一種幹細胞培養基及培養方法與流程

2023-10-20 10:41:57 2

本發明涉及細胞培養技術領域，具體為一種幹細胞培養基及培養方法。

背景技術：

體外擴增人全能幹細胞的方法主要有兩種：滋養層培養和無滋養層培養。一般在培養基中加入胎牛血清，用於支持細胞生長，執行細胞的功能(主要是物質傳送，比如脂肪酸，金屬離子轉運等)。但血清非常昂貴，而且化學成分不確定，批次質量也存在很大的不穩定性，如果將全能幹細胞用於人體再生醫學中，培養mefs的培養基中補加的胎牛血清會使hesc和hipsc暴露於動物源細胞的風險之中，且死亡的mefs的dna

會進入上層全能幹細胞中，造成基因汙染。業界一直期望能夠有一種無動物源性成分、化學成分確定的幹細胞培養基。本發明旨在提供一種化學成分確定的幹細胞培養基

以往、幹細胞的培養使用含有血清的培養基進行。例如，胎牛血清(fbs)等作為對於細胞增殖重要的添加物在細胞培養中廣泛使用。但是將培養後的幹細胞以醫療目的使用時，異種來源成分有成為血液媒介病原菌的感染源或異種抗原的可能性。另外由血清的批間差而也有培養結果發生偏差的可能性。因此，近年，使用化學組成明了的培養基培養幹細胞成為主流，進行無血清培養基的開發。

本發明與生物細菌培養技術有關，特別是關於一種幹細胞培養基及培養方法。

技術實現要素：

本發明的目的在於提供一種幹細胞分化能力強，可分化成多種功能細胞，培養基成分明確，品質穩定，使得培養的幹細胞在移植後不容易產生人體排斥反應的一種幹細胞培養基及培養方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種幹細胞培養基,包括培養皿本體和mef培養基，所述培養皿本體上設有器皿槽，所述器皿槽的上方設有上蓋，所述器皿槽的內部設有mef培養基。

優選的，所述mef培養基內包含10％的fbs、1000μ/ml青黴素1000g/ml鏈黴素，所述mef培養基內還包含維生素和營養元素、含有脂肪酸負載量降低的白蛋白以及各種胺基酸。

優選的，所述維生素包括維生素b70.000005-0.000025g/l，維生素c0.002-0.004g/l，維生素b50.002-0.006g/l。

優選的，所述mef培養基中的胺基酸包括非必須胺基酸0.1ml、穀氨醯胺2ml、丙酮酸鈉1ml。

優選的，一種幹細胞培養基的培養方法，包括以下步驟：

a、在37℃的水浴鍋裡快速融化一管氮凍存的胚胎成纖維細胞；

b、把融化好的細胞懸浮液加到裝有幾毫升預熱好的mef培養基的無菌離心管中，輕輕混勻後，1000g，5min離心收集細胞；

c、洗掉上清液中的dmso，用10ml預熱的mef培養基重懸細胞後，把融加到一個10cm的細胞培養皿中，放入37℃，含有co2的加溼培養箱中培養；

d、大約每4天進行一次的培養液的更換，細胞就可以基本長滿整個培養皿。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

本發明能夠快速擴增幹細胞同時又不影響幹細胞的潛能，而且能用於培養多種組織的幹細胞，具有極佳的適用性，所培養的幹細胞分化能力強，可分化成多種功能細胞，培養基成分明確，品質穩定，使得培養的幹細胞在移植後不容易產生人體排斥反應。

附圖說明

圖1為本發明的培養皿本體整體結構示意圖。

圖中：1、培養皿本體；2、上蓋；3、器皿槽；4、mef培養基。

具體實施方式

下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範圍。

請參閱圖1，本發明提供一種技術方案：一種幹細胞培養基及培養方法,包括培養皿本體1、mef培養基4，培養皿本體1上設有器皿槽3，器皿槽3的上方設有上蓋2，器皿槽3的內部設有mef培養基4。

mef培養基4內包含10％的fbs、1000μ/ml青黴素1000g/ml鏈黴素，mef培養基4內還包含維生素和營養元素、含有脂肪酸負載量降低的白蛋白以及各種胺基酸。

維生素包括維生素b70.000005-0.000025g/l，維生素c0.002-0.004g/l，維生素b50.002-0.006g/l。

mef培養基4在進行幹細胞培養的時候溫度控制在37℃,5％和95％溼度的培養條件，mef培養基4中的胺基酸包括非必須胺基酸0.1ml、穀氨醯胺2ml、丙酮酸鈉1ml。

一種幹細胞培養基的培養方法，包括以下步驟：

a、在37℃的水浴鍋裡快速融化一管氮凍存的胚胎成纖維細胞；

b、把融化好的細胞懸浮液加到裝有幾毫升預熱好的mef培養基的無菌離心管中，輕輕混勻後，1000g，5min離心收集細胞；

c、洗掉上清液中的dmso，用10ml預熱的mef培養基重懸細胞後，把融加到一個10cm的細胞培養皿中，放入37℃，含有co2的加溼培養箱中培養；

d、大約每4天進行一次的培養液的更換，細胞就可以基本長滿整個培養皿。

本發明能夠快速擴增幹細胞同時又不影響幹細胞的潛能，而且能用於培養多種組織的幹細胞，具有極佳的適用性，所培養的幹細胞分化能力強，可分化成多種功能細胞，培養基成分明確，品質穩定，使得培養的幹細胞在移植後不容易產生人體排斥反應。

儘管已經示出和描述了本發明的實施例，對於本領域的普通技術人員而言，可以理解在不脫離本發明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的範圍由所附權利要求及其等同物限定。