一種防癌抗癌益生菌製劑及其製備方法與流程
2023-10-09 12:51:44 2
本發明涉及一種益生菌製劑領域，具體涉及一種防癌抗癌益生菌組合物及其製備方法。技術背景肝癌是全球常見的惡性腫瘤之一，發病率居所有腫瘤的第7位，病死率居第3位；在男性人群中，其發病率居第5位，病死率居第2位。目前，大部分早期肝癌可通過手術、射頻消融和肝動脈化學療法栓塞等方法治癒，但很多患者被發現時已處於肝癌晚期，同時對放射療法和化學療法缺乏敏感性，預後很差，因而研究肝癌與腸道微生態的關係可能是肝癌早期診治的新策略。腸道微生態紊亂促進肝癌進展。Fox等分別在致癌化合物和肝炎病毒轉基因誘導的小鼠肝癌模型中發現，腸道微生態與肝癌形成風險密切相關，這一發現為肝癌風險評估和預防提供了理論支持。Dapito等率先指出，腸道微生態和TLR4通過增加肝臟有絲分裂原免疫調節的表達和阻礙凋亡來促進肝癌進展，而腸道無菌狀態則有效抑制肝癌的發展，明顯減少肝癌體積，這表明腸道微生態可作為晚期肝病向肝癌進展的治療靶標。Zhang等在通過致癌化合物誘導的肝癌模型中發現了腸道微生態在肝癌發生、發展機制中的重要性，通過益生菌對腸道微生態進行適度調節，這可能成為一種新型的阻止肝癌進展的方法。隨後，Yoshimoto等報導，在小鼠肝癌模型中，高脂肪飲食會增加腫瘤的發生概率。高脂肪飲食改變了腸道細菌的組成，導致"脫氧膽酸"生成增加，後者是微生物膽汁酸代謝的副產品，會造成DNA損傷。這些發現表明飲食、微生物群和癌症之間的複雜的機制性聯繫，也提示了以腸道微生態為作用靶點的新型治療方法。然而，目前有關臨床肝癌患者腸道微生態的變化還鮮見報導，是亟待研究的重要問題。益生菌是一類對宿主有益的活性微生物，是定植於人體腸道、生殖系統內，能產生確切健康功效從而改善宿主微生態平衡、發揮有益作用的活性有益微生物的總稱。當人體內有足夠的益生菌時，人就會處於健康的狀態，但是一旦體內菌群失去平衡，比如菌種間比例發生大幅變化或者超出正常數值時，那麼腹瀉、過敏、胃口不佳、疲倦、免疫力低等一系列病症就會隨之而來，人體的健康就會亮紅燈，而這時適當添加益生菌或益生元，協助體內菌群平衡，才能讓人重現健康狀態。在正常情況下，成年人體內的有益菌群同有害菌群之間處於相對平衡狀態。一旦平衡受到破壞，如服用抗生素、放療、化療、情緒壓抑、身體衰弱、缺乏免疫力等等，就會導致雙歧桿菌大量消亡，而有害細菌卻大量繁殖，後果是，人體健康處於不佳狀態：對疾病的抵抗力降低，產氣莢膜梭茵等腐敗細菌在腸道中分解食物殘渣成分，產生氨、胺類、硫化氫、糞臭素、吲哚、亞硝酸鹽、細菌毒素等有害物質，人體長期吸收會引起腸功能紊亂，導致便秘、腹瀉、發育受阻、肝臟受損以及動脈硬化、膽固醇增加、血壓升高、免疫力下降，甚至誘發癌症。國內外學者報告雙歧桿菌具有激活機體巨噬細胞或LAK細胞的吞噬活性，並產生一定量的細胸因子如TNF—α、INF—γ等可直接殺死腫瘤細胞。抑制腫瘤內血管形成，破壞腫瘤組織微血管，最終導致出血、壞死。雙歧桿菌等生理性細菌可通過腫瘤細胞凋亡的表達的相關基因，誘導腫瘤細胞的凋亡而達到抑制腫瘤生長的作用。誘導腫瘤細胞的老化和異質化，以便促使機體內LAK和天噬細胞的識別和捕殺，達到清除腫瘤細胞的目的。可以增加機體對放療的放射線的耐受性，改善放化療患者的噁心、嘔吐等胃腸道副作用。2015年一篇發表在Science雜誌上的文章：CommensalBifidobacteriumpromotesantitumorimmunityandfacilitatesanti-PD-L1efficacy，揭示共生的雙歧桿菌提高抗腫瘤免疫力，並且促進抗PD-L1腫瘤免疫療法的效果。由此可見益生菌對於人體的防癌抗癌具有十分重要的作用，但是目前市場上從益生菌出發製備的防癌抗癌的藥物較少。技術實現要素：針對上述問題，本發明提供一種防癌抗癌益生菌製劑及其製備方法，通過食用益生菌製劑，對於易感人群具有防癌的效果，對於癌症患者，可以通過食療抵抗癌症，達到防癌抗癌的效果，。為實現上述目的本發明所採用的技術方案如下：一種防癌抗癌益生菌製劑，該益生菌製劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素。進一步，該益生菌製劑各成分的質量分數為：益生菌5％～7％；益生元10％～20％；膳食纖維60％～75％；無水葡萄糖5％～10％；維生素1％～3％。進一步，上述益生菌為乳雙歧桿菌、長雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、嗜酸乳桿菌、唾液乳桿菌、植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、乾酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、短乳酸桿菌中的三種或者三種種以上混合而成；其中，益生菌活菌量為109～1011CFU/g。進一步，上述益生菌為嗜酸乳桿菌、乳雙歧桿菌、長雙歧桿菌、青春雙歧桿菌混合而成。進一步，上述益生元為低聚果糖、低聚乳果糖、低聚半乳糖中的任一種或兩種混合而成。進一步，上述益生元為低聚果糖、低聚半乳糖混合而成。進一步，上述維生素為維生素B1、維生素B12、維生素D2、維生素D3、維生素A、維生素C、維生素E中的任意四種或者四種以上混合而成。進一步，上述維生素為維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E混合而成。進一步，上述膳食纖維為低聚木糖、蘋果果膠、柚皮果膠、藍莓果膠中任意兩種或者兩種以上混合而成。一種製備上述益生菌製劑的方法，包括如下步驟：1)按配方量將益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素依次置於無菌混合機內，混合均勻；2)使用全自動膠囊充填機充填步驟1)完成後的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機清除吸附在膠囊外壁上的細粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。雙歧桿菌和乳酸菌等有益細菌則在抑制人體有害細菌的生長繁殖，抵抗病原茵的感染，合成人體需要的維生素，促進人體對礦物質的吸收，產生醋酸、丙酸、丁酸和乳酸等有機酸刺激腸道蠕動，促進排便，防止便秘以及抑制腸道腐敗作用、淨化腸道環境、分解致癌物質、刺激人體免疫系統，從而提高抗病能力、降低血液膽固醇、延緩衰老等方面有著重要作用。大凡腸道中雙歧桿菌多的人身體比較健康，而腐敗細菌多的人，身體衰弱多病。因此可以說，腸道中雙歧桿菌的多少，是判斷人體健康的晴雨表。雙歧桿菌有體內結合黃麴黴素能力。此外雙歧桿菌可以與亞硝酸胺或亞硝基胍等誘導劑發生結合，掩蓋誘變劑的活性基因，或使誘變劑活性基因降解，致其推動活性。雙歧桿菌與煙燻肉或油炸食品誘變原具有高吸附性，從而保護機體細胞免受這些致癌物質損害。雙歧桿菌可通過調整腸道正常菌群，抑制腸道許多腐敗菌生長，從而減少一些致癌物質產生，從而大大降低了消化道癌症的發生率。膳食纖維是是一種多糖。可溶性膳食纖維在胃腸道內和澱粉等碳水化合物交織在一起，並延緩後者的吸收；不可溶性膳食纖維可促進人體胃腸道蠕動，加快食物通過胃腸道，減少吸收；大腸中的不可溶性纖維還可以吸收水分軟化大便，從而防治便秘。相比現有技術，本發明的有益效果在於：1.本發明所述的益生菌製劑針對癌症易感人群和癌症患者，對於易感人群具有防癌的效果，對於癌症患者，可以配合現有的醫療手段，進行癌症的食療；2.除益生菌外，本發明還添加了益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素等物質作為補充，可有效改善益生菌定植環境，增強益生菌抗癌效果；3.本發明最終製備的益生菌製劑混合物將以腸溶膠囊為載體，克服了益生菌食用後經胃酸、膽汁等極端環境後到達腸道定植的低活菌率，從而利於益生菌發揮腸道保健作用。具體實施方式下面結合具體的實施方式對本發明作進一步詳細說明。實施例1一種防癌抗癌益生菌製劑，該益生菌製劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素，該益生菌製劑各組分的含量分別如下：嗜酸乳桿菌、乳雙歧桿菌、長雙歧桿菌、青春雙歧桿菌(重量比1:1:1:1)750g；低聚果糖、低聚半乳糖(重量比1:1)1350g；低聚木糖、蘋果果膠(重量比1:1)9500g；無水葡萄糖1050g；維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E(重量比1:1:1:1)350g；通過以下方法製備而成：1)按配方量將嗜酸乳桿菌、長雙歧桿菌、乳雙歧桿菌、青春雙歧桿菌、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、蘋果果膠、無水葡萄糖維生素A、維生素B1、維生素C、維生素E依次置於無菌混合機內，混合均勻；2)使用全自動膠囊充填機充填步驟1)完成後的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機清除吸附在膠囊外壁上的細粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。將上述製備的防癌抗癌益生菌製劑進行一系列實驗和測試。1、益生菌計數將裝好的5g的益生菌膠囊用5ml的無菌水溶解，取出100μL，用無菌水稀釋10-8，取出3份稀釋後的100μL益生菌溶液，分別加入3個瓊脂糖培養皿中，進行益生菌的計數，計數方法參照GB4789.2-2010，各益生菌活菌平均數如表1所示。表1益生菌活菌數活菌名稱稀釋度平均數檢測結果(CFU)青春雙歧桿菌10-8181.8×109乳雙歧桿菌10-8202×109長雙歧桿菌10-81151.15×1010嗜酸乳桿菌10-8535.3×109註：菌落形成單位(CFU，Colony-FormingUnits)指單位體積中的活菌個數；稀釋度:益生菌用無菌水稀釋的倍數；平均數:3個瓊脂培養皿中，每種益生菌的平均克隆數。2、殺瘤實驗1)實驗將HepG2細胞、收集，計數；2)用對應的培養基調整細胞數量為4000cell/200ul，鋪於96孔板中，共鋪3個孔；將5g的益生菌溶解於5ml無菌水中，取5μL、10μL、20μL無菌水溶解的益生菌，分別加入三孔中，37℃培養箱中培養2小時；2)向每孔中加入20μLMTT溶液，放於37℃孵育；3)觀察是否有甲瓚生成，向每孔中加入100μL三聯液，於37℃孵育過夜；4)第二天早上於酶標儀OD595檢測其吸光度，進行數據處理。註：MTT全稱3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazoliumbromide，商品名:噻唑藍，是一種黃顏色的染料。活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT，同時在細胞色素C的作用下，生成藍色(或藍紫色)不溶於水的甲臢(Formazan)，甲臢的多少可以用酶標儀在570nm處進行測定。在通常情況下，甲臢生成量與活細胞數成正比，因此可根據光密度OD值推測出活細胞的數目。由於死細胞中不含琥珀酸脫氫酶，因此加入MTT不會有反應。如圖1所示為不同濃度的益生菌對HepG2細胞的抑制率，從圖中可以看到隨著益生菌加入量的增加對HepG2細胞的抑制率越高。3、裸鼠動物實驗1)培養HepG2細胞，製成細胞懸液，用生理鹽水調整細胞濃度為5*107cells/ml；2)用6號針頭的注射器取適量細胞懸液注射於裸鼠的皮下，每個接種部位注射0.2ml；3)4周後觀察到裸鼠成瘤，並記錄裸鼠的重量，成瘤大小；4)將裸鼠分成4組，第一組是空白對照組，餵食裸鼠純水；第二組為低劑量組，餵食裸鼠益生菌劑量為25mg/kg；第三組為中劑量組，餵食裸鼠益生菌劑量為50mg/kg；第四組為高劑量組，餵食裸鼠益生菌劑量為100mg/kg；5)連續餵食7天後，檢查裸鼠腫瘤情況。表2荷瘤裸鼠攝入益生菌結果評估表上表表明，服用益生菌的荷瘤裸鼠，腫瘤得到明顯控制。4、肝癌患者實驗招募10名肝癌的患者，連續30天服用益生菌，服用劑量為10g/Day。抽取患者的外周血，用ELISA方法檢測使用前後病人的CEA值(腫瘤指標)。表310例服用益生菌病人外周血CEA值從表中可以看出，服用防癌抗癌益生菌製劑後，病人的CEA值均降低，說明該防癌抗癌益生菌制可以減輕癌症患者的病症。實施例2一種防癌抗癌益生菌製劑，該益生菌製劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素，該益生菌製劑各組分的含量分別如下：嬰兒雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、唾液乳桿菌(重量比2:1:1)1050g；低聚半乳糖1500g；低聚木糖、柚皮果膠(重量比3:1)10500g；無水葡萄糖1500g；維生素B12、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C(重量比1:2:1:3)450g。通過以下方法製備而成：1)按配方量將嬰兒雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌、唾液乳桿菌、低聚半乳糖、低聚木糖、柚皮果膠、無水葡萄糖1500g、維生素B12、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C依次置於無菌混合機內，混合均勻；2)使用全自動膠囊充填機充填步驟1)完成後的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機清除吸附在膠囊外壁上的細粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。實施例3一種防癌抗癌益生菌製劑，該益生菌製劑包含益生菌、益生元、膳食纖維、無水葡萄糖、維生素，該益生菌製劑各組分的含量分別如下：植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、乾酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、短乳酸桿菌(重量比1:1:1:2:2)750g；低聚果糖、低聚半乳糖(重量比1:2)2250g；低聚木糖、蘋果果膠、藍莓果膠(重量比2:1：1)11250g；無水葡萄糖600g；維生素A、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C(重量比1:2:1:1)150g。通過以下方法製備而成：按配方量將植物乳桿菌、羅伊氏乳桿菌、乾酪乳桿菌、瑞士乳桿菌、短乳酸桿菌、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、蘋果果膠、藍莓果膠、無水葡萄糖、維生素A、維生素D2、維生素D3、維生素E、維生素C依次置於無菌混合機內，混合均勻；2)使用全自動膠囊充填機充填步驟1)完成後的混合物，填充好的腸溶膠囊使用膠囊拋光機清除吸附在膠囊外壁上的細粉，使膠囊光潔，無菌下包裝。上述實施方式僅為本發明的優選實施方式，不能以此來限定本發明保護的範圍，本領域的技術人員在發明的基礎上所做的任何非實質性的變化及替換均屬於本發明所要求保護的範圍。當前第1頁1 2 3