一種治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法

2023-08-13 12:28:56

專利名稱：：一種治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法
技術領域：
：本發明涉及中藥
技術領域：
，具體涉及一種治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法。
背景技術：
：心腦血管疾病是導致人類死亡的第一病種，隨著社會生活水平的提高以及人口的老齡化，心腦血管疾病藥物的研究成為藥物開發的熱點。冠狀動脈粥樣硬化性心臟病，簡稱冠心病，其病因是由於一些不能滲進動脈壁的血脂類物質如膽固醇、甘油三脂等，沉積在動脈內膜上形成"粥樣斑塊，，後，使得原來富有彈性的動脈變硬，隨著動脈內膜上的粥樣斑塊範圍加大，導致血管變窄甚至阻塞，引起心肌缺血、缺氧或壞死。缺血性腦中風(腦梗塞)，在急性發作期以及在中風前期和恢復期均是其預防和治療的重要時機。中醫藥在上述疾病的預防和治療中發揮著重要的作用，尤其是以丹參為主要原料的單方或複方製劑均有著確切的療效，如複方丹參片、複方丹參注射液、精製冠心顆粒、樂麥膠嚢等，這些製劑中丹參發揮著主要作用。近幾年來，關幹丹參的提取及丹參複方製劑臨床應用的報導很多。出現了很多劑型，如複方丹參片、複方丹參滴丸、複方丹參膠裡、複方丹參顆粒、複方丹參氣霧劑、複方丹參口服液等。這些產品的研製成功為丹參的臨床應用開闢了更為廣闊的前景。但這些產品多是採用水煮醇沉法或醇提取的舊工藝，提取過程中溫度較高，丹參的水溶性有效成分丹酚酸B大部分丟失或被破壞。另外傳統的提取工藝所得產品原生藥中非活性成份含量很高，提取物重量一般為原生藥的20%至50°/。左右，其中大部分為非活性物質。傳統的丹參製劑多採用醇提法。如根據《中國藥典》2005年版一部複方丹參片中丹參需提取三次，第一次加乙醇回流1.5小時，濾過，濾液回收乙醇並濃縮至適量，備用；藥渣加50%乙醇加熱回流1.5小時，提取液濾過，濾液回收乙醇並濃縮至適量，備用；藥渣加水煎煮2小時，煎液濾過，濾液濃縮至適量，這種工藝所製成的複方丹4參片中的丹參有效成分丹酚酸B由於長時間受熱而損失嚴重；發明專利(專利號ZL02157377.8)"—種治療心腦血管疾病的複方丹參製劑及其製備方法，，中丹參水提時沒有控制溫度，使大量的丹酚酸B在高溫受熱下破壞成活性較低的丹參素和原兒茶醛。
發明內容本發明所要解決的問題是如何提供一種治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，該製備方法能克服現有技術中的不足，製備方法簡單合理，製備出的藥物有效成分破壞少，轉移率高，生物利用度高，毒副作用小。本發明所提出的技術問題是這樣解決的提供一種治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於①取以下重量份的處方丹參藥材40~90份三七藥材55(H分水片0.510份②取丹參藥材，切片或粉碎成粗顆粒，2080。C水提取24次，分別加水4~12倍量，提取1~3小時，該步驟中有效成分沒有遭到破環，轉移率高，原製劑是直接加水煎煮，有效成分大量破壞，轉移率低；③取三七藥材，切片或粉碎成粗顆粒，加水煎煮提取2~4次，分別加水4~12倍量，煎煮提取1~3小時，現有技術中直接以生藥入藥，生物利用度低，易帶入泥土中的重金屬和其他雜質；④合併步驟②所得的丹參水提液與步驟③所得的三七水提液，調節pH=l~7，攪勻，靜置0.512小時，濾過或離心，上清液過大孔吸附樹脂柱，水洗至流出液還原糖反應呈陰性，棄水洗液，再用30~100%乙醇洗脫，採集洗脫液，該步驟的作用是除去大部分的蛋白質、糖類等吸溼性成分，穩定性更好，可減少服用量，同時降低了包裝成本；⑤將步驟④所得的洗脫液回收乙醇，濃縮乾燥，得丹參三七合提物；⑥加入水片，加入輔料製成片劑、膠嚢、軟膠嚢、口服液、滴丸、噴霧劑或顆粒劑等。按照本發明所提供的治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於，在步驟⑤中，洗脫液回收乙醇，濃縮至相對密度1.05~1.25,加乙醇至含醇量達70~90%,冷藏保存2~24小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮千燥，得丹參三七合提物，該步驟可除去一些色素類無效成分，進一步純化樣品，減少服用量，穩定性更好。按照本發明所提供的治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於，大孔吸附樹脂為非極性、弱極性或極性大孔吸附樹脂，型號包括AB-8，HPD-100,D101,DA201,DM130,WLD-3，YPR-II，X5，Dx畫5，NKA-9等。本發明的有益效果採用本發明所得的藥物有效成分破壞少，轉移率高，生物利用度高，重金屬等雜質含量微少，穩定性好，服用量小，成本低廉，功效明顯，毒副作用小，服用方便，質量穩定可靠，具有很好的臨床推廣運用價值。具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步描述實施例1稱取丹參藥材13.5kg,切片，80。C水溫浸^是取3次，每次所用水的重量為藥材重量的8倍，每次l小時，濾過，得濾液A;三七4.24kg，粉碎成粗顆粒，水煎煮提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的8倍，每次1.5小時，濾過，得濾液B;合併濾液B與濾液A，調節pH二3，攪勻，靜置1小時，離心，上清液通過預處理好的HPD-100大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液還原糖反應呈陰性，再用75%乙醇(洗脫劑)洗至流出液無色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度l.l,加乙醇至含醇量達80%,冷藏保存12小時，濾過，濾液回收乙醇並濃縮成浸膏，於70。C減壓(真空度-0.08Mpa)乾燥，得到幹浸膏l.lkg,粉碎，過5號篩，加入可溶性澱粉lkg、硬脂酸鎂20g、羧甲基澱粉鈉140g，混勻，制粒，乾燥。冰片240g,研細，與上述顆粒混勻，壓製成10000片，包薄膜衣。每片0.25g，相當於原生藥1.8g。所製得的樣品以下簡稱FDS片。上述製備方法中，所述的丹參的提取方法為浸提，提取次數可為24次，提取時間可為13小時，丹參飲片的水提溫度可為20~80°C;所述的三七提取方法為煎煮，提取次數可為2~4次，提取時間可為1~3小時；所述的洗脫劑所用乙醇濃度可為30-100%;冷藏溫度可為0~l(TC;所述的輔料可為藥學上可接受的輔料(例如澱粉、乳糖、微粉矽膠、滑石粉等)，可將本發明的中藥複方丹參製劑製成多種劑型。按以上方法製備的藥物，經檢測，丹酚酸B轉移率為82.1%，人參鬼苦Rgl、人參皂苷Rb,和三七皂苷R,的總量轉移率為90.3%，而出膏率由45.5%降為6.2%,表明該製備工藝科學合理，保留了藥物中主要有效成分，同時顯著減少了服用量，達到了精製的目的。實施例2稱取丹參藥材14kg,切片，70。C水溫浸提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的10倍，每次1小時，濾過，得濾液A;三七3.8kg，粉碎成粗顆粒，水煎煮提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的IO倍，每次2小時，濾過，得濾液B;合併濾液B與濾液A,調節pH-5，攪勻，靜置1小時，離心，上清液通過預處理好的AB-8大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液還原糖反應呈陰性，再用70%乙醇(洗脫劑)洗至流出液無色，收集洗脫液，回收乙醇並濃縮成浸膏，於75。C減壓(真空度-0.071^^&)乾燥，粉碎，得到浸膏粉1.2kg，過5號篩，加入1.4kg微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素O.lkg、滑石粉0.1kg混勻，制粒，乾燥。水片O.lkg，研細，與上述顆粒混勻，分裝，製成膠囊10000粒。每粒OJg，相當於原生藥1.8g。所製得的膠嚢以下簡稱FDS膠嚢。按以上方法製備的藥物，經檢測，丹酚酸B轉移率為84.5%，人參急苷Rg"人參皂苷Rb,和三七皂苷的總量轉移率為91.6%，而出膏率為6.7%。實施例3稱取丹參藥材13kg,切片，65。C水溫浸提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的9倍，每次1.5小時，濾過，得濾液A;三七4.78kg，切片，水煎煮提7取3次，每次所用水的重量為藥材重量的9倍，每次1.5小時，濾過，得濾液B;合併濾液B與濾液A，調節pH^3,攪勻，靜置1小時，離心，上清液通過預處理好的D-101大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液還原糖反應呈陰性，再用75%乙醇(洗脫劑)洗至流出液無色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度1.15,加95°/。乙醇至含醇量達85%,冷藏保存10小時，濾過，濾液回收乙醇並濃縮成浸膏，於65。C減壓(真空度-0.09Mpa)乾燥，粉碎，得到浸膏粉1.08kg,過5號篩，加入水片220g、丙二醇500g，混勻，加入1.7kg已熔融的聚乙二醇6000,在8(TC加溫下混勻，滴入甲基珪油中，製成滴丸10萬粒。每粒35mg,相當於原生藥0.18g。所製得的滴丸以下簡稱FDS滴丸。按以上方法製備的藥物，經檢測，丹酚酸B轉移率為83.5%,人參急苷Rg。人參皂苷Rbi和三七皂苷R,的總量轉移率為90.8%,出膏率為6.1%。原製劑的製法照2005年版藥典一部"複方丹參片"項下製法，稱取丹參藥材4.5kg，切片，加乙醇加熱回流1.5小時，提取液濾過，濾液回收乙醇並濃縮至適量，備用；藥渣加50%乙醇加熱回流1.5小時，提取液濾過，濾液回收乙醇並濃縮至適量，備用；藥渣加水煎煮2小時，煎液濾過，濾液濃縮至適量。三七藥材1.41kg，敘V年成細粉，與上述濃縮液和適量的輔料製成顆粒，乾燥。冰片80g研細，與上述顆粒混勻，壓製成10000片，包薄膜衣，即得。所製得的樣品以下簡稱複方丹參片。通過對實施例1、2、3所製備的樣品與複方丹參片在重金屬、砷鹽以及主要有效成分的轉移率比較，說明本發明所製得的樣品在除去雜質和有害成分的同時最大限度的保留了藥品有效成分，並且顯著的減少了服用量，達到了精製的目的。比較結果見表l。表l:重金屬、砷鹽、出膏率及丹酚酸B轉移率比較結果tableseeoriginaldocumentpage8試驗證明有益效果1:通過對實施例l、2、3所製備的樣品與複方丹參片體外抗氧化藥效對比，證明本發明製備方法的有益效杲。一、試-驗動物SD大鼠，20隻，雌雄各半，體重220-250g，清潔級，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物合格證號SCXK(滬)2003-0002。二、試S全方法1.微粒體製備大鼠放血處死，經肝門靜脈用TBS(0.1gKCl,4.0gNaCl，O.lgKH2P04,0.72gNa2HPO4/1.04gNa2HPO4.12H2O,加水至500ml)灌流後，取大鼠肝組織，剪碎，稱重，按1:4加入TBS，用高速勻漿機勻漿(20，000rpm)，冰浴下j喿作，每次約10s,間隔約10s，重複4~5次，成肝組織勻漿(25%勻漿)，10，000g離心20min，取上清，100，000g離心60min,取沉澱以1:10重新懸浮於30%甘油PBS(甘油PBS=30:70(v/v))中，-80°。保存(分裝於小管中)。用考馬斯亮藍法測定微粒體的蛋白含量。2.Fe^半胱氨酸誘發肝微粒體脂質過氧化的測定。2.1誘導過程反應液lml內含有樣吏粒體(l:10)100^1,lmmol/LFeSO450pl，10mmol/L半胱氨酸20pl，供試樣品FDS片、FDS膠嚢、FDS滴丸以及複方丹參片終濃度均為1.5mg原生藥/ml，對照蒸餾水10fd，0.01MpH7.4PBS820^1。上述溶液混勻後，在37。C下溫育30min,於4。C終止反應。2.2MDA含量測定/過氧化抑制率測定按丙二醛(MDA)測定試劑盒方法測定MDA,將上述反應液取100^1,按試劑盒要求在10ml試管中加樣後用旋渦混懸器混勻，試管口用封口膜紮緊，刺一'J、孑L，95。C水浴下加熱反應80min,取出後用流水冷卻，4000rpm離心10min，取上清液，在532nm處，lcm光徑，三蒸水調零，測定OD值。2.3數據處理求算出各受試樣品對丙二醛產量的抑制百分率[(溶劑對照值-測定值)/溶劑對照值xl00。/。],作為抗氧化活性指標，所有數據均經統計處理，數據以均悽bt標準差(X士S)表示。三、試驗結果試驗證明本發明製備方法所製得的樣品FDS片、FDS膠囊以及FDS滴丸在同等原生藥材量下體外抗氧化作用明顯強於複方丹參片。結果見表2。表2.FDS對大鼠肝微粒體脂質過氧化的抑制作用(i±s,n=10)組別劑量(原生藥/ml)MDA(nmol/ml)抑制率(％)蒸餾水對照11.7±3.9FDS片1.5mg原生藥/ml6.3±1.5**46.2FDS膠囊1.5mg原生藥/ml6.2±1.8**47.0FDS滴丸1.5mg原生藥/ml5.9±1.2**49.6複方丹參片1.5mg原生藥/ml8.4±2.9*28.2*P<0.05,**P<0.01與蒸餾水對照組相比。試驗證明有益效果2:通過對實施例1、2、3所製備的樣品與複方丹參片大鼠冠狀動脈結紮急性心肌缺血的影響的藥效對比，證明本發明製備方法的有益效果。一、試-瞼動物SD大鼠，60隻，雌雄各半，體重220-250g，清潔級，購自上海西普爾-必凱實驗動物有限公司，動物合格證號SCXK(滬)2003-0002。二、i式-驗方法1.給藥方法1.1給藥劑量本發明製備方法所製得的FDS片、FDS膠嚢、以及FDS滴丸與複方丹參片給藥劑量均為0.5g原生藥/kg/日。1.2藥物配製根據上述劑量，受試樣品均分別用0.5。/。CMC-Na研磨混懸至相應濃度，等體積給藥，假手術組和模型組給予相同體積的0.5%CMC-Na,受試樣品均為當天配製。1.3給藥體積lml/100g.BW1.4給藥途徑灌胃101.5給藥時間採用預防給藥，於每天上午灌胃給藥一次，連續7天。2.大鼠心肌缺血模型建立各組動物於最後1次給藥後30min,烏拉坦(10%,lml/100g),ip麻醉，固定，接動物呼吸機，同時監測心電圖(肢體n導聯)，經胸骨左緣開胸，暴露心臟，撕開心包膜，在肺動脈圓錐與左心耳間的冠狀靜脈下，用5/0帶線縫合針結紮左冠狀動脈，以心電圖T波顯著升高作為結紮成功指標，閉緊胸腔(排盡胸腔內空氣)，穩定呼吸約10min左右，去除呼吸機恢復自主呼吸。結紮4h後，頸動脈放血，分離血清，按試劑盒說明書進行MDA、SOD、LDH、CK等生化指標測定；處死動物，取出心臟染色，進行缺血面積測定。3.心力幾^:血面積的測定大鼠取出心臟，去除心房，心室用生理鹽水洗淨血後於-20。C冷凍10min後，徒手刀片切成1~2mm的心肌片，置於pH7.4PBS配製的P/oTTC溶液中，37°C溫育10min染色，心肌片上正常的心肌被染為深紅色，缺血心肌呈灰白色。將染色後心肌片上正常和缺血部分心肌分別稱重，以缺血部分心月幾所佔全部心室肌重量的比例作為缺血指標。4.數據處理及統計方法各組數據均以5士s表示，組間比較採用t檢驗考察顯著性，以屍O.05作為顯著性指標。三.試驗結果實驗證明本發明製備方法所製得的樣品FDS片、FDS膠嚢及FDS滴丸在0.5g原生藥/kg劑量下可明顯縮小大鼠冠狀動脈結紮造成的心室梗死區(P<0.01，PO.05)。血清生化指標檢測結果表明，在模型組中，心肌缺血導致大鼠血清MDA水平明顯增高(PO.01),SOD活力顯著下降(PO.01),LDH和CK釋放明顯增力口(PO.Ol)。與模型組相比，FDS片、FDS膠嚢及FDS滴丸在0.5g^生藥/kg劑量下可顯著降低血清MDA水平、減少心肌缺血引起的LDH和CK釋放(P<0.01,P<0.05)，同時對降低的SOD活力具有明顯的升高作用(PO.05)。試驗結果還表明本發明製備方法所製得的FDS片、FDS膠囊及FDS滴丸在同等原生藥量下的作用強度大於複方丹參片。結果見表3、4。表3.FDS對大鼠冠脈結紮急';性心肌缺血模型心肌梗死區的影響(i±s，n=10)tableseeoriginaldocumentpage12**P<0.01與假手術組相比；*P<0.05,##P<0.01與模型組相比。表4.FDS對大鼠冠脈結紮急性心肌缺血模型血清生化指標的影響(i±s,n=10)tableseeoriginaldocumentpage12**P<0.01與,I手術組相比；#P<0.05，##P<0.01與^^莫型組相比。通過上述具體實施例試驗數據，充分說明本發明製備方法所製得的樣品在除去雜質和有害成分的同時最大限度的保留了藥品有效成分，並且顯著的減少了服用量，得到了精製的目的；本發明製備方法所製得的樣品在治療心腦血管疾病方面療效顯著，為臨床提供了一種新的用藥選擇。權利要求1、一種治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於①取以下重量份的處方丹參藥材40～90份三七藥材5～50份冰片0.5～10份；②取丹參藥材，切片或粉碎成粗顆粒，20～80℃水提取2～4次，分別加水4～12倍量，提取1～3小時；③取三七藥材，切片或粉碎成粗顆粒，加水煎煮提取2～4次，分別加水4～12倍量，煎煮提取1～3小時；④合併步驟②所得的丹參水提液與步驟③所得的三七水提液，調節pH＝1～7，攪勻，靜置0.5～12小時，濾過或離心，上清液過大孔吸附樹脂柱，水洗至流出液還原糖反應呈陰性，棄水洗液，再用30～100％乙醇洗脫，採集洗脫液；⑤將步驟④所得的洗脫液回收乙醇，濃縮乾燥，得丹參三七合提物；⑥加入冰片，加入輔料製成片劑、膠囊、軟膠囊、口服液、滴丸、噴霧劑或顆粒劑。2、根據權利要求1所述的治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於在步驟⑤中，洗脫液回收乙醇，濃縮至相對密度1.05-1.25,加乙醇至含醇量達70~90%,冷藏保存224小時，濾過，濾液回收乙醇，濃縮乾燥，得丹參三七合提物。3、根據權利要求1或者2所述的治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於稱取丹參藥材13.5kg，切片，8(TC水溫浸提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的8倍,每次1小時，濾過，得濾液A;三七4.24kg,粉碎成粗顆粒，水煎煮提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的8倍，每次1.5小時，濾過，得濾液B;合併濾液B與濾液A，調節pH:3，攪勻，靜置1小時，離心，上清液通過預處理好的HPD-100大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液還原糖反應呈陰性，再用75%乙醇洗至流出液無色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度l.l，加乙醇至含醇量達80%，冷藏保存12小時，濾過，濾液回收乙醇並濃縮成浸膏，於70。C減壓乾燥，得到幹浸膏l.lkg，粉碎，過5號篩，加入可溶性澱粉lkg、硬脂酸鎂20g、羧曱基澱粉鈉140g，混勻，制粒，乾燥；冰片240g,研細，與上述顆粒混勻，壓製成10000片。4、根據權利要求1或者2所述的治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於稱取丹參藥材14kg，切片，70。C水溫浸提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的10倍，每次1小時，濾過，得濾液A;三七3.8kg，粉碎成粗顆粒，水煎煮提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的IO倍，每次2小時，濾過，得濾液B;合併濾液B與濾液A，調節pH-5，攪勻，靜置1小時，離心，上清液通過預處理好的AB-8大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液還原糖反應呈陰性，再用70%乙醇洗至流出液無色，收集洗脫液，回收乙醇並濃縮成浸膏，於75。C減壓乾燥，粉碎，得到浸膏粉L2kg，過5號篩，加入1.4kg微晶纖維素、低取代羥丙基纖維素O.lkg、滑石粉0.1kg混勻，制粒，乾燥；冰片O.lkg,研細，與上述顆粒混勻，分裝，製成膠嚢10000粒。5、根據權利要求1或者2所述的治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於稱取丹參藥材13kg，切片，65。C水溫浸提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的9倍，每次1.5小時，濾過，得濾液A;三七4.78kg,切片，水煎煮提取3次，每次所用水的重量為藥材重量的9倍，每次1.5小時，濾過，得濾液B;合併濾液B與濾液A,調節pH:3，攪勻，靜置1小時，離心，上清液通過預處理好的D-101大孔吸附樹脂柱，先用水洗至流出液還原糖反應呈陰性，再用75%乙醇洗至流出液無色，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度1.15,加95%乙醇至含醇量達850/。，冷藏保存10小時，濾過，濾液回收乙醇並濃縮成浸膏，於65。C減壓乾燥，粉碎，得到浸膏粉1.08kg，過5號篩，加入冰片220g、丙二醇500g，混勻，加入1.7kg已熔融的聚乙二醇6000，在80°C加溫下混勻，滴入曱基^:油中，製成滴丸10萬粒。6、根據權利要求1或者2所述的治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，其特徵在於大孔吸附樹脂為非極性、弱極性或極性大孔吸附樹脂，型號包括AB-8，HPD-100,DlOl，DA201,DM130,WLD-3,YPR-II，X5,Dx-5，NKA-9。全文摘要本發明公開了一種治療心腦血管疾病的中藥複方丹參製劑的製備方法，取丹參藥材，切片或粉碎成粗顆粒，20～80℃水提取2～4次，分別加水4～12倍量，提取1～3小時；取三七藥材，切片或粉碎成粗顆粒，加水煎煮提取2～4次，分別加水4～12倍量，煎煮提取1～3小時；合併丹參水提液與三七水提液，調節pH＝1～7，攪勻，靜置0.5～12小時，濾過或離心，上清液過大孔吸附樹脂柱，水洗至流出液還原糖反應呈陰性，棄水洗液，再用30～100％乙醇洗脫，採集洗脫液；將洗脫液回收乙醇，濃縮乾燥，得丹參三七合提物；加入冰片，加入輔料製成片劑、膠囊、軟膠囊、口服液、滴丸、噴霧劑或顆粒劑。文檔編號A61P9/00GK101584743SQ20091005948公開日2009年11月25日申請日期2009年6月2日優先權日2009年6月2日發明者耿福能申請人:耿福能