栽培菊苣提取物及其應用的製作方法
2023-10-23 05:14:47 2
專利名稱：栽培菊苣提取物及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及天然植物的提取，特別是栽培菊苣提取物，該提取物具有天然抗氧化活性，可以製成抗氧化劑，用於防止食品氧化，預防疾病，提高機體免疫力，以及為延年益壽 的保健品、藥品、化妝品的添加劑。
背景技術：
氧自由基不僅能破壞富含油脂的食品，還會侵害生物體內許多重要的生物分子， 如細胞膜、蛋白質和DNA，造成細胞和組織的損傷。因此清除氧自由基成為保存食物和預防 人類疾病的重要防治手段。目前的抗氧化劑多以人工合成為主，因其毒性作用而在使用上 受到很大程度的限制。很多蔬菜和水果中都含有許多抗氧化的活性成分，它們能夠清除自 由基、淬滅單線態氧或者螯合金屬離子，這些作用不僅體現了這些蔬菜水果的營養價值，還 提示它們可開發成為抗氧化劑的潛力。栽培菊苣(Cichorium endivia L.)又稱苦苣，或苦菊，多作為沙拉輔料或蔬菜食 用，我國目前也有了人工引種栽培。苦菊具有抗菌、解熱、消炎、明目等功效，但至今未見苦 菊有效成分提取工藝及其相關生物學特性檢測的研究報導。
發明內容
本研究的目的是提供一種低成本、適合於產業化開發的、從苦菊中提取抗氧化活 性物質的方法本發明是通過以下技術方案來實現的(1)將栽培菊苣於陰涼處晾乾，粉碎後，加入濃度為50 100%的乙醇溶液進行提 取，提取比例1 5 1 30，提取時間1 2h，重複浸提4次，過濾。(2)提取液濃縮後，混懸於30 95%乙醇溶液中，用石油醚萃取4次(石油醚與 混懸液的比例是1 1 1 5)。(3)將石油醚萃取後的水層揮幹至無醇味，加水混懸，用乙酸乙酯萃取3次(乙酸 乙酯與混懸液的比例是1 1 1 5)。(4)萃取後乙酸乙酯部位經濃縮，真空乾燥得到提取物。本發明栽培菊苣提取義物(KJ-E)具有抗氧化活性的特點，可以作為食品抗氧化 劑應用於食品的抗氧化作用，也可用於防治疾病，提高機體免疫力，以及作為延年益壽的保 健品、藥品、化妝品的添加劑。該植物資源豐富，提取簡便。
具體實施例方式1栽培菊苣提取物的製備本發明通過以下實施例子進一步詳述，但本實施例子所屬的技術內容是說明性 的，而不是限定性的，不應以此來局限本發明的保護範圍。本發明所涉及的從栽培菊苣提取抗氧化活性物質的方法步驟如下
購自北京新發地菜市場的栽培菊苣，將乾燥全草5. 8kg於95%乙醇回流提取三次 (80LX 2h、70LX lh、68LX lh)，過濾，合併濾液，減壓濃縮，所得浸膏混懸於70%乙醇溶液中 (總體積3. 5L)，石油醚萃取四次(2L，1. 5L，1. 5L，1. 5L)，醇層減壓濃縮至無醇味，加水混懸 約2. 3L，乙酸乙酯萃取三次(1. 5L，1. 2L，1. 2L)，減壓濃縮後揮幹溶劑，真空乾燥。2栽培菊苣的抗氧化活性測定結果將KJ-E用二甲基亞碸(DMS0)溶解配製成一定濃度的溶液，以Trolox(水溶性的 維生素E)和Vc(維生素C)為陽性對照，進行DPPH自由基清除試驗、0RAC抗氧化能力測試、 福淋酚還原能力測試和紅細胞溶血試驗。實驗方法如下(1) DPPH自由基清除試驗清除DPPH自由基能力測試的反應體系在96孔板中進行，每孔加入一定濃度的苦 菊提取液或陽性對照藥20 u 1，然後迅速加入終濃度為150 u mol L—1的DPPH (溶於無水 乙醇)180 u 1，震蕩混勻後採用酶標儀於517nm波長處檢測0D值，同時以20 yl DMS0代替 測試液作為空白對照。經過多個時間點的檢測，以測試液的0D值不再發生改變作為最終測 量值。抗自由基活性以測試液達到50% DPPH 清除率時的濃度(EC5Q)進行表達，DPPH 清 除率公式為 DPPH 清除率=(l-0Di/0Df) X 100%其中ODi指加入測試液時DPPH 溶液的0D值，ODf為空白對照的DPPH 溶液的 0D值；根據測試液不同濃度的清除率作曲線算出EC5(i。(2) 0RAC抗氧化能力測試配製75mM磷酸鉀緩衝液，調pH值至7. 4。使用磷酸鉀緩衝液配製螢光素鈉溶液 (終濃度為61.2nM)和2，2-偶氮-雙-(2-脒基丙烷)氯化二氫(AAPH)溶液(終濃度為 19. ImM)，並用磷酸鉀緩衝液稀釋樣品和陽性對照藥成一定濃度。反應體系在螢光酶標板中 進行。具體操作步驟參照表1 表1 0RAC抗氧化能力測試操作步驟(單位P L)
『―…~—..................................聖百雨 L一一AAPH(-)…—...........................AAPHCO———一———i 麗——一一一L
測試液__
磷酸鉀緩衝液 120100
螢光素鈉 _100
置螢光酶標儀中，37°C孵育5min
AAPH
80
20 100
80
20
100
迅速混勻，在激發波長485nm，發射波長538nm，37°C環境中每隔lmin檢測1
次OD值，至螢光衰減至基線 實驗所得的各個微孔的螢光強度數據通過軟體輸出到Excel表格中，進行下一步 的處理。各個微孔不同時間點的絕對螢光強度數據與其初始時間的螢光強度相比，折算成相對螢光強度f，以相對螢光強度採用近似積分法計算螢光衰退曲線下面積(AUC)，其公式 為AUC = 0. 5 X [2 X (^+^+― +fn_!+fn) -f0-fn] X A t其中fn表示第n個測定點的相對螢光強度，A t是相鄰兩個時間點之間的時間間隔。通過時間-相對螢光強度作圖，抗氧化劑作用下的螢光衰退曲線下面積與無抗氧 化劑存在時自由基作用的螢光衰退曲線下面積之差，即抗氧化劑的氧化自由基消除能力 0RAC值，義稱為抗氧化劑的抗氧化能力指數，是通過螢光衰退曲線下的保護面積與標準抗 氧化物質(Trolox)的保護面積相比得出。0RAC值以trolox當量(umol Trolox當量/mg) 表達。(3)福淋酚還原能力測試反應體系在96孔板和酶標儀進行檢測。方法如下溶於DMS0的藥物組分、單 體和陽性藥分別稀釋為2g/L。以上試劑溶液分別取10 y L溶於600 u L的蒸餾水，混勻， 在96孔板中每孔加150 iiL，然後依次加入福淋酚試劑12. 5iiL，蒸餾水50iiL和1M的 Na2C0337.5 iiL。置於37°C烘箱中2h，使用酶標儀于波長725nm處，測定0D值。結果以沒食 子酸當量(Pmol沒食子酸當量/mg)表達。操作步驟參照表2 表2福淋酚還原能力實驗操作步驟 (4)紅細胞溶血試驗從家兔耳中央動脈取血約5 10ml，放入有玻璃珠的三角瓶中振搖10分鐘，再加 PBS，搖勻後將混懸液以2500rpm離心5min，棄上清，反覆洗紅L細胞3 4次，直至上清液 無色透明。將所得紅細胞按其容積用PBS配成2%紅細胞混懸液，供試驗用。製備2%紅細 胞懸液，加入樣品37°C孵育30min，然後加入50mM的自由基引發劑2，2-偶氮-雙_(2_脒 基丙烷)氯化二氫仏六？田力？！孵育處。AAPH能引起紅細胞膜磷脂發生過氧化反應，導致 紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白。對紅細胞懸液行4000rpm離心，取上清，使用酶標儀於545nm 波長下測定0D值。紅細胞溶血率(％ ) = A/BX100%,A 試樣體系的0D值，B 完全溶血0D值以上實驗結果參照表3和4。
表3樣品的清除DPPH自由基、ORAC抗氧化試驗和福淋酚還原能力測試 以上結果顯示，栽培菊苣提取物KJ-E具有一定的清除自由基、抗氧化和還原能 力，活性比維生素C強，紅細胞溶血試驗提示KJ-E在細胞水平上也具有一定的抗氧化能力。
權利要求
一種栽培菊苣提取物在食品、藥品、化妝品及保健品中的應用，其特徵在於其提取方法的步驟如下(1)將栽培菊苣於陰涼處晾乾，粉碎後，加入濃度為20～100％的乙醇溶液進行提取，提取比例1∶5～1∶30，提取1～4h，重複浸提4次，過濾。(2)提取液濃縮後，混懸於30～95％乙醇溶液中，用石油醚萃取1～6次(石油醚與混懸液的比例是1∶1～1∶10)。(3)將石油醚萃取後的水層揮幹至無醇味，加水混懸，用乙酸乙酯萃取1～4次(乙酸乙酯與混懸液的比例是1∶1～1∶10)。(4)萃取後乙酸乙酯部位經濃縮，真空乾燥，得到提取物。
2.權利要求1所述的栽培菊苣提取物作為天然食品抗氧化劑在製備食品、藥品、化妝 品及保健品中的應用，以及經作為清除人體自由基、抗衰老的食品、藥品、化妝品及保健品 中的應用。
全文摘要
本發明涉及天然植物的提取，特別是栽培菊苣提取物。栽培菊苣(Cichorium endivia L.)經過乙醇提取、石油醚和乙酸乙酯萃取純化、濃縮乾燥而成，最終得到具有很強抗氧化活性的物質，屬於天然產物提取領域。該提取物經ORAC抗氧化能力、清除DPPH自由基能力和福淋酚還原能力測試顯示，其抗氧化活性比維生素C強，同時也能有效抑制紅細胞溶血。本發明採用栽培菊苣為原材料製備強抗氧化活性物質，工藝和設備簡單，投資較少，適合大規模生產，適用於醫藥及食品添加劑、保健品、化妝品等行業。
文檔編號A23L1/30GK101869299SQ20101020959
公開日2010年10月27日 申請日期2010年6月25日 優先權日2010年6月25日
發明者王愛平, 王英明, 秦海林, 陳超傑, 靳洪濤, 魏金鋒 申請人:王愛平;秦海林;北京貴千金醫藥科技有限公司