一種複方丹參片的質量控制方法及應用的製作方法
2023-09-17 16:26:55 1
專利名稱：一種複方丹參片的質量控制方法及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物分析技術中質量控制方法領域，尤其涉及一種複方丹參片的質量 控制方法及應用。
背景技術：
心腦血管疾病是嚴重危害人類的常見疾病。近年來，由於社會的發展，工作、生活、 及環境的變化，心腦血管疾病呈上升趨勢。複方丹參製劑多用來治療心腦血管疾病，例如復 方丹參片、複方丹參滴丸、冠心丹參滴丸等。這些複方丹參製劑(均含有丹參、三七)因其配 方不同，或者配方比例不同，或者提取精製方法不同，或者劑型不同，治療效果也有所差異。以「君、臣、佐、使」相互制約和協調的複方製劑，強調從整體上發揮作用，多半不是 針對某個靶點，也不是若干成分的簡單加合，僅靠單一成分的檢測降低了鑑別的準確和專 屬性，不能代表中藥製劑的整體功效，不能反映其內在質量，及不能解決偽品摻雜等問題。 中藥指紋圖譜是一種綜合的、可量化的化學鑑定手段，可以鑑別真偽，評價原料藥材、半成 品和成品質量的均一性和穩定性，體現了中藥作用的整體性和模糊性。近年來，國外對草藥 產品的質量評價大力提倡色譜指紋圖譜。通過圖譜主要特徵峰的峰位，面積或比例，反映出 化學成分的種類及數量的特徵性，有效地判別真偽，評價優劣。色譜指紋圖譜分析成為鑑別 中藥真實性及評價質量一致性和產品穩定性的可行的模式。複方丹參片是由丹參、三七為主要原料製成的複方製劑，臨床上用於治療心腦血 管疾病、冠心病、心絞痛、心肌缺血等各類疾病，其治療效果已經得到臨床的驗證。但目前復 方丹參片的質量標準僅選取丹參的一、二個活性成分或指標成分進行含量測定，並以其含 量多少來判定質量，具有一定的片面性，不完善，缺乏全面有效的質量控制方法。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是彌補已有技術的不足，目的在於提供一種有效可靠 的複方丹參片的質量控制方法。本發明的另一目的是提供上述控制方法的應用。為解決以上技術問題，本發明的技術方案是，一種複方丹參片的質量控制方法，包 括如下步驟(1)製備含丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、隱丹 參酮、丹參酮I、丹參酮II A的混合對照品溶液；(2)製備複方丹參片含水醇溶液作為供試品溶液；(3)採用高效液相色譜法分析上述對照品溶液，色譜條件色譜柱為十八烷基矽 烷鍵合矽膠為填料，採用梯度洗脫，流動相A為乙腈酸水溶液，流動相B為乙腈；(4)測定吸取供試品溶液注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到複方 丹參片高效液相色譜指紋圖譜；(5)比較並根據對照品溶液的色譜圖和供試品溶液的指紋圖譜監控複方丹參片的質量。
優選地，步驟(3)中所述高效液相色譜法的梯度洗脫程序如下Omin時，流動相A 流動相B ==1000 ；
40min時，流動相A流動相B=7030
60min時，流動相A流動相B=4060
85min時，流動相A流動相B=1585其中，上述比例為體積比。優選地，步驟(3)中所述高效液相色譜法的流速1. OOOml/min。優選地，步驟(3)中所述高效液相色譜法的進樣體積10μ 1 20μ 1。優選地，步驟(3)中所述高效液相色譜法的檢測波長為274nm 286nm。優選地，步驟(3)中所述流動相A為10%乙腈0. 4%甲酸水溶液。優選地，步驟(3)中所述高效液相色譜法的柱溫20°C 30°C。優選地，步驟(2)中所述製備複方丹參片供試品溶液的製備方法如下取複方丹 參片，除去包衣，用含水甲醇或含水乙醇提取，濾過，製成供試品溶液。優選地，步驟(3)和步驟(4)中所述指紋圖譜有25個特徵峰，各特徵峰的保留 時間分另1J 為 6min、12min、21min、24min、25min、27min、29min、30min、31min、33min、35min、 48min、53min、56min、60min、62min、63min、66min、68min、71min、75min、76min、77min、 85min、88min，其中保留時間為 6min、24min、25min、27min、30min、60min、66min、68min、 75min的9個色譜峰依次與對照品溶液的色譜圖中丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、 丹酚酸A、二氫丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A相同。另外，本發明還提供一種複方丹參片的質量控制方法的應用，是應用於鑑別複方 丹參片。與現有技術相比，本發明具有以下有益效果以複方丹參片中的主要有效成分丹 參化學組分為指標建立起來的HPLC指紋圖譜，代表著複方丹參片大部分藥理活性，能有效 地表徵複方丹參片的質量。從而實現對複方丹參片最大可能的化學成分進行檢測，有利於 對產品質量的全面控制。以複方丹參片中丹參各有效成分指紋圖形作為一個整體看待，注 重各個構成指紋特徵峰前後順序和相互關係，避免只測定一、二個化學成分兒判定複方丹 參片整體質量的片面性。本發明的方法建立了複方丹參片的指紋圖譜技術標準，通過指紋 圖譜中共有峰的有無及特徵，有效地全面監控半成品和成品的質量，監控生產工藝的穩定 性，保證其質量的穩定、均一、可控。本發明還具有方法先進、穩定性和重現性好、可操作性 等優點。本發明採用高效液相色譜法構建了複方丹參片的指紋圖譜，利用高效液相色譜指 紋特徵可全面監控複方丹參片的質量，且通過建立的標準指紋圖譜可以監控半成品與成品 生產工藝過程的穩定性。本發明提高了複方丹參片成品、半成品的質量監控標準，有效的避 免了產品偽造，保證該品種的正常生產、流通秩序。
圖1是本發明的複方丹參片標準指紋圖譜，圖中從左到右的箭頭所指分別是特徵 峰1至25 ；圖2是混合對照品與複方丹參片指紋圖譜對應的色譜圖，圖中峰號1、2、3、4、5、6、7、8、9依次指示為丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、隱丹參 酮、丹參酮I、丹參酮II A。
具體實施例方式為了本領域的技術人員能夠更好地理解本發明所提供的技術方案，下面結合具體 實施例進行闡述。一種複方丹參片的質量控制方法，包括以下步驟(1)製備含丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、隱丹 參酮、丹參酮I、丹參酮II A的混合對照品溶液，各組分的濃度均為0. 4mg/ml ；(2)製備複方丹參片含水醇溶液作為供試品溶液；(3)採用高效液相色譜法分析上述對照品溶液和供試品溶液，色譜條件色譜柱 為十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料；採用梯度洗脫，流動相A為10%乙腈0.4%甲酸水溶液； 流動相B為乙腈；梯度洗脫程序如下，其中下述比例為體積比Omin時，流動相A 流動相B =1000 ；
40min時，流動相A流動相B=7030
60min時，流動相A流動相B=4060
85min時，流動相A流動相B=1585流速1. 000ml/min,進樣體積10 20 μ 1 ；檢測波長280nm ；柱溫25°C ；(4)測定精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到復 方丹參片高效液相色譜指紋圖譜；(5)比較並根據對照品溶液的色譜圖和供試品溶液的指紋圖譜監控複方丹參片的質量。上述質量控制方法步驟(2)中所述複方丹參片含水醇溶液的製備方法如下取復 方丹參片，除去包衣，用含水甲醇或含水乙醇提取，濾過，製成供試品溶液。更具體地，該步 驟為取本品，糖衣片除去糖衣，薄膜衣片除去薄膜衣，研細，取約0.5 2g，精密稱定，置具 塞錐形瓶中，精密加入含水甲醇或含水乙醇10 40ml，密塞，稱定重量，超聲處理5 30 分鐘，放冷，再稱定重量，用含水甲醇或含水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，用 0. 45 μ m微孔濾膜濾過，作為成品供試品溶液。所述梯度洗脫的步驟也可用表1表示表1梯度洗脫表 按照本發明的方法，通過對多批次複方丹參片構建的高效液相色譜指紋圖譜並進 行分析比較，找出其共有特徵峰，標出各共有特徵峰的保留時間Rt，得到複方丹參片標準 指紋圖譜。其共有峰為25個，其保留時間Rt值分別為6min、12min、21min、24min、25min、 27min、29min、30min、31min、33min、35min、48min、53min、56min、60min、62min、63min、 66min、68min、71min、75min、76min、77min、85min、88min,其中 Rt 值為 6min、24min、25min、 27min、30min、60min、66min、68min、75min的9個色譜峰經確證為丹參素鈉、迷迭香酸、紫草 酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A0以上色譜峰構成了 複方丹參片的指紋特徵。1儀器與試藥1. 1 儀器DI0NEX SUMMIT P680 高效液相色譜儀(ASI-100TM 自動進樣器、PDA-100 二極體陣列檢測器、變色龍色譜工作站)；色譜柱=Dikma PLATISIL ODS(250mmX4. 6mm, 5 μ m) ο1.2試藥10批成品及對應的半成品，均由廣州白雲山和記黃埔中藥有限公司提 供。實驗中液相色譜所用試劑乙腈均為色譜純，其餘所用試劑均為分析純，水為超純水。2.方法與結果2. 1成品供試品溶液的製備分別取本品10片，研細，取約1. 0g，精密稱定，置具塞 錐形瓶中，精密加入70%甲醇(或70%乙醇)20ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率360W， 頻率35kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇(或70%乙醇)補足減失的重量，搖勻， 濾過，取續濾液，用0. 45 μ m微孔濾膜濾過，作為成品供試品溶液。半成品供試品溶液的製備取本品流膏約0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密 加入70%甲醇(或70%乙醇)50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率360W，頻率35kHz) 30 分鐘，放冷，再稱定重量，用70%甲醇(或70%乙醇)補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾 液，用0. 45 μ m微孔濾膜濾過，作為半成品供試品溶液。混合對照品溶液的製備分別稱取丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸 A、二氫丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A對照品約4mg，精密稱定，用甲醇定容於 IOml量瓶中，製成每Iml含丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、 隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A各0. 4mg的混合對照品溶液。2. 2高效液相色譜分析精密吸取成品及半成品供試品溶液10 μ 1，進樣；色譜條 件色譜柱為Dikma PLATISIL ODS C18，25(kimX4. 6謹，5 μ m ；流動相為流動相A為10%乙 腈0. 4%甲酸水溶液；流動相B為乙腈，採用表2的梯度洗脫方式表2梯度洗脫表 流速1. 000ml/min,進樣體積10 μ 1 ；檢測波長280nm ；柱溫25°C ；得到複方丹參片 高效液相色譜指紋圖譜。2. 3共有峰確定將上述得到的多批次複方丹參片的高效液相色譜指紋圖譜經 《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A版》進行比較，共有模式(參照指紋圖譜)共出 現 25 個。其保留時間 Rt 值分別為 6min、12min、21min、24min、25min、27min、29min、30min、 31min、33min、35min、48min、53min、56min、60min、62min、63min、66min、68min、71min、 75min、76min、77min、85min、88min ；25 個共有特徵峰中，其中 Rt 值為 6min、24min、25min、 27min、30min、60min、66min、68min、75min的9個色譜峰經確證為丹參素鈉、迷迭香酸、紫草 酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、隱丹參酮、丹參酮I、丹參酮II A ；它們構成了複方丹 參片的指紋特徵，可作為複方丹參片的標準指紋圖譜，具體見圖1。對比混合對照品色譜圖㈧及複方丹參片指紋圖譜(B)，確定了複方丹參片中的9 個成分，具體見圖2，圖中A為混合對照品，B為複方丹參片。2. 4精密度試驗取同一個複方丹參片供試品溶液連續進樣6次，檢測指紋圖譜， 採用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A版》進行評價，結果表明供試品溶液相似度 均大於0.996，儀器的精密度良好。精密度結果見表3:表3精密度結果 2. 5穩定性考察取同一個複方丹參片供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24、 48小時進樣，檢測指紋圖譜，採用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A版》進行評價， 結果表明供試品溶液相似度均等於1，供試品溶液在放置48小時內穩定。穩定性結果見表
4 表4穩定性結果
2. 6重複性試驗取同一批覆方丹參片供試品6份，按「成品及半成品供試品溶液 的製備」項下方法製備，分別進樣，檢測指紋圖譜，採用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統 2004A版》進行評價，結果表明供試品溶液相似度均大於0. 999，方法重複性好。結果見表 5 表5重複性結果 以上僅是本發明的優選實施方式，應當指出的是，上述優選實施方式不應視為對 本發明的限制，本發明的保護範圍應當以權利要求所限定的範圍為準。對於本技術領域的 普通技術人員來說，在不脫離本發明的精神和範圍內，還可以做出若干改進和潤飾，這些改 進和潤飾也應視為本發明的保護範圍。
權利要求
一種複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，包括如下步驟(1)製備含丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮Ⅰ、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ、丹參酮ⅡA的混合對照品溶液；(2)製備複方丹參片含水醇溶液作為供試品溶液；(3)採用高效液相色譜法分析上述對照品溶液，色譜條件色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料，採用梯度洗脫，流動相A為乙腈酸水溶液，流動相B為乙腈；(4)測定吸取供試品溶液注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到複方丹參片高效液相色譜指紋圖譜；(5)比較並根據對照品溶液的色譜圖和供試品溶液的指紋圖譜監控複方丹參片的質量。
2.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)中所述高效液相色譜法的梯度洗脫程序如下Omin時，流動相A 流動相B ==100 0 ；40min時，流動相A流動相B=70 3060min時，流動相A流動相B=40 6085min時，流動相A流動相B=15 85其中，上述比例為體積比。
3.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)中所述高 效液相色譜法的流速1. OOOml/min。
4.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)中所述高 效液相色譜法的進樣體積10 μ 1-20 μ 1。
5.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)中所述高 效液相色譜法的檢測波長為274nm 286nm。
6.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)中所述流 動相A為10%乙腈0.4%甲酸水溶液。
7.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)中所述高 效液相色譜法的柱溫20°C 30°C。
8.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(2)中所述復 方丹參片含水醇溶液的製備方法如下取複方丹參片，除去包衣，用含水甲醇或含水乙醇提 取，濾過，製成供試品溶液。
9.根據權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法，其特徵在於，步驟(3)和步 驟(4)中所述指紋圖譜有25個特徵峰，各特徵峰的保留時間分別為6min、12min、21min、 24min、25min、27min、29min、30min、31min、33min、35min、48min、53min、56min、60min、 62min、63min、66min、68min、71min、75min、76min、77min、85min、88min,其中保留時間為 6min、24min、25min、27min、30min、60min、66min、68min、75min 的 9 個色譜峰依次與對照品 溶液的色譜圖中丹參素鈉、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、二氫丹參酮I、隱丹參 酮、丹參酮I、丹參酮II A相同。
10.權利要求1所述的複方丹參片的質量控制方法的應用，是應用於鑑別複方丹參片。
全文摘要
本發明公開一種複方丹參片的質量控制方法，包括如下步驟(1)製備混合對照品溶液；(2)製備複方丹參片含水醇溶液作為供試品溶液；(3)採用高效液相色譜法分析上述對照品溶液，色譜條件色譜柱為十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料，採用梯度洗脫，流動相A為乙腈酸水溶液，流動相B為乙腈；(4)測定吸取供試品溶液注入液相色譜儀，按照高效液相色譜法測定，得到複方丹參片高效液相色譜指紋圖譜；(5)比較並根據對照品溶液的色譜圖和供試品溶液的指紋圖譜監控複方丹參片的質量。本發明還公開了一種質量控制方法的應用，是應用於鑑別複方丹參片。本發明的目的提供一種更為有效可靠的複方丹參片的質量控制方法。
文檔編號A61P9/10GK101912440SQ20101025149
公開日2010年12月15日 申請日期2010年8月6日 優先權日2010年8月6日
發明者姚小華, 李楚源, 林青, 肖曉麗, 黃琳 申請人:廣州白雲山和記黃埔中藥有限公司