哲羅鮭線粒體全基因組序列及其擴增引物的製作方法

2023-10-09 21:49:09

專利名稱：：哲羅鮭線粒體全基因組序列及其擴增引物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種線粒體全基因組序列及其擴增引物。
背景技術：
：線粒體是細胞內一個重要的細胞器，它具有自身的一套基因組，在魚類中線粒體基因組由於其母系遺傳的特點，複製過程中缺乏修復機制導致序列的累積變異速率遠遠大於核基因組的變異速率等特點，使其作為保護生物學和進化生物學研究的一種非常有效的工具。同時由於線粒體在細胞內起到產能及能量傳遞的重要作用，其基因組中的鹼基突變或缺失能造成重大線粒體疾病(如人類的線粒體肌肉病及線粒體腦肌肉病等)，且其基因組的多態性與物種的經濟性狀相關，因此對線粒體基因組的研究十分重要。目前鮭科魚類中已有13個物種對線粒體基因組進行了測序，而哲羅鮭(Huchotaimen)的線粒體基因組序列到目前為止仍未測定。哲羅鮭是我國土著的珍稀名貴的魚類，是鮭科魚類中體型最大。由於環境惡化及過度捕撈等因素，其目前的資源量已十分稀少、瀕臨滅絕；因此，1998年哲羅鮭被列入《中國瀕危動物紅皮書(魚類)》，2004年被列入《中國物種紅色名錄》。哲羅鮭同時也是一種優良的冷水性養殖魚類，其具有生長快速、抗逆性強的特點，目前已成功進行了野生哲羅鮭的人工馴養，並在此基礎上成功開展了規模化繁殖和養殖。但由於其自殘嚴重、不耐高溫、不耐低氧及在北方地區低溫季節(如冬春季水文在1(TC以下季節)生長緩慢等特性影響了生產的成本和產量。因此，確定哲羅鮭線粒體全基因組序列可以在哲羅鮭的保護遺傳學、進化遺傳學及優良養殖品種的分子標記輔助選擇上起到重要作用。
發明內容本發明的目的是確定哲羅鮭線粒體全基因組序列，為哲羅鮭的保護遺傳學、進化遺傳學及優良養殖品種的分子標記輔助選擇提供物質基礎。哲羅鮭線粒體全基因組序列如SEQIDNO:1所示。哲羅鮭線粒體全基因組序列的擴增引物為33對；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第1對的正向引物為5'-AGAGCGCCGGTCTTGTAATC-3'，反向引物為5'-GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第2對的正向引物為5'-TGAATTCCAGAGAACCCATGT-3'，反向引物為5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第3對的正向引物為5'-CAAAGGCTTGGTCCTGACTT-3'，反向引物為5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第4對的正向引物為5'-TGATATCCGCCAGGGAACTA-3'，反向引物為5，-CCCTTGCGGTACTTTTTCTG-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第5對的正向引物為5'-GGGTCACCCTGAGCTGACTA-3'，反向引物為5'-GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第6對的正向引物為5'-AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA-3'，反向引物為5'-CCCTCGTGATGCCATTCAT—3'哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第7對的正5'-AACACAAGCCTCGCCTGTT-3'，反向引物為5'-CGTTGAACAAACGAACCCTTA-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第8對的正5'-CTCTCCCAGAGTCCCTATCG-3'，反向引物為5'-GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA—3'哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第9對的正反向引物為5'-GTGGGATGCGCCTAAAAATA-3';5，TGCTTTCCTCACCCTACTTGA-哲羅鮭線粒體5'-CCCTTTGACCTCACAGAAGG-哲羅鮭線粒體5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-哲羅鮭線粒體5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-哲羅鮭線粒體5，-CACCAGCTGTGACTGCGATA-哲羅鮭線粒體5'-CCCATGCCTTCGTTATGATT-哲羅鮭線粒體5，-TGGCAGCAGGCATTACTATG-哲羅鮭線粒體5'-TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT-哲羅鮭線粒體全5，-AATGGCACATCCCTCACAAC-哲羅鮭線粒體5'-GACGTCCTTCACTCCTGAGC-哲羅鮭線粒體5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-哲羅鮭線粒體5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-哲羅鮭線粒體5'-CCCTTTGAGGTACCCCTTCT-哲羅鮭線粒體5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-哲羅鮭線粒體5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-哲羅鮭線粒體5，-ACATCTCCCTCCTGGTCTCC-哲羅鮭線粒體3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全3，，全基因組序列反向引物為5'-基因組序列反向引物為5'-基因組序列反向引物為5'-基因組序列反向引物為5'-基因組序列反向引物為5'-基因組序列反向引物為5'-基因組序列擴增引物第10對的CTGGCAAAGGTGAGGACTGT-3:擴增引物第11對的GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT-3:擴增引物第12對的TGTGGGATAAAGTCCTGCAA-3:擴增引物第13對的TCAGGGGCTCCGATTATTAG-3:擴增引物第14對的TGGGCTCAAACGATAAATCC-3:擴增引物第15對的CCTGCGAGGCCTAGGAAAT-3'向向向向向向向向向向正向引正向引正向引正向引正向引正向引正向引擴增引物第16對的3'，反向引物為5'-GGATAACTGCTGGGAGGACA-3';基因組序列擴增引物第17對的正向反向引物為5'-CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA-3';基因組序列擴增引物第18對的正向反向引物為5'-TGCTGGGTAAATCGGTTGAT-3';基因組序列擴增引物第19對的正向引反向引物為5'-CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG-3'基因組序列擴增引物第20對的反向引物為5'-GATTGTAAATGGGGCTTCGT-3基因組序列擴增引物第21對的反向引物為5'-TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA-3基因組序列擴增引物第22對的反向引物為5'-TGGAAAAAGCATGAGTGTGG-3基因組序列擴增引物第23對的反向引物為5'-GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA-3基因組序列擴增引物第24對的反向引物為5'-TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG-3'基因組序列擴增引物第25對的正正向引向向向向向正向引正向引正向引正向引向引物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為5'-GCAATTATTCTCATAATCGCACA-3'，反向引物為5'-TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA—3'5哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第26對的正向引物為5'-CTCTTATCCACCGAGAGAAATC-3'，反向引物為5'-CAGCCGATAAATAGTTGGAACA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第27對的正向引物為5'-AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC-3'，反向引物為5'-TGGATGTAGAGAATGCGACAA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第28對的正向引物為5'-GCGATAGAGGGTCCTACGC-3'，反向引物為5'-AACCTCATGGGTAGCAGTGG-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第29對的正向引物為5'-GCCATTTATAGCCTCCGAGT-3'，反向引物為5'-GATACAAGTGGGGTGGCATT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第30對的正向引物為5，-CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA-3，，反向引物為5，-GGTTGGCCATTAGGTTCTTG-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第31對的正向引物為5'-CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC-3'，反向引物為5'-GGAGAAGCCCCCTCAAAT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第32對的正向引物為5'-ATTCTGAGGGGCCACTGTAA-3'，反向引物為5'-CCGATTCAGGTGAGGATGAG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第33對的正向引物為5'-CATGGTTGTCCCCATCCTAC-3'，反向引物為5'-AACCTTGGATTTGTGCTGATG—3'。本發明確定了哲羅鮭線粒體全基因組序列，為哲羅鮭的保護遺傳學、進化遺傳學及優良養殖品種的分子標記輔助選擇提供物質基礎。哲羅鮭線粒體全基因組序列共16797bp，含有22個tRNA基因，l個12SrRNA基因，l個16SrRNA基因和13個蛋白編碼基因。本發明所設計引物的擴增產物應覆蓋整個線粒體全基因組，每對引物的擴增產物長度在5001300bp，且相鄰兩對引物獲得的序列重疊100300bp。圖1是具體實施方式三提取的哲羅鮭線粒體基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳圖，圖2是具體實施方式三哲羅鮭線粒體基因組DNA的PCR擴增產物瓊脂糖凝膠電泳圖。具體實施例方式本發明技術方案不局限於以下所列舉具體實施方式，還包括各具體實施方式間的任意組合。具體實施方式一本實施方式哲羅鮭線粒體全基因組序列如SEQIDNO:1所示。哲羅鮭線粒體全基因組序列共16797bp，含有22個tRNA基因，1個12SrRNA基因，1個16SrRNA基因和13個蛋白編碼基因，哲羅鮭線粒體中的基因及其他結構相應序列位置如表1所示。表1基因/部件序列位置bp序列大小編碼鏈起始密碼子終止密碼子tRNA-Phe基因16868bp6tableseeoriginaldocumentpage7tableseeoriginaldocumentpage8具體實施方式二本實施方式哲羅鮭線粒體全基因組序列的擴增引物為33對；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第1對的正向引物為5'-AGAGCGCCGGTCTTGTAATC-3'，反向引物為5'-GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第2對的正向引物為5'-TGAATTCCAGAGAACCCATGT-3'，反向引物為5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第3對的正向引物為5'-CAAAGGCTTGGTCCTGACTT-3'，反向引物為5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第4對的正向引物為5'-TGATATCCGCCAGGGAACTA-3'，反向引物為5，-CCCTTGCGGTACTTTTTCTG-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第5對的正向引物為5'-GGGTCACCCTGAGCTGACTA-3'，反向引物為5'-GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第6對的正向5'-AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA-3'，反向引物為5'-CCCTCGTGATGCCATTCAT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第7對的正向5'-AACACAAGCCTCGCCTGTT-3'，反向引物為5'-CGTTGAACAAACGAACCCTTA-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第8對的正5'-CTCTCCCAGAGTCCCTATCG-3'，反向引物為5'-GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA—3'哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第9對的正5，-TGCTTTCCTCACCCTACTTGA-3，，反向引物為5，GTGGGATGCGCCTAAAAATA-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第10對的5'-CCCTTTGACCTCACAGAAGG-3'，反向引物為5'-CTGGCAAAGGTGAGGACTGT—3哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第11對的5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-3'，反向引物為5'-GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT—3哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第12對的5'-TTGGTGCTTCCACTACACCA-3'，反向引物為5'-TGTGGGATAAAGTCCTGCAA—3哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第13對的5'-CACCAGCTGTGACTGCGATA-3'，反向引物為5'-TCAGGGGCTCCGATTATTAG—3哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第14對的5'CCCATGCCTTCGTTATGATT-3'，反向引物為5'-TGGGCTCAAACGATAAATCC—3'哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第15對的反向引物為5'-CCTGCGAGGCCTAGGAAAT-3'基因組序列擴增引物第16對的3'，反向引物為5'-GGATAACTGCTGGGAGGACA-3';基因組序列擴增引物第17對的正向反向引物為5'基因組序列反向引物為5'基因組序列反向引物為5'-CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG-3'基因組序列反向引物為5'基因組序列反向引物為5'基因組序列反向引物為5'基因組序列反向引物為5'基因組序列反向引物為5'-TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG-3'5，-TGGCAGCAGGCATTACTATG-3，，哲羅鮭線粒體全5'-TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT-哲羅鮭線粒體全5，-AATGGCACATCCCTCACAAC哲羅鮭線粒體5，-GACGTCCTTCACTCCTGAGC哲羅鮭線粒體5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC哲羅鮭線粒體5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC哲羅鮭線粒體5'-CCCTTTGAGGTACCCCTTCT哲羅鮭線粒體5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT哲羅鮭線粒體5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT哲羅鮭線粒體5'-ACATCTCCCTCCTGGTCTCC向向向向向向向向向正向引正向引正向引正向引正向引正向引-3，，.全-3，，.全-3，，.全-3，，.全-3，，.全-3，，全-3，，.全-3，，.正向引-CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA-3';擴增引物第18對的正向-TGCTGGGTAAATCGGTTGAT-3';擴增引物第19對的正向引擴增引物第20對的-GATTGTAAATGGGGCTTCGT-3:擴增引物第21對的-TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA-3:擴增引物第22對的-TGGAAAAAGCATGAGTGTGG-3:擴增引物第23對的-GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA-3:擴增引物第24對的正向引向向向向向正向引正向引正向引正向引物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為物為哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第25對的正向引物為5'-GCAATTATTCTCATAATCGCACA-3'，反向引物為5'-TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第26對的正向引物為5'-CTCTTATCCACCGAGAGAAATC-3'，反向引物為5'-CAGCCGATAAATAGTTGGAACA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第27對的正向引物為5'-AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC-3'，反向引物為5'-TGGATGTAGAGAATGCGACAA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第28對的正向引物為5'-GCGATAGAGGGTCCTACGC-3'，反向引物為5'-AACCTCATGGGTAGCAGTGG-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第29對的正向引物為5'-GCCATTTATAGCCTCCGAGT-3'，反向引物為5'-GATACAAGTGGGGTGGCATT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第30對的正向引物為5，-CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA-3，，反向引物為5，-GGTTGGCCATTAGGTTCTTG-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第31對的正向引物為5'-CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC-3'，反向引物為5'-GGAGAAGCCCCCTCAAAT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第32對的正向引物為5'-ATTCTGAGGGGCCACTGTAA-3'，反向引物為5'-CCGATTCAGGTGAGGATGAG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第33對的正向引物為5'-CATGGTTGTCCCCATCCTAC-3'，反向引物為5'-AACCTTGGATTTGTGCTGATG—3'。本實施方式所設計引物的擴增產物應覆蓋整個線粒體全基因組，每對引物的擴增產物長度在5001300bp，且相鄰兩對引物獲得的序列重疊100300bp。具體實施方式三本實施方式利用具體實施方式二中的33對引物按以下步驟擴增獲得哲羅鮭線粒體全基因組序列—、提取哲羅鮭的線粒體基因組DNAA、取200mg新鮮或-2(TC保存的哲羅鮭的肌肉、肝臟用無菌水洗淨研磨，然後提取線粒體(線粒體提取操作步驟及參數參見商業化線粒體提取試劑盒使用操作手冊)；B、向含線粒體懸浮液的離心管中加入質量濃度為20%的SDS，使SDS的終濃度達到0.8%，再37t:水浴15min;C、在離心管中加入與離心管中液體等體積的酚氯仿抽提，輕輕搖勻至乳白色，冰上靜止10min;D、在4t:條件下10000g離心10min，取上清液移至另一離心管中；E、重複步驟C和D12次(去除蛋白質)，加入離心管中液體總體積0.2倍的醋酸鈉(濃度為lmol/L)，再加入原離心管中液體總體積2倍的溫度為-20°C的無水乙醇，置於_201:環境中放置4h;F、在fC條件下15000g離心30min，棄去上清液，用上清液2倍體積的體積濃度為75%乙醇洗滌兩次；G、加入50iiL0.1XTE溶液溶解線粒體DNA;二、用具體實施方式二中的33對引物對哲羅鮭線粒體基因組DNA進行PCR擴增33對引物PCR擴增反應體系都為25iiL，均由3.5iiL濃度為20ng/iiL的哲羅鮭線粒體基因組DNA、2.5iiL高保真TaqDNA聚合酶商業包裝中的10XBuffer、1.5yL濃度為25mmol/L的MgCl2、2iiL濃度為2.5mmol/L的dNTP、1.6iiL濃度為10pmo1/iiL正向引物、1.6iiL濃度為10pmol/iiL反向引物、0.3iiL濃度為5U/iiL高保真TaqDNA聚合酶和餘量無菌去離子水組成；擴增反應程序為94t:預變性5min，循環設置為94。C變性30s、退火30s、72。C延伸30s60s，72。C延伸10min;其中哲羅鮭線粒體全基因組序列第1對擴增引物的退火溫度為56t:，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第2對擴增引物的退火溫度為54t:，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第3對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第4對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第5對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第6對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第7對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第8對擴增引物的退火溫度為54t:，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第9對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第10對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第11對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第12對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第13對擴增引物的退火溫度為53°C，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第14對擴增引物的退火溫度為53°C，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第15對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第16對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第17對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第18對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第19對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第20對擴增引物的退火溫度為54t:，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第21對擴增引物的退火溫度為50°C，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第22對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第23對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第24對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第25對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第26對擴增引物的退火溫度為53t:，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第27對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第28對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第29對擴增引物的退火溫度為5(TC，循環38次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第30對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第31對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第32對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；哲羅鮭線粒體全基因組序列第33對擴增引物的退火溫度為53t:，循環35次；三、對獲得的PCR擴增產物進行純化回收，並進行序列測定PCR擴增產物的純化回收和測序交由上海生物工程技術有限公司進行商業操作，PCR擴增產物序列測定的測序引物為步驟二中PCR擴增的正向引物或反向引物其中第1對引物的擴增產物用第1對中的正向引物測序；第2對引物的擴增產物用第2對中的正向引物測序；第3對引物的擴增產物用第3對中的正向引物測序；第4對引物的擴增產物用第4對中的正向引物測序；第5對引物的擴增產物用第5對中的正向引物測序；第6對引物的擴增產物用第6對中的正向引物測序；第7對引物的擴增產物用第7對中的正向引物測序；第8對引物的擴增產物用第8對中的正向引物測序；第9對引物的擴增產物用第9對中的正向引物測序；第IO對引物的擴增產物用第IO對中的正向引物測序；第ll對引物的擴增產物用第ll對中的正向引物測序；第12對引物的擴增產物用第12對中的反向引物測序；第13對引物的擴增產物用第13對中的正向引物測序滯14對引物的擴增產物用第14對中的正向引物測序；第15對引物的擴增產物用第15對中的正向引物測序；第16對引物的擴增產物用第16對中的正向引物測序；第17對引物的擴增產物用第17對中的正向引物測序；第18對引物的擴增產物用第18對中的正向引物測序；第19對引物的擴增產物用第19對中的正向引物測序；第20對引物的擴增產物用第20對中的反向引物測序；第21對引物的擴增產物用第21對中的正向引物測序；第22對引物的擴增產物用第22對中的正向引物測序；第23對引物的擴增產物用第23對中的反向引物測序；第24對引物的擴增產物用第24對中的正向引物測序；第25對引物的擴增產物用第25對中的正向引物測序；第26對引物的擴增產物用第26對中的正向引物測序；第27對引物的擴增產物用第27對中的正向引物測序；第28對引物的擴增產物用第28對中的正向引物測序；第29對引物的擴增產物用第29對中的正向引物測序；第30對引物的擴增產物用第30對中的正向引物測序；第31對引物的擴增產物用第31對中的正向引物測序；第32對引物的擴增產物用第32對中的正向引物測序；第33對引物的擴增產物用第33對中的正向引物測序；四、採用序列拼接軟體對獲得的序列進行質量控制，並根據各條序列中的重疊部分進行全基因組序列拼接獲得的PCR產物序列用序列拼接軟體Staden進行測序峰的讀取及質量控制，並進行全基因組序列拼接；在讀取測序峰和序列拼接時採用置信度控制序列質量，去除平均置信度小於15以下的序列；五、採用序列分析軟體對獲得的全基因組序列進行結構、功能分析，並對序列進行注釋採用tRNAScan-SE軟體確定哲羅鮭線粒體全基因組序列的21個tRNA基因，第22個tRNA基因tRNA-Ser(AGY)採用Blast軟體與其他鮭科魚類線粒體全基因序列比對確定；採用ORFFinder、GetORF和Sequin軟體確定哲羅鮭線粒體全基因組序列的13個蛋白質編碼基因；採用Blast軟體與其他鮭科魚類線粒體全基因序列比對確定12SrRNA、16SrRNA基因、線粒體基因組複製轉錄控制區CR(ControlRegion)和線粒體基因組輕鏈複製起始區0L(0riginofR印lication)。本實施方式提取的哲羅鮭線粒體基因組DNA的瓊脂糖凝膠電泳圖如圖1所示，其中圖1中"M"泳道標樣為Marker,第二泳道標樣為基因組DNA，"mt"泳道標樣為哲羅鮭線粒體基因組DNA。本實施方式哲羅鮭線粒體基因組DNA的PCR擴增產物瓊脂糖凝膠電泳圖如圖2所示，其中圖2中"M"泳道標樣為Marker,第"313"泳道標樣為第3對至第13對哲羅鮭線粒體基因組擴增引物，每對引物擴增用兩個哲羅鮭樣品，第一個樣本H表示哲羅鮭紅花爾基群體野生樣品，BH表示哲羅鮭北洪群體野生樣品。序列表〈110〉中國水產科學研究院黑龍江水產研究所〈120〉哲羅鮭線粒體全基因組序列及其擴增引物〈160>67〈210>1〈211>1679712〈212>DNA〈213〉哲羅鮭(Huchotaimen)〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列。〈400〉1GCTAGCGTAGCTTAACTAAAGCATAACACTGAAGCTGTTAAGATGGACCCTAGAAAGTCC60CGAAGGCACAAAGGCTTGGTCCTGACTTTACCATCAGCTTTAACTGAACTTACACATGCA120AGTCTCCGCATTCCTGTGAGGATGCCCTTAATCCCCTGCCCGGGGACGAGGAGCCGGCAT180CAGGCACGCCCCGGCAGCCCAAGACGCCTTGCTAAGCCACACCCCCAAGGAAACTCAGCA240GTGATAGACATTAAGCCATAAGCGAAAGCTTGACTTAGTTAAGGTTAAGAGGGCCGGTAA300AACTCGTGCCAGCCACCGCGGTTATACGAGAGGCCCTAGTTGATGGTTACCGGCGTAAAG360AGTGGTTATGAAAAAGTATTTAATAAAGCCGAACACCCCCTTAGCCGTCATACGCACCTG420GGGGCACGAAGACCTACTGCGAAAGCAGCTTTAATTATACCTGAACCCACGACAGCTACG■ACACAAACTGGGATTAGATACCCCACTATGCCTAGCCGTAAACTTTGATAAAAACATACA540ACTGATATCCGCCAGGGAACTACAAGCGCCAGCTTAAAACCCAAAGGACTTGGCGGTGCC600TCAGACCCACCTAGAGGAGCCTGTTCTAGAACCGATAACCCCCGTTCAACCTCACCACCT660CTTGTTTTCCCCGCCTATATACCACCGTCGTCAGCTTACCCTGTGAAGGCCTTATAGTAA720GCAAAATGGGCAAAACCCAAAACGTCAGGTCGAGGTGTAGCGCATGGGGTGGGAAGAAAT780GGGCTACATTCTCTAAATTAGAGCACTACGAACCACGCTGTGAAACCAGCGTCCGAAGGT840GGATTTAGCAGTAAACAGAAAACAGAGAGTTCTCTTGAAACTGGCTCTGAGGCGCGCACA■CACCGCCCGTCACTCTCCCCGAGTTCAATTTATCCTTCTAACTAAGAAGTTAACCGAACA960AAGGGGAGGCMGTCGTAACATGGTMGTGTACCGGAAGGTGCACTTGGAATAACCAGAG1020TGTAGCTAAGATAGAMAGCACCTCCCTTACACCGAGAAGACATCCGTGCAATTCGGGTC1080ACCCTGAGCTGACTAGCTAGCCCACACCTTGGTCTAACACCACAACATACATACCCCTM1140AAGACTTAGAACTAAGTTAACAAACCATTTTTCCACCTTAGTACGGGCGACGGAAMGGA1200GATAATCGAGCAACAGAGAAAGTACCGCAAGGGAMGCTGAAAGAGAACTGAAACAACCC1260ATTTAAGCCTAGAAAAGCAGAGATTMATCTCGTACCTTTTGCATCATGATTTAGCCAGC1320AMCCTGGGCMAGAGAACTTTAGTTCAGGCCCCCGAAACTAGACGAGCTACTCCGGGAC1380AGCCTATTATAGGGCCAACCCGTCTCTGTGGCAAMGAGTGGGACGAGCCCCGAGTAGAG1440GTGATAMCCTATCGAGCCTAGTTATAGCTGGTTGCTTAGGAAATGMTAGMGTTCAGC1500CCCCTGGCCTTCTTAGGACCTCAAGGTAAAACTAACCTTGTCCCMAGAAACCMGGGAG1560TTAGTCMAGGAGGTACAGCTCCTTTGAACAAGGACACAACCTTMCAGGCGGCTAAGGA1620TCATAATTACTAAGGTAACCTGTTACAGTGGGCCTAAGAGCAGCCACCTGCATAGAAAGC1680GTTAAAGCTCAGACAGATATMGCCTCTTATCCTGATAAGAAATCCTACCCCCTAACCGT1740ACTAAGCCATTCCATGCCCCCATGGMGAGATTATGCTAGAATGAGTAATAAGAGGGMT1800AACCCTCTCCCAGCACATGTGTAAGTCGGACCGGACCCCCCGCCGACAAATAACGAACCC1860AAGCCAAGAGGGAACTGTAGGCCAGMTAAACACCAAGAAGAACCTACACCAATAAATCG1920TTAACCCCACACAGGAGTGCCCACAGGGAAAGACCCAAAGGAAGAGAAGGAACTCGGCM1980ACACAAGCCTCGCCTGTTTACCAAAMCATCGCCTCTTGCAAATCAAAGCATAAGAGGTC2040CCGCCTGCCCTGTGACTATGGGTTTMCGGCCGCGGTATTTTGACCGTGCGAAGGTAGCG2100CMTCACTTGTCTTTTAAATGAAGACCTGTATGAATGGCATCACGAGGGCTTAGCTGTCT2160CCTCTTCCAAGTCAATGAAATTGATCTGCCCGTGCAGAAGCGGACATAAGCACATAAGAC2220GAGAAGACCCTATGGAGCTTTAGACACCAGGCAGATCACGTCAAGCAACCTTGMCTAAC2280AAGTAAMACGCAGTGACCCCTAGCCCATATGTCTTTGGTTGGGGCGACCGCGGGGGAAA2340ACAAAGCCCCCATGTGGACTGGGGGCACTGCCCCCCACAGCCAAGAGCTACAACTCTAAG2400CACCAGMTTTCTGACCAAAMTGATCCGGCGAACGCCGATCAACGGACCGAGTTACCCT2460AGGGATMCAGCGCAATCCTCTCCCAGAGTCCCTATCGACGAGGGGGTTTACGACCTCGA2520TGTTGGATCAGGACATCCTAATGGTGCAGCCGCTATTAAGGGTTCGTTTGTTCMCGATT2580AMGTCCTACGTGATCTGAGTTCAGACCGGAGTAATCCAGGTCAGTTTCTATCTATGAAG2640TGATGTTTCCTAGTACGAAAGGACCGGAAAGAAGGGGCCCATGCTTTAGGCACGCCCCAC2700CCCCACCTGATGAAGGCAACTAAAACAGACAAGGGGGCACACCAAGATTGTGCCTAAAAG2760AACGGCGCGCTAAGGTGGCAGAGCCCGGTAATTGCGAGAGGCCTMGCCCTCTTTTTCAG2820AGGTTCMGTCCTCTCCTTAGCTATGACTACCCTTATTACCCATGTTATTAACCCACTCG2880TATACATTGTGCCTGTTCTCCTAGCAGTTGCTTTCCTCACCCTCCTCGAACGAMAGTTC2940TCGGGTACATGCAACTTCGAAAGGGACCTAATATTGTTGGTCCATATGGATTACTTCAAC3000CCATTGCAGACGGCCTTAAGCTATTTATTAAAGAACCAGTTCGACCATCCACCTCTTCCC3060CCTTTCTATTTCTCGCCACACCAATACTTGCCTTMCACTTGCACTCACCTTATGAGCCC3120CMTACCAATCCCCTACCCCGTCACAGACCTCAACCTAGGAATACTATTTATTCTAGCAC3180TATCAAGCCTCGCGGTATACTCAATCCTAGGGTCAGGATGAGCATCAAATTCCMATATG3240CATTAATCGGAGCCCTACGAGCAGTAGCCCAMCTATTTCCTATGMGTCAGCCTAGGAC3300TMTCCTACTMGCGTGATTATCTTCACAGGAGGATACACACTACAAACATTTMCATCA3360CCCAAGMAGTATCTGACTACTCATACCAGCCTGACCCCTTGCCGCCATATGATACATCT3420CMCCCTAGCTGAGACAAACCGTGCACCATTCGACCTAACAGAAGGAGAATCAGAACTGG3480TATCCGGCTTTAATGTAGAATATGCTGGAGGACCCTTCGCCCTTTTTTTCTTAGCCGAAT3540ACGCTAATATCCTTCTAATAMTACACTCTCAGCCATCCTATTCCTAGGCGCATCCCATA3600TCCCAGCTCTCCCTGMCTAACAGCCCTTAATCTCATAACAAAAGCTGCCCTACTCTCCG3660TTGTATTCTTATGAGTACGAGCATCCTACCCCCGATTTCGGTACGACCAACTTATACACT3720TAGTTTGAAAMGCTTCCTACCTCTMCTTTAGCCCTTGTCCTATGACACCTTGCACTCC3780CTATTGCTATAGCAGGCCTCCCTCCCCAACTTTAATTTCACAAGGAATTGTGCCTGAATG3840CTTAAGGACCACCTTGATAGCGTGGCTGATAGGGGTTCAAGTCCCCTCAATTCTAGAGAG3900AAGGGGCTCGMCCCATCCTCAAGAGATCAAAACTCTTGGTGCTTCCACTACACCACTTT3960CTAGTAMGTCAGCTMTTAAGCTTTTGGGCCCATACCCCAAATATGTTGGTTMAATCC4020TTCCTTTACTMTGAACCCCTATGTACTCACTATTTTACTTTCCAGCCTAGGTCTAGGCA4080CAGTCCTCACCTTTGCCAGCTCCCACTGACTTCTTGCATGAATAGGCCTAGAAATTAATA4140CCCTTGCTATTATTCCAATCATAGCACGACAGCACCACCCCCGAGCAATTGAAGCTACM4200CCAAGTACTTTTTAACACAAGCAACTGCCGCAGCMTGATCCTCTTTGCCAGCACTACCA4260ATGCTTGACTGGTTGGGGAATGAGAMTCCACCAACTATCCCACCCCTTAGCAACTACM4320CTGTAATACTGGCCTTAGCACTTAAGCTCGGGCTAGCCCCCGTTCATTTCTGATTACCAG4380AAGTCCTTCAAGGGATTGAACTCACCACAGGGTTMTCCTTTCAACCTGACAAMACTCG4440CACCCTTTGCACTTATAATTCAAGTAGCCCCAACTATCAACTCTTCTCTACTTATTACAC4500TAGGTCTTCTATCAACTCTAGTGGGGGGTTGAGGAGGACTTAACCAAACCCAGCTACGTA4560AMTTTTAGCATACTCTTCAATTGCCCACCTGGGATGAATAGTGTTAATCTTACAATTTG4620CACCCTCCCTGACACTCCTCAGCCTTC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AACGTATACACCAGCAGCCAAACAGTACCAAATGCTACAACCACCTCCTCCTTTCTTTTCCACTCACACTTATTCGTCTCCATCCGTTATTAACCTCAAACTGCCGCTCTCCAACAAGCAATTTCTTCCCTGATCGCCAGCCTCCGCTCACCTACCTCACTCGCTCGAAGAGAAAAGCACCCCCGCTCGTGTGTTTCATACCACCACATACCGCTGCTGAATGACAAAAAAGAACCCCAAGG1422014280143401440014460145201458014640147001476014820148801494015000150601512015180152401530015360CAGCAAAATAGAAATAAAGATGAAAAACCACCCCCTCCTAAGTTTGATGAACTTTTCCTATATCTGCCGGTttCttcttTATATAAGGAGTGTAGGCTATCCTCCTATCCCTCTGTAGACTATCGCAGCTAGCAGGAATTCCTGCTCGGGTCTCCTTGGATAAACCCGAGGGGTGGAGTACACCTCTAAAAGGAGCAGGACACAAGATAACCGTTGTTATAAAATTGCTAAATTTTGGGTGCCATACATTGATGTTAGTTATCTGTATTTACTTGAAATAGTCCTTCCATGCTGTCCCCTAATGCTACTCGCTACAGTCCAACTCCGACGTTTGTGGCCAGATCCAGACATGGTACTTCTCTCGCCCTCTCAACGTGGACTTAGATGCAAGTCATAATTCTCAACTACAAATGACGCACTCTCTCCTAGGACACCTCTGAACGGCTGACTATATACATATTTGGAGTAGTGAGGACAAATATGTTGGGGGTAACACGATTTCCACCTTCTCTGATAAAATTACTATTAGGATTTTACACCTGTTTGCCTATGTTCTCCATTAACCTTCCGCAGCCACAAGCTGCTCGGACGAACCTAATGAGTTGACCTTCTTATGTCTACATTTCAACAAATTCGTAATCGCCCGAGGAACTATTACTTATCCTTCTGACGCCCTAGTATTTCGCCTTCATTTTTACACCTCATTTCACCCTAACATCTCGCCAACCCGTGCAATTCTACCTCGTCCTTACCACTGACCCCCTAAAACCTTTAACCGAAGCTAACCTCCCCAGCACCCTGCCACCCAAAGCCTTTTCCTATCCACGCTACTTTACTACGCTCACCATGAGGAGCCACTGCAGTGAATTTCACTTCCTATGAAACCGGGTCCCTACTTCTCTAGCTCTTTCTAGTTACCCCGCTCTATCCATAGTTGTCCCAATTCTTATAACCCTAAAAACTAATGACTGAAAAACCCACTAATATCTCTTCTCACCGGCCGTCTGCCAACGGAGCATCGGTCCTACTTTAACTGCCTTTAATCACCAAGAGGCGGATTTCCCGTTTGTCAAACAATCCCATATAAAGATTGCACCCAACACCTCACATCCAATAAACTCCATCCTCCATCTGAACCCT2115420154801554015600156601572015780158401590015960160201608016140162001626016320163801644016500AGTAGCAGACTATCATTGGCAGCCGGCTGGGCGCCGGTCTAGATTTTAACCCGCCGATGTATTATATTACTGTATTATCATTAAGCAAAACAAACCTTCATCATGTAGTAGCAGAAATCGGGGCTATCCTCAATCTTATTrprprprprprprprprprpATAGAATGATCATCCTCACAACGCTGAACGATTTTTGTTACAACACTGTCATACTGATCCCAAGTCGCCTGCCGAGAATATGTAATCCGGTCCTACCCTTACAATAATAAACACTATGTAACATAAGTGGCACGGATAACGCTAACACGAAGAACCGACCTATTAGGTAGTAAGAAACCAGCCCGTTACCTCCGGGGTTCATTTTATAAAGATATCTAATATCCTTGTGTAAGTATACATATCGGACCCCTCACCTGGATCCGTAATTTAAAGCCCTTGAAGGCCGGAGGAACTCCCAAAATGTTATATCTTTACCCATGTTTTAACCCCCACCAACTAAGCTCCGTCTTAACGATTTATCATCTCGTGAGCCCCTGAAACACCAAGCCGCGAAACTAGAGAATCACATAAGATCCCCGGTCCTGTCAAATAATAAACTTCTTTCATAAT22TGGAGGTATACTTCGCCATCATGAGCCTGCTTAAAACCCTGCTAAGATTCTTACAAGTCATACAATATTGTCATACATCAGATGTTTTAATACCCACCAACAGTAGGCATATTATTCCTGGCCGAATGTAGGCGTTCTCTTCTTGAATTCCTTGGATATCCTTCTGCGCGCCCCTAAACCTTTAACACACTAAAGTATACCCTGTAGAACTTCCTAGTCCCCTAGTAGCTCCCTAGTGCTTAAATTAAACGTACGATATACGCATGAGTAGCACAAATCCCCCGATTAATCTTTCAGCATACTCTTATTGGCATTTGGTTATGCATCTGGTATATGCATACCGAGGACTAAAGTGCATAAACAAACCCCCAGGAAGTCTCTTTATGACATATTAATAAACACCCATTTATTCGCCCCCCTCAGCGCCAGACAGAGAAAGGTACCCTCTGAACACTTATGTGTACATTATAAAGGTTTACATGCTACACCACAGTCCTGCTATGGTCAGGGCCTATATCAATTAATGGTGTGGGTTCTCTTATGTATCATTGGTCCAATTCCTACCCCCCTAACAGCGCTATTGGCACCGATTTTTAACAC16560ACTTTATGACATTTGGCACCGACAACACTGTCATCGGACCCCCTTTCATAATTAAAGTAT16621ACATTAATAAACTTTTTAACACACTTTATGACATTTGGCACCGACAACACTGTCATCGGA16680CCCCCTTTCATAATTAAAGTATACATTAATAAACTTTTTAACACACTTTATGACATTTGG16740CACCGACAACACTGTCATCGGACCCCCTTTCGTAATTAAATGTATTCAAGACCCATT16797〈210>2〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第1對的正向引物序列。〈400>2AGAGCGCCGGTCTTGTAATC20〈210>3〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第1對的反向引物序列。〈400>3GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC22〈210>4〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第2對的正向引物序列。〈400>4TGAATTCCAGAGAACCCATGT21〈210>5〈211>20〈212>DNA〈213>人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第2對的反向引物序列。〈400>5TAAAACAAGGGGTGGTGAGG20〈210>6〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第3對的正向引物序列。〈400>6CAAAGGCTTGGTCCTGACTT20〈210>7〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第3對的反向引物序列。〈400>7TAAAACAAGGGGTGGTGAGG20〈210>8〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第4對的正向引物序列。〈400>8TGATATCCGCCAGGGAACTA20〈210>9〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第4對的反向引物序列。〈400>9CCCTTGCGGTACTTTTTCTG20〈210>10〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第5對的正向引物序列。〈400〉10GGGTCACCCTGAGCTGACTA20〈210>11〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第5對的反向引物序列。〈400〉11GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG20〈210>12〈211>24〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第6對的正向引物序列。〈400>12AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA24〈210>13〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第6對的反向引物序列。〈400>13CCCTCGTGATGCCATTCAT19〈210>14〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第7對的正向引物序列。〈400>14AACACAAGCCTCGCCTGTT19〈210>15〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉25〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第7對的反向引物序列。〈400>15CGTTGAACAAACGAACCCTTA21〈210>16〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第8對的正向引物序列。〈400>16CTCTCCCAGAGTCCCTATCG20〈210>17〈211>21〈212>DNA〈213>人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第8對的反向引物序列。〈400>17GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA21〈210>18〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第9對的正向引物序列。〈400〉18TGCTTTCCTCACCCTACTTGA21〈210>19〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第9對的反向引物序列。〈400>19GTGGGATGCGCCTAAAAATA20〈210>20〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第10對的正向引物序列。〈400>20CCCTTTGACCTCACAGAAGG20〈210>21〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第10對的反向引物序列。〈400>21CTGGCAAAGGTGAGGACTGT20〈210>22〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第11對的正向引物序列。〈400>22TTGGTGCTTCCACTACACCA20〈210>23〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第11對的反向引物序列。〈400>23GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT20〈210>24〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第12對的正向引物序列。〈400>24TTGGTGCTTCCACTACACCA20〈210>25〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第12對的反向引物序列。〈400>25TGTGGGATAAAGTCCTGCAA20〈210>26〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第13對的正向引物序列。〈400>26CACCAGCTGTGACTGCGATA20〈210>27〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第13對的反向引物序列。〈400>27TCAGGGGCTCCGATTATTAG20〈210>28〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第14對的正向引物序列。〈400>28CCCATGCCTTCGTTATGATT20〈210>29〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第14對的反向引物序列。〈400>29TGGGCTCAAACGATAAATCC20〈210>30〈211>2028〈212>DNA〈213>人工序列〈220>〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第15對的正向引物序列。〈400>30TGGCAGCAGGCATTACTATG20〈210>31〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第15對的反向引物序列。〈400>31CCTGCGAGGCCTAGGAAAT19〈210>32〈211>23〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第16對的正向引物序列。〈400>32TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT23〈210>33〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第16對的反向引物序列。〈400>33GGATAACTGCTGGGAGGACA20〈210>34〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第17對的正向引物序列。〈400>34AATGGCACATCCCTCACAAC20〈210>35〈211>23〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第17對的反向引物序列。〈400>35CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA23〈210>36〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第18對的正向引物序列。〈400>36GACGTCCTTCACTCCTGAGC20〈210>37〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第18對的反向引物序列。〈400>37TGCTGGGTAAATCGGTTGAT20〈210>38〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第19對的正向引物序列。〈400>38CCTCCCATGAATTCTTTTCC20〈210>39〈211>27〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第19對的反向引物序列。〈400>39CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG2728/33頁〈210>40〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第20對的正向引物序列,〈400>40CCTCCCATGAATTCTTTTCC20〈210>41〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第20對的反向引物序列,〈400>41GATTGTAAATGGGGCTTCGT20〈210>42〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第21對的正向引物序列,〈400>42CCCTTTGAGGTACCCCTTCT20〈210>43〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第21對的反向引物序列,〈400>43TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA20〈210>44〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第22對的正向引物序列,〈400>44GCCCTTCTCCTTACGCTTCT20〈210>45〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第22對的反向引物序列。〈400>45TGGAAAAAGCATGAGTGTGG20〈210>46〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第23對的正向引物序列。〈400>46GCCCTTCTCCTTACGCTTCT20〈210>47〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第23對的反向引物序列。〈400>47GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA20〈210>48〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第24對的正向引物序列。〈400>48ACATCTCCCTCCTGGTCTCC20〈210>49〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第24對的反向引物序列。〈400>49TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG21〈210>50〈211>23〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第25對的正向引物序列。〈400>50GCAATTATTCTCATAATCGCACA23〈210>51〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第25對的反向引物序列。〈400>51TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA21〈210>52〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第26對的正向引物序列。〈400>52CTCTTATCCACCGAGAGAAATC22〈210>53〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第26對的反向引物序列。〈400>53CAGCCGATAAATAGTTGGAACA22〈210>54〈211>24〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉33〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第27對的正向引物序列。〈400>54AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC24〈210>55〈211>21〈212>DNA〈213>人工序列〈220>〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第27對的反向引物序列。〈400>55TGGATGTAGAGAATGCGACAA21〈210>56〈211>19〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第28對的正向引物序列。〈400>56GCGATAGAGGGTCCTACGC19〈210>57〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第28對的反向引物序列。〈400>57AACCTCATGGGTAGCAGTGG20〈210>58〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第29對的正向引物序列。〈400>58GCCATTTATAGCCTCCGAGT20〈210>59〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列34〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第29對的反向引物序列。〈400>59GATACAAGTGGGGTGGCATT20〈210>60〈211>22〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第30對的正向引物序列。〈400>60CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA22〈210>61〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第30對的反向引物序列。〈400>61GGTTGGCCATTAGGTTCTTG20〈210>62〈211>26〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第31對的正向引物序列。〈400>62CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC26〈210>63〈211>18〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第31對的反向引物序列。〈400>63GGAGAAGCCCCCTCAAAT18〈210>64〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第32對的正向引物序列。〈400>64ATTCTGAGGGGCCACTGTAA20〈210>65〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第32對的反向引物序列。〈400>65CCGATTCAGGTGAGGATGAG20〈210>66〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第33對的正向引物序列。〈400>66CATGGTTGTCCCCATCCTAC20〈210>67〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈223〉哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第33對的反向引物序列。〈400>67AACCTTGGATTTGTGCTGATG2權利要求哲羅鮭線粒體全基因組序列，其特徵在於哲羅鮭線粒體全基因組序列如SEQIDNO1所示。2.哲羅鮭線粒體全基因組序列的擴增引物，其特徵在於哲羅鮭線粒體全基因組序列的擴增引物為33對；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第1對的正向引物為5'-AGAGCGCCGGTCTTGTAATC-3'，反向引物為5'-GCTAGCGGGACTTTCTAGGGTC—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第2對的正向引物為5'-TGAATTCCAGAGAACCCATGT-3'，反向引物為5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第3對的正向引物為5'-CAAAGGCTTGGTCCTGACTT-3'，反向引物為5'-TAAAACAAGGGGTGGTGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第4對的正向引物為5'-TGATATCCGCCAGGGAACTA-3'，反向引物為5，-CCCTTGCGGTACTTTTTCTG-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第5對的正向引物為5'-GGGTCACCCTGAGCTGACTA-3'，反向引物為5'-GTGCAGGTGGCTGCTCTTAG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第6對的正向引物為5'-AAACCAGGAGAGTTAGTCAAAGGA-3'，反向引物為5'-CCCTCGTGATGCCATTCAT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第7對的正向引物為5'-AACACAAGCCTCGCCTGTT-3'，反向引物為5'-CGTTGAACAAACGAACCCTTA-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第8對的正向引物為5'-CTCTCCCAGAGTCCCTATCG-3'，反向引物為5'-GCGAGAAATAGAAAGGGTGAA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第9對的正向引物為5，-TGCTTTCCTCACCCTACTTGA-3，，反向引物為5，-GTGGGATGCGCCTAAAAATA-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第10對的正向引物`5，-CCCTTTGACCTCACAGAAGG--3，，反向引物為5''-CTGGCAAAGGTGAGGACTGT-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第11對的正向引物`5，-TTGGTGCTTCCACTACACCA--3，，反向引物為5''-GTGTGAGAGAGGGTGCGAAT-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第12對的正向引物`5，-TTGGTGCTTCCACTACACCA--3，，反向引物為5''-TGTGGGATAAAGTCCTGCAA-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第13對的正向引物`5，-CACCAGCTGTGACTGCGATA--3，，反向引物為5''-TCAGGGGCTCCGATTATTAG-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第14對的正向引物`5，-CCCATGCCTTCGTTATGATT--3，，反向引物為5''-TGGGCTCAAACGATAAATCC-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第15對的正向引物`5，-TGGCAGCAGGCATTACTATG--3，，反向引物為5''-CCTGCGAGGCCTAGGAAAT-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第16對的正向引物`5'-TTACGTAGTTGCTCATTTCCACT-3'，反向引物為5'-GGATAACTGCTGGGAGGACA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第17對的正向引物為5'-AATGGCACATCCCTCACAAC-3'，反向引物為5'-CAGATCTCAGAACATTGTCCGTA-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第18對的正向引物為5'-GACGTCCTTCACTCCTGAGC-3'，反向引物為5'-TGCIGGGTAAATCGGTTGAT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第19對的正向引物為5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-3'，反向引物為5'-CATTAAACGTTTTCTTGTAAATAGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第20對的正向引物為5'-CCTCCCATGAATTCTTTTCC-3'，反向引物為5'-GATTGTAAATGGGGCTTCGT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第21對的正向引物為5'-CCCTTTGAGGTACCCCTTCT-3'，反向引物為5'-TCTAAGCCTCCTTGGGTTCA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第22對的正向引物為5'-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-3'，反向引物為5'-TGGAAAAAGCATGAGTGTGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第23對的正向引物為5，-GCCCTTCTCCTTACGCTTCT-3，，反向引物為5，-GAAGGTGTAGGGGTTGCGTA-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第24對的正向引物為5'-ACATCTCCCTCCTGGTCTCC-3'，反向引物為5'-TCCTATTAGGTTGGGGAGAGG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第25對的正向引物為5'-GCAATTATTCTCATAATCGCACA-3'，反向引物為5'-TCCTTTAGAAGCACGAGTGAA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第26對的正向引物為5'-CTCTTATCCACCGAGAGAAATC-3'，反向引物為5'-CAGCCGATAAATAGTTGGAACA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第27對的正向引物為5'-AACCTTAGCTTTAAATTTGACCAC-3'，反向引物為5'-TGGATGTAGAGAATGCGACAA—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第28對的正向引物為5，-GCGATAGAGGGTCCTACGC-3'，反向引物為5'-AACCTCATGGGTAGCAGTGG-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第29對的正向引物為5'-GCCATTTATAGCCTCCGAGT-3'，反向引物為5'-GATACAAGTGGGGTGGCATT—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第30對的正向引物為5，-CCTCACCCTATTTTTCCTTTCA-3，，反向引物為5，-GGTTGGCCATTAGGTTCTTG-3，；哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第31對的正向引物為5'-CACAAGATAAGTCATAATTCCTGCTC-3'，反向引物為5'-GGAGAAGCCCCCTCAAAT-3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第32對的正向引物為5'-ATTCTGAGGGGCCACTGTAA-3'，反向引物為5'-CCGATTCAGGTGAGGATGAG—3';哲羅鮭線粒體全基因組序列擴增引物第33對的正向引物為5'-CATGGTTGTCCCCATCCTAC-3'，反向引物為5'-AACCTTGGATTTGTGCTGATG—3'。全文摘要哲羅鮭線粒體全基因組序列及其擴增引物，它涉及一種線粒體全基因組序列及其擴增引物。本發明確定哲羅鮭線粒體全基因組序列，為哲羅鮭的保護遺傳學、進化遺傳學及優良養殖品種的分子標記輔助選擇提供物質基礎。哲羅鮭線粒體全基因組序列如SEQIDNO1所示。哲羅鮭線粒體全基因組序列的擴增引物為33對。本發明為哲羅鮭的保護遺傳學、進化遺傳學及優良養殖品種的分子標記輔助選擇提供物質基礎。文檔編號C12N15/12GK101736007SQ20091007311公開日2010年6月16日申請日期2009年10月29日優先權日2009年10月29日發明者佟廣香,匡友誼,孫效文,尹家勝申請人:中國水產科學研究院黑龍江水產研究所