一種用於五種細菌的複合增菌培養基及其製備方法
2023-10-29 11:34:02
一種用於五種細菌的複合增菌培養基及其製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌複合增菌培養基及其製備方法，該培養基組分包括：牛腦浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋白腖5-15份，氯化鈉2.5-7.5份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1.5-3.5份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，七葉苷1-3份，蒸餾水1000份，pH值為7.2-7.5。製備方法包括：按照配方將各成分加入蒸餾水中，攪拌溶解，調節pH值，高壓滅菌。五種細菌是我國食品衛生標準中需檢測的主要致病菌。使用本發明所述複合增菌培養基，能夠實現五種致病菌的快速增殖。增菌16小時，菌體濃度可由1CFU/mL增至106CFU/mL~109CFU/mL，可直接用於多重PCR、基因晶片、微流控晶片等高通量檢測，完成上述五種病原菌的篩查。
【專利說明】一種用於五種細菌的複合增菌培養基及其製備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬於致病菌的前增菌培養基，特別是涉及到一種同時對沙門氏菌、金黃色 葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌複合增菌的培養基及其製備方法。
【背景技術】
[0002] 食源性致病菌是食物中毒和食源性疾病暴發的重要因素，是食品安全的重要風險 隱患。據世界衛生組織（World Health Organization, WHO)報導，全球每年發生腹瀉病的 病例數高達1. 5億，其中70%病例與各種致病性微生物汙染的食品有關。我國研究資料顯 示，微生物病原引起的食源性疾病佔46. 4%，嚴重危及人們的健康，造成重大經濟損失。沙門 氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌是食源性疾病的主要 致病菌，是食品安全風險預測和危害評估中重要監測項目。
[0003] 目前我國食品安全標準檢測沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌時，需要經過前增菌、選擇性增菌、分離培養、生化鑑定、和血清學鑑定 等步驟。培養基品種繁多，操作麻煩，工作量大，耗時長，無法滿足現代檢測快速、高通量的 要求，給食品生產企業和質檢單位造成較大壓力。所以在食品安全問題日益被人們所重視 的今天，研製出滿足快速檢測的多種致病菌複合增菌培養基迫在眉睫。
[0004] 關於多種致病菌複合增菌培養基的研究，近年來已受到國內外研究人員的廣泛關 注。Hyochin等研製的選擇性營養肉湯（SEL)，可同時富集沙門氏菌、大腸埃希氏菌和單 增李斯特菌，當接種量為l〇 2CFU/mL，經過12h複合培養後，菌體濃度可達到106?108CFU/ mL，可直接應用於多重 PCR 擴增（Hyochin Kim and Arun Κ· Bhunia.SEL, a Selective Enrichment Broth for Simultaneous Growth of Salmonella enterica， Escherichia coli0157H7，and Listeria monocytogenes[J]. Applied and Environmental Microbiol ogy，2008, 74(15) :4853-4866.);翁思聰等研製的選擇性增菌肉湯（SSSV)，可同時富集沙 門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌，當接種量為10 2CFU/mL，經過8h複合培 養後，菌體濃度可達到1〇5?106CFU/mL，可直接應用於多重PCR擴增(翁思聰，朱軍莉，馮 立芳，勵建榮.1種選擇性富集沙門氏菌、志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和副溶血性弧菌共增 菌培養基SSSV研究[J].中國食品學報2013, 13(1) :19-28.);劉園園等研製的選擇性增菌 肉湯（SSL)，可同時培養沙門氏菌、單增李斯特菌和金黃色葡萄球菌，當接種量為10 2CFU/ mL，經過24h複合培養後，菌體濃度可達到107?108CFU/mL，可直接應用於螢光PCR擴增(劉 園園，肖性龍，餘以剛，陳谷，李曉鳳，唐語謙，吳暉.一種能同時富集沙門氏菌、金黃色 葡萄球菌和單增李斯特菌的培養基[J].微生物學報，2009, 49 (10) :1389 - 1396.)。 此外，還有UPB (通用預增菌肉湯)、BPW(緩衝蛋白腖水）、NB (營養肉湯）等通用培養基，可 同時增殖多種細菌，但還沒有適用於沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌五種致病菌且組分簡單、製備簡便的複合增菌培養基。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的在於提供一種可同時培養沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏 菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌複合增菌的培養基，適用於多重PCR、基因晶片、微流控芯 片等高通量檢測，用於所述五種病原菌的篩查。
[0006] 本發明的目的通過如下技術方案實現： 一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌複合增 菌培養基，以質量份數計，其原料配方組成為：牛腦浸出粉5-10份，牛心浸出粉5-15份，蛋 白腖5-15份，氯化鈉2. 5-7. 5份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1. 5-3. 5份，甘露醇1-3份，丙 酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，七葉苷1-3份，蒸餾水1000份，pH值為7. 2-7. 5。
[0007] -種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復 合增菌培養基，以質量份數計，其優選配方為：牛腦浸出粉7. 5份，牛心浸出粉10份，蛋白 腖10份，氯化鈉5份，葡萄糖2份，磷酸氫二鈉2. 5份，甘露醇2份，丙酮酸鈉2份，甘氨酸 2份，七葉苷2份，蒸餾水1000份，pH值為7. 4。
[0008] 本發明的又一個目的是提供一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增 李斯特菌和副溶血性弧菌複合增菌培養基的製備方法，所述方法由以下步驟組成： (1) 按照配方將牛腦浸出粉、牛心浸出粉、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、磷酸氫二鈉、甘露 醇、丙酮酸鈉、甘氨酸和七葉苷加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH溶液調節pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C 高壓滅菌 15-20min，4°C 保存。
[0009] 本發明提供一種沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶 血性弧菌菌複合增菌培養基及其製備方法，所述五種細菌在該複合培養基中，能夠實現同 時快速增殖。增菌16小時，菌體濃度可由1 CFU/mL增至106 CFU/mL~109 CFU/mL，即可直接 用於多重PCR、基因晶片、微流控晶片等高通量檢測，用於上述五種病原菌的篩查。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1 稱取牛腦浸出粉5g，牛心浸出粉15g，蛋白腖5g，氯化鈉2. 5g，葡萄糖3g，磷酸氫二鈉 1. 5g，甘露醇lg，丙酮酸鈉 lg，甘氨酸3g，七葉苷lg，蒸饋水1000ml，攪拌溶解後，用10 mol/ L的NaOH溶液調節pH值至7. 2,121°C高壓滅菌15min，4°C保存。
[0011] 將菌體濃度均為1〇9 CFU/mL的沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李 斯特菌和副溶血性弧菌培養液分別稀釋1〇7倍，然後分別取100 μ?，接入10 mL製備好的用 於沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌複合增菌培養 基，使培養基中各菌體濃度為1 CFU/mL，37°C培養16h，取增菌培養後的增菌液100 μ?，適當 稀釋後分別塗布到沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧 菌選擇性培養基平板，進行分離培養。根據五種病原菌在平板上的特徵菌落進行計數，結果 見表1。
[0012] 表1複合增菌培養基增菌效果
【權利要求】
1. 用於沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯特菌和副溶血性弧菌復 合增菌的培養基，其特徵在於，以質量份數計，其原料配方組成為：牛腦浸出粉5-10份，牛 心浸出粉5-15份，蛋白腖5-15份，氯化鈉2. 5-7. 5份，葡萄糖1-3份，磷酸氫二鈉1. 5-3. 5 份，甘露醇1-3份，丙酮酸鈉1-3份，甘氨酸1-3份，七葉苷1-3份，蒸餾水1000份，pH值 為 7. 2-7. 5。
2. 根據權利要求1所述的用於沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌複合增菌的培養基，其特徵在於：以質量份數計，其配方為牛腦浸出粉 7. 5份，牛心浸出粉10份，蛋白腖10份，氯化鈉5份，葡萄糖2份，磷酸氫二鈉2. 5份，甘露 醇2份，丙酮酸鈉2份，甘氨酸2份，七葉苷2份，蒸餾水1000份，pH值為7. 4。
3. 根據權利要求1、2所述的用於沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、單增李斯 特菌和副溶血性弧菌複合增菌的培養基的配製方法，其特徵在於包括以下步驟： (1) 按照配方將牛腦浸出粉、牛心浸出粉、蛋白腖、氯化鈉、葡萄糖、磷酸氫二鈉、甘露 醇、丙酮酸鈉、甘氨酸和七葉苷加至蒸餾水中，攪拌溶解； (2) 用10 mol/L的NaOH溶液調節pH值至7. 2-7. 5 ; (3) 121°C 高壓滅菌 15-20min，4°C 保存。
【文檔編號】C12R1/42GK104195086SQ201410450436
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月27日 優先權日:2014年8月27日
【發明者】張巖, 劉銘, 李雲, 葛少林, 邢婉麗 申請人:博奧生物集團有限公司, 清華大學, 廣東粵檢生物科技有限公司