此引入其全文作為參考。在另一個實施方案中，所述激動劑是通式IV的化合物其中X是O或S；並且R選自H，OR1，NHC(O)R1，和滷素，其中R1是氫或C1-C4烷基。在特別優選的實施方案中所述菸鹼類膽鹼激動劑選自N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥苯氧基)苯甲醯胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-乙醯氨基苯氧基)苯甲醯胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(苯基硫烷基)苯甲醯胺，和N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(3-氯苯基磺醯基)苯甲醯胺。製備通式IV的化合物的方法如PCT專利申請公開號WO01/85727所述，在此引入其全文作為參考。在另一個實施方案中，所述激動劑是(1-氮雜-雙環[2.2.2]辛-3-基)-氨基甲酸1-(2-氟苯)-乙酯。製備該化合物的方法如美國專利申請公開號2002/0040035中所述，在此引入其全文作為參考。在另一個實施方案中，α7激動劑是α7菸鹼受體的選擇性激動劑(更優選是特異性激動劑)的抗體。所述抗體可以是多克隆或單克隆；可以來自人，非人的真核生物，細胞，真菌或細菌；可以是由基因組或載體編碼序列編碼；可以在使用或不使用佐劑的情況下結合天然的或重組的α7或其片段，可通過本領域熟知的各種方法和工藝產生和生產抗體。可用抗體的其它實例包括但不限於嵌合的，單鏈的，和各種人的或人化的抗體，以及它們的片段例如Fab片段和由專門的表達系統產生的片段。本發明還涉及抗體，其是α7激動劑，如上所述。產生α7菸鹼受體的抗體的方法的一個非限制性的實例是用α7受體或其片段免疫合適的實驗室動物，通過與α7結合的免疫作用分離釋放出的抗體。免疫和分離步驟是本領域普通技術人員熟知的。作為激動劑的抗體可以用本文公開的方法鑑別，例如使分離的抗體與已受到刺激釋放促炎性細胞因子的巨噬細胞混和，或者通過能評價α7受體活性的任何其它適當的方法鑑別。對細胞因子釋放的抑制表示具有激動劑活性。對α7的選擇性可以通過檢測對至少一種其它菸鹼或類膽鹼受體的活性來評價，如前所述。已確定是α7受體的選擇性激動劑的抗體可以進一步評價其治療一種或多種本文所述的炎性疾病的功效，例如在動物模型中另外進行體外檢測或體內檢測。本發明還包括用此方法鑑別的α7選擇性抗體激動劑。本發明可用於研究培養的細胞，例如研究炎性細胞因子釋放對於巨噬細胞生物學的作用，或者檢測化合物的類膽鹼激動劑活性。但是體內的應用具有許多優選的實施方案。在那些實施方案中，細胞是患有由炎性細胞因子級聯介導的疾病或具有其患病危險的受試體中的細胞。這裡所說的受試體可以是任何哺乳動物。但是，在優選的實施方案中，所述受試體是人。因此，在一些實施方案中，本發明涉及在受試體中抑制炎性細胞因子級聯的方法。所述方法包括用足量的能抑制炎性細胞因子級聯的類膽鹼激動劑治療所述受試體，其中所述受試體患有由炎性細胞因子級聯介導的疾病或具有其患病危險。優選地，所述類膽鹼激動劑對α7菸鹼受體是選擇性的。對任何由炎性細胞因子級聯介導的疾病的治療都在本發明的範圍之內。在優選的實施方案中，所述疾病是其中炎性細胞因子級聯受到巨噬細胞釋放促炎性細胞因子的影響的疾病。所述疾病可以是其中炎性細胞因子級聯引起系統性反應，例如膿毒性休克的疾病。另外，所述疾病可以由局部炎性細胞因子級聯介導，例如風溼性關節炎。可用本發明治療的疾病的非限制性實例包括那些在說明書的
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部分列舉的疾病。優選地，所述疾病是闌尾炎，消化器官，胃和十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，急性或缺血性腸炎，憩室炎，會厭炎，弛緩不能，膽管炎，膽囊炎，肝炎，克羅恩氏病，腸炎，惠普爾病，哮喘，變態反應，過敏性休克，免疫複合體疾病，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒症，敗血病，內毒素性休克，惡病體質，高燒，嗜伊紅細胞肉芽腫，肉芽腫病，肉樣瘤，膿毒性流產，附睪炎，陰道炎，前列腺炎，尿道炎，支氣管炎，肺氣腫，鼻炎，囊腫性纖維化，局限性肺炎，黑肺病(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis)，alvealitis，細支氣管炎，咽炎，胸膜炎，竇炎，流行性感冒，呼吸道合胞病毒，皰疹，散播菌血症，登革熱，念珠菌病，瘧疾，絲蟲病，阿米巴病，水泡囊，燒傷，皮炎，皮肌炎，曬斑，風疹，疣，水皰，血管炎，angiitis，心內膜炎，動脈炎，動脈硬化症，血栓性靜脈炎，心包炎，心肌炎，心肌缺血，動脈周炎，風溼熱，阿爾茨海默病，乳靡洩，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合症，腦膜炎，腦炎，多發性硬化，大腦梗塞，大腦栓塞，guillame-barre綜合症，神經炎，神經痛，脊髓損傷，癱瘓，葡萄膜炎，關節炎，關節痛，骨髓炎，筋膜炎，佩吉特式病，痛風，牙周疾病，風溼性關節炎，滑膜炎，重症肌無力，甲狀腺炎，系統性紅斑狼瘡，古德帕斯丘症候群，白塞氏綜合症，同種異體移植物排斥，移植物抗宿主症，I型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，II型糖尿病，僵直性脊椎炎，Berger病，和瑞特綜合症，或何杰金氏病。在另外的實施方案中，所述疾病是上述列舉的任何疾病，條件是該疾病不是潰瘍性結腸炎，中風，II型糖尿病，克羅恩氏病，阿爾茨海默病或炎性皮膚疾病。在一個實施方案中，所述疾病是闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，克羅恩氏病，哮喘，變態反應，過敏性休克，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒症，敗血病，內毒素性休克，惡病體質，膿毒性流產，散播菌血症，燒傷，阿爾茨海默病，乳靡洩，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合症，大腦梗塞，大腦栓塞，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主症。在一個實施方案中，所述疾病是膿毒症。在另一個實施方案中，所述疾病是闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，哮喘，變態反應，過敏性休克，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒症，敗血病，內毒素性休克，惡病體質，膿毒性流產，散播菌血症，燒傷，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合症，大腦梗塞，大腦栓塞，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主病。在一個實施方案中，所述疾病是膿毒症。在另一個實施方案中，所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，器官缺血，再灌注損傷，膿毒症，內毒素性休克，惡病體質，燒傷，成人呼吸窘迫綜合症，慢性阻塞性肺病，牛皮癬，風溼性關節炎，系統性紅斑狼瘡，心肌缺血，和同種異體移植物排斥。在另一個實施方案中，所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，膿毒症，內毒素性休克，成人呼吸窘迫綜合症，慢性阻塞性肺病，風溼性關節炎，系統性紅斑狼瘡，心肌缺血，同種異體移植物排斥，哮喘，移植物抗宿主病，充血性心力衰竭和囊腫性纖維化。這些疾病優選用化合物I-VII中的任何一種或其藥學可接收的鹽治療。類膽鹼激動劑的給藥方式取決於要治療的疾病。例如靜脈注射優選用於治療系統性疾病例如膿毒性休克，口服給藥優選用於治療胃腸疾病例如胃潰瘍。給藥的方式和所給予類膽鹼激動劑的劑量可由所屬領域技術人員用標準的劑量-反應研究確定，而無需過度的實驗。進行確定的時候要考慮有關的環境，包括要治療的疾病，給藥組合物的選擇，受試體個體的年齡，體重和反應，以及受試體症狀的嚴重程度。因此，依賴於所述疾病，類膽鹼激動劑可以口服，腸胃外，鼻內，陰道，直腸，向舌，舌下，臉頰，臉頰內和經皮膚給藥給受試體。相應地，設計用於口腔，向舌，舌下，臉頰，臉頰內給藥的類膽鹼激動劑組合物可以用本領域公知的方法製備而無需過度的試驗，例如用惰性稀釋劑或用可食用載體。所述組合物可以包裹在明膠膠囊中或壓縮成片劑。為口服治療給藥的目的，本發明的藥物組合物可以與賦形劑混合，製成片劑，錠劑，膠囊，酏劑，懸浮液，糖漿，薄膜，口香糖等。片劑，丸劑，膠囊，錠劑等還可以含有粘合劑，賦形劑，崩解劑，潤滑劑，甜味劑，調味劑。粘合劑的一些實例包括維晶纖維素，黃蓍膠或明膠。賦形劑的實例包括澱粉或乳糖。崩解劑的實例包括褐藻酸，玉米澱粉等。潤滑劑的實例包括硬脂酸鎂或硬脂酸鉀。助流劑的一個實例是膠體二氧化矽。甜味劑的一些實例包括蔗糖，糖精等。調味劑的一些實例包括薄荷，甲基水楊酸鹽，橙調味料等。用於製備這些不同的組合物的物質應當是藥物純的，並且所使用的量應當是無毒的。本發明的類膽鹼激動劑組合物可以容易地通過腸胃外給藥，例如靜脈內，肌肉內，脊髓內或皮下注射。腸胃外給藥可以將本發明的類膽鹼激動劑組合物製成溶液或懸液進行。這種溶液或懸液還可以包含無菌稀釋劑例如注射水，鹽溶液，不揮發性油，聚乙二醇，丙三醇，丙二醇或其它合成溶劑。腸胃外製劑還可以包括抗細菌劑例如苯甲醇或苯甲酸甲酯，抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉和鰲合試劑例如EDTA。還可以加入緩衝液例如乙酸鹽，檸檬酸鹽或磷酸鹽，以調整滲透壓，如氯化鈉或右旋糖。腸胃外製劑可以放入玻璃或塑料製作的安瓿瓶，一次性注射器或多劑量小瓶中。直腸給藥包括將藥物組合物給入到直腸或大腸中。這可以用栓劑或灌腸劑實現。栓劑製劑可以容易地用本領域公知的方法製備。例如栓劑製劑的製備可以通過將丙三醇加熱至大約120℃，將類膽鹼激動劑溶解於丙三醇中，加入純淨水後攪拌加熱的丙三醇，將熱的混合物注入到栓劑模具中。經皮膚給藥包括類膽鹼激動劑通過皮膚吸收。經皮製劑包括貼劑(例如公知的尼古丁貼片)，油膏，乳劑，凝膠，軟膏等。本發明包括經鼻給予哺乳動物治療有效量的類膽鹼激動劑。這裡所說的經鼻給藥或鼻內給藥包括將類膽鹼激動劑給予到受試體鼻腔通道或鼻腔的黏膜上。這裡所說的鼻內給予類膽鹼激動劑的藥物組合物包括用公知的方法製備的適於以鼻噴霧劑，滴鼻劑，懸液，凝膠，油膏，乳劑或粉末的形式給藥的治療有效量的該激動劑。類膽鹼激動劑的給藥也可以通過鼻塞或鼻用棉球實現。如前所述，這些方法中優選的類膽鹼激動劑對α7受體是選擇性的或是特異性的，包括例如DMXB-A(化合物(V))，甲碘化古柯鹼。本發明還涉及確定一種化合物是否是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼激動劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子。在這些方法中，能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的化合物是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼激動劑。這些方法優選包括用所述化合物和能刺激促炎性細胞因子級聯的試劑處理哺乳動物細胞。優選試劑是細菌脂多糖(LPS)。所述化合物可以在所述試劑之前，與所述試劑同時，或在所述試劑之後給予哺乳動物細胞。優選地，所述化合物在所述試劑之前給藥。參見，例如美國專利申請序列號09/855,446。在優選的實施方案中，確定為α7激動劑的化合物可進一步檢測其激活至少一種其它菸鹼受體亞型的能力，以確定所述α7激動劑是否是選擇性的或特異性的。能選擇性或特異性激活α7亞型的檢測化合物可以進一步進行更進一步的檢測，例如進一步在動物模型中進行體外檢測或體內檢測以進一步評價所述化合物用於治療患有炎性疾病的受試體的適宜性。這些方法不僅僅限於任何要檢測的特定化合物。雖然大部分類膽鹼激動劑已知是小分子，α7激動劑活性也可能存在於蛋白質(例如抗體，如前所述)，寡核苷酸或其類似物(例如適配體)或任何其它化合物中。這些方法適用於檢測任何可能的α7激動劑。在這些方法中，所述細胞可以是任何可被誘導產生促炎性細胞因子的細胞。在優選的實施方案中，所述細胞是免疫細胞，例如巨噬細胞，單核細胞，或嗜中性粒細胞。在最優選的實施方案中，所述細胞是巨噬細胞。用於測量其受到抑制的促炎性細胞因子可以是任何能被誘導從細胞中釋放的促炎性細胞因子。在優選的實施方案中，所述細胞因子是TNF。可以用任何已知的方法評價細胞因子產生的抑制，包括細胞因子的定量測定(例如用ELISA)，或者通過生物檢測，(例如測定促炎性細胞因子活性是否降低)，或者通過測量促炎性細胞因子mRNA。技術人員可以使用這些檢測方法而無需過度的實驗，參見美國專利申請序列號09/855,446中幾種可用於這方面的檢測。這些方法可以在體內進行，其中動物，例如大鼠用所述化合物和能刺激促炎性細胞因子級聯的試劑一起處理，通過例如檢測血清TNF水平來檢測所述試劑對促炎性細胞因子級聯的誘導作用。但是，由於用細胞培養物進行這些類型的檢測比用完整的動物更容易，所述方法優選在體外進行，例如使用巨噬細胞培養物。在相關的實施方案中，本發明涉及確定一種化合物是否是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼拮抗劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否降低了類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力。在這些實施方案中，能降低類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的化合物是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼拮抗劑。這些方法優選包括用所述化合物和α7激動劑以及能刺激促炎性細胞因子級聯的試劑一起處理哺乳動物細胞。因此這些方法基本上類似於上述的方法，除了前述檢測中的化合物是能抑制受到所述試劑誘導的細胞釋放促炎性細胞因子的α7激動劑。對檢測化合物進行評價，確定其是否能阻止α7激動劑抑制由所述試劑(例如LPS)引起的促炎性細胞因子級聯。所述細胞和試劑如前述方法中所述；所述α7激動劑可以是任何非特異性的，選擇性的，或特異性的α7激動劑，例如菸鹼或DMXB-A。同樣與前述方法相同，這些方法可以在體內進行，但是優選在體外進行。與前述方法相同，所述用於檢測α7拮抗劑活性的化合物不限於小分子化合物，可以包括任何化合物，包括蛋白質，寡肽，或寡肽類似物。同樣與前述方法相同，通過檢測細胞因子產生的抑制評價所述檢測化合物的功效，可以用任何已知的方法，包括細胞因子的定量測定(例如用ELISA)，或者通過生物檢測，(例如測定促炎性細胞因子活性是否降低)，或者通過測量促炎性細胞因子mRNA。技術人員可以使用這些檢測方法而無需過度的實驗。在其它實施方案中，本發明涉及確定檢測化合物是否具有抑制炎症的能力的方法。在一些方面，這些方法包括確定所述檢測化合物是否是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼激動劑。優選所述方法進一步包括通過檢測所述檢測化合物激活至少一種其它菸鹼受體的能力來確定所述檢測化合物對α7是否是選擇性的。這些測定可以如前所述進行，例如通過測定所述化合物是否能抑制哺乳動物細胞，優選巨噬細胞釋放促炎性細胞因子。在其它方面，所述測定檢測化合物是否具有抑制炎症的能力的方法包括測定所述檢測化合物是否能抑制拮抗劑與α7菸鹼受體的結合，例如通過測定所述檢測化合物是否能抑制巨噬細胞中FITC-α-銀環蛇毒素的結合。參見實施例1，在一些實施方案中所述方法可使用α-銀環蛇毒素染色和共焦顯微鏡方法，除了加入所述檢測化合物以測定所述化合物是否能抑制α-銀環蛇毒素與巨噬細胞的結合。在一些情況下希望能夠限制哺乳動物細胞的抑制促炎性細胞因子釋放的能力。這種情況的實例是當希望促炎性細胞因子能夠防止癌症或者抵抗癌症的時候，或者當研究α7受體的生理作用的時候。因此本發明還涉及抑制哺乳動物細胞在所述細胞暴露於類膽鹼激動劑的時候其中促炎性細胞因子的釋放的減少的方法。所述方法包括用能抑制類膽鹼激動劑與α7受體的結合的試劑處理所述細胞。與前述方法相同，這些方法中優選的細胞是巨噬細胞。技術人員能夠預見有幾種使類膽鹼激動劑與細胞上的α7受體結合的途徑可受到抑制。其實例包括用α7拮抗劑處理所述細胞；用能與α7受體結合的抗體或適配體處理所述細胞，防止類膽鹼激動劑與所述受體的結合；或者，優選地，用能與α7mRNA互補的並能抑制該mRNA翻譯成α7受體的反義寡核苷酸或其模擬物處理細胞。參見實施例1可以證明這種反義模擬物的效果。這裡所說的模擬物是一種寡核苷酸類似物，其在化學上與天然的寡核苷酸不同，但是能以類似於寡核苷酸的方式與互補的核苷酸序列非共價結合。參見，例如美國專利6,436,909，其中有關於可用的模擬物的討論。在優選的實施方案中，所述試劑是硫代磷酸酯寡核苷酸模擬物，與相關的α7基因互補。在Pengetal.，1994中給出了α7基因。有效的反義序列的實例是5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′(參見實施例1)或類似的序列，優選是人α7亞基基因翻譯起始密碼子周圍的序列。因此，本發明還涉及能抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露於類膽鹼激動劑的時候其中脂多糖誘導的TNF釋放的減少的寡核苷酸或其模擬物。所述寡核苷酸或其模擬物包括大於5個核苷酸長的與α7受體的mRNA互補的序列。優選地，所述寡核苷酸或模擬物與α7mRNA的轉錄起始區域互補。最優選地，所述寡核苷酸或模擬物包括序列5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′。本發明的優選實施方案將在下述實施例中描述。根據說明書的描述或本發明的實踐，權利要求保護範圍內的其它實施方案對本領域技術人員來說是顯而易見的。應當理解說明書，以及實施例僅僅是在由實施例後面的權利要求所表示的本發明的範圍和精神範圍內的示例性描述。實施例1.α7菸鹼受體作為神經免疫突觸的分子底物實施例概述這裡我們發現了乙醯膽鹼對巨噬細胞TNF釋放的抑制需要有菸鹼受體α7亞基。α-銀環蛇毒素與初級人巨噬細胞表面表達的不連續的受體簇相結合。與α7特異性抗體的免疫雜交證明了通過α-銀環蛇毒素結合的珠子的粘附分離的蛋白質中α7亞基的同一性。將巨噬細胞暴露於α7反義寡核苷酸會減少α-銀環蛇毒素的結合併且在存在菸鹼的條件下能恢復TNF的釋放。缺少菸鹼受體α7亞基的小鼠與野生型小鼠相比，在內毒素血症期間產生顯著更多的TNF，IL-1β和IL-6。從α7剔除小鼠中分離的巨噬細胞對類膽鹼激動劑沒有反應，繼續產生TNF。結果，用在野生型小鼠中能抑制TNF釋放的方法對迷走神經進行電刺激不能抑制α7缺陷型小鼠中的TNF釋放。因此，菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基對於促炎性細胞因子的類膽鹼抑制是必需的。結果和討論在促炎性細胞因子釋放的抑制中鑑別巨噬細胞受體的第一步是用FITC-α-銀環蛇毒素，一種能結合類膽鹼受體子集的肽拮抗劑對初級人巨噬細胞進行標記(Lindstrom，1995；LeonardBertrand，2001)。觀察到α-銀環蛇毒素在巨噬細胞表面的強烈結合(圖1a)。進行菸鹼預處理顯著降低了結合的強度(圖1b)。在神經肌肉連接處和神經元突觸處，菸鹼受體形成受體聚合體或受體簇，促進了快速信號傳遞(Linetal.，2001；Fengetal.，1998；Shoopetal.，2000)。在更高的放大倍數下在巨噬細胞表面可以清楚觀察到不連續的α-銀環蛇毒素簇的結合，特別是集中在細胞體表面(圖1c，d)。到目前為止，α1，α7和α9是已知的人細胞中α-銀環蛇毒素結合的菸鹼受體亞基(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001)。α1和β1，δ以及ε(成人)或γ(胎兒)亞基一起形成異五聚體的菸鹼受體，調節肌肉收縮；α7和α9每個形成同五聚體的菸鹼受體(Lindstrom，1995；LeonardandBertrand，2001)。為了確定這些受體亞基是否在巨噬細胞中表達，我們從外周血單核細胞(PBMC)體外分化得到的初級人巨噬細胞中分離RNA並進行RT-PCR分析。為了增加實驗的靈敏度和特異性，我們用對每個亞基特異的巢式引物在逆轉錄後進行了兩輪PCR。通過測序驗證PCR產物的同一性。在來自不相干血液供體的人巨噬細胞中檢測到α1，α10(數據未顯示)和α7(圖2a)mRNA的表達。用同樣的RT-PCR策略在巨噬細胞中沒有檢測到α9亞基mRNA的表達(數據未顯示)。接下來用westernblotting檢測α1和α7亞基的蛋白表達。在兩個分化的初級巨噬細胞和未分化的PBMC中用α7特異性抗體都識別出一個清晰的條帶，其分子量大約是55kD(與已公開的α7蛋白的分子量類似[Pengetal.，1994；DrisdelandGreen，2000])(數據未顯示)。在PBMC體外分化成巨噬細胞的過程中，α1受到負調控至檢測不到的水平(數據未顯示)。δ亞基，一種α1異五聚體菸鹼乙醯膽鹼受體所必需的組分用這種巢式RT-PCR策略檢測不到(數據未顯示)。為了驗證巨噬細胞中的陽性信號是代表與α-銀環蛇毒素結合的α7菸鹼受體，我們用α-銀環蛇毒素結合珠粘附由人巨噬細胞或PC12細胞(大鼠嗜鉻細胞瘤細胞，已知能表達α7同五聚體[DrisdelandGreen，2000])製備而得的蛋白。用westernblotting用能識別人和大鼠α7蛋白的多克隆或單克隆α7特異性抗體(人和大鼠的α7蛋白含有相同數目的胺基酸，具有94％的相同性[Pengetal.，1994；Seguelaetal.，1993])分析保留的蛋白。從結果明顯看出人巨噬細胞表達α-銀環蛇毒素結合的α7蛋白，其分子量與PC12細胞的α7亞基類似(圖2b)。用RT-PCR方法克隆全長的巨噬細胞表達的α7以驗證巨噬細胞α7亞基的同一性。巨噬細胞中的全長菸鹼乙醯膽鹼α7亞基包括外顯子1到10，與神經元中表達的菸鹼乙醯膽鹼α7亞基相同(Gaultetal.，1998)。總的來說，這些數據確定了菸鹼乙醯膽鹼α7亞基就是人巨噬細胞表面表達的α-銀環蛇毒素結合的受體。為了研究α7受體是否是TNF釋放的類膽鹼抑制所必需的，我們合成了人α7亞基基因的翻譯起始密碼子周圍的硫代磷酸酯反義寡核苷酸。合成α1和α10亞基基因的類似區域的反義寡核苷酸作為對照。暴露於α7特異的反義寡核苷酸(ASα7)中的巨噬細胞對菸鹼的TNF抑制作用的反應顯著地減小(圖3a)。在存在菸鹼的條件下菸鹼乙醯膽鹼α7亞基的反義寡核苷酸恢復了巨噬細胞TNF的釋放。在缺乏LPS和菸鹼的條件下，巨噬細胞暴露於ASα7中不能刺激TNF的合成。α1(ASα1)和α10(ASα10)亞基的反義寡核苷酸，在相似條件下，不能顯著改變菸鹼對於LPS誘導的TNF釋放的作用(圖3b，c)，表明菸鹼對於TNF的抑制作用是對菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基特異性的。其它α7，α1和α10的反義寡核苷酸也具有類似的效果(數據未給出)。向巨噬細胞培養基中加入菸鹼乙醯膽鹼α7亞基反義寡核苷酸可以減少FITC-標記的α-銀環蛇毒素的表面結合(圖3d，e)。綜合這些數據表明菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基菸鹼受體對於巨噬細胞中依賴於類膽鹼抗炎性途徑的TNF釋放的抑制來說是必需的。巨噬細胞是在體內對細菌內毒素反應時產生的TNF的主要來源(Bianchietal.，1995；Kuminsetal.，1996)。為了研究菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基對於體內的類膽鹼抗炎性途徑是否是必需的，我們檢測了通過基因剔除技術產生的α7基因缺陷型的小鼠中產生的TNF(Orr-Urtregeretal.，1997)。缺少α7受體亞基的小鼠發育正常，總體上沒有表現出解剖學缺陷(Id.；Franceschinietal.，2000)。暴露於內毒素的α7亞基缺陷型小鼠中的血清TNF水平比野生型對照小鼠高5倍(野生型血清TNF＝2.3±0.3ngml-1，α7易除小鼠的血清TNF＝12.2±4.7ngml-1，p＜0.05(雙尾t檢驗))(圖4a)。剔除小鼠的肝和脾中產生的TNF也較高(圖4b，c)，表明菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基對於體內炎性反應的調節具有重要作用。內毒素血症的α7亞基缺陷型的小鼠與野生型小鼠相比也產生顯著更高水平的IL-1β(圖4d)和IL-6(圖4e)。來自α7亞基剔除的小鼠的巨噬細胞能抵抗類膽鹼激動劑，在存在菸鹼或乙醯膽鹼的時候也能正常產生TNF(表1)。因此菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基在巨噬細胞中的表達對於TNF的類膽鹼調節是必需的。表1.野生型和α7-缺陷型腹膜巨噬細胞的TNF產生處理TNF-ngml-1野生型α7剔除從硫乙醇酸鹽誘導的野生型小鼠或菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基剔除小鼠分離的腹膜巨噬細胞用LPS(100ng/ml)在培養基中刺激4小時。對照未刺激的巨噬細胞培養基。需要指出，菸鹼或乙醯膽鹼(Ach)在LPS之前5-10分鐘加入。用ELISA檢測TNF水平；數據顯示為平均值±s.e.m.每組n＝8。*＝與LPS具有顯著性差異，p＜0.05，雙尾t檢驗結果。為了確定菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基是否是系統性TNF的迷走神經抑制所必需的，我們對內毒素血症的野生型或α7亞基缺陷型小鼠的迷走神經進行電刺激(Borovikovaetal.，2000)。對迷走神經的電刺激在野生型小鼠中顯著減少了內毒素誘導的血清TNF水平(圖5)。但是，在菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基缺陷型小鼠中用這種方法進行迷走神經的刺激並不減少內毒素血症期間的血清TNF水平(圖5)。因此，在體內對迷走神經刺激的功能反應需要菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基來抑制TNF釋放。這些結果暗示對於炎症和TNF釋放的調控可以有幾種理解，也可以設計幾種治療方案。以前的數據表明菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基形成參與細胞間快速化學信號傳導的同五聚體受體(Lindstrom，1995；LeonardBertrand，2001；LeNovereChangeux，1995)。神經元菸鹼乙醯膽鹼α7受體對於鈣是高度滲透的(Vijayaraghavanetal.，1992；Shoopetal.，2001)，我們已經觀察到菸鹼在巨噬細胞中可誘導暫時的鈣流量(數據未顯示)。這種增加的鈣流量的作用和抑制TNF釋放的細胞內機制還需要進一步研究。破壞菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基在體內的表達顯著增加內毒素誘導的TNF釋放，使迷走神經刺激劑無效，這可作為抑制TNF釋放的方法。這表明菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基的產物對於內毒素血症的系統性炎性反應期間的急性TNF釋放的迷走神經調節是必需的。迷走神經末梢釋放的，或者其它來源(例如淋巴細胞或者上皮細胞)的乙醯膽鹼特別可抑制巨噬細胞的激活。有可能研究類膽鹼激動劑，將菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基靶定於外周免疫細胞，作為抗炎性試劑抑制TNF釋放。還有可能研究具有抗炎性活性的迷走神經刺激劑；類似的物質在臨床上是安全的，可用於治療一些疾病發作的受試體，因此關注能靶定菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基的TNF抑制策略是合情合理的。方法α-銀環蛇毒素染色和共焦顯微鏡方法人巨噬細胞的分離和培養如前所述(Borovikovaetal.，2000)。細胞在完全培養基(具有10％熱滅活的人血清的RPMI1640)中在存在MCSF(2ng/ml)的條件下分化七天。分化的巨噬細胞與1.5μgml-1的FITC標記的α-銀環蛇毒素(SIGMA)一起在細胞培養基中在4℃培育15分鐘。在加入α-銀環蛇毒素之前加入菸鹼使其終濃度為500μM。用RPMI培養基(GIBCO)洗滌細胞三次，然後在4％的多聚甲醛-PBS溶液(pH7.2)中室溫固定15分鐘。固定之後用PBS洗滌細胞一次，用螢光共焦顯微鏡觀察計數。RT-PCR.用TRIzol試劑從體外分化的人巨噬細胞中提取總RNA。用TitanOneTubeRT-PCR試劑盒(RocheMolecularBiochemicals)進行逆轉錄和第一輪PCR，根據製造商的手冊操作。用Promega2xPCRmastermix進行第二輪巢式PCR。巢式PCR的PCR產物在瓊脂糖凝膠上進行電泳，用GeneCleanIII試劑盒(Biolab)回收並進行測序以驗證結果。逆轉錄和第一輪PCR所用的引物是α1有義引物5′-CCAGACCTGAGCAACTTCATGG-3′5′-AATGAGTCGACCTGCAAACACG-3′；α有義引物5′-GACTGTTCGTTTCCCAGATGG-3′，反義引物5′-ACGAAGTTGGGAGCCGACATCA-3′；α9有義引物5′-CGAGATCAGTACGATGGCCTAG-3′，反義引物5′-TCTGTGACTAATCCGCTCTTGC-3′。巢式PCR的引物是α1有義引物5′-ATCACCTACCACTTCGTCATGC-3′，反義引物5′-GTATGTGGTCCATCACCATTGC-3′；α7有義引物5′-CCCGGCAAGAGGAGTGAAAGGT-3′，反義引物5′-TGCAGATGATGGTGAAGACC-3′；α有義引物5′-AGAGCCTGTGAACACCAATGTGG-3′，反義引物5′-ATGACTTTCGCCACCTTCTTCC-3′。要克隆全長α7cDNA，使用下述引物5′AGGTGCCTCTGTGGCCGCA3′和5′GACTACTCAG-TGGCCCTG3′；5′CGACACGGAGACGTGGAG3′和5′GGTACGGATG-TGCCAAGGAGT3′；5′CAAGGATCCGGACTCAACATGCGCTGCTCG3′和5′CGGCTCGAGTCACCAGTGTGGTTACGCAAAGTC3′。Westernblotting和α-銀環蛇毒素pull-dowr檢測.將PC12或初級人巨噬細胞與裂解緩衝液(150mMNaCl，5mMEDTA，50mMTrispH7.4，0.02％疊氮鈉，1％TritonX-100和蛋白酶抑制劑混合物)在冰上共培育90分鐘製備得到細胞溶解物。在SDSPAGE凝膠上將等量的總蛋白與α7特異性抗體(SantaCruzsc-1447)或α1單克隆抗體(Oncogene)進行westernblotting。在α-銀環蛇毒素pull-down檢測中，α-銀環蛇毒素(SIGMA)與CNBr-活化的Sepharose珠(Pharmacia)結合，然後與細胞溶液物在4℃培育過夜。將珠子和結合蛋白用裂解緩衝液洗滌四次，用α7特異性抗體(多克隆SantaCruzH-302，單克隆SigmaM-220)進行westernblotting進行分析。反義寡核苷酸實驗.合成硫代磷酸酯反義寡核苷酸並用Genosys純化。寡核苷酸序列是ASα75′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′；ASα15′-gggctccatgggctaccgga-3′；ASα105′-ccccatggccctggcactgc-3′。這些序列覆蓋了α7，α1和α10基因的不同的翻譯起始區域。這些反義寡核苷酸的遞送如Cohenetal.(1997)所述，寡核苷酸濃度為1μM，時間為24小時。在細胞培養實驗中，用所述寡核苷酸預處理的巨噬細胞培養物用新鮮培養基洗滌並用100ngml-1LPS和菸鹼(1μM，在LPS之前5-10分鐘加入)進行刺激，或者不用菸鹼。LPS刺激後用L929檢測測定釋放的TNF的量，然後用TNFELISA進行驗證。在α-銀環蛇毒素染色中，洗滌預處理的細胞並進行處理，如上所述地進行FITC-α-銀環蛇毒素染色。菸鹼和其它菸鹼乙醯膽鹼受體α7亞基激動劑也能顯著抑制鼠巨噬細胞樣細胞系RAW264.7中LPS誘導的TNF釋放(數據未顯示)。α7菸鹼受體缺陷型小鼠.α7菸鹼受體缺陷型小鼠(C57BL/6背景)和野生型同窩出生仔鼠購自TheJacksonLaboratory(B6.1297-Chrna7mtmlBay，#003232)。繁殖純合體剔除小鼠或野生型小鼠得到其後代。用大約8到12周齡的雌性和雄性小鼠(年齡和性別都與野生型對照相匹配)進行內毒素實驗。將小鼠逐個稱重，相應地給予0.1mgkg-1LPS(i.p.)。在TNF實驗中，在給予LPS一小時後收集血液，肝和脾。在IL-1β和IL-6實驗中，在給予LPS四小時後收集血液樣品。用ELISA檢測TNF，IL-1β和IL-6。用基因組PCR策略驗證小鼠的基因型。從大約8周齡(每組n＝8)的硫乙醇酸鹽誘導的(48小時)α7剔除和野生型雄性和雌性小鼠中分離腹膜巨噬細胞。每組收集巨噬細胞並培養過夜。在加入LPS(100ngml-1)之前5-10分鐘加入菸鹼和乙醯膽鹼。與乙醯膽鹼一起加入溴化3-二甲氨基甲醯氧基-1-甲基吡啶(100μM)。LPS誘導後四個小時，用ELISA檢測TNF水平。迷走神經刺激.α7菸鹼受體缺陷型小鼠(C57BL/6背景)和年齡和性別相匹配的野生型C57BL/6小鼠用克他命(100mgkg-1，肌肉內)和甲苯噻嗪(100mgkg-1，肌肉內)進行麻醉。對小鼠施以假手術或用電刺激組件(STM100A，HarvardApparatus)對迷走神經進行刺激(左迷走神經，1伏，2ms，1Hz)。刺激進行20分鐘(給予LPS之前10分鐘，之後10分鐘)。給予致命量的LPS(75mgkg-1，腹膜腔內)。給予LPS之後2小時收集血液。用ELISA檢測TNF水平。統計學分析.用雙尾t檢驗進行統計學分析；P＜0.05則認為具有顯著性。實驗重複兩次或三次；在體內實驗或離體實驗中，「n」指每種條件下動物的數目。實施例2化合物(V)和(VI)左盲腸結紮和穿孔鼠模型的膿毒症中起保護作用式(V)和(VI)的化合物在治療盲腸結紮和穿孔鼠模型的膿毒症中特別有效。3-(2，4-二甲氧基苯亞甲基)anabaseine(V)3-(4-羥基-2-甲氧基-苯亞甲基)anabaseine(VI)如FinkandHeard，J.ofSurg.Res.49186-196(1990)，Wichmanetal.，Crit.CareMed.262078-2086(1998)和Remicketal.，Shock489-95(1995)所述進行盲腸結紮和穿孔(CLP)。簡短來說，肌肉內施用75mg/kg克他命(FortDodge，FortDodge，Iowa)和20mg/kg甲苯噻嗪(BohringerIngelheim，St.Joseph，MO)進行麻醉。進行中線切割並分離盲腸。在距離遠離回盲瓣的盲腸末端5.0mm的位置處進行6-0聚丙烯紡織纖維縫合結紮。用22標準尺寸針對結紮的盲腸參與部分進行一次穿孔，不直接擠出糞便。然後將盲腸放回其在腹部內的正常位置。然後用6-0聚丙烯紡織纖維進行兩層縫合封閉腹腔，即分別對腹膜和肌膜縫合以防止體液外瀉。以20ml/kg體重給所有動物皮下給予生理鹽水使其復甦。手術後給每隻小鼠皮下注射imipenem(0.5mg/小鼠)(Primaxin，MerckCo.，Inc.，WestPoint，PA)30分鐘。然後使動物復甦。小鼠用4mg/kg的3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(化合物(V))或者4mg/kg的3-(4-羥基-2-甲氧基-苯亞甲基anabaseine(化合物(VI))以及載體對照處理。這些化合物和載體對照給予到腹腔內(i.p.)，在第1天和第2天(分別是手術後24小時和48小時)一天兩次，在第3天給予一次。每天監測其死亡率直至手術後14天。結果如圖6所示，其中顯示了用化合物(V)，化合物(VI)或載體對照處理後存活動物的百分數。在第14天，有91％(p＜0.01)的用化合物(V)處理的小鼠和82％(p＜0.02)的用化合物(VI)處理的小鼠存活，而只有30％的用載體對照處理的小鼠存活。這些結果證明化合物(V)和化合物(VI)能顯著提高膿毒症的鼠CLP模型中的存活率。實施例3化合物(V)和菸鹼抑制鼠RAW2647巨噬細胞樣細胞中LPS誘導的TNF-α釋放鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞(美國典型組織培養物保藏中心，Rockville，Md.，USA)在加入10％胎牛血清，青黴素和鏈黴素的DMEM中培養。將細胞接種於24孔的組織培養板中的Opti-MEM1培養基中，90％匯合。細胞用0.001，0.01，0.1，1，10或100μM的化合物(V)或菸鹼(Sigma)處理。加入化合物(V)或菸鹼後五分鐘，將細胞用LPS(500ng/ml)處理。4小時後收集上清，用ELISA(RDSystemsInc.，Minneapolis，MN的鼠ELISA試劑盒)檢測TNF-α。結果如圖7所示，證明化合物(V)與菸鹼一樣以劑量依賴的方式抑制RAW264.7細胞的TNF-α釋放。實施例4化合物(VI)抑制鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導的TNF-α釋放鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞(美國典型組織培養物保藏中心，Rockville，Md.，USA)在加入10％胎牛血清，青黴素和鏈黴素的DMEM中培養。將細胞接種於24孔的組織培養板中的Opti-MEM1培養基中，90％匯合。在圖8A中，用0.1，1和10μM的化合物(VI)處理細胞。在與化合物(VI)預培育0.1，4或24小時後，用LPS(500ng/ml)處理細胞。4小時後收集上清，用ELISA(RDSystemsInc.，Minneapolis，MN的鼠ELISA試劑盒)檢測TNF-α。結果如圖8A所示，顯示為TNF-α抑制的百分數。化合物(VI)以劑量依賴的方式抑制TNF-α。圖8B顯示了圖8A中預培育0小時的結果，顯示為TNF-α抑制的百分數。化合物(VI)的估計IC50為0.9μM。實施例5在LPS刺激之前的化合物(VI)處理抑制小鼠中的循環TNF將C57B/6小鼠用4mg/kg化合物(VI)或載體對照進行腹膜腔內處理(i.p.)。用化合物(VI)或載體處理後5分鐘，給小鼠i.p.注射100μgLPS。LPS處理後2小時處死小鼠，收集血液樣品檢測TNF-α。如上所述用ELISA檢測TNF-α。如圖9所示，在LPS刺激之前用化合物(VI)處理使循環TNF-α水平與用載體對照處理的小鼠相比降低了大約50％。實施例6化合物(VI)在鼠DSS結腸炎中減少了結腸炎症右旋硫酸鈉誘導的(DSS)結腸炎的操作如Hoveetal.，Dig.Dis，Sci.47(9)2056-2063(2002)所述。C57B/6小鼠在其飲用水中給予3％(w/v)DSS(分子量40kDa；TdBConsultancy，Uppsala，Sweden)，持續7天。開始給予DSS後12小時，給小鼠i.p.注射4mg/kg化合物(VI)一天兩次，持續7天。第7天處死小鼠。小鼠死亡後收集結腸，通過中線切割摘除。測量結腸總長度，結果如圖10(B)所示。結腸縮短表示結腸炎更加嚴重。用化合物(VI)處理的小鼠結腸比對照小鼠的結腸長度略長(p＝0.07)，表明化合物(VI)處理的小鼠的結腸炎較輕。另一個表示疾病嚴重程度的特徵，結腸重量也進行了測量。記錄結腸溼重作為炎症水腫的指標。結果如圖10(A)所示。用化合物(VI)處理的小鼠的結腸與對照條件的小鼠相比重量減輕。這些結果表明化合物(VI)在鼠DSS結腸炎中減少了結腸炎症實施例7化合物(VII)抑制鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞中LPS誘導的TNF-α釋放化合物(VII)在抑制TNF-α釋放上顯示出顯著的效果。(-)-螺-1-氮雜雙環[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑烷-2′-酮(VII)鼠RAW264.7巨噬細胞樣細胞(美國典型組織培養物保藏中心，Rockville，Md.，USA)如實施例3所述進行培養。將細胞用0.001，0.01，0.1，1，10或100μM的(-)-螺[1-氮雜雙環[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑烷-2′-酮](化合物(VII))。加入化合物(VII)後5分鐘，用LPS(500ng/ml)處理細胞。如上所述用ELISA檢測TNF-α。結果如圖11所示，其中證明了較高濃度的化合物(VII)抑制RAW264.7細胞的TNF-α釋放。用100μM的化合物(VII)處理的細胞中的TNF-α釋放與對照細胞降低了四倍多。綜上所述，可以看到本發明具有幾個優點，也具有其它優點。可以對上述方法和組合物進行各種改變而不背離本發明的範圍，上述說明書中所包含的所有內容以及附圖中所顯示的內容都是舉例說明而不具有限制作用。說明書中所有引用的參考文獻都在此引入作為參考。本文中對參考文獻的討論僅僅是作者的觀點，而不應當將任何參考文獻作為現有技術。申請人保留置疑所引用的參考文獻的準確性和相關性的權利。本發明特別給出了優選的實施方案，本領域技術人員應當理解可以對其形式和細節上進行各種變化而不背離由權利要求包括的本發明的範圍。權利要求1.一種治療患有由促炎性細胞因子的釋放介導的疾病的受試體的方法，包括用足量的能減少巨噬細胞中促炎性細胞因子釋放的量的對α7菸鹼受體選擇性的類膽鹼激動劑治療受試體其中所述疾病選自闌尾炎，消化器官，胃和十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，會厭炎，弛緩不能，膽管炎，膽囊炎，肝炎，惠普爾病，哮喘，變態反應，過敏性休克，免疫複合體疾病，器官缺血，再灌注損傷，器官壞死，花粉熱，膿毒症，敗血病，內毒素性休克，惡病體質，高燒，嗜伊紅細胞肉芽腫，肉芽腫病，肉樣瘤，膿毒性流產，附睪炎，陰道炎，前列腺炎，尿道炎，支氣管炎，肺氣腫，鼻炎，囊腫性纖維化，局限性肺炎，黑肺病(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis)，alvealitis，細支氣管炎，咽炎，胸膜炎，竇炎，流行性感冒，呼吸道合胞病毒，皰疹感染，HIV感染，B型肝炎病毒感染，C型肝炎病毒感染，散播菌血症，登革熱，念珠菌病，瘧疾，絲蟲病，阿米巴病，水泡囊，燒傷，血管炎，angiitis，心內膜炎，動脈炎，動脈硬化症，血栓性靜脈炎，心包炎，心肌炎，心肌缺血，動脈周炎，風溼熱，乳靡洩，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合症，阻塞性肺病，腦膜炎，腦炎，神經炎，神經痛，脊髓損傷，癱瘓，葡萄膜炎，關節炎，關節痛，骨髓炎，筋膜炎，佩吉特式病，痛風，牙周疾病，風溼性關節炎，滑膜炎，重症肌無力，甲狀腺炎，系統性紅斑狼瘡，古德帕斯丘症候群，白塞氏綜合症，同種異體移植物排斥，移植物抗宿主症，僵直性脊椎炎，Berger病，僵直性脊椎炎，Berger病，瑞特綜合症和何杰金氏病。2.權利要求1的方法，其中所述促炎性細胞因子選自腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1β，IL-6，IL-18和HMG-1。3.權利要求1的方法，其中所述促炎性細胞因子是TNF。4.權利要求1的方法，其中所述類膽鹼激動劑選自古柯鹼的四元類似物；(1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基)-氨基甲酸1-(2-氟苯基)-乙酯；式I的化合物其中，R代表氫或甲基，n代表0或1；式I的化合物的藥學可接收的鹽；式II的化合物其中m是1或2；n是0或1；Y是CH，N或NO；X是氧或硫；W是氧，H2或F2；A是N或C(R2)；G是N或C(R3)；D是N或C(R4)；條件是A，G和D中不超過一個是氮，但是Y，A，G和D中至少一個是氮或NO；R1是氫或C1-C4烷基；R2，R3和R4獨立地是氫，滷素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3，或者R2和R3，R3和R4分別一起形成另一個六元芳香環或者共同具有A和G，或G和D，分別含有零到兩個氮原子，並被一種或兩種下述取代基取代的雜芳環獨立地氫，滷素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3；R5和R6獨立地是氫，C1-C4烷基，C(O)R7，C(O)NHR8，C(O)OR9，SO2R10或一起構成(CH2)jQ(CH2)k，其中Q是O，S，NR11，或一個鍵；j是2到7；k是0到2；R7，R8，R9，R10，R11獨立地是C1-C4烷基，芳基，或雜芳基，或其對映異構體。或其藥學可接收的鹽；式II的化合物的藥學可接收的鹽；式III的化合物其中R1，R6和R7是氫或C1-C4烷基；R2選自下組和其中R3，R4和R5選自氫，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C4烷基，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C6烷氧基，在烷氧基上具有1到4個碳的烷氧羰基，氨基，在醯基上具有1到4個碳的醯氨基，氰基，和在每個烷基上具有1到4個碳的二烷基氨基，滷素，羥基或硝基；以及式IV的化合物其中X是O或S；並且R選自H，OR1，NHC(O)R1，和滷素，其中R1是C1-C4烷基。5.權利要求1的方法，其中所述類膽鹼激動劑是式I的化合物R代表氫或甲基，n代表0或1；或其藥學可接收的鹽。6.權利要求5的方法，其中所述類膽鹼激動劑是(-)-螺[1-氮雜雙環[2.2.2]辛烷-3，5′-惡唑啉-2′-酮]7.權利要求1的方法，其中所述類膽鹼激動劑是式II的化合物其中m是1或2；n是0或1；Y是CH，N或NO；X是氧或硫；W是氧，H2或F2；A是N或C(R2)；G是N或C(R3)；D是N或C(R4)；條件是A，G和D中不超過一個是氮，但是Y，A，G和D中至少一個是氮或NO；R1是氫或C1-C4烷基；R2，R3和R4獨立地是氫，滷素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3，或者R2和R3，R3和R4分別一起形成另一個六元芳香環或者共同具有A和G，或G和D，分別含有零到兩個氮原子，並被一種或兩種下述取代基取代的雜芳環獨立地氫，滷素，C1-C4烷基，C2-C4烯基，C2-C4炔基，芳基，雜芳基，OH，OC1-C4烷基，CO2R1，-CN，-NO2，-NR5R6，-CF3或-OSO2CF3；R5和R6獨立地是氫，C1-C4烷基，C(O)R7，C(O)NHR8，C(O)OR9，SO2R10或一起構成(CH2)jQ(CH2)k，其中Q是O，S，NR11，或一個鍵；j是2到7；k是0到2；R7，R8，R9，R10，R11獨立地是C1-C4烷基，芳基，或雜芳基，或其對映異構體，或其藥學可接收的鹽。8.權利要求7的方法，其中所述類膽鹼激動劑是式II的化合物，其中m是1；n是0；p是0；x是氧；A是C(R2)；G是C(R3)；D是C(R4)。9.權利要求7的方法，其中所述類膽鹼激動劑是5′-苯基螺[1-氮雜雙環[2.2.2]辛烷-3，2′-(3′H)-呋喃並[2，3-b]吡啶]。10.權利要求1的方法，其中所述類膽鹼激動劑是式III的化合物其中R1，R6和R7是氫或C1-C4烷基；R2選自下組和其中R3，R4和R5選自氫，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C4烷基，任選地被在每個烷基上具有1到4個碳的N，N-二烷基氨基取代的C1-C6烷氧基，在烷氧基上具有1到4個碳的烷氧羰基，氨基，在醯基上具有1到4個碳的醯氨基，氰基，和在每個烷基上具有1到4個碳的二烷基氨基，滷素，羥基或硝基。11.權利要求10的方法，其中所述類膽鹼激動劑是式III的化合物，其中R2與四氫吡啶環的3-位置相連，進一步其中與苯環的4-或2-位置相連的R3選自下組氨基，羥基，氯，氰，二甲基氨基，甲基，甲氧基，乙醯氨基，乙醯氧基，和硝基。12.權利要求10的方法，其中所述類膽鹼激動劑是選自下組的化合物通式III，其中R3是羥基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是乙醯氨基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是乙醯氧基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是甲氧基，其中R1，R4和R5是氫；通式III，其中R3是甲氧基，其中R1和R4是氫，進一步其中R3與苯環的2-位置相連，與苯環的4-位置相連的R5是甲氧基或羥基。13.權利要求10的方法，其中所述類膽鹼激動劑選自3-2，4-二甲氧基苯亞甲基anabaseine(DMXB-A)，3-(4-羥基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-甲氧基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-氨基苯亞甲基)anabaseine，3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)anabaseine(化合物(VI))，3-(4-甲氧基-2-羥基苯亞甲基)anabaseine，反-3-亞肉桂基anabaseine，反-3-(2-甲氧基-亞肉桂基)anabaseine和反-3-(4-甲氧基亞肉桂基)anabaseine。14.權利要求10的方法，其中所述類膽鹼激動劑是3-(4-羥基-2-甲氧基苯亞甲基)anabaseine15.權利要求10的方法，其中所述類膽鹼激動劑是3-(2，4-二甲氧基苯亞甲基)anabaseine。16.權利要求1的方法，其中所述類膽鹼激動劑是通式IV的化合物其中X是O或S；並且R選自H，OR1，NHC(O)R1，和滷素，其中R1是C1-C4烷基。17.權利要求15的方法，其中所述的類膽鹼激動劑選自N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥苯氧基)苯甲醯胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-乙醯氨基苯氧基)苯甲醯胺，N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(苯基硫烷基)苯甲醯胺，和N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(3-氯苯基磺醯基)苯甲醯胺。18.權利要求15的方法，其中所述類膽鹼激動劑是N-[(3R)-1-氮雜雙環[2.2.2]辛-3-基]-4-(4-羥苯氧基)苯甲醯胺。19.權利要求1的方法，其中所述類膽鹼激動劑是甲碘化古柯鹼。20.權利要求1的方法，其中所述疾病選自闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，哮喘，變態反應，過敏性休克，器官壞死，花粉熱，膿毒症，敗血病，內毒素性休克，惡病體質，膿毒性流產，散播菌血症，燒傷，乳靡洩，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合症，慢性阻塞性肺病，風溼性關節炎，系統性紅斑狼瘡，心肌缺血，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主症。21.權利要求1的方法，其中所述疾病選自闌尾炎，消化器官，胃或十二指腸潰瘍，腹膜炎，胰腺炎，肝炎，哮喘，變態反應，過敏性休克，器官壞死，花粉熱，膿毒症，敗血病，內毒素性休克，惡病體質，膿毒性流產，散播菌血症，燒傷，充血性心力衰竭，成人呼吸窘迫綜合症，慢性阻塞性肺病，風溼性關節炎，系統性紅斑狼瘡，心肌缺血，大腦梗塞，大腦栓塞，脊髓損傷，癱瘓，同種異體移植物排斥或移植物抗宿主病。22.權利要求1的方法，其中所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，膿毒症，內毒素性休克，成人呼吸窘迫綜合症，慢性阻塞性肺病，風溼性關節炎，系統性紅斑狼瘡，心肌缺血，同種異體移植物排斥，哮喘，移植物抗宿主病，充血性心力衰竭和囊腫性纖維化。23.權利要求1的方法，其中所述疾病選自腹膜炎，胰腺炎，內毒素性休克，惡病體質，成人呼吸窘迫綜合症，慢性阻塞性肺病，風溼性關節炎，系統性紅斑狼瘡，心肌缺血，和同種異體移植物排斥。24.權利要求1的方法，其中所述疾病是膿毒症。25.確定化合物是否是對α7菸鹼受體具有選擇性的類膽鹼激動劑的方法，所述方法包括確定化合物是否能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子，並且確定所述化合物是否是能與至少一個非α7的菸鹼受體反應的類膽鹼激動劑，其中能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子，並且不是能與至少一個非α7的菸鹼受體反應的類膽鹼激動劑的化合物是對α7菸鹼受體具有選擇性的類膽鹼激動劑。26.權利要求25的方法，其中所述促炎性細胞因子選自腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1β，IL-6，IL-18和HMG-1。27.權利要求25的方法，其中所述促炎性細胞因子是TNF。28.權利要求25的方法，其中所述哺乳動物細胞是免疫細胞。29.權利要求25的方法，其中所述哺乳動物細胞是巨噬細胞。30.權利要求25的方法，進一步包括用能刺激促炎性細胞因子級聯的試劑處理所述哺乳動物細胞。31.權利要求30的方法，其中所述試劑是LPS。32.權利要求25的方法，其中促炎性細胞因子釋放的抑制的確定包括測定所述促炎性細胞因子的mRNA。33.權利要求25的方法，其中促炎性細胞因子釋放的抑制的確定包括測定所述促炎性細胞因子的蛋白。34.權利要求25的方法，其中促炎性細胞因子釋放的抑制的確定包括測定所述促炎性細胞因子的活性。35.確定化合物是否是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼拮抗劑的方法，所述方法包括確定化合物是否能降低類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力，其中能降低類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的化合物是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼拮抗劑。36.權利要求35的方法，其中所述促炎性細胞因子選自腫瘤壞死因子(TNF)，白介素(IL)-1β，IL-6，IL-18和HMG-1。37.權利要求35的方法，其中所述促炎性細胞因子是TNF。38.權利要求35的方法，其中所述哺乳動物細胞是免疫細胞。39.權利要求35的方法，其中所述哺乳動物細胞是巨噬細胞。40.權利要求35的方法，進一步包括用能刺激促炎性細胞因子級聯的試劑處理所述哺乳動物細胞。41.權利要求40的方法，其中所述試劑是LPS。42.權利要求35的方法，其中對所述化合物是否能降低類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的確定包括測定所述促炎性細胞因子的mRNA。43.權利要求35的方法，其中對所述化合物是否能降低類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的確定包括測定所述促炎性細胞因子的蛋白。44.權利要求35的方法，其中對所述化合物是否能降低類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力的確定包括測定所述促炎性細胞因子的活性。45.確定檢測化合物是否具有抑制炎症的能力的方法，所述方法包括確定檢測化合物是否是能與α7菸鹼受體反應的類膽鹼激動劑。46.權利要求45的方法，其中所述受體是巨噬細胞。47.確定檢測化合物是否具有抑制炎症的能力的方法，所述方法包括確定檢測化合物是否能抑制α7菸鹼受體拮抗劑的結合。48.權利要求47的方法，其中所述α7受體拮抗劑是銀環蛇毒素。49.一種能抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露於類膽鹼激動劑的時候其中脂多糖誘導的TNF釋放的減少的寡核苷酸或其模擬物，其中所述寡核苷酸或模擬物基本由大於5個核苷酸長的與α7受體mRNA互補的序列組成。50.權利要求49的寡核苷酸或模擬物，其中所述序列與所述mRNA的轉錄起始區域互補。51.權利要求49的寡核苷酸，其中所述序列包括5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′。52.權利要求49的寡核苷酸，其中所述序列基本由5′-gcagcgcatgttgagtcccg-3′組成。53.一種抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露於類膽鹼激動劑的時候其中TNF釋放的減少的方法，所述方法包括用權利要求49的寡核苷酸或模擬物處理巨噬細胞。54.權利要求53的方法，其中所述巨噬細胞是在哺乳動物體內。55.權利要求54的方法，其中所述哺乳動物是人。全文摘要提供了一種抑制巨噬細胞釋放促炎性因子的方法。所述方法包括用足量的能減少巨噬細胞釋放的促炎性因子的量的類膽鹼激動劑處理巨噬細胞。其中所述類膽鹼激動劑對α7菸鹼酸受體是選擇性的。還提供了一種在受試體中抑制炎性細胞因子級聯的方法。所述方法包括用足量的能抑制炎性細胞因子級聯的類膽鹼激動劑治療受試體，其中所述類膽鹼激動劑對α7菸鹼酸受體是選擇性的。還提供了確定一種化合物是否是能與α7菸鹼酸受體反應的類膽鹼激動劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否能抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子。此外，還提供了確定一種化合物是否是能與α7菸鹼酸受體反應的類膽鹼拮抗劑的方法。所述方法包括確定所述化合物是否能降低類膽鹼激動劑的抑制哺乳動物細胞釋放促炎性細胞因子的能力。還提供了能抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露於類膽鹼激動劑的時候其中脂多糖誘導的TNF釋放的減少的寡核苷酸或其模擬物。所述寡核苷酸或其模擬物基本上由大於5個核苷酸長的與α7受體mRNA互補的序列組成。此外，提供了抑制哺乳動物巨噬細胞在所述巨噬細胞暴露於類膽鹼激動劑的時候其中TNF釋放的減少的方法。所述方法包括用上述的寡核苷酸和模擬物處理巨噬細胞。文檔編號G01N33/68GK1735414SQ200380108261公開日2006年2月15日申請日期2003年12月5日優先權日2002年12月6日發明者凱文·J·翠西,王紅申請人:北岸長島猶太人研究學院