土牛膝提取物的提取方法
2023-10-09 12:23:14 2
土牛膝提取物的提取方法
【專利摘要】本發明涉及醫藥【技術領域】，特別涉及土牛膝提取物的提取方法。該提取方法獲得的土牛膝提取物，可以用於製備治療酒精性肝炎藥物。本發明提供的土牛膝提取物能夠有效治療酒精性肝炎。
【專利說明】土牛膝提取物的提取方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於醫藥【技術領域】，具體涉及一種土牛膝提取物的提取方法。
【背景技術】
[0002] 酒精性肝炎是由於長期大量飲酒導致的肝臟疾病，嚴重酗酒時可誘發廣泛性肝細 胞壞死甚至肝衰竭。該病是我國的常見肝臟疾病之一。嚴重危害人民的身體健康。酒精性 肝炎也是酒精性肝病的一個臨床分型，是短期內肝細胞大量壞死引起的一組臨床病理綜合 徵，可發生在有或無肝硬化的基礎上，主要表現為血清ALT、AST升高和血清總膽紅素明顯 增高，可伴有發熱、外周血中性粒細胞升高。重症酒精性肝炎是指酒精性肝炎患者出現肝衰 竭的表現，如凝血機制障礙、黃疸、肝性腦病、急性腎衰竭、上消化道出血等，常伴有內毒素 血症。
[0003] 酒精性肝炎最主要的臨床表現是迅速出現黃疸，其他的症狀和體徵包括發熱、腹 水、近端肌肉鬆弛等，重症酒精性肝炎患者可出現肝性腦病。通常，酒精性肝炎患者的肝臟 增大、肝臟觸痛陽性。實驗室研究顯示，酒精性肝炎患者特徵性表現為：AST常>2倍正常值 上限，但很少>300U/ml。而血清ALT較低，AST/ALT通常>2,但此特徵不具特異性及靈敏 性。同時外周血白細胞、中性粒細胞計數、血清總膽紅素和國際標準化比值（International normalized ratio. INR)升高。血清肌酐水平升高，預示預後不良，因為這常常預示著肝 腎症候群的發生乃至死亡的臨近。
[0004] 目前治療酒精性肝炎的藥物主要有糖皮質激素、己酮可可鹼及其他藥物等，其中 糖皮質激素通過部分抑制轉錄因子如AP-I和NF-KB的活性，來終止炎症過程，可改善重症 酒精性肝炎。但糖皮質激素治療酒精性肝炎尚存爭議，而對於急性重型酒精性肝炎患者，使 用糖皮質激素會有較高的死亡率。而己酮可可鹼是磷酸二酯酶的抑制劑，具有多種效應，包 括調節TNF的轉錄、降低酒精性肝炎患者短期病死率。但有多重不良反應，其中以消化道症 狀如腹瀉、嘔吐、上腹部疼痛最先出現，其他不良反應症狀包括頭疼、皮膚紅疹、自發性細菌 性腹膜炎、尿道感染等。其他藥物治療主要是直接補充細胞膜的成分包括外源性補充多烯 磷脂醯膽鹼、促進內源性磷脂醯膽鹼（S-腺苷蛋氨酸）和穀胱甘肽生成等。這類藥物還是 細胞膜信使（如磷酸肌醇）的重要成分，且具有抗氧化作用。甘草酸製劑可抑制CS降解 酶，使內源性CS增加，具有抗炎、抗毒、抗過敏的作用。奶薊中提取的活性成分水飛薊素具 有較強的抗氧化、抗纖維化的作用。但上述藥物均不能從根本上治癒酒精性肝炎。因此研 究開發低毒、安全、有效的酒精性肝炎治療藥物意義重大。
[0005] 土牛膝為覽科植物粗毛牛膝JcAJrafliAe1S 35/76?/? L.的乾燥根及根莖。土牛膝臨 床運用歷史悠久，其味微苦酸，性寒，無毒；歸肝、腎經，具有活血祛瘀；瀉火解毒；利尿通淋 的功能。主要用於閉經；跌打損傷；風溼關節痛；痢疾；白喉；咽喉腫痛；瘡癰；淋證；水腫 等。但用土牛膝或土牛膝提取物製備治療酒精性肝炎的藥物尚未見報導。
【發明內容】
[0006] 本發明的目的是提供一種土牛膝提取物的提取方法。該提取方法獲得的土牛膝提 取物，可以用於製備治療酒精性肝炎藥物。
[0007] 為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案： 本發明提供了一種土牛膝提取物的提取方法，包括如下步驟： 步驟1 :取土牛膝，加乙醇和乙醚的混合溶液回流提取，回收乙醇和乙醚，過濾，得到藥 渣； 步驟2 :取所述藥渣加水提取，過濾後收集濾液，經第一濃縮至相對密度為1. 12? 1. 15,獲得第一浸膏； 步驟3 :取所述第一浸膏與氯仿和正丁醇的混合溶液經Sevage法脫蛋白，收集水層，經 第二濃縮至相對密度為1. 20?1. 23,即得； Sevage法：利用蛋白質在三氯乙燒等有機溶劑中變性的特點，將提取液與Sevage試 劑[氯仿：正丁醇=5 : 1(V/V)]按照體積比為I : 1混合，振蕩，離心，變性後的蛋白質 介於提取液與Sevage試劑交界處。此法的優點是條件溫和，不會引起多糖的變性。
[0008] 本發明中，所述土牛膝為覽科植物粗毛牛膝JcAJrafliAe1S 35/76?/? L.的乾燥根及 根莖。
[0009] 本發明步驟1中，以g/mL計，所述乙醇和乙醚的混合溶液中乙醇和乙醚的體積比 為1 : 9;所述土牛膝和混合溶液體積比為I : 10?30。
[0010] 本發明步驟2中，以g/mL計，所述藥漁與水的質量體積比為I : 10?40。所 述混合溶液中氯仿和正丁醇的體積比為5 : 1;所述第一浸膏與所述混合溶液的體積比為 1 ： 1〇
[0011] 本發明步驟3中，所述混合溶液中氯仿和正丁醇的體積比為5 : 1 ;所述第一浸膏 與所述混合溶液的體積比為1 : 1。
[0012] 本發明中，所述第一濃縮或第二濃縮為在70?80°C，真空度為0. 04?0. 06MPa 的條件下濃縮。
[0013] 本發明還提供了上述提取方法獲得的土牛膝提取物。
[0014] 本發明還提供了上述提取方法獲得的土牛膝提取物在製備治療酒精性肝炎中的 應用。
[0015] 本發明提供了一種土牛膝提取物的提取方法。該提取方法獲得的土牛膝提取物可 以用於製備治療酒精性肝炎藥物。本發明提供的土牛膝提取物具有治療酒精性肝炎的作 用。
【具體實施方式】
[0016] 為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對 本發明作進一步的詳細說明。
[0017] 本發明提供的土牛膝提取物的提取方法中，所用原料及試劑均可由市場購得。
[0018] 實施例1 : 取土牛膝藥材l〇〇g，粉碎後加15倍量乙醇和乙醚的混合溶液回流提取（乙醇和乙醚 的體積比為1 : 9)30分鐘，回收乙醇和乙醚，過濾，得到藥渣，藥渣加10倍水提取，煎煮 30分鐘，過濾後收集濾液，在溫度為80°C，真空度為0. 06MPa的條件下濃縮至相對密度 I. 15(80°C)，加入同體積的氯仿和正丁醇的混合溶液(氯仿和正丁醇的體積比為5 : 1)，除 去中間白色絮狀沉澱，取水層在溫度為80°C，真空度為0. 06MPa的條件下濃縮至相對密度 為1. 23 (80°C )，獲得土牛膝提取物21g。
[0019] 實施例2: 取土牛膝藥材l〇〇g，粉碎後加10倍量乙醇和乙醚的混合溶液回流提取（乙醇和乙 醚的體積比為1:9 ) 40分鐘，回收乙醇和乙醚，過濾，得到藥渣，藥渣加20倍水提取，煎煮 20分鐘，過濾後收集濾液，在溫度為70°C，真空度為0. 06MPa的條件下濃縮至相對密度 I. 12(80°C)，加入同體積的氯仿和正丁醇的混合溶液(氯仿和正丁醇的體積比為5 : 1)，除 去中間白色絮狀沉澱，取水層在溫度為80°C，真空度為0. 06MPa的條件下濃縮至相對密度 為1. 20 (80°C )，獲得土牛膝提取物23g。
[0020] 實施例3 : 取土牛膝藥材10 0 g，粉碎後加3 0倍量乙醇和乙醚的混合溶液回流提取（乙醇和乙 醚的體積比為1:9) 20分鐘，回收乙醇和乙醚，過濾，得到藥渣，藥渣加40倍水提取，煎煮 40分鐘，過濾後收集濾液，在溫度為80°C，真空度為0. 06MPa的條件下濃縮至相對密度 I. 13(80°C)，加入同體積的氯仿和正丁醇的混合溶液(氯仿和正丁醇的體積比為5 : 1)，除 去中間白色絮狀沉澱，取水層在溫度為80°C，真空度為0. 04MPa的條件下濃縮至相對密度 為1. 22 (80°C )，獲得土牛膝提取物19g。
[0021] 臨床試驗： 一、一般資料 84例，診斷參照中華醫學會肝病學分會2003年修訂的酒精性肝炎診斷標準，其中男 76例，女8例；年齡35?65歲，平均52.8歲；飲酒史均超過5年，最多日飲酒量為高度白 酒0. 75 kg ;其中腹脹者53例，嘔吐者31例，食欲不振者32例，往來寒熱者29例，黃疸者 18例。將患者隨機分為治療組與對照組，2組患者性別、飲酒史、日飲酒量及臨床表現等資 料經統計學處理，均無顯著性差異（P >0.05)，具有可比性。
[0022] 二、治療方法 常規戒酒，營養支持。飲食以清淡新鮮，提供高蛋白低脂，易消化吸收，補充維生素 B、 維生素 C、維生素 K及葉酸，並注意高熱量飲食。在此基礎上，對照組給予硫普羅寧0.3 g 加入5%萄糖或生理鹽水250 mL靜脈滴注，每日1次。治療組給予實施例1製備的土牛膝 提取物15 g 口服，分2次早晚分服。治療2周為1個療程，根據病情可治療1?2個療 程。
[0023] 三、療效評價 顯效：臨床症狀、體徵消失，肝功能基本正常； 有效：臨床症狀、體徵明顯好轉，肝功能恢復正常或較治療前異常值下降50%以上； 無效：臨床症狀、體徵無明顯緩解，肝功能無明顯改變甚至加重。
[0024] 四、臨床效果 治療組顯效率明顯優於對照組（P< 0.01)，具體結果見表1。
[0025] 表1治療組和對照組療效比較
【權利要求】
1. 一種土牛膝提取物的提取方法，其特徵在於所述方法包括以下步驟： 步驟1:取土牛膝，加乙醇和乙醚的混合溶液回流提取，回收乙醇和乙醚，過濾，得到藥 渣； 步驟2 :取所述藥渣加水提取，過濾後收集濾液，經第一濃縮至相對密度為1. 12? 1. 15,獲得第一浸膏； 步驟3 :取所述第一浸膏與氯仿和正丁醇的混合溶液經Sevage法脫蛋白，收集水層， 經第二濃縮至相對密度為1. 20?1. 23,即得。
2. 根據權利要求1所述的提取方法，其特徵在於：步驟1中，所述混合溶液中乙醇和乙 醚的體積比為1 : 9。
3. 根據權利要求1所述的提取方法，其特徵在於：步驟1中，所述土牛膝和所述混合溶 液體積比為1 : 10?30。
4. 根據權利要求1所述的提取方法，其特徵在於：步驟2中，以g/mL計，所述藥渣與 水的質量體積比為1 : 10?40。
5. 根據權利要求1所述的提取方法，其特徵在於：步驟3中，所述混合溶液中氯仿和正 丁醇的體積比為5 : 1。
6. 根據權利要求1所述的提取方法，其特徵在於，步驟3中，所述第一浸膏與所述混 合溶液的體積比為1 : 1。
7. 根據權利要求1所述的提取方法，其特徵在於：所述第一濃縮或第二濃縮為在70? 80°C，真空度為0. 04?0. 06MPa的條件下濃縮。
8. 根據權利要求1至7中任一項的方法製得的土牛膝提取物。
9. 根據權利要求1所述的土牛膝提取物在製備治療酒精性肝炎藥物中的應用。
【文檔編號】A61P1/16GK104352539SQ201410585554
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2014年10月28日 優先權日:2014年10月28日
【發明者】銀勝高, 王孝勳, 辛華, 施學麗, 辛寧, 郭敏, 黃語夢 申請人:廣西中醫藥大學