具有抗腫瘤活性的大環內酯類的製作方法

2023-09-09 23:32:20

專利名稱：具有抗腫瘤活性的大環內酯類的製作方法
技術領域：
本發明領域本發明涉及從新的海生微生物有機體的肉湯培養物中分離的新的大環內酯化合物。本發明還涉及在控制的條件下通過需氧發酵產生該新化合物及其分離和純化、也涉及衍生的化合物，並且涉及在抗腫瘤和其它活性的發現的基礎上的其它方面。
本發明背景稱作寡黴素和高寡黴素(homoligomycin)的大環內酯從J.Antibiotics 461334～1341，1993、J.Antibiotics 45171～179，1992和J.Antibiotics 491275～1277，1996中已知。
本發明目的由於大量的癌細胞系(包括那些顯示MDR表型的癌細胞系)不能用任何藥物有效治療這一事實，所以人們仍然需要新的抗增生化合物來治療幾種人體腫瘤。
本發明的另一個目的是提供用於給予需要此治療的患者所述活性化合物的藥用組合物。
人們對微生物產物感興趣，因為目前已很好地建立了工業生產。因此，本發明另一個目的涉及生產該活性化合物的方法、涉及從發酵肉湯培養物中分離和純化所述活性化合物的方法、也涉及水解為糖苷配基化合物和衍生化成為相關的化合物的方法。本發明概述本發明提供了下式的稱作IB-96212的具有大環內酯樣結構的化合物
也提供了獲得IB-96212的方法，並且所述優選的方法包括在控制的浸沒需氧條件下，在具有可同化的碳源和氮源以及鹽的水溶性營養培養基中培養能夠產生IB-96212的微生物菌株。未純化的或者部分純化的並具有抗腫瘤活性的肉湯培養物自身也為本發明的一部分。可以從該肉湯培養物中回收化合物IB-96212並加以純化。證明該化合物和發酵肉湯培養物具有令人感興趣的抗幾種人癌細胞的活性，在它們中間包括敏感的和多抗藥性(MDR)的白血病細胞。另外，IB-96212對於一些革蘭氏陽性菌顯示抗菌活性。
通過水解可以從化合物IB-96212中脫除經鑑定為L-玫瑰糖(rhodinose)的三脫氧糖，得到活性糖苷配基化合物IB-96212B，該化合物具有母體IB-96212中心26-元大環內酯環體系。
因此，本發明還提供具有以下結構的化合物IB-96212B
IB-96212B與母體IB-96212具有相當的活性。
在化合物IB-96212中，我們鑑定為L-玫瑰糖的三脫氧糖其本身能被衍生化或者該糖能夠被替代，無論哪一種情況均可以得到在所述糖的位置上具有非L-玫瑰糖基團的另外的IB-96212衍生物。因此，更廣義地講，本發明提供以下通式的化合物
其中R為氫或取代基基團。
舉例說明，R為氫或選自糖基團、烴基基團、醯基基團、雜環基基團或某些其它適宜的取代基基團。該取代基基團的性質不是至關重要的。所述糖基團適宜為單-、雙-或三糖，其可為脫氧糖。所述烴基可以為烷基、環烷基、芳基、芳烷基或烷基芳基，特別是C1-C6烷基、環-(C4-C8)-烷基、苯基、萘基或苄基。所述雜環基基團可以為具有1至4個雜原子的4至8元環，特別是具有1或2個選自氧、硫或氮的雜原子的5或6元環。所述烴基基團、醯基基團或雜環基基團本身可以被取代，例如被1、2或3個選自C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、滷素、羥基、氨基或其它基團的取代基取代。
得到IB-96212優選的培養物為稱之為ES25-008的新菌株，其化學、生物化學和形態學的特徵顯示它屬於小單孢菌屬，在分類學上歸類為小單孢菌屬菌種(Micromonospora sp.)。
如上所述，已經發現化合物IB-96212和IB-96212B在抑制幾種多抗藥性(MDR)的人和鼠的白血病細胞以及敏感的細胞系以及抗其它的人體腫瘤的增生活性方面是有效的。所給出的通式的其它化合物將保留這樣的活性。
簡述

圖1為純化的IB-96212的HPLC色譜圖；圖2為純化的IB-96212的紫外光譜(UV)；圖3為純化的IB-96212的紅外光譜(IR)；圖4為純化的IB-96212的質子NMR(1H)光譜；圖5為純化的B-96212的碳-13NMR(13C)光譜；圖6為純化的IB-96212的質譜；圖7為在丙酮-d6中的IB-96212的HMBC NMR光譜；圖8為在丙酮-d6中的IB-96212的COSY NMR光譜；圖9為在丙酮-d6中的IB-96212的HMQC 132Hz NMR光譜；圖10顯示了IB-96212B的NMR相關性；圖11為IB-96212B的質譜；圖12為在丙酮-d6中的IB-96212B的HMBC 60ms NMR光譜；圖13為在丙酮-d6中的IB-96212B的HMBC 110ms NMR光譜；
圖14為在丙酮-d6中的IB-96212B的COSY NMR光譜；和圖15為在丙酮-d6中的IB-96212B的HMQC 145Hz NMR光譜。
本發明詳細描述生產生物用於產生IB-96212和由此產生IB-96212B的微生物優選為小單孢菌屬菌種的菌株ES25-008，它的培養物已經以保藏號CECT3333下保藏於Valencia大學的西班牙典型培養物保藏中心。在布達佩斯條約的條款下進行這種保藏，給出的保藏日期為1997年8月4日。該微生物是從未鑑定的海生多孔動物中分離出來的。在此描述的分類方法為那些在表1中報導的方法。所有培養物在27℃下孵育並且每周進行結果記錄直到第21天。表11.用於菌落形態研究的培養基ISP培養基第2、3、5和6號ShirlingGotlieb.(7).ATCC培養基第172號ATCC Catalog.Czapek Agar DifcoBennet瓊脂，Waksman.(9)1.5％水瓊脂，Luedemann(5)所有的培養基以50％ASW補充2.生理性狀研究ISP培養基n°1，Shirling和Gotlieb.(7)NaCl抗性含有0、2、4、7和10％NaCl的ATCC 172碳利用率ISP-9，E.B.ShirlingD.Gotlieb.(7)3.化學組成研究脂肪酸分析，Van der Auwera等.(8)全細胞糖分析，Guerrant和Moss.(3)該生物的描述如下形態學在28℃下、21天後，於補充人造海水(ASW)的ISP2和172中觀察到生長。在所研究的不同培養基上觀察到幾種橙色的覆蓋物。無氣生菌絲體形成。使基內菌絲體是分支的。在基內菌絲體上產生分離的終端芽孢。所述芽孢為球形的。並且在至少孵育14天後，在一些培養基中能夠檢測到一些過度生長的菌絲團。生理性狀無論在固體培養基上還是在液體培養基上，菌株ES25-008均沒有形成可擴散的色素。對NaCl的抗性超過4％。最適生長溫度範圍在25℃和35℃之間。在葡萄糖、蔗糖、木糖和甘露糖作為唯一碳源時該生物可以生長，然而，在為棉子糖、肌醇、半乳糖、果糖、蜜二糖、乙醇、甘油和鼠李糖時，生長為陰性，並且在為甘露醇時上的生長是有疑問的。細胞化學組成胺基酸內消旋-2，6-二氨基庚二酸存在於菌株ES25-008的全細胞水解產物中。脂肪酸FAME組成如下在表2中所示表2130i-140140 i-150 n-150 150 i-161 i-160 161 160＜1 ＜1＜1 8.21 1.00 1.09＜1 35.07 ＜11.12i-171 i-170n-170 171 170i-181 i-180 cis-181 180＜1 3.18 3.3929.49 7.88 1.44＜1 2.30 ＜1糖當通過氣相色譜法分析時，全細胞糖圖形(pattern)顯示存在著木糖、核糖和葡萄糖。檢測到痕量的阿拉伯糖。該圖形將該菌株歸為Lechevalier等(4)的D組。其它被檢測到的糖為甘露糖、半乳糖、m-肌醇和甘露糖胺。所述多元醇阿糖醇和胞壁酸為其它的細胞內組分。未檢測到馬杜拉糖。
基於前述的特徵，經鑑定所述培養物為小單孢菌屬的菌種，其與任何國際保藏機構獲得的該屬的其它任何已知類型的菌株並不相似。通過脂肪酸層析法分析發現，其與最密切相似的青銅小單孢菌ATCC 31395的相似性僅有80％。
儘管很清楚地優選所述保藏的生物，但是本發明不限制或局限於該具體的菌株或生物。本發明者的意圖就是在本發明範圍內包括任何其它的產生IB-96212的生物、菌株或突變株。發酵當在控制的條件下、於適宜的介質中培養時，小單孢菌屬菌種ES25-008產生抗生素IB-96212。該菌株在含水營養培養基中於需氧和嗜中溫條件下生長，優選在24℃和35℃、在pH範圍為6.0和8.0之間。能夠將多種液體培養基用於培養所述生物，有用的培養基為那些培養基，即包括可同化的碳源如澱粉、糊精、糖漿、甘油、葡萄糖、蔗糖等等，可同化的氮源如蛋白、蛋白水解物、脫脂粉、玉米漿等等以及有用的無機陰離子和陽離子如鈉、鎂、鉀、銨、硫酸根、氫氯酸根、磷酸根、碳酸根等等。也可加入微量元素。最好通過向該發酵培養基通氣供氧。通過機械高速攪拌器提供攪拌。已經發現常規的發酵罐可很好地適宜於進行該生物的培養。在發酵的不同階段期間可能需要加入營養物和控制pH以及消泡劑，以增加產量和避免起泡。
通過所述優選的生物來產生IB-96212的所需的必需步驟為
用冷凍的或冷凍乾燥的菌絲體開始。在嗜中溫的溫度和需氧條件下，在搖瓶中用含有部分上述成分的培養基來得到培養初始細胞的菌絲團，如需要的話可將該步驟重複幾次，並且將該收集物用作接種物，在一個或幾個含有適當培養基的發酵罐中接種，如果需要的話，這些罐也可用作接種物，並且如果需要時可將該步驟重複幾次，或者將它們用於生產階段，這根據所需要的肉湯的體積而定。有時生產培養基可不同於用於接種的那些培養基。
在表3中，描述了能夠用於接種物生長和IB-96212產生的培養基表3接種培養基生產培養基蔗糖 5g 蔗糖 5g澱粉 20g澱粉 20g牛肉膏3g 大豆粉15g酵母提取物5g 酵母提取物5g胰化蛋白腖5g 胰化蛋白腖2gCaCO34g CaCO34gNaCl 4g NaCl 4gNa2SO41g Na2SO41gKCl 0.5g KCl 0.5gMgCl22g MgCl22gK2HPO40.5g K2HPO40.5g自來水加至1,000ml自來水加至1,000mlIB-96212的產生能夠通過抗細胞系鼠白血病P-388的全肉湯測定或者通過HPLC進行監測。IB-96212的分離通過用適宜的溶劑混合物如CHCl3∶CH3OH∶H2O的混合物從該菌絲體餅(cake)中提取來分離抗生素IB-96212。活性部分集中在下層。合併兩次重複提取的提取液並真空蒸發至幹。
通過採用常規層析技術的適當組合從該粗品活性提取液中分離並純化IB-96212。
通過組分的抗腫瘤活性或者通過用在濃H2SO4中的香草醛顯影的TLC或者用帶有二極體陣列檢測器的分析性HPLC指導分步分離。在室溫下、使用甲醇∶水(92∶8)作為流動相、2mm/min流速下進行HPLC分析(Waters RCM 8×10，8C18 10柱)，並且在225nm下繪製圖譜。如在圖1中所示，在這些條件下IB-96212的保留時間為3.64min。
基於它們的各種波譜特性的詳細解析，可鑑定該純的化合物為IB-96212(參見圖2至6中呈現的數據)。
如在圖2中所報導的那樣，該U.V.光譜在225nm處顯示吸收。
在附圖的圖3中顯示了在KBr中的紅外吸收光譜。
在圖4和圖5中分別報導了其1H和13C N.M.R.光譜。
在圖6中報導了其FAB-MS光譜在1021處顯示有(M+Na)-峰。
將IB-96212的1H NMR數據列表如下位置 δH[int mult，J(Hz)] 位置 δH[int mult，J(Hz)]133 3.52(1H)2 5.80(1H，d，15.5) 34 1.35(1H，m)1.68(1H，m)3 6.74(1H，dd，10.5，15.5) 35 0.94(3H，t，7.5)4 2.37(1H，dt，6.5，10.0)36 1.13(3H，d，6.5)5 3.62(1H，d，9.0) 37 077(3H，d，7.0)6 1.73(1H，m)38 1.40(1H，m)1.64(1H，m)7 4.02(1H，d，9.0) 39 1.42(1H，m)1.54(1H，m)8 3.62(1H，d，9.0) 40 0.91(3H，t，7.0)9 3.54(1H) 41 0.96(3H，d，6.5)104.07(1H，dd，4.5，8.5) 42 1.25(1H，m)1.42(1H，m)113.46 (1H) 43 3.68(1H，m)12 44 1.08(3H，d，6.5)133.78(1H，dd，1.5，6.5) 45 0.75(3H，d，7.0)141.82(1H，m)46 0.92(3H，d，7.0)151.98(1H，m)47 0.78(3H，d，6.0)2.19(1H，m)165.42(1H，ddd，3.5，10.5，14.5) 48 0.82(3H，d，7.0)176.03(1H，dd，10.5，14.5) 5-OH 4.21(1H，s)186.01(1H，dd，10.5，14.5) 7-OH 4.90(1H，s)195.16(1H，dd，10.0，14.5) 9-OH 3.50(1H，s)202.26(1H，dt，10.0)10-OH4.50(1H，d，4.5)211.40(1H，m) 11-OH3.53(1H，s)1.64(1H，m)220.92(1H，m) 12-OH3.75(1H，s)1.58(1H，m)233.92(1H，d，10.5) 13-OH4.43(1H，d，6.5)241.95(1H，m) 33-OH3.38(1H，d，6.0)254.81(1H，dd，5.0，11.5) 43-OH3.39(1H，d，6.0)261.75(1H) 1＇ 4.54(1H，dd，1.5，7.7)27 2＇ 1.43(1H)2.09(1H，dt，2.0，8.5)281.40(1H，m) 3＇ 1.46(1H，m)1.75(1H，m)1.93(1H，m)291.49(1H，m) 4＇ 3.15(1H，sep，5.0)1.65(1H，m)301.49(1H，m) 5＇ 3.31(1H，dq，2.5，6.0)313.82(1H，d，10.5) 6＇ 1.24(3H，d，6.0)321.66(1H，m) 4＇-OH 4.04(1H，d，5.0)
將IB-96212B的1H NMR數據列表如下位置 δH[int mult，J(Hz)] 位置 δH[int mult，J(Hz)]1 333.55(1H，m)2 5.80(1H，d，15.5) 341.37(1H，m)1.70(1H，m)3 6.75(1H，dd，10.0，15.5) 350.95(3H，t，7.5)4 2.45(1H，dt，6.5，10.0)361.14(3H，d，6.5)5 3.65(1H) 370.85(3H，d，7.0)6 1.75(1H，m)381.45(1H，m)1.59(1H，m)7 3.94(1H，d，8.0) 391.35(1H，m)1.55(1H，m)8 3.62(1H) 400.88(3H，t，7.0)9 3.63(1H) 410.98(3H，d，6.5)10 4.14(1H，d，6.5) 421.25(1H，m)1.45(1H，m)11 3.50(1H) 433.80(1H，m)12 441.08(3H)13 3.78(1H，寬s) 450.78(3H，d，7.0)14 1.85(1H，m)460.93(3H，d，7.0)15 2.10(1H，m)470.80(3H，d，6.0)2.22(1H，m)16 5.45(1H，ddd，3.5，10.5，14.5) 480.83(3H，d，7.0)17 6.01(1H，dd，10.0，14.5) 5-OH18 6.08(1H，dd，10.0，14.5) 7-OH19 5.18(1H，dd，10.5，14.5) 9-OH20 2.35(1H，dt，10.0) 10-OH21 1.46(1H，m)11-OH1.65(1H，m)22 1.02(1H，m)12-OH1.60(1H，m)23 3.96(1H，d，10.5) 13-OH4.24(1H，寬s)24 1.93(1H，m)3340H3.40(1H，d，6.4)25 4.90(1H，dd，5.5，11.5)4340H3.43(1H，d)26 1.75(1H) 1＇27 2＇28 1.40(1H，m)3＇1.77(1H，m)29 1.50(1H，m)4＇1.65(1H，m)30 1.52(1H，m)5＇31 3.84(1H，d，10.5) 6＇32 1.68(1H，m)4＇-OH
將IB-96212和IB-96212B的13C NMR數據列表如下位置 IB-96212δCIB-96212BδC位置 IB-96212δCIB-96212BδC1165.2 165.328 33.1 32.82122.7 122.529 28.8 28.83150.7 150.730 31.7 31.7442.5 42.0 31 74.1 74.2580.8 80.6 32 39.9 39.9636.4 36.5 33 73.6 73.6777.5 78.6 34 28.8 28.8883.5 74.0 35 9.79.7971.6 73.0 36 18.4 18.210 69.1 71.0 37 4.54.911 70.9 72.1 38 38.0 38.412 76.7 77.5 39 17.2 17.213 68.0 70.6 40 15.2 15.214 34.0 34.3 41 15.0 15.115 39.2 39.2 42 46.9 46.716 131.6 131.543 65.3 65.417 133.1 133.244 24.8 24.818 132.1 132.345 6.76.519 137.5 137.546 12.4 12.320 41.8 41.2 47 18.2 18.121 33.1 33.1 48 9.822 32.2 31.7 1＇104.423 68.9 68.7 2＇31.024 36.7 37.0 3＇31.925 76.7 76.6 4＇71.426 38.7 38.8 5＇77.627 99.1 99.1 6＇ 18.7首先根據圖1至6中的數據，我們指定在我們擁有優先權的GB專利文件中所示的結構，但是利用IB-96212和IB-96212B兩者後面圖的另外的數據，我們得到了IB-96212的結構如下
所述糖取代基能夠通過水解除去，得到下式的化合物IB-96212B
在IB-96212的糖上以常規方式衍生化，或者以常規方式將IB-96212B衍生化從而用另一個取代基替代所述糖，由此得到下式的化合物
根據需要可以改變R。生物學活性化合物IB-96212對於藤黃微球菌(Micrococcus Luteus)顯示出良好的抗菌活性，在較高劑量下對金黃葡萄球菌(Staphylcoccus aureus)和枯草芽胞桿菌(Bacillus subtilis)也顯示一定活性。在液體Meuller-Hinton培養基中、於35℃下，通過將選擇的菌株與不同濃度的IB-96212一起孵育來研究化合物IB-96212的抗菌活性。
IB-96212和IB-96212B對於數種哺乳動物癌細胞系顯示了良好的抗腫瘤活性。通過根據Bergeron等(2)和Schroeder等(6)描述的方法對腫瘤細胞進行體外培養來檢測抗腫瘤活性。已經觀察到對數種人腫瘤如白血病、結腸癌、NSC肺癌、黑素瘤等等具有活性。
某些腫瘤比其它的腫瘤更敏感。例如我們發現白血病細胞和MDR白血病細胞比結腸癌至少敏感100倍以上。
通過腹膜內注射QD1-5，用P-388在雌性小鼠組評價了體內活性，得到以下表4所示的結果。表4劑量 體重 體重死亡 存活mg/kg 變化天數 時間注射 總量 第0天第5天IB-96212 0.02.121.6±0.522.6±0.5 0.82，6，10，10，13 8.2±3.8IB-96212 0.01.05 20.6±1.021.7±0.7 1.19，11，13，13，14 12.0±1.8IB-96212 0.005 .025 22.0±1.222.9±0.6 0.810，10，11，11，1311.0±1.1Pos 21.0±1.221.4±1.1 0.58，8，8，8，8，9，9，98.4±0.5本發明也涉及藥用製劑，該製劑含有作為活性成分的化合物IB-96212或IB-96212B或者所給出通式的另一種衍生物，本發明也涉及它們的製備方法。
藥用組合物的實例包括任何用於口服、局部或非腸道給藥的含有適當組成的固體(片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑等)或液體(溶液劑、混懸劑或乳劑)組合物，並且它們可含有純的化合物，或者當非腸道給藥時組合物可能需要滅菌。
根據具體的製劑、應用方法和所治療的具體狀況、宿主和腫瘤，IB-96212、IB-96212B或衍生物的藥用組合物的正確劑量將隨之變化。也應該考慮其它因素像年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、排洩率、宿主的病情、藥物的聯合、反應敏感性和疾病的嚴重性。在最大耐受劑量範圍內可進行連續或定期給藥。
本發明實施例參照以下幫助理解本發明的實施例，將對本發明作進一步闡明，但是這些實施例不解釋為對本發明的限制。除非另外指明，否則所有在此報導的百分率均以重量比表示。所有的溫度均以攝氏度表示。所有的孵育均在28℃下進行，並且在定軌搖床上振搖培養瓶。所有的培養基和容器均為滅菌的，並且所有的培養過程均為無菌的。實施例1貯存培養物小單孢菌屬的菌種ES25-008的純培養物的全肉湯在20％的甘油中冷凍保存。
接種把冷凍的培養物或者生長良好的斜面培養物(5％vo1.)接種於先前描述的在250cc搖瓶中包含100ml的種子培養基中。將該燒瓶在48小時期間孵育。在2L的錐形瓶中用10％的第一階段接種物接種500ml的相同培養基。該燒瓶在48小時期間孵育。
發酵在17L發酵罐中用第二階段的接種物2.5L接種前述的50L的生產培養基。在400rpm攪拌和0.5V/V.M.的空氣流下，在96小時內進行發酵。通過全肉湯抗P-388測定或者通過HPLC監測次級代謝物的產生。實施例2分離過濾10L全收穫的肉湯來分離生物質和其它固體。用CHCl3∶CH3OH∶H2O(2∶1∶1)的混合溶劑(2.4L)提取該菌絲體餅兩次，該活性部分集中在下層。濃縮有機溶劑並真空蒸發至幹，得到450mg的粗提取物。
使用己烷/乙酸乙酯的混合物作為洗脫溶劑，在矽膠上層析該提取物。以己烷/乙酸乙酯(30∶70)洗脫到44mg具有抗腫瘤活性的組分。在矽膠柱層析上進一步純化，用氯仿/甲醇(92∶8)洗脫活性部分，得到19mg乾燥物質。使用甲醇/水(90∶10)作為洗脫溶劑，經C18反相柱層析進行最後的純化，得到12mg純的IB-96212。實施例3水解為IB-96212B把31mg的IB-96212溶於3ml的CHCl3∶CH3OH(1∶1)中，並且加至10ml的15％H2SO4溶液中，保持回流3小時。該反應混合物以15ml水稀釋，並用25ml氯仿提取兩次，得到30mg反應產物，其通過矽膠層析分析，用CHCl3∶CH3OH(96∶4)洗脫。得到20mg的水解產物糖苷配基。實施例4生物學活性所使用抗腫瘤細胞為P-388(來自DBA/2小鼠淋巴瘤的懸浮培養物)、A-549(人巨紅細胞肺癌的單層培養物)、HT-29(人結腸癌的單層培養物)、MEL-28(人黑素瘤的單層培養物)和其它所指定的細胞系。
將P-388細胞以每孔含有1×104個細胞的量接種到16mm孔中，每孔含有1ml等份的具有指定藥物濃度的MEM 5FCS。接種另一組無藥物的培養物作為生長對照組，以確保細胞在指數生長期。所有的測定均以復份進行。在具有98％溼度的10％的CO2氣氛中、於37℃下孵育三天後，用0.1％結晶紫對這些孔進行染色。通過將含有藥物的孔中的生長與不含有藥物的對照組孔中的生長相比較來計算IC50。
表5中的活性代表以IC50(mcg/ml)表示的活性。表5化合物 P-388 P388MDR MIEL8226 A-549 HT-29 MEL-28 CV1IB-962120.0001 0.001 0.0005 1.001.00 1.00 0.0002IB-96212B 0.0011 1.210.001順鉑2.5 2.5 2.5 5 2.5adriamicin 0.0210.002 0.05 0.02紫杉醇 0.2 ＞2 0.002 0.002 0.002etopoxide 0.1 10 0.1 1 0.5在35℃下，在液體Mueller-Hinton培養基中使受試微生物與IB-96212共同孵育來研究化合物IB-96212的抗菌活性。通過與IB-96212孵育24小時後在孵育培養基中出現濁度來測定MIC。這些結果示於表6中。IB-96212對於抗革蘭氏陽性菌顯示出殺菌活性。表6微生物 MIC(μg/ml)大腸桿菌 ＞100肺炎免雷伯氏菌＞100綠膿假單孢菌 ＞100金黃葡萄球菌 100枯草芽胞桿菌 100藤黃微球菌0.4參考文獻在此引用了下列參考文獻，並且它們通過引用結合到本文中(1)American Type Culture Catalog第17版，1989.Rockville.Maryland.U.S.A.(2)Bergeron等.Biochem.Biophys.Res.Comm.，121848，1984(3)Guerrant G.O.和C.W.Moss，Anal.Chem.56633，1984(4)Lechevalier M.P.等.J.Bacteriol.105313，1971(5)Luedemann G.M.Personal Communication(6)Schroeder等.J.Med.Chem.，241078，1981(7)Shirling B.E.和D.Goblieb.Int.J.Syst.Bacteriol.16313，1966(8)Van der Auwera等.J.Microbiol.Methods 4265，1986(9)Waksman，S.A.The Actinomycetes第II卷331，1961已經詳細描述了本發明，包括其優選的實施方案。然而，本領域技術人員可以理解基於本發明公開的內容可以進行修改和/或改進。
權利要求
1.以下通式的化合物
其中R為氫或取代基。
2.權利要求1的化合物，其中R為氫或選自糖基團、烴基基團、醯基基團或雜環基基團的基團。
3.權利要求1的化合物，為在此被稱為IB-96212的具有以下結構的化合物
或者在此被稱為IB-96212B的具有以下結構的化合物
4.在此被稱為IB-96212的化合物，其中圖1為純化的IB-96212的HPLC色譜圖；圖2為純化的IB-96212的紫外光譜(UV)；圖3為純化的IB-96212的紅外光譜(IR)；圖4為純化的IB-96212的質子NMR(1H)光譜；圖5為純化的B-96212的碳-13NMR(13C)光譜；和圖6為純化的IB-96212的質譜。
5.產生權利要求3或4的化合物IB-96212的方法，該方法包括在控制的條件下、在含水營養培養基中培養能夠產生化合物IB-96212的微生物菌株。
6.權利要求5的方法，其進一步包括從該肉湯培養物中分離和純化化合物IB-96212。
7.權利要求5或6的方法，其中所述產生IB-96212的微生物為基本純的培養菌株ES25-008，它能夠以保藏號CECT3333號從西班牙典型培養物保藏中心獲得。
8.產生權利要求3的化合物IB-96212B的方法，該方法包括將權利要求3的化合物IB-96212水解。
9.產生其中R不為氫的權利要求1的化合物的方法，該方法包括將其中R為氫的權利要求1的化合物衍生化。
10.權利要求1的化合物在治療對於所述化合物敏感的哺乳動物癌症中的用途。
11.含有權利要求1的化合物的藥用組合物。
12.抗腫瘤藥用組合物，它含有有效量的抗一種或多種哺乳動物腫瘤的化合物IB-96212或IB-96212B的。
13.菌株小單孢菌屬菌種ES25-008，可在保藏號CECT-3333下獲得。
全文摘要
通過培養在保藏號CECT－3333下獲得的菌株小單孢菌屬菌種ES25—008,可以得到具有結構(Ⅰ)的在此稱為IB－96212的化合物,並且可以將其水解得到具有結構(Ⅱ)的IB－96212B。為L－玫瑰糖的糖取代基本身能夠衍生化或者該糖能夠被替代,無論何種情況均可得到在所述糖位置上具有非L－玫瑰糖基團的IB－96212另外的衍生物。
文檔編號C12N1/20GK1276791SQ98809559
公開日2000年12月13日 申請日期1998年8月4日 優先權日1997年8月4日
發明者L·M·卡內多, F·埃斯普列戈, R·I·費爾南德斯－奇梅諾, J·L·費爾南德斯－普恩特斯, J·佩雷茲－巴茲, F·羅梅羅 申請人:拜奧馬研究所有限公司