一種獺兔源枯草芽孢桿菌及其在提高獺兔生長性能中的應用的製作方法

2023-08-13 18:20:31 1

本發明屬於生物技術領域，具體地說，涉及一種獺兔源枯草芽孢桿菌及其在提高獺兔生長性能中的應用。

背景技術：

近年來，我國養殖業面臨著日益嚴峻的食品安全問題，傳統的抗生素雖然在治療動物疾病、促進動物生長方面具有巨大的優勢，但由於其易產生耐藥性等缺陷而飽受爭議，在養殖業中受到越來越多的限制。於是大部分國家開始限制抗生素的使用，並開始尋找替代抗生素的產品，以解決養殖業面臨的難題。芽孢桿菌是一種重要的益生菌，對促進動物的生長發育和維持動物體內微生態的平衡具有重要意義，芽孢桿菌能夠在惡劣環境下形成抗逆性強的內生孢子，能夠耐受自然界及加工過程中的極端條件，具有作為飼用益生菌開發的潛力，對動物健康養殖意義重大。目前可以作為飼用的芽孢桿菌有：枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)，地衣芽孢桿菌(bacilluslicheniformis)，短小芽孢桿菌(bacilluspumilus)和蠟樣芽孢桿菌(bacilluscereus)等。

綜合目前關於枯草芽孢桿菌的文獻報導，其對動物的益生功能主要體現在以下幾方面：第一，枯草芽孢桿菌可通過多種途徑提高動物機體的免疫功能；第二，枯草芽孢桿菌能夠降低腸道有害菌的數量、增加腸道有益菌的數量，維持腸道微生態的平衡；第三，枯草芽孢桿菌能分泌多種酶類，促進動物對營養物質的消化吸收，改善腸道形態；第四，枯草芽孢桿菌通過抑制蛋白質轉化為胺和氨，降低脲酶活性，減少氨氮物質分解，提高含氮物質的消化率等方式達到生物除臭的作用；第五，枯草芽孢桿菌能夠提高動物機體的抗氧化能力，保護機體免受氧化應激。

獺兔是一種皮肉兼用型兔種，在目前保護野生動物的大背景下，獺兔皮是裘皮比較成功的替代品。此外兔肉是世界衛生組織推薦的「三高四低」優質肉製品，養殖前景廣闊。獺兔是一種敏感性很高的動物，飼料原料、飼料配方和飼養環境的改變、驚嚇等都極易造成獺兔的應激，從而引起死亡。本試驗從獺兔體內分離益生芽孢桿菌並應用於獺兔，降低了芽孢桿菌添加後可能對獺兔造成的應激，且益生菌存在種屬差異，不同宿主來源的細菌很難在其他種屬動物腸道內定植，甚至還可能轉化為致病菌，相同宿主來源的優勢菌進入宿主體內時能夠在複雜的腸道菌群中排除定植抗力，快速定植到腸道中發揮其功能。在獺兔養殖中，腹瀉疾病高發、頻發，嚴重影響兔業生產，且斷奶兔因自身免疫系統、消化系統發育不完善，斷奶後飼料結構發生變化，極易發生腹瀉，高產酶的芽孢桿菌的添加可以改善獺兔的消化吸收，促進腸道發育，減少腹瀉的發生。

已有的研究表明在獺兔飼養中添加一定劑量的非獺兔源益生菌，獺兔死亡率卻異常升高，但耐過存活獺兔的小腸絨毛高度、隱窩深度、黏膜層厚度、腸道質量均顯著增加，免疫器官質量、細胞因子水平也顯著提高，腸道菌群結構更加複雜，部分有害菌數量降低，有益菌數量增加，腹瀉率降低。此外一定劑量的益生菌還可增加獺兔肌肉生長速度。由此可見，獺兔在適應外源益生菌的過程中會導致部分弱兔出現不耐受，死亡率升高的嚴重問題。獺兔源的益生菌來自獺兔，不會出現不耐受現象，同時又具有上述益生效果，所以獺兔源益生菌篩選與應用是目前解決獺兔養殖中斷奶兔養殖問題的有效途徑之一。但是相關的研究在國內外都是空白。因此，獺兔源高產酶芽孢桿菌的定向篩選與應用研究工作十分必要，為獺兔養殖中使用益生菌替代抗生素添加劑提供參考，並為生產綠色優質的兔肉提供保證。

目前，國內申請飼用芽孢桿菌專利，其

技術實現要素：
大多是飼用具有育肥作用的芽孢桿菌，例如：專利一種利用中性蛋白酶的凝結芽孢桿菌提高北京油雞生產性能的方法(申請號：201611014471.3，申請日：2016-11-18，公開號：cn106520614a，公開日：2017-03-22)報導了從傳統乾酪中分離出的一株凝結芽孢桿菌可以降低北京油雞的死亡率，顯著提高油雞體重和蛋白利用率，促進腸道中有益菌的生長，抑制有害菌的生長，對提高油雞生產性能有良好的作用；專利一株提高白羽肉雞生長性能的凝結芽孢桿菌(申請號：201410719197.4，申請日：2014-12-03，公開號：cn104403972a，公開日：2015-03-11)報導了從健康家禽的消化道分離出的一株凝結芽孢桿菌可以降低白羽肉雞盲腸大腸桿菌數和氨態氮濃度，提高盲腸微生物多樣性指數，降低死淘率和料重比，提高肉雞的日增重；專利枯草芽孢桿菌製劑及其製備方法與應用(申請號：201210139547.0，申請日：2012-05-08，公開號：cn102660534a，公開日：2012-09-12)報導了枯草芽孢桿菌製劑經口服途徑(飲水或拌料)飼餵畜禽後，具有改善消化功能，提高飼料轉化率，促進生長的作用。

目前有關芽孢桿菌在提高獺兔生長性能的方法未見專利報導。關於利用獺兔源高產纖維素酶、蛋白酶、澱粉酶的芽孢桿菌活菌製劑飼餵獺兔，提高飼料轉化率和腸道酶活、降低料重比、提高獺兔生長性能的方法，也尚未見國內外相關文獻報導和專利報導。

發明內容

有鑑於此，本發明針對上述的問題，提供了一種獺兔源枯草芽孢桿菌及其在提高獺兔生長性能中的應用。

為了解決上述技術問題，本發明公開了一種獺兔源枯草芽孢桿菌，該菌株已於2017年5月31日保藏於中國典型培養物保藏中心，保藏地址：湖北省武漢市武昌區八一路299號，武漢大學保藏中心，430072，保藏號cctccno：m2017290。

本發明還公開了一種上述的獺兔源枯草芽孢桿菌在提高獺兔生長性能中的應用。

進一步地，在獺兔的基礎日糧中添加枯草芽孢桿菌製劑，枯草芽孢桿菌在每克基礎日糧中的含量為1.0×106～107cfu。

進一步地，所述枯草芽孢桿菌製劑為枯草芽孢桿菌菌粉。

進一步地，所述枯草芽孢桿菌菌粉通過以下方法製備得到：將冷凍保存的枯草芽孢桿菌bswj2017003在營養肉湯培養基中活化後接種到固體培養基中培養72～96h，期間挑取菌落鏡檢，收集菌體，加入載體，65℃烘乾製備得到枯草芽孢桿菌菌粉，即為枯草芽孢桿菌製劑。

進一步地，所述固體培養基配方：黃豆粉1.3％，玉米粉1.3％，麩皮0.5％，蛋白腖0.3％，葡萄糖2％，牛肉膏0.1％，氯化鈉0.5％，瓊脂1.2％，餘量為瓊脂，以上質量百分含量為100％，ph6.5-7.5。

進一步地，製劑中枯草芽孢桿菌活菌含量為2×1010cfu/g。

進一步地，所述枯草芽孢桿菌製劑飼料制粒時添加到獺兔的基礎日糧中。

與現有技術相比，本發明可以獲得包括以下技術效果：

本發明分離得到了一株獺兔源枯草芽孢桿菌，將上述的枯草芽孢桿菌以1.0×106～107cfu/g的劑量添加到飼料中，能夠顯著降低獺兔料重比、提高腸道酶活等。其中，尤以在基礎日糧中添加1.0×106cfu/g和1.0×107cfu/g的枯草芽孢桿菌效果最為顯著。

當然，實施本發明的任一產品並不一定需要同時達到以上所述的所有技術效果。

附圖說明

此處所說明的附圖用來提供對本發明的進一步理解，構成本發明的一部分，本發明的示意性實施例及其說明用於解釋本發明，並不構成對本發明的不當限定。在附圖中：

圖1是本發明枯草芽孢桿菌bswj201700316srdnapcr產物的電泳圖；

圖2是本發明不同添加量對獺兔料重比的影響。

具體實施方式

以下將配合實施例來詳細說明本發明的實施方式，藉此對本發明如何應用技術手段來解決技術問題並達成技術功效的實現過程能充分理解並據以實施。

實施例1菌的分離與鑑定

一、菌種的分離

稱取健康獺兔盲腸內容物0.5g，加入到裝有49.5ml無菌生理鹽水的帶玻璃珠的錐形瓶中，搖床震蕩20min，80℃水浴20min，十倍梯度稀釋，將每個稀釋度各取100μl均勻塗布於nb平板，置於37℃恆溫培養箱培養12～24h後，接種環挑取疑似芽孢桿菌的單個菌落在nb平板上反覆劃線純化，直至鏡檢無雜菌，得到一株能夠提高獺兔生長性能的菌種，命名為bswj2017003。

二、菌種鑑定

(一)按照「伯傑細菌鑑定手冊」(第八版)和「常見細菌系統鑑定手冊」(東秀珠，蔡妙英等編著，北京：科學出版社，2001.2)中描述的方法，對菌株bswj2017003進行形態特徵、培養特性和生理生化特性鑑定，具體結果如下：

菌株的形態和生理生化特徵：

在nb培養基，37℃培養24h，菌落呈淺黃色，近圓形，表面乾燥、無光澤，有皺褶狀突起，邊緣不整齊。革蘭氏陽性，顯微鏡下呈直杆狀，芽孢橢圓中生。

生理生化特徵：

明膠液化：+；接觸酶：+；v-p反應：+；形成吲哚：﹣；檸檬酸鹽利用：﹣；葡萄糖發酵：+；葡萄糖產氣：+；木糖產酸：﹣；木糖產氣：+；甘露醇產酸：﹣；甘露醇產氣：+；阿拉伯糖產酸：+；馬尿酸鹽水解：﹣；精氨酸雙水解：﹣；酪素水解：+；酪氨酸水解：﹣；澱粉水解：+；硝酸鹽還原：+；苯丙氨酸脫氫酶：﹣；2％nacl生長：+；5％nacl生長：+；7％nacl生長：+。

(二)16srdna試驗

挑取平板上的單菌落，對其進行16srrna菌落pcr鑑定，純化後的pcr產物送北京華大基因測序，枯草芽孢桿菌bswj201700316srdnapcr產物電泳結果圖見圖1，測得的序列seqidno.1。根據gen-bank序列同源性比較，菌株bswj2017003與bacillussubtilisstraingxs-11(genbank登錄號ku904283.1)同源性99％，判定該菌為枯草芽孢桿菌(bacillussubtilis)。

基於以上特徵，將菌株bswj2017003鑑定為bacillussubtilis，其分類命名為bacillussubtilisbswj2017003。該菌株已於2017年5月31日保藏於保藏於中國典型培養物保藏中心(湖北省武漢市武昌區八一路299號，武漢大學保藏中心，430072)，保藏號cctccno：m2017290。

實施例2菌種產纖維素、蛋白酶和澱粉酶初選和複選

1、菌種產纖維素、蛋白酶和澱粉酶初選

1.1產纖維素酶初選

將菌種活化後接種於營養肉湯培養基中，37℃培養12h，然後用滴種法移接在cma-na平板上，培養24-48h，採用0.2％的剛果紅染色30min，然後依次用蒸餾水和濃度為1mo/l的氯化鈉洗去染液，再用5％的醋酸溶液固定顏色，用遊標卡尺分別測量染色圈直徑和菌落直徑，計算二者的比值。

1.2產蛋白酶初選

將菌種活化後接種於營養肉湯培養基中，37℃培養12h，然後用滴種法移接在酪素平板上，培養24-48h，用遊標卡尺分別測量酪素水解圈直徑和菌落直徑，計算二者的比值。

1.3產蛋白酶初選

將菌種活化後接種於營養肉湯培養基中，37℃培養12h，然後用滴種法移接在澱粉平板上，培養24-48h，採用盧戈式碘液染色，用遊標卡尺分別測量透明圈直徑和菌落直徑，計算二者的比值。

產酶初選試驗的結果表明，分離得到的122株菌株中，109株具有產纖維素酶的能力，100株具有產蛋白酶的能力，30株具有產澱粉酶的能力。菌株bswj2017003同時具有產纖維素酶、蛋白酶和澱粉酶的能力。

2、菌種產纖維素、蛋白酶和澱粉酶複選

2.1產纖維素酶複選

2.1.1標準曲線的製作

取16支20ml刻度試管，滅菌乾燥，按表1配置各種濃度的葡萄糖溶液。(每個濃度做3個平行)

表1纖維素酶標準曲線的製作

向上述不同濃度的葡萄糖溶液中分別加入1ml2mol/l氫氧化鈉溶液和2mldns溶液，搖勻後置沸水浴中5min，然後流水冷卻，加蒸餾水定容至20ml。用分光光度計于波長485nm處，以不含葡萄糖的0號試管為空白對照，分別測定其吸光度值。並建立通過吸光度值求葡萄糖的回歸方程。

2.1.2粗酶液cmc酶活力測定

將活化的芽孢桿菌菌液接種於種子培養基ⅰ中，37℃培養12h，然後以2％的接種量接種於發酵培養基ⅰ中，搖床培養160r/min，37℃培養48h，發酵12h後補加cmc-na。發酵後離心，收集上清液即為待測粗酶液。將0.625％cmc-na溶液預熱至50℃。按以下順序操作：取20ml具塞刻度試管，預先滅菌乾燥，編號。取粗酶液1.00ml，置於50℃水浴鍋中預熱2min，加入4ml己預熱至50℃的0.625％cmc-na溶液，於50℃水浴準確反應5min取出，立即加入lml2mol/l氫氧化鈉溶液和2mldns顯色液，搖勻後樣品管與對照管都置於沸水浴準確計時5min取出，流水迅速冷卻，加蒸餾水定容至20ml。空白對照加底物之前置於沸水浴中10min使酶失活，其餘操作同上。定容，搖勻，用分光光度計測定od485的值。在上述條件下定義為每分鐘每毫升粗酶液產生lμmol葡萄糖為一個酶活單位(u)。

2.1.3粗酶液濾紙酶活力的測定

粗酶液的製備方法同2.1.2。

取50mg新華濾紙，加入3ml0.2mol/lph4.6的醋酸緩衝液，加入粗酶液1ml，50℃水浴準確反應60min，加入2mldns，沸水浴5min，冷卻後定容至20ml。空白對照加底物之前置於沸水浴中10min使酶失活，其餘操作同上。定容，搖勻，用分光光度計測定od485的值。在上述條件下定義為每分鐘每毫升粗酶液產生lμmol葡萄糖為一個酶活單位(u)。

2.2產蛋白酶複選

2.2.1標準曲線的製作

取16支20ml刻度試管，滅菌乾燥，按表2配置各種濃度的酪氨酸溶液。(每個濃度做3個平行)

表2蛋白酶標準曲線的製作

取上述不同濃度的酪氨酸溶液各1ml，分別加入5ml0.4mol/ml碳酸鈉溶液和1ml福林試劑溶液，搖勻後置於40℃水浴中反應20min，加蒸餾水定容至20ml。用分光光度計于波長660nm處，以不含酪氨酸的0號試管為空白對照，分別測定其吸光度值。並建立通過吸光度值求酪氨酸的回歸方程。

2.2.2粗酶液蛋白酶活力測定

將活化的芽孢桿菌菌液接種於種子培養基ⅱ中，37℃培養12h，然後以2％的接種量接種於發酵培養基ⅱ中，搖床培養160r/min，37℃培養48h，發酵24h後補加葡萄糖。發酵後離心，收集上清液即為待測粗酶液。將2％酪蛋白溶液放入40℃的恆溫水浴鍋中預熱5min。按以下順序操作：取20ml具塞刻度試管，預先滅菌乾燥，編號。取粗酶液2.50ml，置於40℃水浴鍋中預熱2min，加入2.5ml己預熱至40℃的2％酪蛋白溶液，於40℃水浴準確反應10min取出，加入5ml0.4mol/l三氯乙酸溶液終止反應，立即搖勻，取出靜置10min，取濾液1ml，加入5ml0.4mol/l碳酸鈉溶液和1ml福林試劑溶液，混勻後置40℃水浴中20min，加蒸餾水定容至20ml。空白對照，樣品中先加入三氯乙酸使酶失活，再加入酪蛋白溶液，以後操作步驟同上。用分光光度計測定od660的值。在上述條件下定義為每分鐘每毫升粗酶液產生lμmol酪氨酸為一個酶活單位(u)。

2.3產澱粉酶複選

2.3.1標準曲線的製作

取19支20ml刻度試管，滅菌乾燥，按表1配置各種濃度的麥芽糖溶液。(每個濃度做3個平行)

表3澱粉酶標準曲線的製作

向上述不同濃度的麥芽糖溶液中分別加入2mldns溶液，搖勻後置沸水浴中5min，然後流水冷卻，加蒸餾水定容至20ml。用分光光度計于波長520nm處，以不含麥芽糖的0號試管為空白對照，分別測定其吸光度值。並建立通過吸光度值求麥芽糖的回歸方程。

2.3.2粗酶液澱粉酶活力測定

將活化的芽孢桿菌菌液接種於種子培養基ⅲ中，37℃培養12h，然後以5％的接種量接種於發酵培養基ⅲ中，搖床培養160r/min，37℃培養48h，發酵24h後補加碳酸鈣。發酵後離心，收集上清液即為待測粗酶液。按以下順序操作：取20ml具塞刻度試管，預先滅菌乾燥，編號。取粗酶液1.00ml加入2％的可溶性澱粉lml，蒸餾水3ml，於60℃水浴中預熱5min，加入0.1mol/l檸檬酸緩衝液(ph6.0)lml。於60℃水浴中保溫30min，加入1.5mldns溶液，沸水浴5min，流水迅速冷卻，加蒸餾水定容至20ml。空白對照加底物之前置於沸水浴中10min使酶失活，其餘步驟同上。定容，搖勻，用分光光度計測定od520的值。在上述條件下定義為每分鐘每毫升粗酶液產生lμmol麥芽糖為一個酶活單位(u)。

根據產酶初選試驗結果，產纖維素酶複選試驗選取染色圈直徑/菌落直徑≥1.90的19株菌株、產蛋白酶複選試驗選取染色圈直徑/菌落直徑＞1.97的31株菌株、產澱粉酶複選試驗選取染色圈直徑/菌落直徑≥1.23的16株菌株進行試驗。產酶複選試驗的結果與產酶初選試驗結果基本一致，進一步證明菌株bswj2017003具有產纖維素酶、蛋白酶和澱粉酶的能力，且該菌株具有較高的產纖維素酶、蛋白酶和澱粉酶能力。

實施例3枯草芽孢桿菌菌粉的製備

將冷凍保存的枯草芽孢桿菌bswj2017003在營養肉湯培養基中活化後接種到固體培養基(黃豆粉1.3％，玉米粉1.3％，麩皮0.5％，蛋白腖0.3％，葡萄糖2％，牛肉膏0.1％，氯化鈉0.5％，瓊脂1.2％，餘量為瓊脂，以上質量百分含量為100％，ph6.5-7.5)中培養72～96h，期間挑取菌落鏡檢，當形成大量芽孢時，收集菌體，按1:100的比例加入適量載體(玉米粉等)，65℃烘乾製備得到枯草芽孢桿菌菌粉，稀釋法檢測菌粉活菌數。

實施例4枯草芽孢桿菌菌粉在提高獺兔生長性能中的應用

1、動物試驗及試驗設計

120隻35日齡斷奶獺兔(1000±200g)適應性飼養一周後，隨機分成6個處理組，每個處理組20隻獺兔。第1組為空白對照組，飼餵不添加抗生素的基礎日糧；第2-6組為枯草芽孢桿菌菌粉試驗組，飼料中枯草芽孢桿菌菌粉添加量分別為1.0×104、1.0×105、1.0×106、1.0×107、1.0×108cfu/g，試驗周期為8周，試驗時間為2016年11月-2017年1月。基礎日糧配方見表4。參照nutritionoftherabbit(2010第二版)兔飼養標準配製。

表4基礎日糧配方和營養成分

註：每公斤飼料中維生素與微量元素含量：mn90mg；zn50mg；fe90mg；cu10mg；i0.4mg；se0.2mg；co0.4mg；va5000iu；vd3500iu；ve10iu；vk0.5mg；vb11.5mg；vb26.0mg；泛酸12mg；煙酸35mg；vb66.0mg；；葉酸0.8mg；vb120.01mg；生物素0.18mg

2、動物試驗方法

採用疊層籠養，1隻/籠。自然通風，自由採食和飲水。

3、生長性能指標檢測

分別在試驗期第1、8、15、22、29、36、43、50、57天早上七點空腹稱重，統計每周採食量，計算每周和1-8周的日採食量、日增重和料重比指標。

4、腸道酶活檢測

試驗第57天，第1組、第3組、第4組、第5組每個組隨機選取6隻獺兔，無菌分離出十二指腸、空腸、迴腸、盲腸，收集其內容物，按上述酶活測定方法測定十二指腸、空腸和迴腸內容物的蛋白酶和澱粉酶活力，以及盲腸內容物的cmc酶和濾紙酶活力。一個酶活單位(u)的定義為每g腸道內容物在上述條件下每分鐘產生lμmol底物所需的酶量。

5、統計方法

試驗數據採用spss軟體對數據進行one-wayanova分析，以p＜0.05為顯著水平，試驗數值以「平均值±標準差」表示。

6、結果分析

6.1、芽孢桿菌產酶初選

表5芽孢桿菌產纖維素酶初選

結果顯示(表5)，通過cmc-na平板培養、染色，觀察，測量，枯草芽孢桿菌bswj2017003產生染色圈，染色圈直徑/菌落直徑比值為1.94。

表6芽孢桿菌產蛋白酶初篩

結果顯示(表6)，通過酪素平板培養，觀察，測量，枯草芽孢桿菌bswj2017003產生透明圈，染色圈直徑/菌落直徑比值為2.00。

表7芽孢桿菌產澱粉酶初篩

結果顯示(表7)，通過澱粉平板培養、染色，觀察，測量，枯草芽孢桿菌bswj2017003產生透明圈，染色圈直徑/菌落直徑比值為1.32。

6.2、芽孢桿菌產酶復篩

表8芽孢桿菌產纖維素酶、蛋白酶、澱粉酶復篩

結果顯示(表8)，枯草芽孢桿菌bswj2017003的cmc酶、濾紙酶、蛋白酶和澱粉酶活力分別為15.40、2.19、6.56、3.54u/ml。

6.3、枯草芽孢桿菌對獺兔採食量的影響

表9枯草芽孢桿菌對獺兔日採食量的影響(g/天)

結果顯示(表9)，試驗各組之間的採食量存在差異，第1、3、5、6、7、8周，1-8周試驗組獺兔日採食量低於空白對照組。

6.4、枯草芽孢桿菌對獺兔日增重的影響

表10枯草芽孢桿菌對獺兔日增重的影響(g/天)

註：結果表示為平均值±標準差，同列數據附不同字母者表示差異顯著(p<0.05)，以下各表同。

結果顯示(表10)，各組之間的體重差異存在差異，但是與添加枯草芽孢桿菌的劑量之間很難找到明顯的規律。從試驗全程來看，與對照組相比，各試驗組的差異不顯著。

6.5、枯草芽孢桿菌對獺兔料重比的影響

表11枯草芽孢桿菌對獺兔料重比的影響

結果顯示(表11和圖2)，與對照組相比，除第3周第6組、第4周第6組、第7周第3組的料重比增加外，試驗期間，各試驗組的料重比都有下降的趨勢，且第4組的料重比顯著降低；從試驗全程來看，與對照組相比，第4組、第5組的料重比顯著降低，這表明添加1.0×106cfu/g、1.0×107cfu/g的枯草芽孢桿菌可提高飼料轉化率，從而降低料重比。

6.6、枯草芽孢桿菌對獺兔腸道酶活的影響

表12枯草芽孢桿菌對獺兔腸道酶活的影響

根據1-8周料重比的結果，在第2-6組中選取料重比較小的3個組(第3組、第4組、第5組)，加上第1組(作為對照)，共4個組進行後面的試驗。

結果顯示(表12)，與對照組相比，第3組除十二指腸澱粉酶、空腸蛋白酶、迴腸澱粉酶外，其它腸道酶活顯著升高，第4組、第5組的十二指腸、空腸、迴腸的蛋白酶和澱粉酶以及盲腸的cmc酶和濾紙酶均顯著升高。這表明添加1.0×106cfu/g和1.0×107cfu/g的枯草芽孢桿菌可顯著改善腸道酶活，促進營養物質的消化吸收，進而提高獺兔的生產性能。

綜上所述，動物試驗結果表明，上述枯草芽孢桿菌以1.0×106～107cfu/g的劑量添加到斷奶獺兔的基礎日糧中，飼餵8周後，獺兔的日料重比顯著增加，腸道酶活顯著升高，促進了獺兔對營養物質的消化吸收，從而提高了獺兔的生長性能。顯示本發明所述的枯草芽孢桿菌具有良好的提高獺兔生長性能的作用，對獺兔規模化養殖具有較大的意義。

上述說明示出並描述了發明的若干優選實施例，但如前所述，應當理解發明並非局限於本文所披露的形式，不應看作是對其他實施例的排除，而可用於各種其他組合、修改和環境，並能夠在本文所述發明構想範圍內，通過上述教導或相關領域的技術或知識進行改動。而本領域人員所進行的改動和變化不脫離發明的精神和範圍，則都應在發明所附權利要求的保護範圍內。

sequencelisting

四川農業大學四川省草原科學研究院

一種獺兔源枯草芽孢桿菌及其在提高獺兔生長性能中的應用

2017

1

patentinversion3.3

1

1073

dna

獺兔源枯草芽孢桿菌

1

gtgatacggagctataatgcagtcgagcggacagatgggagcttgctccctgatgttagc60

ggcggacgggtgagtaacacgtgggtaacctgcctgtaagactgggataactccgggaaa120

ccggggctaataccggatgcttgtttgaaccgcatggttcaaacataaaaggtggcttcg180

gctaccacttacagatggacccgcggcgcattagctagttggtgaggtaatggctcacca240

aggcaacgatgcgtagccgacctgagagggtgatcggccacactgggactgagacacggc300

ccagactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccgcaatggacgaaagtctgacgga360

gcaacgccgcgtgagtgatgaaggttttcggatcgtaaagctctgttgttagggaagaac420

aagtaccgttcgaatagggcggtaccttgacggtacctaaccagaaagccacggctaact480

acgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggaattattgggcgta540

aagggctcgcaggcggtttcttaagtctgatgtgaaagcccccggctcaaccggggaggg600

tcattggaaactggggaacttgagtgcagaagaggagagtggaattccacgtgtagcggt660

gaaatgcgtagagatgtggaggaacaccagtggcgaaggcgactctctggtctgtaactg720

acgctgaggagcgaaagcgtggggagcgaacaggattagataccctggtagtccacgccg780

taaacgatgagtgctaagtgttacggggtttccgccccttagtgctgcagctaacgcatt840

aagcactccgcctggggagtacggtcgcaagactgaaactcaaggaattgacgggggccc900

gcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagcacgcgaagaaccttaccaggtctga960

catcctctgacatcctagagataggacgtccccttcggggcagagtgacagtggtgcatg1020

atgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaa1073