用於治療小兒外感咳嗽的藥物及製備方法

2023-09-17 04:32:20

專利名稱：用於治療小兒外感咳嗽的藥物及製備方法
技術領域：
本發明涉及一種用於治療外感咳嗽、特別是小兒外感咳嗽的藥物，以及製備其的方法。

背景技術：
外感咳嗽是中醫兒科常見、多發病證。外感咳嗽，以風寒、風熱證候最為常見。由於小兒生理病理特點，外感風寒之證，易轉化為成風寒化熱即風寒束肺兼肺經鬱熱之證。目前治療此證的中藥複方製劑尚不多見。目前上市治療小兒外感咳嗽的中藥複方製劑中，以風熱犯肺證為適應證候者居多，風寒束肺者次之，而明確以風寒化熱為適應證候者尚不多見。
因此，市場對治療外感咳嗽、尤其小兒外感咳嗽(急性支氣管炎)風寒化熱證的中藥複方製劑存在著需求。


發明內容
本發明的目的是提供一種藥物，主要用於治療外感咳嗽、尤其小兒外感咳嗽。
本發明提供的藥物由以下重量配比的原料製成 荊芥 5～15份，優選8～13份； 矮地茶 10～20份，優選14～22份； 麻黃(蜜炙) 5～15份，優選7～12份； 苦杏仁1～10份，優選3～8份； 黃芩 1～10份，優選3～8份； 前胡 5～15份，優選7～12份； 法半夏5～15份，優選7～12份； 浮石 5～15份，優選7～14份； 蟬蛻 1～10份，優選3～8份； 陳皮 1～10份，優選3～8份； 紫草 1～10份，優選3～8份； 甘草 1～10份，優選3～8份。
本發明提供的藥物可以製成多種製劑片劑、丸劑、膠囊劑、囊片劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、凝膠劑、糊劑中的任意一種。
本發明的另一個目的是提供一種製備上述藥物的方法。
製備上述藥物的製備方法包括以下步驟 (1)按重量份稱取矮地茶、炙麻黃、法半夏、苦杏仁、前胡、紫草，進行滲漉，收集漉液，加入包合劑，真空濃縮得第一濃縮液； (2)按重量份稱取荊芥、陳皮，用水蒸餾提取，收集揮髮油及濾液； (3)按重量份稱黃芩、浮石、蟬蛻、甘草與步驟(1)和(2)所得的藥渣合併，加熱水煎提合適的次數和時間，收集水提液，過濾，濾液與步驟(2)中荊芥、陳皮提取後所得的濾液合併，濃縮，得第二濃縮液，然後靜置一段時間，過濾，向所得濾液中加入包合劑，再濃縮，得第三濃縮液； (4)取所述第一濃縮液和所述第三濃縮液，混合，濃縮，乾燥，粉碎成細粉； (5)按適當比例製備由所述揮髮油與包合劑組成的包合物； (6)取步驟(4)得到的細粉(幹浸膏粉)與步驟(5)得到的包合物，製成適宜的劑型。
臨床試驗表明，本發明提供的藥物對臨床常見的小兒外感風寒咳嗽，或有風寒未解，有化熱之勢，以致寒包熱鬱而症見咳嗽，鼻流清涕，咽癢，或咽紅咽痛，口渴等症有較好療效。

具體實施例方式 本發明提供的用於治療外感咳嗽、尤其用於治療小兒外感咳嗽的藥物主要由荊芥、矮地茶、麻黃(蜜炙)、苦杏仁、黃芩、前胡、法半夏、浮石、蟬蛻、陳皮、紫草、甘草組成。該配方是本發明人根據多年的中醫從業經驗和對中醫理論的深入理解而提出。配方中各主要成分的功用如下 荊芥性味辛、微溫。歸肺、肝經。功能祛風解表，透疹消瘡，炒炭止血。用於外感表證，感冒發熱，頭痛，咳嗽，咽喉腫痛，麻疹不透，風疹瘙癢，瘡瘍初起有表證，吐衄下血。
矮地茶又名紫金牛(《中藥大辭典》)、平地木(《中華本草》)。味辛、微苦，性平。歸肺、肝經。功能化痰止咳，利溼活血。主治新久咳嗽，痰多，痰中帶血，風溼痺證，腫毒、痢疾、咯血、吐血、勞傷等。
麻黃味辛、微苦，性溫，入肺、膀胱經。功能散寒解表，宣肺平喘，利水。主治傷寒表實，頭痛身痛，咳嗽氣喘，風水浮腫，風邪頑痺等。《本經》「發表出汗，去邪熱氣，主咳逆上氣」。
杏仁味苦，性微溫，有小毒，入肺、大腸經。功能降氣化痰，止咳平喘，潤腸通便。可用於多種咳嗽氣喘病證。。
黃芩性味苦、寒。歸肺、胃、膽、大腸經。功能清熱燥溼，瀉火解毒，涼血止血，除熱安胎。用於溼溫暑溼，溼熱痞悶，黃疸瀉痢，肺熱咳嗽，熱病煩渴，癰腫瘡毒，咽喉腫痛，血熱吐衄，胎熱不安。
前胡味苦、辛，性微寒。歸肺經。功能散風清熱，降氣化痰。用於風熱咳嗽，痰熱喘滿，咯痰黃稠。。
法半夏味辛，性溫，入脾、胃、肺經。功能燥溼化痰、降逆止嘔、消痞散結。主治溼痰冷飲，咳喘痰多，胸膈脹滿，嘔吐反胃，痰厥頭痛等。
海浮石味鹹，性寒。歸肺、腎經。功能清肺化痰，軟堅散結。主治痰熱咳嗽，癭瘤，瘡腫。
蟬蛻味甘、鹹，性涼，入肺、肝經。功能散風熱，宣肺，定痙。主治外感風熱，咳嗽音啞，麻疹透發不暢，風疹瘙癢，小兒驚癇，破傷風等。。
陳皮味辛、苦，性溫，入脾、肺經。功能理氣降逆，調中開胃，燥溼化痰。治療胸腹脹滿，不思飲食，嘔吐噦逆，咳嗽痰多等。現代藥理研究表明，陳皮所含揮髮油有刺激性祛痰作用，陳皮醇提取物對豚鼠離體氣管有較強鬆弛作用。
紫草味苦，性寒。歸心、肝經。功能解毒透疹，涼血活血。
甘草味甘，性平，入心、肺、脾、胃經。功能和中緩急，潤肺止咳，解毒，調和諸藥。
以上諸藥配合，共同達到疏風散寒、宣肺清熱、祛痰止咳的功效，與主治病證病因病機切合。且本品擇藥用量，處處考慮適應病證及小兒生理病理特點。證屬風寒束表，則以辛溫表散為主，但注意小兒為稚陰之體，不可表散太過，以免傷津生變；證兼鬱熱，仍當以宣開為主，雖助以苦寒清洩但用量較輕，主次分明且沒有傷脾胃的副作用。本組合符合主治病證病因病機，兼顧小兒生理病理特點。其立法、擇藥、組方，符合中醫藥理論及適應病症的病因病機。
根據本發明的用於治療外感咳嗽、尤其用於治療小兒外感咳嗽的藥物是由下述重量配比的原料製成 荊芥 5～15份，優選8～13份； 矮地茶 10～20份，優選14～22份； 麻黃(蜜炙) 5～15份，優選7～12份； 苦杏仁 1～10份，優選3～8份； 黃芩 1～10份，優選3～8份； 前胡 5～15份，優選7～12份； 法半夏 5～15份，優選7～12份； 浮石 5～15份，優選7～14份； 蟬蛻 1～10份，優選3～8份； 陳皮 1～10份，優選3～8份； 紫草 1～10份，優選3～8份； 甘草 1～10份，優選3～8份。
在本發明的一種更優選實施方式中，該用於外感咳嗽的藥物是由下述重量配比的原料製成 荊芥 10.9份 法半夏9份 矮地茶 18份 浮石 10.9份 麻黃(蜜炙) 9份 蟬蛻 5.5份 苦杏仁 5.5份陳皮 5.5份 黃芩 5.5份紫草 5.5份 前胡 9份 甘草 5.5份 上述藥物配方中的原料皆為草藥，其可以是在藥店出售的草藥成品，也可以是新收穫的草藥，對於後者的情況，一般要將新草藥進行烘乾或曬乾，以基本除去水份。
本發明的藥物可以單獨使用，或者在適當情況下，與其他藥物結合使用。
本發明的藥物可以含有一種或多種藥用賦形劑(載體)。賦形劑出於多種目的被加入到藥物成分中。該藥物成分可以方便地以單位劑量形式提供，並且由本領域已知的方法製備。這樣的方法包括將提取物成分與載體相組合的步驟，其中載體本身可以包括一種或多種輔助成分。一般地，該劑型的製備是通過均勻而密切地使提取物成分與液體載體、或者粉末固體載體或者二者的結合相混合，然後必要時成形該產物。
藥用賦形劑是指對於製備藥物組合物有用的賦形劑，通常它是安全、無毒併合乎需要的，且包括可應用於獸醫學和人類藥物學的賦形劑。這類賦形劑可以是固體、液體、半固體，或在氣溶膠組成的情況下是氣體。
本發明的藥物可以以幹的口服製劑形式經口給予。本發明的藥物可以以片劑、丸劑、膠囊劑、囊片劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、凝膠劑、糊劑等經口給予。口服組合物可以包括常用載體、賦形劑和稀釋劑。本發明藥物組合物的口服劑型可以用本領域已知技術製備，並含有治療上有效量的藥物成分。對於本發明製劑的治療有效的口服劑量根據從業醫生的判斷通過標準臨床技術來確定。例如，除醫學參考書和藥物學文獻提供的信息外，可以用熟知的體外或者體內化驗來幫助確定最佳劑量。
優選地，該藥物製劑是幹的口服劑型。優選地，該藥物製劑是固體劑型。優選地，該藥物製劑是片劑、丸劑、膠囊劑、囊片劑、粉劑和顆粒劑。在本發明的一個具體實施例中，該藥物製劑為顆粒劑。幹的劑型可以包括藥學可接受的添加劑，如包合劑、賦形劑、載體、稀釋劑、穩定劑、增塑劑、粘結劑、助流劑、崩解劑、填充劑、潤滑劑、塑化劑，著色劑、成膜劑、增味劑、甜味劑、防腐劑、給藥載體(dosing vehicle)以及前述中的任意結合。這些皆是本領域技術人員所熟知的，在此不再贅述。
包合劑的實例包括α-環糊精(α-CD)、β-環糊精(β-CD)和N-LOK變性澱粉，優選β-環糊精。包合劑加入量約為全方藥材總量的1％～10％。
甜味劑的實例包括甜菊素、甜菊糖、蛋白糖、木糖醇、高果糖、甜蜜素等。這些甜味劑可以單獨使用或以它們的兩種或多種的混合物形式使用。在本發明中優選蔗糖或甜菊糖，更優選二者的混合物。可以根據劑型和相應甜味劑的甜度來確定選擇甜味劑的用量，通常在0.01％～0.6％，例如當甜度是蔗糖的200～300倍時，溶液製劑用量一般為0.07％。
粘結劑的實例包括羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、低取代羥丙基纖維素(L-HPC)、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K-30，優選聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K-30。
賦形劑和用量的選擇由製劑設計師根據經驗並考慮標準工序和本領域參考資料很容易確定。本發明的固體藥物包括粉末、顆粒、聚集體和壓實組分。本發明的優選給藥途徑是口服。該劑量可以以單位劑型方便地提供，並用藥學領域的任何熟知方法製備。劑型包括固體劑型，如片劑、丸劑、粉劑、膠囊、顆粒劑、囊片劑、小袋劑、藥片和錠劑。本發明特別優選的劑型為顆粒。
糊劑溶液或凍乾粉末的形式用於胃腸道外給藥。使用前可向粉末中加入合適的稀釋劑或其它藥用載體而進行重配。液體配方通常是緩衝、等滲、水溶液。合適的稀釋劑的例子有標準等滲鹽水溶液、5％的葡萄糖水溶液。這類配方尤其適合胃腸道外給藥，但也可口服。最好添加賦形劑，如聚乙烯吡咯烷酮、明膠、氧化纖維素、阿拉伯膠、聚乙二醇、甘露醇、氯化鈉、或檸檬酸鈉。
可替換地，這些藥物可以是膠囊包被的、片劑的、或在乳劑或糖漿劑中配製，用於口服。為了加強或穩定藥物、或有利於組合物的製備，可以加入藥用固體或液體載體。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、甘油、鹽水、醇類、或水。固體載體包括澱粉、乳糖、硫酸鈣、二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂、或硬脂酸、滑石粉、果膠、阿拉伯膠、瓊脂、或明膠。載體也可包括緩釋物質，諸如甘油單硬脂酸或甘油二硬脂酸，單獨或與蠟一起。固體載體的量各不相同， 本發明還提供製備前述藥物的方法，包括以下步驟 (1)按重量份稱取矮地茶、炙麻黃、法半夏、苦杏仁、前胡、紫草，進行滲漉，收集漉液，加入適量包合劑，真空濃縮得第一濃縮液； (2)按重量份稱取荊芥、陳皮，用水蒸餾提取適當時間，收集揮髮油及濾液； (3)按重量份稱黃芩、浮石、蟬蛻、甘草與步驟(1)和(2)所得的藥渣合併，加熱水煎提合適的次數和時間，收集水提液，過濾並與荊芥、陳皮提取後的濾液合併，濃縮，得第二濃縮液，然後靜置一段時間，過濾，於濾液中加入包合劑，再濃縮，得第三濃縮液； (4)取上述第一濃縮液和第三濃縮液，混合，濃縮，乾燥，粉碎成細粉； (5)按適當比例製備由上述揮髮油與包含劑組成的包合物； (6)取步驟(4)得到的細粉(幹浸膏粉)與步驟(5)得到的包合物，製成適宜的劑型。
在提取工藝研究中，分別進行了荊芥、陳皮揮髮油的提取及其包合工藝條件，矮地茶等六味藥材提取工藝條件的優選，黃芩、浮石、蟬蛻等藥材水提工藝條件的優選研究；在濃縮與乾燥工藝研究中，進行了不同濃縮、乾燥方式對幹膏粉溶化性的研究；在製劑成型研究中，製劑處方、成型工藝等進行了研究。通過上述研究，確定了本品的如下製備工藝條件。
步驟(1)中，最優選的滲漉操作可以按照中國藥典2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法進行，即，用75％乙醇作溶劑，浸漬24小時，然後以每分鐘3～5ml的流速(以1000g藥材計)滲漉。然而，本領域技術人員容易理解，對以上條件作些調整，同樣可以實施本發明。例如對溶劑作些變化，例如採用其他百分含量的乙醇水溶液。我們在試驗中發現，用60～90％的乙醇是可用的。此外，採用適宜濃度的甲醇水溶液、或丙酮水溶液也可以實施本發明。另外，還可以對浸漬的時間和流速加以調整。在步驟(1)中，濃縮適宜在減壓下進行，適宜的溫度為40～75℃，優選50～65℃。濃縮工藝研究中，多次試驗表明在60℃以下、-0.08MPa真空度和濃縮至例如相對密度為1.15～1.20(60℃熱測)的操作條件是優選的。該步驟中，包合劑加入量可以為全方藥材總量的1～10％的範圍，優選在1.5～7％的範圍，更優選在2～5％的範圍，例如為2.5％。
步驟(2)中，優選在蒸餾提取前用水浸泡一段時間，例如0.5小時。水的加入量是為荊芥、陳皮重量的4～12倍，優選6～10倍例如8倍。加熱蒸餾提取4～10小時，優選6～8小時，例如6小時。
步驟(3)中，加熱水煎提數次，通過實驗發現，加熱水煎提三次即可充分提取，加水量分別為藥材量的8倍、6倍、6倍，提取時間分別為1.5小時、1小時、1小時。與荊芥、陳皮蒸餾後的濾液合併後濃縮，得到的第二濃縮液的相對密度優選1.04～1.06(60℃熱測)。靜置時間為數小時，優選12小時以上。該步驟中，包合劑加入量優選約為全方藥材總量的2.5％。第三濃縮液的相對密度優選為1.23～1.25(60℃熱測)。在一個具體實施例中，上述包含劑為β-環糊精。
步驟(4)中，濃縮條件可以為在60℃濃縮至相對密度為1.30～1.32(60℃熱測)。真空乾燥條件例如為60℃、-0.08MPa。
步驟(5)中，可以先將包合劑用適宜的溶劑如水調成糊狀，然後加入適宜比例的步驟(2)中得到的揮髮油，混合均勻。作為優選，可以將揮髮油先配成溶液，如50％的乙醇溶液，然後使該溶液與上述包合劑糊裝物合併，研磨合適的時間。最後乾燥得到揮髮油包合物。在一個具體實施方式
中，可以用水將β-環糊精調成糊狀，在研缽中研磨均勻。按照包含劑∶揮髮油比例為(5～15)∶1，優選8∶1稱取揮髮油，用乙醇稀釋。然後將該稀釋液與前述糊裝物合併研磨。最後乾燥、粉碎。乾燥溫度為40～60℃，優選50℃。
在步驟(6)中，可以將藥物製成片劑、丸劑、膠囊劑、囊片劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、凝膠劑、糊劑中的任意一種。對於本發明而言，優選製成片劑、粉劑、膠囊劑、顆粒劑，更優選粉劑、顆粒劑，最優選顆粒劑。
在本發明的一些具體實施例中，該藥物被製成顆粒劑。在製備中，按所需比例取步驟(4)得到的細粉與步驟(5)得到的包合物，加入適量甜味劑混勻，以粘結劑溶液制軟材，過篩，在一定溫度下乾燥，整粒，即得藥物顆粒。粘結劑溶液可是乙醇溶液形式，濃度例如為3％。篩孔大小例如為10～12目。
在本發明的一些具體實施例中，該藥物被製成片劑。在製備中，按所需比例取步驟(4)得到的細粉與步驟(5)得到的包含物，加入適量微晶纖維素和3％的交聯聚維酮(PVPP)，混勻，用2％聚維酮K30(PVP)的95％乙醇溶液制軟材，擠壓過16目篩網，40～50℃乾燥，整粒，加入3％的羧甲基澱粉鈉(CMS-Na)和0.3％的硬脂酸鎂混勻，壓製成片，包薄膜衣，即得片劑。
藥物配製遵循傳統的藥物製備方法，就製備片劑而言，涉及研磨、混合、成粒、和壓縮(當必要時)；或就製備硬膠囊而言，涉及研磨、混合、和填充。當使用液體載體時，藥物製劑為糖漿、酏劑、乳劑、或水性或非水性混懸液形式。對於這種液體劑型可直接口服(p.o.)給藥或裝填入軟膠囊劑中。
製備實施例 實施例1 取矮地茶10份、炙麻黃5份、法半夏5.2份、苦杏仁1.1份、前胡5份、紫草1.1份(均為重量份，下同)，照中國藥典2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法，用65％乙醇作溶劑，浸漬36小時，然後以每分鐘3～5ml的流速(以1000g藥材計)滲漉，收集漉液，加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的1.5％)，在40～75℃和減壓下濃縮至相對密度為1.15～1.20(60℃熱測)，備用。取荊芥5份、陳皮1.1份，加5倍量水浸泡0.5小時，加熱蒸餾提取5小時，收集揮髮油及濾液，備用。取黃芩1.1份、浮石5份、蟬蛻1.1份、甘草1.1份與上述醇提及蒸餾後的藥渣合併，加熱水煎提三次，加水量分別為藥材量的8倍、6倍、6倍，提取時間分別為1.5小時、1小時、1小時，收集三次水提液，過濾並與荊芥、陳皮蒸餾後的濾液合併，濃縮至相對密度約為1.04～1.06(60℃熱測)，靜置過夜(12小時以上)，取上清液過濾，於濾液中加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的5％)，濃縮至相對密度為1.23～1.25(60℃熱測)，備用。取上述醇提與水提濃縮液，混合，繼續濃縮至相對密度為1.30～1.32(60℃熱測)，真空乾燥(60℃，-0.08MPa)，粉碎成細粉，備用。另取β-環糊精適量置於研缽中，加4倍量水研磨均勻，按8∶1(β-環糊精∶揮髮油)的比例取揮髮油適量，先配成50％揮髮油乙醇液，然後緩緩加入到研缽中，研磨2小時，於50℃乾燥，粉碎，備用。取上述幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物，加入適量蔗糖、甜菊素混勻，以3％聚維酮K30乙醇溶液制軟材，過10～12目篩，40℃乾燥，整粒，得顆粒劑。
實施例2 取矮地茶20份、炙麻黃14.7份、法半夏14.7份、苦杏仁10份、前胡14.7份、紫草10份，照中國藥典2000年版一部附錄I O流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法，用90％乙醇作溶劑，浸漬16小時，然後以每分鐘2～7ml的流速(以1000g藥材計)滲漉，收集漉液，加入約為全方藥材總量的2.5％的β-CD，真空濃縮(60℃以下，-0.08MPa)至相對密度為1.15～1.20(60℃熱測)，備用。取荊芥14.7份、陳皮10份，加12倍量水浸泡3小時，加熱蒸餾提取4小時，收集揮髮油及濾液，備用。取黃芩10份、浮石14.7份、蟬蛻10份、甘草10份與上述醇提及蒸餾後的藥渣合併，加熱水煎提三次，加水量分別為藥材量的8倍、6倍、6倍，提取時間分別為2小時、1.5小時、1小時，收集三次水提液，過濾並與荊芥、陳皮蒸餾後的濾液合併，濃縮至相對密度約為1.04～1.06(60℃熱測)，靜置過夜(12小時以上)，取上清液過濾，於濾液中加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的2.5％)，濃縮至相對密度為1.23～1.25(60℃熱測)，備用。取上述醇提與水提濃縮液，混合，於50-70℃繼續濃縮至相對密度為1.30～1.32(60℃熱測)，真空乾燥(60℃，-0.08MPa)，粉碎成細粉，備用。另取β-環糊精適量置於研缽中，加4倍量水研磨均勻，按8∶1(β-環糊精∶揮髮油)的比例取揮髮油適量，先配成50％揮髮油乙醇液，然後緩緩加入到研缽中，研磨2小時，於50℃乾燥，粉碎，備用。取上述幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物，加入適量蔗糖、甜菊素混勻，以3％聚維酮K30乙醇溶液制軟材，過10～12目篩，40℃乾燥，整粒，得顆粒劑。
實施例3 取矮地茶14份、炙麻黃7.1份、法半夏7.1份、苦杏仁3份、前胡7.1份、紫草3份，照中國藥典2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法，用75％乙醇作溶劑，浸漬24小時，然後以每分鐘3～5ml的流速(以1000g藥材計)滲漉，收集漉液，加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的5％)，真空濃縮(60℃以下，-0.08MPa)至相對密度為1.10～1.25(60℃熱測)，備用。取荊芥8份、陳皮3份，加8倍量水浸泡3小時，加熱蒸餾提取4小時，收集揮髮油及濾液，備用。取黃芩3份、浮石7.1份、蟬蛻3份、甘草3份與上述醇提及蒸餾後的藥渣合併，加熱水煎提三次，加水量分別為藥材量的10倍、6倍、6倍，提取時間分別為1.5小時、1小時、1小時，收集三次水提液，過濾並與荊芥、陳皮蒸餾後的濾液合併，濃縮至相對密度約為1.04～1.06(60℃熱測)，靜置過夜(12小時以上)，取上清液過濾，於濾液中加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的2.5％)，濃縮至相對密度為1.23～1.25(60℃熱測)，備用。取上述醇提與水提濃縮液，混合，於60℃繼續濃縮至相對密度為1.30～1.32(60℃熱測)，真空乾燥(60℃，-0.08MPa)，粉碎成細粉，備用。另取β-環糊精適量置於研缽中，加4倍量水研磨均勻，按8∶1(β-環糊精∶揮髮油)的比例取揮髮油適量，先配成50％揮髮油乙醇液，然後緩緩加入到研缽中，研磨2小時，於50℃乾燥，粉碎，備用。取上述幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物，加入適量蔗糖、甜菊素混勻，以3％聚維酮K30乙醇溶液制軟材，過10～12目篩，40℃乾燥，整粒，得顆粒劑。
實施例4 取矮地茶19份、炙麻黃12份、法半夏12份、苦杏仁7.9份、前胡12份、紫草7.9份，照中國藥典2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法，用75％乙醇作溶劑，浸漬24小時，然後以每分鐘3～5ml的流速(以1000g藥材計)滲漉，收集漉液，加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的2.5％)，真空濃縮(60℃以下，-0.08MPa)至相對密度為1.15～1.20(60℃熱測)，備用。取荊芥8份、陳皮7.9份，加8倍量水浸泡0.5小時，加熱蒸餾提取6小時，收集揮髮油及濾液，備用。取黃芩7.9份、浮石12份、蟬蛻7.9份、甘草7.9份與上述醇提及蒸餾後的藥渣合併，加熱水煎提三次，加水量分別為藥材量的8倍、6倍、6倍，提取時間分別為1.5小時、1小時、1小時，收集三次水提液，過濾並與荊芥、陳皮蒸餾後的濾液合併，濃縮至相對密度約為1.04～1.06(60℃熱測)，靜置過夜(12小時以上)，取上清液過濾，於濾液中加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的2.5％)，濃縮至相對密度為1.23～1.25(60℃熱測)，備用。取上述醇提與水提濃縮液，混合，於60℃繼續濃縮至相對密度為1.30～1.32(60℃熱測)，真空乾燥(60℃，-0.08MPa)，粉碎成細粉，備用。另取β-環糊精適量置於研缽中，加4倍量水研磨均勻，按8∶1(β-環糊精∶揮髮油)的比例取揮髮油適量，先配成50％揮髮油乙醇液，然後緩緩加入到研缽中，研磨2小時，於50℃乾燥，粉碎，備用。取上述幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物，加入適量蔗糖、甜菊素混勻，以3％聚維酮K30乙醇溶液制軟材，過10～12目篩，40℃乾燥，整粒，得顆粒劑。
實施例5 取矮地茶18份、炙麻黃9份、法半夏9份、苦杏仁5.5份、前胡9份、紫草5.5份，照中國藥典2000年版一部附錄IO流浸膏劑與浸膏劑項下的滲漉法，用75％乙醇作溶劑，浸漬24小時，然後以每分鐘3～5ml的流速(以1000g藥材計)滲漉，收集漉液，加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的2.5％)，真空濃縮(60℃以下，-0.08MPa)至相對密度為1.15～1.20(60℃熱測)，備用。取荊芥10.9份、陳皮5.5份，加8倍量水浸泡0.5小時，加熱蒸餾提取6小時，收集揮髮油及濾液，備用。取黃芩5.5份、浮石10.9份、蟬蛻5.5份、甘草5.5份與上述醇提及蒸餾後的藥渣合併，加熱水煎提三次，加水量分別為藥材量的8倍、6倍、6倍，提取時間分別為1.5小時、1小時、1小時，收集三次水提液，過濾並與荊芥、陳皮蒸餾後的濾液合併，濃縮至相對密度約為1.04～1.06(60℃熱測)，靜置過夜(12小時以上)，取上清液過濾，於濾液中加入一定量β-CD(約為全方藥材總量的2.5％)，濃縮至相對密度為1.23～1.25(60℃熱測)，備用。取上述醇提與水提濃縮液，混合，於60℃繼續濃縮至相對密度為1.30～1.32(60℃熱測)，真空乾燥(60℃，-0.08MPa)，粉碎成細粉，備用。另取β-環糊精適量置於研缽中，加4倍量水研磨均勻，按8∶1(β-環糊精∶揮髮油)的比例取揮髮油適量，先配成50％揮髮油乙醇液，然後緩緩加入到研缽中，研磨2小時，於50℃乾燥，粉碎，備用。取上述幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物，加入適量蔗糖、甜菊素混勻，以3％聚維酮K30乙醇溶液制軟材，過10～12目篩，40℃乾燥，整粒，得顆粒劑。
實施例6 幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物的製備步驟與實施例1完全相同。只不過通過以下方法製備成片劑取幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物，加入細粉重量3倍量微晶纖維素和3％的交聯聚維酮(PVPP)，混勻，用2％聚維酮K30(PVP)的95％乙醇溶液制軟材，擠壓過16目篩網，40～50℃乾燥，整粒，加入3％的羧甲基澱粉鈉(CMS-Na)和0.3％的硬脂酸鎂混勻，壓製成1000片(0.40g/片)，包薄膜衣，即得片劑。
實施例7 幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物的製備步驟與實施例2完全相同。只不過通過以下方法製備成片劑取幹浸膏粉與揮髮油的β-環糊精包合物，加入細粉重量2倍量微晶纖維素和3％的交聯聚維酮(PVPP)，混勻，用2％聚維酮K30(PVP)的95％乙醇溶液制軟材，擠壓過16目篩網，40～50℃乾燥，整粒，加入3％的羧甲基澱粉鈉(CMS-Na)和0.3％的硬脂酸鎂混勻，壓製成片(0.40g/片)，包薄膜衣，即得片劑。
實施例8 步驟和配方與實施例1相同，只不過用羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)代替聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K-30，用α-環糊精(α-CD)代替β-環糊精，用木糖醇代替蔗糖、甜菊素。
實施例9 步驟和配方與實施例2相同，只不過用低取代羥丙基纖維素(L-HPC)代替聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K-30，用N-LOK變性澱粉代替β-環糊精，用蛋白糖代替蔗糖、甜菊素。
實施例10 步驟和配方與實施例5相同，只不過用聚乙二醇(PEG)代替聚乙烯吡咯烷酮(PVP)K-30，用α-環糊精(α-CD)代替β-環糊精，用高果糖代替蔗糖、甜菊素。
藥效學試驗 試驗材料 1.藥物與試劑 1.1受試藥物 荊杏止咳顆粒其為本發明的一種產品，其製備方法如實施例5所披露。規格浸膏每1ml含4.25g生藥。臨床擬用量55g生藥/日。
1.2對照藥物 風寒咳嗽衝劑主要成分有陳皮、生薑、法半夏、青皮、杏仁等。功能溫肺散寒、祛痰止咳。用於外感風寒、頭痛鼻塞、咳嗽痰多、胸悶氣喘等。含量5g(成藥)/袋，臨床用量為1袋/次，2次/日，由太極集團·四川省綿陽製藥廠生產，批准文號ZZ-3282-川衛藥準字(1994)010286號，批號0100105001。
阿司匹林腸溶片長春長慶藥業(集團)有限公司生產 批號20000104規格25mg/片。
安比先膠囊海南三葉製藥廠 批號010822規格2.5g/粒。
慶大黴素8萬u/ml，批號2001080 鄂北製藥廠。
氨苄西林鈉1g/支，批號10012205 華北製藥股份有限公司。
1.3試驗試劑 磷酸組胺上海麗珠東風生物技術有限公司 批號020106。
氯化乙醯膽鹼上海試劑三廠 批號960508。
百白破三聯疫苗湖南省衛生防疫站提供 批號010719。
環磷醯胺規格20mg/支，上海華聯製藥有限公司 批號20010713。
氫化可的松規格25mg/瓶，上海信誼藥廠 批號20001011。
肝素鈉注射液規格2ml/支，徐州萬邦生化製藥有限公司 批號0103103。
1.4實驗用病毒株 流感病毒亞甲型鼠肺適應株FM1，購自中國預防醫學科學院病毒研究所。
流感病毒甲3型、柯薩奇B族病毒4型(CoxB4)副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(Ad3)和鼻病毒14型。分別購自中國預防醫學科學院病毒學研究所及兒科研究所。
1.5試驗用菌株 標準株金黃色葡萄球菌(25923)，肺炎雙球菌(31002)，溶血性鏈球菌(32213)，流感桿菌(58529)，流感嗜血桿菌(58601)，莫拉卡他菌(29103)，以上菌株由湖南省衛生防疫站提供。
臨床株金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、流感嗜血桿菌，均由湖南中醫學院微生物教研室提供。
2.實驗動物 2.1來源及種屬 昆明種小鼠，清潔級，體重13～17g，雌雄兼用，合格證號湘醫動字20-011號。
Wistar大鼠，符合清潔級標準，體重45～85g，雌雄兼用，合格證號湘醫動字20-022號，以上動物由湖南醫科大學實驗動物學部提供。
抗病毒實驗所用動物昆明種小鼠，體重14±1g，雌雄兼用。由北京生物製品研究所實驗動物室提供，合格證號京動許字(1999)第012號。
3.試驗儀器 TP-1000型電子天平湘儀天平儀器廠，SE2020型電子天平上海奧豪公司，L80-2離心沉澱機上海躍進醫療器械廠，721型分光光度計上海分析儀器三廠，超聲霧化器，S-888E型，中外合資南京道芬電子有限公司生產。
4.統計方法 計量資料以X±SD表示，方差齊者以方差分析和成組t檢驗分析方差不齊者以秩和檢驗分析。計數資料以X2檢驗分析。
5.劑量設置 荊杏止咳顆粒臨床小兒用法用量溫開水衝服，每日3次，每次4g，合生藥55g。小兒體重以35kg計算，小兒每日用量為1.57g生藥/kg。按實驗動物與人臨床用藥劑量的體型係數換算法計算，(R小鼠＝0.06，R大鼠＝0.09，R家兔＝0.093，R豚鼠＝0.099R人＝0.11)。根據實驗結果，以動物等效量的0.5、1、2倍量作為大、小鼠、豚鼠的低、中、高劑量；以動物等效量的1，2，4倍量作為家兔的低、中、高劑量。則實驗動物的低劑量、中劑量、高劑量為

6.給藥途徑 灌胃給藥，與擬推薦的臨床用藥途徑一致。
方法與結果 [主症研究] 一、對急性支氣管炎模型大鼠的影響 (一)造模實驗方法 1.造模與分組 選體重55～85g的幼年Wistar大鼠60隻♀

各半，隨機分成6組，(1)正常組；(2)模型組；(3)，(4)，(5)為荊杏止咳顆粒高、中、低劑量組；(6)風寒咳嗽衝劑組，將(2)、(3)、(4)、(5)、(6)組大鼠放入500ml密閉的玻璃容器內，50g捲菸末燃燒煙燻，同時通入O2(含5％CO2)，持續1h，每天1次，連續煙燻21天，同時鼻滴奈氏卡他菌(3億/ml)5滴，每周1次，共3次。
2.給藥方法 與造模同時給藥。模型組、正常對照組分別灌服生理鹽水0.5ml/天，連續21天。
(二)檢測指標及結果 1.病理學檢查 造模21天後，於最後1次給藥後1h，處死大鼠，斷頭取血加肝素抗凝備用，用於細胞內殺菌試驗和白細胞趨向化功能試驗。將大白鼠處死後，立即把各組動物的氣管、支氣管、連帶肺組織一併固定於10％福馬林溶液中，72h後，取出氣管、支氣管組織塊，包埋切片，HE染色，於顯微鏡下觀察。結果見表1、2及病理檢驗報告。
表1 荊杏止咳顆粒對急性支氣管炎模型大鼠病理損傷的修復結果
經X2比較；與正常對照組比較***P＜0.01；與模型組比較△△P＜0.05 表2 荊杏止咳顆粒對急性支氣管炎模型大鼠病理損傷的積分結果
與正常對照組比較***P＜0.01；與模型組比較△△P＜0.05，△△△P＜0.01 結果由表1、表2可見，荊杏止咳顆粒高、中、低劑量組與模型組比較有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒對急性支氣管炎模型大鼠的病理損傷有修復作用和減輕其損傷作用。
2.細胞內殺菌試驗 實驗方法 (1)將實驗造模的大鼠處死，斷頭取血並加肝素抗凝血，分離出白細胞用Hank’s液配製成5×106/ml細胞懸液。
(2)調理素用8ml Hank’s液加2ml新鮮鼠血清配成20％新鮮血清調理素。
(3)細菌金黃色葡萄球菌，本院微生物教研室保留菌株，取金黃色葡萄球菌將其配製成1×108/ml細菌懸液。
(4)按如下操作
(5)計算
結果見表3。
表3 荊杏止咳顆粒白細胞殺菌試驗結果
與正常空白對照組比較*P＞0.05；**P＜0.05；***P＜0.01 與模型對照組比較△P＞0.05；△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果由表3可見，在60min與90min時，荊杏止咳顆粒高、中、低劑量，與模型對照組比較有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒能增強造模大鼠細胞內殺菌作用。
3.白細胞趨向化功能試驗(瓊脂糖平皿法) 方法將實驗造模後大鼠處死，斷頭取血並加肝素抗凝。分離出白細胞，用RPMI-1640液配製成2.5×107/ml細胞懸液。按瓊脂糖平皿法製備瓊脂糖平皿，每平皿打24孔，孔距為2.4mm，每行3孔測定一個樣本。中間孔加白細胞懸液5μl，外孔加大腸桿菌24h液體培養物過濾液5μl，同孔加RPMI-1640培養液5μl作對照。將上述平皿加蓋後，放入溫盒內，置37℃溫育3h。取出後每皿加3ml甲醇30min處理，繼續加47％中性福馬林溶液3ml固定，取出完整的瓊脂層，粘附固定在平皿底層的細胞用瑞氏染液染色，水洗，待幹。用400倍生物顯微鏡測微尺測量中間孔向兩側移行的距離。以中間孔細胞向外孔(趨化因子)移行的距離為A，向內孔(培養液對照)移行的距離為B，按下式計算移動指數，結果見表4。

表4 荊杏止咳顆粒白細胞趨向化功能試驗結果
與正常空白對照組比較，***P＜0.01 與模型組比較，△P＞0.05，△△P＜0.05，△△△P＜0.01 結果由表4可見，荊杏止咳高、中劑量組與模型對照組比較有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒能增加造模大鼠的白細胞移動指數，提高白細胞趨向化功能。
二、抗炎實驗 (一)對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響 方法取體重13～17g雄性昆明種小鼠70隻，隨機分為7組，正常空白對照組，模型組，荊杏止咳高、中、低劑量組，阿司匹林組，風寒咳嗽衝劑組，每組10隻，其中正常空白對照組，模型組給予蒸餾水，灌胃給藥組分別按表5灌胃給藥，每日1次，連續6d，未次給藥1h後，每隻小鼠左耳前後面塗0.05ml二甲苯致腫，右耳不塗以作對照，30min後，處死動物，剪下左、右耳，用9mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，用天平稱量，以左右耳差值作為腫脹度，數據經成組t檢驗，結果見表5。
表5 荊杏止咳顆粒對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響(n＝10，χ±SD)
注與模型對照組比較△P＞0.05，△△P＜0.05，△△△P＜0.01；與空白對照組比較***P＜0.01 結果荊杏止咳顆粒各劑量組與模型組比較均有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒對二甲苯致小鼠耳廓腫脹具有明顯抑制作用。
(二)對大鼠皮下注射瓊脂致肉芽腫增生影響。
方法取體重55～85g雄性Wistar大鼠60隻，隨機分為6組，每組10隻，於乙醚麻醉狀態下，在鼠背中線下注射2％瓊脂溶液，每隻1ml，按表6劑量每天給藥或蒸餾水，給藥15天後，頸靜脈放血處死解剖，剝離出肉芽腫瓊脂塊，稱取溼重，數據經成組t檢驗，結果見表6。
表6 荊杏止咳顆粒對大鼠皮下注射瓊脂致肉芽腫增生的影響(n＝10，χ±SD)
注與模型對照組比較△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果荊杏止咳高、中、低劑量組與模型對照組比較有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒對皮下注射瓊脂所致肉芽腫增生具有明顯抑制作用。
三、鎮咳實驗 (一)對濃氨水致小鼠咳嗽的影響。
方法通過預試，找出氨水引起小鼠100％咳嗽的最小噴霧時間(採用超聲霧化法)取體重13～17g昆明種小鼠50隻，♀

各半。按體重與性別隨機分成模型對照組。荊杏止咳高、中、低劑量組，風寒咳嗽衝劑組，每組10隻，分別按表7劑量灌胃給藥或蒸餾水，每天給藥1次，連續3d，末次給藥後1h，分別將小鼠放入體積4L的鐘罩內，噴入27％氨水8秒刺激小鼠致咳(以收腹、仰頭、張口或咳嗽為咳嗽指標)，觀察小鼠咳嗽潛伏期及3min內的咳嗽次數，數據經成組t檢驗，結果見表7。
表7 荊杏止咳顆粒對濃氨水致小鼠咳嗽的影響(n＝10，χ±SD)
注與模型對照組比較△P＞0.05；△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果荊杏止咳顆粒高、中二個劑量組與對照組比較，咳嗽次數和潛伏期均有非常顯著性差異，低劑量組在咳嗽次數方面有顯著差異，提示荊杏止咳顆粒對濃氨水致小鼠咳嗽具有明顯抑制作用。
(二)對SO2所致小鼠咳嗽的影響 方法取體重13～17g昆明種小鼠50隻。按體重與性別隨機分為模型對照組，荊杏止咳高、中、低劑量組，風寒咳嗽衝劑組，每組10隻，對照組灌服蒸餾水，其它各組按表8劑量灌胃給藥，每天1次，連續給藥3d，末次給藥後1h，將小鼠放入500ml的廣口瓶中，通入SO26ml引咳，觀察並記錄小鼠的咳嗽潛伏期和3min內咳嗽次數，數據經成組t檢驗。結果見表8。
表8 荊杏止咳顆粒對SO2所致小鼠咳嗽的影響(n＝10，χ±SD)

注與對照組比較△P＞0.05；△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果荊杏止咳顆粒高、中劑量組與對照組比較咳嗽次數與潛伏期均有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒對SO2致咳有明顯抑制作用。
[次症研究] 一、化痰實驗 (一)對小鼠氣管排泌酚紅的影響 方法1.取體重13～17g昆明種小鼠60隻，♀

各半，按體重與性別隨機分為空白對照組、荊杏止咳高、中、低劑量組、風寒咳嗽衝劑組，每組10隻，按表9劑量分別給藥或蒸餾水，連續給藥3天，末次給藥1h後，按0.1mg/10g的劑量，給每鼠ip0.5％的酚紅溶液，30min後，處死動物，剝離氣管周圍組織，剪下自甲狀軟骨至氣管分支處一段氣管，放入盛有2ml生理鹽水的試管中，再加入0.1mllNaOH溶液(1mol/L)，用721型分光光度計於546nm處測OD值。
2.用分析純酚紅配製濃度為100μg/ml、10μg/ml、5μg/ml、3μg/ml、1μg/ml、0.7μg/ml、0.5μg/ml、0.3μg/ml、0.1μg/ml的溶液，測定其OD值，計算其標準曲線回歸方程為y＝0.1368+7.4673X(r＝0.9988)。
3.據標準曲線將測得的OD值換算成酚紅含量，數據經成組t檢驗，結果見表9。
表9 荊杏止咳顆粒對小鼠氣管排泌酚紅的影響(n＝10，χ±SD)

注與模型對照組比較△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果荊杏止咳顆粒高、中劑量組與空白對照組比較有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒能夠促進小鼠氣管排泌酚紅作用。
(二)對大鼠毛細玻管排痰量的影響 方法取體重55～85gWistar大鼠60隻，♀

各半，按體重和性別隨機分為空白對照組，荊杏止咳高、中、低劑量組，風寒咳嗽衝劑組，每組10隻，實驗前先禁食不禁水10h，用烏拉坦銨1g/kg腹腔注射麻醉後，仰位固定，剪開頸中部皮膚分離出氣管，在甲狀軟骨下緣上中兩軟骨環之間用尖銳的注射針尖扎一小孔，然後插入玻璃毛細管一根，使毛細管剛好接觸氣管底部表面，使之吸取氣管後部之痰液，記錄給藥前2h的正常分泌量，按表10劑量灌胃給藥後，再觀察2h分泌量。數據經成組t檢驗，結果見表10。
表10 荊杏止咳顆粒對大鼠毛細玻管排痰量的影響(n＝10，χ±SD)
注與模型對照組比較△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果荊杏止咳顆粒三個劑量組與空白對照組比較，其差異有顯著性意義，且高、中、低三個劑量組給藥後平均每小時分泌量為給藥前的200％以上，說明荊杏止咳顆粒有增加大鼠毛細玻管排痰量作用。
二、平喘實驗 對磷酸組織胺哮喘模型豚鼠的影響 方法取體重為120～180g幼年豚鼠若干只，放入噴霧箱內，用超聲霧化器噴入2％乙醯膽鹼和0.4％組胺的等量混合液，每次噴10～15s，觀察豚鼠的哮喘反應，選出合格者(哮喘潛伏期不超過150s為合格)50隻，雌雄不拘，隨機分成5組，分別為①模型空白對照組；②風寒咳嗽衝劑組；③～⑤荊杏止咳高、中、低劑量組。按隨機原則將各組動物按表11劑量灌胃給藥15min後，再重複給藥一次，給藥30min後，放入噴霧箱內，選用預選時的同樣條件噴入磷酸組胺混合液，記錄豚鼠的哮喘潛伏期(從開始噴霧至出現抽搐，跌倒為止的時間即為豚鼠的哮喘潛伏期)。
表11荊杏止咳顆粒對磷酸組胺致哮喘豚鼠的影響(χ±SD)
注與對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01 結果表11表明荊杏止咳中、低劑量與空白對照組比較，能使豚鼠誘喘潛伏期顯著延長，表明荊杏止咳顆粒能抑制磷酸組胺導致豚鼠的哮喘。
[病因研究] 一、抗病毒實驗 (一)材料與試劑 受試藥物荊杏止咳顆粒，批號200110901，由湖南省中醫藥研究院提供。
陽性對照藥病毒唑湖北省醫藥工業研究所出品，為原料藥，批號950708，實驗時小鼠按臨床等效劑量(0.07g/kg/d)灌餵給藥。
風寒咳嗽衝劑太極集團四川省綿羊製藥廠生產，批號0100105001。實驗時小鼠按臨床等效劑量(2.10g/kg/d)灌餵給藥。
病毒流感病毒亞甲型鼠肺適應株FM1，用於體內抗病毒實驗，購自中國預防醫學科學院病毒研究所，-60℃低溫冰箱保存備用。
流感病毒甲3型、柯薩奇B族病毒4型(CoxB4、)副流感病毒1型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(Ad3)和鼻病毒14型。分別購自中國預防醫學科學院病毒學研究所及兒科研究所，本實驗室傳代後使用。
細胞人喉癌傳代細胞HEP-2株，購自衛生部藥品生物製品檢定所。本實驗室傳代後使用。
細胞培養液含10％小牛血清、0.29mg穀氨醯胺/ml、100u/ml青、鏈黴素的Eagle’s MEM(日本日水製藥株式會社出品)。
細胞維持液除所含小牛血清為2％外，其他含量均同培養液。
動物昆明種小鼠，體重14±1g，雌雄兼用。由北京生物製品研究所實驗動物室，合格證號京動許字(1999)第012號。
主要儀器CO2培養箱，日本Yamato松株式會社產品。倒置顯微鏡，日本Olympus產品。
(二)方法與結果 1.體內抗病毒實驗 (1)對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用 方法取小鼠70隻，按體重隨機分成7組、分別為正常動物對照組、病毒感染對照組、給藥三個劑量組、病毒唑組、風寒咳嗽衝劑組。除正常對照組外，將小鼠用乙醚輕度麻醉，以15個LD50流感病毒液滴鼻感染，每隻0.05ml。從感染前一天開始灌餵給藥，每天2次，每次0.5ml，連續5天，對照組在同等條件下蒸餾水灌喂。第6天稱取小鼠體重後解剖，肉眼觀察肺部病變，記錄肺部肝樣實變的程度，摘取全肺稱重，逐個計算肺指數值，並求出肺指數抑制率。
肺指數＝[肺重(g)/體重(g)]×100％
結果採用組間t檢驗進行統計學處理。見表12 表12 藥物對小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用
與正常對照組比較##P＜0.01 與病毒對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05 結果表12結果顯示受試藥物的高、中劑量組動物的肺指數值明顯低於病毒對照組，與病毒對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，表明藥物在此劑量時對流感病毒引起的小鼠肺炎均有明顯的抑制作用，抑制率均為18.08％。
(2)對流感病毒所致小鼠死亡的保護作用 方法取小鼠120隻，按體重隨機分成6組。分別為荊杏止咳顆粒三個劑量組、病毒唑(0.07g/kg/d)組、風寒咳嗽衝劑組(2.10g/kg/d)及病毒感染對照組。各組小鼠用乙醚輕度麻醉後，以2個LD50流感病毒液滴鼻感染，每隻0.05ml。從感染前一天開始灌胃給藥，每天2次，每次0.5ml，連續7天。累計感染後小鼠的死亡數，計算死亡率、保護率及生命延長率。結果採用卡方及T檢驗進行統計學處理。



表13 荊杏止咳顆粒對流感病毒致小鼠死亡的保護作用
與感染對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05 表14 荊杏止咳顆粒對流感病毒致小鼠死亡的保護作用

與感染對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05 結果表13、14結果顯示小鼠感染病毒後14天內，荊杏止咳顆粒22.8、11.4g/kg/d劑量組小鼠的死亡數較感染對照組明顯減少，11.4g/kg/d劑量組與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，保護率為38.89％。小鼠的平均存活天數較感染對照組明顯延長，與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，延長率為15％和16.5％。表明荊杏止咳顆粒在此劑量時對流感病毒感染致小鼠死亡有一定的保護作用。
2.荊杏止咳顆粒的體外抗病毒實驗 (1)對Hep-2培養細胞的毒性試驗 方法將藥液用Eagle’s培養液作1∶20-1∶1280倍比稀釋，加到巳長成單層的HEP-2細胞培養板中，100ul/孔，每個稀釋度藥液做3個復孔，同時設正常細胞對照。將培養板置37℃5％CO2培養箱中培養四天，每天倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，確定細胞不出現明顯退變的最低稀釋倍數，實驗時順延做到最小有效濃度(即最大稀釋倍數)。按Reed-Muench法計算50％毒性濃度(TC50)和最大無毒濃度(TC0)。
表15 荊杏止咳顆粒對培養細胞的TC0TC50(mg生藥/ml)
(2)對病毒致細胞病變作用的影響 取已長成單層細胞的培養板，倒掉培養液，接種100TCID50的不同病毒液50ul，置37℃5％CO2培養箱中吸附1小時後，倒掉病毒液，用不含小牛血清的Eagle’s維持液洗細胞面2次後，加入相應稀釋度的藥液100ul/孔。同時設病毒對照、陽性對照藥及正常細胞對照。病毒唑的終濃度採用TC50的1/4。置37℃5％CO2培養箱中培養，每日倒置顯微鏡下觀察細胞病變，當病毒對照組細胞變為++++時記錄實驗結果。細胞病變按六級標準判斷，並按Reed-Muench計算50％有效濃度(EC50)和治療指數(TI)。
一細胞生長正常，無病變出現； ±細胞病變少於整個單層的10％； 1細胞病變約佔整個單層細胞的25％以下； 2細胞病變約佔整個單層細胞的50％以下； 3細胞病變約佔整個單層細胞的75％以下； 4細胞病變約佔整個單層細胞的75％以上； 治療指數(TI)＝TC50/EC50 (3)結果 表16 荊杏顆粒對病毒致細胞病變的影響

注「-」表示無細胞病變。
表中結果顯示荊杏止咳顆粒在體外實驗時，流感病毒、HVJ、RSV、CoxB4、Ad3及鼻病毒的細胞病變較病毒對照組均有所減輕，其中HVJ、RSV、CoxB4及鼻病毒有顯著性差異(P＜0.05)，EC50和IT均為0.4mg/ml和3.4。其他病毒無統計學意義。
二、抑菌實驗 (一)試驗材料 1.菌株 標準株金黃色葡萄球菌(25923)，肺炎雙球菌(31002)，乙型溶血性鏈球菌(32213)，流感桿菌(58529)，流感嗜血桿菌(58601)，莫拉卡他菌(29103)，以上菌株由湖南省衛生防疫站提供。
臨床株金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌，流感嗜血桿菌均由湖南中醫學院微生物教研室提供。
2.培養基牛肉膏湯瓊脂培養基；5％兔血瓊脂培養基。
3.試藥荊杏止咳浸膏4.25g生藥/ml。批號200110901，提供單位湖南省中醫藥研究院。
4.對照藥物 慶大黴素8萬u/ml，批號2001080，鄂北製藥廠。
氨苄西林鈉1g/支，批號10012205，華北製藥股份有限公司。
(二)方法與結果 1.體內抑菌試驗——對細菌感染所致小鼠死亡的保護作用 方法將金黃色葡萄球菌，肺炎雙球菌，流感嗜血桿菌臨床株接種於牛肉膏湯液體培養基中，置37℃溫箱培養8小時，用生理鹽水稀釋為10-1、10-2、10-3、10-4濃度的菌液，將不同濃度的菌液分別腹腔注射感染小鼠，每鼠1ml，每組10隻，觀察動物在5天內的死亡情況，測出試驗菌株引起小鼠90％-100％死亡的MLD，菌株的MLD分別為金葡菌為1×108cfu/ml，肺炎雙球菌為1.5×108cfu/ml，流感嗜血桿菌為1.0×109cfu/ml。取體重13～17g昆明種小鼠360隻，雌雄各半，隨機分成18組，每組20隻，按表17劑量灌胃給藥，對照組給等容積生理鹽水，給藥3天後，於第4天腹腔注射感染小鼠的MLD1ml，再繼續給藥3天，觀察記錄感染後一周內各組小鼠的死亡數，計算死亡率，以死亡率通過X2進行統計比較。
表17 荊杏止咳顆粒對金葡菌及肺炎雙球菌感染所致小鼠死亡的保護作用

注與對照組比較△△P＜0.05 △△△P＜0.01 結果試驗結果表明，荊杏止咳高劑量組對金葡菌、流感嗜血桿菌臨床株感染後小鼠的死亡率與對照組比較有顯著性差異，荊杏止咳中、低劑量對肺炎雙球菌臨床株感染後小鼠的死亡率與對照組比較有顯著性差異。
2.平板打孔法 取平板(普通瓊脂平板/血平板)，用接種環挑取各菌種標準株，用劃線法將菌液均勻塗布各培養基表面，然後用直徑6mm的打孔器打孔(等距離4孔/平板)培養24h，觀察是否有抑菌圈出現，通過量化抑菌圈直徑以此初步判斷試驗藥物抑菌作用的強弱，結果如下表 表18 荊杏止咳顆粒抑菌試驗結果
(金葡菌、肺炎雙球菌、乙型鏈球菌、莫拉卡他菌用氨苄西林鈉作陽性對照藥、流感桿菌、流感嗜血桿菌用慶大黴素作陽性對照藥)。
3.試管法測藥物的MIC及MBC 按試管稀釋法用培養基將藥物稀釋成1∶1、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32、1∶64、1∶128，每管1ml，向每管加入3×10-3cfu/ml稀釋的新鮮菌液0.1ml，同時設立菌株對照，培養基對照。金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、乙型鏈球菌以氨苄西林鈉作陽性對照藥，流感桿菌、流感嗜血桿菌以慶大黴素作陽性對照組。置37℃培養24h，觀察細菌生長情況。以不顯示混濁，完全無菌生長的試藥濃度為藥物對該菌株的最低抑菌濃度，選出MIC試驗中無菌生長的培養基管用接種環取-環接種於不含試藥的瓊脂培養基上，置37℃溫箱培養18小時，觀察細菌生長情況，完全無菌生長的濃度為藥物對該菌株的最低殺菌濃度(MBC)。
結果見表19、20。
表19 荊杏止咳顆粒的抑菌試驗(MIC)結果
表20 荊杏止咳顆粒的抑菌試驗(MBC)結果

結果試驗結果表明，荊杏止咳顆粒對金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、莫拉卡他菌均有不同程度的體外抑菌作用，其中對乙型溶血性鏈球菌及肺炎雙球菌作用較弱。
[輔助研究] 一、免疫功能試驗 (一)對免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響 方法取幼年雄性昆明種小鼠60隻，隨機分為6組，正常對照組每天灌胃蒸餾水，其它各組每日SC氫化可的松50mg/kg一次，造成免疫功能低下，並分別給予荊杏止咳高、中、低劑量，風寒咳嗽衝劑或蒸餾水，連續7天，於末次給藥1h後，每鼠尾靜脈注射印度墨汁10ml/kg，於2min、12min時，分別從眼底靜脈叢取血20ul，加到2ml0.1％Na2CO3溶液中搖勻，於721型分光光度計在680nm處測定吸光度，將取完血後的小鼠斷頭處死，將其肝臟和脾臟取出稱重，計算廓清指數及校正廓清指數。
表21 荊杏止咳顆粒對免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響(χ±SD)

注與空白對照組比較***P＜0.01 與模型組比較△P＞0.05；△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果表21表明，荊杏止咳顆粒高、中、低劑量組與模型對照組比較，其差異有非常顯著性意義，提示荊杏止咳顆粒對氫化可的松所致免疫功能低下小鼠有明顯提高特異性免疫的作用。
(二)對免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響 方法取幼年昆明種小鼠60隻，♀

各半，按體重與性別隨機分為6組，每組10隻，空白對照組和模型組灌胃蒸餾水，其餘各組按容量0.2ml/10g灌胃荊杏止咳高、中、低劑量，風寒咳嗽衝劑等相應藥液，連續7天，除空白對照組外，其餘各組小鼠按40mg/kgSC環磷醯胺連續3天，造成免疫功能低下模型，第1日每鼠腹腔注射5％雞紅細胞懸液0.2ml，末次給藥1h後，於眼底靜脈叢取血，分離血清，用生理鹽水將血清稀釋100倍，取稀釋血清1ml，與5％雞紅細胞懸液0.5ml、10％豚鼠血清0.5ml混合，在37℃恆溫箱中溫育30min，置0℃冰箱中中止反應，離心，取上清液於721型分光光度計540nm處比色，測定吸光度，另設不加小鼠血清的空白對照管調零，數據經成組t檢驗。
表22 荊杏止咳顆粒對免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響(χ±SD )
與正常空白組比較***P＜0.01；與模型對照組比較△P＞0.05；△△P＜0.05；△△△P＜0.01 結果表22表明，荊杏止咳顆粒各劑量組與模型對照組比較，其差別具有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒能顯著提高環磷醯胺所致免疫功能低下小鼠誘生溶血素能力。
二、解熱實驗 對三聯疫菌引起家兔發熱的解熱作用 方法取體重1～1.5kg健康家兔若干只，實驗室溫度控制在25℃左右，於試驗前3日，每日測正常肛溫2次，選取體溫變動不高於0.3℃的家兔40餘只，耳靜脈注射三聯疫苗2ml/kg體重，造成高熱病理模型。1h後測體溫，以升高0.5℃以上者作為實驗動物，選取40隻實驗家兔隨機分為對照組，荊杏止咳高、中、低劑量組，風寒咳嗽衝劑組。分別予受試藥物灌胃，其中對照組ig蒸餾水，藥後1h、2h、3h、4h測定體溫。結果見表23。
表23 荊杏止咳顆粒對三聯疫苗所致家兔發熱體溫的影響(n＝10，χ±SD)
注與對照組比較△△△P＜0.01；△△P＜0.05 結果荊杏止咳顆粒各劑量組與對照組比較有顯著性差異，提示荊杏止咳顆粒能抑制三聯疫苗所致家兔體溫的升高，具有一定地清熱解表作用。
荊杏止咳顆粒對急性支氣管炎模型大鼠的實驗研究結果顯示荊杏止咳顆粒對急性支氣管炎模型大鼠的病理損傷有修復作用，並能增強造模大鼠細胞內殺菌作用，能增加造模大鼠的白細胞移動指數，提高白細胞趨向化功能。
由抗炎實驗可見，荊杏止咳顆粒對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，大鼠皮下注射瓊脂肉芽腫形成有較強的抑制作用，具有一定的抗炎作用。
由鎮咳實驗可見，荊杏止咳顆粒對濃氨水和SO2引咳均能延長咳嗽潛伏期和減少3min內咳嗽次數，具有一定的止咳作用。
由化痰實驗可見，荊杏止咳顆粒能夠促進小鼠氣管酚紅排泌及增加大鼠毛細玻管排痰量，有一定的化痰作用。
由平喘實驗可見，荊杏止咳顆粒能使豚鼠誘喘潛伏期顯著延長，表明荊杏止咳顆粒能抑制磷酸組胺導致豚鼠的哮喘。
荊杏止咳顆粒體內抗流感病毒實驗結果顯示藥物在22.8、11.4g/kg/d劑量時對小鼠流感性肺炎有明顯的抑制作用；在11.4g/kg/d劑量時對流感病毒致小鼠死亡有明顯的保護作用，保護率為38.89％，生命延長率為16.5％％。
荊杏止咳顆粒體外抗病毒實驗顯示荊杏止咳顆粒對流感病毒、HVJ、RSV、CoxB4、Ad3及鼻病毒有一定的抑制作用。荊杏止咳顆粒在體外實驗時，對流感病毒、HVJ、RSV、CoxB4、Ad3及鼻病毒的細胞病變較病毒對照組均有所減輕，其中HVJ、RSV、CoxB4及鼻病毒與病毒對照組比較，有顯著性差異(P＜0.05)，EC50和TI均為0.4mg/ml和3.4。
由抑菌實驗可見荊杏止咳顆粒對金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌、莫拉卡他菌、溶血性鏈球菌等有不同程度的體外抑菌作用，對金葡菌、肺炎雙球菌、流感嗜血桿菌感染小鼠死亡有不同程度的保護作用。荊杏止咳顆粒具有一定的抑菌作用。
由免疫實驗可見，荊杏止咳顆粒能提高免疫功能低下小鼠的碳粒廓清指數及誘生溶血素能力，具有一定的提高免疫力的作用。
由解熱實驗可見，荊杏止咳顆粒能明顯抑制三聯疫苗所致家兔體溫的升高，具有一定的解熱作用。
總之，通過對急性支氣管炎模型大鼠影響的研究及抗炎、止咳、化痰、平喘、抗病毒、抗菌、免疫、解熱等試驗，結果表明本發明提供的藥物對急性支氣管炎模型大鼠的氣管病理損傷有修復作用，並能增強模型大鼠細胞內殺菌作用，增強模型大鼠白細胞趨化功能；對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，大鼠皮下注射瓊脂所致的肉芽腫形成有較強的抑制作用，具有一定的抗炎作用；對濃氨水和SO2引咳均能延長咳嗽潛伏期和減少3min內咳嗽的次數，具有一定的止咳作用；能夠促進小鼠氣管酚紅排泌量及增加大鼠毛細玻管排痰量，具有一定的化痰作用；能抑制由磷酸組織胺引起的豚鼠哮喘，具有較好的平喘作用；本發明提供的藥物體外對副流感病毒I型(HVT)、呼吸道合胞病毒、柯薩奇B族病毒4型(CoxB4)及鼻病毒14型均顯示出一定的抑制作用；本發明提供的藥物體內在所試劑量範圍內對小鼠流感性肺炎有明顯抑制作用，中劑量對流感病毒致小鼠死亡有明顯的保護作用；對金黃色葡萄球菌，肺炎球菌、莫拉卡他菌、溶血性鏈球菌等有一定的體外抑菌作用，對金葡菌，肺炎雙球菌、流感嗜血桿菌感染小鼠死亡有不同程度的保護作用，具有一定的抑菌作用；能提高免疫功能低下小鼠的碳粒廓清指數及誘生溶血素能力，具有一定的提高免疫作用；對三聯疫苗所致的家兔發熱有明顯的解熱作用。結果表明本發明提供的藥物具有改善急性支氣管炎症狀及抗炎、止咳、祛痰、平喘、抗病毒、抗菌、增強免疫、解熱作用。
毒理研究 1.急性毒性試驗 小兒荊杏止咳顆粒最大濃度為4.25g/ml，當以最大濃度、最大灌胃體積給予小鼠3次/24h，此時最大累積給藥劑量達510.0g/Kg，相當於臨床用量的324.84倍，動物未見明顯毒性作用，結果表明該藥一次性用藥是較安全的。
2.長期毒性試驗 小兒荊杏止咳顆粒20g/kg，40g/kg，80g/kg三個劑量連續灌胃大鼠8周，此時低、中、高劑量分別相當於臨床劑量的12.75、25.5、51倍，結果給藥期及恢復性觀察期(2周)與空白對照組比較，大鼠一般狀況、體重增長、血液學及血液生化指標、主要臟器係數、肉眼觀察及鏡下組織形態學觀察均無明顯差異或異常，表明小兒荊杏止咳顆粒臨床用藥範圍內應用是較安全的。
本發明提供的藥物處方中無法定毒性中藥材及配伍禁忌，臨床前毒理研究證明本品用藥安全性較好。
本領域技術人員將會認識到，或者根據常規經驗就可以確定很多本文所描述的本發明具體實施方式
的等效替換。本申請引用的出版物的披露內容也以引用形式全部併入本文中，以作為參考。然而應該明白，本發明的範圍不限於上述具體實施方式
。在此特別指出，儘管在具體實施例中只列出了本發明藥物的兩種製劑(顆粒劑和片劑)，但是本領域技術人員應該明白，本發明並不局限於此，本文中提到的其他劑型完全可以實施。因此本發明不按照這些具體描述也可以實施，並且仍然在所附的權利要求的範圍之內。
權利要求
1. 一種藥物組合物，其為由下述重量配比的原料製成的藥劑
荊芥 5～15份
矮地茶10～20份
麻黃(蜜炙)5～15份
苦杏仁1～10份
黃芩 1～10份
前胡 5～15份
法半夏5～15份
浮石 5～15份
蟬蛻 1～10份
陳皮 1～10份
紫草 1～10份
甘草 1～10份。
2. 根據權利要求1所述的藥物組合物，其為由下述重量配比的原料製成的藥劑
荊芥 8～13份
矮地茶15～22份
麻黃(蜜炙)7～12份
苦杏仁3～8份
黃芩 3～8份
前胡 7～12份
法半夏7～12份
浮石 7～14份
蟬蛻 3～8份
陳皮 3～8份
紫草 3～8份
甘草 3～8份。
3. 根據權利要求2所述的藥物組合物，其為由下述重量配比的原
料製成的藥劑
荊芥 10.9份
矮地茶 18份
麻黃(蜜炙) 9份
苦杏仁 5.5份
黃芩 5.5份
前胡 9份
法半夏 9份
浮石 10.9份
蟬蛻 5.5份
陳皮 5.5份
紫草 5.5份
甘草 5.5份。
4. 含有權利要求1所述藥物組合物的藥物，其為片劑、丸劑、膠囊劑、囊片劑、粉劑、顆粒劑、懸浮劑、凝膠劑、糊劑中的任意一種。
5. 根據權利要求4所述的藥物，其為片劑或顆粒劑。
6. 根據權利要求4所述的藥物，其進一步含有選自賦形劑、包合劑、載體、稀釋劑、穩定劑、增塑劑、粘結劑、助流劑、崩解劑、填充劑、潤滑劑、塑化劑，著色劑、成膜劑、增味劑、甜味劑、防腐劑中的一種或多種輔料和/或添加劑。
7. 根據權利要求4所述藥物的製備方法，包括(該權項是方法權利要求中的最寬權項，請認真研究，其中的哪些步驟或操作是可省的，或者可由其他方法代替，總之，儘量將能製成此藥的所有方法囊括其中，以免以後其他人繞開權利要求而實施該產品)
(1)按重量份稱取矮地茶、炙麻黃、法半夏、苦杏仁、前胡、紫草，進行滲漉，收集漉液，加入包合劑，真空濃縮得第一濃縮液；
(2)按重量份稱取荊芥、陳皮，用水蒸餾提取，收集揮髮油及濾液；
(3)按重量份稱黃芩、浮石、蟬蛻、甘草與步驟(1)和(2)所得的藥渣合併，加熱水煎提，收集水提液，過濾，濾液與步驟(2)中荊芥、陳皮提取後所得的濾液合併，濃縮，得第二濃縮液，然後靜置，取上清液過濾，向所得濾液中加入包合劑，再濃縮，得第三濃縮液；
(4)取所述第一濃縮液和所述第三濃縮液，混合，濃縮，乾燥，粉碎成細粉；
(5)按適當比例製備由所述揮髮油與包合劑組成的包合物；
(6)取步驟(4)得到的細粉與步驟(5)得到的包合物，製成適宜的劑型。
8. 根據權利要求7所述的方法，其中所述步驟(1)按如下方法進行
用60～90％乙醇作溶劑，浸漬16-36小時，然後以每分鐘2～7ml的流速(以1000g藥材計)滲漉，收集漉液，加入全方藥材總量的1～5％的所述包合劑，在40～75℃和減壓下部分濃縮得所述第一濃縮液。
9. 根據權利要求7所述的方法，其中所述步驟(2)按如下方法進行
按重量份稱取荊芥、陳皮，用4-12倍量的水浸泡0.5-3小時，蒸餾提取4～10小時，收集所述揮髮油及濾液。
10. 根據權利要求7所述的方法，其中所述步驟(3)按如下方法進行
按重量份稱黃芩、浮石、蟬蛻、甘草與步驟(1)和(2)所得的藥渣合併，加藥材量4-10倍量的熱水煎提1-3次，時間為1-5小時，收集水提液，過濾並與步驟(2)中荊芥、陳皮蒸餾後的濾液合併，部分濃縮，得到所述第二濃縮液，然後靜置，過濾，向所得濾液中加入適量β-環糊精，再濃縮，得所述第三濃縮液。
11. 根據權利要求7所述的方法，其中所述步驟(4)按如下方法進行
取所述第一濃縮液和第三濃縮液，混合，在50-70℃濃縮，乾燥，粉碎成細粉。
12. 根據權利要求7所述的方法，其中所述步驟(5)按如下方法進行
先將所述包合劑用適宜的溶劑如水調成包合劑糊狀物，然後加入適宜比例的步驟(2)中得到的所述揮髮油，混合均勻，作為優選，將所述揮髮油用乙醇稀釋，然後使所得溶液與所述包合劑糊裝物合併，研磨合適的時間，最後乾燥得到揮髮油包合物。
13. 根據權利要求1所述的藥物組合物在製備用於治療小兒外感咳嗽的藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種用於治療外感咳嗽、特別是小兒外感咳嗽的藥物、含有其的藥物組合物，及其製備方法。本發明提供的藥物由以下重量配比的原料製成荊芥5～15份；矮地茶10～20份；麻黃(蜜炙)5～15份；苦杏仁1～10份；黃芩1～10份；前胡5～15份；法半夏5～15份；浮石5～15份；蟬蛻1～10份；陳皮1～10份；紫草1～10份；甘草1～10份。
文檔編號A61K36/8888GK101244170SQ20071011156
公開日2008年8月20日 申請日期2007年6月19日 優先權日2007年6月19日
發明者張慶華 申請人:張慶華