異硫氰酸酯類化合物在前列腺疾病及皮膚癌中的應用的製作方法

2023-09-25 18:42:30 5

專利名稱：異硫氰酸酯類化合物在前列腺疾病及皮膚癌中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種以天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物在治療前列腺增生、前列腺炎、黑色素瘤方面的應用。採用分子生物學方法，本發明證明各種異硫氰酸酯類化合物或其衍生物均能誘導前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶(Phase II detoxification enzyme)——穀胱甘肽轉移酶(GSTP1)，進而抑制前列腺細胞增生及炎症。在此基礎上，本發明運用大鼠體內試驗證明該類化合物在極低劑量下對於良性前列腺增生、前列腺炎有效。此外，本發明證實部分異硫氰酸酯類化合物或其衍生物可以抑制人前列腺癌LNCaP細胞雄激素受體(AR)及雄激素受體上遊基因Sp1、雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原(prostate specific antigen，PSA)的表達，進而抑制前列腺細胞增生、抑制前列腺癌細胞生長。運用體外細胞和鼠體內試驗證明該類化合物對黑色素瘤B16細胞(皮膚癌細胞)有抑制作用。本發明涉及的異硫氰酸酯類化合物可與其它輔料組合，製成藥品、食品、保健品、化妝品以治療和/或預防前列腺疾病及皮膚癌。本發明還提供了以天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物為活性成分(API)的組合物及其製備方法。於是本發明提供了一種有效的預防和治療前列腺疾病及皮膚癌的以異硫氰酸酯類化合物或其衍生物為活性成分，優先是以苯乙基異硫氰酸酯為活性成分的方法。
背景技術：
前列腺增生症，亦稱為良性前列腺肥大(BPH)，是中老年人常見疾病，與前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶(Phase II detoxification enzyme)——穀胱甘肽轉移酶(GSTP1)的基因的表達的丟失、雄性激素水平異常以及年齡相關。40歲前發病率很低，50歲者佔40％，80歲者近90％，至90歲時，若行前列腺組織學檢查則幾乎100％發現前列腺增生，約25％的患者發生尿路梗阻需要藥物和手術治療。隨著生活節奏不斷加快及人平均壽命的延長，良性前列腺增生患者日漸增多，並且有資料顯示，良性前列腺增生患者呈年輕化發展趨勢。
前列腺由腺體及肌肉組成，這些組織會隨年齡增生，其過分增殖就會造成良性前列腺增生。由於前列腺組織體積增加，造成對尿道的擠壓，因而引起排尿困難。如果缺乏適當的診斷及治療更可能導致良性前列腺增生合併症，如尿頻、排尿困難、急性尿瀦留、泌尿道感染、膀胱結石、脫肛、內痔、性功能減退、高血壓、心腦血管意外、腎積水、尿毒症、甚至誘發前列腺癌等。
目前治療前列腺增生的藥物主要有三類5a-還原酶抑制劑、α-受體阻滯劑和天然植物藥(花粉)。其中5α-還原酶抑制劑Proscar(保列治)是美國默克公司研製生產的藥品，主要治療良性前列腺增生症，為目前前列腺增生用藥市場上的主力軍，但是保列治只適用於體積較大的前列腺(＞40cm3)，否則臨床效果欠佳[1]。α-受體阻滯劑可以促使膀胱頸和前列腺周圍的肌肉得到放鬆，從而達到治療目的。這類藥物無法徹底治癒BPH，只能幫助減輕某些症狀。這類藥物常見的副作用包括疲倦、頭暈、頭痛等。而且5a-還原酶抑制劑和α-受體阻滯劑副作用都較大，會引起女性化和性功能障礙。其它藥物抑制前列腺增生的效果也不太令人滿意。
前列腺炎是男性常見病，絕大多數發生在青壯年，大致可分為急性及慢性，致病原因可由細菌或非細菌感染引起。主要症狀包括尿痛、尿白、尿灼、尿頻、小腹會陰部脹痛不適；較嚴重時，甚至會發燒或發冷。有時症狀與前列腺增生相似。本發明的一實施例中使用的抗前列腺炎陽性對照藥津源靈(CENURIN(r))，是義大利米蘭利康大藥廠經多年研究而發明的，能夠治療各種膀胱及前列腺之病症由膀胱炎、膀胱痛、前列腺炎、尿道炎、膀胱尿道炎、尿道膀胱三角炎等所引起之 各種排尿困難、急尿、夜尿、上骨弓痛等症狀。經臨床試用表明，該藥口服吸收很快，能分布到各臟器組織中，最後從尿中排出，可選擇性作用於泌尿道生殖系統平滑肌，解除其痙攣性疼痛，從而達到緩解膀胱刺激症狀的作用。具有療效確切、生物利用度高、副作用極小等特點。
前列腺癌早期多無特別症狀，當癌細胞生長時，前列腺體肥大，擠壓尿道而引起排尿困難。這些癌細胞可隨著血液擴散到身體其它部分。雖然一般病程呈緩慢進展，早期對激素治療敏感，但晚期可引起膀胱頸口梗阻和遠處轉移等症狀，並由激素依賴型轉化為激素非依賴型，此時對激素治療和化療都不敏感，進而不治身亡。前列腺癌是西方國家發病最高的惡性腫瘤，約佔男性總人口的10％。在我國，傳統上認為前列腺癌發病率較低，因而多年來該病的研究、預防和治療均未受到應有的重視。但是隨著人們經濟生活的改善、生活習慣的改變和壽命的延長，近年來的研究表明，前列腺癌的發病率增加驚人。然而由於前列腺癌細胞對於高濃度的化療藥物或放射性療法的細胞毒害作用不敏感，儘管投入了大量的資金和努力，前列腺癌的發病率和死亡率並沒有降低。
皮膚癌在我國發病率較低，但是在白色人種中卻是常見的惡性腫瘤之一。皮膚癌可發生於身體的任何部位，大約80％發生於面部、頭部、頸部，引起受累部位的畸形和危險。皮膚癌的主要發病原因為紫外線，紫外線大部分來自太陽光照射，所以不管人種、皮膚類型和年齡、職業和居住何處，每個人都有患皮膚癌的可能。目前用於抗皮膚癌的藥物並不多，但是據有關報導稱，近年來皮膚癌患者呈逐年上升的趨勢。世界衛生組織2006年7月份發表的一份報告顯示，每年有將近60000人由於過度日曬而死亡，其中絕大多數是因為患上惡性皮膚癌。有48000人的死因是惡性黑色素瘤，另外12000人的死因是其他種類的皮膚癌。因此開發出一種預防和/或治療皮膚癌的藥品、保健品具有很好的醫學應用價值。
綜上所述，前列腺疾病為影響男性健康的主要疾病，會對人類社會，尤其是日益老年化的社會帶來嚴重問題。而皮膚癌患者也正悄然上升，因此有必要開發研製一些新的、高效的治療和/或預防前列腺疾病及皮膚癌的藥品或保健品、食品、化妝品。
無錫傑西醫藥科技有限公司的相關研究人員首次發現異硫氰酸酯類化合物或其衍生物，尤其是苯乙基異硫氰酸酯，無論是天然的還是人工合成的，是既能抑制異常的DNA甲基化又能抑制組蛋白脫乙醯基酶的雙重抑制劑，可用於治療和預防惡性腫瘤[2]。我們的這一重要發現最近得到Tin Oo Khor，Young-Sam Keum等人的支持[3]。該研究組發現低劑量苯乙基異硫氰酸酯和薑黃素合併使用能有效抑制PC-3前列腺癌的生長。在上述專利發明中，我們還證明，異硫氰酸酯類化合物通過抑制II相藥物代謝解毒酶(Phase II detoxification enzyme)，即穀胱甘肽轉移酶基因(GSTP1)的異常DNA甲基化而誘導穀胱甘肽轉移酶表達，增加了細胞清除有害物質的能力，進而提示異硫氰酸酯類化合物有治療和預防前列腺等組織器官炎症的作用。此外，在另一專利發明中我們又證明異硫氰酸酯類化合物，尤其是苯乙基異硫氰酸酯還能通過抑制SP1轉錄因子來抑制異常的雄激素受體的轉錄和表達，進而抑制由雄激素所誘導的良性前列腺增生及前列腺癌細胞生長[4]。
考慮到大多數異硫氰酸酯類化合物或其衍生物，包括苯乙基異硫氰酸酯為水難溶性化合物，我們將其與藥用載體混合製成分散劑，並根據不同給藥方式的需要，進一步將其製備成不同的劑型，改善了體內生物利用度[5]，使其在極低劑量下就可以產生最佳治療效果而降低了藥物的毒副作用，並且其在動物實驗中的療效與保列治、津源靈相當甚至更好。這對於前列腺增生和前列腺炎這樣的慢性的需要長時間給藥治療的疾病，無疑是一重大突破。本發明中，我們進行的動物試驗已經證明，異硫氰酸酯類化合物，尤其是苯乙基異硫氰酸酯在極低劑量下能有效抑制良性前列腺增生和非細菌性前列腺炎。除此之外，體外細胞試驗和體內藥效試驗還表明，異硫氰酸酯類化合物，尤其是苯乙基異硫氰酸酯對皮膚癌有抑制作用，可以作為皮膚癌的預防和治療藥物。採用分子生物學方法，在人前列腺癌LNCaP細胞中，本發明還證明並比較了多種異硫氰酸酯類化合物及其衍生物均能誘導II相藥物代謝解毒酶-穀胱甘肽轉移酶(GSTP1)，部分異硫氰酸酯類化合物及其衍生物(是指除了4-磺酸基苯基異硫氰酸酯及其衍生物之外的其它本發明的異硫氰酸酯類化合物及其衍生物)能抑制雄激素受體AR及雄激素受體上遊基因Sp1、雄激素受體下遊基因特異性前列腺特異抗原PSA的表達及其抑制前列腺癌細胞生長的作用，進而提供了異硫氰酸酯類化合物及其衍生物抑制前列腺癌細胞生長、抑制前列腺細胞增生及炎症的相關分子機理。因此，本發明異硫氰酸酯類化合物及其衍生物，尤其是苯乙基異硫氰酸酯類化合物具有廣泛的適用性，可以應用於藥品、食品、保健品、化妝品中以治療和/或預防前列腺疾病及皮膚癌。
此外，實驗中我們發現，本發明涉及的活性成分異硫氰酸酯類化合物或其衍生物，如苯乙基異硫氰酸酯在自然狀態下的穩定性比較差，很多因素都會影響到它的穩定性，客觀上，這對於將該化合物製備成安全、有效、順應性好的組合物是一個很大的挑戰。本公司的相關研究人員通過大量的試驗，研究出本發明的組合物不僅體內療效顯著，而且穩定性好，適宜製作多種安全有效的劑型，如但不限於片劑、丸劑、膠囊劑、軟膏劑、霜劑、膜劑、注射用粉針、乳劑、噴霧劑、植入劑、栓劑、注射劑、凍幹劑等多種劑型。

發明內容
本發明涉及天然或合成的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物的應用、組合物物及其製備方法。應用主要包括治療和/或預防前列腺疾病及癌症。
本發明的目的之一是異硫氰酸酯類化合物或其衍生物在治療和/或預防前列腺增生、前列腺炎、前列腺癌、皮膚癌等疾病方面的應用。
本發明的目的之二是提供以異硫氰酸酯類化合物或其衍生物為有效成分的組合物，用於治療和/或預防前列腺增生、前列腺炎、前列腺癌、皮膚癌等疾病。
本發明的目的之三是提供異硫氰酸酯類化合物或其衍生物和以其為有效成分的組合物的製備方法。
本發明中所涉及的天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物，包括但不限於苯甲基異硫氰酸酯、苯乙基異硫氰酸酯、烯丙基異硫氰酸酯和4-磺酸基苯基異硫氰酸酯，其結構式分別如下(1)、(2)、(3)、(4)式 本發明涉及的異硫氰酸酯類化合物的衍生物，包括但不限於苯甲基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、烯丙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物，其結構式分別如下(5)、(6)、(7)、(8)式
本發明所述的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物，預防和治療前列腺疾病及皮膚癌效果較佳的是苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯及其N-乙醯半胱氨酸共軛物；更佳的是苯乙基異硫氰酸酯及其衍生物苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物；最佳的是苯乙基異硫氰酸酯。
本發明所述的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物，其應用包括治療和/或預防前列腺方面的疾病和各種癌症，至少包括前列腺增生、前列腺炎、前列腺痛、前列腺膿腫、前列腺癌、結腸癌、胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、陰莖癌、宮頸癌、皮膚癌、神經母細胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、耳癌、舌癌、腦癌；其中，在前列腺疾病中優選的是前列腺增生和前列腺炎，最優的是治療和/或預防前列腺增生；在癌症方面優選的是皮膚癌和前列腺癌。
在本發明所述的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物，包括但不限於苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物(PEITC-NAC)，均可以有效地誘導前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶即穀胱甘肽轉移酶(GSTP1)基因的表達，增加前列腺細胞細胞清除有害物質的能力，進而具有治療和或預防預防前列腺疾病及其它組織器官炎症的作用。
在本發明所述的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物，包括但不限於苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物，還可以有效地抑制人前列腺癌細胞生長、抑制人前列腺癌細胞中雄激素受體(AR)、雄激素受體上遊基因Sp1及雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原(PSA)的表達。
本發明涉及的異硫氰酸酯類化合物，可以是天然的從十字花科蔬菜包括但不限於水田芥、西蘭花、冬獨行菜、家木犀草中提取出來的，也可以是人工合成的。
本發明所述組合物的應用形式可以是藥品、食品、保健品、化妝品。
本發明提供的含有異硫氰酸酯類化合物或其衍生物的藥品、保健品組合物，其特徵在於包含下列成分(a)0.5-50重量份活性成分，所述的活性成分包含天然或合成的異硫氰酸酯類化合物；(b)0-1000重量份可藥用的活性成分載體，所述可藥用載體包括(b1)0-1000重量份表面活性劑或增溶劑，所述的表面活性劑選自聚氧乙烯月桂醇醚、聚氧乙烯單硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烴氧酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、泊洛沙姆、聚乙二醇、吐溫、聚山梨酯等；所述的增溶劑選自聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25、聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮K90，聚乙二醇400、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一種或一種以上組成的混合物；(b2)0-500重量份油性成分，所述的油性成分選自脂肪酸或脂肪酸甘油三酯，單或雙脂肪酸甘油酯，包括但不限於大豆油，玉米油，花生油，硬脂酸，軟脂酸，棕櫚油，葵花籽油，橄欖油，椰子油，芝麻油，棉籽油，低芥酸菜籽油，油酸，中鏈脂肪酸甘油三酯，單辛癸酸甘油酯，單乙酸甘油酯，二乙酸甘油酯，三乙酸甘油酯中的一種或一種以上的組合物；(b3)由(b1)、(b2)一種或多種藥用載體組成的混合載體。
其中，活性成分包括但不限於苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯、烯丙基異硫氰酸酯、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、苯甲基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、烯丙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物中；其中，所述的非離子表面活性劑或增溶劑優選自硬脂酸聚烴氧(40)酯，聚氧乙烯23月桂醇醚，聚氧乙烯蓖麻油35，聚氧乙烯氫化蓖麻油40，維生素E琥珀酸聚乙二醇酯，泊洛沙姆F-127，泊洛沙姆F-68，吐溫80，聚乙二醇6000，聚乙二醇4000中的一種或多種組合物；最優選的非離子表面活性劑是硬脂酸聚烴氧(40)酯。
本發明所述的藥品、保健品組合物，所述的油性成分尚佳的為中鏈脂肪酸甘油三酯、脂肪酸甘油三酯、大豆油、玉米油、棉籽油、硬脂酸、油酸；更佳的為中鏈脂肪酸甘油三酯、大豆油、玉米油，其中最佳的為中鏈脂肪酸甘油三酯。
本發明所述的藥品、保健品組合物，其特徵在於，還可以通過添加如下輔料，進一步製備成其它適宜的劑型，其所添加的其它輔料包括(a)吸附劑和稀釋劑，所述的吸附劑和稀釋劑選自α乳糖(一水)、無水乳糖、β環糊精、羥丙基β環糊精、微晶纖維素(PH101，PH102，KG系列)、微晶纖維素丸心、乳糖澱粉丸心、碳酸鈣、碳酸氫鈣、改性澱粉、蔗糖八乙酸酯、羧甲基澱粉鈉、羥丙基纖維素、硬脂酸、甘露醇、山梨醇、山梨酸、羧甲基纖維素鈉、多孔澱粉、微粉矽膠中的一種或一種以上的組合；(b)潤滑劑，所述的潤滑劑選自硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇、微粉矽膠、滑石粉；(c)粘合劑，所述的粘合劑選自聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素(200目)、聚乙二醇；(d)崩解劑，所述的崩解劑選自多孔澱粉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉鈉、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素；(e)包衣材料，所述的包衣材料選自羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素、乙基纖維素、二甲胺乙基甲基丙烯酯-中性甲基丙烯酯聚合物、聚乙二醇、二氧化鈦、氧化鐵紅、山梨酸鉀；其中，所述的吸附劑和稀釋劑優選為硬脂酸、山梨醇、微晶纖維素(KG系列)、甘露醇300DC、β環糊精、微粉矽膠、α乳糖(一水)；更優的為β環糊精、硬脂酸；最優的為β環糊精；所述的吸附劑和稀釋劑通常用量為0.5-1500重量份，更佳的為2.0-500重量份；其中，所述的潤滑劑更優的為硬脂酸鎂、聚乙二醇、微粉矽膠；最優的為聚乙二醇；潤滑劑的通常用量為0-30重量份；其中，所述的粘合劑優選為羥丙基纖維素EF、聚乙二醇6000、羥丙基甲基纖維素E15；更優的為羥丙基甲基纖維素E15、聚乙二醇6000；最優的為聚乙二醇6000；粘合劑的通常用量為0-100重量份；其中，所述的崩解劑優選的是微晶纖維素PH101、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉；最優的是微精纖維素PH101；崩解劑的通常用量為0-100重量份；其中，所述的包衣材料優選的是羥丙基甲基纖維素E15、羥丙基纖維素EF、二甲胺乙基甲基丙烯酯-中性甲基丙烯酯聚合物、聚乙二醇400、聚乙-醇4000、乙基纖維素(200目)；更優的是羥丙基甲基纖維素E15、聚乙二醇4000、乙基纖維素；包衣材料的通常用量是0.5-20重量份。
在較優的藥品、保健品組合物中，其中活性成分的數量是1-25重量份，表面活性劑數量是5-200重量份，油性成分的數量是0.5-100重量份，其他輔料的數量是0.5-1500重量份。
在本發明的藥品、保健品組合物中，活性成分穩定性較優的可在60℃高溫10天，其活性成分含量高於90％，更佳的高於95％，最佳的高於98％。
本發明所述的藥品、保健品組合物，可以製成的劑型應該至少包括片劑、膠囊劑、丸劑、注射用粉針、注射劑、凍乾粉劑、軟膏劑、栓劑、霜劑、膜劑、乳劑、噴霧劑、植入劑；其中，按照藥品、保健品組合物中活性成分的體外溶出及穩定性，優選的劑型為膠囊劑、片劑、丸劑、栓劑、乳劑、注射用粉針；其中更優的是膠囊劑、片劑、丸劑。
本發明所述的藥品、保健品組合物，其應用包括治療和/或預防前列腺方面的疾病和各種癌症，至少包括前列腺增生、前列腺炎、前列腺痛、前列腺膿腫、前列腺癌、結腸癌、胃癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、陰莖癌、宮頸癌、皮膚癌、神經母細胞瘤、胰腺癌、卵巢癌、耳癌、舌癌、腦癌；
其中，在癌症方面優選的是皮膚癌和前列腺癌，在前列腺疾病中優選的是前列腺增生和前列腺炎；最優的是治療和預防前列腺增生。
在本發明的藥品、保健品組合物中，較優的組合物具有體外溶出高、穩定性好、劑量低、毒副作用小等特點。
在本發明的藥品、保健品組合物中，較優的如含有苯乙基異硫氰酸酯的藥物組合物，能有效地抑制和減少前列腺組織的異常增生。
在本發明的藥品、保健品組合物中，較優的如以苯乙基異硫氰酸酯為活性成分的藥物組合物，能有效地預防和/或治療前列腺組織的炎症。
在本發明的藥品、保健品組合物中，較優的如以苯乙基異硫氰酸酯為有效藥物成分的組合物，還可以有效地抑制皮膚癌細胞增殖。
在本發明的藥品、保健品組合物中，以苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物為有效藥物成分的組合物，均可以有效地誘導人前列腺癌細胞中II相藥物代謝解毒酶即穀胱甘肽轉移酶基因表達，增加細胞清除有害物質的能力，進而具有治療和預防前列腺疾病及其它組織器官炎症的作用。
在本發明的藥品、保健品組合物中，以苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物為有效成分的組合物，還可以有效地抑制人前列腺癌細胞生長、抑制人前列腺癌細胞中雄激素受體(AR)、雄激素受體上遊基因Sp1及雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原(PSA)的表達。
在本發明的藥品、保健品組合物中，較優的如以苯乙基異硫氰酸酯為有效成分的組合物，在治療相關疾病時，可以是單獨使用，也可以是聯合使用，如與外科手術聯合使用或與一種或多種西藥聯合使用或與中草藥聯合使用或與放射性治療聯合使用或與基因治療聯合使用或與生物調節劑聯合使用等。
與現有技術相比，本發明的優越性在於本發明首次證明了苯乙基異硫氰酸酯等的異硫氰酸酯類化合物能有效地治療和/或預防前列腺增生、前列腺炎。
本發明在我們以前專利申請(申請號200510040865.1)的基礎上再次證明其它異硫氰酸酯類化合物與苯乙基異硫氰酸酯相似，能有效地誘導前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶——即穀胱甘肽轉移酶基因的表達，增加了前列腺細胞清除有害物質的能力，進而具有治療和/或預防前列腺疾病及其它組織器官炎症的作用。
本發明首次採用切除睪丸的大鼠體內實驗模型證明了以苯乙基異硫氰酸酯為代表的異硫氰酸酯類化合物能有效地抑制良性前列腺增生。
本發明首次通過大鼠體內試驗證明了以苯乙基異硫氰酸酯為代表的異硫氰酸酯類化合物對治療和預防前列腺炎有效，特別是非細菌性前列腺炎。
本發明在我們以前專利申請(申請號200510095737.7)的基礎上再次證明部分異硫氰酸酯類化合物與苯乙基異硫氰酸酯相似，能抑制人前列腺癌細胞中雄激素受體AR、雄激素受體上遊基因Sp1、雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原PSA的表達。
本發明在我們以前專利申請(申請號200510095737.7)的基礎上再次證明部分異硫氰酸酯類化合物與苯乙基異硫氰酸酯相似，能抑制人前列腺癌細胞生長。
本發明首次通過試驗證明以苯乙基異硫氰酸酯為代表的異硫氰酸酯類化合物對黑色素瘤B16細胞(皮膚癌)有抑制作用。
本發明首次提供了以一種天然或合成的苯乙基異硫氰酸酯等的異硫氰酸酯類化合物為有效成分的組合物。
本發明提供的以苯乙基異硫氰酸酯等的異硫氰酸酯類化合物為有效成分的藥品、保健品組合物不僅溶出度高、劑量低、療效好、毒副作用小且穩定性好。


圖1，不同異硫氰酸酯類化合物對人前列腺癌細胞LNCaP細胞中II相藥物代謝解毒酶GSTP1的誘導作用。圖中PEITC苯乙基異硫氰酸酯、BITC苯甲基異硫氰酸酯、AITC烯丙基異硫氰酸酯、SPITC4-磺酸基苯基異硫氰酸酯、PEITC-NAC苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物。
圖2，不同異硫氰酸酯類化合物對人前列腺癌細胞LNCaP細胞中雄激素受體AR、雄激素上遊基因Sp1、雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原(PSA)的抑制作用。圖中PEITC苯乙基異硫氰酸酯、BITC苯甲基異硫氰酸酯、AITC烯丙基異硫氰酸酯、SPITC4-磺酸基苯基異硫氰酸酯、PEITC-NAC苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物。
圖3，前列腺正常組織切片。
圖4.1，前列腺增生模型陰性對照組腺泡密集度增加切片。
圖4.2，前列腺增生模型陰性對照組腺腔體增大切片。
圖4.3，保列治對照組腺腔體增大切片。
圖4.4，保列治對照組腺泡密集度增加切片。
圖4.5，前列腺增生模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(2mg/kg)切片。
圖5.1，前列腺炎模型陰性對照組充血切片。
圖5.2，津源靈對照組淋巴細胞浸潤切片。
圖5.3，前列腺炎模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(4mg/kg)切片。
圖5.4，前列腺炎模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(2mg/kg)切片。
圖5.5，前列腺炎模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(1mg/kg)切片。
圖6，不同異硫氰酸酯類化合物對人前列腺癌細胞LNCaP細胞生長的抑制作用及其比較。
圖中PEITC苯乙基異硫氰酸酯、BITC苯甲基異硫氰酸酯、AITC烯丙基異硫氰酸酯、SPITC4-磺酸基苯基異硫氰酸酯。
圖7，苯乙基異硫氰酸酯對黑色素瘤B16細胞生長曲線的影響。
圖8，灌胃給藥苯乙基異硫氰酸酯後小鼠黑色素瘤體積增長趨勢。
具體實施方法實施例1苯乙基異硫氰酸酯的製備儀器與試劑1H-NMR譜用BruckerAV-300型核磁共振儀測定，內標TMS，無特別說明溶劑為CDCl3；MS用Nicolet FTMS-2000型質譜儀測定；元素分析用Elementar Vario EL III儀器測定。
薄層層析(TLC)採用矽膠GF254(青島海洋化工廠生產)自製；試劑均為市售化學純或分析純產品，未經處理直接使用。
實施例1-1從天然植物中提取苯乙基異硫氰酸酯a、將水田芥切成碎塊加水後室溫放置數天，在酶的作用下分解出苯乙基異硫氰酸酯，用正己烷等與水不相溶的溶劑萃取，然後真空蒸去溶劑，再減壓蒸餾得產品，產品可得較高產率和純度[6](具體方法可參見Ribnicky David M，Poulev Alexander A et al.2000)。
b、按上述方法也可從冬獨行菜中製得苯乙基異硫氰酸酯；將家木犀草根塊用水浸泡後，再用水蒸汽蒸餾法，可獲得上述苯乙基異硫氰酸酯。
實施例1-2化學方法合成苯乙基異硫氰酸酯在50mL圓底燒瓶中加入15mL CH2Cl2和硫代光氣3mL(40mmol)，攪拌，冷卻至0℃，用恆壓滴液漏鬥緩慢滴加等當量的三乙胺(4.04g，40mmol)組成的混合液(滴加過程放熱，溫度不宜超過15℃)。滴畢後，在室溫下反應5-6小時，用TLC檢測苯乙胺消失後，加入10mL水猝滅反應。再加5mLCH2Cl2，分液漏鬥分出有機相，有機相用水洗滌兩次(15mL×2)，無水硫酸鈉乾燥有機相後，過濾，濃縮有機相至幹。殘留液用石油醚(沸程60-90℃)作洗脫液，經矽膠柱洗脫純化，濃縮後，經真空精餾得無色油狀液體4.9g，產率75％。按照Katritzky等人[7]和Victor Gil[8]的文獻方法進行核磁共振和質譜確證結構。
結構測定結果1H-NMRδ7.26-7.24(m，3H，Ph-H)，7.12(d，J＝8.5Hz，2H，Ph-H)，3.94(t，J＝7.0Hz，2H，CH2)，2.81(t，J＝7.0Hz，2H，CH2)；ESI-MS164.1[M+H]+，C9H9NS(163.24)；Anal.Calcdfor C9H9NSC66.22，H5.56，N8.58，FoundC66.30，H5.42，N8.34；分子量為163.24。
實施例2不同異硫氰酸酯類化合物對GSTP1蛋白分子影響的研究材料與方法試劑苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)，由無錫傑西醫藥科技有限公司合成，經NMR、UV、IR、MS等確定其化學結構，以HPLC測定其含量及純度(＞99％)；其它異硫氰酸酯化合物，即苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)、購於美國Sigma-Aldrich公司。苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物(PEITC-NAC)購於美國LKT公司。其它化學試劑除特別說明外，均購於美國Sigma化學試劑公司。蛋白電泳用聚丙烯醯胺凝膠試劑、SDS、電泳緩衝液、蛋白電轉移緩衝液、硝酸纖維膜等購於美國Bio-Rad生命科學公司。蛋白印跡檢測試劑盒及膠片購於美國GE公司。II相藥物代謝解毒酶(GSTP1)抗體及β-actin抗體分別購於美國BD公司及Santa Cruz生化技術公司。
細胞培養人前列腺癌細胞LNCaP、PC-3，購於American Type Culture Collection。細胞置於37℃，5％CO2培養箱中，以含10％胎牛血清、青黴素和連黴素的RPMI1640培養基培養。
蛋白印跡法檢測GSTP1蛋白將對數生長期的人前列腺癌細胞LNCaP以如圖1所示的苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)、PEITC-NAC(苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物)處理24小時。收集細胞、洗滌、以文獻方法[9](Wang，Ossowski et al.2001)提取蛋白，定量。取50g的蛋白進行SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳。電泳後，將蛋白轉到硝酸纖維膜上，以GSTP1抗體進行蛋白印跡測定，以-Actin抗體作為內標，以ECL膠片記錄實驗結果。
結果和討論採用蛋白印跡技術，我們研究並比較了異硫氰酸酯化合物抑制前列腺增生及炎症、人前列腺癌細胞生長的分子機理。在同等的實驗條件下所試異硫氰酸酯化合物均明顯地誘導前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶——穀胱甘肽轉移酶GSTP1基因的表達。作為II相藥物代謝解毒酶，GSTP1對細胞有效地、不斷地清除內源性和外源性有害物質包括炎症物質、致癌物質起極其重要的作用。大量研究已表明在前列腺炎症、腫大、癌變的過程中，由於外環境的影響，GSTP1基因的啟動子部位的DNA被逐漸地甲基化而失去正常的表達能力。如我們先前的專利中所表述的那樣，本發明再次證明苯乙基異硫氰酸酯(PEITC，JC-5411)和其它所有具有異硫氰酸官能團的受試異硫氰酸酯類化合物一樣有效地誘導GSTP1的表達(見圖1)。這一實驗結果表明異硫氰酸酯類化合物由於其異硫氰酸基團對GSTP1基因的誘導表達作用很可能是它們可以治療和預防前列腺增生、前列腺炎的重要機理。本研究還表明包括4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)在內的具有異硫氰酸官能團的異硫氰酸酯化合物及苯乙基異硫氰酸酯體內代謝物苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物均能有效地用於前列腺疾病的預防與治療。
實施例3不同異硫氰酸酯類化合物對AR、SP1、PSA蛋白分子影響的研究材料與方法試劑異硫氰酸化合物，同實施例2。其它化學試劑除特別說明外，均購於美國Sigma化學試劑公司。蛋白電泳用聚丙烯醯胺凝膠試劑、SDS、電泳緩衝液、蛋白電轉移緩衝液、硝酸纖維膜等購於美國Bio-Rad生命科學公司。蛋白印跡檢測試劑盒及膠片購於美國GE公司。雄激素受體、Sp1、前列腺特異抗原PSA及β-actin等抗體分別購於美國BD公司及SantaCruz生化技術公司。
細胞培養同實施例2。
蛋白印跡法檢測AR、SP1、PSA蛋白將對數生長期的人前列腺癌細胞LNCaP以如圖2所示的苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物(PEITC-NAC)處理24小時。收集細胞、洗滌、以文獻方法[9]提取蛋白，定量。取50g的蛋白進行SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳。電泳後，將蛋白轉到硝酸纖維膜上，以特異的AR、Sp1、PSA抗體進行蛋白印跡測定，並以-Actin抗體作為內標，以ECL膠片記錄實驗結果。
結果和討論採用蛋白印跡技術，我們研究並比較了異硫氰酸酯化合物抑制前列腺增生及炎症、人前列腺癌細胞生長的其它可能的分子機理。實驗結果表明這類化合物，尤其是苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)對人前列腺癌細胞中的雄激素受體AR、雄激素受體上遊基因Sp1及雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原PSA等基因的表達有很明顯的抑制作用(圖2)。苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物(PEITC-NAC)對人前列腺癌細胞中的雄激素受體AR、雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原PSA等基因的表達有相似作用。比較而言，烯丙基異硫氰酸酯(AITC)對上述基因表達抑制作用較弱，而4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)在所試藥物濃度下則幾乎無作用。該結果與下述化合物對LNCaP癌細胞生長抑制作用相當吻合(實施例7)，說明抑制雄激素受體表達是這類化合物選擇性地抑制前列腺增生、抑制前列腺癌細胞增殖的分子機理。
基於對異硫氰酸酯化合物抑制前列腺增生及炎症、抑制前列腺癌細胞增殖的分子機理的研究，我們進一步研究了異硫氰酸酯類化合物在動物體內外的藥效。
實施例4苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)對良性前列腺增生的研究(一)材料與方法試劑苯乙基異硫氰酸酯，同實施例2；睪丸酮丙酸酯、雌二醇、氯胺酮、青黴素均購自無錫山禾集團健康參藥連鎖有限公司。
動物成年無病源健康雄性SD大鼠，體重150-200克，購於南京醫科大學實驗動物中心。每籠5隻，供應常規食物和飲用水，晝夜交替燈光，室溫維持在25±2℃。
病理模型及藥物治療將60隻雄性SD大鼠隨機分成6組，每組10隻。第1-6組的所有大鼠無菌操作下注射氯胺酮麻醉，手術切除雙側睪丸。術後注射青黴素防止感染，一周後皮下注射睪丸酮丙酸酯，劑量為1mg/只鼠，每天注射一次，連續一個月。第1組為陰性對照組，在睪丸酮丙酸酯注射開始當天，每天口服生理鹽水，連續一個月。第2組為陽性對照組，在睪丸酮丙酸酯注射開始當天，每天皮下注射油性苯甲酸雌二醇0.1mg/只鼠，連續一個月。第3、第4、第5、第6組為給藥組，從注射睪丸酮丙酸酯第1天起就灌胃給藥苯乙基異硫氰酸酯藥物組合物(油溶性製劑和水溶性製劑)，劑量分別為4mg/kg(本發明的實施例11-3組合物中有效成分)、1mg/kg(本發明的實施例11-3組合物中有效成分)、4mg/kg(本發明的實施例11-16組合物中有效成分)、1mg/kg(本發明的實施例11-16組合物中有效成分)，每天給藥，連續一個月。
在末次給藥24小時後，將動物處死，稱重，並取出前列腺組織測量體積、稱重、求得平均值、計算臟器係數(每組平均前列腺重/平均體重)，最後進行生物統計處理(t檢驗)。
結果和討論陰性對照組大鼠前列腺平均重量為1.28g，臟器係數為0.34％；陽性對照組前列腺重為0.73g，臟器係數為0.23％；給藥組(油劑4mg/kg、油劑1mg/kg、水劑4mg/kg、水劑1mg/kg)前列腺平均重分別為0.79g、0.91g、0.83g、0.75g，臟器係數分別為0.23％、0.25％、0.23％、0.21％，都低於陰性對照組，且有顯著差異(P＜0.05)。由此可以看出，雄性激素能有效地誘發前列腺增生，以苯乙基異硫氰酸酯為有效成分的油溶性和水溶性組合物都能抑制前列腺增生，其效果與陽性藥物雌二醇組無顯著性差異。本實施例說明苯乙基異硫氰酸酯在實驗藥物濃度區間就能有效抑制前列腺增生。
實施例5苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)對良性前列腺增生的研究(二)材料與方法試劑苯乙基異硫氰酸酯，同實施例2；睪丸酮丙酸酯、保列治、氯胺酮、青黴素均購自無錫山禾集團健康參藥連鎖有限公司。
動物成年無病源健康雄性SD大鼠，體重150-200克，購於南京醫科大學實驗動物中心。每籠5隻，供應常規食物和飲用水，晝夜交替燈光，室溫維持在25±2℃。
病理模型及藥物治療將36隻雄性SD大鼠按體重隨機分成4組，每組9隻。第1組為空白對照組(偽手術組)，在無菌條件下注射氯胺酮麻醉，按手術切除睪丸法操作但不切除睪丸，正常餵養。第2-4組的所有大鼠無菌操作下注射氯胺酮麻醉，手術切除雙側睪丸。後注射青黴素防止感染，一周後皮下注射睪丸酮丙酸酯，劑量為5mg/kg，每天注射一次，連續一個月。第2組為陰性對照組，在睪丸酮丙酸酯注射開始當天，每天口服生理鹽水，連續一個月。第3組為陽性對照組，在睪丸酮丙酸酯注射開始當天，每天口服給藥保列治混懸液0.1mg/rat/天，連續一個月。第4組為給藥組，從注射睪丸酮丙酸酯第1天起就灌胃給藥苯乙基異硫氰酸酯組合物(本發明的實施例11-16組合物)，劑量為2mg/kg，每天給藥，連續一個月。
在末次給藥24小時後，將動物處死，稱重，取出前列腺組織進行測量體積、稱重、求得平均值、計算臟器係數(每組平均前列腺重/平均體重)，並進行組織切片實驗，最後進行生物統計處理(t檢驗)。
組織切片實驗用石蠟包埋前列腺組織塊，然後切片進行HE染色，光鏡下觀察。
實驗數據見下表表1苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)對前列腺增生的抑制作用

表2大鼠前列腺增生切片的讀片結果

注0代表0分，+代表1分，++代表2分，+++代表3分。
*與陰性對照組相比P＜0.05**與陰性對照組相比P＜0.01結果和討論由表1，對照陰性組數據與空白組數據可以看出，前列腺增生明顯，說明前列腺增生的模型是成功的。表1還表明，保列治陽性組與苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)給藥組都能使前列腺有所萎縮，具有一定的治療效果。可能由於給藥時間僅僅一個月，而前列腺的器質性改變是需要一定的時間的，僅僅從前列腺萎縮的指標看，可能二組的給藥時間更長一些效果會更好。無論前列腺重量、體積還是臟器係數抑制率數據都可以看出，這二組的治療是有效的。苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)給藥組的數據似乎比保列治給藥組數據略好一些，然而二者的治療效果的比較尚需要更為嚴格的實驗驗證。
從組織切片看，本實驗大鼠前列腺增生的主要表現為腺泡密集度改變，腺泡腔體大小改變及腔內分泌物(瀦留物)改變，伴有結締組織增生及乳頭增生。由表2及圖3、圖4.1-4.5可見，苯乙基異硫氰酸酯給藥組及陽性對照保列治給藥組的病理改變均輕於陰性對照組且有顯著差異(保列治P＜0.05，苯乙基異硫氰酸酯P＜0.01)。且與前列腺重量、體積還是臟器係數抑制率數據相類似，苯乙基異硫氰酸酯給藥組的病理改變不如陽性對照組保列治明顯。
實施例6苯乙基異硫氰酸酯對非細菌性前列腺炎作用的研究材料與方法試劑苯乙基異硫氰酸酯，同實施例2；消痔靈注射液(硫酸鋁鉀鞣酸注射液)購於濟南永寧製藥股份有限公司；津源靈(鹽酸黃酮哌酯)，氯胺酮，青黴素購自無錫山禾集團健康參藥連鎖有限公司。
動物成年無病源健康雄性SD大鼠，體重150-200克，購於南京醫科大學實驗動物中心。每籠5隻，供應常規食物和飲用水，晝夜交替燈光，室溫維持在25±2℃。
病理模型及藥物治療將55隻雄性SD大鼠隨機分成6組，除陰性對照組為10隻大鼠外，其它5組每組9隻大鼠。第1-6組大鼠在無菌操作下注射氯胺酮麻醉後常規消毒，取下腹正中切口1.5cm左右，第1組僅注射青黴素防止感染，每天口服蒸餾水10ml/kg，每周5天，連續5周；第2-6組用1ml注射器在前列腺左葉、右葉各注射25％消痔靈注射液0.1ml，用一號絲線縫合肌肉、皮膚後注射青黴素防止感染。第2組為模型對照組，在消痔靈注射結束24小時後，每天口服蒸餾水10ml/kg，每周5天，連續5周。第3組為陽性對照組，在消痔靈注射結束24小時後，每天口服津源靈混懸液60mg/kg，每周5天，周末不給藥，連續5周。第4、第5、第6為給藥組，在消痔靈注射結束24小時後，灌胃給予苯乙基異硫氰酸酯組合物(本發明的實施例11-16組合物)，劑量分別為4mg/kg、2mg/kg、1mg/kg，每周5天，周末不給藥，連續5周。在給藥最後一天，分別收集每組大鼠給藥後1小時、2小時、3小時的尿液。
在末次給藥24小時後，將動物處死，稱重，取出前列腺組織測量體積、稱重、求得平均值、計算臟器係數(每組平均前列腺重/平均體重)，並進行組織切片實驗，最後進行生物統計處理(t檢驗)。
組織切片實驗用石蠟包埋前列腺組織塊，然後切片進行HE染色，光鏡下觀察。
實驗數據見下表表3苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)對前列腺腫大的抑制作用

注*與陰性對照組相比P＜0.05表4苯乙基異硫氰酸酯的利尿作用

注*與陰性對照組相比P＜0.05表5大鼠前列腺炎切片的讀片結果

注0代表0分，+代表1分，++代表2分，+++代表3分。
**與陰性對照組相比P＜0.01結果由表3可以看出，苯乙基異硫氰酸酯對前列腺炎所致的前列腺腫大有明顯的抑制作用，且這種抑制作用與劑量的相關性不明顯，有可能說明本實驗中最低劑量已達到最佳治療效果。由表4可見，PEITC給藥組的利尿作用明顯，且劑量越大，利尿作用越明顯，呈現劑量療效相關性。當PEITC劑量達到4mg/kg時，從尿液量數據看，與陰性組相比，利尿作用顯著(P＜0.05)，且比陽性藥物津源靈利尿作用略強。由表5及圖3、圖5.1-5.5可見，陽性給藥組及苯乙基異硫氰酸酯大、中、小劑量組大鼠的病理改變程度均明顯低於陰性對照組且有顯著差異(P＜0.01)，表明苯乙基異硫氰酸酯與陽性藥物津源靈一樣，具有減輕和治療前列腺炎的作用。
實施例7不同異硫氰酸酯類化合物對人前列腺癌細胞體外生長抑制作用的研究材料及方法試劑苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)，同實施例2。其它異硫氰酸酯化合物，即苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)購於美國Sigma-Aldrich公司。實驗時，除4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)以無血清的RPMI-1640細胞培養基配製成工作液外，其它上述異硫氰酸酯類化合物都以DMSO配成溶液。
細胞培養同實施例2。
MTT和SRBMTT和SRB實驗方法如文獻所述[10](Kreis，Budman et al.1997)，簡述如下取對數生長期的癌細胞，接種於96孔板中，細胞密度為每孔5000細胞/200 1。24小時後加入等系列稀釋的所試藥物。細胞在藥物作用下，繼續培養3或7天。每孔取出100 1的培養液後，加入50 1 MTT[3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide]溶液繼續培養4小時。以200 1鹽酸異丙醇溶液溶解紫黑色的甲臢(Formazan)沉澱物，於540nm波長處測定光吸收值。若採用SRB法，則在72小時後，除去所有的培養液，細胞以10％三氯醋酸固定1小時後，置空氣中自然乾燥24小時，加入50 1的SRB(sulforhodamine B)染色20-30分鐘，以1％冰醋酸洗滌5次，置空氣中自然乾燥後，加入200 1的10mM Tris-HCl(pH10.0)溶液溶解紫紅色蛋白-SRB複合物，於540-630nm雙波長處測定光吸收值。求得各組試驗數據的平均值，以實驗組對對照組計算得細胞生存率。實驗結果見下表6。以SigmaPlot繪圖軟體繪得細胞生存率-藥物濃度半對數曲線(見圖6)，並求得藥物的半數有效濃度(IC50)。
表6異硫氰酸酯對人前列腺癌細胞LNCaP生長的抑制作用細胞生存率(％)

結果和討論採用MTT及SRB二種分析方法，我們對苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)、烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)的抗人前列腺癌LNCaP細胞活性進行了研究比較。結果發現除4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)在所試藥物濃度範圍內(0.039-20μM)無明顯細胞生長抑制外，其它三種異硫氰酸酯化合物對人前列腺癌細胞都有明顯的抑制作用，其中苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)與苯甲基異硫氰酸酯(BITC)抑制細胞生長強度相當，半數有效抑制濃度(ICs0)在0.8-1.5μM之間。而烯丙基異硫氰酸酯(AITC)對細胞生長抑制作用較弱，IC50大約為10μM(圖6)。本實驗說明對前列腺癌細胞或其它異常生長的癌細胞生長的抑制作用是異硫氰酸酯類化合物的共同藥理學特性。但與實施例9中苯乙基異硫氰酸酯對小鼠黑色素瘤B16生長抑制作用相比(IC50大約為10-12μM)，該化合物對人前列腺癌細胞生長抑制作用明顯強於對B16的抑制作用(強8-10倍)。該結果提示人癌細胞較動物癌細胞對異硫氰酸酯類化合物更敏感，或者是前列腺癌細胞較其它癌細胞更敏感。
實施例8PEITC-NAC體內抗腫瘤活性及對雄激素受體表達影響的研究材料及方法藥物PEITC-NAC同實施例2。實驗用其它化學試劑除特別說明外，均購於美國Sigma化學試劑公司。
腫瘤接種及藥物處理BALB/c無毛小鼠，雄性，5周齡，購於中國科學院上海實驗動物中心。動物詞養於SPF實驗室。取激素非依賴型人前列腺癌PC-3細胞，加入Matrigel膠，然後皮下接種於小鼠前腋下，平均每小鼠大約接種1×106個細胞。接種24小時後，將動物隨機分成2組，每組8隻，一組為非給藥陰性對照，給予AIN76A飼料。另一組為PEITC-NAC治療組，給予含PEITC-NAC的AIN76A飼料，每克飼料含8μM的PEITC-NAC。分別於給藥後第7、10、22天觀測腫瘤發病率。於最後一次給藥後24小時，稱量動物體重，並將動物處死，取出腫瘤稱重，計算腫瘤生成抑制率，結果見表7，以蛋白印跡法測定雄激素受體的表達變化。
表7PEITC-NAC對荷人激素非依賴型前列腺癌PC-3細胞裸鼠的抗癌作用

結果與討論免疫缺陷型小鼠被廣泛用於人體腫瘤的移植及抗癌藥物的研究。為了證明PEITC-NAC的抗前列腺癌活性，我們將激素非依賴型人前列腺癌PC-3細胞移植於免疫缺陷型小鼠，以觀察PEITC-NAC對激素非依賴型人前列腺癌PC-3細胞的抗癌作用。實驗結果如表7所示，PEITC-NAC在所用劑量下，對激素非依賴型人前列腺癌PC-3細胞具有較強的抑制作用，腫瘤生長抑制率達53.3％(P＜0.02)，並有一隻小鼠未發生腫瘤。
實施例9苯乙基異硫氰酸酯對小鼠黑色素瘤B16細胞體外生長抑制作用的研究材料與方法試劑苯乙基異硫氰酸酯，同實施例2；小鼠黑色素瘤細胞B16購自中國科學院上海細胞研究所；RPMI-1640細胞培養基購自Gibco公司；小牛血清購自上海華美生化試劑公司；穀氨醯胺購自Sigma公司；青黴素、鏈黴素為醫用品；胰蛋白酶為Amresco分裝產品；臺盼蘭購自Sigma公司；24孔細胞培養板購自美國Costar公司；二甲亞碸(DMSO)購自上海醫藥(集團)上海化學試劑公司。
細胞培養RPMI-1640培養液用1mol/L HCl或NaOH調pH至7.0～7.2，過濾除菌，4℃冰箱保存。用前加入10％小牛血清(FCS)，1％200mmol/L穀氨醯胺，100U/mL的青黴素和100U/mL鏈黴素，配製成完全培養液。小鼠黑色素瘤B16細胞生長於此培養基中，於37℃，5％CO2及飽和溼度的培養箱中生長。
細胞生長曲線的測定取對數生長期的B16細胞，經0.25％的胰酶消化後，用RPMI-1640完全培養液調整細胞濃度約2～5×104/mL，然後將細胞接種於24孔培養板中，每孔1mL，培養24h後，將含不同濃度苯乙基異硫氰酸酯的培養液加入各培養孔中，使其終濃度為5、10、15μmol/L，每個濃度設3個復孔，對照組加等體積RPMI-1640完全培養液，於37℃，5％CO2培養箱中培養0～5d。分別取不同培養時間的細胞，利用臺盼蘭染色法進行活細胞計數，每個濃度的活細胞數取3個復孔的平均值，並繪製細胞的生長曲線。生長曲線見附圖7。
抑制率的測定取對數生長期的B16細胞，經0.25％的胰酶消化後，用RPMI-1640完全培養液調整細胞濃度為3～5×104/mL，將細胞接種於96孔培養板中，每孔150μL，置於37℃、5％CO2培養箱培養24h後，實驗組加入含不同濃度的苯乙基異硫氰酸酯的培養液150μL，空白對照組加入等體積的RPMI-1640完全培養液，每組設4個復孔，將細胞培養板移入CO2培養箱，於37℃、5％CO2及飽和溼度條件下繼續培養48h。培養結束後，小心棄去上清液，每孔加入150μL D-Hanks，清洗一次，小心棄去上清液，然後每孔加入MTT溶液100μL(0.5mg/mL)，再培養4h後，小心棄去上清液，每孔加入150μL DMSO，37℃，放置10min，振蕩後用酶聯免疫檢測儀測定OD570。抑制率結果見下表表8苯乙基異硫氰酸酯對小鼠黑色素瘤B16細胞的抑制作用

結果和討論從生長曲線(圖7)可以看出，苯乙基異硫氰酸酯對小鼠黑色素瘤B16細胞有明顯的抑制作用，而且濃度越高，這種細胞生長的抑制作用就越明顯。從抑制率實驗結果我們可以看出苯乙基異硫氰酸酯的濃度與小鼠黑色素瘤B16細胞的數量有明顯的量效關係，隨著樣品濃度的增加，抑制作用明顯增強，最高抑制率達到96％以上。這說明苯乙基異硫氰酸酯在體外能有效抑制小鼠黑色素瘤B16細胞增殖。
實施例10苯乙基異硫氰酸酯對體內小鼠黑色素瘤B16細胞抑制作用的研究材料與方法試劑苯乙基異硫氰酸酯，同實施例2；小鼠黑色素瘤細胞B16購自中國科學院上海細胞研究所；RPMI-1640細胞培養基購自Gibco公司；小牛血清購自上海華美生化試劑公司；穀氨醯胺購自Sigma公司；青黴素、鏈黴素為醫用品；胰蛋白酶為Amresco分裝產品；臺盼蘭購自Sigma公司；注射用環磷醯胺(CTX)(江蘇恆瑞醫藥股份有限公司)；生理鹽水上海長徵富民藥業銅陵有限公司。
動物健康雄性昆明種小鼠，鼠齡4～6wk，體重18～22g，購於南京醫科大學實驗動物中心。
體外細胞培養及在小鼠體內的傳代B16細胞於含體積分數為10％的小牛血清、1％200mmol/L穀氨醯胺、100U/mL的青黴素和100U/mL鏈黴素的RPMI-1640完全培養液中，37℃、5％CO2及飽和溼度的培養箱中生長，貼壁細胞用0.25％胰酶消化傳代。取對數生長期的B16細胞，用PBS製成細胞懸液，細胞計數，臺盼藍拒染法計活細胞數達98％以上，然後用PBS調整細胞濃度為1×107/mL，於小鼠右腋皮下接種0.2mL，進行傳代。
病理模型及藥物治療在無菌條件下剝離小鼠腋下傳代的黑色素瘤B16瘤塊，剪成碎塊，用玻璃勻漿器加生理鹽水(1∶3)磨成勻漿，用生理鹽水製成單細胞懸液，臺盼藍拒染法計活細胞數達98％以上，用生理鹽水調整細胞濃度為1×107/mL，每隻小鼠右腋皮下接種0.2mL，接種後按體重隨機分成5組，每組12隻。
實驗組設灌胃給藥高、低劑量組(本發明的實施例11-26組合物，以有效成分苯乙基異硫氰酸酯計，劑量為70、120mg/kg)，陰性對照組採用含有相同溶劑的生理鹽水灌胃，陽性對照組採用腹腔注射環磷醯胺(20mg/kg)，次日開始給藥，每日給藥一次，連續給藥15d。停藥24h後處死小鼠，取瘤稱重、記錄瘤體積、計算抑瘤率。抑制率結果見表9。
測定腫瘤體積生長曲線瘤體積測定參照衛生部藥政局編《新藥(西藥)臨床前研究指導原則彙編》中的「抗腫瘤藥物藥效學指導原則」規程進行實驗。本實驗從小鼠腫瘤接種後第四天開始用遊標卡尺隔天測量荷瘤小鼠的腫瘤長徑(A)和短(B)徑，測量重複三次。按公式計算相似體積V＝π/6[(A+B)/2]3，並作時間-腫瘤體積生長曲線圖(圖8)。
表9苯乙基異硫氰酸酯對移植性小鼠黑色素瘤B16的抑制作用


注*與陰性對照組相比，P＜0.05**與陰性對照組相比，P＜0.01△與陽性對照組相比，P＞0.05結果和討論(1)由表9可知，給藥途徑為灌胃時，苯乙基異硫氰酸酯給藥組的平均瘤重與陰性對照組相比，具有顯著性差異(P＜0.05)，並且有一定的劑量依賴關係。苯乙基異硫氰酸酯對小鼠B16實體瘤的抑制率可達58.54％，陽性對照組(環磷醯胺)的抑制率達66.23％，兩者之間無顯著性差異(P＞0.05)。苯乙基異硫氰酸酯系口服給藥，而陽性藥物通過注射給藥，顯然，口服給藥更方便患者使用。
(2)由圖8可知，瘤體積生長曲線作為評價抑瘤率指標時，瘤體積和瘤重具有很好的相關性。結果表明給藥途徑為灌胃時，苯乙基異硫氰酸酯對體內的小鼠黑色素瘤B16依濃度變化產生不同程度的抑制作用，抑制效果與劑量正相關。
結合表9和圖8，我們可以得出這樣的結論苯乙基異硫氰酸酯對體內移植性小鼠腫瘤B16具有一定的抗腫瘤作用。而在人體的皮膚癌中，惡性黑色素瘤是最嚴重的一種皮膚癌，。苯乙基異硫氰酸酯在小鼠體內外藥效實驗中均已顯示出較好的抑制作用，我們有理由相信不難推斷苯乙基異硫氰酸酯對於人皮膚癌也可以有良好的治療前景。
實施例11不同異硫氰酸酯類化合物的藥物組合物的研究本發明經過廣泛而深入的研究，通過對表面活性劑、油性成分及其它輔料成分進行合理篩選，製備了溶出度高，穩定性好的異硫氰酸酯的藥品、保健品組合物。體內藥效學研究結果表明，這類組合物對前列腺增生、前列腺炎、皮膚癌有很好的抑制作用。
本發明的藥品、保健品組合物，其組成主要包括(a)天然的或人工合成的有效成分異硫氰酸酯類化合物；(b)表面活性劑或增溶劑；(c)油性成分等；(d)其他輔料成分。其中(a)、用於本發明的天然的或人工合成的異硫氰酸酯活性成分，其用量為0.5-50重量份，更佳的為1-25重量份。
(b)、表面活性劑表面活性劑在本發明中起乳化、增溶等作用。表面活性劑由於同時具有親水親油基團，可以包圍在活性成分的分子周圍，進而起乳化、增溶及穩定有效成分的作用。表面活性劑可以是聚氧乙烯月桂醇醚、聚氧乙烯單硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烴氧酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯蓖麻油、泊洛沙姆、聚乙二醇、吐溫中的一種或多種組合物；其中優選的是硬脂酸聚烴氧(40)酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚氧乙烯蓖麻油35、泊洛沙姆F-68、聚乙二醇6000；最優選的是硬脂酸聚烴氧(40)酯；表面活性劑或增溶劑的用量通常為0-1000重量份，更佳地為5-200重量份。
(c)、油性成分本發明的藥品、保健品組合物中還含有油性成分，作為稀釋劑或助溶劑。它們可以是脂肪酸或脂肪酸甘油三酯、單或雙脂肪酸甘油酯、包括但不限於大豆油、玉米油、花生油、硬脂酸、軟脂酸、棕櫚油、葵花籽油、橄欖油、椰子油、芝麻油、棉籽油、低芥酸菜籽油、油酸、中鏈脂肪酸甘油三酯、單辛癸酸甘油酯、單乙酸甘油酯、二乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯中的一種或一種以上的組合物；其中優選的為中鏈脂肪酸甘油三酯、脂肪酸甘油三酯、大豆油、玉米油、棉籽油、硬脂酸、油酸；更佳的為中鏈脂肪酸甘油三酯、大豆油、玉米油；最佳的為中鏈脂肪酸甘油三酯；油性成分的通常用量為0-500重量份，更佳的為0.5-100重量份。
(d)、其它輔料成分如吸附劑和稀釋劑、潤滑劑、粘合劑、崩解劑、包合材料、溶劑、包衣材料等；運用這些輔料添加劑可將本發明中所述的的組合物進一步製成片劑、顆粒劑、丸劑、凍乾粉劑、溶液劑、乳劑、注射劑、膏劑、膜劑、栓劑、噴霧劑、植入劑等其它一切適宜劑型；其中吸附劑由於本發明的藥品、保健品組合物中有的活性成分為水難溶性的油狀物，如果要製成片劑等固體劑型，首先需採用合適的吸附劑和稀釋劑。本發明所採用的吸附劑可以是α乳糖(一水)、無水乳糖、β環糊精、羥丙基β環糊精、微晶纖維素(PH101、PH102，KG系列)、乳糖澱粉丸心(starlac)、微晶纖維素丸心、碳酸鈣、磷酸氫鈣、改性澱粉、蔗糖八乙酸酯、羧甲基澱粉鈉、羥丙基纖維素、硬脂酸、甘露醇、山梨醇(P20/60)、山梨酸、羧甲基纖維素、多孔澱粉、微粉矽膠中的一種或多種組合物；其中優選的為硬脂酸、山梨醇、微晶纖維素(KG系列)、甘露醇300DC、β環糊精、微粉矽膠、α乳糖(一水)；更優的為β環糊精、硬脂酸；其通常的用量為0.5-1500重量份，更佳的為2.0-500重量份。
潤滑劑在本發明中，潤滑劑的作用是增加組合物的流動性，以便於壓片或灌裝膠囊。本發明所用的潤滑劑選自硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、聚乙二醇6000、微粉矽膠、滑石粉。其中更優的為硬脂酸鎂、聚乙二醇、微粉矽膠；潤滑劑通常的用量範圍是0-30重量份。
粘合劑本發明中，粘合劑的作用是增加粉末之間的粘合力，以便於制粒或壓片。本發明所用的粘合劑選自聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素(200目)、聚乙二醇6000等，其中優選的是羥丙基纖維素EF、聚乙二醇6000、羥丙基甲基纖維素E15；粘合劑通常的用量為0-100重量份；崩解劑本發明中崩解劑的作用主要是使有效成分進入體內能迅速崩散，以獲得較好的體內生物利用度。本發明所用的崩解劑選自多孔澱粉、羧甲基纖維素鈉、羧甲基澱粉納、低取代羥丙基纖維素、微晶纖維素等，優選的是微晶纖維素PH101、低取代羥丙基纖維素、羧甲基纖維素鈉；崩解劑的通常用量為0-100重量份；溶劑本發明中溶劑的作用主要是作為將本發明的組合物製備成液體製劑的分散相，或者為了便於將本發明的組合物中的活性成分均勻分散到其它相關基質中的一種輔助溶媒，本發明所用的溶劑選自純化水、無菌注射用水、生理鹽水、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷等；溶劑的通常用量範圍為0-400重量份；包衣材料本發明中包衣材料的作用一方面是減少外界因素對藥物的影響，提高有效成分的穩定性，另一方麵包衣還可以將本發明的組合物製劑包裝成適宜方便給藥、易於被接受的商業化產品。本發明所用的包衣材料選自羥丙基甲基纖維素E15、羥丙基纖維素EF、甲基纖維素、乙基纖維素(200目)、二甲胺乙基甲基丙烯酯-中性甲基丙烯酯聚合物、聚乙二醇400、聚乙二醇4000、二氧化鈦、氧化鐵紅、山梨酸鉀；包衣材料的通常用量範圍是0.5-20重量份；本發明的苯乙基異硫氰酸酯藥品、保健品組合物，能有效抑制前列腺增生、前列腺炎及皮膚癌。
實施例11-14-磺酸基苯基異硫氰酸酯10mg
微晶纖維素(PH102)90mg無水乳糖 150mg微粉矽膠 2mg工藝取4-磺酸基苯基異硫氰酸酯，然後按等量遞增原則加入處方比例的微晶纖維素(PH102)、無水乳糖混合均勻，再加入微粉矽膠混合均勻，直接壓片。
4-磺酸基苯基異硫氰酸酯是粉末狀固體，分散性良好。本處方中主藥含量不高，故採用微晶纖維素和無水乳糖作稀釋劑，直接壓片。
實施例11-24-磺酸基苯基異硫酸酯10mg澱粉乳糖丸心(starlac) 288mg硬脂酸鎂2mg工藝先將澱粉乳糖丸心和4-磺酸基苯基異硫酸酯攪拌混合5分鐘，再加入硬脂酸鎂攪拌混合5分鐘，直接壓片。
澱粉乳糖丸心由於澱粉在內，乳糖在外，具有良好的抗溼性。本處方根據這一特點，選用starlac丸心，直接壓片。
實施例11-3苯乙基異硫氰酸酯2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯 350mg工藝取苯乙基異硫氰酸酯和中鏈脂肪酸甘油三酯攪拌混合均勻後，製備軟較囊或灌裝硬膠囊。
將本產品用於實施例4苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)對良性前列腺增生的研究(一)。
實驗中使用成年無病源健康雄性SD大鼠，手術切除雙側睪丸，注射睪丸酮丙酸酯，連續一個月。一個月後，陰性對照組可見明顯前列腺增生。以苯甲酸雌二醇為陽性對照，另設二個本產品給藥組，從注射睪丸酮丙酸酯第1天起就灌胃給藥本產品，劑量分別為4mg/kg、1mg/kg，每天給藥，連續一個月。
在末次給藥24小時後，將動物處死，稱重，並取出前列腺組織測量體積、稱重、求得平均值、計算臟器係數(每組平均前列腺重/平均體重)，最後進行生物統計處理。
實驗結果表明陰性對照組大鼠前列腺平均重量為1.28g，臟器係數為0.34％；陽性對照組前列腺重為0.73g，臟器係數為0.23％；本產品4mg/kg組、1mg/kg組的前列腺平均重分別為0.79g、0.91g，臟器係數分別為0.23％、0.25％，都低於陰性對照組，且有顯著差異(P＜0.05)。由此可以看出，本產品的組合物能抑制前列腺增生，其效果與陽性藥物雌二醇組無顯著性差異。
苯乙基異硫氰酸酯是水難溶性液體，限制了處方的選擇餘地。本處方採用碳鏈較短的中鏈脂肪酸甘油三酯，分散性好，除保證了製劑的含量均勻度外，還有穩定性較好的優點。儘管體外溶出度的提高尚不夠令人滿意，但從體內實驗的結果來看，本產品可以認為是有臨床應用前景的產品之一。
實施例11-4苯甲基異硫氰酸酯 2.5mg大豆油350mg工藝取苯甲基異硫氰酸酯和大豆油攪拌混合均勻後，製備軟較囊或灌裝硬膠囊。
與11-3處方相比，本處方採用大豆油，優點是價格較低、來源較廣，但由於碳鏈較長，對藥物的體內吸收較為不利。
實施例11-5苯乙基異硫氰酸酯 100mg聚乙二醇4000 3000mg
工藝聚乙二醇4000先在磁力加熱器上加熱熔融，然後加入苯乙基異硫氰酸酯攪拌均勻，60℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯乙基異硫氰酸酯的滴丸。
本處方使用聚乙二醇4000有利於提高苯乙基異硫氰酸酯的溶出度。滴丸這種劑型對溶出度的改善也是有好處的，但是僅僅使用聚乙二醇4000熔點較低，對滴丸的成型帶來困難。
實施例11-6苯乙基異硫氰酸酯 2.5mg維生素E琥珀酸聚乙二醇酯 125mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
維生素E琥珀酸聚乙二醇酯是一種優秀的表面活性劑，這對提高主藥的溶出度是大有好處的。但是維生素E琥珀酸聚乙二醇酯內含生物活性物質α-生育酚，如此高含量的維生素E琥珀酸聚乙二醇酯是否會對患者產生有利或有害的副作用值得探討。
實施例11-7苯乙基異硫氰酸酯 2.5mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 25mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
硬脂酸聚烴氧(40)酯是藥典批准使用的表面活性劑之一，沒有維生素E琥珀酸聚乙二醇酯生物活性副作用。經實驗證實，本處方除穩定性較好外，溶出度也較好。
實施例11-8苯乙基異硫氰酸酯50mg聚乙二醇6000150mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 1350mg工藝聚乙二醇6000和硬脂酸聚烴氧(40)酯先在磁力加熱器上加熱熔融，然後加入苯乙基異硫氰酸酯攪拌均勻，60℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯乙基異硫氰酸酯的滴丸，直接罐裝膠囊。
本處方綜合使用聚乙二醇6000和硬脂酸聚烴氧(40)酯，實驗結果表明溶出度較好，但是穩定性不夠理想。
實施例11-9苯甲基異硫氰酸酯 50mg聚乙二醇6000 300mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 1200mg工藝聚乙二醇6000和硬脂酸聚烴氧(40)酯先在磁力加熱器上加熱熔融，然後加入苯甲基異硫氰酸酯攪拌均勻，60℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯甲基異硫氰酸酯的滴丸。
與苯乙基異硫氰酸酯相似，苯甲基異硫氰酸酯亦為水溶性差的油狀液體。故本處方採用11-8類似的輔料，實驗結果也表明溶出度較好。
實施例11-10滴丸處方 苯乙基異硫氰酸酯50mg聚乙二醇6000450mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 1050mg包衣處方 Eudragit E100 100mg丙酮1420mg滑石粉/硬脂酸鎂 50mg聚乙二醇6000(過80目篩) 10mg
水 20mg工藝取處方量聚乙二醇6000、硬脂酸聚烴氧(40)酯先加熱熔融，然後加入苯乙基異硫氰酸酯攪拌均勻，70℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯乙基異硫氰酸酯的滴丸。
另取處方量的丙酮，加入硬脂酸鎂、滑石粉，攪拌均勻待用。再將處方量的聚乙二醇溶於水中。然後將上述兩種溶液混合均勻，用球磨機分散均勻得混懸液。另取處方量EudragitE100用丙酮適量溶解，製備成12.5％的Eudragit E100丙酮溶液，加入配好的混懸液中，並用丙酮調整濃度，得到濃度為8～10％的包衣溶液。
將製成的滴丸置包衣鍋，轉動狀態下噴灑包衣液，包衣。然後將包衣後的滴丸灌裝硬膠囊。
實施例11-11苯乙基異硫氰酸酯 25mg維生素E琥珀酸聚乙二醇酯 50mg泊洛沙姆F-12750mg山梨醇 75mg多孔澱粉 193mg微晶纖維素PH101 392mg10％聚乙烯吡咯烷酮K30乙醇溶液0.5ml滑石粉 15mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯、泊洛沙姆F-127加熱熔融後，加入山梨醇、多孔澱粉、微晶纖維素PH101吸附攪拌均勻後，邊攪拌邊加入聚乙烯吡咯烷酮K30乙醇溶液制顆粒，過篩，置60℃烘箱烘30分鐘，得幹顆粒，加入滑石粉適量攪拌均勻，灌裝硬膠囊。
實施例11-12苯乙基異硫氰酸酯 25mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 250mg微晶纖維素KG系列 2380mg滑石粉 70mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯在60℃熔融，混合均勻後，按等量遞增原則加入微晶纖維素KG系列吸附，攪拌均勻後，加入處方量的滑石粉，直接壓片。
實施例11-13苯甲基異硫氰酸酯 2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯 2mg吐溫80 25mg工藝將苯甲基異硫氰酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、吐溫80混合均勻後，灌裝硬膠囊。
為了改善苯甲基異硫氰酸酯的溶出，本處方參照實施例11-3，增加了表面活性劑吐溫80，實驗結果證實本處方的溶出有較明顯的改善。
實施例11-14苯乙基異硫氰酸酯 2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯 2mg聚氧乙烯23月桂醇醚 25mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、聚氧乙烯23月桂醇醚在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
本處方是按照實施例11-13的思路，探討不同表面活性劑的影響。
實施例11-15
苯乙基異硫氰酸酯 2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯2mg聚氧乙烯氫化蓖麻油40 10mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、聚氧乙烯氫化蓖麻油40在40℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
聚氧乙烯氫化蓖麻油40是近年來多種難溶性藥物(如紫杉醇)製劑選用的表面活性劑，本實驗也證明聚氧乙烯氫化蓖麻油40對水難溶性藥物的確有良好的增溶效果。
實施例11-16苯乙基異硫氰酸酯 2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯 2mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 25mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
將本產品用於實施例4苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)對良性前列腺增生的研究(一)。實驗中使用成年無病源健康雄性SD大鼠，手術切除雙側睪丸，注射睪丸酮丙酸酯，連續一個月。一個月後，陰性對照組可見明顯前列腺增生。以苯甲酸雌二醇為陽性對照，另設二個本產品給藥組，從注射睪丸酮丙酸酯第1天起就灌胃給藥本產品，劑量分別為4mg/kg、1mg/kg，每天給藥，連續一個月。
在末次給藥24小時後，將動物處死，稱重，並取出前列腺組織測量體積、稱重、求得平均值、計算臟器係數(每組平均前列腺重/平均體重)，最後進行生物統計處理。
實驗結果表明陰性對照組大鼠前列腺平均重量為1.28g，臟器係數為0.34％；陽性對照組前列腺重為0.73g，臟器係數為0.23％；本產品4mg/kg組、1mg/kg組的前列腺平均重分別為0.83g、0.75g，臟器係數分別為0.23％、0.21％，，都低於陰性對照組，且有顯著差異(P＜0.05)。由此可以看出，本產品的組合物能抑制前列腺增生，其效果與陽性藥物雌二醇組無顯著性差異。
此外，本產品用於實施例5苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)對良性前列腺增生的研究(二)和實施例6苯乙基異硫氰酸酯對非細菌性前列腺炎作用的研究，都取得了令人滿意的實驗結果。
苯乙基異硫氰酸酯是水難溶性液體，限制了處方的選擇餘地。本處方參照實施例11-3和實施例11-7，在同一處方內同時使用中鏈脂肪酸甘油三酯和硬脂酸聚烴氧(40)酯。體外實驗結果表明本處方不僅穩定性較好，而且溶出度較高，體內實驗的結果與體外溶出度結果一致。綜合體內體外的實驗結果，本產品可以認為是有臨床應用前景的產品之一。
實施例11-17苯乙基異硫氰酸酯 2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯125mg硬脂酸聚烴氧(40)酯25mg工藝取苯乙基異硫氰酸酯和硬脂酸聚烴氧(40)酯、中鏈脂肪酸甘油三酯加熱熔融，攪拌混合均勻後，灌入硬膠囊。
本處方是實施例11-16的改進型，但可能由於中鏈脂肪酸甘油三酯比例偏高的緣故，該處方的溶出度反而較實施例11-16差。
實施例11-18苯甲基異硫氰酸酯 2.5mg玉米油100mg硬脂酸聚烴氧(40)酯50mg工藝取苯甲基異硫氰酸酯和硬脂酸聚烴氧(40)酯、玉米油加熱熔融，攪拌混合均勻後，灌入硬膠囊。
本處方仍是實施例11-16的改進型。但處方中主藥改變為苯甲基異硫氰酸酯，用玉米油代替中鏈脂肪酸甘油三酯。可能由於玉米油碳鏈較長的緣故，該處方的溶出度不如實施例11-16。
實施例11-19苯乙基異硫氰酸酯 2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯250mg硬脂酸聚烴氧(40)酯125mg工藝取苯乙基異硫氰酸酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯、中鏈脂肪酸甘油三酯加熱熔融，攪拌混合均勻後，採用壓製法製備軟膠囊。
本處方仍是實施例11-16的改進型，與實施例11-17相比，同時增加了中鏈脂肪酸甘油三酯和硬脂酸聚烴氧(40)酯的量，該處方的溶出度較實施例11-17有改善。
實施例11-20烯丙基異硫氰酸酯 2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯320mg硬脂酸聚烴氧(40)酯40mg工藝取烯丙基異硫氰酸酯和硬脂酸聚烴氧(40)酯、中鏈脂肪酸甘油三酯加熱熔融，攪拌混合均勻後，採用壓製法製備軟膠囊。
烯丙基異硫氰酸酯也是水難溶性液體，所以仍採用類似實施例11-16的處方。為了提高烯丙基異硫氰酸酯的穩定性，本處方採用中鏈脂肪酸甘油三酯比例偏高的做法。
實施例11-21苯乙基異硫氰酸酯 50mg硬脂酸 150mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 1350mg工藝硬脂酸和硬脂酸聚烴氧(40)酯先在磁力加熱器上加熱熔融，然後加入苯乙基異硫氰酸酯攪拌均勻，60℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯乙基異硫氰酸酯的滴丸。
本處方仍是實施例11-16的改進型，與實施例11-16相比，用硬脂酸代替了中鏈脂肪酸甘油三酯。其出發點在於硬脂酸是硬脂酸聚烴氧(40)酯的組成部分，這二者配合使用，應當有較好的相容性。
實施例11-22苯甲基異硫氰酸酯50mg硬脂酸 300mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 1200mg工藝硬脂酸和硬脂酸聚烴氧(40)酯先在磁力加熱器上加熱熔融，然後加入苯甲基異硫氰酸酯攪拌均勻，60℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯甲基異硫氰酸酯的滴丸。
與實施例11-21相比較，除主藥由苯乙基異硫氰酸酯改變為苯甲基異硫氰酸酯外，硬脂酸比例有所提高。優點是處方產品的熔點上升，有利於滴丸的成型。
實施例11-23苯乙基異硫氰酸酯 25mg中鏈脂肪酸甘油三酯 20mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 50mg維生素E琥珀酸聚乙二醇酯 125mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
本處方是實施例11-16的改進型，由於使用了維生素E琥珀酸聚乙二醇酯，進一步改善了水溶性，但維生素E琥珀酸聚乙二醇酯具有一定的生物活性，對特定的臨床適應症而言，有必要考慮是否會產生正面或負面的效果。
實施例11-24苯甲基異硫氰酸酯 25mg中鏈脂肪酸甘油三酯 20mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 100mg維生素E琥珀酸聚乙二醇酯 125mg工藝將苯甲基異硫氰酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
該處方除活性藥物改變為苯甲基異硫氰酸酯外，其它與實施例11-23近似。
實施例11-25苯乙基異硫氰酸酯 25mg芝麻油 17mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 62mg泊洛沙姆F-68 42mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、芝麻油、硬脂酸聚烴氧(40)酯、泊洛沙姆F-68在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
與實施例11-16相比較，本處方有二處改進(1)中鏈脂肪酸甘油三酯換成了芝麻油；(2)增加了泊洛沙姆F-68。作為非離子型的聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物泊洛沙姆F-68，結構上與硬脂酸聚烴氧(40)酯有相似之處，而親水性更為優異一些，二者的確是可以協同使用。
實施例11-26苯乙基異硫氰酸酯 25mg中鏈脂肪酸甘油三酯 20mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 75mg聚氧乙烯蓖麻油35 50mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯、硬脂酸聚烴氧(40)酯、聚氧乙烯蓖麻油35在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
本處方是實施例11-16的改進型，增加了聚氧乙烯蓖麻油35，進一步改善了水溶性。
實施例11-27苯甲基異硫氰酸酯 25mg棉籽油 20mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 250mg聚氧乙烯蓖麻油35 50mg工藝將苯甲基異硫氰酸酯、棉籽油、硬脂酸聚烴氧(40)酯、聚氧乙烯蓖麻油35在60℃熔融，混合均勻後，灌裝硬膠囊。
與實施例11-26相比較，本處方用棉籽油代替中鏈脂肪酸甘油三酯。此外，硬脂酸聚烴氧(40)酯的比例增大，改善了處方的水溶性。
實施例11-28苯乙基異硫氰酸酯 100mg中鏈脂肪酸甘油三酯 90mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 250mg聚乙二醇6000 2500mg工藝聚乙二醇6000、硬脂酸聚烴氧(40)酯先在磁力加熱器上加熱熔融，然後加入苯乙基異硫氰酸酯和中鏈脂肪酸甘油三酯攪拌均勻，70℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯乙基異硫氰酸酯的滴丸。用無水乙醚洗滌滴丸表面的殘留二甲基矽油，揮除乙醚，罐裝膠囊。
與實施例11-16相比較，本處方增加了熔點較高的聚乙二醇6000。這使得處方的熔點提高，有利於滴丸的成型。
實施例11-29苯甲基異硫氰酸酯100mg中鏈脂肪酸甘油三酯 80mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 1000mg聚乙二醇60004800mg工藝聚乙二醇6000先在磁力加熱器上加熱熔融，然後加入苯甲基異硫氰酸酯和中鏈脂肪酸甘油三酯攪拌均勻，70℃水浴保溫至無氣泡，滴入冷卻劑二甲基矽油中，得到苯甲基異硫氰酸酯的滴丸。用正己烷洗滌滴丸表面的殘留二甲基矽油，揮除乙醚，罐裝膠囊。
與實施例11-28相比較，本處方有二處改進(1)主藥苯乙基異硫氰酸酯改變為苯甲基異硫氰酸酯；(2)同時增加了硬脂酸聚烴氧(40)酯和聚乙二醇6000的比例。這使得實施例11-28為了提高熔點而損失的親水性能力得以部分地補償。
實施例11-30苯乙基異硫氰酸酯25mg中鏈脂肪酸甘油三酯 25mg維生素E琥珀酸聚乙二醇酯 100mg聚乙二醇400025mg工藝聚乙二醇4000、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯先在水浴60℃熔融，然後加入苯乙基異硫氰酸酯和中鏈脂肪酸甘油三酯攪拌均勻，趁熱罐裝硬膠囊。
與實施例11-23相比較，本處方用聚乙二醇4000代替了硬脂酸聚烴氧(40)酯。與後者相比較，聚乙二醇4000沒有硬脂酸基團，但分子量約為後者的1倍，二種效應的共同結果使得前者的親水性較後者略強。
實施例11-31苯乙基異硫氰酸酯 25mg生育酚 25mg維生素E琥珀酸聚乙二醇酯 75mg聚乙二醇4000 25mg工藝聚乙二醇4000、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯先在水浴60℃熔融，然後加入苯乙基異硫氰酸酯和生育酚攪拌均勻，趁熱罐裝硬膠囊。
本處方採用維生素E琥珀酸聚乙二醇酯作為表面活性劑。考慮到維生素E琥珀酸聚乙二醇酯包括了α-生育酚和聚乙二醇，根據相似相溶的原則，這三者的共同使用會有比較好的親和效果。但是維生素E琥珀酸聚乙二醇酯和α-生育酚均具有一定的生物活性，對特定的臨床適應症而言，有必要考慮是否會產生正面或負面的效果。
實施例11-32苯乙基異硫氰酸酯2.5mg中鏈脂肪酸甘油三酯 2.0mg硬脂酸聚烴氧(40)酯 25mg羧甲基澱粉鈉300mg聚乙二醇6000(過80目篩) 10mg工藝將苯乙基異硫氰酸酯、聚氧乙烯40單硬脂酸酯、中鏈脂肪酸甘油三酯稍稍加熱熔融後，加入羧甲基澱粉鈉攪拌混合，加入聚乙二醇6000細粉，混合均勻後灌膠囊。
羧甲基澱粉鈉是一種優秀的粘合劑，本處方旨在探討將實施例11-16的處方改造成粉末狀固體製劑的可能性。
實施例11-33片劑處方 4-磺酸基苯基異硫氰酸酯10mgβ環糊精(Kleptose DC) 240mg甘露醇(Pearlitol SD200) 240mg硬酯酸鎂 10mg包衣處方 羥丙甲纖維素E15 0.4mg羥丙基纖維素EF0.4mg聚乙二醇400 0.08mg山梨酸鉀 0.014mg水10mg工藝先將4-磺酸基苯基異硫氰酸酯、β環糊精、甘露醇在渦輪攪拌器中攪拌10分鐘。然後加硬酯酸鎂，攪拌5分鐘，直接壓片。
另取處方量的水，保溫、攪拌狀態下加入羥丙甲基纖維素E15、羥丙基纖維素EF、聚乙二醇400和山梨酸鉀，得到包衣液。將製成的片心加入包衣鍋，轉動狀態下噴灑包衣液。製得包衣片。
實施例12.部分異硫氰酸酯組合物的穩定性研究實驗儀器S.C.101型鼓風電熱恆溫乾燥箱浙江省嘉興縣新勝電熱儀器廠，METTLER AE 100電子天平瑞士梅特勒公司，安捷倫1100高效液相色譜儀美國Agilent公司。
實驗方法取異硫氰酸酯對照品和組合物適量，置潔淨西林瓶中，加橡膠塞，鋁蓋密閉，置60℃條件下放置，於第0，5，10天取樣，高效液相色譜法考察含量的變化。
實驗結果見表10表10穩定性實驗結果

實驗討論上述實驗結果表明，異硫氰酸酯類化合物與油性成分組成的組合物的穩定性較單獨的異硫氰酸酯有所改善(實施例11-3、11-4)。此外，本實驗還說明異硫氰酸酯類化合物與油性成分(玉米油、中鏈脂肪酸甘油三酯等)、硬脂酸聚烴氧(40)酯等按不同比例混合而成的組合物穩定性亦較單獨的異硫氰酸酯好。這說明油性成分或油性成分及表面活性劑硬脂酸聚烴氧(40)酯可以在一定程度上改善異硫氰酸酯的穩定性，其機理尚待進一步研究。
實施例13部分異硫氰酸酯組合物的體外溶出度考察材料與方法藥物選自由實施例11中相關異硫氰酸酯類藥物組合物組方製備而成的適宜溶出考察的具體劑型。
儀器溶出度儀RCZ-5A智能藥物溶出儀，天津大學精密儀器廠；高效液相色譜儀美國安捷倫公司Agilent-1100。
溶出度測定方法按中國藥典2005年版二部附錄XC溶出度測定法第二法槳法，200轉/分鐘，37℃±0.5℃，脫氣去離子水500ml，45分鐘時取樣，立即過0.8μm微孔濾膜，取樣，高效液相分析，計算溶出百分率。
結果與討論為了評價異硫氰酸酯類藥物組合物溶出度的改善程度，我們取上述實施例中異硫氰酸酯類藥物組合物的部分組方(苯乙基異硫氰酸酯作對照)進行溶出度測定，現將部分結果列於下表。
表11部分異硫氰酶酯類組合物的溶出度結果

實驗討論由上表可知，異硫氰酸酯類化合物與單一油性成分組成的藥物組合物幾乎沒有溶出。異硫氰酸酯類化合物與油性成分、表面活性劑組成的藥物組合物有一定的溶出度。實驗數據表明，油性成分與溶出度呈負相關關係。
綜合實施例12穩定性實驗和實施例13溶出度實驗結果可知，異硫氰酸酯類化合物與油性成分和異硫氰酸酯類化合物與油性成分、表面活性劑組成的藥物組合物穩定性較好。此外，異硫氰酸酯類化合物與油性成分、表面活性劑組成的藥物組合物體外溶出度亦較高，本發明還通過實施例4、5、6、10的體內藥效實驗證實了這類藥物組合物療效確切，能夠用來預防和治療前列腺增生、前列腺炎及皮膚癌。
討論前列腺疾病是影響男性，尤其是中老年男性，生活質量的主要疾病之一。世界範圍內的前列腺疾病發病率正呈逐年上升的趨勢，目前的治療手段仍以藥物治療為主。現有的治療前列腺疾病的藥物或多或少存在這樣那樣的問題，如結構上具甾體母核的化合物有一定甾體性激素樣毒副作用，其它一些治療或預防前列腺疾病的藥物亦有諸如某些有效成分不明確、治療機理不清晰、療效不確切等不盡如人意之處，有必要研發新的、高效的藥品或保健品、食品、化妝品以預防和或治療前列腺疾病發生、發展。本發明應用多種體內及體外模型，通過大量的實驗數據證明了具有異硫氰酸基團的異硫氰酸酯類化合物，包括但不限於苯乙基異硫氰酸酯(PEITC)、苯甲基異硫氰酸酯(BITC)，烯丙基異硫氰酸酯(AITC)、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯(SPITC)、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物(PEITC-NAC)等能有效地治療和/或預防前列腺疾病，包括但不限於前列腺增生、前列腺炎及前列腺癌。在此基礎上，本發明還研究了治療和預防上述疾病的分子機理，即這類化合物均能通過誘導前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶GSTP1，使細胞增強對有害物質的清除，進而預防和治療前列腺增生、前列腺炎、前列腺癌變；另外，部分異硫氰酸酯，如苯乙基異硫氰酸酯還能通過有效地抑制雄激素受體AR、雄激素受體上遊基因SP1及雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原PSA的表達而抑制前列腺細胞增殖、抑制前列腺癌細胞生長。值得一提的是本專利所述的有效化合物口服有效，臨床使用方便，對於需要通過長期用藥治療前列腺疾病的患者來說，減少了不必要的痛苦和麻煩。本發明還提供證據表明異硫氰酸酯化合物能有效地治療和預防皮膚疾病包括但不限於皮膚癌。我們的實驗發現苯乙基異硫氰酸酯能有效抑制體內外小鼠黑色素瘤B16細胞增殖，說明苯乙基異硫氰酸酯還具有抗瘤譜廣等特點。早先已有學者提出苯乙基異硫氰酸酯能作為化學預防劑預防腫瘤發生，現我們又發現了其在前列腺疾病上的有效抑制作用，拓展了其可能的醫學應用領域。
為了將具有藥物活性的異硫氰酸酯類化合物變為有價值的產品，我們在組合物物及生產工藝方面亦進行了大量研究，包括在本專利內的是異硫氰酸酯類化合物為有效成分的藥品、保健品組合物。這些組合物具有溶出度較好、有效成分穩定等特點，有效成分使用劑量較低，因而藥物毒副作用較小、亦可以降低藥物生產成本、減輕患者的經濟負擔。在異硫氰酸酯類有效成分生產工藝上，本專利也提供了具體的從天然蔬菜中提取或人工合成這類化合物的工藝。綜上所述，本專利提供了一個新穎、實用、具廣闊臨床前景的產品。
附圖簡要說明圖1，不同異硫氰酸酯類化合物對人前列腺癌細胞LNCaP細胞中II相藥物代謝解毒酶GSTP1的誘導作用。圖中PEITC苯乙基異硫氰酸酯、BITC苯甲基異硫氰酸酯、AITC烯丙基異硫氰酸酯、SPITC4-磺酸基苯基異硫氰酸酯、PEITC-NAC苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物。
圖2，不同異硫氰酸酯類化合物對人前列腺癌細胞LNCaP細胞中雄激素受體AR、雄激素上遊基因Sp1、雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原(PSA)的抑制作用。圖中PEITC苯乙基異硫氰酸酯、BITC苯甲基異硫氰酸酯、AITC烯丙基異硫氰酸酯、SPITC4-磺酸基苯基異硫氰酸酯、PEITC-NAC苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物。
圖3，前列腺正常組織切片(顯微鏡放大20倍)。
圖4.1，前列腺增生模型陰性對照組腺泡密集度增加切片(顯微鏡放大20倍)。圖中與正常組織相比，腺泡密集度明顯增大。
圖4.2，前列腺增生模型陰性對照組腺腔體增大切片(顯微鏡放大20倍)。圖中與正常組織相比，腺腔體明顯增大，腔內分泌物增多。
圖4.3，保列治對照組腺腔體增大切片(顯微鏡放大20倍)。圖中與正常組織相比，前列腺腔體增大，腔內分泌物增多，但與前列腺增生模型的陰性對照組相比，前列腺腔體減小，腔內分泌物減少。
圖4.4，保列治對照組腺泡密集度增加切片(顯微鏡放大20倍)。圖中與正常組織相比，腺泡密集度增加，但與前列腺增生模型的陰性對照組相比，腺泡密集度減小。
圖4.5，前列腺增生模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(2mg/kg)切片(顯微鏡放大20倍)。圖中與正常組織相比，腔體增大，腔內分泌物增多，腺泡密集度增大，但與前列腺增生模型的陰性對照組相比，腔體減小，腔內分泌物減少，腺泡密集度減小。
圖5.1，前列腺炎模型陰性對照組充血切片(顯微鏡放大20倍)。圖中前列腺充血、水腫、中性白細胞浸潤、出血。
圖5.2，津源靈對照組淋巴細胞浸潤切片(顯微鏡放大20倍)。圖中淋巴細胞浸潤、纖維化、充血。
圖5.3，前列腺炎模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(4mg/kg)切片(顯微鏡放大20倍)。圖中前列腺水腫、稍有充血、纖維素滲出，但較前列腺炎模型陰性對照組輕。
圖5.4，前列腺炎模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(2mg/kg)切片(顯微鏡放大20倍)。圖中前列腺充血、水腫、纖維素滲出。
圖5.5，前列腺炎模型苯乙基異硫氰酸酯給藥組(1mg/kg)切片(顯微鏡放大20倍)。圖中前列腺充血、水腫、纖維素滲出、中性白細胞浸潤，但較前列腺炎模型陰性對照組輕。
圖6，不同異硫氰酸酯類化合物對人前列腺癌細胞LNCaP細胞生長的抑制作用及其比較。圖中PEITC苯乙基異硫氰酸酯、BITC苯甲基異硫氰酸酯、AITC烯丙基異硫氰酸酯、SPITC4-磺酸基苯基異硫氰酸酯。
圖7，苯乙基異硫氰酸酯對B16細胞生長曲線的影響。
圖8，灌胃給藥苯乙基異硫氰酸酯後黑色素瘤體積增長趨勢圖。
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權利要求
1.異硫氰酸酯類化合物或其衍生物在製備預防和治療前列腺疾病及皮膚癌的組合物中的應用。
2.如權利要求1所述的應用，其特徵在於，均能誘導前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶(Phase II detoxification enzyme)——穀胱甘肽轉移酶(GSTP1)的基因的表達。
3.如權利要求1所述的應用，其特徵在於，部分異硫氰酸酯類化合物或其衍生物抑制人前列腺癌LNCaP細胞雄激素受體(AR)及雄激素受體上遊基因Sp1、雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原的表達。
4.如權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述異硫氰酸酯類化合物包括苯甲基異硫氰酸酯、苯乙基異硫氰酸酯、烯丙基異硫氰酸酯、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯，其結構式分別如下(1)、(2)、(3)、(4)式
5.如權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述異硫氰酸酯類化合物衍生物包括苯甲基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、苯乙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、烯丙基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯-N-乙醯半胱氨酸共軛物，其結構式分別如下(5)、(6)、(7)、(8)式
6.如權利要求1所述的應用，其特徵是所述前列腺疾病包括前列腺增生、前列腺炎、前列腺癌。
7.如權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述異硫氰酸酯類化合物是天然的、從十字花科蔬菜包括但不限於水田芥、西蘭花、冬獨行菜、家木犀草中提取出來的，或人工合成的。
8.如權利要求1所述的應用，其特徵是所述的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物為單獨使用，或與輔料一起製成組合物使用。
9.如權利要求1所述組合物的應用，其特徵在於，組合物的形式是藥品或保健品或食品或化妝品。
10.如權利要求9所述的藥品、保健品組合物，其特徵在於，藥品與保健品的組合物包含下列成分(a)作為活性成分的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物；(b)可藥用的活性成分載體，所述可藥用載體包括(b1)表面活性劑或增溶劑；(b2)油性成分；(b3)由(b1)、(b2)中的一種或多種藥用載體組成的混合載體。
11.如權利要求10所述的藥品、保健品組合物，其特徵在於，所述的作為活性成分的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物具體為苯乙基異硫氰酸酯、苯甲基異硫氰酸酯、烯丙基異硫氰酸酯、4-磺酸基苯基異硫氰酸酯及其N-乙醯半胱氨酸共軛物。
12.如權利要求10所述的藥品、保健品組合物，其特徵在於，所述的表面活性劑選自聚氧乙烯月桂醇醚、聚氧乙烯單硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烴氧酯、維生素E琥珀酸聚乙二醇酯、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、泊洛沙姆、聚乙二醇、吐溫、聚山梨酯等；所述的增溶劑選自聚乙烯吡咯烷酮K17、聚乙烯吡咯烷酮K25、聚乙烯吡咯烷酮K30、聚乙烯吡咯烷酮K90，聚乙二醇400、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一種或一種以上組成的混合物。
13.如權利要求10所述的藥品、保健品組合物，其特徵在於，所述的油性成分選自脂肪酸或脂肪酸甘油三酯、單或雙脂肪酸甘油酯、大豆油、玉米油、花生油、硬脂酸、軟脂酸、棕櫚油、葵花籽油、橄欖油、椰子油、芝麻油、棉籽油、低芥酸菜籽油、油酸、中鏈脂肪酸甘油三酯、單辛癸酸甘油酯、單乙酸甘油酯、二乙酸甘油酯、三乙酸甘油酯中的一種或一種以上的混合物。
14.如權利要求10-13中任意一項所述的藥品、保健品組合物，其特徵是藥品、保健品組合物製成的劑型為片劑、膠囊劑、丸劑、注射用粉針、注射劑、凍乾粉劑、軟膏劑、栓劑、霜劑、膜劑、乳劑、噴霧劑、植入劑中的一種。
15.如權利要求10所述的藥品、保健品組合物在製備預防和治療前列腺疾病及皮膚癌的組合物中的應用。
16.如權利要求15所述的應用，其特徵是所述的前列腺疾病包括前列腺增生、前列腺炎、前列腺癌。
17.如權利要求15所述的應用，其特徵是組合物為單獨使用，或聯合使用。
18.如權利要求17所述的應用，其特徵在於，所述的聯合使用包括與外科手術聯合使用或與一種或多種西藥聯合使用或與中草藥聯合使用或與放射性治療聯合使用或與基因治療聯合使用或與生物調節劑聯合使用。
全文摘要
本發明涉及一種使用天然及人工合成的異硫氰酸酯類化合物或其衍生物預防和治療前列腺疾病及皮膚癌的方法。體外實驗證明各種異硫氰酸酯類化合物或其衍生物均能誘導前列腺細胞II相藥物代謝解毒酶——穀胱甘肽轉移酶，進而抑制前列腺細胞增生及炎症，大鼠體內試驗證實該類化合物在低劑量時對於良性前列腺增生、前列腺炎有效。本發明證實部分異硫氰酸酯類化合物或其衍生物可抑制人前列腺癌LNCaP細胞雄激素受體(AR)及雄激素受體上遊基因Sp1、雄激素受體下遊基因前列腺特異抗原的表達，體內外試驗證明該類化合物在較高劑量對前列腺癌和皮膚癌有效。本發明的以苯乙基異硫氰酸酯等為有效成分的組合物具多方面優點，可用於治療和/或預防前列腺及皮膚等方面疾病。
文檔編號A61P35/00GK101091705SQ20061012689
公開日2007年12月26日 申請日期2006年9月11日 優先權日2005年11月15日
發明者程景才, 王龍貴, 喬仁偉, 金海亞, 鍾成娟 申請人:無錫傑西醫藥科技有限公司