肺炎衣原體抗體檢測試劑盒及其製備方法
2023-10-23 12:31:27
專利名稱：肺炎衣原體抗體檢測試劑盒及其製備方法
技術領域：
本發明涉及一種肺炎衣原體抗體檢測試劑盒及其製備方法，屬於生物技術領域。
背景技術：
肺炎衣原體(Chlamydia pneumonia)，又稱為TWAR組衣原體，為專性細胞內寄生的微生物。該衣原體主要寄生於人類，無動物儲存宿主，屬嚴格的人類病原體，目前只有一種血清型。肺炎衣原體傳染途徑是呼吸道分泌物的人與人的傳播、其擴散較為緩慢。潛伏期平均30d左右。
肺炎衣原體感染是全世界各地廣泛存在、高度流行的常見病。四季均可流行，重複感染較常見，主要引起急性呼吸道感染。目前，肺炎衣原體感染約佔社區獲得性肺炎的10％。肺炎衣原體感染的臨床表現輕重不一，以肺炎為主，無特徵性，通常症狀較輕，有發熱、咳嗽、寒戰、胸痛和肌痛等，可伴隨肺外表現，如腦炎、吉蘭一巴雷症候群等。除此之外，肺炎衣原體感染可引起中耳炎、鼻竇炎、扁桃體炎、咽炎、喉炎、支氣管炎、肺炎等疾病。
肺炎衣原體感染的診斷方法通常有細胞培養分離技術、血清微量免疫螢光抗體技術(MIF)、直接免疫螢光試驗(DIF)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，其中細胞培養分離技術操作繁瑣、培養時間長、設備要求高並且技術難度大，一般實驗室難以具備；血清微量免疫螢光抗體技術(MIF)能檢測出特異性抗體，但要求讀片人受過專業訓練並且該技術很難標準化，除此之外，由於病原體從進入機體進行複製和抗原刺激產生抗體需要一段較長的窗口期(初次感染一般需要3周)，時間跨度長，不能滿足早期病原體確診的需要，不利於病人的早期診斷和治療；直接免疫螢光試驗(DIF)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測標本中的衣原體兩者均需一些大型的儀器設備，操作步驟繁瑣，使用不方便。
發明內容
本發明要解決的問題是針對現有技術的不足，提供一種適用於臨床輔助診斷和鑑別的肺炎衣原體抗體檢測試劑盒及其製備方法，該試劑盒具有結構簡單、使用便捷、檢測速度快的優點。
為解決以上問題，本發明的技術方案如下肺炎衣原體抗體檢測試劑盒，其特徵在於所述試劑盒包括 檢測盒，包括檢測盒盒體和盒蓋，盒蓋的內側設有硝酸纖維素膜，與硝酸纖維素膜位置對應的盒蓋上設有反應孔，檢測盒盒體內設有吸水墊，硝酸纖維素膜上設有有檢測點和質控點； 金標工作液瓶，盛有金標工作液，該金標工作液由金標濃縮液與稀釋液混合而成；和 洗滌液瓶，盛有洗滌液，該洗滌液包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸； 其中，檢測點包被有肺炎衣原體抗原，質控點包被有羊抗鼠抗體。
作為上述技術方案的進一步改進 所述金標濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶15-30。
所述金標濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶20。
所述製備方法包括檢測盒、金標工作液和洗滌液的製備； 其中，金標工作液的製備包括以下步驟 a、製備金標濃縮液 取1-4％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.5-1％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100μl，得到混合溶液； 然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用； b、製備稀釋液 將121.1-363.3mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.5-2mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其pH調節至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按比例混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶內。
所述洗滌液的製備包括以下步驟 將121.1-242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.1-1mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調節為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2～8℃下保存。
所述檢測盒的製備包括以下步驟 首先在硝酸纖維素膜的檢測點包被肺炎衣原體抗原，在質控點包被羊抗鼠抗體； 然後將盒蓋、硝酸纖維素膜、吸水墊和檢測盒盒體按照從上而下的順序組裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40％的環境下乾燥2小時； 最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋內並封口。
步驟b中，三羥甲基氨基甲烷的用量為242.2mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為1mg。
所述三羥甲基氨基甲烷的用量為121.1mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為0.5mg。
本發明採用以上技術方案，與現有技術相比，具有以下優點由檢測盒、金標工作液瓶和洗滌液瓶組成，結構簡單，只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷肺炎衣原體特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
下面結合附圖和實施例對本發明作進一步說明
附圖1為本發明實施例中試劑盒的結構示意圖； 附圖2為本發明實施例中檢測盒的結構示意圖； 附圖3為附圖2中A-A向的剖視圖。
圖中， 1-金標工作液瓶，2-洗滌液瓶，3-盒蓋，4-硝酸纖維素膜，5-吸水墊，6-檢測盒盒體，7-檢測點，8-質控點，9-反應孔，10-鋁箔袋。
具體實施例 實施例1，如圖1所示，肺炎衣原體抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。
如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有肺炎衣原體抗原，質控點8包被有羊抗鼠抗體。
金標工作液瓶1內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配製獲得的。
該試劑盒通過以下步驟製備 (一)檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被肺炎衣原體抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體； 然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40％的環境下乾燥2小時； 最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口； (二)金標工作液的製備 a、製備金標濃縮液 取1％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.5％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100μl，得到混合溶液； 然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用； b、製備稀釋液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1mg的氯化鈉和0.5mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其pH調節至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按15∶1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶1內； (三)製備洗滌液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1mg的氯化鈉和0.1mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調節為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2～8℃下保存； (四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法 1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢測 a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、滴加1滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、滴加150μl待測血清於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。
3、結果判斷 陽性若被測標本中含有肺炎衣原體抗體，標本中的Cpn特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相Cpn抗原發生特異性結合形成複合物，而其他無關物質則被濾過，再加上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有肺炎衣原體抗體，為陽性結果。
陰性若被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆抗體與包被的Cpn抗原無法形成間接抗原-抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記。同時，金標單克隆抗體與質控點上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，為陰性結果。
無效反應後，若質控點8不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷肺炎衣原體特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
實施例2，如圖1所示，肺炎衣原體抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。
如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有肺炎衣原體抗原，質控點8包被有羊抗鼠抗體。
金標工作液瓶1內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配製獲得的。
該試劑盒通過以下步驟製備 (一)檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被肺炎衣原體抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體； 然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40％的環境下乾燥2小時； 最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口； (二)金標工作液的製備 a、製備金標濃縮液 取2％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.7％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100μl，得到混合溶液； 然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用； b、製備稀釋液 將242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化鈉和1.0mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其pH調節至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按20∶1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶1內； (三)製備洗滌液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化鈉和0.5mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調節為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2～8℃下保存； (四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法 1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢測 a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、滴加1滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、滴加150μl待測血清於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。
3、結果判斷 陽性若被測標本中含有肺炎衣原體抗體，標本中的Cpn特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相Cpn抗原發生特異性結合形成複合物，而其他無關物質則被濾過，再加上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有肺炎衣原體抗體，為陽性結果。
陰性若被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆抗體與包被的Cpn抗原無法形成間接抗原-抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記。同時，金標單克隆抗體與質控點上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，為陰性結果。
無效反應後，若質控點8不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷肺炎衣原體特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
實施例3，如圖1所示，肺炎衣原體抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。
如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有肺炎衣原體抗原，質控點8包被有羊抗鼠抗體。
金標工作液瓶1內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配製獲得的。
該試劑盒通過以下步驟製備 (一)檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被肺炎衣原體抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體； 然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40％的環境下乾燥2小時； 最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口； (二)金標工作液的製備 a、製備金標濃縮液 取3％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.8％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100μl，得到混合溶液； 然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用； b、製備稀釋液 將363.3mg的三羥甲基氨基甲烷、0.5mg的氯化鈉和1.5mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其pH調節至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按25∶1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶1內； (三)製備洗滌液 將242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.5mg的氯化鈉和0.7mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調節為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2～8℃下保存； (四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法 1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢測 a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、滴加1滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、滴加150μl待測血清於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。
3、結果判斷 陽性若被測標本中含有肺炎衣原體抗體，標本中的Cpn特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相Cpn抗原發生特異性結合形成複合物，而其他無關物質則被濾過，再加上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有肺炎衣原體抗體，為陽性結果。
陰性若被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆抗體與包被的Cpn抗原無法形成間接抗原-抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記。同時，金標單克隆抗體與質控點上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，為陰性結果。
無效反應後，若質控點8不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷肺炎衣原體特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
實施例4，如圖1所示，肺炎衣原體抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、金標工作液瓶1以及洗滌液瓶2，檢測盒放置在鋁箔袋10內。
如圖2、圖3所示，檢測盒包括檢測盒盒體6和盒蓋3，盒蓋3的內側設有硝酸纖維素膜4，與硝酸纖維素膜4位置對應的盒蓋3上設有反應孔9，檢測盒盒體6內設有吸水墊5，硝酸纖維素膜4上設有檢測點7和質控點8，檢測點7包被有肺炎衣原體抗原，質控點8包被有羊抗鼠抗體。
金標工作液瓶1內盛有金標工作液，該金標工作液是由金標濃縮液經稀釋液稀釋所獲得的。
洗滌液瓶2內盛有洗滌液，該洗滌液是由三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸配製獲得的。
該試劑盒通過以下步驟製備 (一)檢測盒的製備 首先在硝酸纖維素膜的檢測點7包被肺炎衣原體抗原，在質控點8包被羊抗鼠抗體； 然後將盒蓋3、硝酸纖維素膜4、吸水墊5和檢測盒盒體6按照從上而下的順序組裝並扣緊，組裝成檢測盒； 將檢測盒放置在溼度小於40％的環境下乾燥2小時； 最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋10內並封口； (二)金標工作液的製備 a、製備金標濃縮液 取4％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入1.0％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫； 向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100μl，得到混合溶液； 然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用； b、製備稀釋液 將242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、1mg的氯化鈉和2.0mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其pH調節至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用； c、將稀釋液與金標濃縮液按30∶1的體積比混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶1內； (三)製備洗滌液 將121.1mg的三羥甲基氨基甲烷、1mg的氯化鈉和1mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調節為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2～8℃下保存； (四)在金標工作液瓶1和洗滌液瓶2上貼好標籤後與檢測盒一起組裝成試劑盒。
以上試劑盒的使用、檢測方法 1、樣本收集 將靜脈血置於乾淨、未加抗凝劑的容器內，靜置使血自然收縮，離心取血清檢測。
2、檢測 a、取出試劑盒，室溫平衡20～30分鐘； b、滴加1滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體將硝酸纖維膜4完全溼潤； c、滴加150μl待測血清於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； d、滴加3滴金標工作液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入； e、滴加3滴洗滌液於硝酸纖維素膜4上，待液體充分吸入後於3分鐘內觀察結果。
3、結果判斷 陽性若被測標本中含有肺炎衣原體抗體，標本中的Cpn特異性抗體便與硝酸纖維素膜4上的固相Cpn抗原發生特異性結合形成複合物，而其他無關物質則被濾過，再加上金標鼠抗人單克隆抗體，濾過時金標記單抗便與複合物結合，即可在檢測點7觀察到紅色反應標記。同時，金標鼠抗人單克隆抗體與質控點8上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7有紅色反應標記出現，這表明被測標本中含有肺炎衣原體抗體，為陽性結果。
陰性若被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，反應體系中的金標鼠抗人單克隆抗體與包被的Cpn抗原無法形成間接抗原-抗體反應，即在檢測點7無紅色反應標記。同時，金標單克隆抗體與質控點上包被的羊抗鼠抗體結合，在質控點8形成紅色反應標記。檢測點7無紅色反應標記出現，這表明被測標本中不含有肺炎衣原體抗體，為陰性結果。
無效反應後，若質控點8不顯色，表明操作失誤或試劑失效。
使用本發明實施例的試劑盒對1000例測試標本進行檢測，結果如下表
從以上檢測方法及檢測結果可以看出，本發明的試劑盒只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷肺炎衣原體特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，符合率高，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
權利要求
1.肺炎衣原體抗體檢測試劑盒，其特徵在於所述試劑盒包括
檢測盒，包括檢測盒盒體(6)和盒蓋(3)，盒蓋(3)的內側設有硝酸纖維素膜(4)，與硝酸纖維素膜(4)位置對應的盒蓋(3)上設有反應孔(9)，檢測盒盒體(6)內設有吸水墊(5)，硝酸纖維素膜(4)上設有有檢測點(7)和質控點(8)；
金標工作液瓶(1)，盛有金標工作液，該金標工作液由金標濃縮液與稀釋液混合而成；和
洗滌液瓶(2)，盛有洗滌液，該洗滌液包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清白蛋白和鹽酸；
其中，檢測點(7)包被有肺炎衣原體抗原，質控點(8)包被有羊抗鼠抗體。
2.如權利要求1所述的肺炎衣原體抗體檢測試劑盒其特徵在於所述金標濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶15-30。
3.如權利要求2所述的肺炎衣原體抗體檢測試劑盒其特徵在於所述金標濃縮液與稀釋液的混合體積比為1∶20。
4.肺炎衣原體抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所述製備方法包括檢測盒、金標工作液和洗滌液的製備；
其中，金標工作液的製備包括以下步驟
a、製備金標濃縮液
取1-4％的氯金酸水溶液100ml，加熱至沸騰，加入0.5-1％檸檬酸三鈉溶液0.8ml，迅速混勻，待溶液顏色由淡黃→藍色→紫色→完全透明的酒紅色，繼續煮沸10分鐘，停止加熱，冷卻至室溫；
向得到的溶液中加入1mg/ml的抗人IgG單克隆抗體溶液100μl，得到混合溶液；
然後將混合溶液進行離心處理，棄去上清液，得到下層金標濃縮液，備用；
b、製備稀釋液
將121.1-363.3mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.5-2mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，最後用鹽酸將其pH調節至7.4，得到稀釋液，在2～8℃下保存，備用；
c、將稀釋液與金標濃縮液按比例混合，得到金標工作液，並放置在金標工作液瓶(1)內。
5.如權利要求4所述的肺炎衣原體抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所述洗滌液的製備包括以下步驟
將121.1-242.2mg的三羥甲基氨基甲烷、0.1-1mg的氯化鈉和0.1-1mg的牛血清白蛋白置於容量瓶內，加入雙蒸水，輕搖使之完全溶解，然後繼續加入雙蒸水至100mL，再用鹽酸將其pH調節為7.4，得到洗滌液，放在洗滌液瓶內，置於2～8℃下保存。
6.如權利要求4所述的肺炎衣原體抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所述檢測盒的製備包括以下步驟
首先在硝酸纖維素膜的檢測點(7)包被肺炎衣原體抗原，在質控點(8)包被羊抗鼠抗體；
然後將盒蓋(3)、硝酸纖維素膜(4)、吸水墊(5)和檢測盒盒體(6)按照從上而下的順序組裝並扣緊，組裝成檢測盒；
將檢測盒放置在溼度小於40％的環境下乾燥2小時；
最後將乾燥後的檢測盒放置在鋁箔袋內並封口。
7.如權利要求4所述的肺炎衣原體抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於步驟b中，三羥甲基氨基甲烷的用量為242.2mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為1mg。
8.如權利要求5所述的肺炎衣原體抗體檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於所述三羥甲基氨基甲烷的用量為121.1mg，氯化鈉的用量為0.9mg，牛血清白蛋白的用量為0.5mg。
全文摘要
本發明涉及一種肺炎衣原體抗體檢測試劑盒，包括檢測盒、盛有金標工作液的金標工作液瓶和盛有洗滌液的洗滌液瓶，檢測盒包括檢測盒盒體和盒蓋，盒蓋的內側設有硝酸纖維素膜，與硝酸纖維素膜位置對應的盒蓋上設有反應孔，檢測盒盒體內設有吸水墊，硝酸纖維素膜上設有有檢測點和質控點，檢測點包被有肺炎衣原體抗原，質控點包被有羊抗鼠抗體，只需將待測血清滴入檢測盒的硝酸纖維素膜上，就能快速診斷肺炎衣原體特異性抗體，使用簡單便捷、檢測速度快，臨床檢驗不需任何儀器，避免了實驗過程中各種因素對結果的影響以及減輕了操作人員的勞動強度。
文檔編號G01N33/569GK101762696SQ20101001133
公開日2010年6月30日 申請日期2010年1月11日 優先權日2010年1月11日
發明者楊致亭, 劉安明, 傅愛華, 劉玉華, 祝希梅 申請人:楊致亭