依託咪酯在製備預防或治療創傷後應激障礙藥物中的應用的製作方法

2023-10-30 12:32:37

專利名稱：：依託咪酯在製備預防或治療創傷後應激障礙藥物中的應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥領域，特別涉及依託咪酯在製備預防或治療創傷後應激障礙藥物中的應用。
背景技術：
：創傷後應激障礙(Posttraumaticstressdisorder,PTSD)又稱延遲性心因性反應(delayedpsychogenicreaction)，是由應激性事件或處境而引起的延遲性反應。導致產生PTSD的事件，是ー個人經歷或目睹威脅生命的事件，這類事件包括自然災害和人為災害，如地震、嚴重災害、戰爭、嚴重事故、被強暴、受酷刑、被搶劫等。PTSD可以共病焦慮、抑鬱、物質依賴等多種精神疾患，也可以共病高血壓、支氣管哮喘等軀體疾病。PTSD患者的自殺危險性遠遠高於普通人群，高達19%。這是因為PTSD患者不但具有自身的獨特的症狀學特徵，還常常伴有不同程度的焦慮、抑鬱情緒，某些患者其嚴重程度甚至達到合併診斷情緒障礙的標準包括抑鬱症、焦慮症等。據美國精神病協會(AmericanPsychiatryAssociation,ΑΡΑ)統計，美國PTSD的人群總體患病率為114%，平均為8%，個體終生患病危險性達358%，女性約是男性的2倍。總之，PTSD給個人、家庭、社會帶來沉重的心理、生理和經濟等方面的負擔。美國精神病協會DSMIV(AmercianPsychiatricAssociation)對創傷後應激障礙(PTSD)的定義是經歷過嚴重的創傷事件並具有以下的特徵性症狀持續1個月以上者(1)重新體驗創傷事件，包括夢境中重現全部或部分。(2)迴避與事件有關的任何刺激井出現廣泛的麻木反應，表現為感覺麻木，情緒麻痺。(3)多種形式的情緒性及生理性喚起，各種形式的睡眠障礙最常見，也表現為作業困難，易激惹及緊張；災難性事件的滯後和或延長反應導致穩態失衡和心身障礙。常見於殘酷的戰爭、災難事故、暴力傷害的身受或目擊者；表現的症狀為反覆出現創傷體驗，持續地警覺性增高或迴避，也可表現為普遍性的反應麻木。從PTSD的定義可以得出PTSD的特點①長時間不能從創傷中恢復。②部分混亂的感官印象和凌亂片段的回憶，表現為反覆「閃回」。③分離(dissociation)症狀以及軀體化。這些現象是因為中樞神經系統對應激信息的記憶過程出現了障礙，使條件化的恐懼反應難於抑制或過分抑制所致。目前關於其產生機制研究結果包括以下方面一、腦內的記憶系統紊亂神經生理學和神經心理學的研究指出，高等哺乳動物腦內至少有兩個主要的與記憶相關的系統一個系統與邊緣系統為主要環節，與認知性記憶有關；另ー個系統以基底神經節為主要環節，與習慣的獲得和適應性反應的記憶有關。這兩個系統要進入運作狀態均需要來自大腦皮層的輸入，被感覺刺激激活的大腦皮層感覺區通常充當觸發記憶啟始的角色，從初級感覺投射區出發至少形成兩條通路一條通向背側，與額葉的運動系統相連接，另一條通向腹側，與顳葉的邊緣系統相連接。陳述性記憶的神經迴路是視覺信號從視網膜經外膝體到達視皮層，在皮層視覺信號需經多級神經元的處理加工才能被識別。除初級皮層Vlタト，還要經V2，V3和V4等高級的視皮層的整合，再到顳葉以完成更為複雜的視覺信號的識別，然後經顳下回與邊緣系統連接進入回憶迴路。邊緣系統主要包括外嗅和內嗅皮層、杏仁複合體、海馬結構和旁海馬回。這些內側顳邊緣結構直接發出投射到丘腦內側核團，同時也可以經終紋的床核和乳頭體間接投射到上述丘腦內側核團。丘腦內側核團再投射到額葉的腹內側部分，包括眶額皮層，內側前額葉以及扣帯皮層。邊緣系統的這三個部分即內側顳葉、內側丘腦和腹內側額葉是認知性記憶迴路中三個關鍵性環節。在猿猴上的試驗結果證明，損壞其中ー個環節，動物即不能完成帶有認知性記憶的任務操作。邊緣系統的這三個部分又是通向基底前腦膽鹼能系統的間門，而基底前腦膽鹼能系統被認為是另ー個對認知性記憶十分重要的腦結構。膽鹼能系統與邊緣系統有雙向的聯繫，並可投射到大腦皮層的廣泛區域，這樣就形成了一個陳述性記憶的神經迴路。在這個記憶迴路中，丘腦是外界感知信息進入大腦的間ロ；杏仁體是邊緣系統的一部分，與情緒的加工處理和回憶有關。在這裡，信息的「重要性」將被評估，並由此激發焦慮、逃跑、抗爭等等情緒和行為；海馬也是邊緣系統的一部分，負責與時間和空間有關信息的攝取和回憶。W.J.JacobsandJ.Metcalfe運用「熱系統/7令系統(Hotsystem/Coolsystem)"來解釋應激壓カ狀態下的記憶工作模式，「冷整合系統」指海馬記憶系統的記錄和拷貝是客觀的，程序化的以自我傳記的形式進行空間和時間的儲存；它的整合是完整的、中立的、信息化的，易於控制的程序，且是整體的。相反，「熱整合系統」指杏仁核則是直接的，快速，非常情緒化且不可逆轉，碎片狀；其記憶是被刺激驅使且完全是ー種重溫的跡象，就象簡單的回應。DeKloet等研究指出熱系統/冷系統對于越來越増加的應激反應是不同的在低水平的應激反應時，在海馬的鹽皮質激素受體產生增加適應應激反應，但在高水平的應激反應時，糖皮質激素受體的連續佔有鹽皮質激素受體的結合點導致海馬變得不反應，甚至在更高的應激反應時變得功能紊亂；而熱系統對於不斷增加應激反應，表現為簡單的反應增加。因此，在創傷壓力水平下，冷系統變得功能紊亂而此時熱系統變的高反應，這就意味著內在編碼在這種條件下變得碎片狀，而不是空間時間的整合，充實完整和連貫的。ニ、記憶的印痕與中樞神經系統的突觸可塑性(LTP)研究表明，正常的記憶印痕形成和學習與長時程突觸增強(LTP)有關。在海馬的傳人纖維及海馬的內部環路主要形成三個興奮性突觸連接系統來自眶回的前穿質(perforantpath,PP)ヰ海馬齒狀回的CA4顆粒細胞；顆粒細胞發出的苔狀纖維(mossyfiber)-CA3錐體細胞；CA3錐體細胞發出的khaffer側支ヰCAl錐體細胞。研究發現；在CA4，CAl和CA3神經元附近記錄到按刺激強度分級的誘發電位，形成LTP。誘導LTP的兩個主要因素是強直刺激的頻率和強度，一定強度的刺激可提高單個刺激引起的EPSP的幅度，而一定頻率的刺激可使EPSP產生疊加效應，作用的結果使突觸後膜的去極化達到一定程度，使位於NMDA受體通道內阻止Ca2+內流的Mg2+移開，這樣當遞質與NMDA受體結合後，通道打開，Ca2+內流，胞內Ca2+濃度升高，繼後觸發一系列生化反應，改變膜的性質，導致LTP產生。而患者在強的應激狀態下，會導致海馬內Ca2+超載，從而引起應激狀態下的不易消退的長時效應或突觸形態改變，進而導致創傷性記憶的障礙。三、神經內分泌功能紊亂下丘腦-垂體-腎上腺(Hypothalamicpituitaryadrental，HPA)軸糸統在應激反應調控中有重要作用。促腎上腺皮質激素釋放因子(corticotropin-releasingfactor,CRF)是調節哺乳動物應激所致內分泌，自分泌和行為反應最重要的神經調質之一。Bremner等通過對比檢驗患者與正常對照人群腦脊液CRF含量發現，PTSD患者體內存在HPA軸神經內分泌調節功能紊亂。^huda等發現PTSD與其他應激個體有以下不同①皮質醇的低水平(PTSD的患者可的松水平在尿液和唾液中明顯減低)，②糖皮質激素受體的敏感性増加，③較強的負反饋抑制，④下丘腦-垂體軸的各系統變得愈來愈敏感。另外^huda又發現PTSD患者及其後代的可的松水平均成較低的水平。糖皮質激素系統在HPA軸調控中亦有重要作用，其中皮質醇可能有明顯的抗「應激」效應。^huda等研究表明，PTSD患者M小時尿平均皮質醇含量明顯減少，血漿基礎皮質醇水平降低，淋巴細胞內糖皮質激素受體數目増加，地塞米松抑制實驗顯示患者HPA軸負反饋抑制作用增強。在整體的應激心理神經內分泌反應中，腎上腺糖皮質激素是認知狀態下ー個客觀變化指標，在急性應激和慢性應激狀態下，糖皮質激素水平都明顯提高。海馬內比其他腦區集中了更高濃度的腎上腺糖皮質激素受體，即I類鹽皮質激素受體(MR)和II類糖皮質激素受體(MR)，因此也是對應激過程特別敏感的ー個腦區。當腎上腺糖皮質激素受體與多數腎上腺糖皮質激素結合，II類糖皮質激素受體和極少數結合。而當機體處於應激反應的狀態下，腎上腺糖皮質激素的循環濃度提高，II類糖皮質激素受體的結合得到加強。電生理研究發現，I類鹽皮質激素受體可以通過增加長時程增強效驗(LTP)而增加海馬神經可塑性。而II類糖皮質激素受體對LTP起相反作用。因此，長時期應激引起的腎上腺糖皮質激素濃度持續釋放，或者長期接受腎上腺糖皮質激素的處理，能導致海馬容量減少，海馬CA3區樹突萎縮，頂樹突結構發生改變、大量錐體細胞變薄和脫落，還發現齒狀回顆粒細胞的神經發生受到抑制。一般來說，依賴海馬的認知功能失調的量和腎上腺糖皮質激素的急性影響之間呈倒U型關係，慢性應激引起糖皮質激素持續增高引起海馬基因表達異常，導致學習和記憶的能力受損。藥物治療是PTSD的重要治療手段之一。雖然目前用於PTSD治療的藥物較多，但幾乎沒有預防的藥物。另外，大多數是對症治療藥物，缺乏針對以上三個發病環節的對因治療藥物，且副作用犬。如苯ニ氮卓類抗焦慮藥、抗抑鬱藥、非典型抗精神病藥、抗驚厥藥等。早期一線藥物主要以三環類抗抑鬱劑(TCAs)和苯ニ氮卓類等為主，近10多年來被副反應相對較少的選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑類(SSRIs)取代。但是通過美國FDA認證的抗PTSD藥物只有兩個帕羅西汀(paroxetine，商品名I^axil)和舍曲林(sertraline，商品名Zoloft)ο依託咪酯(etomidate)的化學式為(+)-1_(1_苯乙基)-IH-咪唑_5_羧酸乙酯(ethyl3-[(IR)-1-phenylethyl]imidazole-4-carboxylate)，乙II^Hit甲；^中豐及胃溶解，在水中不溶，在稀鹽酸中易溶。依託咪酯作為ー種短效、非巴比妥類靜脈麻醉誘導藥物，能夠降低腦血流和腦耗氧，對呼吸、循環系統影響很小，體內代謝與清除均較快，具有極寬的安全劑量範圍，作為麻醉誘導劑廣泛應用於臨床。截至目前為止，未見任何依託咪酯用於防治PTSD相關性焦慮和抑鬱的相關報導。
發明內容本發明的目的是提供依託咪酯在製備預防或治療創傷後應激障礙藥物中的新用途。本發明在動物模型上首次測試ロ服經胃給藥預防和治療PTSD相關性焦慮和抑鬱的藥效學、藥代學和安全性評價，發現依託咪酯具有顯著降低應激引起的腎上腺皮質激素水平升高，改善慢性應激造成的焦慮和抑鬱等作用。依託咪酯預防和治療PTSD相關性焦慮和抑鬱藥理作用的機理尚不十分清楚，但本發明相關的藥理學研究結果顯示(1)通過未知的作用機理改善下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸負反饋抑制應激性失調，可逆性抑制應激性腎上腺皮質激素水平異常持續升高的作用，進而保護腎上腺皮質激素水平異常持續升高所造成的腦神經細胞損傷和突觸功能損壞；(2)通過未知的分子與細胞機理逆轉下調的腦內糖、鹽皮質激素受體的表達水平；(3)在腦應激早期可能發揮替代中樞Y-氨基丁酸(GABA)的作用與GABAA受體直接結合引起效應或間接地作用於GABAA受體而增強GABA能的作用，這些作用可以挽救腦應激早期出現的興奮性突觸傳遞過強而抑制性突觸調節功能減弱的突觸穩態失調問題。本發明的實驗基礎是應用模擬PTSD的慢性不可預見應激(chronicunpredictablemildstress,CUMS)動物試驗模型及束縛應激試驗動物模型(Restraintstress)，在動物接受應激刺激開始之日起連續4-8周ロ服經胃給予依託咪酯可以顯著降低應激引起的腎上腺皮質激素水平升高，改善慢性應激造成的焦慮、抑鬱等動物行為學異常，而對照組無相應改善作用。每天分別在不同組大鼠經ロ灌胃給予依託咪酯(2，6，15，30mg/kg體重)，持續4_8周，定量觀察試驗資料的各項指標，發現(1)在開放曠場行為學測試中，依託咪酯給藥組未出現在慢性應激組所觀察到的行為學焦慮與抑鬱表現，提示該藥具有顯著改善慢性應激造成的焦慮、抑鬱等病理症狀；(2)運動協調功能實驗結果顯示與正常組相比，給藥組與對照組相比無統計學差異，證明不影響大鼠的運動協調能力。(3)水迷宮結果發現慢性應激後大鼠學習能力下降，而合適的依託咪酯劑量組與對照組相比，學習與記憶能力不受影響。(4)ELISA檢測結果顯示，依託咪酯給藥組未出現在慢性應激組所觀察到的ACTH、皮質酮和醛固酮含量持續增高現象；(5)Western免疫印記試驗檢測結果顯示，依託咪酯給藥組可以翻轉慢性應激組動物海馬等腦區腎上腺糖和鹽皮質激素受體表達水平下降並恢復正常；(6)腦片電生理記錄結果顯示，依託咪酯給藥組可以完全翻轉慢性應激動物海馬LTP消失和LTD持續延長現象。以上結果提示，依託咪酯可以通過抑制慢性應激造成的腎上腺糖和鹽皮質激素水平異常增高來調節下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸負反饋抑制紊亂；通過某個尚不清楚的腦保護機制恢復糖和鹽皮質激素受體在腦內的正常表達水平，抑制突觸可塑性(LTP和LTD)異常，改善動物因應激性腦功能異常而產生的焦慮和抑鬱，達到預防與治療作用。通過行為學Morris水迷宮試驗、Rota-Rod運動協調試驗、位置偏愛試驗等，持續8周的經ロ灌胃依託咪酯處理對動物的學習記憶、運動協調等無不良作用，與嗎啡比較無藥物依賴性作用。持續給藥無顯著藥物耐受作用。通過血液肝腎功、血液常規、尿便代謝物、骨髓塗片、大鼠各器官組織(心、肺、肝、脾、胰腺、腦、腎上腺、睪丸、附睪)稱重、大鼠各器官組織病理學切片染色等檢查，除個別動物出現腎小管出現蛋白管型之外，未見其它異常，提示連續8周給藥安全性好。8周的組織病理學檢測結果顯示，該藥無致癌和致病作用。具體實施例方式本發明公開了依託咪酯在製備預防或治療創傷後應激障礙藥物中的新用途，本領域技術人員可以借鑑本文內容，通過適當改進エ藝參數而實現該發明。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明之內。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
發明內容、精神和範圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技木。為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進ー步的詳細說明。實施例1依託咪酯防治PTSD相關焦慮與抑鬱的評價方法與藥效學一、主要方法(1)慢性不可預見應激模型每隻大鼠接受6-8周的隨機刺激，包括冰水遊泳G°C，5min)，熱水遊泳(48°C，5min)，禁食(48h)，禁食禁水(Mh)，350ml水倒入籠內鋸末內，晝夜顛倒04h)，夾尾及搖晃Omin)，電擊足底G5V電壓電擊k，間歇k，共進行30min)，水平震蕩(5min)、41°C高溫環境(5min)。每日進行1種刺激，1周內同種刺激不連續出現。(2)束縛應激試驗模型單籠飼養，每天給予大鼠束縛他，束縛期間禁食禁水，模型建立時間為3W。(3)CUMS動物試驗模型和束縛應激試驗模型兩組動物，隨機分配到依託咪酯幹預組和對照組，定量觀察動物食慾，體重，探洞開放聯合曠場行為學試驗，Rota-Rod運動協調能力試驗，Morris水迷宮空間學習記憶試驗，海馬等腦區突觸電生理學記錄實驗，腦內腎上腺糖和鹽皮質激素受體表達水平，血液ACTH、糖、鹽皮質激素水平等生化和分子標示物檢測寸。ニ、主要結果建立慢性應激動物行為學、突觸電生理學和應激血液腦生化評價指標(1)發現慢性應激後大鼠在1周左右出現顯著焦慮行為，表現為不安，膽小，探査行走行為異常增多；2周後表現為持續抑鬱，動物體重減輕(表1)，感覺遲鈍，表現淡漠，探究和行走行為顯著減少，偏愛角落萎縮(表幻，觀察至8周無明顯改善。(2)被試動物Rota-Rod運動協調能力試驗未發現與對照組有何異常，即不同條件應激後不影響大鼠的運動協調能力(表3)。(3)Morris水迷宮空間學習記憶試驗結果顯示慢性應激後大鼠的學習記憶能力較對照組顯著下降(表4)。(4)用ELISA檢測發現，慢性應激組大鼠血漿中的ACTH、皮質酮和醛固酮含量持續增高，而對照組動物以上指標無顯著改變(表5)。(5)用Western免疫印記試驗顯示慢性應激組動物海馬等腦區腎上腺糖和鹽皮質激素受體表達水平顯著下降(表6)。(6)用腦片突觸電生理學記錄技術研究發現，慢性應激動物海馬內嗅區-齒狀回和內嗅區-海馬CAl突觸傳導通路的條件性長時程增強效應(long-termpotentiation,LTP)消失，而條件性長時程壓抑效應(long-termdepression,LTD)持續延長，提示兩個普遍被認可能夠反應腦內正常突觸可塑性的生理指標發生顯著異常(表7)。依託咪酯防治PTSD相關焦慮與抑鬱藥效學評價把以上(1)-(6)的行為、病理生理和生化指標作為評價依託咪酯防治PTSD相關焦慮與抑鬱藥效學的定量指標，對正常對照組、束縛應激模型組、慢性不可預見應激模型組和依託咪酯組大鼠的食慾，體重，探洞開放聯合曠場行為學試驗，Rota-Rod運動協調能力試驗，Morris水迷宮空間學習記憶試驗，海馬等腦區突觸電生理學記錄實驗，腦內腎上腺糖和鹽皮質激素受體表達水平，血液ACTH、糖、鹽皮質激素水平等生化和分子標示物檢測等進行定量觀察。以上實驗結果顯示慢性應激致下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸負反饋抑制失調，造成腎上腺皮質激素水平持續增高，導致腦內多個部位腎上腺皮質激素受體表達下降和海馬突觸可塑性損害，應用依託咪酯可逆轉下丘腦-垂體-腎上腺皮質軸負反饋抑制失調，預防和治療慢性應激造成的腦功能障礙，改善PTSD相關的焦慮和抑鬱行為學症狀(具體結果見表1-7)。8權利要求1.依託咪酯在製備預防或治療創傷後應激障礙藥物中的應用。全文摘要本發明涉及醫藥領域，公開了依託咪酯在製備預防或治療創傷後應激障礙藥物中的應用。本發明在動物模型上進行口服經胃給藥預防和治療創傷後應激障礙相關性焦慮和抑鬱的藥效學、藥代學和安全性評價，證實依託咪酯可以使應激引起的腎上腺皮質激素水平升高恢復正常水平，逆轉應激導致的海馬等腦區腎上腺皮質激素受體表達水平下降和海馬突觸可塑性異常，改善慢性應激造成的焦慮和抑鬱的作用。文檔編號A61P25/24GK102579433SQ20111000828公開日2012年7月18日申請日期2011年1月14日優先權日2011年1月14日發明者呂卓敏,尚剛偉,李春麗,李震,楊帆,王應莉,王曉亮,王燕,陳軍申請人:海南際中博遠實業發展有限公司