一種商陸種子快速萌發的方法以及該方法在無菌苗培養中的應用的製作方法

2023-10-29 16:43:22 2

專利名稱：一種商陸種子快速萌發的方法以及該方法在無菌苗培養中的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及植物組織培養領域，具體是涉及一種商陸種子快速萌發的方法以及該方法 在無菌苗培養中的應用。
背景技術：
商陸是具有諸多功效的多年生草本植物，目前人們對商陸的利用主要是採摘野生資源， 這主要是因為商陸繁殖困難，不利於大規模種植。商陸一般採用種子繁殖，但由於種皮硬度 大、結構緻密、休眠期長等原因，致使商陸種子的萌發往往長達一到數月，並且萌發率不高， 這使商陸的生長周期很長，要數月乃至數年才能獲得人們想要的代謝產物。針對商陸萌發難 的問題， 一些人試圖通過光照處理、變溫處理、硝酸鉀溶液浸泡以及赤黴素溶液浸泡等方法 來打破商陸種子的休眠狀態，促使其快速萌發。但是大都效果甚微。實驗結果不是無法促進 商陸種子的快速萌發，就是萌發率過低，不能大規模應用。因此，解決商陸種子萌發難的問 題成為了大規模種植、應用和研究商陸的關鍵問題。

發明內容
為了克服商陸萌發困難和生長周期長的難題，本發明提供一種商陸種子快速萌發及無菌苗培 養的方法，有效地解決了問題。
本發明所依據的原理是商陸是種子繁殖植物，其繁殖困難、休眠期長的原因並不是 許多人猜想的那樣商陸種子含有抑制種子萌發的物質，而是由於商陸種皮過硬且結構緻密， 不利於種子的吸漲，致使商陸種子萌發緩慢。針對商陸種皮過硬的問題，本發明採用濃硫 酸浸泡商陸種子一定的時間，使其破壞商陸種皮的結構(但同時不能損害種子的內含物)， 打破種子休眠狀態，這樣種子就能迅速吸漲進入萌發狀態。同時我們利用濃硫酸的殺菌作 用對商陸進行消毒，獲得無菌種子，經無菌繁殖得到無菌苗。
本發明所採用的技術方案是
一種商陸種子快速萌發的方法，是在商陸種子萌發培養前，用濃硫酸浸泡種子5 30min，然後衝洗去除殘留濃硫酸。
本發明還提供了上述快速萌發方法在商陸無菌苗培養中的應用。所說的應用，是將用濃硫酸 浸泡處理的種子，用無菌蒸餾水衝洗去除殘留濃硫酸後，將種子接入培養基，進行無菌培 養，獲得商陸無菌苗。
上述所說的培養基優選MS培養基+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂。 具體的操作步驟是-
1、 商陸種子的促萌及表面消毒
取成熟飽滿的商陸種子，在流水中衝洗3小時，瀝乾水分，將商陸種子浸泡於濃硫酸 中5 30min，然後傾倒出濃硫酸溶液，用無菌蒸餾水衝洗種子6 8次，去除殘留濃硫酸。 將經浸泡衝洗的種子置於無菌濾紙上瀝乾水分，備用。
2、 商陸試管苗的培養
將經過上述處理的商陸種子接種於裝入50mLMS固體培養基的150mL培養瓶中，每瓶 4 5粒，每種處理接種6 7瓶；於26士rC下暗培養，三天後種子開始萌發， 一周後種子 完成萌發過程，然後將培養瓶轉入26士rC，光照強度1500 2000LUX的光照培養箱中培養， 大約兩周後可以獲得商陸無菌苗。
採用本發明方法能快速打破商陸種子的休眠狀態，大大縮短了商陸種子的萌發以及成 苗時間。並且給實驗室研究提供了一個商陸無菌苗培養的方法。
具體實施例方式
在本發明中所使用的術語，除非有另外說明， 一般具有本領域普通技術人員通常理解的 含義。
下面結合具體的實施例，並參照數據進一步詳細地描述本發明。應理解，這些實施例只 是為了舉例說明本發明，而非以任何方式限制本發明的範圍。
在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。所用 試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其後所用相同 試劑如無特殊說明，均以首次標明的內容相同。實施例l
於9月底商陸果實和種子成熟季節釆摘商陸果實，選取完全成熟且無蟲害的果實在 太陽下晾曬，待商陸果實完全乾癟後，用手揉搓使種子從果實中脫落出來。然後進行分揀， 分揀後將種子繼續晾曬直至其乾燥。將涼曬好的種子裝於透氣性好的袋子中存於陰涼處。
取成熟飽滿的商陸種子，在流水中衝洗3小時，瀝乾水分。從中取200粒種子裝入lOOmL 的試劑瓶中，倒入50mL濃硫酸，輕輕晃勻，浸泡15min。然後傾倒出濃硫酸，用水衝洗種 子8次，去除殘留的濃硫酸。將經浸泡衝洗的種子置於濾紙上瀝乾水分，備用。
將經上述處理的商陸種子撒種於裝有一定量土壤的花盆中，室溫保持在25"左右，一 周后大部分種子開始萌發，商陸芽並迅速伸長， 一月後，商陸苗可以達到15cm高。
實施例2
取成熟飽滿的商陸種子，在流水中衝洗3小時，瀝乾水分。從中取100粒種子裝入無菌 的100mL的試劑瓶中，倒入30mL濃硫酸，輕輕晃勻，浸泡15min。然後傾倒出濃硫酸， 用無菌蒸餾水衝洗種子8次，去除殘留的濃硫酸。將經浸泡衝洗的種子置於無菌濾紙上瀝 幹水分，備用。
在無菌條件下將經上述處理的商陸種子接種於裝入50 m L MS固體培養基(MS培養基 +2%蔗糖+0.7%瓊脂)的150mL培養瓶中，每瓶5粒，接種6瓶；然後將它們置於26±1°C 下暗培養， 一周後統計種子的萌發率，然後將培養瓶轉入26士rC，光照強度2000LUX的光 照培養箱中培養，兩周後可以獲得商陸無菌苗。
數據處理以及統計方法
(1) 萌發率(°/。)=(發芽種子數/種子總數>100%
(2) 汙染率(％)=(汙染數/接種總數)xlOO%
(3) 未汙染率(％)=(未汙染數/接種總數)xlOO%
(4) 成苗率(％)=(成苗數/萌發數)xlOO%通過數據統計處理，我們得到結果，採用上述方法處理和培養商陸種子，最早萌發時間 為3天， 一周後的商陸種子的萌發率可以達到96.7%，汙染率為0。三周後商陸無菌苗可以達到 10cm高，成苗率為100%。
權利要求
1、一種商陸種子快速萌發的方法，其特徵在於，用濃硫酸浸泡商陸種子5～30min後，衝洗種子去除殘留濃硫酸，然後進行萌發培養。
2、 權利要求1所說的商陸種子快速萌發的方法在商陸無菌苗培養中的應用。
3、 根據權利要求2所說的應用，其特徵在於，具體方法是將用濃硫酸浸泡處理的種 子，用無菌蒸餾水衝洗去除殘留濃硫酸後，將種子接入培養基，進行無菌培養，獲得商陸 無菌苗。
4、 根據權利要求2所說的應用，其特徵在於，其中所說的培養基是MS培養基+20g/L 蔗糖+7g/L瓊脂。
全文摘要
本發明涉及植物組織培養領域，具體是涉及一種商陸種子快速萌發的方法以及該方法在無菌苗培養中的應用。本發明的方法是採用濃硫酸浸泡商陸種子一定的時間，使其破壞商陸種皮的結構，打破種子休眠狀態，使種子迅速吸漲進入萌發狀態。與此同時利用濃硫酸自身的殺菌功能對商陸種子進行了消毒處理。隨後將無菌的商陸種子接種在我們實驗選定的培養基上，調整一定的溫度、光照等條件使其快速萌發，並最終獲取了商陸無菌實生苗。採用本發明方法能快速打破商陸種子的休眠狀態，大大縮短了商陸種子的萌發以及成苗時間。並且給實驗室研究提供了一個商陸無菌苗培養的方法。
文檔編號C12N5/04GK101451119SQ20081024323
公開日2009年6月10日 申請日期2008年12月26日 優先權日2008年12月26日
發明者鄭鐵松, 靜 陳 申請人:南京師範大學