一種油包水型納米乳疫苗製劑的製作方法
2023-10-11 10:47:44 5
專利名稱：一種油包水型納米乳疫苗製劑的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域，具體涉及一種油包水型納米乳疫苗製劑。
背景技術：
目前，國內外常用疫苗類型分為活疫苗和滅活疫苗，但二者在實際應用中均存在 一定的局限性。滅活疫苗剌激機體產生細胞免疫和黏膜免疫作用較弱；弱毒活疫苗儲存不 方便、安全性較低、伴有接種反應等。因此，研製出既能產生較強的體液免疫抗體又能產生 高效的局部黏膜免疫的新型疫苗已成為疫苗研究的焦點。
發明內容
針對上述現有技術中存在的問題，本發明的目的在於提供一種儲存方便、安全的 納米乳疫苗製劑的製備。
實現上述發明目的的技術方案是一種納米乳疫苗製劑的製備，由下述重量百分 比的原料製成油10% 70%、表面活性劑20% 60%、助表面活性劑5% 30%、抗原 1 40 % 、免疫增強劑0. 01 % 40 %組成，上述原料的總重量百分比為100 % 。
本發明製備的納米乳疫苗為水包油型納米乳，外觀澄清、透明，並且在透射電鏡下 觀察，納米乳顆粒呈球形，分布均勻，無粘連。 本發明納米乳中的油類包括大豆油、麥芽油、角鯊烯等動植物油和輕質液體石蠟、 乙酸乙酯、IPM(肉豆蔻酸異丙酯)等礦物質油，可減少動物機體的疫苗副反應；表面活性劑 包括斯盤80、吐溫80、斯盤85等非離子表面活性劑；助表面活性劑包括乙醇、丙二醇、丁二 醇等小分子醇類。 另一方面，本發明的納米乳疫苗中可添加免疫增強劑，包括板藍根多糖、海藻多糖 等植物，真菌多糖類中的一種或幾種；其若是水溶性的，溶於水中作為水相的一部分；若溶 於有機溶劑，則可溶於油相或助表面活性劑中。 再一方面，本發明涉及本發明製備的納米乳疫苗製劑在製備免疫疫苗中的用途，
其中涉及的抗原包括新城疫滅活抗原、禽流感滅活抗原、藍耳病滅活抗原等滅活病原體，新
城疫弱毒病毒等活病原體及類毒素或其它蛋白質抗原。
本發明的疫苗製劑與現有的商品化的疫苗有以下優點和效果 1)具有獨特的穩定性，4(TC放置40天無分層或破乳現象； 2)黏度低，便於注射； 3)採用黏膜接種，無疫苗副反應； 4)免疫效果理想，可同時誘導體液免疫和細胞免疫； 5)疫苗的免疫保護期長； 6)製備成本低，具有廣闊的市場前景。
圖1新城疫多糖納米乳疫苗透射電鏡圖。
圖2新城疫多糖納米乳疫苗粒徑分布直方圖。
圖3新城疫多糖納米乳疫苗粒徑分布曲線圖。
具體實施例方式
結合實施對本發明做進一步描述和論證，但本發明之內容並不局限於此。
實施例1 :新城疫多糖納乳疫苗的製備 i.油相的製備按照液體石蠟斯盤80 :吐溫80 :乙醇=2 : 1.9 : 0.9 : 0.9
的質量比，稱取油相併攪拌混合均勻； 2.水相將板藍根、黃芪多糖溶解於新城疫滅活病毒(Lasota株)溶液中製成混 合溶液(板藍根多糖、黃芪多糖均佔1% )，作為水相，其滅活前EIDs。 = 10—8 83/0. lml ;
3.油相和水相按照質量3 : 1比例進行乳化混合； 4.採用高壓均質機進行納米處理，即得新城疫板藍根、黃芪多糖納米乳疫苗。
實施例2 :禽流感海藻、淫羊藿多糖納米乳疫苗的製備 i.納米乳油相的製備乙酸乙酯斯盤80 :吐溫80 :丙二醇= 2 : 1.9 : 0.9 : o. 95質量比，稱取油相併攪拌混合均勻； 2.納米乳水相將海藻多糖、淫羊藿多糖加入禽流感滅活病毒(H9亞型)抗原溶 液中製成混合溶液(海藻多糖、淫羊藿多糖均佔1% )，作為水相，禽流感病毒滅活前EIDs。 =10—8 38/0. lml ; 3.將水相和油相按照質量3 : 1比例進行乳化混合； 4.將乳液採用高壓均質機進行納米處理，即得禽流感海藻、淫羊藿多糖納米乳疫苗。
實施例3 :藍耳病香菇、柴胡多糖納米乳疫苗的製備 i.納米乳油相的製備按照棕櫚酸異丙酯斯盤so :吐溫so :無水乙醇= 2 : 1.9 : 0.9 : o. 95質量比，稱取油相併攪拌混合均勻； 2.納米乳水相將香菇多糖、柴胡多糖加入藍耳病滅活抗原(NVDC-JXA株)製成
混合溶液，作為水相，其滅活前TCDs。 = 10—5°°/0. lml ; 3.將水相和油相按照質量7 : 3比例進行乳化混合； 4.將乳液採用高壓均質機進行納米處理，即得藍耳病香菇、柴胡多糖納米乳疫苗。
試驗例1新城疫多糖納米乳疫苗的質量評價
材料與方法 1)實驗材料按照實施事例1中的製備的新城疫多糖納米乳疫苗
2)實驗方法 a.新城疫多糖納米乳疫苗的鑑別及其結構類型的鑑別分別採用離心法和染色法 鑑別所製備的液體是否為納米乳及其結構類型。 b.新城疫多糖納米乳疫苗形態觀察及其粒徑測定採用透射電鏡下觀察納米乳 的形態，用雷射粒度分析儀測定其平均粒徑、多分散係數(Polydispersity index， PDI)和 強度粒徑分布。 c.黏度的測定在室溫25。C，用lml吸管(下口內徑為1.2mm，上口內徑為2.7mm)吸取疫苗lml，令其垂直自然流出，記錄流出0. 4ml所需的時間。
結果與分析 1)新城疫多糖納米乳疫苗的鑑別及其結構類型的鑑別將製備的新城疫多糖納 米乳疫苗4000rpm離心20分鐘無分層現象；染色法觀察，蘇丹紅(紅色)在納米乳中的擴 散速度大於亞甲基藍(藍色)，表明本發明製備的疫苗為油包水型納米乳。
2)新城疫多糖納米乳疫苗形態觀察及其粒徑測定 透射電鏡下觀察結果顯示，新城疫多糖納米乳疫苗呈球形，分布均勻，無粘連，見 圖1。 3)粒度分析儀測定結果表明，新城疫多糖納米乳疫苗的平均粒徑為364nm ;液滴 大小均勻；粒徑分布範圍在90nm 700nm之間，基本呈正態分布，見圖2，圖3。
4)黏度的測定新城疫黏度測定為4s左右，表明本發明疫苗的黏度低。
試驗例2納米乳疫苗的穩定性、安全性評價
1.材料與方法 1)實驗材料按照實施事例1中的製備的新城疫多糖納米乳疫苗
2)試驗方法
a.穩定性評價 將納米乳疫苗放置在溫度在40°C ，相對溼度在60±5%的條件下，時間為40天，觀 察納米乳有無絮凝、分層現象。
b.安全性評價 接種10隻21日齡的SPF雞，每隻雞以lml接種新城疫多糖納米乳疫苗，觀察兩周，
有無臨床症狀和局部病變。 2.結果與分析 1)穩定性實驗結果顯示，新城疫多糖納米乳疫苗在4(TC下放置40天，其外觀均 勻、透明，未發生絮凝、分層現象，實驗表明本發明製備的納米乳疫苗具有很好的穩定性。
2)接種SPF雞觀察兩周，無死亡或明顯不良的局部或全身反應，表明疫苗對雞安 全。 試驗例3納米乳疫苗免疫效果的研究
1.材料與方法 1)實驗材料按照實施事例1中的製備的新城疫多糖納米乳疫苗
2)試驗方法 為了檢驗疫苗免疫後所產生的免疫作用對機體的保護力，用28日齡SPF雞分3 組，每組10隻，第一組皮下注射0. 5ml新城疫多糖納米乳疫苗，第二組口服O. 6ml納米乳疫 苗，最後一組10隻為對照組(口服、注射生理鹽水各半)。接種28天後，每隻雞口服F^E8 毒株108EID5。/0. lmL，各0. 2mL，觀察14天，並記錄體重。
2.結果與分析 表1新城疫多糖納米乳疫苗攻毒試驗結果
分 兔疫日齡教毒日齡 毒株 薦v陽性ft/
組/d /d /途徑 攻毒數
第一組(注射) 25 43 F E (im) 0/10
第二綴(口服) 25 43 P E (po) '0/l(J
' 對照組 涯43Fia&(l/2im;l/2po) 5/5:5/5 攻毒結果(見表1)顯示，接種新城疫多糖納米乳疫苗組全部存活，而對照組全部 死亡。結果表明，新城疫多糖納米乳疫苗具有良好的保護力。
權利要求
一種油包水型納米乳疫苗製劑，其特徵在於，由下述重量百分比的原料製成油10％～70％、表面活性劑20％～60％、助表面活性劑5％～30％、抗原1～40％、免疫增強劑0.01％～40％組成，上述原料的總重量百分比為100％；所述的油是白油、輕質石蠟油、肉豆蔻酸異丙酯、大豆油、橄欖油中的一種或幾種；所述的表面活性劑為非離子表面劑斯盤80、吐溫80或斯盤85；所述的助表面活性劑是乙醇、丙二醇、正丁醇中的任一種；所述的抗原是活病原體、滅活病原體、類毒素抗原中的任一種；所述的免疫增強劑是板藍根多糖、海藻多糖等植物，真菌多糖類中的一種或幾種。
全文摘要
本發明公開了一種油包水型納米乳疫苗製劑，由下述重量百分比的原料製成油10％～70％、表面活性劑20％～60％、助表面活性劑5％～30％、抗原1～40％、免疫增強劑0.01％～40％組成，上述原料的總重量百分比為100％。本發明的納米乳劑型不盡能夠提高疫苗的穩定性、安全性及減低疫苗副反應，而且能顯著提高抗原的體液應答、細胞應答以及增強機體黏膜免疫作用。
文檔編號A61K39/00GK101695567SQ200910218608
公開日2010年4月21日 申請日期2009年10月27日 優先權日2009年10月27日
發明者李雅, 歐陽五慶, 陳建明 申請人:西北農林科技大學;