一種地錦草提取物、製備工藝及其應用的製作方法
2023-10-07 22:34:54 1
專利名稱：一種地錦草提取物、製備工藝及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種地錦草提取物、製備工藝及其應用，屬於天然藥物化學領域。
背景技術：
地錦草為大戟科植物地錦草或斑地錦乾燥的全草，為多年生草本植物，具有清解毒、利溼退黃、活血止血、抗病原等功能。現代研究表明，地錦草主要含可水解性鞣質類和槲皮素、山萘素等黃酮類化合物；藥理研究證明其具有抗菌、抗病毒、抗氧化、護肝、止血等生物活性。目前地錦草的提取均採用普通的水提醇沉或單純的醇提，其鞣質、脂溶性雜質較多、純度低，乾燥後提取物的引溼性過大。
發明內容
本發明的目的在於提供一種新的地錦草提取物製備工藝，經該工藝製備的提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。本發明採用的技術方案是地錦草提取物的製備工藝，其特徵是，依次包括以下步驟(1)取地錦草，加入70%的乙醇回流提取2次，每次3小時，70%的乙醇加入量每次為地錦草質量的8倍；(2)合併兩次提取液，然後將提取液加入到濃縮罐中，控制濃縮罐內溫度為 90士 1°C進行濃縮，至濃縮液相對密度為1. 025 ；(3)將濃縮液置聚醯胺柱上，分別用水，30%乙醇，50%乙醇梯度洗脫，每個梯度洗脫至無色；收集50 %乙醇洗脫液置濃縮罐中，控制濃縮罐內溫度為90 士 1 °C，濃縮至相對密度為1.025 ；(4)將濃縮後的50%乙醇洗脫液送入噴霧乾燥器，控制容器內進風口溫度為 180士5°C，出風口溫度為60 70°C，進行噴霧乾燥得到便於存放的地錦草提取物。上述乙醇的百分數均為重量百分數。上述工藝製得的地錦草提取物的主要成分及含量為總黃酮(槲皮素、山萘素、異黃酮、雙黃酮、查爾酮等)含量為M 27wt%，其中以槲皮素為主，地錦草提取物中槲皮素含量為12 Hwt %。該提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。本發明的有益效果是經聚醯胺柱洗脫後得到的產品，去除了可消解性鞣質成分， 使最終的提取物得到了純化，為產品進行下一步的開發應用奠定了堅實的基礎。經實驗證明本工藝製備的地錦草提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。
具體實施例方式實施例1
1、儀器與材料地錦草購自濟南市建聯中藥有限公司中藥飲片廠，產地為山東。聚醯胺柱40CmX200Cm 製造廠家天津阿託茲精細化工有限公司實驗菌種來自臨床經鑑定具有耐藥性的禽源大腸桿菌2、地錦草提取物製備取地錦草藥材50kg，置提取罐內，加入70%乙醇400Kg，加熱回流3小時，濾過，濾渣加入70 %乙醇400Kg，加熱回流3小時，濾過，濾液合併，置濃縮罐中，控制濃縮罐內溫度為90士 1°C，濃縮至相對密度為1.025，放冷。將濃縮液置40cmX 200cm聚醯胺柱內，調節洗脫液流速為5L/min，用水洗脫至無色(5小時)，再用30%乙醇洗脫至無色G小時)，然後用50%乙醇洗脫至無色(5小時)，收集50%乙醇洗脫液置濃縮罐中，控制濃縮罐內溫度為90士 1°C，濃縮至相對密度為1.025， 放冷。將濃縮後的50%乙醇洗脫液送入噴霧乾燥器內，控制容器內進風口溫度為 180士5°C，出風口溫度為60 70°C，進行噴霧乾燥，得噴乾粉2kg。上述乙醇的百分數均為重量百分數。3、地錦草提取物抑菌實驗3. 1藥液製備用IOg提取物，加入IOOml無菌蒸餾水，攪拌，3000轉/min離心，去除不溶物，高壓滅菌，即得。3. 2細菌懸液的製備用接種環將耐藥大腸桿菌接種於營養瓊脂斜面培養基， 37°C培養M小時，傳種於無菌肉湯培養基中，經18小時培養，再傳種於無菌肉湯培養基中培養6小時，將菌液濃度做1 100稀釋3. 3抑菌實驗取無菌小試管，每管加肉湯培養基1ml。取藥液Iml加入第1管， 混勻後取Iml加入第2管，第1管補加肉湯培養基1ml，第2管混勻後取Iml加入第3管， 第2管補加肉湯培養基1ml，如此連續稀釋至第10管，從第10管取出Iml棄掉，第11管用anl肉湯培養基做對照，這樣1 10管為倍比稀釋的藥液(按提取物折算即1 40，
1 80......1 20480)。第1 9和第11管每管各加菌液0.05ml，第10管不加菌液。
將所有試管充分混勻，置37°C培養M小時，觀察結果。3. 4結果判斷要求藥液對照管即第10管無大腸桿菌生長，菌液對照管即第11管有大腸桿菌生長正常，實驗方為有效。以抑制大腸桿菌生長的藥液最高稀釋度為抗菌效價。 以能抑制大腸桿菌生長的最高稀釋度為最低抑菌濃度MIC。實驗重複3次。結果顯示本工藝製備的地錦草提取物對耐藥性的禽源大腸桿菌的最低抑菌濃度 MIC 為 5120。4、槲皮素含量測定4. 1色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-0.4%磷酸溶液(50 50)為流動相；檢測波長360nm。4. 2對照品溶液的製備精密稱定槲皮素對照品適量，加80%甲醇製成每ImL 含20 μ g的溶液，即得。4. 3供試品溶液的製備取本品粉末約0. 03g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密封，稱定重量，超聲提取5分鐘，取出，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液20mL，精密加入25%鹽酸7mL，置85°C水浴中水解30min，取出，迅速放冷，轉至50mL容量瓶中，並加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。4. 4測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得。4. 5計算公式
權利要求
1.一種地錦草提取物，其特徵是，由地錦草提取製得，其總黃酮含量為M 27wt%;所述總黃酮以槲皮素為主，所述地錦草提取物中槲皮素含量為12 Hwt%。
2.權利要求1所述的地錦草提取物的製備工藝，其特徵是，依次包括以下步驟(1)取地錦草，加入70%的乙醇回流提取2次，每次3小時，70 %的乙醇加入量每次為地錦草質量的8倍；(2)合併兩次提取液，然後將提取液加入到濃縮罐中，控制濃縮罐內溫度為90士1°C進行濃縮，至濃縮液相對密度為1. 025 ；(3)將濃縮液置聚醯胺柱上，分別用水，30%乙醇，50%乙醇梯度洗脫，每個梯度洗脫至無色；收集50%乙醇洗脫液置濃縮罐中，控制濃縮罐內溫度為90士 1°C，濃縮至相對密度為 1. 025 ；(4)將濃縮後的50%乙醇洗脫液送入噴霧乾燥器，控制容器內進風口溫度為 180士5°C，出風口溫度為60 70°C，進行噴霧乾燥製得產品。
3.權利要求1所述的地錦草提取物在抑制耐藥性禽源大腸桿菌方面的應用。
全文摘要
本發明公開了一種地錦草提取物、製備工藝及其應用，屬於天然藥物化學領域。本發明將地錦草經回流提取、提取液濃縮，然後將濃縮液置聚醯胺柱上，分別用水，30％乙醇，50％乙醇梯度洗脫，收集50％乙醇洗脫液，洗脫液經濃縮、乾燥製得。其主要成分及含量為總黃酮含量為24～27wt％，其中以槲皮素為主，含量為12～14wt％。本發明經聚醯胺柱洗脫後得到的產品，去除了可消解性鞣質成分，使最終的提取物得到了純化，為產品進行下一步的開發應用奠定了堅實的基礎。經實驗證明本工藝製備的地錦草提取物具有良好的抑制耐藥性禽源大腸桿菌的作用。
文檔編號A61K36/47GK102302538SQ20111025560
公開日2012年1月4日 申請日期2011年9月1日 優先權日2011年9月1日
發明者張傳津, 蘇梅, 高迎春 申請人:山東華爾康獸藥有限公司