保存穩定性優異的含有s-腺苷-l-蛋氨酸的乾酵母組合物及其製造方法
2023-10-18 07:34:14 2
專利名稱：保存穩定性優異的含有s-腺苷-l-蛋氨酸的乾酵母組合物及其製造方法
技術領域：
本發明涉及高濃度地含有水溶性的作為生理活性物質有用的S-腺苷-L-蛋氨酸(以下，記為SAMe)、保存穩定性優異的乾酵母組合物及其製造方法。
背景技術：
SAMe在機體內廣泛存在，是在核酸、神經傳導物質、磷脂、激素、蛋白質等合成、代謝中作為各種利用轉甲基酶的甲基反應的甲基供給體而扮演重要角色的水溶性生理活性物質。SAMe在人體幾乎所有細胞中可見，作為各種生物化學中的共同因子發揮作用，通過甲基轉移、硫基轉移和氨基丙基轉移的3個代謝路線被代謝。例如，是軟骨維持和腦內物質的生物合成不可缺少的物質。根據近年的SAMe的功能研究，也報告了對脂肪肝、高脂血症、動 脈硬化症、失眠症、酒精性肝炎、老年痴呆症等的治療效果。這樣，SAMe是重要的生理活性物質，在歐美各國作為抑鬱症、肝臟疾病和關節炎等的治療藥或健康食品被廣泛利用。因此，強烈希望廉價、簡便地製造、提供SAMe。目前，作為SAMe的製造方法，已知有使用含有作為前體物質的L-蛋氨酸的培養基進行發酵生產的方法；使用從酵母等微生物分離精製得到的SAMe合成酶(蛋氨酸腺苷基轉移酶)、以5'-三磷酸腺苷(ATP)和L-蛋氨酸作為基質、酶合成SAMe的方法，和利用合成法的方法等。關於酶合成法，是使用從酵母等微生物分離精製得到的SAMe合成酶(蛋氨酸腺苷基轉移酶)，以5'-三磷酸腺苷(ATP)和L-蛋氨酸作為基質，酶合成SAMe的方法，與發酵法相比，雖然該方法有SAMe的積蓄量多、不需要從菌體提取的SAMe操作等的優點，但是有酶的製備繁瑣、得到的酶活性微弱、必須除去ATP分解酶等妨礙物質的問題，還有基質ATP極其高價的各種問題，未必能夠成為實用的方法。另外，由於近年的基因工程的發展，通過使用克隆得到的SAMe合成酶基因，該酶的製備變得更加簡便，雖然酶製備的問題得到解決，但依然必須將高價的ATP作為基質使用等其它實用上的問題還未被解決。另外，由於SAMe熱不穩定，有即使在常溫下也容易被分解的性質，因此，在作為醫藥品、健康食品使用時成為大的障礙。作為其對策，進行了以保存穩定性提高為目的的多種嘗試。例如，一般有將以上述製造方法得到的SAMe組合物通過色譜法等精製後，製成和硫酸、對甲苯磺酸的鹽或和丁烷ニ磺酸的鹽，實現使SAMe穩定化的方法(例如，參照專利文獻O ;或者，在精製得到的SAMe中進行添加物處理，使SAMe形成組合物而實現穩定化的方法(例如，參照專利文獻I);由於需要許多工夫和費用，因此，作為治療藥和健康食品廉價地製造提供重要的SAMe是極其困難的。近年來，進行著關於使用將SAMe以更廉價、精製エ序少、具有能夠簡便地製造SAMe的生產能力且能夠ロ服攝取的微生物的、含有SAMe的乾燥微生物的研究(例如，參照專利文獻2、非專利文獻I)。但是，現狀是，與精製得到的SAMe、SAMe組合物相比，含有SAMe的乾燥微生物的保存穩定性低形成問題。現有技術文獻專利文獻
專利文獻I :日本特開昭59-51213號公報專利文獻2 國際公開第2008/090905號非專利文獻非專利文獻I Biochemica et Biophysica Acta, 1573, 105-108，(2002)非專利文獻2 :J of Chromatography B, 863，94-100 (2008)
發明內容
發明所要解決的課題
本發明的目的在於確立能夠以低成本、簡便地製造高濃度地含有SAMe的保存穩定性優異的乾酵母組合物的エ藝。用於解決課題的方法為了解決上述課題，本發明的發明人深入地研究了經濟地生產高濃度地含有SAMe、且能夠以穩定的狀態長時間保存的、性能優異的組合物的方法，結果發現，使用具有SAMe生產能力且能夠ロ服攝取的酵母，在菌體內使SAMe高濃度地產生積蓄後，以離心分離等分離方法從培養液分離酵母菌體，在所得到的酵母菌體濃縮物中添加增粘劑後，使之乾燥，由此，能夠簡便地收率良好地製造作為高濃度地含有作為目的的SAMe、且保存穩定性優異的組合物的乾酵母，從而完成了本發明。另外，發現本發明的含有SAMe的乾酵母的組合物，除了保存穩定性優異，機體吸收性也優異，從而完成了本發明。本發明提供( I)ー種含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，含有S-腺苷-L-蛋氨酸和增粘齊U，和(2) ー種含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物的製造方法,使用具有S-腺苷-L-蛋氨酸生產能力的酵母，在由酵母的菌體培養液得到的酵母菌體濃縮物中添加增粘劑後，進行乾燥。發明的效果本發明的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，保存穩定性優異，並且機體吸收性也優異，因此，通過破碎製成粉末狀，或根據需要加入其它生理活性成分、賦形劑等添加劑、壓縮壓片製成片劑狀的組合物，或將粉體造粒為顆粒狀、將造粒得到的顆粒灌裝而進行膠囊化等，能夠提供醫藥、健康食品用的、水溶性的、作為生理活性物質有用的組合物。另外，能夠提供以低成本、簡便地製造高濃度地含有S-腺苷-L-蛋氨酸的保存穩定性優異的組合物、機體吸收性也優異的含有SAMe的乾酵母組合物的方法。
具體實施例方式本發明中所使用的酵母種類，只要是具有SAMe生產能力且能夠ロ服攝取的酵母即可，例如，可以列舉屬於酵母菌屬的酵母。其中，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)更適合。此外，在乾酵母中，含有大量5'-核苷酸、游離胺基酸、具有抗氧化作用且有利於肝功能改善的穀胱甘肽、具有免疫カ增強作用、整理腸道作用的β -葡聚糖、食物纖維等有用成分，作為健康食品等被廣泛利用。在培養上述酵母時所使用的碳源，只要是酵母能夠同化的物質即可，沒有特別限制，例如，可以列舉葡萄糖、蔗糖、澱粉、廢糖蜜等碳水化合物、こ醇等醇或こ酸等有機酸。只要是酵母能夠同化的物質，氮源也沒有特別限制，例如，可以列舉氨、硝酸、尿素等無機氮化合物、或酵母提取物、麥芽提取物等含有有機氮的化合物。另外，作為無機鹽類，可以使用磷酸、鉀、鈉、鎂、鈣、鐵、鋅、錳、鈷、銅、鑰等的鹽。還能夠添加參與SAMe的骨架結構的蛋氨酸、腺嘌呤、腺苷核糖核苷，進行培養。作為培養基，使用含有L-蛋氨酸的培養基(Shiozaki S.，et all, J.Biotechnology, 4, 345-354，(1986))。在作為培養基成分含有蔗糖、酵母提取物、L-蛋氨酸、尿素、甘氨酸、磷酸ニ氫鉀、硫酸鎂七水合物、生物素、氯化鈣ニ水合物和微量金屬鹽的培養基中接種細菌，流動加入蔗糖和/或こ醇等碳源，並且進行好氧培養，能夠得到含有SAM的菌體。培養溫度和培養液的pH根據所使用的酵母種類而不同，作為培養溫度，能夠列舉20 35°C的溫度，作為培養液的pH，能夠列舉pH4 7的範圍。 另外，在提高菌體內的SAMe含量中，優選好氧培養。培養槽只要能夠進行通氣且能夠根據需要進行攪拌即可，例如，能夠利用機械式攪拌培養槽、空氣升降式培養槽和氣泡塔型培養槽等。培養基的提供方法，一次性或者分別連續地或間歇地提供碳源、氮源、各種無機鹽類、各種添加劑等。例如，蔗糖、こ醇等基質既可以作為與其它培養基成分的混合物向培養槽提供，另外，也可以與其它培養基成分分別獨立地向培養槽提供。培養液的PH控制可以通過酸、鹼溶液進行。作為鹼，希望使用作為氮源所使用的氨、尿素、或非氮類鹼，例如，使用氫氧化鈉、氫氧化鉀等，進行PH控制。作為酸，使用無機酸，例如，使用磷酸、硫酸、硝酸，或有機酸。此外，也能夠使用無機鹽類的磷酸鹽、鉀鹽、鈉鹽、硝酸鹽等進行pH控制。以這樣的條件進行培養，在目標量的SAMe在酵母菌體中積蓄的階段，取出培養液，分離酵母菌體。作為分離方法，只要是能夠高效地進行菌體的分離和洗浄的方法即可，沒有特別限制，作為適合的例子，可以列舉使用對流型酵母離心分離機和分離膜的超濾裝置。接著，在分離得到的酵母菌體的分離濃縮物中添加增粘劑。由此，乾酵母中的SAMe保存穩定性和機體吸收性提高，另外，酵母的乾燥エ序中的成品率也提高，另外，乾酵母獨特的臭氣也得到掩蔽。作為所添加的增粘劑的量，以相對於含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物的質量比計，優選為O. I 70質量％的範圍，更優選為O. 4 70質量％的範圍，更加優選為O. 7 70質量％的範圍。而且，特別優選為4. 5 70質量％的範圍。如果低於O. I質量％，則乾酵母中的SAMe保存穩定性變得不充分，如果超過70質量％，不僅浪費，而且乾酵母中的SAMe保存穩定性顯示用量依賴性地下降的傾向。在本發明中，增粘劑是指具有增粘作用、如凝膠化劑那樣的能夠在食品中添加的各種增粘劑等。具體而言，作為能夠使用的增粘劑，可以列舉下述(I) (7)，能夠從中選擇ー種以上使用。(I)選自黃原膠、結冷膠、凝膠多糖、海藻黃原膠、普魯蘭多糖和納豆菌膠中的來自微生物的增粘劑；(2)選自瓜爾膠、塔拉膠、刺槐豆膠、羅望子膠和車前子膠中的來自種子的增粘劑；(3)選自纖維素、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、澱粉和羧甲酸鈉中的來自植物的增粘劑；(4)選自角叉菜膠、藻酸鈉、藻酸和藻酸丙ニ醇酯中的來自海藻的增粘劑；(5)選自阿拉伯樹膠、黃蓍膠、蟲膠和阿拉伯半乳聚糖中的來自樹脂的增粘劑；(6)選自殼聚糖和幾丁質中的來自甲殼的增粘劑；和(7)選自果膠、甘露聚糖、透明質酸、軟 骨素、瓊脂、膠原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸鈉中的增粘劑。其中，更優選(I)選自黃原膠、結冷膠、凝膠多糖、海藻黃原膠、普魯蘭多糖和納豆菌膠中的來自微生物的增粘劑；(2)選自瓜爾膠、塔拉膠、刺槐豆膠、羅望子膠和車前子膠中的來自種子的增粘劑；(5)選自阿拉伯樹膠、黃蓍膠、蟲膠和阿拉伯半乳聚糖中的來自樹脂的增粘劑；(6)選自殼聚糖和幾丁質中的來自甲殼的增粘劑；和(7)選自果膠、甘露聚糖、透明質酸、軟骨素、瓊脂、膠原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸鈉中的增粘劑。還特別優選(I)選自黃原膠、結冷膠、凝膠多糖、海藻黃原膠、普魯蘭多糖和納豆菌膠中的來自微生物的增粘劑，和(2)選自瓜爾膠、塔拉膠、刺槐豆膠、羅望子膠和車前子膠中的來自種子的增粘劑。在本發明中所使用的增粘劑，在食品、化妝品、醫藥品用途中被廣泛使用，能夠安全地使用。在這樣操作進行增粘劑的添加處理後，對酵母菌體的濃縮物，通過利用噴霧乾燥器的噴霧乾燥法、冷凍乾燥法等的乾燥方法使水分蒸發，製成含有SAMe的乾酵母組合物。作為乾燥條件，在噴霧乾燥法中，希望在入口溫度210°C以下、出口溫度110°C以下使之乾燥。在冷凍乾燥法中，希望在最終塔板溫度30°C以下使之乾燥。從保存穩定性的觀點出發，希望本發明的含有SAMe組合物的水分含量為5. O質量％以下。接著，對該乾酵母組合物進行破碎，製成粉狀，或根據需要，在粉狀的乾酵母中加入其它生理活性成分、賦形劑等的添加劑後，壓縮壓片，製成片劑狀的組合物，還能夠進ー步包覆其表面。另外，也能夠將粉體造粒為顆粒狀、將粉體、造粒得到的顆粒灌裝而進行膠囊化
坐寸ο實施例以下，利用實施例和比較例更具體地說明本發明，但本發明不受這些例子限定。實施例I 4( a )酵母菌體的培養根據如上所述的公知的培養法，在含有L-蛋氨酸的培養基(Shiozaki S.，etall, J. Biotechnology, 4，345-354 (1986))中接種屬於酵母菌屬的釀酒酵母IF02346，邊以培養溫度27 29°C好氧通氣攪拌，邊培養6日。其結果，得到18L菌體濃度3. 5wt%、SAMe含量205mg/g —乾酵母的酵母菌體培養液。
(b)酵母菌體的收集用連續旋轉型離心分離器(日立HIMAC CENTRIFUGE CR10B2)處理18L上述酵母菌體培養液，得到3. 4kg液狀酵母菌體濃縮物，其中，菌濃度以乾燥物換算，相當於18質量％。(c)向酵母菌體濃縮物添加增粘劑在上述3. 4kg酵母菌體濃縮物中，以相對於該酵母濃縮物中的SAMe的質量比為O. 02,0. 2,2. 2,11. I倍量地加入黃原膠，在室溫攪拌混合30分鐘，得到添加了黃原膠的酵母菌體濃縮物。(d)乾酵母的製造在冷凍乾燥器(日本真空技術株式會社生產)的冷凍乾燥用不鏽鋼盤中流入添加了上述黃原膠的酵母菌體濃縮物，在-50°C冷凍乾燥後，以最終塔板溫度25°C的條件冷凍 乾燥36小吋。通過進ー步對所得到的冷凍乾酵母進行粉碎而得到粉末乾酵母。在密閉玻璃容器中裝入這樣操作得到的粉末乾酵母，在40°C、RH75%的加速試驗條件下進行保存穩定性試驗。在表I中表示在40°C、RH75%的加速保存穩定性試驗的結果。此外，對於SAMe殘留率，通過使用高氯酸的公知方法從含有SAMe的乾酵母提取SAMe，通過使用液相色譜的比較定量法實施。對於保存後有無臭氣，由5名參加者的感官檢查求出。感官檢查的評價方法為，5名參加者全部認為無異臭時記為5名中I 2名認為有異臭時記為「Λ」、5名中3名以上認為有異臭時記為「 X 」。本發明中的SAMe測定方法，使用以下條件的液相色譜。所使用的分析條件柱Nacalai(nacalai tesque) C0SM0SILC>4· 6X IOOmm洗脫液0· 2M KH2PO4水溶液/甲醇=95/5流速O.7mL/min,檢測器UV (260nm)SAMe保持時間約150秒實施例5 8在酵母菌體濃縮物中使用凝膠多糖，與實施例I同樣處理，得到粉末乾酵母。在表I中表示所得到的粉末乾酵母中的SAMe含量、質量、以及所得到的含有SAMe的乾酵母在密閉玻璃容器中在40°C、RH75%的加速條件下的保存穩定性試驗的結果、感官檢查的結果。實施例9在酵母菌體濃縮物中，相對於該酵母濃縮物中的SAMe的質量比為O. 2倍量地加入瓜爾膠，除此以外，與實施例I同樣地處理，得到粉末乾酵母。在表I中表示所得到的粉末乾酵母中的SAMe含量、質量、以及所得到的含有SAMe的乾酵母在密閉玻璃容器中在40°C、RH75%的加速條件下的保存穩定性試驗的結果、感官檢查的結果。實施例10在酵母菌體濃縮物中，相對於該酵母濃縮物中的SAMe的質量比為O. 2倍量地加入羅望子膠，除此以外，與實施例I同樣地處理，得到粉末乾酵母。在表I中表示所得到的粉末乾酵母中的SAMe含量、質量、以及所得到的含有SAMe的乾酵母在密閉玻璃容器中在40°C、RH75%的加速條件下的保存穩定性試驗的結果、感官檢查的結果。實施例11在酵母菌體濃縮物中，相對於該酵母濃縮物中的SAMe的質量比為O. 2倍量地加入結冷膠，除此以外，與實施例I同樣地處理，得到粉末乾酵母。在表I中表示所得到的粉末乾酵母中的SAMe含量、質量、以及所得到的含有SAMe乾酵母在密閉玻璃容器中在40°C、RH75%的加速條件下的保存穩定性試驗的結果、感官檢查的結果。比較例I除了在酵母菌體濃縮物中不添加黃原膠以外，與實施例I同樣處理，得到粉末乾酵母。在表I中表示所得到的粉末乾酵母中的SAMe含量、質量、以及所得到的含有SAMe的乾酵母在密閉玻璃容器中在40°C、RH75%的加速條件下的保存 穩定性試驗的結果、感官檢查的結果。比較例2在酵母菌體濃縮物中，相對於該酵母濃縮物中的SAMe的質量比為2. 2倍量地加入海藻糖，除此以外，與實施例I同樣地處理，得到粉末乾酵母。在表I中表示所得到的粉末乾酵母中的SAMe含量、質量、以及所得到的含有SAMe的乾酵母在密閉玻璃容器中在40°C、RH75%的加速條件下的保存穩定性試驗的結果、感官檢查的結果。[表I]
權利要求
1.一種含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，其特徵在於 含有S-腺苷-L-蛋氨酸和增粘劑。
2.如權利要求I所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，其特徵在於 所述增粘劑是選自下述(I) (7)的任一項中的至少I種， (1)選自黃原膠、結冷膠、凝膠多糖、海藻黃原膠、普魯蘭多糖和納豆菌膠中的來自微生物的增粘劑； (2)選自瓜爾膠、塔拉膠、刺槐豆膠、羅望子膠和車前子膠中的來自種子的增粘劑； (3)選自纖維素、甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素、澱粉和羧甲酸鈉中的來自植物的增粘劑； (4)選自角叉菜膠、藻酸鈉、藻酸和藻酸丙二醇酯中的來自海藻的增粘劑； (5)選自阿拉伯樹膠、黃蓍膠、蟲膠和阿拉伯半乳聚糖中的來自樹脂的增粘劑； (6)選自殼聚糖和幾丁質中的來自甲殼的增粘劑；和 (7)選自果膠、甘露聚糖、透明質酸、軟骨素、瓊脂、膠原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸鈉中的增粘劑。
3.如權利要求2所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，其特徵在於 所述增粘劑是選自下述的(I)、(2)和(5) (7)的任一項中的至少I種， (1)選自黃原膠、結冷膠、凝膠多糖、海藻黃原膠、普魯蘭多糖和納豆菌膠中的來自微生物的增粘劑； (2)選自瓜爾膠、塔拉膠、刺槐豆膠、羅望子膠和車前子膠中的來自種子的增粘劑； (5)選自阿拉伯樹膠、黃蓍膠、蟲膠和阿拉伯半乳聚糖中的來自樹脂的增粘劑； (6)選自殼聚糖和幾丁質中的來自甲殼的增粘劑；和 (7)選自果膠、甘露聚糖、透明質酸、軟骨素、瓊脂、膠原、白蛋白、玉米醇溶蛋白、酪蛋白和酪蛋白酸鈉中的增粘劑。
4.如權利要求I 3中任一項所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，其特徵在於 相對於含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，含有所述增粘劑O. I 70重量％。
5.如權利要求I 4中任一項所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，其特徵在於 乾酵母為屬於酵母菌屬的酵母。
6.如權利要求5所述的含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物，其特徵在於 所述屬於酵母菌屬的酵母為釀酒酵母。
7.一種含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母組合物的製造方法，其特徵在於 使用具有S-腺苷-L-蛋氨酸生產能力的酵母，在由酵母的菌體培養液得到的酵母菌體濃縮物中添加增粘劑後，進行乾燥。
全文摘要
本發明提供一種含有S-腺苷-L-蛋氨酸和增粘劑的保存穩定性優異的乾酵母組合物。通過在培養收集具有SAMe生產能力的酵母得到的酵母菌體濃縮物中添加增粘劑後進行乾燥，能夠簡便且經濟性地製造保存穩定性和機體吸收性優異的、高濃度地含有S-腺苷-L-蛋氨酸的乾酵母，因此，能夠在市場上提供高濃度地含有水溶性的作為生理活性物質有用的S-腺苷-L-蛋氨酸、保存穩定性和機體吸收性優異的乾酵母組合物。
文檔編號C12N1/16GK102858950SQ20118001781
公開日2013年1月2日 申請日期2011年4月5日 優先權日2010年4月7日
發明者高野健太郎, 莪山真與 申請人:三菱瓦斯化學株式會社