新黴素菌種選育快速篩選方法

2023-10-09 14:23:09 1

專利名稱：新黴素菌種選育快速篩選方法
新黴素菌種選育快速篩選方法本發明涉及一種新黴素菌種選育快速篩選方法，尤其涉及一種將新黴素優良菌種 快速鑑別出來的方法。
背景技術：
新黴素菌種篩選是提高菌種質量，穩定發酵水平的關鍵環節。長期以來，新黴素菌 種選育一直採用抗生素微生物檢定法來測定不同單菌落的生產能力，從中選擇生產能力高 的菌株，淘汰生產能力低下的菌株。由於菌種選育要經過初篩和復篩兩個階段，篩選的單菌 落眾多，一般在150-200，加之抗生素微生物檢定法操作繁瑣，測定時間約需20小時，且每 次測定數量有限，故要分數批進行測定，這不但大大降低了菌種篩選效率，還因不同條件、 不同操作人等因素的變化，增加了生物檢定法測定的誤差，降低了選育優良菌種的準確性。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種新黴素菌種選育快速篩選方法，該方法能 夠縮短菌種選育的周期，提高菌種篩選效率和選育優良菌種的準確性，為新黴素發酵生產 提供優良的菌種，從而提高和穩定新黴素發酵生產水平。本發明的目的是這樣實現的一種新黴素菌種選育快速篩選方法，包括以下步 驟
(1)接種發酵瓶在無菌室內採用挖塊接種法將新黴素單菌落斜面接於發酵瓶，將發酵 瓶放入搖床上振搖，搖床轉速250轉/分；溫度35士2度；培養時間135-140小時，完成發酵 瓶接種；
(2)發酵液過濾將發酵到終點的發酵瓶進行過濾，取其過濾液；
(3)平板的培養基的準備將生物檢定培養基預熱融化，在無菌室內倒入平板內，待培 養基凝固後，再倒入內含敏感菌的檢定培養基；
(4)直接點樣將多個用濾紙製作成圓形紙片放置於平板培養基上，用進樣器吸取發酵 液的過濾液直接點在圓形紙片上，所有樣品點完後，將平板培養基放入培養箱中進行培養， 培養時間14-16小時，培養溫度36-38度；
(5)抑菌圈的測量將培養24小時的平板從培養箱中取出，對每個抑菌圈進行測量，根 據菌種選育確定的數量，優先選擇抑菌圈大的菌株進行生物效價確認，完成新黴素菌種選 育快速篩選。控制培養基厚度在2_3mm之間。控制檢定培養基的厚度在2_3mm之間。本發明提供的新黴素菌種選育快速篩選方法，由於發明了菌種選育中的快速簡化 的篩選方法，從而縮短菌種選育的周期，以前菌種選育周期要用5周時間，現在僅用一周時 間，菌種篩選效率提高的80% ；本發明提高菌種篩選效率和選育優良菌種的準確性，從而為 新黴素發酵生產提供優良的菌種，為提高和穩定發酵生產水平提供了可靠保證。
具體實施例方式實施例
(1)接種發酵瓶在無菌室內採用挖塊接種法將新黴素單菌落斜面接於發酵瓶，將發酵 瓶放入搖床上振搖，搖床轉速250轉/分；溫度35士2度；培養時間135-140小時，完成發酵 瓶接種；
(2)濾液的製備將發酵到終點的發酵液IOOml進行過濾，用濾紙過濾，獲取過濾液；
(3)平板的準備用不鏽鋼薄板製作35X25X4cm尺寸的平板(帶蓋)，將生物檢定培養 基預熱融化，在無菌室內倒入平板內，倒入量以培養基厚度控制在2-3mm為宜，待培養基 凝固後，再倒入內金黃色葡萄球菌作含敏感菌的檢定培養基，倒入量以培養基厚度控制在 2-3mm為宜；
(4)直接點樣用濾紙製作成直徑為5mm的圓形紙片，將紙片按適當距離放置於平板培 養基上，後用5微升進樣器吸取發酵液的過濾液直接點在圓形紙片上，樣品點完後，將平板 培養基放入培養箱中進行培養，培養時間14 - 16小時，培養溫度36 - 38度。(5)抑菌圈的測量將培養後的平板從培養箱中取出，用遊標卡尺對每一個抑菌圈 進行測量，根據菌種選育確定的數量，優先選擇抑菌圈大的菌株進行下一步的生物效價確 認。實施例試驗數據一
發酵時實際效 間 價 抑菌,直徑 平均值
丄2Hmm
140小吋 20356u/ml 2「 23,58i_ 23.42mm
1 2 丄 l:5inm 87小時 11708u/ml 2._21.29min 21.22mm
試驗數據一中採用的是兩個效價差別大的樣進行對比，是在不同批次，不同發酵時間 的完成的取樣，從表中數據顯示，效價高的其抑菌圈直徑大，效價低的其抑菌圈直徑小。實施例試驗數據二
樣品序樣品效平均直
號 價 圈1直徑圈2直徑徑
1號樣 11946u^ml 22.52mm 22.86mm22.69mm
2號樣 9233u/ml 22.39mm 22.26mm22.32mm 3號樣-8273uM ■ 22.IOmrn Tl.85mm"207η τη 4號樣『11979'j/ml~2J3mm ~58mm22.45mm ？號祥 10674u/ml 22.24mm 22.21mm22.22mm 石號樣 9134ii/ml 21.86mm 21.38mm21.62mm
從試驗數據二可以看到不同效價的樣，其效價高的抑菌圈直徑大，效價低的抑菌圈直 徑小。規律性較強，通過這一規律，可完成新黴素菌種選育快速篩選。
權利要求
一種新黴素菌種選育快速篩選方法，其特徵在於包括以下步驟(1)接種發酵瓶在無菌室內採用挖塊接種法將新黴素單菌落斜面接於發酵瓶，將發酵瓶放入搖床上振搖，搖床轉速250轉/分；溫度35±2度；培養時間135 140小時，完成發酵瓶接種；(2)發酵液過濾將發酵到終點的發酵瓶進行過濾，取其過濾液；(3)平板的培養基的準備將生物檢定培養基預熱融化，在無菌室內倒入平板內，待培養基凝固後，再倒入內含敏感菌的檢定培養基；(4)直接點樣將多個用濾紙製作成圓形紙片放置於平板培養基上，用進樣器吸取發酵液的過濾液直接點在圓形紙片上，所有樣品點完後，將平板培養基放入培養箱中進行培養，培養時間14 16小時，培養溫度36 38度；(5)抑菌圈的測量將培養24小時的平板從培養箱中取出，對每個抑菌圈進行測量，根據菌種選育確定的數量，優先選擇抑菌圈大的菌株進行生物效價確認，完成新黴素菌種選育快速篩選。
2.根據權利要求1所述的新黴素菌種選育快速篩選方法，其特徵在於控制培養基厚 度在2-3mm之間。
3.根據權利要求1所述的新黴素菌種選育快速篩選方法，其特徵在於控制檢定培養 基的厚度在2-3mm之間。
4.根據權利要求1所述的新黴素菌種選育快速篩選方法，其特徵在於檢定培養基中 的敏感菌為金黃色葡萄球菌。
全文摘要
一種新黴素菌種選育快速篩選方法，通過接種發酵瓶、發酵液過濾、平板的培養基的準備、直接點樣和抑菌圈的測量的步驟，根據菌種選育確定的數量，優先選擇抑菌圈大的菌株進行生物效價確認，完成新黴素菌種選育快速篩選。本發明提供的新黴素菌種選育快速篩選方法，從而縮短菌種選育的周期，以前菌種選育周期要用5周時間，現在僅用一周時間，菌種篩選效率提高的80%；本發明提高菌種篩選效率和選育優良菌種的準確性，從而為新黴素發酵生產提供優良的菌種，為提高和穩定發酵生產水平提供了可靠保證。
文檔編號C12N1/00GK101974435SQ201010545450
公開日2011年2月16日 申請日期2010年11月16日 優先權日2010年11月16日
發明者何連明 申請人:宜昌三峽製藥有限公司