用於生物細胞的固定溶液的製作方法
2023-10-22 19:09:27 2
專利名稱：用於生物細胞的固定溶液的製作方法
用於生物細胞的固定溶液本發明涉及用於生物細胞的固定溶液，其用於在體外保存細胞學樣品，該固定溶液的類型為包含醇以用於固定所述細胞。更特別地，本發明適用於細胞學領域。固定溶液，或固定劑，用於保存或保持包含細胞的細胞學取樣物或樣品，以便由細胞學家以後對其進行分析。這些細胞樣品可以例如通過在患者中進行針穿刺、清洗、刷擦或小便採集來獲得。所述細胞可以來自任何器官，例如子宮、肝臟、胃、乳房等。細胞樣品可以例如為液體取樣物，例如尿、腹水、胸膜液或心包液；塗片，例如宮頸塗片、陰道塗片...；器官(例如，淺表腺體例如乳腺、甲狀腺，或者深層腺體例如胰腺或肝臟，等等)的穿刺物。「細胞學固定劑」或「細胞學固定溶液」是指通常在細胞學分析中使用以實現細胞固定的溶液。
固定是這樣的操作，所述操作g在使細胞的形態儘可能地保持於在其取樣之前它們所處的狀態。最好的固定劑是那些固定劑，所述固定劑通過快速作用，產生儘可能少的可能妨礙細胞內部形態的分析的二次修飾或人為現象。こ酸福馬林醇(alcool formol6ac6tique)或AFA是已知的並且很久以來尤其用於農業科學和獸醫學環境。AFA包含甲醇或こ醇、福馬林和冰醋酸。福馬林由甲酸、甲醛、低聚甲醛和甲醇組成。ー個實例為Locquin的AFA，其組成如下-80。こ醇IOOcc，-38%的實驗室福馬林10cc，-冰醋酸5cc，-蔗糖10g，-蒸餾水20cc。然而，冰醋酸破壞紅細胞並且裂解其內容物，其中涉及血紅蛋白沉積，這在標準染色例如帕帕尼古拉烏(Papanicolaou)染色或梅-格-吉(May-Griinwald Giemsa)染色(MGG)之後的分析中是非常有妨礙的，或者對於免疫細胞化學研究來說是非常有妨礙的，等等。此外，在該濃度下，こ醇從規定角度來看被認為是易燃的，並且福馬林被認為是有毒的和致癌的。本發明的目標是提供用於生物細胞的固定溶液，其使得能夠良好地保持具核細胞和紅細胞的完整性以為了其分析，但對於使用者來說危險性更小。為此，本發明的目標在於上述類型的用於生物細胞的固定溶液，其包含生理鹽水以便避免在細胞壁處的滲透壓休克，福馬林和聚こニ醇以用於保持在所述溶液中進行固定的具核細胞和紅細胞的大小和完整性。根據本發明的其他方面，所述用於生物細胞的固定溶液包含ー個或多個下述特徵-所述固定溶液不包含丙酮或酮類化合物，也不包含こ酸，以便保護紅細胞的完整性；-所述醇為こ醇或異丙醇；-所述醇為こ醇和異丙醇的混合物；
-醇的量大致小於該固定溶液的45體積％；-福馬林的量大致為該固定溶液的大約0.2-1體積％ ；-所述固定溶液包含保證該固定溶液的pH大致為6.4-7. 4的緩衝液；和
-所述固定溶液包含80體積％至95體積％的-590ml的生理鹽水，-IOmi 的 peg (Carbowax )，-203ml 的異丙醇，-193ml 的純こ醇， -0. 01體積％的疊氮化鈉，以及20體積％至5體積％的經緩衝的4%福馬林。因此，該溶液使得能夠更好地保持細胞的比例，特別是相對於細胞尺寸而言的細胞核尺寸，並且尤其是極好地保持紅細胞。此外，該固定溶液是不太易燃的、非毒性的和非致癌的。經由閱讀僅作為實例而給出並通過參考附圖
來進行的下面的描述，將會更好地理解本發明，在所述附圖中-圖I為取自乳房的細胞樣品的照片，所述樣品保持在根據本發明的固定溶液中，-圖2為取自甲狀腺的細胞樣品的照片，所述樣品保持在根據本發明的固定溶液中。本發明涉及用於在體外保存細胞學樣品的固定溶液，所述細胞學樣品包含準備供由細胞學家進行分析之用的生物細胞。所述固定溶液包含等滲的氯化鈉水溶液或生理鹽水，以代替習慣上作為通常使用的固定溶液的基質而使用的蒸餾水或去離子水。生理鹽水很久以來就是已知的，並且包含按照9克氯化鈉/I升水稀釋在蒸餾水中的氯化鈉。生理鹽水是等滲的，這使細胞維持在合適的滲透性狀態下，以避免對於其造成的在細胞壁處的任何滲透壓休克並因此避免由於細胞質膜和核膜破裂而引起的細胞破壞。生理鹽水的滲透性等於308毫滲透壓摩爾/升。滲透性是介質的濃度。這藉助了滲透的概念，滲透是溶劑穿越分隔兩種具有不同濃度的溶液(例如固定溶液和細胞的細胞質液體)的半透膜而進行的擴散。此外，所述固定溶液包含醇以用於通過在該含醇介質中固定細胞來使所述細胞保持在其狀態。優選地，醇的量大致小於該固定溶液的45體積％，以便是不太易燃的。因此，該低的醇含量使得更容易運輸和儲存，因為該固定溶液的危險性更小。「不太易燃的」特別是指，根據本發明的溶液不需要在該溶液的包裝上使用標明產品易燃性的安全象形符號。所述醇為例如こ醇或異丙醇。根據ー個變化形式，所述醇為こ醇和異丙醇的混合物。然而，単獨的醇是脫水性還原劑，因此通過細胞核和細胞質的收縮而改變細胞的大小。為了克服該缺點，所述固定溶液還包含福馬林以用於保持細胞的大小。以已知的和已經由Saccomanno等人發表的方式,所述固定溶液還可以包含Carbowax 或聚こニ醇。以已知的和已經發表的方式，所述福馬林可以與脫鈣劑或抗聚集劑例如こニ胺四こ酸(EDTA)及其鹽相聯合。以也是已知的和已經發表的方式，可以向包含粘液的取樣物添加粘液溶解試劑例如ニ硫蘇糖醇(DTT)或こ醯半胱氨酸。福馬林使得能夠保持紅細胞和具核細胞而不裂解它們，這保證了在大小方面的參考，從而允許細胞學家作更確切的診斷。特別地，正如可以在根據本發明的固定溶液中保持的細胞取樣物的圖I和2中看到的，在所述圖中標註為I的紅細胞被完好地保持並且是完整的，這使得能夠進行這些取樣物的確切分析。優選地，福馬林的量大致為該固定溶液的大約0. 2-1體積％。在該濃度下，根據由國家研究和安全研究所(Institut National de Recherche et de Securite, INRS)所編訂的毒理學記錄卡，福馬林或甲醛被認為僅是刺激性的，這與1-25%的通常所使用的濃度(在該濃度下，福馬林是腐蝕性的和致癌的)不同。因此，根據本發明的溶液的包裝也 不需要使用標明腐蝕性產品的安全象形符號。因此，在低於1%的濃度下，可以毫無危險地操作該溶液，其中關於操作它的預防措施水平是不太高的。以已知的方式，所述固定溶液可以包含抗微生物剤。所述固定溶液包含保證該固定溶液的pH大致為6. 4-7. 4的緩衝液。該pH範圍相應於保持人體細胞和血液的最佳條件。下面的實施例舉例說明了本發明而不限制其範圍。實施例I :由下列組分形成的溶液80 體積 ％ 的-590ml的生理鹽水，-IOmi 的 peg (Carbowax )，-203ml 的異丙醇，-193ml 的純こ醇，-0. 01體積％的疊氮化鈉，以及20體積％的經緩衝的4%福馬林。備選地，所述溶液可以由90體積％的上述混合物和10體積％的經緩衝的4%福馬林形成，或者由95體積％的上述混合物和5體積％的經緩衝的4%福馬林形成。進ー步地，將會注意到，根據本發明的固定溶液不包含丙酮或酮類化合物，也不包含こ酸。因為這些產品裂解紅細胞，其通過破裂而釋放結合在所述細胞上的血紅蛋白。某些類型的染色，例如帕帕尼古拉烏染色，由於聯合了數種核染料的染色試劑的複雜性和血紅蛋白，因而致使細胞學分析(尤其是細胞核分析)非常困難甚至不可能。同樣地，免疫細胞化學研究經常受到血紅蛋白沉積妨礙。根據本發明，通過帕帕尼古拉烏染色來進行的樣品的以後分析，或者在本文所描述的並且不包含丙酮或酮類化合物也不包含こ酸的固定溶液中進行固定的取樣物的免疫細胞化學研究，得到了改善。因此，上面所描述的固定溶液使得能夠極好地保持具核細胞和紅細胞的完整性以為了其分 析。
權利要求
1.用於在體外保存包含具核細胞和紅細胞的細胞學樣品的固定溶液，其包含醇以用於固定所述細胞，生理鹽水以便避免在細胞壁處的滲透壓休克，福馬林和聚こニ醇以用於保持在所述溶液中進彳丁固定的具核細胞和紅細胞的大小和完整性；所述固定溶液的特徵在幹，不包含丙酮或酮類化合物，也不包含こ酸，以便保護紅細胞的完整性。
2.根據權利要求I的固定溶液，其特徵在於，所述醇為こ醇或異丙醇。
3.根據權利要求I的固定溶液，其特徵在於，所述醇為こ醇和異丙醇的混合物。
4.根據權利要求I至3中任ー項的固定溶液，其特徵在於，醇的量大致小於該固定溶液的45體積％。
5.根據權利要求I至4中任ー項的固定溶液，其特徵在於，福馬林的量大致為該固定溶液的大約0. 2-1體積％。
6.根據權利要求I至5中任ー項的固定溶液，其特徵在於，它包含保證該固定溶液的PH大致為6. 4-7.4的緩衝液。
7.根據權利要求3至6中任ー項的固定溶液，其特徵在於，它包含80體積％至95體積％的 -590ml的生理鹽水， -IOmi 的 peg (CarbowaX )， -203ml的異丙醇， -193ml的純こ醇， -0. 01體積％的疊氮化鈉， 以及20體積％至5體積％的經緩衝的4%福馬林。
全文摘要
該固定溶液用於在體外保存包含具核細胞和紅細胞的細胞學樣品，並且包含醇以用於固定所述細胞。它包含生理鹽水以便避免在細胞壁處的滲透壓休克，福馬林和聚乙二醇以用於保持在所述溶液中進行固定的具核細胞和紅細胞的大小和完整性。該溶液不包含丙酮或酮類化合物，也不包含乙酸。
文檔編號A01N1/02GK102791124SQ201180013370
公開日2012年11月21日 申請日期2011年1月20日 優先權日2010年1月27日
發明者E·佩爾蒂埃 申請人:諾瓦賽特公司