用於穩定蛋白的不含哺乳動物賦形劑的製劑的製作方法

2023-09-14 20:22:40 4

專利名稱：用於穩定蛋白的不含哺乳動物賦形劑的製劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種用於穩定蛋白的不含哺乳動物賦形劑的製劑。尤其涉及一種包括親水性聚合物、多元醇與糖的混合物以及去垢劑的製劑，其中多元醇與糖的重量比為 2 1 5 l(wt-%)，其中所述製劑不含穩定蛋白。在一個實施方案中，本發明涉及一種試劑盒，其中所述試劑盒包括包含所述製劑/組合物的一個或多個容器、使用說明書和任選的藥用無菌溶劑。
背景技術：
現有技術中已知不含穩定蛋白的蛋白製劑。WO 2006/020208涉及包括肉毒桿菌毒素和非蛋白質穩定劑的藥物組合物，其在水溶液中保留了肉毒桿菌毒素的活性。WO 2006/005910涉及包括肉毒桿菌毒素複合物或高純度肉毒桿菌毒素和表面活性劑的固體或液體藥物組合物。其中報導了在23 °C 27 V最大6個月的穩定性。WO 2007/041664涉及一種包括肉毒桿菌毒素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和任選的雙糖的藥物組合物。WO 2004/0069 涉及一種包括穩定的肉毒桿菌毒素和至少一種加強劑的藥物組合物，所述加強劑通過提高患者的皮膚滲透性而促進肉毒桿菌毒素對人類患者的透皮給藥。WO 01/58472公開了一種適合人類患者注射的藥物組合物，包括肉毒桿菌毒素和多糖。其還公開了一種包括神經毒素和羥乙基澱粉的藥物組合物。WO 2006/079722涉及液體組合物在實施凍幹蛋白以穩定所述蛋白的方法中的應用，所述組合物包括塌陷溫度在_18°C和0°C之間的填充劑、穩定劑、緩衝溶液，以及視情況而定可能包括非離子表面活性劑。發明目的本發明的目的是提供一種用於穩定蛋白的新製劑，其不含穩定蛋白。與現有技術的製劑相比，這類製劑可以配製並為蛋白提供優異的穩定性。通過作為本申請主題的製劑可以實現這一目的和其它目的。

發明內容
通過作為本申請主題的製劑可以實現本發明的目的。本發明涉及一種包括親水性聚合物、多元醇與糖的混合物以及去垢劑的製劑，其中多元醇與糖的重量比為[2 1] [5 1] (wt-% )，例如[2 1]、[2. 5 1]、[3 1]、[3. 5 1]、[4 1]、[4. 5 1]、 [5 1]，其中所述製劑不含穩定蛋白。在又一個實施方案中，本發明涉及一種組合物，其包括所述製劑和天然的或改性的/人工肽、蛋白或它們的混合物。在又一個實施方案中，本發明的組合物是凍幹的。本發明的另一方面涉及一種組合物，其包括如本文定義的肽或蛋白，或它們的混合物，用於作為藥物、化妝品、皮膚護理產品或診斷產品。
本發明的另一方面涉及所述組合物在治療疾病或病症中的應用，所述疾病或病症由患者的肌肉或外分泌腺中過度活躍的膽鹼能神經支配引起或與之有關。本發明的另一方面涉及一種試劑盒，其包括包含所述製劑/組合物的一個或多個容器和所述製劑的使用說明書，以及任選的藥用無菌溶劑。發明詳述本發明涉及一種包括親水性聚合物、多元醇與糖的混合物以及去垢劑的製劑，其中多元醇與糖的重量比為[2 1] [5 l](wt-%)，例如[2 1]、[2.5 1]、[3 1]、 [3.5 1]、[4 1], [4.5 1]、[5 1]，其中所述製劑不含穩定蛋白。本文使用的術語「製劑」涉及包括藥用賦形劑的混合物，並且涵蓋液體、固體、半固體、膠體和本領域技術人員已知的所有其它形式。本文所述的製劑不含穩定蛋白。本發明使用的術語「組合物，，涉及本文所要求保護的製劑，其進一步包括肽、蛋白或它們的混合物。本發明的製劑包括親水性聚合物。本文使用的術語「聚合物」涉及由重複單元組成的結構。本發明的術語「聚合物」 的範圍包括均聚物和共聚物。本文使用的術語「親水性」涉及水可溼性的物質、材料、賦形劑或藥用活性成分。在本發明的一個實施方案中，親水性聚合物選自下組透明質酸、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) ,N-乙烯吡咯烷酮的共聚物、纖維素衍生物、聚乙二醇(PEG)、PEG/PPG嵌段共聚物、丙烯酸與甲基丙烯酸的均聚物和共聚物、聚氨酯、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯醚、馬來酸酐基共聚物、聚酯、乙烯胺、聚乙烯亞胺、聚環氧乙烷、聚(羧酸)、聚醯胺、聚酐、聚磷腈以及它們的混合物。所述纖維素衍生物可以選自下組羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、葡聚糖以及它們的混合物。本文使用的術語「聚乙烯吡咯烷酮」是指一種水溶性聚合物，由N-乙烯吡咯烷酮單體製得。所用的術語和縮寫「PVP、聚維酮(povidone)、聚維酮(polyvidone)、交聯聚維酮、Kollidone」均為同一含義。所述的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)可以是Kollidon 12PF、Kollidon 17PF、Kollidon 25、Kollidon 30、Kollidon 90F、聚維酮、交聯聚維酮、Kollidon VA 64和共聚維酮或它們的混合物。本發明含義中的術語「透明質酸(hyaluronic acid) 」是指非硫酸化粘多糖。在一個實施方案中，透明質酸的分子量為0.8 1.2X IOf5Datl此外，在本發明中還可以使用交聯透明質酸。術語「透明質酸」與「玻尿酸(hyaluronan)」作為同義詞使用。在本發明中術語「透明質酸」還涵蓋透明質酸的衍生物，諸如透明質酸鹽，例如鈉鹽、鉀鹽、鎂鹽和鈣鹽。進一步地，術語「透明質酸」涵蓋其所有天然的和人工合成的衍生物。其為分子量一般為IOkDa 4. 5 X IO6Da的分子。本發明的製劑包括重量比為[2 1] [5 l](wt%)的多元醇與糖的混合物。本文使用的術語「多元醇」涉及一組以碳水化合物為基礎的成分，其可用於保護蛋白防止其不穩定。術語「多元醇」和「糖醇」在應用時含義相同。本文使用的術語「糖」涉及任何單糖、雙糖和多糖。本文使用的術語「單糖」涉及水化合物的基本單元。本發明的術語「雙糖」的範圍涉及兩個單糖組成的碳水化合物。本文使用的術語「多糖」涉及單糖的重複單元，其中單糖通過糖苷鍵連接。本文使用的術語「混合物」涉及同質性或異質性的組合物，其中通過採用本領域技術人員已知的方法或設備將至少兩種相同或不同的組合材料或結構的物質混合。本發明的術語「混合物」的範圍涵蓋固態、液態和半固態形式的混合物。本文使用的術語「混合」涉及將至少兩種活性或非活性成分按不同比例組合。混合涉及將來自相同組(group)或不同組的至少兩種不同的活性或非活性物質以任何順序進行組合的任何過程或行動。術語「混合」還披露將任何活性成分與任何賦形劑進行組合的任何過程或行動。在本發明的一個實施方案中，多元醇選自下組甘露醇、肌醇、乳糖醇、異麥芽糖醇、木糖醇、赤蘚糖和山梨醇。在本發明又一個實施方案中，所述糖選自由單糖組成的組，其中所述單糖可以是葡萄糖、硫代葡萄糖(thioglucose)、硫代甘露糖(thiomarmose)、硫代果糖 (thiofructose)、果糖和半乳糖。在另一個實施方案中，所述糖是一種雙糖，其中所述雙糖可以是海藻糖、蔗糖、辛-0-乙醯基-硫代海藻糖(octa-0-acetyl-thiotrehalose)、硫代蔗糖(thiosucrose)、硫代麥芽糖(thiomaltose)、麥芽糖和麥芽糖醇。在另一個實施方案中， 所述糖是一種多糖，其中所述多糖可以是褐藻膠(alginate)、羥乙基澱粉和羥丙基澱粉。本發明要求保護一種製劑，其中將多元醇與糖混合，得到重量比為[2 1] [5 1]的多元醇與糖的混合物。在另一個實施方案中，所述多元醇和糖混合的重量比為 [2 1] [3 1]，如[2 1]、[2.5 1]、[3 1]。在另一個實施方案中，所述多元醇與糖混合的重量比為[3:1]。根據本發明的一個實施方案中，多元醇和糖的混合物包括重量比為[2 1] [5 1]的甘露醇和蔗糖，如[2 1]、[2.5 1]、[3 1]、[3.5 1]、[4 1]、[4. 5 1]、 [5:1]。在本發明的另一個實施方案中，多元醇和糖的混合物包括重量比為[3 1]的甘露醇和蔗糖。所述多元醇和糖可以使用V型攪拌機(雙殼攪拌機)、轉筒混合器、雙螺帶攪拌器 (double ribbon blender)、犁式混合器、槳式混合器、雙錐攪拌機進行混合。本領域技術人員能夠根據實驗室規模(bench-top scale)或大生產規模(high scale)選擇恰當的混合器。混合時間取決於批量大小、賦形劑的質量，例如粉末的顆粒大小和混合類型。本發明的製劑還包括去垢劑。本文使用的術語「去垢劑」涉及可以使另一種物質溶解或穩定的任何物質，其可以是製劑的藥物活性成分或其它賦形劑。所述去垢劑可以通過空間排列(sterically)或靜電作用穩定所述的蛋白或肽。術語「去垢劑」與術語「表面活性劑」或「表面活性試劑」在應用時含義相同。在本發明的一個實施方案中，去垢劑選自由非離子型表面活性劑組成的組。本發明中術語「非離子型表面活性劑」的含義是指有沒有正或負電荷的表面活性劑。所述非離子型表面活性劑的一方面可以是山梨醇酯(山梨醇單月桂酸酯、山梨醇酐單棕櫚酸酯、山梨醇單硬脂酸酯、失水山梨醇單硬脂酸、山梨醇單油酸酯、山梨醇三油酸酯)，聚山梨酯(聚氧乙烯00)山梨醇酐單月桂酸酯(聚山梨酯20)、聚氧乙烯00)山梨醇酐單棕櫚酸酯、聚氧乙烯OO)山梨醇酐單硬脂酸酯、聚氧乙烯OO)山梨醇酐三硬脂酸酯、 聚氧乙烯OO)山梨醇三油酸酯、聚氧乙烯OO)-山梨醇酐-單油酸酯(吐溫80/聚山梨酯 80))，泊洛沙姆(poloxamer)(泊洛沙姆407、泊洛沙姆188)，聚氧乙烯蓖麻油(cremophor) 以及它們的混合物。在另一個實施方案中所述去垢劑為陰離子表面活性劑。本發明中術語「陰離子表面活性劑」的含義是指包括陰離子親水基團的表面活性劑。根據一個方面，所述陰離子表面活性劑可以是十四烷基三甲基溴化銨、十二烷基三甲基溴化銨、十二烷基醚硫酸鈉(sodium laureth sulphate)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、溴棕三甲銨(cetrimide)、十六烷基三甲基溴化銨以及它們的混合物。在另一個實施方案中，所述去垢劑為陽離子表面活性劑。本發明的含義中術語「陽離子表面活性劑」涵蓋包括陽離子親水基團的表面活性劑。一方面，所述陽離子表面活性劑可以是苯扎氯銨、十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、 氯化十六烷基吡啶(CPC)、苄索氯銨(BZT)以及它們的混合物。在本發明的一個實施方案中，以生產的散裝組合物(production bulk composition)的總重量，即本發明製劑、待穩定的肽或蛋白、添加的注射用無菌溶劑(通常為水或等滲鹽水)的總量計，去垢劑的濃度不超過0.5mg/g。在本發明又一個實施方案中， 以生產的散裝組合物的總重量計，去垢劑的濃度在0. lmg/g和0. 3mg/g之間。在本發明另一個實施方案中，去垢劑為聚山梨酯80，以生產的散裝組合物的總重量計，其濃度為0. 2mg/本文使用的「生產的散裝組合物」是指組合物在灌裝成個體劑量單位之前的組合物。在本發明的一個實施方案中，所用的親水性聚合物為透明質酸，去垢劑為聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，所用的親水性聚合物為透明質酸，去垢劑為聚山梨酯20。在本發明又一個實施方案中，所用的親水性聚合物為聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，去垢劑為聚山梨酯80。本發明的製劑不含穩定蛋白。本發明中術語「不含穩定蛋白」的含義是指製劑不含能穩定活性肽或蛋白的肽或蛋白。賦形劑的實例包括但不限於，人血清白蛋白(HSA)、明膠、胺基酸，例如組氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸或免疫球蛋白。本發明的製劑用於穩定蛋白、肽，或它們的混合物。本發明進一步涉及一種組合物，其包括所述製劑和活性試劑，所述活性試劑可以是天然的或改性的/人工的蛋白、肽，或它們的混合物。本文使用的術語「穩定的組合物」涉及一種組合物，其中的蛋白或肽可以在室溫、 60% RH下貯存至少4周，與凍幹後即貯存前的測量值比較，其物理和化學穩定性及完整性高達 50%、60%、70%、80% 和 90%。在又一個實施方案中，本發明的組合物包括這樣的蛋白或肽在室溫、60% RH下貯存至少6個月，與凍幹後即貯存前的測量值比較，其物理和化學穩定性及完整性高達 50%、60%、70%、80% 和 90%。在另一個實施方案中，本發明的組合物包括這樣的蛋白或肽在室溫、60% RH下貯存至少12個月，與凍幹後即貯存前的測量值比較，其物理和化學穩定性及完整性高達 50%、60%、70%、80%和 90%。對於生物活性，「穩定的組合物」是指一種組合物，其中神經毒性成分在藥物組合物的重組或水溶液中的毒性高於生物活性神經毒性成分加入到藥物組合物之前的毒性約 20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、至約 100%。本發明中的術語「室溫」也定義為RT(或環境溫度)，是指美國藥典定義的20 25 0C [68 77 °F ]。本發明中的術語「相對溼度」也定義為RH，是指在特定溫度下空氣中水汽的量與該溫度下空氣中可容納的最大量的比值，以百分比表示。在本發明的一個方面中，所述組合物在25°C和60% RH下以凍幹形式可以穩定7 個月。在本發明的另一個方面中，所述組合物在25°C和60% RH下以凍幹形式可以穩定3個月。在本發明的又一個方面中，所述組合物在25°C和60% RH下以凍幹形式可以穩定2個月。在本發明的另一方面中，所述組合物在25°C和60% RH下以凍幹形式可以穩定1個月。在本發明的另一方面中，所述組合物在40°C和75% RH下以凍幹形式可以穩定7 個月。在本發明的又一個方面中，所述組合物在40。C和75 % RH下以凍幹形式可以穩定3個月。在本發明的又一個方面中，所述組合物在40°C和75% RH下以凍幹形式可以穩定2個月。在本發明的再一個方面中，所述組合物在40°C和75% RH下以凍幹形式可以穩定1個月。在本發明的一個實施方案中，穩定性是通過測量隨時間變化的聚集程度(作為蛋白穩定性的一個指標)來量度的。在另一個實施方案中，可以採用本領域技術人員已知的分析方法測量蛋白組合物的穩定性，測定完整蛋白的％，例如蛋白水解裂解、細胞水平檢測(cell based assay) 0在另一個實施方案中，蛋白組合物的穩定性採用鼠-偏側膈 (Mouse-hemidiaphragm assay)法檢測(HDA-檢測)。在本發明的一個實施方案中，採用 HDA-檢測本文所要求保護的組合物的穩定性。結果以在HDA-檢測中測量的效用表明。HDA-檢測按 G0schel 等所定義的實施。(〃 Botulinum Toxin Therapy Neutraliζing and Nonneutralizing Antibodies-Therapeutic Consequences" Experimental Neurology, 1997 ; 147 :96-102)。本發明進一步涉及包括所述製劑與天然的或改性的/人工的肽、蛋白或它們的混合物的組合物。改性包括化學修飾，如糖基化、乙醯化、醯化等，這對於例如蛋白的吸收或穩定可能是有益的。然而，蛋白的肽鏈可以替代性或另外地通過添加、替換或缺失一個或多個胺基酸殘基進行修飾。本發明中術語「肽」的含義是指α -胺基酸以固定順序連接而形成的短聚合物。本文使用的術語「蛋白」涉及直鏈排列的、通過相鄰胺基酸殘基的羧基和氨基之間的肽鍵連接在一起胺基酸化合物。術語「蛋白」在應用時與術語「肽」的含義相同。本發明的蛋白可以是人工的或天然的。本文所要求保護的製劑中的活性蛋白或肽可以是人工的/改性的或天然的。本發明中的術語「人工蛋白，，的含義是指改性的蛋白。術語「改性的蛋白，，涵蓋了本領域技術人員已知的所有可能的修飾，例如化學修飾、缺失。本發明中的術語「天然的」的含義是指哺乳動物有機體中天然存在的蛋白或肽。在本發明的一個實施方案中，所述蛋白選自下組毒素、軟骨素、彈性蛋白、肌動蛋白、肌球蛋白、抑肽酶、生長激素、生長激素釋放因子、甲狀旁腺激素、促甲狀腺激素、脂蛋白(LDL、IDL、VLDL, VHDL, HDL)、載脂蛋白(ApoA-1, ApoA-II、ApoA-IV, ApoC-I、ApoC-II、 ApoC-III, ApoD, ApoE)、α -1抗胰蛋白酶、胰島素、胰島素原、卵泡刺激激素、降鈣素、催產素、加壓素、醋酸亮丙瑞林、生長抑素、促黃體激素、胰高血糖素、凝血因子、抗凝血因子、纖溶酶原激活物、人巨噬細胞炎性蛋白、血管內皮生長因子(VEGF)、類風溼因子、骨源性神經營養因子(BDNF)、神經生長因子-β (NGF-β)、血小板衍生生長因子(PDGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子(TGF-β 1、TGF-β 2、TGF-β 3、TGF-β 4、 TGF-βδ)、促紅細胞生成素、白介素(IL-1至IL-10)、骨形態發生蛋白(BMP)、甲狀旁腺激素、脫氧核糖核酸酶(DNAse)、陽離子鐵蛋白、幹擾素(α、β、Y)及它們的混合物。在本發明的另一個實施方案中，所述蛋白為毒素。在本發明的又一個實施方案中， 所述毒素為肉毒桿菌毒素、白喉毒素或破傷風毒素，或者它們中兩個或兩個以上的混合物。在本發明的一個實施方案中，所述組合物中的蛋白為肉毒桿菌毒素。在本發明又一個實施方案中，肉毒桿菌毒素選自以下類型Α、B、C、Cp D、Ε、F和G 型，在本發明另一個實施方案中，所述肉毒桿菌毒素為A型。在本發明又一個實施方案中， 所述蛋白為A型肉毒桿菌毒素的神經毒性成分。本申請所用的術語「肉毒桿菌毒素」是指不含任何其它梭菌蛋白的神經毒性成分， 但也指「肉毒桿菌毒素複合物」。本文所用的術語「肉毒桿菌毒素」基於毒素複合物和神經毒性成分之間沒有必要或不需要區分。「ΒοΝΤ」或「NT」是常用的縮寫。肉毒桿菌毒素複合物的「神經毒性成分」最初作為單一的肽鏈形成，若為血清型 A，則分子量約為150kDa。若為其它血清型，觀察到的神經毒性成分的分子量在約145至約170kDa之間，這取決於細菌來源。當為血清型A的情況下，例如肽的蛋白水解處理會產生由二硫鍵連接的重鏈和輕鏈組成的雙鏈肽形式的激活肽。在人類中，重鏈介導結合前突觸膽鹼能神經末梢和毒素內化進入細胞。術語「神經毒性成分」還包括在其它血清型的肉毒桿菌中發現的功能同源物。在本發明的一個實施方案中，神經毒性成分不含任何其它的肉毒桿菌的蛋白，例如不含可能與神經毒性成分潛在相關的RNA。神經毒性成分可以是約150kDa的單鏈前體蛋白或經蛋白水解處理的神經毒性成分，包括由一個或多個二硫鍵連接的約50kDa的輕鏈(Lc)和約IOOkDa的重鏈(He)(可參考例如Simpson LL, Ann Rev Pharmacol Toxicol. 2004 ；44 :167-93)。在人類中，重鏈介導結合前突觸膽鹼能神經末梢和毒素內化進入細胞。輕鏈被認為是負責毒素效應，作為鋅內肽酶和裂解特定的蛋白負責膜融合(SNARE複合)(見如Montecucco C, Shiavo G. ,Rosetto 0 破傷風和肉毒桿菌神經毒素白勺作用機(The mechanism of action of tetanus and Botulinum neurotoxins). Arch Toxicol. 1996 ； 18(Suppl.) :342-354))。本文中提到的肉毒桿菌毒素複合物的神經毒性亞基是指「神經毒性成分」或「不含
9複合蛋白(complexing protein)的神經毒性成分」。肉毒桿菌毒素的神經毒性成分A型和 B型的生產在例如國際專利申請W000/74703中描述。在又一個實施方案中，肉毒桿菌毒素為A型肉毒桿菌毒素。在一個實施方案中，所述肉毒桿菌毒素不含任何複合蛋白(神經毒性成分)。在又一個實施方案中，其為純的神經毒性成分血清型A。此外，通過改性和重組生成的肉毒桿菌毒素的神經毒性成分，包括各自的突變、缺失等，也包含在本發明的範圍內。關於合適的突變體，可參考WO 2006/027207A1、 WO 2009/015840A1、WO 2006/114308A1 和 EP08015^7. 9，其以參閱的方式全文併入於此。 此外，在本發明中，可使用不同血清型的混合物(神經毒性成分的形式或重組的形式或這兩種形式，如肉毒神經毒素A型和B型的混合物)。然而，本發明也涉及毒素，如經過化學改性的肉毒桿菌毒素，如通過聚乙二醇化、糖基化、硫酸化、磷酸化或任何其它的改性，尤其是一個或多個表面或溶劑暴露的胺基酸。這種肉毒桿菌毒素在例如EP 08015288. 7中及其披露的現有技術中公開。根據本發明的教導，本發明還涵蓋含有除神經毒性成分以外不含蛋白的肉毒桿菌毒素複合物的藥物。所述肉毒桿菌毒素，優選本文所指的神經毒性成分，可以是唯一的活性成分，或者也可以含有其它的藥物活性成分。在一個實施方案中所述組合物是凍幹的。在本發明的一個實施方案中，液體組合物可以裝入Iyo-瓶中，隨後凍幹。樣品的凍幹可以在_35°C至_65°C的溫度進行冷凍1 10小時，如5 10小時。該步驟後進行初級乾燥，在IOOmTorr至200mTorr的壓力下在貨架溫度_30°C至10°C，如-20°C至10°C或 5°C至10°C，乾燥10小時至25小時。最後，樣品進入凍幹工藝的最後一步，進行二級乾燥， 在貨架溫度15°C至25°C下乾燥5小時至15小時。Iy0-瓶的樣品體積在0. 1 5ml之間， 如0. 2 Iml或0. 4 0. 6ml，或0. 5ml。在一個實施方案中樣品體積在2ml 細1之間。在本發明又一個實施方案中，凍幹工藝可以在貨架溫度_45°C對樣品進行冷凍約 2小時，然後在貨架溫度_25°C和90mTorr下進行初級乾燥約12小時，在貨架溫度25°C下進行二級乾燥約12. 5小時。在一個實施方案中，一種注射液包括要求保護的所述組合物。本文要求保護的注射液在2 8°C的溫度下能穩定M小時。在一個實施方案中，在施用於哺乳動物前，所述注射液通過藥用無菌溶劑和所述凍幹組合物的重組而獲得。在又一個實施方案中，本發明涉及一種製備所述注射液的方法，所述注射液通過靜脈內、皮下、肌肉內、關節內、腹腔內、腦脊液內(intracerobrospinal)、心內、鞘膜內、膀胱內、骨內、玻璃體內、硬腦膜外、滑膜內注射給哺乳動物。所述方法包括施用前，以藥用無菌溶劑溶解本文所要求保護的凍幹組合物的步驟。 在本發明的另一個實施方案中，所述注射液也可以通過其它途徑給藥。給藥的途徑包括但不僅限於，吸入、口腔和鼻腔。對於此類應用的實例包括但不限於，例如，將α-1 抗胰蛋白酶以本文所要求保護的注射液形式給慢性阻塞性肺病(COPD)患者吸入。本文所要求保護的組合物可以用作藥物、化妝品、皮膚護理產品或診斷產品。本文使用的術語「藥物」涉及一種產品或產品的混合物，其中所述產品可以在給藥
10前混合或依次使用，其對施用的哺乳動物具有治療和/或診斷作用。本文使用的術語「化妝品，，涉及用於化妝目的的產品。本文使用的術語「化妝」 涉及按FD&C法案，sec. 201 (i)(聯邦食品、藥品和化妝品法案(Federal Food, Drug and Cosmetic Act), FDA)定義的將產品擦、倒、灑、或噴上、引入、或以其它方式應用到人體，用於清潔、美化、增加吸引力，或改變外觀。本文使用的術語「診斷產品」涉及包括給予患者用於對患者進行診斷或檢測的一種或多種化合物的任何產品。本文使用的術語「藥用化妝品」涉及非處方的化妝產品，也具有藥物或類似藥物的益處。在本發明的一個實施方案中，本文所要求保護的製劑可以包括緩衝液。本文使用的術語「緩衝液」涉及由弱酸及其共軛鹼或弱鹼及其共軛酸的混合物組成的水溶液。在本發明的一個實施方案中，緩衝液選自下組磷酸鹽緩衝液、醋酸鹽緩衝液、檸檬酸鹽緩衝液、甲酸鹽緩衝液、苯甲酸鹽緩衝液、TRIS(三(羥甲基)氨基甲烷)和馬來酸鹽緩衝液。所述緩衝液根據USP(美國藥典)、EP(歐洲藥典)、JP(日本藥典)的質量標準， 使用符合藥典規定的賦形劑製備。緩衝液的濃度要根據最終產品的PH值確定。本文製劑中使用的賦形劑和活性成分(肽和/或蛋白)均是藥用的。本文使用的術語「藥用，，涉及任何賦形劑、藥用活性成分，其能使所述組合物被哺乳動物以治療有效量的濃度攝取，避免任何一種副作用。本發明的一個方面涉及一種試劑盒，其包括包含製劑/組合物的一個或多個容器和所述製劑/組合物的使用說明書，以及任選的藥用無菌溶劑。本文使用的術語「溶劑」涉及能輔助溶解或稀釋任何其它物質或物質混合物或產品的任何液體。本發明中術語「溶劑」的含義也可以包括混合溶劑。所述方法中使用的藥用無菌溶劑包括但不局限於，注射用水(WFI)、等滲鹽溶液、 林格氏溶液(Ringer' s solution)、pH緩衝溶液、5%葡萄糖水溶液。本發明的另一個方面涉及無菌組合物。本文使用的術語「無菌」涉及不存在不希望的微生物，涉及USP (美國藥典)、EP (歐洲藥典)和JP(日本藥典)中定義的規範標準。在一個實施方案中，所述組合物為無熱原的(non-pyrogenic)，例如每劑量含有 < IEU(內毒素單位，一個標準量度)，優選每劑量含有< 0. IEU0在又一個實施方案中，所述注射液無菌且無熱原。在發明的一個實施方案中，所述組合物在脊椎動物，如哺乳動物中使用。術語「脊椎動物」被定義為脊索動物亞門的任何成員，具有脊骨和脊柱的脊索動物。因此，術語「脊椎動物」包括人類、哺乳動物、有袋動物、爬行類、鳥類、兩棲類和魚類。本文中的術語「哺乳動物」是指任何溫血動物，以具有汗腺包括產生奶汁的腺體為特徵，及以存在頭髮、用於聽覺的三個中耳骨，在大腦中有新皮層區為特徵的脊索動物。 因此，雄性或雌性的人、狗、貓、豬、牛、馬、驢、綿羊、山羊和鹿這些哺乳動物均涵蓋於該定義內。本文中的術語「有袋動物」被定義為哺乳動物，其中雌性通常有一個袋，哺育幼年的嬰兒。它們不同於繁殖性狀為胎盤的哺乳動物。本文中的術語「爬行動物」被定義為任何呼吸空氣、外溫性脊索動物，被鱗片而不是頭髮或羽毛覆蓋皮膚。本文中的術語「鳥類」被定義為任何雙足、溫血、產卵的脊索動物。本文中的術語「兩棲類」被定義為所有沒有羊膜卵的活動四足動物(四足脊索動物)，是外溫性動物，一般一部分時間在陸地上生存。本文中的術語「魚」被定義為水生脊索動物，通常為外溫動物、有鱗片覆蓋，並長有兩套成對的鰭和幾個未成對鰭。本文的濃度值均以「約」值表示。本文使用的術語「約」是為了反映其所連接數值的20%的變化。本發明進一步涉及製備所述組合物的方法，其特徵在於將所述組合物製成水溶性組合物，隨後凍幹。凍幹之前，蛋白或肽溶解在水溶液中，它通過親水性聚合物、多元醇及糖的混合物以及去垢劑來穩定。溶液中蛋白的穩定化是指蛋白被主要由親水性聚合物、多元醇及糖的混合物、去垢劑組成的結構包圍。通過使用去垢劑，可以減少親水性聚合物的量。在一個實施方案中，通過使用吐溫 80，以產品總體組合物的總重量計，PVP的濃度降至150mg/g至80mg/g。由於具有這樣的效果，本文組合物的工業生產得到了改進。在本發明的一個實施方案中，以Ig生產的散裝組合物計，本發明的組合物包括重量約2pg至50ng的肉毒桿菌毒素的神經毒性成分。優選地，每Ig水，分別地每Ig生產的散裝組合物中，重量範圍為2pg 200pg、200pg 400pg、400pg 600pg、600pg 800pg、 800pg lng、Ing 1. 5ng、1. 5ng 2ng、2ng 2. 5ng、2. 5ng 3ng、3ng 3. 5pg、3. 5ng 4ng,4ng 4. 5ng、4. 5ng 5ng。在本發明的一個實施方案中，神經毒性成分的生物活性為每ng神經毒性成分50 250LD5(i單位，在小鼠LD5tl檢測中測定。在又一個實施方案中，神經毒性成分的生物活性為每ng神經毒性成分約150LD5Q。以下對本發明所述穩定性組合物的實施方案予以說明，其中特定組分的量均相對於Ig生產的散裝組合物而言。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約0. 5mg透明質酸、約15. Omg甘露醇、約5. Omg蔗糖和約0. Img聚山梨酯80。在本發明的另一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約1. Omg透明質酸、約30. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約0. 2mg聚山梨酯 80。在本發明的另一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約2. Omg透明質酸、約40. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約0. 5mg聚山梨酯 80。在本發明的另一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1.6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約2. Omg透明質酸、約40. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約0. 2mg聚山梨酯 80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約1. Omg透明質酸、約40. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約0. 5mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約1. Omg透明質酸、約10. Omg蔗糖和約0. 2mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約80. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約50. Omg甘露醇和約0. 2mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約80. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約50. Omg甘露醇和約0. 5mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1.6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約100. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約30. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約 0. 2mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約80. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約30. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約0. 2mg 聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約80. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約30. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖、約0. 2mg 聚山梨酯80和約IOmM磷酸鹽緩衝液(pH值7. 4)。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約50. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約30. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖、約0. 2mg 聚山梨酯80和約IOmM磷酸鹽緩衝液(pH值7. 4)。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1.6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約100. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約30. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約 0. 5mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約100. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約50. Omg甘露醇和約0. 2mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1. 6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約100. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約50. Omg甘露醇和約0. 5mg聚山梨酯80。在本發明又一個實施方案中，本文所述的組合物包括< 1.6ng肉毒桿菌毒素的神經毒性成分、約150. Omg聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、約30. Omg甘露醇、約10. Omg蔗糖和約 0. 2mg聚山梨酯80。本文所述的組合物用於治療疾病或病症，所述疾病或病症由患者的肌肉或外分泌腺中過度活躍的膽鹼能神經支配引起或與之有關，其中神經毒性成分阻擋了乙醯膽鹼分泌到突觸間隙。因此，本發明所述的組合物可以直接治療下述任意適應症，其中大部分在 Dressier D U000)(肉毒桿菌毒素治療(Botulinum Toxin Therapy). Thieme Verlag, Stuttgart，紐約)中詳細描述肌張力障礙顱部肌張力障礙眼瞼肌張力障礙下頌肌張力障礙開頌型
閉頌型磨牙症美格(Meige)症候群舌肌張力障礙眼瞼張開失用症頸部肌張力障礙頸前屈頸後屈頸側屈斜頸咽部肌張力障礙喉部肌張力障礙痙攣性發聲障礙/內收型痙攣性發音障礙/外展型痙攣性呼吸困難四肢肌張力障礙臂部肌張力障礙特殊工作性肌張力障礙書寫痙攣音樂家手部痙攣高爾夫球手的痙攣腿部肌張力障礙大腿內收，大腿外展膝關節彎曲，膝關節伸直踝關節彎曲，踝關節伸直馬蹄內翻足畸形足部肌張力障礙紋狀趾足趾彎曲足趾伸直軸向肌張力障礙比薩(pisa)症候群肚皮舞者(belly dancer)肌張力障礙節段性肌張力障礙偏身性肌張力障礙全身性肌張力障礙Iubag型肌張力障礙皮層基底節變性肌張力障礙Iubag型肌張力障礙
遲發性肌張力障礙脊髓小腦共濟失調型肌張力障礙帕金森氏病肌張力障礙亨廷頓氏病肌張力障礙Hallervorden Spatz 症肌張力障礙多巴誘導的運動障礙/多巴誘導的肌張力障礙遲發性運動障礙/遲發性肌張力障礙陣發性運動障礙/陣發性肌張力障礙運動源性非運動源性行動誘導的軟顎肌陣攣肌陣攣肌纖維陣攣僵直症良性肌肉痙攣遺傳性下巴顫抖反常性頌肌活動半側咀嚼肌痙攣肥厚性腮肌病嚼肌肥大脛前肌肥大眼球震顫振動幻視核上性凝視麻痺部分性癲癇持續狀態(planning of spasmodic torticollis operation)外展性肌聲帶麻痺頑抗性突變發聲困難上部食管括約肌功能障礙聲帶肉芽腫□吃抽動穢語症候群中耳肌陣攣保護性喉部封閉喉切除術後失語症保護性上瞼下垂瞼內翻奧狄(Odii)括約肌功能障礙
假性賁門失弛緩症非失弛緩性食管動力紊亂陰道痙攣術後固定震顫膀胱功能障礙逼尿肌括約肌協同失調膀胱括約肌痙攣偏側面肌痙攣神經移植運動障礙化妝品使用眼角魚尾紋皺眉頭面部不對稱頰肌酒窩僵人症候群破傷風前列腺增生肥胖治療小兒腦麻痺斜視交替性麻痺性共同性視網膜脫離術後白內障術後在無晶狀體眼中肌炎性斜視肌源性斜視分離性垂直偏差斜視手術後遺症內斜視外斜視失弛緩症肛裂外分泌腺功能亢進Frey 症候群鱷魚淚症候群多汗
腋下手掌腳掌鼻溢相對多涎在中風中在帕金森氏病中在肌萎縮性側索硬化症中痙攣病症在腦炎和脊髓炎中自身免疫性過程多發性硬化症橫貫性脊髓炎德維克氏(Devic)症候群病毒感染細菌感染寄生蟲感染真菌感染在遺傳性痙攣性截癱中中風後症候群大腦半球梗死腦幹梗死脊髓梗死在中樞神經系統創傷中大腦半球損傷腦幹損傷脊髓損傷在中樞神經系統出血中顱內出血蛛網膜下腔出血硬膜下出血椎管內出血在腫瘤中大腦半球內腫瘤腦幹腫瘤脊髓腫瘤在另一個實施方案中，本發明涉及到一種試劑盒，其中所述試劑盒包括包含本文所述的製劑/組合物的一個或多個容器、重組所述製劑/組合物的說明書，以及任選的藥用無菌溶劑。適當的容器包括但不限於，單瓶、雙室瓶、單獨應用的注射器或雙室注射器。所述
17容器可以採用各種材料製成，如適於藥用、診斷、化妝品或藥用化妝品施用的玻璃或塑料。 所述試劑盒可以單獨應用，也可以多個並用。本發明參考下面的實施例進行說明。提供這些實施例的目的在於解釋本發明，但不應理解為將本發明限制於這些實施例，而是應該理解為涵蓋任何及所有的變化，應視為使本文提供的教導變得清楚。隨後的實施例提供了以下材料和方法，但不限制本發明所涵蓋的大量材料和方法。
實施例實施例為找到一種A型肉毒桿菌毒素的穩定的組合物進行研究。每個組合物中包括 ^ 1. 6ng A型肉毒桿菌毒素的神經毒性成分。篩選製劑的組合物總結於下表，其中給出的量以mg/lg生產的散裝組合物計。
權利要求
1.一種製劑，其包括(a)親水性聚合物，(b)多元醇與糖的混合物，其中多元醇與糖的重量比為2 1 5 l(wt-%),(c)去垢劑，以及其中所述製劑不含穩定蛋白。
2.根據權利要求1所述的製劑，其中所述親水性聚合物選自下組透明質酸、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、N-乙烯吡咯烷酮的共聚物、纖維素衍生物、聚乙二醇(PEG)、PEG/PPG嵌段共聚物、丙烯酸與甲基丙烯酸的均聚物和共聚物、聚氨酯、聚乙烯醇、聚乙烯醚、馬來酸酐基共聚物、聚酯、乙烯胺、聚乙烯亞胺、聚環氧乙烷、聚(羧酸)、聚醯胺、聚酐、聚磷腈以及它們的混合物，其中所述纖維素衍生物選自下組羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、甲基纖維素、羧甲基纖維素、葡聚糖。
3.根據權利要求1或2所述的製劑，其中所述多元醇選自下組甘露醇、肌醇、乳糖醇、 異麥芽糖醇、木糖醇、赤蘚糖醇、山梨醇以及它們的混合物。
4.根據前述權利要求任一項所述的製劑，其中所述糖選自下組單糖、雙糖、多糖以及它們的混合物。
5.根據前述權利要求任一項所述的製劑，其中所述去垢劑選自下組非離子型表面活性劑、陰離子表面活性劑和陽離子表面活性劑。
6.前述權利要求任一項所述的製劑在穩定蛋白、肽、或它們的混合物中的應用。
7.組合物，其包括前述權利要求任一項所述的製劑，其進一步包括肽、蛋白或它們的混合物。
8.根據權利要求7所述的組合物，其是凍幹的。
9.根據權利要求7或8所述的組合物，其中所述蛋白選自下組毒素、軟骨素、彈性蛋白、肌動蛋白、肌球蛋白、抑肽酶、生長激素、生長激素釋放因子、甲狀旁腺激素、促甲狀腺激素、脂蛋白(LDL、IDL、VLDL, VHDL, HDL)、載脂蛋白(ApoA-1、ApoA-II、ApoA-IV、ApoC-I、 ApoC-II、ApoC-III、ApoD、ΑροΕ)、α-1抗胰蛋白酶、胰島素、胰島素原、卵泡刺激激素、降鈣素、催產素、加壓素、醋酸亮丙瑞林、生長抑素、促黃體激素、胰高血糖素、凝血因子、抗凝血因子、纖溶酶原激活物、人巨噬細胞炎性蛋白、血管內皮生長因子(VEGF)、類風溼因子、骨源性神經營養因子(BDNF)、神經生長因子-β (NGF-β)、血小板衍生生長因子(PDGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子(TGF-β 1、TGF-β 2、TGF-β 3、 TGF-β 4、TGF-β 5)、促紅細胞生成素、白介素(IL-1至IL-10)、骨形態發生蛋白(BMP)、甲狀旁腺激素、脫氧核糖核酸酶(DNAse)、陽離子鐵蛋白、幹擾素(α、β、Y)及它們的混合物。
10.根據權利要求9所述的組合物，其中所述蛋白選自下組肉毒桿菌毒素、白喉毒素、 破傷風毒素及它們的混合物。
11.根據前述權利要求任一項所述的組合物，其包括肉毒桿菌毒素、透明質酸、甘露醇、 蔗糖、聚山梨酯80及任選的注射用水。
12.一種可注射的溶液，其包括權利要求7 11任一項所述的組合物。
13.權利要求7 12任一項所述的組合物作為藥物、化妝品、皮膚護理產品或診斷產品的應用。
14.權利要求7 13任一項所述的組合物在治療疾病或病症中的應用，所述疾病或病症由患者的肌肉或外分泌腺中過度活躍的膽鹼能神經支配引起或與之有關。
15.試劑盒，其包括(a)包含前述權利要求任一項所述的製劑/組合物的一個或多個容器和(b)所述製劑的使用說明書和任選的(c)藥用無菌溶劑。
全文摘要
本發明涉及一種包括親水性聚合物、多元醇與糖的混合物以及去垢劑的製劑，其中多元醇與糖的重量比為2∶1～5∶1(wt-％)，其中所述製劑不含穩定蛋白。
文檔編號A61K9/19GK102387791SQ201080016257
公開日2012年3月21日 申請日期2010年4月16日 優先權日2009年4月17日
發明者哈羅德·泰勒, 傑德·J·曼德, 馬庫斯·伯格 申請人:德國麥氏大藥廠