一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌Lactobacillusfermentumstrainsuo及...的製作方法

2023-10-04 11:08:04

一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌Lactobacillus fermentum strain suo及 ...的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌(Lactobacillus fermentum suo)保藏編號為CCTCC NO：M2013511及其用途，該菌株的耐酸性較強，在pH3.0的人工胃液下3h後存活率達到了92.46±4.06％，在1.0％濃度膽鹽下可以緩慢生長，生長效率達到無膽鹽培養的17.36±1.19％，Lactobacillus fermentum suo細胞的疏水性也達到了68.44±2.48％，在人的腸道內正常生長。Lactobacillus fermentum suo能夠減緩便秘引起的小鼠體重減輕趨勢，加快排黑便時間，提高小腸推進率，不同程度的增加血清的MTL、Gas、ET、AchE、SP和VIP因子水平，降低SS因子，增加攝食量和飲水量，降低排便量、排便顆粒數和糞便含水量下降的趨勢，與便秘藥物起到相似的作用，表現出一定的便秘預防效果。
CCTCC NO：M2013511
2013.10.25
【專利說明】一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌 Lactobacillus fermentum strain suo 及其用途

【技術領域】
[0001] 本發明涉及微生物【技術領域】，尤其涉及一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳 桿菌 Lactobacillus fermentum strain suo 及其用途。

【背景技術】
[0002] 乳桿菌與人類生活關係密切，是廣泛應用於食品發酵、工業乳酸發酵及醫療保健 領域中的有益微生物之一。現已認識的乳桿菌屬和雙歧桿菌屬中的許多種都具有特定的優 良性質和遺傳性狀，表現出極強的益生菌特性。乳桿菌不僅能夠提高食品營養價值，改善食 品風味，延長保存時間，還可以改善食品的功能性質。它能夠通過分解食物中的蛋白質、糖 類、合成維生素，提高食物的消化率和生物價，促進消化吸收。還能夠減少人體膽固醇含量、 增強免疫功能、抗變異原性、抗腫瘤、抗高血壓等。近年來，乳桿菌以其特殊的生理活性和營 養功能而成為益生菌的主要來源，正日益引起人們的重視。
[0003] 便秘是非常普遍的一種疾病，在人群中的患病率高達27%，它可以影響各年齡段 的人。習慣性便秘因用力增加腹壓，屏氣使勁排便，是誘發中老年男性高血脂、心腦血管疾 病、動脈硬化、腫瘤等疾病及其併發症的罪魁禍首，從而導致老人心腦血管病變死亡率急劇 增加，出現痔瘡、肛裂等問題，令人痛苦不堪。另外長期便秘，大量便渣會滯留在腸道內發 酵、腐爛，大量毒素和有害菌被腸道反覆吸收，通過血液循環到達人體各部位，成為女性健 康和美麗的罪魁禍首。便秘還會使小孩胃腸道菌群失衡，導致精力不集中、思維遲鈍、營養 不良、心情急躁、消瘦、免疫力下降、易感冒、生長遲緩，如不及時調理，可能造成不可逆的病 變。因便秘發病率高、病因複雜，患者常有許多苦惱，便秘嚴重時會影響生活質量。因此，尋 找一種能夠代替藥物來預防便秘的生物製品有很大的現實意義，微生態療法恰是以一個嶄 新的手段解決了傳統療法存在的多種問題。
[0004] 國內外對乳酸菌的生理功能有大量的研宄報導，但對乳酸菌預防便秘的功能性研 宄報導很少。關於乳酸菌預防便秘的研宄對食品科學、預防醫學和微生態學等許多學科都 有很大價值。發酵乳製品是人們攝入乳酸菌的一條重要渠道，篩選優良的具有預防便秘和 安全的乳酸菌菌株，對於開發功能性乳製品、豐富現有乳製品種類、提高乳品的附加值將具 有重要意義。因此，具有預防便秘的乳酸菌具很大的研宄和應用價值。
[0005] 在目前已經公開的文獻與專利或專利申請中，例如CN101144064A公開了一種具 有抗致突變活性、產胞外多糖的短乳桿菌及其用途，用於發酵食品中以改善食品品質，增 加其營養學功能。CN1796540A公開了具有抗腸道致病菌和抗氧化特性的雙歧桿菌及其用 途，用於製備食品組合物或藥物組合物，殺死或抑制幽門螺旋桿菌或大腸桿菌，治療由其引 起的各種疾病。CN102174450A公開了一種抗幽門螺桿菌感染的植物乳桿菌及其用途，用 於製備藥物組合物、發酵劑、動物飼料添加劑和保健品中來預防或減輕幽門螺桿菌的感染。 CN101144065A公開了一種耐過氧化氫、清除自由基的抗氧化乾酪乳桿菌及其用途，用於發 酵食品及乳品膠囊製品中以開發功能性乳製品、豐富現有乳製品種類、提高乳品的附加值。 但是，這些專利或專利申請沒有完全涉及具有調節腸道運動、預防便秘等性能的微生物。因 此，目前還需要有一種具有調節腸道運動、預防便秘的微生物及其含有它們的食品。


【發明內容】

[0006] 為了解決上述問題，本發明提供了一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌 及其用途，主要提供一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌菌株和提供一種所述發 酵乳桿菌在發酵食品中的用途。
[0007] 本發明提供的一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)於2013年10月25日保藏於中國典型培養物保藏中心（CCTCC)， 該保藏中心的地址位於：中國.武漢.武漢大學，保藏編號為CCTCC NO :M 2013511。
[0008] 從自然發酵犛牛酸乳中篩選出一株發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)，利用形態特徵、培養性狀和生理生化特徵等微生物學特性對該乳酸桿菌 (Lactobacillus fermentum strain suo)鑑定為發酵乳桿菌，該菌株已於2013年10月25 日保藏於中國典型培養物保藏中心（CCTCC)，保藏編號CCTCCNO :M 2013511。
[0009] 所述發酵乳桿菌的形態學特徵具體為：
[0010] 菌體特徵：呈革蘭氏染色陽性，細胞杆狀，菌體約0. 5-1. 0 μ m寬，1. 5-4 μ m長，成 單、成對或者成鏈，不形成芽孢，兩端圓形。
[0011] 菌落特徵：在MRS培養基上形成明顯的菌落，直徑在0.5-2. Omm之間，圓形，邊緣整 齊，乳白色，透明，表面溼潤光滑，不產生色素。
[0012] 所述發酵乳桿菌體內耐受特徵為：
[0013] 發酵乳桿菌的菌株耐酸性較強，在PH3.0的人工胃液下3h後存活率為 92. 46±4. 06 % ;在1.0 %濃度膽鹽下可以緩慢生長，生長效率達到無膽鹽培養的 17. 36±1. 19% ;發酵乳桿菌細胞的疏水性為68. 44±2. 48%。
[0014] 所述發酵乳桿菌來源於傳統發酵食品，屬公認安全（Generally Recognized As Safe，GRAS)菌種，用於發酵食品中。
[0015] 所述發酵食品為含有發酵乳桿菌的乳酸菌奶飲料、乳粉、膠囊製品或發酵乳中的 一種或多種。
[0016] 所述含有發酵乳桿菌的乳酸菌奶飲料是按照下述步驟製備得到的：
[0017] 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度-75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用；
[0018] 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑；
[0019] 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，冷卻到4°C，加入所 述發酵乳桿菌工作發酵劑，使其濃度達到10 6cfu/mL以上，在4°C冷藏保存。
[0020] 所述含有發酵乳桿菌的乳粉是按照下述步驟製備得到的：
[0021] 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用；
[0022] 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑；
[0023] 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，然後冷卻到37°C， 再以原料乳體積的4%接菌量接種所述的發酵乳桿菌工作發酵劑，37°C下發酵16h，得到發 酵乳桿菌發酵乳；所述發酵乳桿菌發酵乳和滅菌後的原料乳按照I : 3(v : V)配比加入， 進行均質，真空濃縮、噴霧乾燥得到含發酵乳桿菌的乳粉。
[0024] 所述含有發酵乳桿菌的膠囊製品是按照下述步驟製備得到的：
[0025] 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用；
[0026] 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑；
[0027] 將原料乳在140°C高溫熱殺菌2s，然後冷卻至37°C，以原料乳體積的4%接菌量接 種所述發酵乳桿菌工作發酵劑，在37°C下發酵16h，得到發酵乳桿菌發酵乳；將所述發酵乳 桿菌發酵乳和滅菌後的原料乳按照以I : 3(V : V))配比加入，均質，真空濃縮、噴霧乾燥 處理後得到乳粉，將得到含有發酵乳桿菌的膠囊製品。
[0028] 所述含有發酵乳桿菌的發酵乳是按照下述步驟製備得到的：
[0029] 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用；
[0030] 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑；
[0031] 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，然後冷卻到37°C， 再按照3-5% (體積）加入發酵乳桿菌工作發酵劑，再加入3-5% (體積）可共生的用於制 備發酵乳製品的發酵劑，混勻後在37°C下混菌發酵至滴定酸度以乳酸計0. 6-0. 7%，然後 冷卻至4°C，再進行冷藏保存得到含有發酵乳桿菌的發酵乳。
[0032] 所述發酵乳桿菌工作發酵劑的製備方法包括：
[0033] 將所述發酵乳桿菌的原始菌種接種於12% (重量）的脫脂乳中，IKTC滅菌 lOmin，在37°C條件下培養14-16h至凝乳，連續培養活化兩代，用作母發酵劑；將所述母發 酵劑按3-5% (體積）接種於滅菌乳中，培養14-16h至凝乳，此時該凝乳中的活菌數約 109cfu/mL，得到工作發酵劑，可以直接將這種工作發酵劑添加到食品中，或者與可共生的 製備發酵乳的商業發酵劑如保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌一起使用製備發酵乳；或
[0034] 將所述發酵乳桿菌的原始菌種接種於MRS液體培養基中，在37°C條件下培養 12-16h進行活化，連續活化兩代，然後將活化培養物按2-4% (體積）接種於MRS培養基中， 培養16-18h，在4°C條件下4000r/min離心15min，去除上清夜，得到細胞沉澱，將沉澱用無 菌脫脂乳製成懸浮液，得到工作發酵劑。
[0035] 所述的加熱殺菌是例如使用上海沃迪自動化裝備股份有限公司銷售的TW10D1000 型管式殺菌機進行的。
[0036] 所述的高溫熱殺菌是例如使用北京勇創嘉業機械設備有限公司銷售的YC-104型 板式超尚溫殺菌機進彳丁的。
[0037] 所述的均質是例如使用常州市均質機械有限公司銷售的GJB500-40小型均質機 進行的。
[0038] 所述的濃縮是例如使用上海偉宙輕工機械有限公司銷售的真空濃縮鍋進行的。
[0039] 所述的噴霧乾燥是例如使用上海沃迪科技有限公司銷售的實驗型噴霧乾燥機進 行的。
[0040] 所述的商品發酵劑優選的是保加利亞乳桿菌或嗜熱鏈球菌。
[0041] 在本發明的意義上，所述的原料乳是一種或多種選自脫脂奶、鮮奶、復原奶的原料 乳。
[0042] 本發明實施例的技術方案帶來的有益效果如下：
[0043] 本發明為一種分離自四川省紅原縣牧民家自然發酵犛牛酸乳中的可調節腸道運 動、預防便秘的發酵乳桿菌和以該菌株為發酵劑或添加的發酵乳、健康食品以及動物保健 製品中的應用，發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)菌株的耐酸性較強， 在PH3.0的人工胃液下3h後存活率達到了 92.46±4.06%，在1.0%濃度膽鹽下可以緩慢 生長，生長效率達到無膽鹽培養的 17. 36±L 19%，Lactobacillus fermentum strain suo 細胞的疏水性也達到了 68. 44±2. 48%。這表明發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)能在人的腸道內正常生長。小鼠體內試驗還表明，發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)能夠減緩便秘引起的小鼠體重減輕趨勢，加快排黑便時間，提高小 腸推進率，不同程度的增加血清的奶1、6&8 31^(^、5?和￥1?因子水平，降低55因子，增 加攝食量和飲水量，降低排便量、排便顆粒數和糞便含水量下降的趨勢，與便秘藥物起到相 似的作用，表現出一定的便秘預防效果。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0044] 為了更清楚的說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例描述中所需要使用 的附圖作簡單的介紹，顯而易見的，下面描述中的附圖僅僅是本發明的一些實施例，對於本 領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的 附圖。
[0045] 圖 1 發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)菌落形態；
[0046] 圖 2 發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)的菌體形態（IOOOx);
[0047] 圖3小鼠體重隨實驗時間的變化；
[0048] 圖4不同組小鼠首次排黑便所需時間；
[0049] 圖5不同組小鼠的小腸總長度；
[0050] 圖6不同組小鼠的小腸推進率；
[0051] 圖7不同組小鼠血清中各因子水平。
[0052] 本發明的發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)於 2013 年 10 月 25日保藏於中國典型培養物保藏中心，該保藏中心的地址位於：中國.武漢.武漢大學，編 號為 CCTCC NO :M 2013511。

【具體實施方式】
[0053] 下面將結合本發明實施例中的附圖，對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完 整的描述，顯然所描述的實施例僅是本發明的一部分實施例，不是全部的實施例，基於本發 明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有付出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實 施例，都屬於本發明保護的範圍。
[0054] 實施例1 :發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)的分離、純化及 初步定。
[0055] 該實施例按照下述步驟進行：
[0056] (I)Lactobacillus fermentum strain suo 的分離、純化。
[0057] 以無菌操作吸取傳統發酵犛牛酸奶樣品500 μ L加入至5mL滅菌生理鹽水混合作 成1 : 10的均勻稀釋液，並繼續作一定比例的稀釋。選擇合適梯度的稀釋液，用無菌槍頭 各吸取100 μ L分別塗布到MRS固體平板培養基中，30°C培養48_72h，觀察記錄菌落形態如 圖1所示。
[0058] 用接種環（或滅菌牙籤）從平板表面及內部挑取不同菌落接種於MRS液體培養基 中，置30°C，300r/min搖床培養24-48h ;重複以上步驟連續活化2代後進行塗片革蘭氏染 色鏡檢如圖2所示。
[0059] 確定為G+菌的繼續活化，直至得到純菌落（鏡檢無雜菌），並進行過氧化氫酶實 驗。將G+和過氧化氫酶陰性的無芽孢桿菌、球菌及鏈球菌均暫定為乳酸菌，並保存，具體操 作參照《微生物學實驗技術》。
[0060] 實驗結果顯示，從紅原安曲地區的十個樣品中共分離出乳酸菌58多株，樣本乳酸 菌活菌數平均在10 8cfu/mL數量級。其中Lactobacillus fermentum strain suo是編號 為54的菌株。
[0061] (2)Lactobacillus fermentum strain suo 的初步鑑定。
[0062] 革蘭氏染色：取典型菌落塗片，進行革蘭氏染色，在微生物顯微鏡油鏡下觀察菌體 形態及其排列方式。挑取視野清晰、形態典型的菌株，進行拍照。過氧化氫酶實驗：挑取固 體培養基上菌落一接種環，置於潔淨試管內，滴加3 %過氧化氫溶液2mL，觀察結果（於半分 鍾內發生氣泡者為陽性，不發生氣泡者為陰性）。
[0063] 結果表明，從樣品中共分離純化出58株乳酸菌，這些菌株均能在含5%。CaC〇j9 MRS平板培養基上生長，並在菌落周圍形成溶鈣圈，革蘭氏染色陽性，過氧化氫酶試驗陰性。
[0064] 實施例 2 :發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)的體外篩選。
[0065] (1)益生菌耐受ρΗ3· 0人工胃液的篩選。
[0066] 人工胃液的配製：NaCl 0.2%、胃蛋白酶0.35%、用IM的HCl調整pH值為3.0後， 在無菌操作臺中用真空泵抽濾除菌後備用。
[0067] 益生菌對人工胃液耐受性的測定：取5mL已經活化好的菌株培養液，在無菌操作 臺中倒入已滅菌IOmL離心管中，經3000r/min離心IOmin收集菌體，加入5mL滅菌生理鹽 水混勾製成菌懸液，取ImL菌懸液與9mL pH3. 0的人工胃液混合，搖勾，置於恆溫振蕩器 中培養（37°C，300r/min)，並分別在Oh和3h取樣，用MRS瓊脂培養基傾注37°C培養48h。 用平板計數法測定活菌數，計算其存活率:存活率（％)= 3h的活菌數/Oh的活菌 數 X100%〇
[0068] (2)益生菌耐受不同濃度膽鹽的測定。
[0069] 選擇在pH3. 0人工胃液中存活率在10%以上的菌種做不同膽鹽濃度下的生長測 試。將活化好的菌種5mL按2%的接種量（100 μ L)用移液槍分別接種於含0.0%牛膽鹽 (即空白）、〇· 3%牛膽鹽、0.5%牛膽鹽、1.0%牛膽鹽（W/V)的MRS-THIO培養基（MRS培養 基中加0. 2%的巰基乙酸鈉）。在恆溫振蕩器中37°C培養24h後，以空白培養基為對照（未 接種的MRS-THIO培養基），分別測定上述不同濃度培養基的OD值，計算菌株對膽鹽的耐受 力。膽鹽耐受力=含膽鹽的培養基的OD值/空白培養基的OD值X 100%。
[0070] (3)菌液濃度調整。
[0071] 選擇在pH3. 0人工胃液中存活率在10%以上、耐膽鹽較強的的菌種，經鏡檢觀察 菌體生長形態良好後進行試驗，將活化好的細菌培養物5mL，在無菌操作臺中倒入已滅菌 10mT,離心管中，以3000r/min離心IOmin收集菌體。以5mL PBS (50mM，pH6. 5)緩衝液洗絛 菌體，3000r/min離心lOmin，重複洗滌兩次。以PBS緩衝液為空白對照，用緩衝液調整受試 菌株菌體濃度，使其在560nm波長下AO值約為1. 00。
[0072] 取4mL調整好濁度的菌液於已滅菌IOmL離心管中，加入0. 8mL二甲苯，對照組不 加二甲苯，振蕩30s，停頓10s，後再振蕩30s，於試管架上靜置5?IOmin分層，取下層水 相，以PBS緩衝液為空白對照，在560nm下測量A值並進行記錄。疏水率=[ (AO-A) / AO] X 100其中AO和A分別是與二甲苯混勻前、後菌液在560nm下測量得到的A值。
[0073] 乳酸菌是正常腸道菌的一部分，作為益生菌的首要條件之一，是能在胃和小腸前 段存活，被篩選的菌株應具有足夠的耐酸性和酸性環境下生長發育的特性。
[0074] Lactobacillus fermentum strain suo 的篩選結果如下表 1 所不：
[0075]

【權利要求】
1. 一種可調節腸道運動、預防便秘的發酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum strain suo)於2013年10月25日保藏於中國典型培養物保藏中心（CCTCC)，保藏編號為CCTCC NO : M 2013511。
2. 如權利要求1所述的發酵乳桿菌，其特徵在於，所述發酵乳桿菌的形態學特徵具體 為： 菌體特徵：呈革蘭氏染色陽性，細胞杆狀，菌體約0. 5-1. 0 y m寬，1. 5-4 y m長，成單、成 對或者成鏈，不形成芽孢，兩端圓形。 菌落特徵：在MRS培養基上形成明顯的菌落，直徑在0. 5-2. 0mm之間，圓形，邊緣整齊， 乳白色，透明，表面溼潤光滑，不產生色素。
3. 如權利要求1所述的發酵乳桿菌，其特徵在於，所述發酵乳桿菌體內耐受特徵為： 發酵乳桿菌的菌株耐酸性較強，在PH3. 0的人工胃液下3h後存活率為92. 46 ±4. 06%; 在1. 0 %濃度膽鹽下可以緩慢生長，生長效率達到無膽鹽培養的17. 36 ±1. 19% ;發酵乳杆 菌細胞的疏水性為68. 44±2. 48%。
4. 如權利要求1所述的發酵乳桿菌，其特徵在於，所述發酵乳桿菌來源於傳統發酵食 品，屬公認安全（Generally Recognized As Safe，GRAS)菌種，用於發酵食品中。
5. 如權利要求4所述的發酵乳桿菌的用途，其特徵在於，所述發酵食品為含有發酵乳 桿菌的乳酸菌奶飲料、乳粉、膠囊製品或發酵乳中的一種或多種。
6. 如權利要求5所述的發酵乳桿菌的用途，其特徵在於，所述含有發酵乳桿菌的乳酸 菌奶飲料是按照下述步驟製備得到的： 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存，或者 在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用； 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑； 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，冷卻到4°C，加入所述發 酵乳桿菌工作發酵劑，使其濃度達到106cfu/mL以上，在4°C冷藏保存； 所述的原料乳是一種或多種選自脫脂奶、鮮奶、復原奶的原料乳。
7. 如權利要求5所述的發酵乳桿菌的用途，其特徵在於，所述含有發酵乳桿菌的乳粉 是按照下述步驟製備得到的： 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存，或者 在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用； 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑； 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，然後冷卻到37°C，再以 原料乳體積的4%接菌量接種所述的發酵乳桿菌工作發酵劑，37°C下發酵16h，得到發酵乳 桿菌發酵乳；所述發酵乳桿菌發酵乳和滅菌後的原料乳按照1 : 3(V : V)配比加入，進行 均質，真空濃縮、噴霧乾燥得到含發酵乳桿菌的乳粉。
8. 如權利要求5所述的發酵乳桿菌的用途，其特徵在於，所述含有發酵乳桿菌的膠囊 製品是按照下述步驟製備得到的： 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存，或者 在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用； 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑； 將原料乳在140°C高溫熱殺菌2s，然後冷卻至37°C，以原料乳體積的4%接菌量接種所 述發酵乳桿菌工作發酵劑，在37°C下發酵16h，得到發酵乳桿菌發酵乳；將所述發酵乳桿菌 發酵乳和滅菌後的原料乳按照以1 : 3(V : V))配比加入，均質，真空濃縮、噴霧乾燥處理 後得到乳粉，將得到含有發酵乳桿菌的膠囊製品。
9. 如權利要求5所述的發酵乳桿菌的用途，其特徵在於，所述含有發酵乳桿菌的發酵 乳是按照下述步驟製備得到的： 所述發酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存，或者 在溫度4°C下以冷凍乾燥菌粉的形式保存備用； 利用所述發酵乳桿菌的原始菌種製備發酵乳桿菌工作發酵劑； 原料乳在95 °C下加熱殺菌20min或在140 °C下高溫熱殺菌2s，然後冷卻到37 °C，再按 照3-5% (體積）加入發酵乳桿菌工作發酵劑，再加入3-5% (體積）可共生的用於製備 發酵乳製品的發酵劑，混勻後在37°C下混菌發酵至滴定酸度以乳酸計0. 6-0. 7%，然後冷 卻至4°C，再進行冷藏保存得到含有發酵乳桿菌的發酵乳。
10. 如權利要求6至9中任意一項權利要求所述的發酵乳桿菌的用途，其特徵在於，所 述發酵乳桿菌工作發酵劑的製備方法包括： 將所述發酵乳桿菌的原始菌種接種於12% (重量）的脫脂乳中，110°C滅菌lOmin， 在37°C條件下培養14-16h至凝乳，連續培養活化兩代，用作母發酵劑；將所述母發酵劑按 3-5% (體積）接種於滅菌乳中，培養14-16h至凝乳，至該凝乳中的活菌數約109cfu/mL，得 到工作發酵劑；或 將所述發酵乳桿菌的原始菌種接種於MRS液體培養基中，在37°C條件下培養12-16h 進行活化，連續活化兩代，然後將活化培養物按2-4% (體積）接種於MRS培養基中，培養 16-18h，在4°C條件下4000r/min離心15min，去除上清夜，得到細胞沉澱，將沉澱用無菌脫 脂乳製成懸浮液，得到工作發酵劑。
【文檔編號】C12N1/20GK104498383SQ201410578559
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年10月27日 優先權日:2014年5月28日
【發明者】索化夷, 李鍵, 騫宇, 趙欣, 陳鍊紅, 蘭道亮, 謝婕 申請人:西南大學