Nkg2d的調節的製作方法

2023-10-10 18:55:44

專利名稱：Nkg2d的調節的製作方法
NKG2D的調節
本申請是申請號為200580017932. 6、申請日為2005年4月5日、發明名稱為 「NKG2D的調節」的中國發明專利申請的分案申請。
本申請要求申請日為2005年3月7日的美國臨時申請60/659，678，申請日為2004 年6月I日的60/576，242，和申請日為2004年4月5日的60/559，919的優先權。
本發明是在得到政府的部分資助的條件下完成的，來自National Institutes Health 的授權文號為 CA89189, CA95137, P30 DK26743 和 P60 DK63720。因此，美國政府擁有本發明的某些權利。發明領域
本發明涉及用於治療和/或預防炎性症候群的方法和組合物，特別是通過削弱自身反應性T細胞的增殖和功能來治療和/或預防炎性症候群的方法和組合物，以及與它相關的任何其他發明特徵。另外，本發明提供了用於預防NK細胞-介導的移植排斥的方法和組合物。
發明背景
NKG2D是在人類和小鼠中在NK細胞和某些類型的T細胞上表達的激活受體。NKG2D 能識別人體中的UL16結合蛋白(ULBP1)、ULBP2、ULBP3, ULBP4和I型MHC鏈-相關分子 (MICA和MICB)和小鼠體內的次要組織相容性抗原60 (H60)、視黃酸早期可 誘導轉錄物 (RAE-1)和鼠ULBP-樣轉錄物I (MULT-1)。NKG2D同型二聚體與接頭分子DAPlO結合，它包括共有的P85磷脂醯肌醇-3-激酶(PI3-K)結合基序Tyr-1le-Asn-Met ( ΝΜ，參見SEQ ID NO 9)0 NKG2D和DAP 10在它們的生物合成途徑上在早期相互作用，並且這種相互作用是將NKG2D轉移到細胞表面上所必需的。
發明概述
本發明提供了治療或預防與N的KG2D-介導的激活相關的症候群方法和組合物。
一方面，所述方法是通過在適合治療或預防所述症候群的條件下使表達NKG2D的白細胞與能減弱所述細胞的配體誘導的NKG2D激活的製劑接觸進行的。在某些實施方案中，所述接觸導致與對照相比配體誘導的NKG2D激活降低至少大約30% ;在其他實施方案中，所述降低為至少大約40%、50%、60%、70%、80%或90%。
所述製劑能夠，但不局限於減弱NKG2D與DAPlO的相互作用；降低細胞表面上的 NKG2D的數量；增加表面NKG2D內在化的比率；通過NKG2D-NKG2D配體複合體減弱信號傳導；和/或減弱NKG2D-編碼核酸的轉錄或翻譯。在某些實施方案中，所述製劑能在某些症狀下增強表面NKG2D多肽的內在化(例如，在慢性炎性症候群中出現的症狀)，在所述症狀中，MICA、MI CB、ULBPl、ULBP2、ULBP 3或ULBP4中的一種或多種不能減少細胞表面NKG2D 的數量到提供治療效果所必需的程度(對於治療劑而言)。
在某些實施方案中，用於本發明提供的組合物和方法中的製劑包括能結合NKG2D 的抗體或它的NKG2D-結合片段。所述抗體可以是單克隆抗體，例如，人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
在實施本發明時，靶白細胞可以是NKG2D+⑶8+T細胞、NKG2D+⑶4+T細胞、 NKG2D+ Y δ T細胞中的一種或多種；和NKG2D+NK細胞；或靶細胞可以包括巨噬細胞。
一方面，本發明的方法可用於在諸如人類患者的哺乳動物中治療和/或預防與 NKG2D-介導的激活相關的炎性症候群。所述人類患者可以被診斷為患有或者具有發生所述炎性症候群的較大風險。在特定方面，本發明的方法涉及在人類患者中治療診斷的症狀。
另一方面，本發明還提供了用於治療或預防類風溼性關節炎、多發性硬化、乳糜瀉、炎性腸病，如克羅恩氏病和潰瘍性結腸炎、牛皮癬或移植排斥包括骨髓移植排斥的方法。還可以使用本發明的症候群包括，但不局限於I型糖尿病、系統性紅斑狼瘡、橋本甲狀腺炎、重症肌無力、傳染性神經元炎、自身免疫眼色素層炎、夏科氏肝硬變、自身免疫性肝炎、自身免疫溶血性貧血、惡性貧血、自身免疫性血小板減少症、Grave's病、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睪丸炎、顳動脈炎、抗-磷脂症候群、韋格內氏肉芽腫症、貝切特氏症候群、硬皮病、多肌炎、皮膚肌炎、關節強硬性脊椎柱炎、Sjogren's症候群、皰疹樣皮炎、慢性天皰瘡、白癲風、牛皮癬關節炎、骨關節炎、類固醇抗性哮喘、慢性阻塞性肺病和動脈粥樣硬化。在特定方面，所述症候群不是I型糖尿病。
另一方面，本發明提供了包括NKG2D調節劑，例如，抗-NKG2D抗體或抗體片段的藥用製劑和試劑盒。在一個系列的實施方案中，所述試劑盒包括NKG2D調節劑和有關使白細胞與NKG2D調節劑在適合治療或預防白細胞的與NKG2D介導的激活相關的症候群的條件下接觸的說明。
本發明還提供了鑑定NKG2D調節劑的方法，包括使NKG2D+白細胞與檢驗試劑接觸；和測定由所述白細胞表達的NKG2D。在某些優選實施方案中，測定NKG2D表達包括測定 NKG2D轉錄、翻譯和內在化中的一種或多種。所述實施方案的亞類還包括按照FDA的指南臨床檢測所述檢驗試劑。
另外，本發明提供了鑑定NKG2D調節劑的方法，包括使NKG2D+白細胞與檢驗試劑接觸；並且測定配體誘導的白細胞的NKG2D激活。在某些優選實施方案中，測定配體誘導的 NKG2D激活包括測定DAPlO磷酸化、p85 PI3激酶活性、Akt激酶活性、IFN- Y產量和NKG2D+ 靶細胞細胞溶解中的一種或多種。所述實施方案的亞類還包括按照FDA指南臨床檢測所述檢驗試劑。
另一方面，本發明提供了鑑定用於治療或預防與NKG2D激活相關的炎性症狀和 /或自身免疫疾病的治療或預防製劑的方法。該方法包括篩選在細胞群體中特異性結合 NKG2D並且削弱NKG2D+T細胞或NK細胞的增殖，而又不會明顯耗盡這些細胞的能力的潛在製劑(例如，抗體或抗體片段)、合適的模型、宿主或患者(例如，通過使用本文所披露的實驗方法分析所述抗體)。所述篩選還可以包括或可替代地篩選誘導NKG2D+T細胞或NK細胞表面上的NKG2D內在化的能力。
另一方面，本發明涉及將對NKG2D特異並且能夠削弱NKG2D+T細胞或NK細胞的擴增而又不會耗盡所述細胞的製劑(例如，抗體或抗體片段)製備用於治療類風溼性關節炎的藥品的用途。
另一特別方面，本發明涉及將對NKG2D特異並且能夠削弱NKG2D+T細胞或NK細胞的擴增而又不會耗盡所述細胞的製劑(例如，抗體或抗體片段)製備用於治療多發性硬化的藥品的用途。
在另一示例性方面，本發明涉及將對NKG2D特異並且能夠削弱NKG2D+T細胞或NK 細胞的擴增而又不會耗盡所述細胞的製劑(例如，抗體或抗體片段)製備用於治療炎性腸病的藥品的用途。
本發明的另一示例性方面涉及將對NKG2D特異並且能夠削弱NKG2D+T細胞或NK 細胞的擴增而又不會耗盡所述細胞的製劑(例如，抗體或抗體片段)製備用於治療牛皮癬的藥品的用途。
本發明的另一方面涉及將對NKG2D特異並且能夠削弱NKG2D+T細胞或NK細胞的擴增而又不會耗盡所述細胞的製劑(例如，抗體或抗體片段)製備用於治療移植排斥的藥品的用途。
附圖的簡要說明


圖1是在前驅糖尿病的NOD小鼠的胰腺細胞上RAE-1表達的圖。圖1 (a)表示在 12-16周大的NOD和BALB/c小鼠的胰腺組織中通過定量RT-PCR測定的RAE_lmRNA。圖1(b)表示通過在4-6周和12-16周大的NOD和NOD重度聯合免疫缺陷(NOD. scid)小鼠的胰腺組織中通過定量RT-PCR測定的RAE-lmRNA。圖1 (c)表示在前驅糖尿病的NOD的不同組織中通過定量RT-PCR測定 的RAE-lmRNA。示出了典型數據，並且表示為RAE-1轉錄的誘導倍數(fold-1nduction)。誘導倍數是根據以下公式計算的誘導倍數=標準化為HPRT的前驅糖尿病的NOD器官中RAE-1轉錄物的數量除以標準化為HPRT的幼小NOD器官中RAE-1 轉錄物的數量。圖1 (d)表示通過流式細胞測量術使用抗-⑶45和抗-RAE-1mAb分析的在 ⑶45-N0D胰腺細胞上的RAE-1表達。圖1 (e)表示在從NOD小鼠的胰腺中分離的⑶45-胰島細胞上(上部圖片)和胰腺引流淋巴結(PLN)(下部圖片)中的RAE-1表達，用抗-⑶45和抗-RAE-1mAb 染色。
圖2 Ca)是在⑶8+T細胞上NKG2D表達的圖。從10周和25周大的NOD小鼠脾、 肝、胰淋巴結(PLN)和胰腺中分離白細胞，並且通過標準方法，使用抗⑶8和NKG2D的單克隆抗體染色。示出了所標明的NKG2D+⑶8+T細胞的百分比(表示為總⑶8+T細胞的百分比)。 圖2 (b)是CD44和Ly-6C在胰腺和PLN NKG2D+CD8+T細胞上表達的圖。用抗CD8、NKG2D 和CD44或Ly6C的單克隆抗體對細胞進行染色，並且示出了分選的CD8+T細胞的結果。圖 2 (c)是NKG2D和⑶44在胰腺和PLN NRP_V7/H_2Kd四聚體-陽性⑶8+T細胞上表達的圖。 用NRP-V7/H-2Kd四聚體和抗CD8和CD44或NKG2D的單克隆抗體對細胞進行染色。示出了所標明的NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性⑶8+T細胞(對⑶8+T細胞的分選)的標明的百分比。 圖2 (d)是蓄積在胰島附近的NKG2D+⑶8+T細胞的顯微照片。隨後用抗-⑶8、抗-⑶68 (巨噬細胞標記)、抗-NKG2D和抗胰島素抗體對從16周大的前驅糖尿病的NOD小鼠中分離的胰腺的連續冷卻切片進行染色。左側相差微分圖像，中央⑶8 (紅色)，NKG2D (綠色)和胰島素(藍色);右側⑶68 (紅色)，NKG2D (綠色)和胰島素(藍色)。雙-陽性⑶8+NKG2D+T細胞和⑶68+NKG2D+巨噬細胞是黃色的。
圖3 Ca)是用抗-NKG2D mAb治療7_25周大的發生糖尿病的NOD小鼠的效果的圖。黑色圓圈用抗-NKG2D mAb處理的NOD小鼠(n=7)(每兩周一次，劑量為200 μ g/小鼠IP);淺色圓圈，用無菌的非致熱PBS處理的NOD小鼠(n=7)。當連續兩次測定血糖含量超過300mg/dL時就診斷為糖尿病。圖3 (b)是每周一次從6周至40周在圖3a中所示出的動物中測定的血糖含量的圖。圖3 (c)是在晚期前驅糖尿病階段用抗-NKG2D mAb處理之後NOD小鼠出現糖尿病比例的圖。用抗-NKG2D mAb (每兩周一次，劑量為200 μ g/小鼠 IP，黑色圓圈；n=14)或對照Ig (淺色圓圈；n=14)從13周到25周處理NOD小鼠。在25周大時，七隻抗-NKG2D mAb-處理的小鼠繼續接受治療，直到30周大(黑色三角形)。圖3(d) 是顯示用圖3c所示動物從12周-36周開始每周測定的血糖含量的圖。
圖4 Ca)是用對照Ig (clg)或抗-NKG2D mAb (200 μ g/小鼠IP，每兩周一次，從第7周開始)處理的11周大的NOD小鼠的白細胞浸潤胰腺和胰淋巴結的分析的圖，所述切片業已用抗-⑶8、抗-NKG2D和抗-⑶44進行過染色，並且進行流式細胞測量術。所示出的結果是對⑶8+T細胞的分選。圖4 (b)是用對照Ig從7周大開始處理的16周大的NOD小鼠的胰島的顯微照片。冷凍的胰腺切片是從用對照I g處理的16周大的NOD小鼠製備的， 並且染色。左側DAPI (核)染色；右側⑶8 (紅色)，NKG2D (綠色)和胰島素(藍色)。圖4(c)是用抗-NKG2D mAb從7周大開始進行處理的16周大的NOD小鼠的胰島按照圖片(b)所示製備並染色的顯微照片GOOyg/小鼠IP，每兩周一次)。圖4 (d)是抗-NKG2D抗體治療對自身反應性NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性CD8+T細胞在胰腺中蓄積的效果的圖。從18周大的NOD小鼠的胰腺和PLN中分離白細胞，所述小鼠是用抗-NKG2D mAb(200 μ g/小鼠IP， 每兩周一次)或對照Ig從13周大開始處理的。示出了 NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性⑶8+T 細胞(對⑶8+T細胞的分選)的標明的百分比。圖4 (e)是來自用對照Ig或用抗-NKG2D (200 μ g/小鼠IP，每兩周一次)處理的小鼠脾臟和外周血中分離，並用NRP-V7/H-2Kd四聚體和抗-⑶8 mAb染色的淋巴細胞的圖。所標明的百分比是NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性細胞 (對⑶8+T細胞群體的分選)。圖4 (f)是從用對照Ig (clg)或抗-NKG2D處理的GOOyg/ 小鼠IP，每兩周一次)25周大的NOD小鼠體內分離的胰淋巴結的圖，正如所標明的，處理是從13周大開始的，並且用PMA (20ng/ml)和伊屋諾黴素(500ng/ml)和布雷菲德菌素A (5μ g/ml)培養6小時。通過免疫螢光染色和流式細胞測量術在CD8+T細胞中檢測細胞內 IFN- Y ο
圖5是顯示來自NOD T細胞轉移入NOD重度聯合免疫缺陷受體的繼承轉移實驗的流式細胞測定的圖。圖5 (a)表示移植了 NOD T細胞的NOD重度聯合免疫缺陷小鼠的胰腺、PLN和脾臟中的NKG2D+CD8+T細胞。在繼承轉移之前，用抗-CD8和抗-NKG2D對來自糖尿病NOD供體的純化的T細胞進行染色(a，上部左側圖片)。在轉移五周之後，用抗-CD8 和抗-NKG2D對從胰腺、PLN和脾臟中收穫的細胞進行染色(a，上部圖片)或用抗-NKG2D和抗-⑶44染色(a，下部圖片)。示出了 NKG2D+⑶8+T細胞的百分比(對⑶8+T細胞的分選)。圖5 (b)表示自身反應性NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性CD8+T細胞在接收了糖尿病NOD小鼠的繼承轉移的T細胞的NOD重度聯合免疫缺陷小鼠中的蓄積，所述糖尿病NOD小鼠用抗-NKG2D mAb (200 μ g/小鼠IP,每兩周一次)或對照Ig處理，在轉移時開始，並且在轉移10周之後分析。所標明的自身反應性NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性CD8+T細胞的百分比是對分選的活細胞的檢測。圖5 (c)表示對來自相同處理的小鼠的NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性T細胞、 分選的⑶8+T細胞上NKG2D的檢測。圖5 Cd)是顯示移植了發生為糖尿病的NOD小鼠的T 細胞的NOD重度聯合免疫缺陷小鼠的比例的圖。接受了來自糖尿病NOD小鼠的繼承轉移的 T細胞的五周大的NOD重度聯合免疫缺陷小鼠從5周開始到1 4周用抗-NKG2D mAb (黑色圓圈；n=6)或對照Ig (淺色圓圈；n=7)處理。用200 μ g抗-NKG2D mAb CX5對小鼠進行腹膜內注射，每周兩次。當血糖含量在兩次連續測定時都超過300mg/dL時就診斷為糖尿病。圖5 (e)是顯示在停止用抗_NKG2DmAb處理之後自身反應性NRP_V7/H_2Kd四聚體-陽性 CD8+T細胞增殖的圖。在停止用抗-NKG2D mAb處理移植有糖尿病NOD小鼠的T細胞的NOD 重度聯合免疫缺陷小鼠四周之後處死小鼠，並且分析胰腺的NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性， NKG2D+⑶8+T細胞的浸潤。為了進行比較，還分析了用出現糖尿病的對照Ig處理過的小鼠。
圖6(a)是在繼承轉移之前在8. 3TcR-轉基因NOD T細胞上缺少NKG2D表達的圖。 淋巴細胞是從幼小的8. 3TcR-轉基因NOD小鼠的淋巴結和脾臟中分離的。然後通過磁力細胞分選來純化8. 3TcR-轉基因NODT細胞。在T細胞轉移之前，用抗-⑶8和NRP_V7/H_2Kd 四聚體或抗-NKG2D對8. 3TcR-轉基因NOD T細胞進行染色，並且通過流式細胞測量術分析， 正如圖中所示出的。圖6 (b)是在8. 3TcR-轉基因NOD T細胞繼承轉移兩天之後NKG2D在胰腺中8. 3TCR轉基因NOD T細胞上表達的圖。在8. 3TcR-轉基因NOD T細胞繼承轉移兩天之後，從在細胞轉移的同時用對照Ig或抗-NKG2D mAb CX5處理過的小鼠胰腺中分離白細胞。用NRP-V7/H-2Kd四聚體和抗-NKG2D對細胞進行染色，並且通過流式細胞測量術分析。示出了 NKG2D在繼承轉移的T細胞(通過分選NRP-V7/H-2Kd四聚體-陽性細胞鑑定) 上的表達。圖6 (c)是抗-NKG2DmAb CX5在胰腺中8. 3TcR-轉基因CD8+N0D T細胞增殖的影響的圖。將CFSE-標記的8. 3TcR-轉基因NOD T細胞(IxlO7)轉入10周大的野生型NOD 小鼠體內(第O天)。在第一 1，第I和第5天用clg或抗-NKG2DmAb CX5 (200 μ g)處理受體NOD小鼠。在轉移之後，處死受體NOD小鼠，並且從胰腺、胰淋巴結(PLN)和腸繫膜淋巴結 (MLN)中分離和分析白細胞。在(c)中所示出的細胞是分選的活的CD8-陽性淋巴細胞。圖 6 (d)是在對照Ig (空心條柱)和抗-NKG2D mAb (實心條柱)_處理的小鼠中CSFS-標記的細胞百分比的圖，所述細胞在轉移之後在第2、3和4天已發生了一次或多次分裂(B卩，增殖細胞)，通過以下公式計算％增殖細胞=(總的CFSE + NRP-V7/H-2Kd四聚體+ CD8+細胞一非分裂的 CFSE + NRP-V7/H-2Kd 四聚體 + CD8+ 細胞)X 100/ 總的 CFSE + NRP_V7/H_2Kd 四聚體+ CD8+細胞。
圖7表示用IOOnM IGRP (葡萄糖_6_磷酸酶催化亞基相關蛋白)肽培養3天，然後在有200U/ml人重組IL-2和4ng/ml IL-7的條件下再生長5天之後的8. 3TcR-轉基因 NOD淋巴細胞的顯微照片。激活的8. 3TcR-轉基因⑶8+T細胞在冰上用抗-NKG2D mAb CX5 染色，並且用霍亂毒素B進行復染色，以便對細胞表面膜進行標記。在37°C下將一等份這種染色細胞培養30分鐘，並且將另一等份保持在冰上。用螢光顯微鏡分析細胞。在顯微照片中，NKG2D表達表現為綠色螢光，而紅色螢光表示霍亂毒素B (膜)染色。注意，NKG2D出現於在冰上培養的細胞的細胞表面上，不過在37°C下培養的細胞中得到了調控並且內在化。
圖8是抗-NKG2D mAb對攜帶NKG2D的CD8+T細胞的體內作用的圖。用IOOnM OVA肽激活OT-1卵白蛋白(OVA)-特異性TcR-轉基因⑶8+T細胞3天時間，然後用200U/ ml人重組IL-2和4ng/ml IL-7再培養5天時間。NKG2D是在激活的0T-1T細胞上表達的 (>95%)，所述細胞是用CFSE標記並且繼承轉移(2xl07細胞)到C57BL/6小鼠體內。在第一 2、0和+2天用抗-NKG2D mAb或對照大鼠Ig (每次腹膜內注射200 μ g)處理接受轉移的 ⑶8+NKG2D+0T-1 TcR-轉基因T細胞的小鼠。圖8 (a):轉移4日之後，採集血液樣品，用抗小鼠⑶8和NKG2D的mAbs染色，並且通過流式細胞測量術進行分析。標明了用CSFE標記的⑶8+T細胞的百分比。圖8 (b):在CFSE-標記的OT-1 TcR-轉基因T細胞繼承轉移並且按(a)中所示用對照Ig或抗-NKG2D mAb CX5進行處理之後第21天，處死小鼠，分離脾細胞，並且通過流式細胞測量術進行分析。圖8 (c):在CFSE-標記的⑶8+NKG2D+0T-1T細胞繼承轉移之後第 天，用耗盡大鼠抗-小鼠CD8mAb (2. 43雜交瘤，大鼠IgG2b同種型)注射小鼠。三天之後，用對照Ig、抗-⑶8或抗-NKG2D mAb對外周血進行染色，並且通過流式細胞測量術進行分析。本實驗的目的是證實在體內施用CX5抗-NKG2D單克隆抗體時，這種抗體不會耗盡NKG2D+⑶8+T細胞。
圖9是抗-NKG2D mAb對自身反應性⑶8+T細胞增殖的影響的圖。用CSFE標記 8. 3TcR-轉基因NOD T細胞，並且轉入野生型NOD小鼠，所述小鼠是用對照Ig或抗-NKG2D mAb CX5處理過的，參見圖6。用NRP-V7/H-2Kd四聚體和抗_CD8mAb對從胰腺、胰淋巴結、 腸繫膜淋巴結和脾臟中收集的細胞進行染色，並且通過流式細胞測 量術進行分析。示出了對CD8-陽性NRP-V7/H-2Kd四聚體陽性細胞分選的淋巴細胞的柱狀圖。在每一個柱狀圖中示出了增殖(分裂一次以上)和非-增殖細胞(對CFSE+⑶8+NRP-V7/H-2Kd四聚體+T細胞分選)的百分比。用同種型-匹配的對照I g或用於證實了所述製劑結合特異性的四聚體染色的對照進行的細胞染色。
圖10表示對NOD胰腺細胞上NKG2D配體染色的特異性。圖10 (a):分離NOD胰腺細胞，並且用抗_CD45mAb和用對照Ig、抗-泛RAE-1mAb (克隆186107)、抗-RAE-1 Y mAb (克隆CXl)或小鼠NKG2D-1g融合蛋白(與人IgGl Fe融合的小鼠NKG2D的細胞外結構域) 進行染色，隨後通過合適的第二個步驟的製劑顯像。通過流式細胞測量術分析細胞，並且評估⑶45-陰性和碘化丙錠-陰性，活細胞。用同種型-匹配的對照Ig (clg)染色的細胞表現出mAb結合的特異性(細線條)。圖10 (b):純的抗-RAE-1 mAbs阻斷了生物素-標記的抗-RAE-1 mAbs的染色,證實了結合的特異性。胰腺細胞用O. 25 μ g純化的clg、抗-泛 RAE-1mAb克隆186107或抗-RAE-1 y mAb克隆CXI(它還能與RAE-1 α和RAE-1 β交叉反應) 預培養。在冰上培養20分鐘之後，再用O. 25 μ g生物素化的對照Ig、生物素化的抗-RAE-1 mAb克隆186107、生物素化的抗-RAE-1 YmAb克隆CXl和FITC-綴合的抗_CD45mAb對所述細胞進行染色20分鐘。為了檢測生物素化的mAbs，洗滌細胞，並且用PE-綴合的抗生物素蛋白鏈菌素培養。通過流式細胞測量術分析細胞，並且所顯示的數據是對CD45-陰性， 碘化丙錠-陰性，活細胞分選的。因此，使用下列三種獨立的製劑在NOD胰腺細胞上檢測 NKG2D配體抗-RAE-1 mAb克隆186107、抗-RAE-1 mAb克隆CXl和小鼠NKG2D_Ig融合蛋白。抗-RAE-1 mAb染色是特異性的，就是說，生物素化的抗-RAE-1 mAb染色能夠被純化的抗-RAE-1 mAbs完全阻斷，而不能被對照大鼠IgG阻斷。
圖11 (a)顯示鼠 NKG2D 的 cDNA 序列(SEQ ID NO 1)0 圖 11 (b)顯示鼠 NKG2D 的胺基酸序列(SEQ ID NO 2)0 圖 11 (c)顯示人 NKG2D 的 cDNA 序列(SEQ ID NO :3)。圖 11 Cd)顯示人NKG2D的胺基酸序列(SEQ ID NO :4)。
圖12是NKL細胞(人NK白血病細胞系)的流式細胞分析的圖，所述細胞已用小鼠抗-人NKG2D抗體(克隆149810)培養了 16小時，以便刺激NKG2D內在化(右側圖片)。左側圖片表示業已用對照抗體培養了 16小時的細胞。在每一種場合下，用酸性緩衝液(pH3. 5) 簡單地洗滌細胞，以便除掉任何殘餘的結合抗體，然後用對照Ig或抗_NKG2DmAb染色，然後用藻紅蛋白-綴合的山羊抗-小鼠IgG抗體染色。該實驗表明，抗-人NKG2D單克隆抗體誘導了 NKG2D的內在化(調節)，而用對照Ig培養不能導致NKG2D內在化。
圖13表示RAE-1是在B/c BM細胞上表達的，而不是在B6 BM細胞上表達。圖13(a):用小鼠NKG2D-人Ig Fe融合蛋白(NKG2D Ig)或對照人Ig (clg)對最新分離的BM細胞進行染色。為了檢測NKG2D-1g的結合，將PE-綴合的抗-人IgG抗體(抗-人Ig PE)用作二級抗體。虛線表示BM細胞上的clg染色。粗線條表示NKG2D配體在BM細胞上的表達。 圖13 (b):用生物素化的抗-泛RAE-lmAb、生物素化的抗_H60mAb、生物素化的抗-MULTI mAb或生物素化的同種型-匹配的clg對BM細胞進行染色，然後用PE-綴合的抗生物素蛋白鏈菌素染色。虛線表示clg染色，而粗線條表示RAE-1、H60和MULTI在BM細胞上的表達。圖13(c和d):在一 2天用抗-NKLlmAb處理CB6F1受體。在第O天，對受體進行輻射 (llGy)，然後用B/c或CB6F1BM細胞(4xl06)重建。在第7天，從受體脾臟中分離細胞，並且按照圖片a和b所示進行分析。虛線表示clg對BM細胞的染色。粗線條表示NKG2D配體、 RAE-UH60和MULTI在BM細胞上的表達。數字表示染色細胞的平均螢光(任意線性單位)。 圖13 (e和f):用圖表表示RAE-1-表達細胞的表型。將BM細胞轉入用抗-NK1.1mAb預處理過的輻射過的受體。按圖片c所示方法分離細胞並且染色。圖13 (g):顯示增殖細胞能表達RAE-1。將B/c BM細胞轉入用抗-NK1.1mAb預處理過的輻射過的CB6F1小鼠體內。轉移六天之後，將BrdU (O. 8mg/小鼠)注射到小鼠體內。2或12小時之後，收集來自受體脾臟的細胞，並且用抗-泛-RAE-1mAb和抗-BrdU進行染色。圖13 (h和I):表示RAE-1在 5-FU-處理的BM的後代上表達。將來自5-氟尿嘧啶-處理的B/c小鼠的BM細胞轉入用抗-NK1.1mAb預處理過的輻射過的CB6F1小鼠體內。轉移八天之後，按圖片c和e所示分離細胞並且進行分析。圖13 (i):表示C-試劑盒和RAE-1-陽性分選細胞的Sca-1染色。 在圖片e-1中，>98%的用clg染色的細胞在左下方的象限(未示出)。示出了上面兩個象限中的細胞百分比。以上結果至少在兩次獨立的實驗中是可再現的(示出了代表性數據)。
圖14 (a):表示了抗-NKG2D mAb能阻斷B/c BM在CB6F1雜交小鼠體內的排斥。 將大約4x106BM細胞轉入輻射過的CB6F1受體。在第5天用125IUdR注射受體小鼠，並且在第六天收集脾臟和計數。黑色條柱顯示在B/c BM->CB6F1小鼠脾臟中125IUdR的吸收，而白色線條表示放射線標記在CB6F1 BM->CB6F1受體中的吸收。按圖中所示用非耗盡的，中和抗-NKG2D mAb或NK細胞-耗盡的抗-NK1.1mAb (200 μ g/小鼠，第一 2天) 處理小鼠。結果表示為平均值土S.D.cpm(5隻小鼠/組)。重複進行該實驗兩次，獲得了相當的結果。圖 14 (b):表示B/c供體細胞的表型，它能對用抗-NKG2D mAb或對照I g處理過的輻射過的 CB6F1受體進行種群恢復。按圖片a所示處理小鼠，在移植8天之後收穫脾細胞，同時對細胞進行染色，並且數據如圖13所示。
圖15表示表達RAE-1的同源的BM細胞的排斥。圖15(a)表示RAE-1 ε在RAE-1 ε 轉基因Β6小鼠的骨髓細胞上的表達。從野生型Β6和RAE-1 ε轉基因Β6小鼠中新分離的骨髓用clg或抗-泛-RAE-1 mAb進行染色。圖15 (b)表示B6NK細胞在體外殺傷同源的 RAE-1 ε轉基因BM細胞。將從野生型Β6和RAE-1 ε轉基因Β6小鼠中新分離的BM用作體外細胞毒性測定的標準的目標，用IL-2-激活的野生型NK細胞(Β6ΝΚ細胞，在2000U/ml重組人 IL-2 中培養七天時間，由 National Cancer Institute Biological Resources Branch Pre-clinical Repository 提供)用作效應物,在濃度為 10 μ g/ml 的 clg 或抗-NKG2D mAb (克隆191004)存在的條件下進行。圖15 (c)表示B6小鼠排斥表達RAE-1 ε的同源的骨髓。將大約4x106RAE-1 ε轉基因Β6ΒΜ細胞轉入輻射過的Β6受體。在第5天用125IUdR注射受體小鼠，並且在第六天收穫脾臟和計數。黑色條柱表示在RAE-1 ε的轉基因ΒΜ->Β6小鼠的脾臟中的125IUdR的吸收，而白色條柱表示放射線標記在野生型B6BM->B6受體中的吸收。按圖中所示用非耗盡的，中和抗-NKG2D mAb或NK細胞-耗盡的抗-NK1.1 mAb處理小鼠(200 μ g/小鼠，第-2天)，結果表示為平均值土S. D. cpm(5隻小鼠/組)。該實驗重複進行兩次，獲得了相似結果。圖15 (d)表示CB6F1小鼠排斥表達CB6Fle的同源骨髓。將大約4x106RAE-1 ε轉基因CB6F1BM細胞轉入輻射過的CB6F1受體。在第5天用125IUdR注射受體小鼠，並且在第六天收穫脾臟和計數。黑色條柱表示RAE-1 ε轉基因BM->CB6F1小鼠脾臟中的125IUdR吸收，而白色條柱表示放射線標記在野生型CB6F1BM->CB6F1受體中的吸收。按圖片c所示處理小鼠並且示出了數據。
圖16 (a)表示DAPlO-/-小鼠不能有效地排斥表達RAE-1 ε的同源的骨髓。將大約4x106RAE-1 ε轉基因Β6ΒΜ細胞轉入輻射過的受體。在第5天用125IUdR注射小鼠，並且在第六天收穫脾臟和計數。黑色條柱表示在RAE-1 ε轉基因Β6ΒΜ-〉野生型Β6小鼠脾臟中的 125IUdR的吸收，白色條柱表示在RAE-1 ε轉基因B6BM->DAP10-/_B6受體中放射線標記的吸收。按圖中所示用非耗盡的，中和抗-NKG2D mAb或NK細胞-耗盡的抗-NK1. lmAb(200y g/ 小鼠，第-2天)處理小鼠。結果表示為平均值土S.D.cpm (5隻小鼠/組)。圖16 (b)表示 DAP12-/-小鼠(Bakker et al.，Immunity，13 :345_353，2000)排斥表達 RAE-1 ε 的同源的骨髓。將大約4xl06RAE-l ε轉基因Β6ΒΜ細胞轉入輻射過的受體。在第5天用125IUdR注射小鼠，並且在第六天收穫脾臟和計數。黑色條柱顯示在RAE-1 ε轉基因Β6ΒΜ-〉野生型Β6 小鼠的脾臟中125IUdR的吸收，而白色條柱表示在RAE-1 ε轉基因B6BM_>DAP 12-/-B6受體中放射線標記的吸收。處理小鼠，結果如圖片a所示。
圖17 (a)示出了在RAE-1 ε轉基因Β6小鼠中的NK細胞上NKG2D的調節。用抗-泛-RAE-1 mAb (左側圖片)或抗-NKG2D和抗-NK1.1 mAb (右側圖片)對來自野生型和RAE-1 ε轉基因Β6小鼠的脾細胞進行染色。分析在脾細胞上的RAE-1表達，並且通過對 NKl.1+細胞分選來分析NKG2D表達。細線條表示用clg染色的細胞，而粗線條表示RAE-1 或NKG2D特異性染色。數字表示染色細胞的平均螢光(任意線性單位)。圖17 (b)表示在 RAE-1 ε轉基因(Tg)NK細胞中NKG2D-依賴型細胞毒性減弱。用來自野生型或RAE-1 ε TgB6 小鼠的脾臟製備富集的NK細胞，所述小鼠在收穫前一天IP- 注射polyl C (lOOyg/小鼠)。按文獻披露的方法對CD32-轉染的721. 221靶細胞進行單克隆抗體-依賴型改向殺傷測定(Lanier et al.，Jlmmunol，141 :3478_3485，1998)，使用對照 Ig (clg)，抗-NKG2D， 或抗-NK1.1 mAbs進行。圖17 (c):示出了 NKG2D對在RAE-1 ε轉基因宿主中發育的野生型NK細胞的調節作用。將Ly 5. 2Β6ΒΜ細胞(IxlO7/小鼠)轉入輻射過的野生型(WT)或 RAE-1 ε Tg Β6小鼠。在移植三個月之後，在脾NK細胞(對⑶3_，NKl. 1+淋巴細胞的分選) 上分析NKG2D (左側圖片)和NKl.1 (右側圖片)的表達水平。細線條表示用clg染色的細胞，而粗線條表示RAE-1或NKG2D特異性染色。數字表示染色細胞的平均螢光(任意線性單位)。圖17 (d)表示在Ly5. 2 B6 BM->RAE-1 Tg嵌合小鼠中NK細胞的NKG2D-依賴型細胞毒性。用Ly5. 2 B6 BM_>RAE_1 Tg和Ly5. 2 B6 BM_>B6小鼠的脾臟製備富集的NK細胞，所述小鼠在收穫脾臟之前一天IP-注射polyl =CXlOOyg/小鼠)。按圖片b所示進行mAb-依賴型改向細胞毒性測定。圖17 (e)表示在RAE-1 Tg小鼠中發育的野生型NK細胞，證實減弱了的NKG2D-依賴型骨髓排斥。黑色條柱表示在RAE-l+Tg BM細胞-> 嵌合小鼠(Ly5. 2 B6 BM->野生型B6)的脾臟中125IUdR的吸收，而白色條柱表示RAE-l+Tg BM細胞-> 嵌合小鼠(Ly5. 2 B6 BM->RAE-1 Tg嵌合小鼠)的脾臟中放射線標記的吸收。圖17 (f)表示在 RAE-1 ε轉基因CB6F1小鼠中的雜合阻抗受到減弱。將4xl06B/c BM細胞轉入輻射過的受體。在第5天用125IUdR注射受體小鼠，並且在第六天收穫脾臟和計數。黑色條柱表示B/c BM->野生型CB6F1小鼠脾臟中的125IUdR的吸收，白色條柱表示在B/c BM->RAE-1 ε轉基因 CB6F1受體中放射線標記的吸收，而灰色條柱表示CB6F1 BM->CB6F1小鼠。按圖中所示用非耗盡的，中和抗-NKG2D mAb或NK細胞-耗盡的抗-NK1.1mAb (200 μ g/小鼠，第_2天)處理小鼠。結果表示為平均值土S.D.cpm (5隻小鼠/組)。重複進行該實驗兩次，獲得了相當的結果。
發明的詳細說明
本發明在某種程度上基於以下出人意料的發現，NKG2D，一種⑶8+T細胞、NK細胞和某些激活的CD4+T細胞上的激活受體，它的調節是預防和/或治療自身免疫和炎性症候群的有效方法。一方面，本發明人業已發現了刺激NKG2D內在化的製劑和方法，並且業已確定所述製劑是治療與NKG2D激活相關的症候群的有效的治療方法。所述製劑和方法特別適用於這樣的症狀(如被認為出現在，例如，慢性炎性症候群中的症狀)其中天然可溶性 NKG2D配體不能夠刺激內在化。本發明還涉及用於減弱NKG2D的功能性表達以便治療所述炎性症候群的任何方法。在某些實施方案中，本發明的方法和組合物只能影響白細胞的亞類，這取決於它們主要在NKG2D上的激活。
本發明涉及能有效治療或預防白細胞的與NKG2D-介導的激活相關的症候群的方法和組合物。該方法是通過在適合預防和治療所述症候群的條件下使表達NKG2D的白細胞與能減弱所述細胞的NKG2D-介導的激活的 製劑接觸。所述接觸可以通過任何適合的方法進行，包括給患者或包括通過NKG2D途徑激活的細胞的宿主，在能將所述製劑輸送給所述患者或宿主體內的細胞的條件下施用所述製劑或包含所述製劑的組合物。根據本發明， NKG2D激活可以通過下面一種或多種方式減弱(i)耗盡預先存在於細胞表面上的細胞表面NKG2D分子；(ii)幹擾NKG2D和DAP 10之間的功能性相互作用，或阻斷NKG2D的信號傳導功能jP(iii)防止NKG2D分子到達細胞表面，包括在轉錄、翻譯或翻譯後水平上幹擾 NKG2D的產生。在某些實施方案中，本發明涉及通過促進它們的內在化來減少預先存在的細胞表面NKG2D分子，而又不會同時導致有可能引發攜帶NKG2D的白細胞的效應子功能的顯著的激活。
在本文中，術語〃NKG2D〃，〃NKG2_D〃，〃D12S2489E〃，〃KLRK1〃，和〃殺傷細胞外源凝集素-樣受體亞科K，成員1〃，表示人類殺傷細胞激活受體基因，CDNA (例如，人類-基因庫保藏號NM-007360)，及其基因產物，以及它的哺乳動物對應物，包括野生型和突變型產物。人NKG2D編碼區參見SEQ ID NO :3所示，而人NKG2D蛋白序列參見SEQ ID N0:4所示。 NKG2D的哺乳動物對應物包括，但不局限於小鼠NKG2D (例如，Mus musculus-GENBANK保藏號 NM-033078)、大鼠 NKG2D (例如，褐家鼠-GENBANK 保藏號 NM-133512)、豬 NKG2D (例如， 小型豬-GENBANK保藏號AF285448)、猴子NKG2D(例如，恆河猴-GENBANK保藏號AJ554302) 和猩猩NKG2D (例如，獼猴-GENBANK保藏號AF470403)。本發明的優選實施方案包括NKG2D 調節劑，如NKG2D拮抗劑和部分拮抗劑。
除非另有說明，本發明的方法可用於實施治療(例如，減輕與以下狀態相關和/或造成以下狀態的症狀，所述狀態被認為導致了一種症狀，依據這種症狀/狀態存在的時間，所述狀態/症狀的發展，所述狀態/症狀的嚴重性等)，或預防(例如，降低出現的可能性，延緩發作，延緩發作後嚴重性，減輕發作時的嚴重程度等)與NKG2D活性相關的任何類型的炎性症狀，如與NKG2D相關的任何炎性自身免疫疾病。不過，可以理解的是，所述症狀可能有很大不同，因此，用於治療各種症狀的方法同樣被認為是本發明的獨特方面。
1.NKG2D-調節劑
除非另有說明或者在本文中明確指明，在實施本發明時，能夠減弱NKG2D-介導的細胞激活的任何製劑都可以使用。所述製劑的非限定性例子包括NKG2D配體，或 NKG2D-結合片段，其變體，或衍生物；抗體，或其片段，變體，或衍生物(例如，NKG2D-結合抗體)；核酸(或其變體或衍生物)，或小分子，它能抑制細胞中NKG2D或DAP 10產生；能干擾 NKG2D-DAP10複合物的形成或功能的肽或小分子；能改變NKG2D信號傳導的小分子，和上述任何物質的組合。例如，典型的NKG2D配體可以參見美國專利6，653, 447 ；Carayannopoulos et al. ,J Immunol,169 (8):4079-83, 2002 ；Carayannopoulos et al. ,Eur J Tmmunol,32 (3):597-605, 2002 !Sutherland et al. ,J Immunol,168 (2):671-9, 2002 !Sutherland et al.,Tmmunol Rev,181 :185-92，2001 ;和 Cosman et al. , Immunity,14 (2):123-33, 2001)。
本發明涉及能從外部接觸NKG2D-表達細胞並且在它們隨後接觸攜帶NKG2D-配體的細胞或重組NKG2D配體時能減弱攜帶NKG2D的細胞的激活。可以監測這種激活的任何指示劑，包括，但不局限於DAP 10磷酸化的刺激，p85 PI3激酶的刺激，Akt的激活，幹擾素-Y (IFN- Y )或其他細胞因子或趨化因子的NKG2D-依賴型產生，攜帶NKG2D-配體的靶細胞的NKG2D-依賴型殺傷等。評估NKG2D激活的水平一種方法是測定人NK細胞殺傷攜帶 NKG2D配體的靶細胞的能力(例如，參見下面的例I)。在本發明的某些實施方案中，有用的 NKG2D-調節劑是這樣的，它能在諸如例I披露的模型系統中導致NKG2D配體誘導的NKG2D 激活減弱至少大約20% ;在其他實施方案中，所述製劑導致配體誘導的NKG2D激活減弱至少大約30%，40%, 50%, 60%, 7 0%, 80%, 90%，或以上。例如，與對照相比，在存在所述製劑的條件下，NKG2D配體誘導的激活可以減弱至少大約30%。例如，所述對照可以是在沒有所述製劑但是在基本上相同的條件下NKG2D的激活，所述條件是在(a)個體，(b) 一群大體上相似的有機體，將平均值用作對照，或(c)這兩者。評估NKG2D激活水平的另一種方法是在存在或缺少NKG2D配體，如MICA或ULBP的條件下測定IFN- Y產量。用於測定IFN- Y產量的任何方法都可以使用，包括，但不局限於能測定IFN-Y蛋白的免疫測定方法或其他測定方法，能測定IFN-Y活性的生物測定方法等。在本發明的某些實施方案中，有用的NKG2D-調節劑是能導致NKG2D-介導的IFN-Y產量降低至少大約20%的製劑；在其他實施方案中，所述製劑導致NKG2D-介導的IFN- Y產量降低至少大約30%，40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%或以上。
在一個系列的實施方案中，本發明的NKG2D-調節劑刺激NKG2D的細胞內在化。可以通過任何合適的方法，例如，通過流式細胞測量術(例如，參見下面的例2);免疫螢光顯微術(包括，通過共焦顯微術監測抗體的內在化)；能檢測細胞表面NKG2D的結合測定等評估內在化。在本發明的某些實施方案中，有用的NKG2D-調節劑是這樣的一些製劑，它能導致 NKG2D的細胞表面含量降低至少大約10%，或者導致NKG2D從細胞表面消失的比率提高10%， 所述變化是相對對照而言的，測定是在例2所披露的模型系統中進行的；在其他實施方案中，所述製劑導致NKG2D的細胞表面含量降低至少大約20%，30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%，90%, 95%,或>99%或導致NKG2D的消失比率增加至少大約20%，30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%,95%。
優選的是，本發明的NKG2D-調節劑不會導致NKG2D-表達細胞的細胞溶解或耗盡， 所述細胞包括，例如⑶8+T細胞，⑶4+T細胞，Y STcR+T細胞，和⑶56/16+NK細胞中的一種或多種。可以採用任何合適的方法評估一種製劑殺傷NKG2D-表達細胞的能力，例如，使用膜聯蛋白V或碘化丙錠染色，整合了臺盼藍，通過流式細胞測量術或顯微術，銪分析或鉻釋放測定來檢測死亡細胞。在本發明的某些實施方案中，有用的NKG2D-調節劑是在能保持至少大約90%的NKG2D-表達細胞生活力的條件下具有可檢測的治療效果的製劑。在其他實施方案中，所述製劑導致NKG2D-表達細胞的數量減少至少大約5%，10%，20%30%，40%，50%， 60%, 70%,或 80%ο
以下表格包含本發明的NKG2D調節劑的特徵的非限定性例子。
表1. NKG2D-調節劑的特徵
權利要求
1.選自如下的製劑製備用於治療或預防選自以下的症候群的藥物中的用途結合 NKG2D的抗體、NKG2D-結合抗體片段、多聚MICA、MICA的多聚NKG2D-結合片段、多聚MICB、 MICB的多聚NKG2D-結合片段、多聚ULBP、ULBP的多聚NKG2D-結合片段、由選自SEQ ID NO: 10,SEQ ID N0:11和SEQ ID NO : 12的序列編碼的RNAi分子；所述症候群選自I型糖尿病、 類風溼性關節炎、多發性硬化、乳糜瀉、炎性腸病、牛皮癬、系統性紅斑狼瘡、橋本甲狀腺炎、 重症肌無力、傳染性神經元炎、自身免疫眼色素層炎、夏科氏肝硬變、自身免疫性肝炎、自身免疫溶血性貧血、惡性貧血、自身免疫性血小板減少症、Grave's病、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睪丸炎、顳動脈炎、抗-磷脂症候群、韋格內氏肉芽腫症、貝切特氏症候群、硬皮病、多肌炎、皮膚肌炎、關節強硬性脊椎柱炎、Sjogren s症候群、皰疹樣皮炎、慢性天皰瘡、 白癲風、牛皮癬關節炎、骨關節炎、類固醇抗性哮喘、慢性阻塞性肺病和動脈粥樣硬化和移植排斥，並且其中所述製劑降低NKG2D在白細胞表面上的量。
2.如權利要求1的用途，其中所述製劑導致了配體誘導的NKG2D激活減弱。
3.如權利要求1的用途，其中所述製劑減弱了NKG2D與DAP 10的相互作用。
4.如權利要求1的用途，其中，所述製劑增加了細胞表面NKG2D內在化的比率。
5.如權利要求1的用途，其中，細胞表面NKG2D的數量的減少是在以下條件下發生的， 其中MICA，MICB, ULBPl，ULBP2, ULBP3，或ULBP4中的一種或多種不能減少細胞表面NKG2D 的數量。
6.如權利要求5的用途，其中，所述NKG2D內在化比率的增加出現在以下條件下其中 MICA，MICB，ULBP1，ULBP2，ULBP3，*ULBP4中的一種或多種不能增加NKG2D內在化的比率。
7.如權利要求1的用途，其中，所述製劑降低通過NKG2D-NKG2D配體複合體的信號傳導。
8.如權利要求1的用途，其中，所述白細胞選自下列一組NKG2D+⑶8+T細胞、 NKG2D+CD4+T細胞、NKG2D+ γ δ T細胞、NKG2D+NK細胞和巨噬細胞。
9.如權利要求1的用途，其中，所述白細胞包含NKG2D+⑶8+Τ細胞。
10.如權利要求1的用途，其中，所述製劑包括能結合NKG2D的抗體或它的NKG2D-結合片段，其中所述抗體表現出對人NKG2D的親和力(Kd)至少與可溶性NKG2D配體相等。
11.如權利要求10的用途，其中，所述抗體是單克隆抗體。
12.如權利要求11的用途，其中，所述單克隆抗體是人類抗體、人源化抗體或嵌合抗體。
13.如權利要求1的用途，其中，所述製劑包括由選自SEQID NO 10,SEQ ID Ν0:11和 SEQ ID NO 12的序列編碼的RNAi分子。
14.如權利要求1的用途，其中，在受所述症候群影響的器官或組織的細胞中NKG2D配體的表達被提聞。
15.如權利要求1的用途，其中，所述製劑導致浸潤受所述症候群影響的器官或組織的淋巴細胞減少。
16.如權利要求1的用途，其中，所述製劑導致由CD8+T細胞產生的Y幹擾素含量的降低。
17.如權利要求1的用途，其中，所述製劑減弱了所述白細胞的增殖。
18.如權利要求1的用途，其中，所述藥物用以治療被診斷患有所述症候群的人類患者。
19.如權利要求1或18的用途，其中，所述症候群是類風溼性關節炎。
20.如權利要求1或18的用途，其中，所述症候群是I型糖尿病。
21.如權利要求1或18的用途，其中，所述症候群是多發性硬化。
22.如權利要求1或18的用途，其中，所述症候群是乳糜瀉。
23.如權利要求1或18的用途，其中，所述症候群是炎性腸病。
24.如權利要求1或18的用途，其中，所述症候群是系統性紅斑狼瘡。
25.如權利要求1或18的用途，其中，所述移植排斥是骨髓移植排斥。
全文摘要
本發明涉及用於治療和/或預防自身免疫性和/或炎性疾病的方法和組合物。具體地講，本發明提供了通過調節NKG2D減弱自身反應性T細胞和/或NK細胞的擴增和功能的治療劑。
文檔編號A61K38/00GK102988959SQ20121034011
公開日2013年3月27日 申請日期2005年4月5日 優先權日2004年4月5日
發明者L·L·拉尼爾, 康悅小笠原, J·A·布魯斯通 申請人:加利福尼亞大學董事會