黃芩甙元的提取方法及其在抗炎、鎮痛中的應用的製作方法
2023-10-26 05:31:17
專利名稱：黃芩甙元的提取方法及其在抗炎、鎮痛中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於醫藥技術領域。
背景技術：
黃芩為唇形科草本植物黃芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的根，是我國傳統常用中藥材。黃芩甙元是黃芩主要活性成份之一，具有多種生物學活性。現有關於黃芩甙元提取方法，如中國專利一種黃芩提取物的製備方法(專利申請號01102536.8)、(專利申請號01145577.2)等，其分別是通過「乙醇回流、乙醚萃取」、「乙醇滲漉提取、樹脂柱層析分離」及「水煮、醇浸」等方法提取黃芩總黃酮甙元，但上述方法均不同程度地存在著提取方法複雜、費時等缺點。而目前對於改進中藥有效成分的傳統提取方法，是中藥現代化研究的重要內容之一。
類風溼性關節炎是主要侵犯骨、關節軟骨的慢性炎症疾病。為常見病、多發病，並是引起癱瘓的主要因素之一。全世界約有1％的人患有此病，在我國關節炎患者總數已超過1億。目前治療類風溼關節炎常用藥物是用甾體類、非甾體類抗炎藥物及免疫抑制藥等，僅能一定程度地緩解病情，但都不能控制病情發展、阻止惡化，並具有較大的副作用。目前還沒有一種世界公認的、能有效控制治療類風溼關節炎的藥物。
黃芩是具有多種生物活性的傳統中藥，常以根入藥，目前普遍用於治療高血壓、通經、腦炎等疾病。而中國專利黃芩莖葉在製藥中的應用(專利申請號98126822.6)公開了黃芩莖葉的藥用價值及新用途，證實黃芩莖葉及其總黃酮的主要有效成分野黃芩甙、黃芩甙等具有較強的鎮痛、抗炎、解熱作用。通過傳統的水煮酸沉法即水煎煮、鹽酸沉澱的方法提取莖葉中的黃芩甙、野黃芩甙等黃酮類物質，此工藝複雜、費時，提取周期較長。
技術內容為了解決上述缺點，本發明提供一種新的黃芩甙元提取方法及其在抗炎、鎮痛中的應用。
本發明的提取方法是以黃芩為原料，粉碎後加入5-8倍甲醇，混勻後在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續作用5分鐘，除去沉渣，再通過旋轉蒸發除去甲醇，收集析出物，烘乾後即得黃芩提取物。
以及黃芩甙元在抗炎、鎮痛藥物中的應用。
本發明提供一種簡便、省時、得率高的黃芩甙元提取方法，並為類風溼性關節炎等炎症性疾病提供新的治療途徑。並且黃芩甙元具有較好的抗炎、鎮痛作用。黃芩為天然藥物，與現有傳統的甾體類和非甾體類抗炎、鎮痛類藥相比，藥理作用突出，安全低毒。可廣泛用於醫藥生產領域。
具體實施例方式本發明的提取方法是以黃芩為原料，粉碎後加入5-8倍65％甲粉碎、與5-8倍65％甲醇溶液充分混合後，放入包裝袋內。排除袋內空氣、封口，將封閉後的包裝袋放入密閉的高壓容器內，並在室溫下對其加壓。當壓力升到200MPa時，保壓5分鐘，然後卸壓，壓力為0時，持續5分鐘後，再次對其加壓，當壓力升到600MPa時，保壓5分鐘，然後卸壓，當壓力將至0時，打開裝置，取出包裝袋，將袋內容物通過離心除去沉渣，取上清液，將液體通過旋轉蒸發除去甲醇，收集析出物，乾燥後得到黃芩甲醇提取物。黃芩甙元的含量不少於總量的50％。本發明的提取工藝簡單、省時、重複性好，有效成份含量高，其得率為3.5～3.8％。
利用超高壓方法得到的甲醇提取物，其主要成份為黃芩甙元，且含量不小於總量的50％，用於製備抗炎、鎮痛藥。
藥效學研究的主要技術參數為(一)體外實驗以T細胞、巨噬細胞為靶點，觀察SBM對炎症細胞功能、炎症介質產生的影響。
1、SBM(500～31.25μg/ml)可明顯抑制ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化，並呈一定的劑量依賴關係。而通過傳統的水煮酸沉法得到的黃芩提取物及通過浸提方法得到甲醇提取物，當濃度為31.25μg/ml時，均不能抑制ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化。同時Westernblot檢測結果進一步證實SBM(125μg/ml)可抑制ConA誘導小鼠脾淋巴細胞P38蛋白磷酸化，通過影響P38蛋白激酶系統，抑制淋巴細胞活化、增殖。
2、對巨噬細胞功能的影響
巨噬細胞是炎症反應中重要的免疫活性細胞，可產生TNFα、IL-1β等多種促炎細胞因子及COX-2等炎症介質，加重炎症反應。本實驗結果表明將大鼠腹腔巨噬細胞分別與LPS(10μg/ml)或LPS(10μg/ml)和SBM(125～31.25μg/ml)共同培養36小時，SBM(125～31.25μg/ml)可以劑量依賴方式，抑制LPS誘導大鼠腹腔巨噬細胞合成IL-1β，可使IL-1β的含量由183.39U分別降至47.54U、97.8U、104.59U、115.46U。同時，Western blot檢測結果表明SBM(250，125μg/ml)可明顯抑制LPS誘導腹腔巨噬細胞COX-2蛋白的表達(
圖1)，同時酶活性實驗結果進一步表明SBM(250～15.625μg/ml)可明顯抑制LPS抑制誘導腹腔巨噬細胞合成COX-2及PGE2，可使COX-2、PGE2的含量由75.96U和26.8U分別降至0.05U、3.76U、11.81U、19.145U、37.445U和1.05U、3.155U、5.435U、5.345U、6.38U，因此，SBM可明顯抑制LPS誘導腹腔巨噬細胞合成炎症因子、炎症介質。
(二)體內實驗採用大鼠足蹠皮內注射弗氏完全佐劑的方法誘導佐劑性關節炎。取雄性大鼠60隻，按體重隨機分為6組(正常組、模型組、陽性對照組、SBM 20mg/kg組、SBM 10mg/kg組、SBM 5mg/kg組)，於右足蹠皮內注射弗氏完全佐劑0.1ml，並在注射佐劑的當日開始灌胃給藥，連續給藥21天，同時利用容積法隔日測量足腫脹，以用藥前足腫脹差值為佐劑性關節炎的腫脹程度。於第21天殺鼠，取脾、測淋巴細胞轉化、取腹腔巨噬細胞、測IL-1β含量。結果發現SBM 20mg/kg於給藥的第1天即可抑制佐劑誘導的足腫脹，抑制率可達22.54％，給藥的第3、7天足腫脹的抑制率分別可達32.05％、20.57％，而陽性對照組(阿司匹林30mg/kg)第1、3、7天足腫脹的抑制率分別為20.37％、31.14％、21.46％，因此，SBM 20mg/kg可明顯抑制佐劑性關節炎急性炎症期的炎症反應。SBM 20mg/kg於給藥的第14、16、18、20天注射側足腫脹抑制率分別可達36.11％、34.02％、39.14％、35.86％，22.54％，繼發性病變的抑制率可達65.55％，而阿司匹林30mg/kg組第14、16、18、20天注射側足腫脹抑制率分別可達30.75％、20.29％、27.86％、27.22％，繼發性病變的抑制率可達37.78％。結果提示SBM20mg/kg可抑制佐劑性關節炎原發及繼發性炎症病變，具有抑制急、慢性炎症反應的作用。進一步研究發現，經SBM20mg/kg治療後，模型鼠脾淋巴細胞轉化功能降低58.85％、IL-1β的含量減少37.59％。因此。SBM可通過抑制淋巴細胞的功能、炎症因子的產生，抑制佐劑性關節炎病情的發展，且其作用效果強於阿司匹林。
實施例1以黃芩1000g為原料，粉碎後加入8倍65％甲醇，混勻後在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續作用5分鐘，除去沉渣，將液體於42℃，通過旋轉蒸發除去甲醇，收集析出物，烘乾後即得38g黃芩提取物，黃芩甙元的含量不少於總量的50％。並採用常規技術製成膠囊、片劑等劑型，作為抗炎、鎮痛藥。
實施例2以黃芩1000g為原料，粉碎後加入6倍65％甲醇，混勻後在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續作用5分鐘，除去沉渣，將液體於42℃，通過旋轉蒸發除去甲醇，收集析出物，烘乾後即得36g黃芩提取物，黃芩甙元的含量不少於總量的50％。並採用常規技術製成膠囊、片劑等劑型，作為抗炎、鎮痛藥。
權利要求
1.一種黃芩甙元提取方法，其特徵在於以黃芩為原料，粉碎後加入5-8倍65％甲醇溶液，混勻後在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續作用5分鐘，除去沉渣，再通過旋轉蒸發除去甲醇，收集析出物，烘乾後即得黃芩提取物。
2.一種黃芩甙元的新用途，其特徵在於黃芩甙元在抗炎、鎮痛藥物中的應用。
全文摘要
一種黃芩甙元的提取方法及其在抗炎、鎮痛中的應用，屬於醫藥技術領域。本發明是以黃芩為原料，粉碎後加入5－8倍甲醇，混勻後在200Mpa和600Mpa的壓力下，分別持續作用5分鐘，除去沉渣，再通過旋轉蒸發除去甲醇，收集析出物，烘乾後即得黃芩提取物。以及黃芩甙元在抗炎、鎮痛中的應用。本發明提供一種簡便、省時、得率高的黃芩甙元提取方法，並為類風溼性關節炎等炎症性疾病提供新的治療途徑。藥理作用突出，安全低毒。可廣泛用於醫藥生產領域。
文檔編號A61K31/352GK1566107SQ0312760
公開日2005年1月19日 申請日期2003年6月27日 優先權日2003年6月27日
發明者朱迅, 朱偉, 張守勤 申請人:長春博泰醫藥生物技術有限責任公司