可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器的使用方法與流程
2023-09-12 00:19:15
可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器的使用方法本申請是申請號「201410010813.9」、申請日：2014.1.10、名稱「可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器」的分案申請。技術領域本發明涉及一種可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器。
背景技術：
在進行生命科學的研究中，人們經常需要使用特異性強、靈敏度高的免疫組織化學技術對組織細胞的特定物質進行定位和定量。免疫組織化學技術的基本原理是首先利用免疫學的已知抗體（第一抗體）與觀察組織中需識別抗原的結合。由於在組織和細胞上完成的已知抗體與需識別抗原的結合一般是不可見的，需要用標記的方法將某種標記物（如酶、螢光素）結合到第一抗體上，再用組織化學方法顯示此標記物或在螢光顯微鏡、雷射共聚集顯微鏡或超高解析度顯微鏡下觀察螢光素髮出的螢光。將研究對象組織中的需識別抗原可視化。在上述提到的用標記的方法將某種標記物（如酶、螢光素）結合到第一抗體上時，人們往往採用已連接上某種標記物的第二抗體與第一抗體的特異性結合的方法。在用免疫組織化學技術對組織細胞的特定物質進行定位和定量時，人們往往採用貼片染色的方法來保持實驗中組織切片良好的結構形態並明確各組織切片的前後順序關係。貼片染色的方法的基本原理是在切片機上切下組織片後，立即將該組織切片按切片的一定順序粘貼在載玻片上。後續的組織切片的封閉、第一抗體孵育、洗滌、第二抗體孵育、再洗滌、脫水、透明和封片等組織切片的處理過程均是在該組織切片粘貼在載玻片的條件下進行的。在上述的組織切片的封閉、洗滌、再洗滌、脫水、透明和封片過程中，由於用到的有關液體成本較低，加之洗滌過程中，洗滌液的用量較大。為了得到良好的實驗效果，人們往往採用將整個粘貼有組織切片的載玻片放置在上述相關液體中的方法來處理。但在進行第一抗體和第二抗體孵育時，由於抗體價格較高（目前一般的單克隆第一抗體100µl的售價是3000元左右，特殊的單克隆的第一抗體價格會更高），且使用時能稀釋的倍數又不能很大。因此，抗體尤其是第一抗體成為免疫組織化學實驗成本的主要部分。所以在用免疫組織化學技術對組織細胞的特定物質進行定位和定量時，不能採用將整個粘貼有組織切片的載玻片放置在抗體孵育液中的方法來完成。人們在貼片法進行免疫組織化學染色時，通常採用將抗體孵育液直接加在載玻片的組織切片上的方法。但使用這一方法時，抗體孵育液加多了會保存不了而漫出載玻片流失，加少了組織切片上的抗體孵育液會在孵育的過程中，因孵育液中水分蒸發而不能保持載玻片上的組織切片始終浸泡在抗體孵育液中。有時，人們也會使用在載玻片貼附的組織切片周圍用油性材料畫一個框的方法，並在該油性畫框內加抗體孵育液，來防止抗體孵育液的溢出。但該方法雖比將抗體孵育液直接加在載玻片貼附的組織切片上的方法有改進之處，但使用該方法，由於油性畫框阻止抗體孵育液外溢的能力很差，也不能保證在整個抗體孵育過程中，組織切片始終浸泡在抗體孵育液中。而且在抗體孵育、洗滌、脫水、透明過程中，這些油性材料會因脫落而失去阻止抗體孵育過程中抗體孵育液外溢的作用；當發生油性材料脫落並粘附在組織切片上時，會影響最終的切片觀察效果；而且，油性材料在組織切片的處理過程中，還會溶到相關的實驗溶液中，汙染實驗溶液而影響的實驗溶液的重複利用和組織切片的處理效果。
技術實現要素：
本發明的目的在於提供一種結構合理，所有的實驗步驟能方便高效進行，能得到良好的免疫組織化學染色實驗結果的可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器。本發明的技術解決方案是：一種可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器，其特徵是：包括不鏽鋼孵育框，不鏽鋼孵育框壓在載玻片上，與其下面的矽膠墊層共同由中間的矩形空間以載玻片為底面形成孵育小室；所述矽膠墊層有與不鏽鋼孵育框相同的中間矩形空間，並粘附在不鏽鋼孵育框上，與載玻片接觸，防止孵育液的洩漏；不鏽鋼孵育框內放入孵育室空間調節框（其外周尺寸與不鏽鋼孵育框的中間矩形尺寸相同），調節孵育室的空間大小；不鏽鋼孵育框的外周尺寸及矽膠墊層的外周尺寸均與載玻片外周尺寸相同；另設有將不鏽鋼孵育框及矽膠墊層夾持在載玻片上的彈性夾持器；所述彈性夾持器包括彈性夾持器根部、彈性夾持器的夾持部及彈性夾持器的夾持口；彈性夾持器根部連接彈性夾持器夾持部，並提供彈性夾持器在形成載玻片孵育器和拆卸載玻片孵育器操作時的手持位置；通過彈性夾持器的夾持口將彈性夾持器夾持在孵育框和載玻片上，彈性夾持器的夾持部將孵育框和載玻片夾持在一起形成孵育小室；不鏽鋼孵育框內矩形壁設有階梯槽，保證孵育室上蓋能平穩的蓋在不鏽鋼孵育框內矩形壁的階梯槽上，並形成空間密閉的孵育小室；所述孵育室上蓋包括孵育室上蓋蓋板及孵育室上蓋把手，孵育室上蓋蓋板蓋在孵育框的內矩形階梯槽上，與孵育框，載玻片共同形成空間密閉的孵育小室；孵育室上蓋把手置於孵育室上蓋的上表面，通過手持該把手揭開或蓋上孵育室上蓋；孵育室空間調節框的高度為不鏽鋼孵育框階梯槽底面至載玻片的距離。使用方法是：將不鏽鋼孵育框及矽膠墊層壓在貼附有組織切片的載玻片上，確保所有組織切片都在孵育框與載玻片形成的孵育小室底部；選擇孵育框與載玻片上下重疊四個邊中的任意一邊，手持彈性夾持器根部，將彈性夾持器的夾持口，對準孵育框與載玻片上下相疊的結構，將彈性夾持器推入孵育框與載玻片上下相疊的結構，保證彈性夾持器的夾持部將孵育框與載玻片緊緊的壓在一起，其餘三邊重複上述的動作將彈性夾持器夾入，確保孵育框與載玻片緊密接觸，形成不洩漏的孵育小室；根據組織切片在載玻片上貼附的位置，向孵育框內加入孵育室空間調節框，以調節孵育室空間的大小；向孵育小室中加入第一抗體的孵育液，保證粘貼在孵育小室底部的組織切片能浸泡在第一抗體的孵育液中後，手持孵育室上蓋把手，將孵育室上蓋蓋板蓋在不鏽鋼孵育框內矩形壁的階梯槽上，形成空間密閉的孵育小室，按要求進行組織切片的孵育；第一次孵育完成後，手持孵育室上蓋把手揭開孵育室上蓋蓋板，吸出第一抗體的孵育液，在取出孵育小室中的孵育室空間調節框後，卸下孵育框與載玻片上下相疊結構四周的彈性夾持器，從載玻片上拆卸下孵育框，對粘貼在載玻片上的組織切片進行洗滌處理；需要進行第二抗體孵育時，重複上述動作。本發明結構合理，在進行組織細胞的免疫組織化學染色時，可通過多次使用彈性夾持器將孵育框緊緊的壓在粘貼有組織切片的載玻片上，加入孵育室空間調節框來調節孵育室的空間大小，然後用蓋上孵育室上蓋，形成一個經調節後，空間大小合適、密閉的孵育小室。保證了在進行抗體孵育時，使用更微量的抗體孵育液，就能使粘貼在載玻片上的所有組織切片能完全浸泡在抗體孵育液中，還防止了因孵育液中水分的蒸發而改變了孵育液的體積和第一抗體的濃度。既進一步節約了科學研究的實驗成本，又保證了抗體孵育液成分的穩定。同時，通過多次卸下孵育框、取出孵育室空間調節框，又保證了載玻片前處理、組織貼片、洗滌、脫水、透明、封片等實驗步驟能不受孵育框的影響，並避免了在組織切片周圍使用油性材料畫框的缺點。使所有的實驗步驟能方便高效進行，確保最終能得到一個良好的免疫組織化學的染色實驗結果。附圖說明下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明。圖1是可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器的孵育室上蓋立體示意圖。圖2是可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器的孵育框立體示意圖。圖3是可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器的載玻片立體示意圖。圖4是可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器的彈性夾持器立體示意圖。圖5是可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器的孵育室空間調節框立體示意圖。圖6是可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器縱剖面示意圖。圖中：1.孵育室上蓋把手：置於孵育室上蓋的上表面，通過手持該把手揭開或蓋上孵育室上蓋。2.孵育室上蓋蓋板：蓋在孵育框的內矩形階梯槽上，與孵育框，載玻片共同形成空間密閉的孵育小室。3.不鏽鋼孵育框：壓在載玻片上，與其下層的矽膠墊共同由中間的矩形空間在載玻片上形成孵育小室的四周側壁。4.不鏽鋼孵育框內矩形壁的階梯槽：保證孵育室上蓋能平穩的蓋在不鏽鋼孵育框上內矩形壁的階梯槽上，並形成空間密閉的孵育小室。5.不鏽鋼孵育框的矽膠墊：粘附在不鏽鋼孵育框上，與載玻片接觸，防止孵育液的洩漏。6.載玻片：承載組織切片，並作為孵育小室的底面。7.彈性夾持器根部：連接彈性夾持器夾持部，並提供彈性夾持器在形成載玻片孵育器和拆卸載玻片孵育器的手持位置。8.彈性夾持器的夾持部：將孵育框和載玻片夾持在一起形成孵育小室。9.彈性夾持器的夾持口：通過該夾持口將彈性夾持器夾持在孵育框和載玻片上。10.孵育室空間調節框：其外徑等於孵育框的內徑，放入孵育框內，調節孵育室空間的大小；孵育室空間調節框的高度為不鏽鋼孵育框階梯槽底面至載玻片的距離；根據需要可以採用不同內部空間的大小孵育室空間調節框。11.孵育室上蓋。12.彈性夾持器。13.空間密閉的孵育小室：形成微小的密閉空間存放孵育液，做到在使用微量的孵育液的前提下，保證了粘貼在載玻片上的組織切片始終浸泡在抗體孵育液中，還阻止了抗體孵育液中水分的蒸發，維持了抗體孵育液的量和抗體濃度的穩定。具體實施方式一種可拆卸、可調容積及空間密閉的載玻片孵育器，包括不鏽鋼孵育框，不鏽鋼孵育框壓在載玻片上，與其下面的矽膠墊層共同由中間的矩形空間以載玻片為底面形成孵育小室；所述矽膠墊層有與不鏽鋼孵育框相同的中間矩形空間，並粘附在不鏽鋼孵育框上，與載玻片接觸，防止孵育液的洩漏；不鏽鋼孵育框內放入孵育室空間調節框，其外周尺寸與不鏽鋼孵育框的中間矩形尺寸相同，調節孵育室的空間大小；不鏽鋼孵育框的外周尺寸及矽膠墊層的外周尺寸均與載玻片外周尺寸相同；另設有將不鏽鋼孵育框及矽膠墊層夾持在載玻片上的彈性夾持器；所述彈性夾持器包括彈性夾持器根部、彈性夾持器的夾持部及彈性夾持器的夾持口；彈性夾持器根部連接彈性夾持器夾持部，並提供彈性夾持器在形成載玻片孵育器和拆卸載玻片孵育器操作時的手持位置；通過彈性夾持器的夾持口將彈性夾持器夾持在孵育框和載玻片上，彈性夾持器的夾持部將孵育框和載玻片夾持在一起形成孵育小室；不鏽鋼孵育框內矩形壁設有階梯槽，保證孵育室上蓋能平穩的蓋在不鏽鋼孵育框內矩形壁的階梯槽上，並形成空間密閉的孵育小室；所述孵育室上蓋包括孵育室上蓋蓋板及孵育室上蓋把手，孵育室上蓋蓋板蓋在孵育框的內矩形階梯槽上，與孵育框，載玻片共同形成空間密閉的孵育小室；孵育室上蓋把手置於孵育室上蓋的上表面，通過手持該把手揭開或蓋上孵育室上蓋；孵育室空間調節框的高度為不鏽鋼孵育框階梯槽底面至載玻片的距離。根據免疫組織化學的要求處理選用的載玻片，以保證組織切片在載玻片上有良好的粘貼效果。選取實驗所需組織進行切片，並將其貼附在載玻片上。將貼附在載玻片上的組織切片進行抗體孵育前的封閉處理。完成上述實驗步驟後，將不鏽鋼孵育框（3）、矽膠墊層（5）壓在貼附有組織切片的載玻片上（6），確保所有組織切片都在孵育框與載玻片形成的孵育小室（13）底部。選擇孵育框與載玻片上下重疊四個邊中的任意一邊，手持彈性夾持器根部（7），將彈性夾持器的夾持口（9）對準孵育框與載玻片上下相疊的結構，將彈性夾持器推入孵育框與載玻片上下相疊的結構。保證彈性夾持器的夾持部（8）將孵育框與載玻片緊緊的壓在一起。其餘三邊重複上述的動作將彈性夾持器（12）夾入。確保孵育框與載玻片緊密接觸，形成不洩漏的孵育小室。根據組織切片在載玻片上貼附的位置，向孵育框內加入孵育室空間調節框（10），以調節孵育室空間的大小。調節好孵育室的空間大小後，孵育小室中加入含特異第一抗體的孵育液，確信粘貼在孵育小室底部的組織切片能浸泡在含特異第一抗體的孵育液中後，手持孵育室上蓋把手（1），將孵育室上蓋蓋板（2）蓋在不鏽鋼孵育框內矩形的階梯槽（4）上，形成空間密閉的孵育小室，按要求進行組織切片的孵育。第一次孵育完成後，手持孵育室上蓋把手，揭開孵育室上蓋，吸出含特異第一抗體的孵育液，在取出孵育小室中的孵育室空間調節框後，卸下孵育框與載玻片上下相疊的結構四邊的彈性夾持器，然後從載玻片上拆卸下孵育框。按常規對粘貼在載玻片上的組織切片進行洗滌處理。需要進行第二抗體孵育時，重複上述動作，再次形成空間大小合適、密閉、不洩漏的孵育小室，加入含特異第二抗體的孵育液，對組織切片進行孵育。孵育完成後，去除含特異第二抗體孵育液。重複上述拆卸下孵育框的操作後。對粘貼在載玻片上的組織切片進行洗滌、脫水、透明、封片等後處理。所有處理完成後，在顯微鏡下觀察組織切片的免疫組織化學染色結果。