聚多巴胺納米球生物傳感器的製造方法
2023-08-13 15:14:46
聚多巴胺納米球生物傳感器的製造方法
【專利摘要】本發明公開了一種聚多巴胺納米球生物傳感器，其以直徑為40～400nm的聚多巴胺納米球為載體，聚多巴胺納米球的表面吸附標記有螢光分子的寡核苷酸。本發明還公開了上述的傳感器在螢光檢測DNA和凝血酶中的應用。本發明提供的聚多巴胺納米球生物傳感器以聚多巴胺納米球為載體吸附標記有螢光分子的寡核苷酸，利用聚多巴胺納米球優異的螢光猝滅特性從而有效的降低背景信號可提高檢測的靈敏度，只需通過普通的螢光分光光度計就可以實現信號的採集，再通過變化表面吸附的寡核苷酸，從而大大的擴寬了其檢測樣品範圍。
【專利說明】聚多巴胺納米球生物傳感器
【技術領域】
[0001]本發明屬於生物檢測【技術領域】，具體涉及一種聚多巴胺納米球生物傳感器，還涉及該傳感器在檢測DNA和凝血酶中的應用。
【背景技術】
[0002]聚多巴胺是一種在人體中普遍存在的真黑素類高分子物質，具有良好的生物相容性和可生物降解的特點。聚多巴胺可以比較容易的通過鹼性條件下多巴胺的自聚合得到。聚多巴胺具有優異的螢光猝滅特性，可以有效的猝滅很寬的波譜範圍內的螢光分子的螢光。同時聚多巴胺對寡核苷酸的不同構象具有不同的作用力，能區分寡核苷酸的不同的構象。基於此原理，我們構建了吸附寡核苷酸的聚多巴胺納米球生物傳感器，通過表面吸附的寡核苷酸的對DNA和凝血酶的特異性識別作用，引起的寡核苷酸構象的變化帶來的螢光強度的變化，特異性的螢光檢測DNA和凝血酶。
【發明內容】
[0003]技術問題:本發明最後要解決的技術問題，是提供上述生物傳感器在檢測DNA和凝血酶中的應用。
[0004]技術方案:為解決上述技術問題，本發明提供了一種聚多巴胺納米球生物傳感器，其以直徑為40?400nm的聚多巴胺納米球為載體，聚多巴胺納米球的表面吸附標記有螢光分子的寡核苷酸。
[0005]作為優選，所述聚多巴胺納米球的直徑為300?400nm。
[0006]作為另一種優選，所述螢光分子為羧基螢光素(FAM)。
[0007]作為另一種優選，所述寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
[0008]本發明還提供了上述聚多巴胺納米球生物傳感器的構建方法，包括如下步驟:
[0009](I)鹽酸多巴胺在鹼性溶液中15?80°C反應2?72h，得聚多巴胺懸浮液；
[0010](2)步驟(I)製得的懸浮液在5000?20000rpm條件下離心10?30min，去除上清，沉澱加入高純水重懸；重複2?4次，沉澱烘乾，得聚多巴胺納米球；
[0011](3)將濃度為0.05?lmg/mL聚多巴胺納米球的水溶液和濃度為10?IOOnmol/L的標記有螢光分子的寡核苷酸的Tris-HCl緩衝溶液按(I?9):(1?9)的體積混合，振蕩反應10?60min,即得。
[0012]其中，步驟(I)中，所述鹼性溶液為體積比為(I?9):(1?9)的水與醇的混合溶液，其PH為7.5?11，鹽酸多巴胺與鹼性溶液的重量體積比為0.1?5.0mg =ImL ;或者所述鹼性溶液為體積比為(I?9): (I?9)的Tris的水溶液與醇的混合溶液，其pH為7.5?10.5，Tris的水溶液濃度為5?25mmol/L ;或者所述鹼性溶液為體積比為(I?9): (I?9)的Tris的水溶液與異丙醇的混合溶液，其pH為7.5?10.5, Tris的水溶液濃度為5?25mmol/L。
[0013]其中，步驟(2)中，標記有螢光分子的寡核苷酸為羧基螢光素(FAM)標記的寡核苷酸，所述寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
[0014]本發明還提供了上述聚多巴胺納米球生物傳感器在檢測DNA中的應用。
[0015]所述應用，具體為:利用聚多巴胺納米球生物傳感器檢測DNA含量，包括以下步驟:
[0016](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含140mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化隹丐；
[0017](2)標準曲線繪製:用緩衝溶液配製不同濃度的DNA標準樣品溶液，將DNA標準樣品溶液和聚多巴胺納米球生物傳感器溶液等體積混合，37°C下振蕩反應30?120min ;其中，DNA標準樣品的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示；螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為470?495納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的DNA標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0018](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測DNA樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測DNA樣品中DNA的濃度。
[0019]本發明還提供了上述聚多巴胺納米球生物傳感器在檢測凝血酶中的應用。
[0020]所述應用，具體為:利用聚多巴胺納米球生物傳感器檢測凝血酶含量，包括以下步驟:
[0021](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含140mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化隹丐；
[0022](2)標準曲線繪製:用緩衝溶液配製不同濃度的凝血酶溶液，將凝血酶溶液和聚多巴胺納米球生物傳感器溶液等體積混合，37°C下振蕩反應30?120min ;螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為470?495納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的凝血酶標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0023](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測凝血酶樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測凝血酶樣品中凝血酶的濃度。
[0024]有益結果:本發明提供的聚多巴胺納米球生物傳感器以聚多巴胺納米球為載體吸附標記有螢光分子的寡核苷酸，利用聚多巴胺納米球優異的螢光猝滅特性從而有效的降低背景信號可提高檢測的靈敏度，只需通過普通的螢光分光光度計就可以實現信號的採集，再通過變化表面吸附的寡核苷酸，從而大大的擴寬了其檢測樣品範圍。該傳感器的普適性和實用性為生物分子的特異性檢測提供了一種極好的方法。
[0025]本發明利用DNA的特異性的識別作用，實現對DNA的高靈敏檢測，檢測DNA的線性範圍為0.78-25nmol/L，特異性好，可以區分單鹼基錯配。
[0026]同時利用適配體的特異性的識別作用，實現對凝血酶的高靈敏檢測，檢測凝血酶的線性範圍為0.78-37.5nmol/L，特異性好，可以避免牛血清白蛋白BSA、人免疫球蛋白IgG和溶解酵素Lysozyme的幹擾。
[0027]本發明提供的生物傳感器的構建及應用方便快捷，在提高檢測靈敏度的同時，能夠簡化檢測過程，縮短檢測時間。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0028]圖1聚多巴胺納米球的掃描電子顯微鏡圖。[0029]圖2聚多巴胺納米球的紅外譜圖。
[0030]圖3聚多巴胺納米球的拉曼譜圖。
[0031]圖4檢測DNA濃度的螢光發射譜圖(A)及信號相關性曲線(B)。
[0032]圖5檢測DNA的特異性圖。
[0033]圖6檢測凝血酶濃度的螢光發射譜圖(A)及信號相關性曲線(B)。
[0034]圖7檢測凝血酶的特異性圖。
【具體實施方式】
[0035]根據下述實施例，可以更好地理解本發明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的內容僅用於說明本發明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發明。
[0036]實施例1:生物傳感器的構建。
[0037]以直徑為300?400nm的聚多巴胺納米球為載體吸附標記有羧基螢光素的寡核苷酸，其中標記有螢光分子的寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，構建聚多巴胺納米球生物傳感器，包括以下步驟:
[0038](I)將體積比為5:2的10mmol/L的Tris溶液與異丙醇混合,調混合溶液pH至10.3，混合溶液中加入鹽酸多巴胺，鹽酸多巴胺與混合溶液的重量體積比為Img:lmL，室溫攪拌反應72h ；
[0039](2)步驟(I)得到的懸浮液,在IOOOOrpm條件下,離心IOmin,去除上清,取沉澱加入高純水重懸，重複離心與重懸的步驟3次，最後得到的沉澱烘乾，得聚多巴胺納米球；
[0040](3)將濃度為0.2mg/mL的聚多巴胺納米球的水溶液和濃度為40nmol/L的Tris-HCl緩衝溶液配製的標記有螢光分子的寡核苷酸溶液按5:5的體積混合，振蕩IOmin即得。
[0041]實施例2:生物傳感器的構建。
[0042]以直徑為300?400nm的聚多巴胺納米球為載體吸附標記有羧基螢光素的寡核苷酸，其中標記有螢光分子的寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，構建聚多巴胺納米球生物傳感器，包括以下步驟:
[0043](I)將體積比為5:2的10mmol/L的Tris溶液與異丙醇混合,調混合溶液pH至10.3，混合溶液中加入鹽酸多巴胺，鹽酸多巴胺與混合溶液的重量體積比為Img:lmL，室溫攪拌反應72h ；
[0044](2)步驟(I)得到的懸浮液，在IOOOOrpm條件下，離心lOmin，去除上清，取沉澱加入高純水重懸，重複離心與重懸的步驟3次，最後得到的沉澱烘乾，得聚多巴胺納米球；
[0045](3)將濃度為0.5mg/mL的聚多巴胺納米球的水溶液和濃度為60nmol/L的Tris-HCl緩衝溶液配製的標記有螢光分子的寡核苷酸溶液按5:5的體積混合，振蕩IOmin即得，其寡核苷酸序列為:5』 -FAM-GGTTGGTGTGGTTGG-3』。
[0046]實施例3:生物傳感器的構建。
[0047]以直徑為300?400nm的聚多巴胺納米球為載體吸附標記有羧基螢光素的寡核苷酸，其中標記有螢光分子的寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，構建聚多巴胺納米球生物傳感器，包括以下步驟:[0048](I)將體積比為1:9的5mmol/L的Tris溶液與異丙醇混合,調混合溶液pH至7.5,混合溶液中加入鹽酸多巴胺，鹽酸多巴胺與混合溶液的重量體積比為0.lmg:lmL，15°C反應 36h ；
[0049](2)步驟(I)得到的懸浮液，在5000rpm條件下，離心30min，去除上清，取沉澱加入高純水重懸，重複離心與重懸的步驟4次，最後得到的沉澱烘乾，得聚多巴胺納米球；
[0050](3)將濃度為0.05mg/mL的聚多巴胺納米球的水溶液和濃度為lOnmol/L的Tris-HCl緩衝溶液配製的標記有螢光分子的寡核苷酸溶液按9:1的體積混合，振蕩30min即得，其寡核苷酸序列為:5』 -FAM-GGTTGGTGTGGTTGG-3』。
[0051]實施例4:生物傳感器的構建。
[0052]以直徑為300?400nm的聚多巴胺納米球為載體吸附標記有羧基螢光素的寡核苷酸，其中標記有螢光分子的寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，構建聚多巴胺納米球生物傳感器，包括以下步驟:
[0053](I)將體積比為9:1的25mmol/L的Tris溶液與異丙醇混合,調混合溶液pH至
10.5，混合溶液中加入鹽酸多巴胺，鹽酸多巴胺與混合溶液的重量體積比為5.0mg:lmL,80°C反應 2h ；
[0054](2)步驟(I)得到的懸浮液,在20000rpm條件下,離心20min,去除上清,取沉澱加入高純水重懸，重複離心與重懸的步驟2次，最後得到的沉澱烘乾，得聚多巴胺納米球；
[0055](3)將濃度為lmg/mL的聚多巴胺納米球的水溶液和濃度為100nmol/L的Tris-HCl緩衝溶液配製的標記有螢光分子的寡核苷酸溶液按1:9的體積混合，振蕩60min即得，其寡核苷酸序列為:5』 -FAM-GGTTGGTGTGGTTGG-3』。
[0056]實施例5
[0057]與實施例3基本相同，不同之處僅在於:步驟(I)中，採用體積比為1:9的水與異丙醇混合代替體積比為1:9的5mmol/L的Tris溶液與異丙醇混合,調pH至7.5,鹽酸多巴胺與混合溶液的重量體積比為0.1mg:lmL。
[0058]實施例6
[0059]與實施例4基本相同，不同之處僅在於:步驟(I)中，採用體積比為9:1的水與異丙醇混合代替體積比為9:1的25mmol/L的Tris溶液與異丙醇混合,調pH至11鹽酸多巴胺與混合溶液的重量體積比為5.0mg:lmL。
[0060]實施例7
[0061]利用實施例1製得的生物傳感器檢測DNA含量，包括如下步驟:
[0062](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含140mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化隹丐；
[0063](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的不同濃度的DNA標準樣品溶液與所述的聚多巴胺納米球生物傳感器的溶液等體積混合，體積分別為200yL，37°C下振蕩反應60min，DNA標準樣品的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為470納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的DNA標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0064](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測DNA樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測DNA樣品中DNA的濃度，結果見圖4。[0065]實施例8
[0066]利用實施例2製得的生物傳感器檢測DNA特異性，包括如下步驟:
[0067](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含140mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化隹丐；
[0068](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的不同濃度的對照DNA樣品溶液與所述的聚多巴胺納米球生物傳感器器的溶液等體積混合，體積分別為200μ L，37°C下振蕩反應120min，對照DNA樣品的核苷酸序列如SEQ ID No:3、SEQ IDNo:4、SEQ ID No:5所示。螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，
[0069]螢光的激發波長為470納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的DNA標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0070](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測DNA樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測DNA樣品中DNA的濃度，結果見圖5。
[0071]實施例9
[0072]利用實施例3製得的生物傳感器檢測DNA含量，包括如下步驟:
[0073](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含50mmol/L氯化鈉,0.5mmol/L氯化鉀,0.2mmol/L氯化鎂和0.2mmol/L氯化隹丐；
[0074](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的不同濃度的DNA標準樣品溶液與所述的聚多巴胺納米球生物傳感器的溶液等體積混合，體積分別為200yL，37°C下振蕩反應30min，DNA標準樣品的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為495納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的DNA標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0075](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測DNA樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測DNA樣品中DNA的濃度。
[0076]實施例10
[0077]利用實施例5製得的生物傳感器檢測DNA含量，包括如下步驟:
[0078](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含200mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化隹丐；
[0079](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的不同濃度的DNA標準樣品溶液與所述的聚多巴胺納米球生物傳感器器的溶液等體積混合，體積分別為200μ L，37°C下振蕩反應120min, DNA標準樣品的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示。
[0080]螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為450納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的DNA標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0081](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測DNA樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測DNA樣品中DNA的濃度。
[0082]實施例11
[0083]利用實施例4製得的生物傳感器檢測凝血酶含量，包括如下步驟:
[0084](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含140mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化隹丐；[0085](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的不同濃度的凝血酶溶液與所述的生物傳感器的溶液等體積混合，體積分別為200 μ L，37°C下振蕩反應60min。螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為470納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的凝血酶標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0086](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測凝血酶樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測凝血酶樣品中凝血酶的濃度，結果見圖6。
[0087]實施例12
[0088]利用實施6製得的生物傳感器檢測凝血酶特異性，包括如下步驟:
[0089](I)配製溶液:緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含140mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化?丐；。
[0090](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的對照樣品溶液與所述的生物傳感器的溶液等體積混合，體積分別為20(^匕371:下振蕩反應601^11，對照樣品分別為:牛血清白蛋白BSA、人免疫球蛋白IgG、溶解酵素Lysozyme。螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為470納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的凝血酶標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0091](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測凝血酶樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測凝血酶樣品中凝血酶的濃度，結果見圖7。
[0092]實施例1 3
[0093]利用實施例1製得的生物傳感器檢測凝血酶含量，包括如下步驟:
[0094](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含50mmol/L氯化鈉,0.5mmol/L氯化鉀,0.2mmol/L氯化鎂和lmmol/L氯化鈣；
[0095](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的不同濃度的凝血酶溶液與所述的生物傳感器的溶液等體積混合，體積分別為200 μ L，37°C下振蕩反應30min。螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為480納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的凝血酶標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0096](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測凝血酶樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測凝血酶樣品中凝血酶的濃度。
[0097]實施例14
[0098]利用實施例6製得的生物傳感器檢測凝血酶含量，包括如下步驟:
[0099](I)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含200mmol/L氯化鈉,5mmol/L氯化鉀，lmmol/L氯化鎂和0.2mmol/L氯化鈣；
[0100](2)標準曲線繪製:將用緩衝溶液配製的不同濃度的凝血酶溶液與所述的生物傳感器的溶液等體積混合，體積分別為200yL，37°C下振蕩反應120min。螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為495納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的凝血酶標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線；
[0101](3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測凝血酶樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測凝血酶樣品中凝血酶的濃度。
【權利要求】
1.一種聚多巴胺納米球生物傳感器，其特徵在於:以直徑為40~400nm的聚多巴胺納米球為載體，聚多巴胺納米球的表面吸附標記有螢光分子的寡核苷酸。
2.根據權利要求1所述的一種聚多巴胺納米球生物傳感器，其特徵在於:所述聚多巴胺納米球的直徑為300~400nm。
3.根據權利要求1所述的一種聚多巴胺納米球生物傳感器，其特徵在於:所述螢光分子為羧基螢光素。
4.根據權利要求1所述的一種聚多巴胺納米球生物傳感器，其特徵在於:所述寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示。
5.權利要求1-4任一項所述的聚多巴胺納米球生物傳感器的構建方法，其特徵在於:包括如下步驟: (1)鹽酸多巴胺在鹼性溶液中15~80°C反應2~72h，得聚多巴胺懸浮液； (2)步驟(1)製得的懸浮液在5000~20000rpm條件下離心10~30min，去除上清，沉澱加入高純水重懸；重複2~4次，沉澱烘乾，得聚多巴胺納米球； (3)將濃度為0.05~lmg/mL聚多巴胺納米球的水溶液和濃度為10~lOOnmol/L的標記有螢光分子的寡核苷酸的Tris-HCl緩衝溶液按(1~9): (1~9)的體積混合，振蕩反應10~60min,即得。
6.根據權利要求5所述的生物傳感器的構建方法，其特徵在於:步驟(1)中，所述鹼性溶液為體積比為(1~9): (1~9)的水與醇的混合溶液，其pH為7.5~11，鹽酸多巴胺與鹼性溶液的重量體積比為0.1~5.0mg:lmL ;或者所述鹼性溶液為體積比為(I~9): (I~9)的Tris的水溶液與醇的混合溶液，其pH為7.5~10.5, Tris的水溶液濃度為5~25mmol/L ;優選地，所述鹼性溶液為體積比為(1~9): (1~9)的Tris的水溶液與異丙醇的混合溶液，其pH為7.5~10.5，Tris的水溶液濃度為5~25mmol/L ;步驟(2)中，標記有螢光分子的寡核苷酸為羧基螢光素(FAM)標記的寡核苷酸，所述寡核苷酸的核苷酸序列如SEQ IDNo:1所示。
7.權利要求1-4任一項所述的聚多巴胺納米球生物傳感器在檢測DNA中的應用。
8.如權利要求7所述的應用，其特徵在於:利用聚多巴胺納米球生物傳感器檢測DNA含量，包括以下步驟: (1)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含50~200mmol/L氯化鈉,0.5~5mmol/L氯化鉀,0.2~lmmol/L氯化鎂和0.2~lmmol/L氯化鈣； (2)標準曲線繪製:用緩衝溶液配製不同濃度的DNA標準樣品溶液，將DNA標準樣品溶液和聚多巴胺納米球生物傳感器溶液等體積混合，37°C下振蕩反應30~120min ;其中，DNA標準樣品的核苷酸序列如SEQ ID No:2所示；螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為470~495納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的DNA標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線； (3)含量測定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測DNA樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測DNA樣品中DNA的濃度。
9.權利要求1-4任一項所述的聚多巴胺納米球生物傳感器在檢測凝血酶中的應用。
10.如權利要求9所述的應用，其特徵在於:利用聚多巴胺納米球生物傳感器檢測凝血酶含量，包括以下步驟: (1)緩衝溶液配製:配製20mmol/L的Tris-HCl緩衝溶液，其pH為7.4，含50~200mmol/L氯化鈉,0.5~5mmol/L氯化鉀,0.2~lmmol/L氯化鎂和0.2~lmmol/L氯化鈣； (2)標準曲線繪製:用緩衝溶液配製不同濃度的凝血酶溶液，將凝血酶溶液和聚多巴胺納米球生物傳感器溶液等體積混合，37°C下振蕩反應30~120min ;螢光分光光度法分別測定各溶液的螢光發射圖譜，螢光的激發波長為470~495納米，發射圖譜的波長範圍為500-650納米，根據不同濃度的凝血酶標準樣品溶液對應的發射峰的強度值，得標準曲線； (3)含量測 定:採用與步驟(2)相同的方法，測定待測凝血酶樣品發射峰的強度值，由標準曲線計算得待測凝血酶樣品中凝血酶的濃度。
【文檔編號】G01N33/545GK103884838SQ201410127769
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2014年3月31日 優先權日:2014年3月31日
【發明者】許丹科, 羌維兵, 李偉, 李曉青, 陳翔 申請人:南京大學