負載腫瘤靶向藥物的顆粒的製作方法

2023-09-14 07:47:15

專利名稱：負載腫瘤靶向藥物的顆粒的製作方法
相關信息本申請要求2003年4月3日提交的序列號為No.60/460,827且名稱為″Paclitaxel-Loaded Particles for Enhancing Delivery of therapeutic Agents toTissue″的美國臨時專利申請的優先權。本申請中引用的所有專利、專利申請和參考文獻的內容通過引用全部併入本文。
政府資助研究該工作部分地得到美國健康和公共事業局(United States Department ofHealth and Human Services)的資助(資助號R37CA49816)。
發明綜述成功的癌症化學療法需要將足夠濃度的有效藥物遞送至腫瘤細胞，同時不對患者造成無法忍受的毒性。本發明描述兩種被設計成靶向腫瘤的負載藥物的顆粒。第一種是用於治療腹膜癌症的負載藥物的微粒，其中將所述顆粒向腹膜內給藥至腹腔(peritoneal cavity)。這些顆粒還可以局部給藥至其它攜帶腫瘤的器官。第二種是用於膀胱內治療膀胱癌的負載藥物的納米顆粒，所述顆粒向膀胱內給藥至膀胱空腔。該納米顆粒還可以全身給藥以靶向腎臟。
背景技術：
負載藥物的微粒多種癌症起源於腹腔內的器官，例如胰腺癌、肝癌、直腸癌和卵巢癌。在疾病後期，腹腔還是起源於腹腔外部的器官的癌症轉移的區域，例如肺癌。在腹腔內，會在骨盆和腹膜表面、其它腹膜器官(例如腸繫膜、膀胱、網膜、膈膜(diaphragm)、淋巴結和肝臟)中發現腫瘤。腫瘤細胞阻礙膈膜或腹部淋巴管引流，導致腹膜液的流出減少，造成癌擴散或腹水。
腹腔內化學療法(其中藥物直接滴注進入腹腔)已經用於治療腹膜癌，例如晚期卵巢癌和結腸癌(Otto，S.E.，J Intraven.Nurs.，18170-176，1995；Collins，J.M.，J Clin Oncol，2498-504，1984)。腹膜內給藥鉑酸鹽化合物(例如，順氯氨鉑(cisplatin)和Taxol，可購買的帕利他西(paclitaxel)的製劑)已經對患者發揮了一些益處且延長存活時間約20％(Gadducci，et al.，GynecolOncol，76157-162，2000；Markman，et al.，J Clin Oncol，191001-1007，2001)。但是，腹腔內化學療法具有限制其應用的以下缺點。腹膜內治療通常經留置導管(indwelling catheter)給藥，每3周6次治療。兩個主要的副作用是與導管的長時間使用相關的感染和由於腹腔內存在的高濃度藥物而導致的腹痛(Francis，et al.，J Clin Oncol，132961-2967，1995)。而且，腹膜內給藥需要住院治療且涉及高昂費用。這些原因導致醫療機構不願使用腹膜內治療，儘管該治療方法具有明確的存活優勢。本發明克服了所述各種缺陷。
在一項早期的發明(美國專利申請序列號No.09/547,825)中，申請人指出當將抗癌藥物(例如，帕利他西，阿黴素(doxorubicin))給藥至實體瘤外部時(這是部位腹膜內治療的情況)，藥物進入實體瘤是非常緩慢的且限於腫瘤外圍。申請人進一步公開了一種方法，以克服這一進入問題。該方法包括使用細胞凋亡誘導(apoptosis induction)治療(例如，使用帕利他西或阿黴素的治療)來擴大腫瘤的空隙空間，從而改善當前和後續給藥的藥物進入和分布在整個實體瘤中。在本申請中，該方法稱作″腫瘤激活(tumor priming)″法且具有兩個要求。第一個要求是藥物濃度必須足夠誘導細胞凋亡。申請人已經指出，使用200nM帕利他西治療3小時足以誘導多個人體腫瘤細胞中的細胞凋亡(Au，et al.，Cancer Res.，582141-2148，1998)。第二個要求是誘導細胞凋亡的預治療和後續治療之間的時間間隔必須足以允許發生細胞凋亡，例如，對於帕利他西是16-24小時(Au，et al.，Cancer Res.，1998；Jang，et al.，J.Pharmacol.Exper.Therap.，2961035-1042，2001)。這些要求記錄在本發明中。
申請人還發現，在腹膜內給藥之後，市售的Taxol製劑被迅速地清除出腹腔，這是由於經由腹膜(位於腹腔內的薄膜)的迅速吸收以及經由淋巴系統的排洩造成的(見下文的實施例4和6)。
基於上述各種考慮和發現，申請人得出以下結論如果治療滿足一些或大部分以下所需性能，則可以實現治療上有用的腹膜內化學療法。第一，藥物應當具有針對預期靶向的癌症類型的活性。第二，治療應當容易實施，不需要長時間(例如，不大於一天或兩天)使用留置導管，且不需要頻繁給藥(例如，每周不多於1次)。第三，應當優化藥物提供速率(rate of drugpresentation)，使得腹腔內的藥量以及藥物濃度足夠高以對疾病具有充分控制，但是同時又足夠低從而不產生顯著的局部毒性。第四，藥物或藥物製劑必須能夠進入實體瘤中並廣泛地分布在其中。第五，藥物或藥物製劑應當在存在腫瘤的腹腔內具有長的保留時間。第六，藥物或藥物製劑應當對腫瘤細胞具有高的親合力並固定在腫瘤表面或存在於腫瘤塊(tumor mass)內。第七，在腹腔或器官內，藥物或藥物製劑的分布應當與腫瘤細胞的分布或傳播相似。大部分或所有上述所需特徵都記錄在本發明中，即，負載藥物的微粒。
負載藥物的微粒被設計以兩種速率釋放藥物；速釋，以提供足夠高的藥物濃度從而誘導細胞凋亡，和緩釋，以對腫瘤提供持續的藥物遞送。細胞凋亡誘導促進殘餘微粒和隨後從緩釋顆粒釋放的剩餘藥物的進入和分布。長時間(例如，數天、數周或數月)的藥物緩釋為患者提供了單一給藥的便利性，減少了治療頻率，排除了住院治療的必要，降低了護理費用、排除了使用留置腹腔內的導管的必要，從而減少了感染的危險並提高了患者的生活質量，同時減少了由於一次性快速藥丸給藥全部劑量而導致的腹腔內的局部高濃度而造成的局部毒性。由於其尺寸和性能，這些顆粒保留在腹腔內，粘結至腫瘤上，在腹腔或器官內表現出相似的分布。
所述顆粒還可以是兩種或多種類型的顆粒的組合，其中至少一種類型迅速釋放藥物以誘導細胞凋亡，同時其它類型較為緩慢地釋放藥物。針對在攜帶腹膜腫瘤的小鼠中產生優異的靶向腫瘤的和抗腫瘤活性，與市售帕利他西製劑即Taxol(帕利他西溶解在克列莫佛(cremophor)和乙醇中)相比，提供負載廣泛使用的抗癌藥物帕利他西藥物的微粒的實例以顯示這些顆粒的效用。
申請人還發現，可以將其它藥物或試劑配製在相同的微粒中，用於治療腹膜癌。
申請人還描述了可以使用負載藥物的顆粒來治療位於容易通過局部或部位給藥而到達的器官或部位中的腫瘤。
本發明使用由明膠和PLGA聚合物製成的可生物降解的且負載有治療效用的試劑的顆粒。配製在明膠和PLGA顆粒中的一種試劑是帕利他西。已經開發了多種結合有可生物降解聚合物的帕利他西製劑，且所述製劑已經在動物模型中顯示出以最小的體系毒性抑制腫瘤生長和細胞凋亡的作用；但是，這些體系中的帕利他西的釋放動力學(在約50天內釋放約10-25％的藥物)很可能對於臨床使用不是最佳的(美國專利No.6,447,796)。而且，大多數早期研究的目的是實現系統的(systemic)而不是部位的藥物遞送。使用可生物降解的聚合物作為具有治療效用的試劑的載體的優點是本領域公認的(美國專利No.6,447,796)，包括(1)完全生物降解，在藥物供給耗盡時不需要後續手術除去藥物載體；(2)組織生物相容性；(3)給藥便易性；(4)在聚合物水解時包衣藥物的受控持續釋放；(5)對於部位使用，最小化或排除系統毒性，例如嗜中性白血球減少症；以及(6)就多功能性而言，可生物降解體系本身的便易性。相似地，許多上述優點都適用於明膠藥物釋放顆粒。
用於膀胱內治療膀胱癌的負載帕利他西的納米顆粒膀胱內化學療法用於減少膀胱癌的發病和/或發展(Kurth，K.H.，Semin.Urol.Oncol.，1430-35，1996)。膀胱內化學療法提供以下優點選擇性地以高濃度向攜帶腫瘤的膀胱遞送藥物，同時減少體系的暴露。申請人已經指出，接受化學療法(例如，絲裂黴素C(mitomycin C)，例如阿黴素)的淺表性(superficial)膀胱癌患者的治療失敗部分地是由於低濃度的藥物被遞送至位於膀胱組織內的腫瘤而造成的(Dalton，et al.，Cancer Res.，515144-5152，1991；Schmittgen，et al.，Cancer Res.，513849-3856，1991；Wientjes，et al.，Pharm.Res.，8168-173，1991；Wientjes，et al.，Cancer Res.，514347-4354，1991；Wientjes，et al.，Cancer Res.，533314-3320，1993；Chai，et al.，J Urol.，152374-378，1994；Wientjes，et al.，Cancer Chemother Pharmacol.37539-546，1996；Au，et al.，J.Natl.Cancer Inst.，93597-604，2001；U.S.Patent No.6,286,513 B1)。而低濃度藥物遞送是由以下幾個原因造成的。第一，只有一部分絲裂黴素C或阿黴素劑量例如～3％-～5％能夠進入覆蓋膀胱腔內表面的膀胱上皮。第二，當給藥藥物時，藥物濃度被存在的殘餘尿液和治療間隔例如2小時期間產生的尿液所稀釋。第三，由於患者需要清空他或她的膀胱，因此腫瘤細胞暴露至藥物例如絲裂黴素C的總時間受限於治療間隔的時間長度。第四，藥物例如絲裂黴素C的膀胱組織內的停留時間受到治療持續時間的控制且主要在患者清空他或她的膀胱之後的數分鐘之內終止。
基於上述考慮和發現，申請人得出以下結論如果治療滿足一些或大部分以下所需性能，則可以實現治療上有用的膀胱內化學療法。第一，藥物應當具有針對膀胱癌的活性。第二，存在於尿液中的大部分藥物必須能夠進入膀胱上皮。第三，藥物在膀胱組織中的停留時間應當超過治療持續時間。第四，尿液中的藥物濃度應當不依賴於尿液體積。帕利他西對於膀胱癌是有活性的(Roth，B.，J.Semin.Oncol.，221-5，1995)，且如申請人所指出的，容易經由膀胱上皮分隔例如50％的劑量(Song，et al.，Cancer Chemother.Pharmacol.，40285-292，1997)。申請人還發現，在從細胞外基質中除去藥物之後，帕利他西保留在腫瘤細胞中(Kuh，et al.，J.Pharmacol.Exp.Ther.，293761-770，2000)，這是提供延長藥物作用超過2小時治療持續時間的機會的性能。但是，市售帕利他西製劑例如Taxol是沒有用的，因為通過將帕利他西夾帶在膠束(micelles)中用於增溶帕利他西的克列莫佛減少帕利他西的游離部分，且因此減少進入膀胱組織的藥物(Knemeyer，et al.，CancerChemother.Pharmacol.，44241-248，1999)。
因此，申請人發明了負載帕利他西的納米顆粒，其滿足在申請人的發現中所指出所有所需性能。這些納米顆粒在2小時的治療間隔內釋放大部分的藥物載荷(drug load)，以至於組織中的帕利他西濃度足以在人的膀胱腫瘤中產生抗腫瘤活性(例如實施例8)。從納米顆粒中釋放的帕利他西的量受到藥物在尿液中的溶解度的限制。因此，尿液中的藥物濃度保持相對恆定且與尿液體積無關(例如實施例10)。從納米顆粒釋放並進入膀胱的帕利他西也保留在膀胱組織中達超過2小時治療持續時間(例如，實施例8)。最後，申請人確定，所述納米顆粒針對寵物狗中自然出現的膀胱癌是有效的(例如申請人還發現改性負載藥物的納米顆粒以延長這些顆粒在膀胱腔和膀胱組織中的保留時間超過治療持續時間的方法，例如通過使用生物粘附分子(bioadhesive molecule)塗布明膠結構體(gelatin framework)(例如實施例7)。
申請人還發現，可以將其它親脂性化合物配製在相同的明膠納米顆粒中。
最後，申請人發現，膀胱內給藥明膠納米顆粒導致腎臟中的藥物含量局部增大(例如實施例11)。因此，還提供用於選擇性將藥物遞送至腎臟的方法和組合物。
定義為了提供對本發明的清楚和一致的理解，為方便起見，這裡匯集說明書、實施例和權利要求書中使用的特定術語。
如這裡所使用的，術語″異常生長″是指細胞表型，其與細胞的正常表型不同，特別是直接或間接與疾病例如癌症相關的細胞表型。
如這裡所使用的，術語″給藥″是指將試劑引入細胞中，所述細胞例如是生物體外細胞、哺乳動物細胞，例如生物體內細胞，或者後來放回動物體內的細胞(例如取自活體的)。
如這裡所使用的，術語″試劑″、″藥物″、″化合物試劑″、″抗癌試劑″、″化學治療劑″、″抗腫瘤藥″和″抗腫瘤試劑″可以互換使用，是指具有抑制或減少異常細胞生長例如癌症的性能的試劑(除非進一步限定)。上述術語還包括細胞毒素試劑、殺細胞試劑或細胞抑制試劑。術語″試劑″包括小分子、大分子(例如，肽、蛋白質、抗體或抗體片斷)以及核酸(例如，基因治療結構成分(gene therapy construct))、重組病毒、核酸片斷(包括，例如合成核酸片斷)。
如這裡所使用的，術語″細胞調亡″是指任何非壞死的、良好調節形式的細胞死亡，如本領域已經確立的標準所限定的。
如這裡所使用的，術語″良性″、″癌症前的(premalignant)″和″惡性″具有它們在本領域中共知的含義。
如這裡所使用的，術語″癌症″、″腫瘤細胞″、″腫瘤″、″白血病″或″白血病細胞″可以互換使用，是指任何異常新生物(″新生長″)，例如癌(來自上皮細胞)、腺癌(來自腺組織)、肉瘤(來自結締組織)、淋巴瘤(來自淋巴組織)，或者血癌(例如，白血病或者紅白血病)。術語癌症或腫瘤細胞還試圖包括癌變組織或腫瘤塊，後者應當理解為癌細胞或腫瘤細胞的匯集。而且，術語癌症或腫瘤細胞試圖包括可能是良性、癌症前的或惡性的腫瘤或細胞。通常，癌症或腫瘤細胞表現出各種領域公知的特點，例如，生長因子獨立性、缺乏細胞/細胞接觸生長抑制，和/或變異染色體組型。通過對比，正常細胞通常僅能夠在培養基中進行有限次的傳代和/或表現出各種領域公知的歸因於正常細胞的特點(例如，生長因子依賴性、接觸抑制，和/或正常染色體組型)。
如這裡所使用的，術語″細胞″包括任何真核細胞，例如身體或種系哺乳動物細胞，或細胞系，如，HeLa細胞(人)、NIH3T3細胞(鼠科)、胚胎幹細胞，和細胞類型，例如造血幹細胞、成肌細胞、肝細胞、淋巴細胞和上皮細胞，以及，例如這裡描述的細胞系。
如這裡所使用的，術語″腹膜的″、″腹膜內的″、″腹膜地″或″腹膜內地″可以互換使用，且涉及腹膜或腹腔。
如這裡所使用的，術語″局部地″、″部位地″、″系統地″分別是指″局部″治療給藥例如進入腫瘤物質，″部位″治療給藥例如進入常見的疑為接種有轉移瘤的腫瘤區域，或者″系統″治療給藥，例如口服或膀胱內給藥，目的是試劑可以廣泛地在受治療者體內散布。
如這裡所使用的，術語″可藥用載體″是本領域公知的，包括適用於給藥本發明的化合物至哺乳動物的、可藥用材料、組合物或賦性劑。
如這裡所使用的，術語″藥物組合物″包括適用於對哺乳動物例如人給藥的製劑。當將本發明的組合物作為藥物給藥至哺乳動物例如人時，可以它們本身的形式給藥或者作為含有例如0.1-99.5％(更優選地，0.5-90％)的活性成分(例如，治療有效量)的藥物組合物與可藥用載體組合給藥。
如這裡所使用的，術語″受治療者″試圖包括人和非人類動物(例如，小鼠、鼠、兔子、貓、狗、牲畜和靈長類動物)。
優選的人類動物包括具有特徵在於異常細胞生長，例如癌症的紊亂的人類患者。
如這裡所使用的，術語″微粒″是指尺寸為約0.1μm-約100μm，約0.5μm-約50μm，0.5μm-約20μm的顆粒，有利地，尺寸為約1μm-約10μm，約5μm的顆粒，或其混合物。所述微粒例如可以包括大分子、基因治療結構成分或化學治療劑。通常，微粒例如可以局部或部位給藥。
如這裡所使用的，術語″納米顆粒″是指尺寸為約0.1nm-約1μm，約1nm-約1μm，約10nm-約1μm，50nm-約1μm的顆粒，約100nm-約1μm，約250-900nm，有利地，約600-800nm。所述納米顆粒例如可以包括大分子、基因治療結構成分或化學治療劑。通常，納米顆粒例如可以經局部、部位或系統給藥方式給藥至患者。
如這裡所使用的，術語″顆粒″是指納米顆粒、微粒或者納米顆粒和微粒兩者。
如這裡所使用的，術語″製劑″是指本領域公知的、以劑量形式引入治療活性劑中的組合物。
如這裡所使用的，術語″快釋製劑″和″速釋製劑″是指在一天內釋放優選＞10％，更優選＞20％，更優選＞30％，更優選＞40％，更優選＞50％，且進一步優選＞60％的藥物成分的藥物製劑。快釋製劑的實例包括微粒和納米顆粒製劑。用於製備這些製劑的方法描述於實施例3和7中。
如這裡所使用的，術語″緩釋製劑″是指將藥物遞送至需要位置達持續時間的藥物製劑，包括保持釋放其藥物成分優選幾天，更優選幾周或更長時間的製劑。
如這裡所使用的，術語″腫瘤激活法″是指通過使用細胞調亡誘導試劑″激活″腫瘤來減小腫瘤細胞密度並增加治療劑對腫瘤物質的可接近性的增強治療藥物的進入的方法。該方法涉及使用細胞調亡誘導劑，例如帕利他西，使用計量和時間足以導致組織內的細胞調亡，從而允許增強腫瘤治療劑(或簡單地，″治療劑″)進入組織(例如通過在組織內產生通道)。這樣，在治療劑的治療劑量被遞送至組織之前，細胞調亡誘導劑用作預治療，與不使用預治療的情況相比，該預治療能夠增強治療劑進入組織。該細胞調亡誘導劑還可以具有治療活性，因此還可以用作治療劑(即，同樣的藥物可以用作細胞調亡誘導劑和治療劑)。或者，細胞調亡誘導劑可以用於增強將治療用的其它類型的藥物或賦性劑的遞送至組織中(即，細胞調亡誘導劑和治療劑可以是不同的藥物，或者治療劑可以含在納米顆粒或微粒中，與不使用預治療的情況相比，在那裡，納米顆粒或微粒向腫瘤組織的遞送得到增強)。
如這裡所使用的，術語″PLGA″或″聚(丙交酯-共-乙交酯)″是指由各種比例的乳酸或丙交酯(LA)和乙醇酸或乙交酯(GA)構成的共聚物。所述共聚物可以具有不同的平均鏈長，導致不同的特性粘度和聚合物性質的差別。PLGA用於製備通常含有治療劑的微粒或納米顆粒。製備這些顆粒的方法描述於實施例3中。
如這裡所使用的，術語″明膠″是指結締組織蛋白膠原的變性形式。通過交聯蛋白質鏈來穩定在溶液中形成的明膠聚集體。使用實施例7的製備方法，明膠形成明膠納米顆粒，通常負載有帕利他西。可獲得的明膠具有不同的蛋白質鏈長，用不同的Bloom數表示。較大的Bloom數表示較長的鏈長。
如這裡所使用的，術語″IC50″是指導致50％的藥物作用的藥物濃度或劑量。
如這裡所使用的，術語″突然釋放(burst release)″是指本領域公知的，對來自製劑的部分藥物載荷的初始迅速釋放的定義，所述釋放通常跟隨有藥物載荷殘餘物的緩釋。
如這裡所使用的，術語″局部化″和″集中″可以互換使用，表示在特定位置例如腫瘤組織處的優先分布。
如這裡所使用的，術語″生物粘附劑″是指粘結且優選強力粘結至諸如皮膚、黏膜和腫瘤等的表面的天然、合成或半合成物質。合適的生物粘附劑包括聚賴氨酸、纖維蛋白原、由部分酯化的聚丙烯酸聚合物製備的物質，包括聚丙烯酸聚合物、天然或合成多糖，例如纖維素衍生物，例如甲基纖維素、纖維素乙酸酯、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素、果膠，以及硫酸化蔗糖和氫氧化鋁的混合物。
如這裡所使用的，術語″間質性膀胱炎″是指本領域公知的、膀胱壁的慢性且疼痛發炎症狀。
如這裡所使用的，術語″可生物降解的″或″可生物腐蝕的″聚合物是指能夠降解成低分子量化合物的聚合物，已知其通常被包括在代謝途徑中。該術語還包括在生物環境中能夠受到攻擊的聚合物體系，以至於體系的完整性以及有些情況下大分子自身被影響且提供能夠從它們的作用位置除去(但是不必從機體上除去)的碎片或其它降解副產物。

發明內容
一種用於將腫瘤治療劑遞送至患者的組合物，其包括腫瘤細胞凋亡誘導劑的快釋製劑、腫瘤治療劑的緩釋製劑以及可藥用載體。可藥用載體中的細胞凋亡誘導劑可以先行給藥或伴隨給藥。也可以使用治療劑(例如，帕利他西)的納米顆粒或微粒(例如，交聯明膠)。所述納米顆粒或微粒可以塗布有生物粘附劑塗層。還可以使用如下的微粒，其能夠聚集以阻塞膀胱淋巴管的入口，從而延遲通過淋巴系統清除微粒。
本發明還使用負載藥物的明膠以及聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)納米顆粒和微粒將藥物遞送靶向腹腔、膀胱組織和腎臟中的腫瘤。


圖1.PLGA微粒靶向腫瘤在小鼠體內植入腹膜內的人Hs766T胰臟異種移植腫瘤。在腫瘤生長後(21天)向腹膜內給藥螢光素異氰酸鹽(FITC)標記顆粒的劑量。FITC在紫外光下顯示出綠色螢光。在第24天，麻醉動物並暴露腹腔。左側給出房間照明下的照片。注意多個腫瘤，其呈白色/黃色和不規則形狀的節塊，散布在整個腹腔中。右側給出在紫外光下的照片。注意綠色螢光表示的顆粒在腫瘤節塊(tumor nodules)上的定位。
圖2.使用帕利他西激活腫瘤促進微粒進入實體瘤以及在其中的分布在小鼠體內植入腹膜內的人SKOV-3卵巢異種移植腫瘤。在腫瘤生長後(42天)給動物腹膜內注射PLGA微粒(～3μm的直徑，50∶50LA∶GA)；使用綠色螢光化合物(吖啶橙)標記這些顆粒。動物接受快釋的負載帕利他西的微粒(其含有10mg/kg的帕利他西劑量)，或者接受不含帕利他西的空白微粒。三天後，麻醉動物，腫瘤附著在冷凍的網膜上，進行切片。表示顆粒位置的螢光纖維圖像重疊在顯示腫瘤輪廓的相差顯微圖像上。左側給出由經歷帕利他西激活腫瘤的動物獲得的腫瘤的代表性切片，右側給出由接受不含帕利他西的空白微粒的動物獲得的腫瘤切片。微粒為綠色螢光環。注意微粒的量越大，則微粒在使用腫瘤激活帕利他西治療方法所治療的腫瘤中的分布越均勻。相反，在沒有使用帕利他西治療的腫瘤中，微粒限於腫瘤外圍。以200X的放大率拍照。白條表示100μm的距離。
具體實施例方式
本發明提供了用於將治療劑遞送至腫瘤和腎臟組織的方法和其中使用的組合物，其中所述方法能夠提高治療劑靶向和進入多層組織(例如固體組織或腫瘤)內部。
在第一方面，本發明提供一種促進化學治療劑或顆粒進入(penetration)腫瘤的方法。該方法包括使用細胞凋亡誘導劑例如帕利他西，其劑量和時間足以導致組織中的細胞凋亡。然後當發生大量細胞凋亡時，將治療劑或顆粒遞送至組織，導致增強治療劑或顆粒機進入組織中。因此，在將治療劑或顆粒遞送至組織之前，將細胞凋亡誘導劑用作預治療，並且與不使用預治療的情況相比，該預治療能夠增強治療劑或顆粒進入組織。該細胞調亡誘導劑還可以具有治療活性，因此還可以用作治療劑(即，同樣的藥物可以用作細胞調亡誘導劑和治療劑)。或者，細胞調亡誘導劑可以用於增強將其它類型的藥物遞送至組織中(即，細胞調亡誘導劑和治療劑可以是不同的藥物)。
在一個實施方案中，本發明使用允許伴隨給藥細胞凋亡誘導劑和治療劑的製劑。在該實施方案中，將細胞凋亡誘導劑配製成快釋製劑，將治療劑配製成在一種或多種緩釋製劑。給藥後，快釋製劑導致組織內的細胞凋亡，緩釋製劑允許在實現顯著程度的細胞凋亡後遞送治療劑總量的大部分。
在相關實施方案中，所述製劑是單一製劑，其提供細胞凋亡誘導劑的初始突然釋放，然後是用作治療劑的剩餘藥物載荷的緩釋。
在相關實施方案中，上述製劑用於治療腹腔中的腫瘤和連接腹腔的組織中的腫瘤。
在另一個相關實施方案中，上述組合製劑用於治療腹水腫瘤。
在又一個相關實施方案中，這些製劑用於治療來自任何來源的轉移性腫瘤，其在腹腔或在與腫瘤所伸入的腹腔相鄰的組織中生長。
在相關實施方案中，這些製劑用於治療位於容易通過直接給藥而達到的器官或部位處的腫瘤，例如，在一種或多種以下組織內腹腔內的或與腹腔相鄰的組織、膀胱組織、腦組織、前列腺組織、或肺組織。
在另一個實施方案中，待治療的腫瘤位於受治療者的腹腔內或者生長在與腹腔相鄰的組織內。
在相關實施方案中，待治療的腫瘤位於容易通過直接給藥到達的器官或部位，例如前列腺、膀胱、腦。
在另一個實施方案中，微粒是通過腹膜內的路徑以懸浮液的形式遞送的。
在另一個實施方案中，微粒是通過直接局部注射至容易到達的器官或者通過直接部位注射到與容易到達的器官相鄰的器官以懸浮液的形式遞送的。
在又一個實施方案中，受治療者是哺乳動物，優選人。
在另一個實施方案中，待治療的患者是患有已經散布至腹腔的胰腺癌或卵巢癌的患者。
在第二方面，本發明提供用在上述方法中的組合物。這些組合物由各種負載藥物的PLGA顆粒構成，所述顆粒隨時間釋放細胞凋亡誘導劑和治療劑，並提供細胞凋亡誘導劑的初始速釋，然後提供治療劑的緩釋。
在一個具體的實施方案中，所述製劑由快釋組分構成，所述組分在一天內釋放優選＞10％，更優選＞20％，更優選＞30％，更優選＞40％，更優選＞50％，且進一步優選＞60％的細胞凋亡誘導劑的成分，導致組織內的細胞凋亡，且所述製劑進一步由一種或多種緩釋成分構成，所述成分持續釋放治療劑優選達幾天，更優選達幾周或更長。
在相關實施方案中，所述組合物可以是帕利他西的單一製劑，其由初始突然釋放和隨後的殘餘藥物載荷的緩釋構成。
在具體的實施方案中，所述組合物還可以是帕利他西的兩種或多種製劑的組合，其中至少一種製劑提供帕利他西的速釋，至少一種製劑提供帕利他西的緩釋。在相關實施方案中，與具有早期突然釋放的單一製劑獲得的效果相比，該組合製劑提供更好受控的藥物釋放，其由早期的快釋和後期的長時間釋放構成。
在又一個相關實施方案中，如果不同試劑用作細胞凋亡誘導劑和治療劑，則該組合製劑是特別有利的。
在另一個實施方案中，所述顆粒是PLGA顆粒，其被配製成含有細胞凋亡誘導劑或治療劑。典型製劑包含不大於50％，優選不大於30％，更優選不大於20％的所述試劑，基於製劑的總重。有時，有利地加入釋放增強劑，例如Tween 20、Tween 80、肉豆蔻酸異丙酯、β-乳糖或苯二甲酸二乙酯，從而獲得應用所需的釋放速率。
在優選實施方案中，快釋PLGA微粒由50∶50LA∶GA構成，其平均直徑為3-5μm，玻璃化轉變溫度低於體溫(例如，30℃)、帕利他西的載荷為～4％以及一天內藥物的釋放速率為～70％。該組合物的實例是表1中描述的批次8。
在優選實施方案中，緩釋PLGA微粒由50∶50LA∶GA構成，其平均直徑為30-50μm，玻璃化轉變溫度低於體溫(例如，30℃)、帕利他西的載荷為～4％以及第一天內藥物的初始突然釋放速率為～20％，然後在7周內緩釋產生70％的總累積釋放。該組合物的實例是表1中描述的批次7。
在優選實施方案中，緩釋PLGA微粒由75∶25LA∶GA構成，其平均直徑為3-5μm，玻璃化轉變溫度高於體溫(例如，50℃)、帕利他西的載荷為～4％以及第一天內藥物的初始突然釋放速率為～5％，然後在7周內緩釋產生30％的總累積釋放。該組合物的實例是表1中描述的批次4。
在第三方面，本發明提供一種通過在存在腫瘤的位置局部給藥含藥物的納米顆粒或微粒，實現改善遞送試劑至腫瘤的方法，其中，與在沒有選擇性粘附至腫瘤的納米顆粒或微粒中的遞送相比，納米顆粒或微粒選擇性地粘附至腫瘤組織，由此在腫瘤內產生更高藥物水平。
在一個實施方案中，含藥物的納米顆粒或微粒選擇性地粘附至腫瘤組織，並且由於細胞調亡誘導劑的釋放，便於它們自身進入腫瘤。例如，實施例5的顆粒示出大量進入腫瘤。該進入是由於細胞調亡誘導劑的釋放導致的，因為不負載有細胞調亡誘導劑的等同顆粒不進入腫瘤內。在進入腫瘤後，顆粒攜帶的藥物載荷的殘餘物隨時間而釋放，導致腫瘤組織高度集中地暴露至釋放的藥物。藥物釋放速率被組織環境所阻礙，增加腫瘤組織暴露的時間。因此，本實施方案的方法是治療腫瘤的有效方法，該方法使用局部給藥腫瘤粘附顆粒，所述顆粒在初始藥物釋放之後進入腫瘤組織。而且，本實施方案不依賴於快釋或緩釋治療劑的使用，但是適用於使用任何治療腫瘤的治療劑，因為顆粒攜帶有細胞調亡誘導劑。
在第四方面，本發明提供用在上述方法中的組合物。
在一個實施方案中，這些組合物由玻璃化轉變溫度(Tg)低於患者體溫的PLGA顆粒構成，從而增強顆粒對腫瘤組織的選擇性粘附。
在優選實施方案中，快釋PLGA微粒由約50％丙交酯和約50％乙交酯構成，其玻璃化轉變溫度低於體溫(例如，30℃)。該組合物的實例是表1中描述的批次8。
在具體的實施方案中，所述顆粒由含有約50％丙交酯和約50％乙交酯的PLGA配製而成，並負載有所述試劑，其中所述試劑的總重量達到不大於製劑總重量的50％，優選不大於30％。
在另一個實施方案中，可以通過以下方法獲得粘附至腫瘤組織的顆粒使用聚賴氨酸進行交聯來提高顆粒的生物粘附性能；使用纖維蛋白原塗布顆粒；或者其它本領域公知的方法。這些顆粒可以是明膠納米顆粒或PLGA微粒。
在第五方面，本發明提供一種通過給藥含藥物的微粒進入腹腔，實現改善遞送試劑至已經分布在腹腔內的腫瘤的方法，其中微粒聚集在最經常出現轉移性腫瘤的腹腔區域，從而，與在沒有最經常出現轉移性腫瘤的位置聚集的製劑中遞送藥物的情況相比，將更大的藥物量遞送至腫瘤。
在第六方面，本發明提供用於上述方法的組合物，即，PLGA微粒，在給藥至腹腔時，該微粒集中(localize)在最經常出現轉移性腫瘤的腹腔區域，例如網膜、腸繫膜、膈膜和小腹。
在優選實施方案中，PLGA微粒具有約3-5μm的平均直徑。這些顆粒優先集中在網膜、腸繫膜、膈膜和小腹附近。這些組合物的實例是表1所述的批次4和8。
在優選實施方案中，PLGA微粒具有約30-50μm的平均直徑。這些顆粒優先集中在小腹附近。這些組合物的實例是表1所述的批次2、3、5、6和7。
在一個實施方案中，微粒集中在腸繫膜內、網膜上、膈膜上，以及作為轉移性腫瘤的生長位置的其它位置上。
在相關實施方案中，顆粒的尺寸與單個腫瘤細胞或者腫瘤細胞的小聚集體的尺寸相似，即，直徑為約3-約30μm。
在第七方面，本發明提供實現改善含試劑的微粒在腹腔內的保留性的方法，通過在玻璃化溫度(Tg)低於患者體溫的PLGA微粒中配製試劑，以促進顆粒聚集體的形成，從而，與Tg高於體溫的微粒相比，減少通過淋巴管引流導致的這些顆粒的清除。
在第八方面，本發明提供用於上述方法的組合物，其由負載藥物的微粒構成，所述微粒已經延遲了淋巴清除。
在優選實施方案中，PLGA微粒由約50％丙交酯和約50％乙交酯製成，其玻璃化轉變溫度低於體溫(例如，30℃)。該組合物的實例是表1中描述的批次6、7和8。
在第九方面，本發明提供實現改善含試劑的微粒在腹腔中的保留性的方法，通過在顆粒尺寸足夠大的PLGA微粒中配製試劑，從而，與沒有將試劑負載在微粒上而給藥試劑的情況相比，減少通過淋巴管引流清除這些顆粒。
在第十方面，本發明提供用於上述方法的組合物，其由負載藥物的微粒構成，所述微粒具有足夠大的尺寸，以延遲通過淋巴管引流而實現的清除。
在優選實施方案中，PLGA微粒的平均直徑為至少10μm。這些組合物的實例是表1中所述的批次2、3、5、6和7。
在第十一方面，本發明提供用於實現改善含試劑的微粒在腹腔內的保留性的方法，通過在PLGA微粒中配製試劑，與沒有負載到微粒上而給藥該試劑的情況相比，所述微粒的尺寸減少由於經由腹膜吸附而導致的從腹腔清除試劑。
在第十二方面，本發明提供用於上述方法的組合物，其由負載藥物的微粒構成，所述微粒已經延遲經由腹膜的吸收。
在優選實施方案中，PLGA微粒的平均直徑為至少10μm。這些組合物的實例是表1中描述的批次2、3、5、6和7。
在第十三方面，本發明提供具有至少兩種以下所需性能的組合物(1)提供藥物的速釋，然後是緩釋，(2)選擇性地粘附至腫瘤組織，(3)在最經常發生轉移性腫瘤的腹腔區域集中，(4)通過淋巴管引流而少量清除，和(5)經由腹膜的低吸收。
在優選實施方案中，所述組合物含有快釋和緩釋PLGA顆粒。快釋PLGA顆粒由50％丙交酯和50％乙交酯製成，平均直徑為3-5μm，玻璃化轉變溫度低於體溫(例如，30℃)，且在數小時之內釋放細胞凋亡誘導量的細胞凋亡誘導藥物。緩釋PLGA微粒由50％丙交酯和50％乙交酯製成，平均直徑為30-50μm，玻璃化轉變溫度低於體溫(例如，30℃)，釋放治療劑，在第一天釋放優選少於30％，更優選少於20％的藥物載荷，然後緩釋，在數周內累積釋放＞60％，優選＞70％。
在進一步優選的實施方案中，細胞凋亡誘導劑和治療劑都是帕利他西。
在第十四方面，本發明提供一種將親脂試劑遞送至患者的膀胱壁的方法。該方法使用明膠納米顆粒用於試劑的製劑，其中所述製劑比給藥自由藥物具有若干優點。由於將試劑配製在明膠納米顆粒內，因此與其它可能的情況相比，可以給藥更大藥量的許多難溶試劑。而且，配製在明膠納米顆粒中的藥物用作持續藥物釋放的儲備，以至於與給藥自由試劑相比，可以維持更高的藥物濃度。而且，即使當尿液排空時，負載藥物的明膠納米顆粒也可以保留在膀胱腔內，從而增大腫瘤對藥物的總體暴露。
在優選實施方案中，本發明提供一種通過膀胱內滴注將帕利他西遞送至患有淺表性膀胱癌的患者的膀胱壁的方法，其中含克列莫佛的製劑中不含帕利他西，且由於這個原因，更容易進入膀胱壁。
在另一個實施方案中，可以使用該方法給藥其它高度親脂性試劑，用於治療淺表性膀胱癌或用於治療間質性膀胱炎(interstitial cystitis)。預期能夠使用該方法產生改進的治療結果的試劑包括但不限於多西他奇(docetaxel)。
在第十五方面，本發明提供組合物，將帕利他西配製成適用於膀胱內滴注的遞送形式，其中該遞送形式滿足以下標準(1)在小體積的滴注劑中含有足夠劑量的帕利他西，(2)該遞送形式能夠快速和有效地將帕利他西遞送至膀胱壁，以及(3)在膀胱壁內獲得大量和治療有效量的帕利他西活性濃度。
在一個實施方案中，該組合物由交聯的明膠納米顆粒構成，所述顆粒負載有帕利他西。
在相關實施方案中，配製明膠納米顆粒以提供帕利他西的溶解度限制釋放，且因此將保持尿液中的帕利他西的溶解濃度。因此，將會不依賴於會另外導致稀釋和降低藥物濃度的過程(包括但不限於，在藥物滴注時存在殘餘尿液，或者在治療持續期間或之後產生尿液)，保持帕利他西的恆定和有效濃度。
在優選實施方案中，由Bloom數為175的明膠製備明膠納米顆粒，其平均直徑為約600nm-約1000nm，且藥物載荷為0.4％-2.0％，更優選藥物載荷為0.5％-1.0％。明膠的交聯可以通過以下方法實現使用實施例7所述的戊二醛，或者其它方法，例如使用本領域公知的氧化多糖分子(美國專利No.6,132,759)。表3中提供了這些納米顆粒的實例，且實施例7中描述了它們的性能。
在另一個相關實施方案中，所述納米顆粒製劑進一步含有其它成分以增大帕利他西的溶解度，因此增大可獲得的用於治療腫瘤的帕利他西的濃度。這些成分的實例是共溶劑，例如二甲基亞碸或聚乙二醇。
在又一個相關實施方案中，通過施加過高熱可以增大帕利他西在尿液中的溶解度。
在另一個實施方案中，在患有淺表性膀胱癌的患者體內經常觀察到，顆粒粘附至正常的膀胱壁和/或發炎的膀胱壁，和/或暴露在膀胱壁表面上的腫瘤組織。通過使用生物粘附分子塗布納米顆粒可以增大該粘附，所述生物粘附分子包括但不限於聚賴氨酸、纖維蛋白原、聚丙烯酸聚合物、甲基纖維素、纖維素乙酸酯、羧甲基纖維素、羥乙基纖維素或果膠。
在相關實施方案中，納米顆粒粘附至膀胱壁能夠保持膀胱腔內的有效藥物濃度，甚至是在患者已經清空他或她的膀胱後。
在具體的實施方案中，粘附至膀胱壁的顆粒是負載有親脂性治療劑且塗布有生物粘附分子的明膠納米顆粒。
在優選實施方案中，所述顆粒是明膠納米顆粒，負載有帕利他西並塗布有聚賴氨酸。
在進一步優選的實施方案中，明膠納米顆粒是由Bloom數為175的明膠製成的顆粒，平均直徑為約600nm-約1000nm，藥物載荷為約0.4％-2％，更優選為約0.5％-1％，其含有佔其重量的5％的聚賴氨酸，其中明膠分子和聚賴氨酸分子可以使用實施例7中所述的戊二醛或者其它本領域公知的交聯方法交聯。
在另一個實施方案中，適用於膀胱內滴注的遞送形式由快釋PLGA微粒構成。
在另一個實施方案中，治療劑進入膀胱內容物中的釋放速率受到試劑的水溶性的限制。
在優選實施方案中，所述試劑是帕利他西。
在另一個實施方案中，快釋PLGA微粒的平均直徑為100nm-6000nm，優選500-5000nm，更優選3000-4000nm。
在優選實施方案中，快釋PLGA微粒由50∶50LA∶GA構成，平均直徑為3000-5000nm，玻璃化轉變溫度低於體溫(例如，30℃)，含有約4％的帕利他西，且在漏槽狀態(sink condition)下在一天內具有約70％的藥物釋放速率。
在另一個實施方案中，PLGA微粒上塗布有生物粘附分子。
在第十六方面，本發明提供一種當通過靜脈內途徑給藥試劑時，增大試劑向腎臟的遞送的方法。與靜脈給藥的試劑的分布相比，該方法基於明膠納米顆粒對腎臟的選擇性分布。
在一個實施方案中，通過靜脈給藥配製在明膠納米顆粒中的試劑實現選擇性地靶向腎臟組織。
在優選實施方案中，選擇性靶向腎臟的方法描述於實施例11中。
在進一步優選的實施方案中，使用具有約600-900nm的平均尺寸並負載有治療上有用的試劑的明膠納米顆粒靶向受治療者的腎臟。
在另一個實施方案中，配製在明膠納米顆粒中的試劑包括用於治療腎癌的化學治療試劑、用於預防腎癌的化學預防試劑、用於治療腎病的基因治療結構成分，以及其它有利於選擇性給藥至腎臟的試劑。
在第十七方面，本發明提供一種組合物，用於將帕利他西或其它試劑配製成適用於選擇性地靜脈靶向腎臟的遞送形式。該組合物由交聯的明膠納米顆粒構成，所述顆粒負載有待遞送的試劑。
在優選實施方案中，所述試劑是帕利他西。
在進一步優選的實施方案中，明膠納米顆粒由Bloom數為175的明膠構成，平均直徑為約600nm-約1000nm，藥物載荷為0.4％-2.0％，更優選藥物載荷為0.5％-1.0％。明膠的交聯可以通過以下方法實現使用實施例7所述的戊二醛，或者其它方法，例如使用本領域公知的氧化多糖分子(美國專利No.6,132,759)。表3中提供了這些納米顆粒的實例，且實施例7中描述了它們的性能。
在另一個實施方案中，所述試劑是用於選擇性地將基因結構成分遞送至腎臟細胞的基因產物。
在第十七方面，本發明提供一種用於將試劑遞送至患者的膀胱壁的方法。該方法使用明膠納米顆粒來配製試劑，其中所述製劑比給藥自由藥物具有若干優點。由於將試劑配製在明膠納米顆粒內，因此與其它可能的情況相比，可以給藥更大藥量的試劑。
在優選實施方案中，配製在明膠納米顆粒中的藥物用作持續藥物釋放的儲備，以至於與給藥自由試劑相比，可以維持更高的藥物濃度。而且，即使當尿液排空時，負載藥物的明膠納米顆粒也可以保留在膀胱腔內，從而增大腫瘤對藥物的總體暴露。
在另一個實施方案中，可以使用該方法給藥用於治療淺表性膀胱癌的其它高度親脂性試劑。預期能夠使用該方法產生改進的治療結果的試劑包括但不限於多西他奇。
在另一個實施方案中，可以使用該方法給藥其它用於治療淺表性膀胱癌的試劑。所述試劑包括但不限於，蘇拉明(suramin)、幹擾素(例如，α、γ、ω幹擾素)、多西他奇、阿黴素和其它蒽環類抗生素、噻替派(thiotepa)、絲裂黴素(例如，絲裂黴素C)、芽孢桿菌(Bacillus)Calmette Guerin、順氯氨鉑、甲氨蝶呤(methotrexate)、長春鹼(vinblastine)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)、氟他米特(flutamide)、二乙基乙烯雌酚(diethylstibestrol)、雌氮芥(estramustine)、甲地孕酮乙酸鹽(megestrol acetate)、環孕酮(cyproterone)、氟他米特和環磷醯胺(cyclophosphamide)。
在另一個實施方案中，可以使用該方法給藥用於治療間質性膀胱炎的試劑。預期能夠使用該方法產生改進的治療結果的試劑包括但不限於，戊聚糖聚硫酸鹽及其鈉鹽、抗組胺劑(例如，羥嗪及其鹽、色甘酸及其鈉鹽)、三環抗抑鬱劑(例如，阿密曲替林(amitriptyline)、地昔帕明(desipramine)、去甲替林(nortriptyline)、多慮平(doxepin)和丙咪嗪(imipramines))、選擇性的血清素再攝取抑制劑(例如，帕羅西汀(paroxetine))、疼痛治療藥(例如，加巴噴丁(gabapentin)、氯硝西泮(clonazepam))、肌肉弛緩劑(例如，地西泮(diazepam)、巴氯芬(Baclofen))、抗驚厥劑(例如，加巴噴丁、氯硝西泮)、麻醉性鎮痛劑(例如，vicodin、鹽酸羥考酮和對乙醯氨基酚片劑(percocet)、奧施康定(oxycontin))、其它鎮痛劑(例如，鹽酸利多卡因(lidocaine hydrochlorid)，鹽酸普魯卡因(procaine hydrochloride)、水楊醇、鹽酸潘妥卡因(tetracainehydrochloride)、鹽酸非那吡啶(phenazopyridine hydrochloride)、撲熱息痛(acetaminophen)、阿司匹林(acetylsalicylic acid)、氟苯柳(flufenisal)、布洛芬(ibuprofen)、吲哚布洛芬(indoprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、甲氧萘丙酸(naproxen)、可待因(codeine)、xycodone和枸櫞酸芬太尼(fentanyl citrate))、解痙藥(例如，Urimax、Pyridiμm、Urised、黃酮哌酯(flavoxate)、雙環胺、丙胺太林(propantheline))、抗膽鹼能類(例如，Detrol、鹽酸奧昔布寧(Ditropan)、硫酸莨菪鹼(Levsin)、硫酸莨菪鹼(hyoscyamine))、H2阻滯劑(例如，泰胃美(Tagamet)、善得胃(Zantac))、尿鹼化劑、adrenetic blocks(例如，卡度雷(Cardura)、Flomax、高特靈(Hytrin))、白細胞三烯抑制劑(leukotrieneinhibitors)(例如，孟魯司特(montelukast))以及具有多種作用的試劑(例如，二甲基亞碸、肝素、oxychlorosend及其鈉鹽、硝酸銀、卡介苗(bacilluscalmette-guerin)、透明質酸鈉、resiniferatoxin、botulinum toxic)。
在另一個實施方案中，所述試劑可用於治療膀胱感染，所述試劑例如是抗生素、抗真菌劑、抗原蟲藥、抗病毒藥和其它抗感染試劑。用於治療這些感染的合適藥物包括絲裂黴素、環丙沙星(ciprofloxacin)、氟哌酸(norfloxacin)、氧氟沙星(ofloxacin)、methanamine、呋喃妥因(nitrofurantoin)、氨比西林(ampicillin)、阿莫西林(amoxicillin)、乙氧萘青黴素(nafcillin)、甲氧苄啶(trimethoprim)、磺胺類藥(sulfa)、甲氧苄氨嘧啶-磺胺甲基異噁唑(trimethoprimsulfamethoxazole)、乙琥紅黴素(erythromycin)、脫氧土黴素(doxycycline)、滅滴靈(metronidazole)、四環素(tetracycline)、卡那黴素(kanamycin)、青黴素類(penicillins)、先鋒黴素類(cephalosporins)和氨基糖甙類(aminoglycosides)。
在又一個實施方案中，所述試劑可以用於治療欲望性尿失禁或發炎。合適的藥物包括雙環胺、去氨基精加壓素(desmopressin)、奧昔布寧(oxybutynin)、雌激素(estrogen)、特羅地林(terodiline)、丙胺太林(propantheline)、多慮平、米帕明(imipramine)、黃酮哌酯、苯丙醇胺(phenylpropanolamine)、特拉唑嗪(terazosin)、praxosin、假麻黃鹼(pseudoephedrine)、氨甲醯甲膽鹼(bethanechol)、抗膽鹼能藥(anticholinergics)、鎮痙劑(antispasmodic agents)、抗毒蕈鹼劑(antimuscarinicagents)、β-2激動劑、去甲腎上腺素吸收抑制劑、血清素吸收抑制劑、鈣通道阻滯劑、鉀通道開放劑，也可以使用肌肉弛緩劑。用於治療失禁的合適藥物包括奧昔布寧、S-奧昔布寧、emeproniμm、維拉帕米(verapamil)、米帕明(imipramine)、黃酮哌酯、阿託品(atropine)、丙胺太林、託特羅定(tolterodine)、羅西維林(rociverine)、克侖特羅(clenbuterol)、達非那新(darifenacin)、特羅地林、trospium、天仙子胺(hyoscyamin)、丙哌凡林(propiverine)、去氨基精加壓素、伐米胺(vamicamide)(Fujiwara Co.，Japan)、YM-46303(Yamanouchi Co.，Japan)、蘭吡立松(lanperisone)(Nippon KayakuCo.，Japan)、NS-21(Nippon Shinyaku Orion，Formenti，Japan/Italy)、NC-1800(Nippon Chemiphar Co.，Japan)、ZD-6169(Zeneca Co.，UnitedKingdom)和司洛碘銨(stiloniμm iodide)。
在另一個實施方案中，所述試劑可以用於增強膀胱收縮性，或減少尿液在膀胱內的保留時間。
實施例1鑑定對人腫瘤細胞具有活性的帕利他西濃度和治療時間本發明描述了設計方法以及負載帕利他西的顆粒的組合物，該組合物在治療期間釋放細胞毒素水平的帕利他西，所述水平足以導致細胞毒性。該實施例鑑定對抗人腫瘤細胞有效的帕利他西濃度和治療時間。
申請人評估了帕利他西(溶解在水中，96小時的治療)在三種人胰腺癌細胞(PANCl、MIA-PaCa和Hs766T)和人膀胱RT4腫瘤細胞中的細胞毒性。使用微四唑鹽染料還原(microtetrazolium dye reduction，MTT)分析確定藥物效應。在這些細胞中產生50％的細胞毒性(IC50)所需的濃度分別是1.5、0.7、0.7nM。這些IC50值與人乳腺MCF7和卵巢SKOV3癌細胞中的帕利他西的IC50相當(Au，et al.，Cancer Res.，582141-2148，1998)。該數據表明胰腺癌細胞對帕利他西是高度敏感的。這是令人吃驚的，因為靜脈給藥的Taxol(溶解在克列莫佛和乙醇中的帕利他西)在晚期胰腺癌患者體內沒有表現出顯著的活性(Gebbia and Gebbia，Eur.J.Cancer，32A1822-1823，1996；Schnall andMacdonald.Semin.Oncol.，23220-228，1996)。RT4細胞中的帕利他西的IC50是4.0±0.4nM(96小時的治療)。
實施例2建立人胰腺和卵巢異體移植腫瘤模型以測試負載帕利他西的微粒的功效該實施例示例建立人腹膜腫瘤模型以測試負載帕利他西的微粒的功效。
申請人使用來自淋巴腺轉移瘤的人胰腺Hs766T細胞在無胸腺的小鼠體內移植生長正位和腹膜內腫瘤。對於正交模型，將2×106腫瘤細胞正交移植到胰腺內。2-3周後腫瘤移植生長(～1.5cm-～2cm的直徑)。對於腹膜內腫瘤，申請人通過系列再移植由被給與Hs766T細胞的IP注射的腹膜洗液收集到的細胞，建立了轉移亞系(metastatic subline)。在6周大的雌性Balb/c(系)小鼠體內再移植Hs766T細胞IP導致遞增的腫瘤遍布整個腹腔。2-3周後，在網膜上發現直徑為～1cm-～1.5cm的腫瘤節塊，在腸繫膜、小腹、腹膜後腔和膈膜上發現～3mm-～5mm的多個節塊。還存在腹水腫瘤。在3-4周動物死亡。
對於卵巢腫瘤模型而言，如對於Hs766T腫瘤所描述的，申請人建立了人卵巢SKOV3細胞的轉移亞系。再移植轉移的SKOV3細胞導致腫瘤在2周內生長在網膜上，在4周內生長在腸繫膜上，然後腫瘤入侵內臟器官的薄壁組織，例如肝和腎，且在後期(6周後)腫瘤存在於膈膜上。在2周時，腹膜液中的蛋白質濃度從正常小鼠的3％增加至攜帶腫瘤的小鼠的約6％。4周後，腹膜液的體積增加7-10倍，且含有腫瘤細胞的聚集體。腹水腫瘤的尺寸為40-幾百μm。5-6周後，動物出現顯著的體重減輕(10-15％)，一些小鼠出現腹膜膨脹(胸圍增大20％，6.3cm-7.6cm)以及腸梗阻。腫瘤植入後7-9周動物死亡。
攜帶胰腺和卵巢腫瘤的小鼠體內的疾病發展與所報導的患者體內的疾病發展相似。例如，卵巢癌患者的腹腔內表現出相似的腫瘤散布和發展，腫瘤出現在腸膜、肝周和脾周韌帶、膈膜、腸繫膜和網膜內。它們還表現出在腹膜液中的高蛋白質濃度(晚期為4.46g/dl)，原因是血清蛋白洩漏和/或腹腔內存在腹水(Lee，et al.，Cancer，702057-2060，1992)。患者體內的惡性腹水示出與SKOV3腹水腫瘤中相似尺寸的腫瘤細胞聚集體(Tauchi，et al.，Acta Cyto/.，40429-436，1996；Monte，et al.，Acta Cytol.，31448-452，1987)。
實施例3鑑定PLGA微粒的性能對它們在腹腔內的分布和保留性的影響本發明公開了負載藥物的PLGA顆粒，其靶向腹膜腫瘤。該實施例示例PLGA微粒的不同性能對其在腹腔內的分布和保留性的影響，以幫助鑑定具有所需保留性和分布特性的PLGA微粒。實施例4-6描述使用帕利他西(廣泛使用的抗癌藥物)作為實例製備和應用所述負載藥物的PLGA微粒。
PLGA微粒尺寸的影響。申請人在腹膜內給藥後，比較了兩種具有不同直徑(即，～3和～30μm)的微粒製劑的分布。這些微粒負載有吖啶橙，因此在紫外光下是可見的。24小時後，對小鼠實施無痛致死，打開其腹部(每種製劑使用三隻小鼠)。結果如圖1所示。在網膜、腸繫膜、膈膜和小腹內發現小的微粒，而大的微粒集中在小腹內。
玻璃化轉變溫度對從腹腔淋巴清除微粒的影響。申請人評估了玻璃化轉變溫度(Tg)對通過淋巴流從腹腔清除微粒的影響。向小鼠進行腹膜內注射75∶25LA∶GA微粒的混合物(即，表1中的批次1)和50∶50LA∶GA微粒的混合物(即，表1中的批次8)。50∶50和75∶25的微粒具有相同的尺寸(直徑為3μm)，但是具有不同的Tg。Tg決定聚合物鏈的運動；在高於Tg的溫度產生運動，但是在低於Tg時不產生運動。聚合物鏈段的運動導致微粒的聚集和粘結。因此，具有低於體溫的Tg(即，30℃vs 37℃)的50∶50LA∶GA微粒在腹膜內給藥後形成聚集體，而具有高於體溫的Tg(即，53℃)的75∶25LA∶GA微粒不形成聚集體。微粒聚集導致更大的有效直徑。75∶25LA∶GA的微粒包含在吖啶橙(綠色螢光)中，而50∶50LA∶GA的微粒包含在若丹明(rhodamine)(紅色螢光)中。
注射後，對小鼠實施無痛致死，切除膈膜並用水洗滌。冷凍一半膈膜，通過螢光顯微術研究冷凍部分。將另一半固定在福馬林中，並使用掃描電鏡進行分析。兩種分析示出1小時時膈膜內部的淋巴血管內的少量微粒和在24小時時明顯更多的微粒，表明隨時間的推移微粒排洩至淋巴系統中。在1和24小時的樣品中，淋巴血管中存在比75∶25LA∶GA微粒約多三倍的50∶50LA∶GA微粒。在縱隔的淋巴結中獲得相似的發現，證實較少量地淋巴清除50∶50LA∶GA微粒。
表1負載帕利他西的PLGA微粒的性能和活性特性粘度與玻璃化轉變溫度(Tg)直接相關。

PLGA微粒優先保留在腹腔內。使用負載若丹明的螢光微粒研究腹膜內給藥後PLGA微粒在腹腔內的聚集和沉積。將該沉積與若丹明在溶液中的沉積進行對比。負載若丹明的微粒(直徑為3μm，50∶50LA∶GA)最初分布在整個腹膜內的空腔(例如，在15分鐘時)內，然後在腸繫膜、網膜和膈膜中聚集(例如，在24小時和96小時時)。相反，溶液中的若丹明在15分鐘時分布在整個腹膜內的空腔中，但是在24小時時不再能觀察到伴隨若丹明的螢光。該數據表明，與溶液相比，顆粒優先保留在腹腔內。
PLGA微粒優先聚集在腹膜腫瘤節塊上。使用吖啶橙標記的螢光微粒研究腹膜內給藥後PLGA微粒在腹腔內的聚集和沉積。這些顆粒的直徑為～3μm，且由50∶50LA∶GA構成。對小鼠進行腹膜內植入人胰腺HS 766 T-細胞的細胞懸浮物。在第21天或當疾病處於晚期(平均存活時間為24天)時給藥一定劑量的吖啶橙標記的微粒。在第24天，麻醉動物，打開腹腔，藉助其螢光估計微粒的分布。圖1的左側是腫瘤節塊在腹腔內的分布；腫瘤主要聚集在腸繫膜內、網膜上以及膈膜上。圖1的右側示出綠色螢光的異硫氰酸螢光素(FITC)標記的微粒在散布在整個腹腔的腫瘤節塊上的聚集。使用若丹明或吖啶橙標記相同PLGA微粒所進行的類似研究得出相似的結果。相反，給藥溶液形式的這些螢光染料(即，沒有結合在微粒上)不表現出在腫瘤組織上的聚集，表明所述聚集是微粒的獨特性能。該性能是有利的，因為其提供了活性腫瘤靶向作用。
總結。基於這些發現，申請人確定，與溶液形式的試劑相比(例如，不伴隨顆粒)，負載在PLGA微粒上的試劑優先保留在腹腔內；通過淋巴管引流，由50∶50LA∶GA構成的微粒緩慢地從腹腔中排放；與大顆粒(～30μm的直徑)相比，小顆粒(～3μm的直徑)更均勻地分布在腹腔內；與具有較高Tg的PLGA顆粒相比，具有較低Tg的PLGA顆粒優先聚集在腹腔內；顆粒尺寸決定經由淋巴管引流的清除和/或經由腹膜的吸收；以及PLGA微粒(～3μm的直徑，50∶50LA∶GA)優先集中在腹腔內的腫瘤節塊上。
實施例4負載帕利他西的PLGA微粒該實施例示例負載帕利他西的PLGA微粒的製備和表徵方法。PLGA微粒是由各種比例的乳酸或丙交酯和乙醇酸或乙交酯構成的共聚物。該實施例進一步示例微粒性能對從微粒釋放藥物的影響，以幫助發現提供所需藥物釋放速率的PLGA微粒。帕利他西用作負載在微粒上的藥物的實例。相似的步驟可用於在這些微粒上負載其它藥物或試劑。
製備方法。申請人使用乳化/蒸發方法製備負載帕利他西的PLGA微粒。簡言之，對於水包油包水(W/O/W)的雙乳化法，將PLGA和帕利他西共溶解在5ml的二氯甲烷中。通過勻漿化30秒將該溶液乳化在1ml水中，並加入20ml的1％聚乙烯醇(PVA)溶液中。對於水包油(O/W)乳化法，將藥物-聚合物溶液直接加入20ml的1％PVA溶液中。對於兩種方法，在於38℃預熱的500ml的0.1％PVA溶液中稀釋所得的乳液，連續攪拌直至結束溶劑蒸發。30分鐘後，通過離心收集微粒，水洗三次，低壓凍幹。
為了確定藥物載荷，將微粒溶解在乙腈中。加入內標物三尖杉寧鹼(cephalomannine)(100μl的20μg/ml甲醇)。在空氣流中乾燥該混合物。將殘餘物重新溶解在0.1ml的乙腈中，然後加入0.1ml的水。離心後，使用高效液相色譜法分析上清液的帕利他西濃度。相似地處理由空白PLGA微粒和已知量的帕利他西的混合物構成的參照樣品。負載藥物的微粒的上清液中的帕利他西濃度與參照樣品中的帕利他西濃度的比率表示藥物載荷。
表徵。使用掃描電鏡研究負載帕利他西的PLGA微粒的表面形態和內部結構。微粒呈球形且表面光滑。使用O/W方法製備的微粒(批次2)表示出均相的、充填內部結構，而使用O/W/O方法(批次3)製備的微粒表現出多孔、多區域內部結構。表1示出負載帕利他西的微粒的特性。
鑑定產生所需藥物釋放速率的PLGA微粒的性能。申請人評估了微粒性能與含有0.1％的Tween80的37℃的磷酸鹽緩衝鹽水中帕利他西的釋放之間的關係。下面示出的結果表明，從微粒釋放帕利他西的速率和程度可以通過改變微粒的性能而很好地調整。
PLGA顆粒尺寸的影響。釋放速率和程度與微粒尺寸是反向相關的。例如，對於使用50∶50摩爾比的LA∶GA製備的微粒，直徑為～4μm的批次8與具有～30μm的更大直徑的批次6相比表現出更高水平的釋放。相似地，僅僅在尺寸上與批次2不同的批次8(直徑為～3vs～60μm)表現出更為快速的釋放。與大微粒相比，較小的微粒具有較高的表面積-體積比。表面積的增大導致帕利他西更大程度地暴露至水性介質，導致更大的初始突然釋放。而且，較小的微粒具有較短的擴散路徑長度，導致更快速的藥物釋放和基質降解。
PLGA微粒內部結構的影響。與具有充填結構的微粒相比，具有多孔多區域結構的微粒表現出更高的釋放速率。這很可能是由於多區域微粒中較短的擴散路徑長度導致的。例如，以50∶50LA∶GA作為載體，與具有充填內部結構的微粒相比，具有多區域結構的微粒表現出更高水平的初始釋放(即，批次7vs批次6)。同樣地，以75∶25LA∶GA作為載體，與具有充填內部結構的微粒相比，具有多區域結構的微粒表現出更快速的釋放(即，批次3vs批次2)。
PLGA微粒的特性粘度的影響。由聚合物的分子量決定的特性粘度與釋放速率反向相關。例如，使用W/O/W製備批次3和7，它們具有相同的顆粒尺寸。表現出更高的特性粘度的批次3釋放帕利他西的速率要慢3.5倍。
PLGA微粒的聚合物構成的影響。用50∶50LA∶GA製備的微粒比用75∶25LA∶GA製備的微粒表現出更高的釋放速率。這很可能是因為50∶50LA∶GA微粒是更加無定形的(即，較低的結晶性)。由於其低的水溶性，流體擴散進入或離開微粒在從微粒釋放帕利他西方面發揮作用。結晶性的降低改善了流體向微粒內的擴散。改善的流體擴散還加速了聚合物的降解，導致更快的藥物釋放(Alonso，et al.，Vaccine，12299-306，1994)。
實施例5進入腫瘤的負載帕利他西的PLGA微粒該實施例示例了具有不同藥物釋放形式的微粒製劑混合物的用途，其中一種製劑迅速釋放帕利他西(例如，24小時內)以誘導細胞凋亡，從而改善PLGA微粒進入腫瘤。
微粒進入腹膜腫瘤。在小鼠腹膜內植入人Hs766T胰腺異體移植腫瘤細胞。當腹膜內的腫瘤生長時(第21天)，用一定劑量的負載帕利他西的微粒(直徑為～3μm)治療該動物，該微粒使用吖啶橙標記，用於方便地檢測顆粒進入腫瘤內。這些微粒快速釋放帕利他西(24小時內～70％)，從而誘導細胞凋亡，這進而促進微粒進入腫瘤。使用由相同方法但是不採用帕利他西製備的空白微粒治療另一組動物。在第24天，獲得網膜和粘附的腫瘤。網膜是分離腹腔和腹膜後腔的韌帶，且是小鼠和人患者體內腫瘤聚集的位置。冷凍腫瘤並切片。通過螢光顯微術確定在腫瘤不同深度處的顆粒進入，該方法可以看到吖啶橙標記的顆粒。圖2示出結果。大量的顆粒進入，且在實體瘤內均勻分布。相反，使用空白微粒治療來自動物的腫瘤，而不使用帕利他西進行腫瘤激活治療，微粒保留在腫瘤周圍。
腹膜腫瘤內帕利他西的濃度。在IP滴注負載帕利他西的微粒(批次8)或Taxol後，申請人對比了位於網膜上的實體瘤內的帕利他西濃度。與可購得的Taxol製劑(3.2μg/g，在第24小時獲得)相比，來自微粒的峰值帕利他西濃度明顯更高(13μg/g)，且在稍後的時間(即，3天)實現。這些濃度是自由藥物和包埋藥物的總濃度。使用線性梯形法則計算的微粒的濃度-時間曲線下面的面積(其是總藥物暴露量的指標)高出16倍(82vs 5μg-天/g)，表明負載帕利他西的PLGA微粒具有顯著的腫瘤靶向優點。
實施例6負載帕利他西的PLGA微粒的生物活性該實施例表明，在生物體外和生物體內，負載帕利他西的PLGA微粒是具有生物活性的。在包裹在微球中之後，帕利他西的生物活性沒有變化。而且，負載帕利他西的PLGA微球由於其腫瘤靶向性能和其在腫瘤內的持續保留性，比可購得的Taxol製劑在生物體內表現出更高的功效。
體外生物活性。使用人卵巢SKOV3癌細胞進行該研究。使用磺基若丹明B分析確定藥物效應(Au，et al.，Cancer Chemother.Pharmacol.，4169-74，1997)。在治療96小時後，該研究比較了水溶液中的自由帕利他西(即，帕利他西溶解在培養基質中)和四種負載帕利他西的PLGA微粒製劑(即，表1中的批次2、4、6和8)的濃度響應曲線。四種製劑的生物活性的級別次序與藥物釋放速率的級別次序相同，其中速釋製劑的活性更高。例如，在96小時內釋放81.5％的批次8的活性最高，然後是釋放28.5％的批次6和釋放10.9％的批次4。釋放0.25％的批次2沒有細胞毒性作用。50％細胞毒性所需的濃度分別是5.0、18.5、108和＞1000nM。
體內生物活性。申請人比較了帕利他西PLGA微粒和可購得的Taxol製劑的抗腫瘤活性。對微粒，劑量是120mg/kg帕利他西當量，對Taxol，劑量是40mg/kg帕利他西當量。在這些劑量下，這兩種製劑是毒性相當的(equi-toxic)，在兩天之內產生約10％的體重減輕，之後，動物恢復體重。所述微粒由三種製劑構成，一種快速釋放帕利他西(批次8，70.5％，在1天內)，其它兩種緩慢釋放帕利他西(批次6，72.6％，在49天內，以及批次4，28.7％，在49天內)。實施例2中更為詳細地描述了顆粒性能。結果表明，微粒具有明顯的存活優勢，對於賦形劑治療的對照組，平均存活時間是47天，對於Taxol組是85.5天，對於微粒組是115.5天(Taxol和微粒之間的差值p＜0.01)。注意，該研究在晚期疾病(植入後4周)中進行，使用具有不同尺寸(約3-4μm和約30μm)的兩種緩釋微粒的組合。
在攜帶腹膜晚期胰腺癌的動物中獲得相似的結果。對小鼠植入了IP人胰腺Hs766T腫瘤。在腫瘤生長後，在腫瘤植入後的第10天，使用生理鹽水、Taxol(60mg/kg)或帕利他西顆粒(快釋和兩種緩釋製劑的組合)治療動物。平均存活時間分別是24、33和57天。空白微粒顯示出與鹽水控制相似的數據。
給藥兩種製劑後的血漿和組織濃度。使用高效液相色譜法測定血漿和腹膜內組織的帕利他西濃度，使用線性梯形法則計算從0-168小時的濃度-時間曲線下的面積(area-under-the-concentration-time curve，AUC)。結果如表2所示，結果表明，與Taxol相比，給藥負載在PLGA微粒內的帕利他西在腹膜組織內產生高出2.5-6倍的濃度。同時，血漿濃度只升高1.5倍，表明使用帕利他西微粒的優先組織靶向。
表2在腹膜內給藥毒性相當的劑量配製成微粒(120mg/kg)或Taxol(40mg/kg)的帕利他西後，血漿和腹膜內組織中的帕利他西濃度使用線性梯形法則計算AUC0-＞168小時

*血漿AUC＝(μg/ml·hr)**腹腔灌洗AUC＝(初始劑量的百分比·hr)該研究使用單獨的和毒性相當劑量的微粒和Taxol。藉助這一標準，微粒的帕利他西當量劑量比Taxol的劑量高。這是因為藥物的持續釋放降低了劑量強度，因此，降低了毒性並增大了最高耐藥劑量。儘管重複給藥Taxol很可能會提高該組中的治療效果，但是不需要重複給藥帕利他西微粒。後者代表微粒的優勢之一，其減少了頻繁計量的需要。
實施例7負載帕利他西的明膠納米顆粒的製備和表徵該實施例示例負載帕利他西的明膠納米顆粒的製備和表徵。
負載帕利他西的明膠納米顆粒的製備。使用具有不同Bloom數s(75-100、175和300)的明膠並使用解溶劑化方法製備納米顆粒(Oppenheim，R.C.，Int.J.Pharm.，8217-234，1981)。將明膠(200mg)溶解在含有2％Tween20的10ml水中。將該溶液加熱至40℃並持續以300rpm攪拌。向該溶液中緩慢加入2ml 20％的硫酸鈉水溶液，然後加入1ml含有2mg帕利他西的異丙醇。加入另一等份的硫酸鈉溶液(5.5-6ml)直至溶液變渾濁，表明形成明膠聚集體。然後加入約1ml蒸餾水直至溶液變清。加入戊二醛的水溶液(25％，0.4ml)，使明膠交聯。5分鐘後加入偏亞硫酸鈉溶液(12％，5mi)以終止交聯反應。1小時後，在Sephadex G-50 colμmn柱上純化粗產物。在冷凍乾燥器中凍幹含納米顆粒的級分48小時以上。
塗布聚賴氨酸和負載帕利他西的明膠納米顆粒的製備。使用與未塗布的納米顆粒相似的方法製備納米顆粒。在形成納米顆粒後的交聯反應的後期，加入重量相當於約5％-約10％的明膠重量的聚賴氨酸，得到塗布聚賴氨酸的納米顆粒。純化步驟與上述用於未塗布納米顆粒的步驟相同。
明膠納米顆粒中的帕利他西載荷的測定。將2mg負載帕利他西的納米顆粒分散在0.5ml磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中，使用0.5ml鏈黴蛋白酶(1mg/ml，在PBS中)在代謝振動器中於37℃消化。約1小時後或當獲得透明溶液時，加入內標物三尖杉寧鹼(50μl 20μg/ml甲醇)，然後用兩份每份3ml的乙酸乙酯萃取。傾出乙酸乙酯層，在空氣流下乾燥，重新溶解在乙腈中。比較萃取液中的帕利他西濃度和參照樣品中的帕利他西濃度，以確定帕利他西載荷。按照上述用於納米顆粒的方法處理由空白明膠納米顆粒和已知量的帕利他西構成的參照樣品。
表3示出帕利他西納米顆粒的不同製劑的物理性能。納米顆粒的產率為40-82％，且隨明膠分子量的降低而下降。實際藥物載荷是理論載荷的33-78％。
表3負載帕利他西的明膠納米顆粒的負載效率
Bloom數越大表明分子量越高(3種製劑的平均標準偏差)

*產率是在製備和凝膠過濾後冷凍乾燥的明膠納米顆粒的重量，用與明膠初始重量的百分比表示。
使用高分子量明膠製備的納米顆粒形成大聚集體；聚集體的直徑為10μm至＞30μm。在柱色譜純化步驟中除去這些聚集體導致低產率和低的藥物包埋效率(entrapment efficiency)。在使用低分子量明膠製備的納米顆粒中也觀察到低的包埋效率。使用中等分子量明膠(175bloom)獲得最佳和最高產率以及包埋效率。隨後的研究使用175bloom的明膠製備負載帕利他西的納米顆粒。
負載帕利他西的納米顆粒的表徵。將明膠納米顆粒和蒸餾水(～50μl)的混合物放置在箔紙上，乾燥，塗布金並在Philips XL 30掃描電鏡(SEM)上觀察。為研究顆粒尺寸分布，使用從4-6個區域取出的SEM圖像研究1000個以上的納米顆粒。由冷凍乾燥的明膠納米顆粒的重量計算產率，並用與明膠的初始重量的百分比表示。SEM結果表明，納米顆粒是球形的，平均尺寸為600-1,000nm。
使用Scintag PAD-V衍射儀獲得純帕利他西、帕利他西(2％，重量％)與空白明膠納米顆粒的混合物以及負載帕利他西的納米顆粒(1.62％載荷)的廣角X射線衍射(WAXD)光譜。以1°/min的掃描速率在5°-60°掃描樣品。WAXD結果示出自由帕利他西、帕利他西和空白明膠納米顆粒的混合物的X射線衍射光譜中出現銳峰，但是負載帕利他西的明膠納米顆粒不出現。這表明，包埋在納米顆粒中的帕利他西以無定型狀態而不是結晶狀態存在。由於其快速的溶解速率，無定型狀態是需要的。
從明膠納米顆粒釋放帕利他西。將帕利他西納米顆粒(12mg)分散在100ml PBS中並在37℃下培養。取出一系列樣品(1ml)，使用Beckman L-70超離心機以40,000rpm離心15分鐘。取出400μl不含納米顆粒的上清液，並用3ml乙酸乙酯萃取兩次。通過高效液相色譜法分析乙酸乙酯萃取液的帕利他西濃度。
吸附研究結果表明，約4.5％的負載在納米顆粒上的帕利他西總量吸附在納米顆粒上。從納米顆粒上釋放帕利他西進入PBS是迅速的，在37℃下，在15分鐘、2小時和3小時後分別釋放55％、87％和92％。
負載帕利他西的納米顆粒的生物活性。從American Type CultureCollection(Rockville，MD)中獲得人RT4膀胱移行膀胱癌細胞，並在McCoy′s基質中在37℃和在空氣中含5％的CO2的潮溼氣氛中培養，所述基質中補充有9％胎牛血清、2mM L-谷醯胺、90μg/ml慶大黴素(gentamicin)和90μg/ml頭孢噻肟鈉。使用胰島素從分匯合培養基獲得細胞並再次懸浮在新鮮基質中。使用通過錐蟲藍排除法(trypan blue exclusion)測定的具有大於90％存活率的細胞。在96孔(well)的微孔滴定板(～2,000細胞/孔)上種植細胞，使其粘附在板表面24小時。申請人已經指出，帕利他西產生即時和延遲的細胞毒性(Au，et a/.，Cancer Res.，582141-2148，1998)。為進行即時作用評估，用0.2ml培養基培養細胞48和96小時，所述培養基含有具有相等的帕利他西劑量的帕利他西(稱作自由帕利他西)或負載帕利他西的顆粒的水溶液的等分試樣。治療後立即測量藥物效應。為進行延遲作用評估，相似地處理細胞15分鐘和2小時，用PBS洗滌一次，然後用不含藥物的基質培養總計96小時，此時測量藥物效應。
對於自由藥物，通過首先在乙醇中溶解帕利他西，然後使用培養基連續稀釋來製備帕利他西的儲備溶液。最終乙醇濃度小於0.1％。
使用磺基若丹明B分析測量治療後剩餘的細胞數目(Au，et al.，CancerChemother.Pharmacol.，4169-74，1997)。使用非線性回歸，分析S型濃度響應曲線獲得產生50％的抑制率的藥物濃度(IC50)。
對即時作用，使用自由帕利他西或納米顆粒包埋的帕利他西導致在48小時60％的最大抑制率和在96小時84％的最大抑制率。最大帕利他西細胞毒性隨治療時間的增加與申請人以前的觀察結果是一致的(Au，et al.，CancerRes.，582141-2148，1998)。針對48和96小時的治療，自由帕利他西的IC50值分別為11.0±0.4和4.0±0.4nM，負載帕利他西的納米顆粒的IC50值為9.6±1.1和4.0±0.3nM帕利他西當量(平均值±兩種製劑的三次試驗的SD(標準偏差))。兩種製劑的IC50差值並不明顯(不成對的t-試驗，48小時p＝0.15，且96小時p＝0.71)。
對延遲作用(即，在96小時測量的作用)，使用自由帕利他西或納米顆粒包埋帕利他西治療15分鐘和2小時產生74％-85％的最大抑制率。對於15分鐘和2小時的治療，自由帕利他西的IC50分別值為156.7±6.6和33.0±4.8nM，負載帕利他西的納米顆粒的IC50值為165.7±33.5和31.4±1.8nM帕利他西當量(平均值±兩種製劑的三次試驗的SD)。兩種製劑的相應IC50值的差值也不明顯(不成對的t-試驗，15分鐘，p＝0.70，2小時，p＝0.64)。該數據表明從納米顆粒快速釋放帕利他西且負載帕利他西的納米顆粒與溶解在乙醇和水中的自由帕利他西(不存在克列莫佛)是同等有效的。
實施例8在膀胱內滴注負載帕利他西的明膠納米顆粒後遞送高濃度的帕利他西至膀胱壁該實施例表明，當滴注到膀胱腔內時，負載帕利他西的明膠納米顆粒遞送高濃度的帕利他西至膀胱壁。
如同其它部分所述，在滴注負載帕利他西的明膠納米顆粒後，確定帕利他西向膀胱壁的遞送(Wientjes，et al.，Cancer Res.，514347-4354，1991；Song，D.，et al.，Cancer Chemother.Pharmacol.，40285-292，1997)。簡言之，在2小時內將負載帕利他西的明膠納米顆粒的溶液(在總重250mg中含有1mg帕利他西)滴注在被麻醉的狗的膀胱。之後，取出膀胱，快速冷凍，使用低溫切片機平行於膀胱上皮表面將其切成40μm的切片。稱重後，如上所述，使用高效液相色譜法分析冷凍組織樣品的帕利他西濃度(Song and Au，J.Chromatogr.，663337-344，1995)。結果表明膀胱壁中的帕利他西濃度從膀胱上皮(即，膀胱的內表面)的約50μg/g(約等於60μm)降低至在距離膀胱上皮500μm深處為約1μg/g，且在大於500μm的組織深度處保持約0.5μg/g相對恆定。膀胱上皮的濃度超過尿液中的游離濃度約20倍，表明帕利他西進入膀胱壁的效果良好。這些組織濃度還超過在人膀胱RT4癌細胞中產生細胞毒性的帕利他西濃度(即，對於2小時處理，～33nM，見實施例1)。
通過在2小時的治療結束後和在計量溶液排出後24小時(即，從計量給藥24小時)分析膀胱組織濃度，研究在其它狗中，在給藥明膠納米顆粒後的帕利他西組織保留性。膀胱上皮中的帕利他西濃度為0.14μg/g(約165nM)，在500μm深度處緩慢下降至0.01μg/g。該數據表明在膀胱組織中帕利他西的顯著保留性；藥物消失的半存留期估計為～150分鐘，該時間比絲裂黴素C在人膀胱組織中的小於5分鐘的半存留期大30倍(Wientjes，et al.，CancerRes.，533314-3320，1993)。
實施例9負載帕利他西的明膠納米顆粒在來自狗患者的膀胱腫瘤的組織培養基(histocultures)中的功效通過經尿道切除從被診斷患有膀胱癌的三隻狗患者的膀胱中獲得膀胱腫瘤。將腫瘤切成1mm的片，在作為組織培養基的膠原凝膠上培養(Au，etal.，Cancer Chemother.Pharmacol.，4169-74，1997)，用負載帕利他西的納米顆粒治療2小時。用帕利他西當量表示的、對於溴脫氧尿苷(bromodeoxyuridine)標記的抑制率-IC50值，在來自其中一隻狗的腫瘤中是2.2μm，在來自另兩隻狗的腫瘤中是＞10μm。
三向比較IC50、膀胱組織中的藥物濃度(見實施例8)以及對這三隻狗的臨床結果(見實施例10)表明，具有最敏感的腫瘤(即，最低IC50值)且因此將接受足夠的藥物以產生治療益處的狗有利地響應使用負載帕利他西的納米顆粒的治療，其中腫瘤尺寸減小50％以上。相反，另兩隻狗中的IC50超過可獲得的膀胱組織濃度，這些動物中的腫瘤表現出發展的疾病(即，尺寸增大50％以上(Helfand，et al.，J.Am.Anim.Hosp.Assoc.，30270-275，1994)。
該實施例顯示膀胱腫瘤對配製在明膠納米顆粒中的帕利他西的敏感性以及生物體外和生物體內結果的相關性。值得注意，人淺表性膀胱腫瘤中的帕利他西的IC50值低於狗中的相應值，且作為直接膀胱內滴注的參加者的人患者中的膀胱腫瘤是淺表的，沒有進入膀胱壁的黏膜層。對於從人患者得到的T0和T1膀胱腫瘤階段，申請人以前獲得的人膀胱腫瘤的IC50值是1.2μm(calculated from dara in Au，et al.，Cancer Chemother.Pharmacol.，4169-74，1997)。這表明人患者的臨床結果好於狗。
實施例10負載帕利他西的明膠納米顆粒在患有膀胱癌的狗患者中的功效具有膀胱的移行細胞癌(TCC)和沒有轉移酶證據的狗是合格的。在常用的麻醉條件下，存在於20ml鹽水中的1mg負載帕利他西的明膠納米顆粒懸浮液經由Foley導管靜脈給藥，每周一次，持續三周。劑量是250mg明膠中1mg帕利他西。所有患者都接受預防性抗生素和地拉考昔(deracoxib)。在2小時治療之前和期間收集血液和尿液樣品。通過柱交換HPLC分析尿液和組織的帕利他西濃度。使用腹部超音波掃描監控腫瘤響應。
治療六隻狗；四名患者以前沒有接受過治療。在所有時間點，血漿濃度都低於HPLC檢測極限。平均初始和最終尿液濃度分別是27.51±8.59g/ml(n＝16)和11.16±8.63g/ml(n＝15)。游離帕利他西的濃度恆定地保持在0.8-1μg/ml，該值約是帕利他西在體溫下的最大水溶性。整體響應是2個部分響應，2名患者患有穩定的疾病(即，沒有部分響應和發展的疾病)，2名患者患有發展的疾病；實施例9中描述了臨床響應或效果的定義。沒有有關系統藥物吸收或毒性的證據。患者的目標響應速率為2/6(33％)，高於在用於使用其它化學治療劑進行靜脈治療的文獻中報導的響應速率(12.5％)(0-20％的範圍，平均12.5％；Mutsaers，et al.，J.Vet.Intern.Med.，17136-144，2003)。
實施例11靜脈給藥後明膠納米顆粒的腎臟靶向通過對比負載帕利他西的明膠納米顆粒的分布與可購得的Taxol製劑的分布，研究明膠納米顆粒的腎臟靶向優勢。製備明膠納米顆粒並在1分鐘內經由尾部小靜脈靜脈給藥至小鼠。帕利他西劑量是10mg/kg。24小時後對動物實施無痛致死。取出器官，均質化，萃取，並使用高效液相色譜法分析帕利他西濃度。如實施例7中所述實施這些步驟。納米顆粒(664nm的直徑，4％的載荷)快速釋放帕利他西(於37℃下24小時內釋放70％)。血液中的帕利他西(自由和游離)總濃度下降，主要半存留期為14小時。帕利他西分布和保留在器官中，以最高水平保留在肝臟、小腸和腎臟中(表4)。組織-血液濃度比的順序為肝臟＞小腸＞腎臟＞＞大腸＞脾臟＝胃＞肺＞心臟。這與Taxol的分布不同，Taxol的分布具有以下順序的組織分布肝臟＞小腸＞大腸＞胃＞肺≥腎臟＞脾臟＞心臟。計算選擇保留性，作為給藥納米顆粒後組織濃度的比或者作為校正血漿濃度後的Taxol(表4)。在腎臟中的選擇保留性是7.86倍，是所有器官中最高的。在給藥納米顆粒後腎臟中的帕利他西濃度的最終半存留期為13.7小時，與給藥Taxol後的1.94小時相比。該數據表明，明膠納米顆粒優先保留在腎臟內。
表4由明膠納米顆粒製劑和克列莫佛/乙醇(即，Taxol)製劑遞送的帕利他西的血液和組織藥物動力學。給予小鼠靜脈劑量(10mg/kg帕利他西當量)的負載帕利他西的納米顆粒或溶解在克列莫佛和乙醇中的帕利他西。研究從給藥後5分鐘-24小時的9個時間點。每個時間點使用三隻動物。在0-24小時計算濃度-時間曲線下的面積(AUC)。C組織∶C血液的比率是所有9個時間點的平均值。

等同方案本領域的普通技術人員應當認識到可以不僅僅使用常規試驗手段和與這裡具體描述的本發明的許多等同方案。權利要求書試圖涵蓋這些等同方案。
權利要求
1.一種用於將腫瘤治療劑遞送至患者的組合物，包括(a)腫瘤細胞調亡誘導劑的快釋製劑；(b)腫瘤治療劑的緩釋製劑；以及(c)可藥用載體。
2.權利要求1的組合物，其中所述細胞調亡誘導劑包括帕利他西。
3.權利要求1的組合物，其中所述快釋製劑在約1小時或更短期間內釋放至少約50nM的帕利他西。
4.權利要求1的組合物，其中提供所述細胞調亡誘導劑，其量足以將腫瘤的上皮細胞密度降低約20％或更高。
5.權利要求1的組合物，其中提供所述細胞調亡誘導劑，其量足以在給藥後的約16-24小時內將腫瘤的上皮細胞密度降低約20％或更高。
6.權利要求1的組合物，其中提供所述細胞調亡誘導劑，其量足以誘導腫瘤的上皮細胞中約10％或更多調亡。
7.權利要求1的組合物，其中提供所述細胞調亡誘導劑，其量足以在給藥後的約16-24小時內誘導腫瘤的上皮細胞中約10％或更多調亡。
8.權利要求1的組合物，其中所述治療劑是一種或多種帕利他西或阿黴素。
9.權利要求1的組合物，其中所述治療劑是化學治療劑、抗生素或基因轉移構成成分中的一種或多種。
10.權利要求1的組合物，其適用於靜脈注射、局部給藥或部位給藥中的一種或多種。
11.一種用於治療腫瘤的試劑盒，包括(a)在可藥用載體中的細胞調亡誘導劑；(b)在可藥用載體中的腫瘤治療劑；以及(c)使用所述細胞調亡誘導劑和所述治療劑治療腫瘤的說明。
12.權利要求11的試劑盒，其中所述腫瘤治療劑包括(a)腫瘤細胞調亡誘導劑的快釋製劑；(b)腫瘤治療劑的緩釋製劑；以及(c)可藥用載體。
13.權利要求11的試劑盒，其中單一的一種或多種納米顆粒或微粒製劑包括所述快釋製劑(a)和緩釋製劑(b)兩者。
14.權利要求1的試劑盒，其中所述治療劑是一種或多種帕利他西或阿黴素。
15.一種治療患者的腫瘤以改善化學治療劑進入所述腫瘤的方法，包括以下步驟(a)給藥細胞調亡誘導劑至腫瘤；(b)允許經過足夠時間，以在腫瘤中發生細胞調亡；以及(c)在發生顯著的細胞調亡時給藥腫瘤治療劑至腫瘤，以獲得治療劑至腫瘤的改善進入。
16.權利要求15的方法，其中使用快釋製劑用於細胞調亡誘導劑，使用緩釋製劑用於治療劑，伴隨遞送細胞調亡誘導劑和治療劑。
17.權利要求15的方法，其中所述治療劑經由腹腔內遞送，且所述腫瘤是在腹腔內的一種或多種組織中生長或在連接腹腔的組織中生長的腫瘤。
18.權利要求14的方法，其中細胞調亡誘導劑經由靜脈遞送，治療劑經由腹腔內遞送，且所述腫瘤是在腹腔內的一種或多種組織中生長或在連接腹腔的組織中生長的腫瘤。
19.權利要求16的方法，其中治療劑經由腹腔內遞送，且所述腫瘤是在腹腔內的一種或多種組織中生長或在連接腹腔的組織中生長的腫瘤。
20.權利要求17的方法，其中腫瘤是腹水腫瘤。
21.權利要求19的方法，其中腫瘤是腹水腫瘤。
22.權利要求17的方法，其中腫瘤是來自主要器官的轉移性腫瘤，其在腹腔內的一種或多種組織中生長或在與腫瘤伸入其中的腹腔相鄰的組織中生長。
23.權利要求19的方法，其中腫瘤是來自主要器官的轉移性腫瘤，其在腹腔內的一種或多種組織中生長或在與腫瘤伸入其中的腹腔相鄰的組織中生長。
24.權利要求16的方法，其中所述快釋製劑在一天內釋放大於約50％的細胞調亡誘導劑的藥物成分。
25.權利要求16的方法，其中待治療的患者是患有已經散布到腹腔中的胰腺癌的患者。
26.權利要求25的方法，其中通過經由導管輸注遞送懸浮物形式的攜帶所述腫瘤治療劑的微粒，所述導管的遞送出口位於胰腺附近。
27.一種將一種或多種細胞調亡誘導劑或腫瘤治療劑遞送至具有腫瘤的患者的組合物，包括選擇性地粘附至腫瘤的一種或多種納米顆粒或微粒，其用於將治療劑遞送至腫瘤附近；從而，與在所述的沒有選擇性地粘附至腫瘤的一種或多種納米顆粒或微粒中的遞送相比，實現所述治療劑在腫瘤中的更高水平的聚集。
28.一種將腫瘤治療劑遞送至具有腫瘤的患者的組合物，其包括誘導至少部分腫瘤細胞調亡的一種或多種納米顆粒或微粒，用於進入腫瘤和釋放腫瘤治療劑。
29.權利要求28的組合物，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒粘附至所述腫瘤。
30.權利要求28的組合物，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒包含細胞調亡誘導劑和所述腫瘤治療劑。
31.權利要求29的組合物，其中組織粘附性已經通過使用生物粘附塗層塗布一種或多種納米顆粒或微粒而增大。
32.權利要求31的組合物，其中所述生物粘附塗層是下述一種或多種聚賴氨酸、纖維蛋白原、部分酯化的聚丙烯酸聚合物、多糖、果膠，或硫酸化蔗糖和氫氧化鋁的混合物。
33.一種治療患者的腫瘤的方法，包括向所述患者給藥權利要求21、28、29、30、31或32中的一種或多種。
34.一種含帕利他西的微球的組合物，包括以下一種或多種(1)直徑為約3-5μm的粘附腫瘤的微球，其提供細胞調亡誘導劑的速釋；(2)直徑為約3-5μm的粘附腫瘤的微球，其提供治療劑的緩釋；(3)直徑為約30-50μm的微球，其提供治療劑的緩釋。
35.一種實現改善遞送腫瘤治療劑至已經散布在腹腔中的腫瘤的方法，包括以下步驟給藥含在一種或多種納米顆粒或微粒中的所述治療劑至腹腔，其中一種或多種納米顆粒或微粒在最經常出現轉移性腫瘤的腹腔區域聚集。
36.一種實現改善含腫瘤治療劑的微粒在腹腔內空腔中的保留性的方法，包括以下步驟在一種或多種以下物質中配製腫瘤治療劑(a)適於形成直徑大於約10μm的聚集體的微粒，其中在遞送所述微粒進入腹腔時形成聚集體；或者(b)直徑大於約10μm的微粒，其中一種或多種聚集體或微粒經由淋巴系統的清除被延遲。
37.權利要求36的方法，其中所述微粒包括PLGA微粒。
38.一種含有腫瘤治療劑的微粒的組合物，包括(a)適於形成直徑大於約10μm的聚集體的微粒，其中在遞送所述微粒進入腹腔時形成聚集體；或者(b)直徑大於約10μm的微粒，其中一種或多種聚集體或微粒經由淋巴系統的清除被延遲。
39.權利要求38的組合物，其中含有腫瘤治療劑的微粒包括由約50％丙交酯和約50％乙交酯構成的PLGA，且尺寸為約3-5μm。
40.一種組合物，包括含有腫瘤治療劑的一種或多種納米顆粒或微粒，所述一種或多種納米顆粒或微粒具有以下組合性能(1)提供藥物的速釋，然後是藥物的緩釋；(2)選擇性地粘附至腫瘤組織；以及(3)集中在腹腔。
41.一種將帕利他西遞送至患有淺表性膀胱癌的患者的膀胱壁的方法，包括以下步驟(a)在不含克列莫佛的製劑中配製所述帕利他西；以及(b)靜脈滴注所述不含克列莫佛的帕利他西，其中所述帕利他西由於不含克列莫佛，更容易進入膀胱壁。
42.一種適於靜脈滴注至患有淺表性膀胱癌的患者的膀胱壁中的帕利他西組合物，包括在不含克列莫佛的製劑中的滴注液劑量的帕利他西。
43.權利要求42的組合物，其中所述帕利他西製劑包含在交聯的明膠納米顆粒中。
44.一種治療膀胱疾病的組合物，包括包含在交聯的明膠納米顆粒中的有效量的帕利他西，該納米顆粒上塗布由生物粘附塗層。
45.權利要求44的組合物，其中所述生物粘附塗層是下述一種或多種聚賴氨酸、纖維蛋白原、部分酯化的聚丙烯酸聚合物、多糖、果膠或硫酸化蔗糖和氫氧化鋁的混合物。
46.一種將治療劑遞送至具有膀胱疾病和限定尿液容量的膀胱中的方法，包括以下步驟(1)將一定劑量的治療劑配製在明膠納米顆粒中，以使治療劑的劑量超過治療劑在所述限定尿液體積中的溶解度；以及(2)滴注治療劑劑量至膀胱，以便在不依賴於患者產生的尿液體積的情況下，在膀胱內達到治療劑的飽和濃度並保持。
47.權利要求46的方法，其中所述治療劑難溶於尿液。
48.一種用於治療具有限定尿液容量的膀胱中的膀胱疾病的組合物，包括含有難溶於尿液的治療劑的明膠納米顆粒，治療劑的劑量超過治療劑在所述限定體積中的溶解度。
49.權利要求48的組合物，其中所述膀胱疾病是以下一種或多種膀胱癌、間質性膀胱炎、尿失禁或尿路感染。
50.權利要求48的組合物，其可直接注射到膀胱中。
51.權利要求48的組合物，其中所述治療劑包含帕利他西。
52.權利要求51的組合物，其中所述帕利他西與共溶劑組合。
53.權利要求52的組合物，其中所述共溶劑是二甲基亞碸或聚乙二醇中的一種或多種。
54.一種增大帕利他西在患者的膀胱中的溶解度的方法，包括對所述患者施加過熱。
55.一種用於治療在腹腔、膀胱組織、腦組織、前列腺組織或肺組織中的或與其相鄰的一種或多種組織中的腫瘤的方法，包括給藥一種或多種負載有腫瘤藥物的納米顆粒或微粒，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒由一種或多種明膠或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)形成。
56.權利要求55的方法，其中所述腫瘤藥物包括帕利他西。
57.權利要求55的方法，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒上塗布有生物粘附劑。
58.權利要求55的方法，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒包括快釋腫瘤藥物製劑和緩釋腫瘤藥物製劑。
59.權利要求55的方法，其中PLGA微粒的所述緩釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有30-50μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在第一天內表現出約20％的初始突然藥物釋放速率，然後緩釋，在約7周內產生約70％的總累積釋放。
60.權利要求55的方法，其中PLGA微粒的所述緩釋製劑包含75∶25LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和高於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在第一天內表現出約5％的初始突然藥物釋放速率，然後緩釋，在約7周內產生約30％的總累積釋放。
61.權利要求55的方法，其中PLGA微粒的所述快釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在約一天內表現出約70％的藥物釋放速率。
62.權利要求59的方法，其中PLGA微粒的所述快釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在約一天內表現出約70％的藥物釋放速率。
63.權利要求60的方法，其中PLGA微粒的所述快釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在約一天內表現出約70％的藥物釋放速率。
64.一種用於治療在腹腔、膀胱組織、腦組織、前列腺組織或肺組織中的或與其相鄰的一種或多種組織中的腫瘤的組合物，包括一種或多種負載有腫瘤藥物的納米顆粒或微粒，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒由一種或多種明膠或聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)形成。
65.權利要求4的組合物，其中所述腫瘤藥物包括帕利他西。
66.權利要求64的組合物，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒塗布有生物粘附劑。
67.權利要求64的組合物，其中所述一種或多種納米顆粒或微粒包括快釋腫瘤藥物製劑和緩釋腫瘤藥物製劑。
68.權利要求67的組合物，其中PLGA微粒的所述緩釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有30-50μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在第一天內表現出約20％的初始突然藥物釋放速率，然後緩釋，在約7周內產生約70％的總累積釋放。
69.權利要求67的組合物，其中PLGA微粒的所述緩釋製劑包含75∶25LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和高於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在第一天內表現出約5％的初始突然藥物釋放速率，然後緩釋，在約7周內產生約30％的總累積釋放。
70.權利要求67的組合物，其中PLGA微粒的所述快釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在約一天內表現出約70％的藥物釋放速率。
71.權利要求68的組合物，其中PLGA微粒的所述快釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在約一天內表現出約70％的藥物釋放速率。
72.權利要求69的組合物，其中PLGA微粒的所述快釋製劑包括約50∶50LA∶GA，具有3-5μm的平均直徑和低於體溫的玻璃化轉變溫度，含有約4％的帕利他西，在約一天內表現出約70％的藥物釋放速率。
73.權利要求67、68、69、70、71和72中任一項的組合物，其額外包括釋放增強劑，所述釋放增強劑是以下一種或多種Tween 20、Tween 80、肉豆蔻酸異丙酯、β-乳糖或苯二甲酸二乙酯。
74.一種改善遞送治療劑至腎臟的方法，包括以下步驟(a)在明膠納米顆粒中配製治療劑；以及(b)通過靜脈路徑給藥明膠納米顆粒，其中，與遞送沒有配製在明膠納米顆粒中的試劑相比，所述治療劑以更高的量遞送至腎臟。
75.權利要求74的組合物，其中明膠納米顆粒的尺寸為約600-1000nm。
76.權利要求74的組合物，其中治療劑包括帕利他西，明膠納米顆粒是由Bloom數為約175的明膠製備的，具有約600nm-約1000nm的平均直徑和約0.14％-2.0％的藥物載荷。
全文摘要
一種用於將腫瘤治療劑遞送至患者的組合物，其包括腫瘤細胞凋亡誘導劑的快釋製劑、腫瘤治療劑的緩釋製劑以及可藥用載體。可藥用載體中的細胞凋亡誘導劑可以先行給藥或伴隨給藥。也可以使用治療劑(例如，帕利他西)的納米顆粒或微粒(例如，交聯明膠)。所述納米顆粒或微粒可以塗布有生物粘附劑塗層。還可以使用如下的微粒，其能夠聚集以阻塞膀胱淋巴管的入口，從而延遲清除淋巴系統中的微粒。
文檔編號A61K9/00GK1816331SQ200480015684
公開日2006年8月9日 申請日期2004年4月2日 優先權日2003年4月3日
發明者傑西·L·-S·奧, M·吉爾勞姆·溫特傑斯 申請人:傑西·L·-S·奧, M·吉爾勞姆·溫特傑斯