一種異喹啉生物鹼的鹽的降糖降脂保肝的用途的製作方法
2023-10-10 01:29:39
本發明涉及天然藥物領域，涉及一種異喹啉生物鹼的鹽的降糖降脂保肝的用途，具體涉及黃柏鹼的鹽的降糖降脂保肝的用途。
背景技術：
糖尿病是一種由於胰島素分泌缺陷及(或)其生物學作用障礙引起的以高血糖為特徵的代謝疾病，是在遺傳基礎上，有環境因素參與的遺傳易感性疾病，是一種慢性全身性代謝疾病，嚴重危害人類健康，積極開展糖尿病的防治工作已成為主要的社會公共衛生問題。
I型糖尿病的發病原因主要是由於胰島素分泌絕對缺少，II型糖尿病是從胰島素抵抗為主伴胰島素相對不足到胰島素分泌不足為主伴胰島素抵抗的病理過程。目前公認II型糖尿病是一種在環境因素、生活方式的改變的作用下由多個基因分別或相互作用所導致的複雜遺傳病，但是II型糖尿病的病因尚未完全闡明。
西醫目前常採用飲食、運動療法磺醯脲類、雙胍類、噻唑烷二酮類、α-葡萄糖苷酶抑制劑、瑞格列奈、胰島素等來治療II型糖尿病，僅噻唑烷二酮類可改善胰島素抵抗。病人在用西藥治療的同時，又不斷地出現動脈硬化、冠心病和高血壓等併發症，II型糖尿病的複雜機制及其導致的全身病變是西藥治療的薄弱環節。不論是磺脈類的促泌劑還是噻唑烷二酮類的增敏劑在實驗和臨床研究中都不具備明顯的減肥功效，而肥胖是II型糖尿病乃至代謝症候群的重要病理基礎。
II型糖尿病不僅是糖代謝紊亂疾病，還是脂肪代謝紊亂疾病。肥胖引起的II型糖尿病患者通常都有高糖和高脂飲食，並常伴有高脂血症。有研究表明提示血糖「正常」的肥胖患者已有β細胞分泌功能的異常。但是，大部分的肥胖者並不發展為糖尿病，說明機體的自身狀況起重要作用。在同樣的毒性作用下，易感人群很容易發展成II型糖尿病，而不敏感人群可能終身不發病，或者延遲發病。現代醫學並不能夠改變機體的易感性，但可以通過改變生活方式，減肥等手段來儘可能地減少早期的誘因，儘量的延長代償期，從而延遲II型糖尿病 的發生，甚至避免發病。
現代II型糖尿病的治療觀點已從已往的單純控制血糖轉為降糖、降脂、降壓、改善胰島素抵抗等多環節治療。但是，對於II型糖尿病患者，藥量需逐漸增加，投藥種類也常由單一用藥逐漸變為聯合用藥，這不可避免地要考慮藥物代謝對肝腎的副作用。故從傳統中藥中尋找低毒、療效肯定的天然藥物來治療是目前研糖尿病究熱點之一。
衛生部制定頒布的《中藥新藥治療消渴病(糖尿病)的臨床研究指導原則》中所制定的分類標準是目前採用最廣泛的分類方法，即陰虛熱盛證、氣陰兩虛證、陰陽兩虛證和血疲氣滯證四型。
黃柏為我國常用的傳統中藥，始載於《神農本草經》，原名「檗木」，列為上品，其性味苦、寒，主歸腎、膀胱經，具有清熱燥溼，灣火除蒸，解毒療疫之功效，用於溼熱汙痢，黃疸尿赤，帶下陰癢，熱淋淫痛，腳氣痿蹵，骨蒸勞熱，盜汗，遺精，腫毒，溼疹。現代藥理研究表明，黃柏具有抗菌、抗真菌、抗炎、抗肝炎、抗腎炎、抗潰病、抗氧化、抗痛風、降血壓、降血糖、抗腫瘤、抗心力衰竭、抑制細胞免疫等作用。目前黃柏製劑在臨床上已經廣泛運用，如治療鼻竇炎、急慢性膿耳、急慢性骨髓炎、慢性結腸炎、皮膚糜爛、膿拖性皮損、溼疫皮炎、潰竊性口腔炎、外痔腫痛、肛痛以及術後外洗、治療軟組織挫傷、消腫等病症。(《黃柏中黃柏鹼的提取純化工藝研究》，《西南交通大學碩士研究生學位論文》，羅鴻，2012年)。
黃柏鹼(Phellodendrine)是從芸香科植物黃柏(Phelhdendron chinensis Schneid.)、威氏黃柏的莖皮中提取分離出來的一種異喹啉生物鹼，其具有降血壓、抗腎炎、抑制細胞免疫反應、中樞神經抑制等作用。
黃柏鹼的藥理作用主要有：降壓作用，主要表現為靜注於貓和鼠和犬均可引起降壓，並能增強腎上腺素和去甲腎上腺素的升壓反應，抑制人工窒息及刺激迷走神經向中端的升壓反應，抑制刺激節前纖維而起的貓瞬膜收縮。隨劑量增大，降壓作用強度及持續時間也增加；植物神經阻斷作用，表現為黃柏鹼對中樞神經有抑制作用，能抑制小鼠的自發活動和各種反射；肌肉鬆馳作用；對細胞免疫應答期的誘導期有抑制作用。
《黃柏中幾種生物鹼的分離、鑑定及促胰島素分泌活性篩選》(《中國醫 藥指南》，2011年3月，第9卷，第7期，第54-55頁，周明偉、範明松、季宇斌、唐意紅)記載了：從黃柏的生物鹼部分分離得到3個化合物，分別為小檗鹼、藥根鹼、黃柏鹼。研究發現，在葡萄糖濃度為5.6mmol/L時，黃柏總鹼中的3種生物鹼對胰島素的分泌均無明顯的促進作用；而當葡萄糖濃度為16.7mmol/L時，小檗鹼能夠明顯的促進細胞的胰島素分泌。陽性藥格列美脲在低糖濃度和高糖濃度時，都能夠促進胰島素分泌。
未見有關黃柏鹼對於糖尿病有預防或治療作用的報導。
未見有關黃柏鹼對於高脂血症有預防或治療作用的報導。
未見有關黃柏鹼對於非酒精性脂肪肝有預防或治療作用的報導。
技術實現要素：
本發明公開一種異喹啉生物鹼的鹽的預防或治療糖尿病的用途；具體是黃柏鹼治療糖尿病的作用新用途，
本發明公開異喹啉生物鹼的鹽用於製備治療或預防糖尿病的組合物。
本發明公開的組合物，異喹啉生物鹼為黃柏鹼。
本發明公開的組合物，為市售或按已知方法製備的黃柏鹼或其藥用鹽、水合物或無水物。
本發明公開的黃柏鹼藥用鹽按照本領域的常規技術製備；
本發明公開的黃柏鹼藥用鹽按照如下方式製備，取黃柏鹼單體，用氯仿溶解，加入氯仿的酸溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到黃柏鹼的藥用鹽單體，用乙醇溶解，置冰箱放置，析晶，過濾乾燥，得到黃柏鹼的藥用鹽，純度達到98％以上。
本發明公開的組合物，其中黃柏鹼藥用鹽包括：無機酸鹽例如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽和磷酸鹽；有機酸鹽例如乙酸鹽，苯甲酸鹽，馬來酸鹽，富馬酸鹽，蘋果酸鹽，檸檬酸鹽，草酸鹽，乳酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，烷基磺酸鹽或芳基磺酸鹽，半胱氨酸鹽或其它胺基酸鹽。還包括鹼式鹽如鈉鹽、鉀鹽和鈣鹽。
水合物包括含n個結晶水，n＝1-12。
本發明公開的組合物，為：藥物、保健品、或功能性食品，賦形劑或載體為製藥或食品領域中常用的賦形劑或載體，如稀釋劑，崩解劑，潤滑劑等。
本發明中所述黃柏鹼的有效量可是目前黃柏鹼應用領域中的常用量或劑量。
本發明的黃柏鹼可通過口服或注射形式使用。
黃柏鹼的藥用鹽按照本領域的常規技術製備。
本發明用於製備預防或治療I型糖尿病的組合物。
本發明用於製備預防或治療II型糖尿病的組合物。
本發明用於製備保護胰島細胞、修復受損的胰島細胞的組合物。
本發明用於製備對抗胰島素抵抗的組合物。
本發明用於製備治療或預防高脂血症的組合物。
本發明用於製備治療或預防非酒精性脂肪肝的組合物。
本發明所述的黃柏鹼(Phellodendrine)，CAS號為6873-13-18，其分子式是C20H24NO4，相對分子質量342，具有式如下的結構：
非酒精性脂肪肝是一種無過量飲酒史，由各種原因引起的肝細胞內脂肪堆積，以肝細胞脂肪變性和脂質蓄積為主要特徵的臨床病理症候群，也是一種臨床常見病症。
在黃柏鹼的藥理活性研究中，本發明意外地發現黃柏鹼具有顯著的減低血糖作用。本發明通過(1)STZ造模的糖尿病小鼠，通過(2)高脂誘導的2型糖尿病動物模型(DIO小鼠)，進行了禁食血糖檢測(FBG)。
在黃柏鹼的藥理活性研究中，本發明意外地發現黃柏鹼具有顯著的減低血脂作用，意外地發現黃柏鹼能降低膽固醇，甘油三酯和低密度脂蛋白的水平，出人意料地發現黃柏鹼能提升高密度脂蛋白的水平，從而可用於預防和、或治療與高血脂有關的疾病或症狀。
在黃柏鹼的藥理活性研究中，本發明意外地發現黃柏鹼具有顯著的治療或預防非酒精性脂肪肝作用，意外地發現黃柏鹼有效緩解高脂飼料引起的非酒精 性脂肪肝變性，改善因脂肪變性而導致的肝功能損害。
基於上述發現，本發明現已完成。為了便於理解，下面通過附圖和具體實施例對本發明的黃柏鹼在治療糖尿病藥物中的用途進行詳細的描述。需要特別指出的是，具體實施例和附圖僅是為了說明，顯然本領域的技術人員可以根據本文說明，對本發明進行各種修正或改變，這些修正和改變也將納入本發明範圍之內。
附圖說明
圖1.黃柏鹼對I型糖尿病小鼠胰腺組織的影響
圖2.黃柏鹼對II型糖尿病小鼠口服糖耐量的影響
圖3.黃柏鹼對II型糖尿病小鼠胰島素耐量的影響
圖4.黃柏鹼對非酒精性脂肪肝小鼠肝臟組織的影響
圖1的詳細說明
圖1通過上中下三個部分展示黃柏鹼對I型糖尿病小鼠胰腺組織的影響；
圖1的上部展示正常組小鼠胰腺組織；
圖1的中部展示STZ組小鼠胰腺組織；
圖1的下部展示STZ+黃柏鹼組小鼠胰腺組織。
圖2的詳細說明
圖2展示黃柏鹼對II型糖尿病小鼠口服糖耐量的影響；
圖2中，control為正常飲食組，HFD為高脂飲食組，HFD+Phellodendrine為高脂+Phellodendrine組。
圖3的詳細說明
圖3展示黃柏鹼對II型糖尿病小鼠胰島素耐量的影響
圖3中，control為正常飲食組，HFD為高脂飲食組，HFD+Phellodendrine為高脂+Phellodendrine組。
圖4的詳細說明
圖4通過左上、右上、左下、右下四個部分展示黃柏鹼對非酒精性脂肪肝小鼠肝臟組織的影響；
圖4的左上部展示正常組小鼠肝臟組織；
圖4的右上部展示高脂組小鼠肝臟組織；
圖4的左下部展示洛伐他汀組小鼠肝臟組織；
圖4的右下部展示黃柏鹼小鼠肝臟組織。
本發明涉及如下表格
表1.黃柏鹼對STZ造模的I型糖尿病小鼠的禁食血糖的影響。
表2.黃柏鹼對STZ造模的小鼠胰島數目的影響
表3.黃柏鹼對高脂造模的II型糖尿病禁食血糖的影響
表4.正常組小鼠糖耐量原始數據及相應線下面積
表5.高脂組小鼠糖耐量原始數據及相應線下面積
表6.黃柏鹼治療高脂飲食小鼠糖耐量原始數據及線下面積
表7.黃柏鹼對口服糖耐量線下面積數據分析
表8.正常組小鼠糖胰島素耐量原始數據及線下面積
表9.高脂組小鼠糖胰島素耐量原始數據及線下面積
表10.黃柏鹼治療高脂飲食小鼠糖胰島素耐量原始數據
表11.黃柏鹼對高脂飲食小鼠糖胰島素耐量線下統計分析
表12.各組小鼠血脂指標的變化
表13.各組小鼠肝功能相關指標的變化
具體實施方式
實施例1
為了研究黃柏鹼對I型糖尿病血糖影響，本實驗採用經典的I型糖尿病模型，使用C57BL小鼠隨機分為3組，正常對照組(10隻)，STZ組(20隻)。STZ組連續腹腔注射STZ(50mg/Kg)5天，兩周後測定禁食血糖，血糖大於等於13.8mmol/L為造模成功，將STZ組隨機分為模型組和黃柏鹼治療組，黃柏鹼治療組採用口服灌胃(15mg/kg)10周後，禁食4h後測定禁食血糖結果如圖1所示，具有顯著的統計學差異。
動物的一般情況：
動物正常飲食飲水，毛髮，活動，精神狀態均正常
表1.黃柏鹼對STZ造模的I型糖尿病血糖的影響.
註：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與STZ組相比。
表1.結果表明，STZ組空腹血糖均值為23mM，顯著高於正常組7.35，顯示造模良好，黃柏鹼能夠有效的降低STZ造成的I型糖尿病的血糖，顯示具有良好的降糖效果，
表2.黃柏鹼對STZ造模的小鼠胰島數目的影響
註：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與STZ組相比。
表2.是隨機選取胰腺病理切片9個視野進行統計結果顯示，結果顯示STZ造模有效的損傷的胰腺組織，分泌胰島素的胰島數目顯著低於正常組，治療後胰島數目一定程度恢復了。附圖1的結果顯示STZ造模後胰腺萎縮，組織結構壞死，通過黃柏鹼治療後胰島組織形態結構恢復明顯。圖1.和表1.的結果提示我們黃柏鹼治療糖尿病可能是通過修復了胰腺的器質性損傷。註：標尺為20μm，放大倍數400倍。
實施例2
為了研究黃柏鹼對II型糖尿病的影響，本實驗採用經典的II型糖尿病模型，使用C57BL小鼠隨機分為3組，正常對照組(10隻)，高脂飲食組(10隻)，黃柏鹼治療組(10隻)，其中高脂飲食組和黃柏鹼治療組採用高脂飲食(基礎飼料加入20％豬油)造模8周，黃柏鹼治療組在高脂飲食同時採用口服灌胃(50mg/kg)方式給藥，給藥結束後測定禁食過夜測定、空腹血糖、葡萄糖耐量和胰島素耐量。實驗數據進行方差分析，結果以x±s表示。結果顯示，黃柏鹼治療效果明顯，具有顯著統計學差異。
實驗結果：
表3.黃柏鹼對高脂造模的II型糖尿病禁食血糖的影響
註：***P＜0.001，與正常組相比；*P＜0.05，***P＜0.001，與高脂組相比
糖耐量試驗是一種口服葡萄糖負荷試驗，用以了解機體對進食葡萄糖後的血糖調節能力。通過糖耐量試驗，可以早期發現糖代謝異常，是目前公認的診斷糖尿病的金標準，在血糖增高但尚未達到糖尿病診斷標準時，為明確是否患糖尿病，可以採用OGTT進行鑑別診斷。正常情況下，機體有一套維持血糖的機制，口服葡萄糖，血糖短暫升高後迅速恢復正常，即糖耐量正常，相應的口服糖耐量曲線線下面積較小，糖尿病患者糖的利用障礙，口服葡萄糖後血糖迅速升高，血糖下降速度較慢，即糖耐量減退相應的線下面積較大，該實驗中糖耐量減退
如圖2.所示黃柏鹼治療組和正常組的糖耐量曲線均在模型組曲線下，相應的線下面積也均低於模型組，且具有統計意義。
糖耐量實驗方法：小鼠禁食過夜，小鼠口服血糖2g/kg後分別在0，15，30，60，90，120min時，尾尖採血測定相應血糖，使用GraphPad Prism軟體計算相應線下而積(AUC)
胰島素耐受實驗方法：小鼠禁食過夜，小鼠腹腔注射胰島素0.75IU/kg後分別在0，30，60，90，120，150min時，尾尖採血測定相應血糖，使用GraphPad Prism軟體計算相應線下面積(AUC)
糖耐量原始數據如下：
表4.正常組小鼠糖耐量原始數據
表5.高脂組小鼠糖耐量原始數及相應線下面積
表6.黃柏鹼治療高脂飲食小鼠糖耐量原始數及線下面積
圖2.黃柏鹼對II型糖尿病小鼠口服糖耐量的影響
註：control為正常飲食組，HFD為高脂飲食組，HFD+Phellodendrine組為高脂
表7.黃柏鹼對口服糖耐量線下面積數據分析
胰島素耐量試驗是反映機體對胰島素敏感性的實驗，II型糖尿病的主要特徵為 胰島素抵抗，對胰島素敏感性降低，即注射相同胰島素相同時間內血糖高於正常機體，如圖3所示，高脂造模後對胰島素敏感性降低，注射相同量的胰島素後各個點的血糖值均高於正常組，其相應的線下面積也高於正常組，給予黃柏鹼治療後各個時間點的血糖數值低於模型組，相應線下面積低於高脂誘導的模型組。結果表明黃柏鹼能夠有效的增加胰島素敏感性改善糖尿病。
表8.正常組小鼠糖胰島素耐量原始數據
表9.高脂組小鼠糖胰島素耐量原始數據
表10.黃柏鹼治療組小鼠糖胰島素耐量原始數據
圖3.黃柏鹼對II型糖尿病小鼠胰島素耐量的影響
表11.黃柏鹼對II型糖尿病小鼠糖胰島素耐量線下統計分析
註：*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，與高脂組比較
可見：與正常組相比，模型組小鼠空腹血糖值顯著升高，說明II型糖尿病模型造模成功。同時，與模型組相比，黃柏鹼有顯著的降低空腹血糖的作用和增加葡萄糖耐受、增強胰島素敏感性。
實施例3
黃柏鹼對高脂血症和非酒精性脂肪肝的治療作用
實驗動物及方法：
C57BL小鼠，SPF級，雄性，體重(20±2)g，隨機分成兩組，第一組12隻，為正常組，給與正常飼料，其餘小鼠(44隻)分為第二組，給與高脂飼料(基礎飼料加入20％豬油，1.25％膽固醇，0.5％的膽酸鈉)自由攝食、飲水。連續餵養8周後，從正常對照組和脂肪肝模型組分別處死4隻小鼠，比較兩組小鼠的血清和肝臟生化指標，以及肝臟組織病理切片，判斷非酒精性脂肪肝模型小鼠是否建立成功。
將造模成功小鼠32隻隨機分為4組，分別為正常對照組(8隻)，模型組(8隻)，黃柏鹼治療組(8隻)，陽性對照組(洛伐他汀組8隻)，連續灌胃給藥8周。給藥期間，除正常對照組標準飼料飼養外，其餘各組繼續給予高脂飲食，直到實驗結束。黃柏鹼治療組在高脂飲食同時採用口服灌胃(50mg/kg)方式給藥，陽性對照組在高脂飲食同時採用口服灌胃洛伐他汀(60mg/kg)方式給藥)
1、觀察指標：
a動物的一般情況
實驗動物在SPF動物房中飼養，12h光照12h黑夜，自由飲食飲水，實驗期間動物狀態正常。
b肝功能相關指標：血清ALT、AST，
c血脂相關指標：TC、TG、HDL、LDL
d病理學檢查：HE染色
2、實驗結果：
結果表明：黃柏鹼均可明顯降低血漿中的總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)，升高高密度脂蛋白(HDL)，降低低密度脂蛋白(LDL)，降低血漿中天門冬氨酸轉氨酶(AST)，丙氨酸轉氨酶(ALT)，病理切片結果顯示有效緩解高脂飼料引起的非酒精性脂肪肝變性，改善因脂肪變性而導致的肝功能損害。
給藥結束後測定小鼠、血脂水平。實驗數據進行方差分析，結果以x±s表示。
結果顯示，黃柏鹼對降低高脂效果明顯，具有顯著統計學差異。
表12.各組小鼠血脂指標的變化
表13各組小鼠肝功能相關指標的變化
實施例4
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M HCL氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到鹽酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到鹽酸黃柏鹼單體。
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M H2SO4氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到硫酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到硫酸黃柏鹼單體。
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M磷酸氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到磷酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到磷酸黃柏鹼單體。
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M果酸氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到果酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到果酸黃柏鹼單體。
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M草酸氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到草酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到草酸黃柏鹼單體。
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M琥珀酸氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到琥珀酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到琥珀酸黃柏鹼單體。
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M醋酸氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到醋酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到醋酸黃柏鹼單體。
黃柏鹼單體(純度在91％～92％)100mg，先用10ml氯仿溶解，加入10mL0.1M丙酸氯仿溶液，析出沉澱，過濾乾燥，得到丙酸黃柏鹼單體，用1ml乙醇溶解，過濾，濾液置冰箱4℃條件下放置24h，析晶，過濾乾燥，得到丙酸黃柏鹼單體。