一種治療癌症的藥物組合物及製備方法

2023-09-23 13:14:50 2

專利名稱：一種治療癌症的藥物組合物及製備方法
技術領域：
本發明屬生物製劑技術領域。具體涉及一種治療癌症的藥物組合物。
背景技術：
癌症是人類第二大殺手，美國每年超過五十五萬人死於癌症，而新診斷的病人超過一百二十萬人。美國女性得癌症的一生風險為30％，男性更高達50％。在中國，雖然不同腫瘤的發生頻率有明顯差異，但總體的癌症死亡率與美國接近，每年超過二百二十萬人死於癌症，而新診斷病人超過六百萬(2001年癌症現狀和數據，美國癌症協會)。
癌症的治療手段，主要包括手術，化療藥物，放療藥物，激素藥物，免疫治療藥物及另類療法包括中藥等，手術是早期癌症治療的首選方法，而放化療藥物則是普遍使用的藥物，據統計，約80％以上的癌症病人會在其就醫過程中接受不同程度的放化療。
這些現行治療方法，對某些類型的腫瘤，有著顯著的效果，如聯合使用化療藥物對於小兒白血病的療效有較理想的效果，但對大多數癌症特別是實體瘤患者，目前使用的治療方法和藥物仍然不理想，而且各自有其局限性。例如，手術治療對早期診斷病人而且腫瘤尚未轉移的病人是首選方法，但由於診斷手段和醫保條件的限制，很多病人在確診時已到晚期，或腫瘤已轉移，這時就難以進行手術治療。此外，手術並不能完全保證原位腫瘤根除，而外圍腫瘤有可能失控發作，導致腫瘤復發或機體死亡。
化療和放療藥物對腫瘤雖有一定療效，但這些藥物對機體一些正常組織細胞具強烈的殺傷效果，造成嚴重的毒副作用，據統計，用過化療藥物的病人的死亡原因中，有近40％的死因與化療藥物使用有關。卡介菌多糖核酸是一種從卡介菌中提取的以多糖和核酸為主要組份的免疫調節劑，這種製劑能夠激活機體免疫力，增強自然殺傷細胞，毒性淋巴T細胞和巨噬細胞活性，誘導MHC II分子表達，並增加幹擾素，白介素2和其受體的表達(王慧等，湖南醫學院學報，13117-121，1988；趙偉強等，湖南醫科大學學報，15；34-37，1990；劉紫庭等，臨床尿泌外科雜誌，1048-49，1995；方建珍等，免疫學雜誌，9175-177，1993)。
卡介菌多糖核酸對細胞免疫體系有增強和調節效果，被用以治療免疫系統平衡紊亂或低下所造成的病症，如哮喘，老年性慢性支氣管炎，過敏和感冒等(王慧等，中華結核和呼吸雜誌，1220-23，1989；馬維勇等，醫學理論與實踐，142-4，2001；金一平等，上海免疫學雜誌，145-8，1994)。
卡介菌多糖核酸製品對腫瘤的治療有一些初步研究，張杰玉等研究了卡介菌多糖核酸在S180腫瘤中的作用，表明使用卡介菌多糖核酸對S180腫瘤有一定的抑制作用，並可延長荷S180腫瘤的小鼠存活期(張杰玉等，湖北醫科大學學報，18305-307，1997)。
化療藥物使用往往導致骨髓抑制和免疫力降低，羅秋平等(湖南醫科大學學報，21281-284，1996)在小鼠中發現，使用卡介菌多糖核酸後可對環磷醯胺造成的免疫抑制有一定程度的保護作用，並建議使用卡介菌多糖核酸加速恢復化療對機體免疫體系造成的傷害。
卡介菌多糖核酸對腫瘤的治療雖然研究有限，但卡介菌或其他卡介菌提取物對腫瘤的治療有大量報導。
如活卡介菌灌注治療淺表皮性膀胱癌，被大量臨床研究證明為最有效的治療方法(Lamm，Clinical Infect.Diseases，31S86-90，2000)。
又比如細菌核酸組份被認為對卡介菌治療腫瘤的效果起關鍵作用，MY-1是從卡介菌中提取的以核酸為主要組份的製劑，可以誘導幹擾素表達，增強自然殺傷細胞，並對腫瘤有明顯抑制效果(Yamamoto et al.Jpn.J.Cancer Res，79866-873，1988；Tokunagaet al.，JNCI，72955-962，1982；Yamamoto et al.，Microbiol.Immunol.，36983-997，1992)。
此外，從微細菌中提取的細胞壁骨架對於免疫系統同樣有調節作用(Chatterjee Khoo，Glycobiol.，8113-120，1998)，其中紅色諾卡氏菌細胞壁骨架製劑被用於臨床治療惡性胸腹水。從卡介菌中提取的糖製劑MTP-PE，在動物和臨床試驗中有一定效果(Pak Fidler，Biotherapy，355，1991)。
從卡介菌及其衍生物的研究來看，多糖和核酸組份均有增強免疫和抗癌的功能，而卡介菌多糖核酸兼具多糖和核酸的功效，並將蛋白含量控制很低，免除或降低了過敏和免疫反應，可作為一項重要的免疫調節劑長期使用。
目前卡介菌多糖核酸的臨床使用主要局限在免疫功能的調節，而卡介菌多糖核酸對腫瘤的治療效果，與標準治療方法包括手術，化療，放療，免疫療法，抗血管增生療法等是否可以產生協同作用，對腫瘤轉移過程的影響，系統用藥和局部用藥的效果差別，對癌症病人的免疫系統調節以及對生活質量的改善等問題並沒有經過系統研究和也沒有確切的結論。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服上述不足之處，設計能有效增強癌症標準治療方法、療效的藥物組合物。
本發明提供了一種治療癌症的藥物組合物，該組合物包括卡介菌多糖核酸和藥用輔料。
癌症的標準治療方法，定義為在醫院常規使用的治療方法，這些方法可能是物理性的操作或方法，如手術，伽馬刀，熱療，雷射等，也可能是藥物方法，包括化療藥物(主要指具有細胞毒性的小分子化合物)，放射線藥物(放療)，激素或生長因子拮抗藥物，抗體藥物，免疫治療藥物，抗血管增生藥物，中成藥物等。
本專利定義的對於癌症治療標準方法的改善，包含兩個方面的內容，第一是藥效學的增加，例如手術後降低病人的復發和轉移比例，或者與藥物治療聯合使用後更多的病人對標準治療方法產生更好的效果，或者同樣數目的病人，但反應的效果增加。
第二方面的內容是在藥效學標準不變的前提下，對標準治療方法毒副作用的改善，特別是對化療和放療這種極易造成對機體損傷的藥物，其表現包括體重降低的改善，免疫力和造血系統的保護和恢復，並發感染的降低等等。
本發明所定義的卡介菌多糖核酸是按照《中國生物製品規程》(2000)以熱酚法工藝生產精製，多糖組份含量70-80％，核酸組份含量10-20％，蛋白含量低於1％，使用時將卡介菌多糖核酸用藥物標準的稀釋液，穩定劑，或輔劑配製。多糖和核酸均被證明具有抗癌效應，兩種組份比例的改變對於本發明所提出的用法和範圍不產生根本的影響，因此卡介菌多糖核酸中多糖和核酸不同比例可被視為具有類似效應。
本發明的藥物組合物以卡介菌多糖核酸為主要組份，用藥物稀釋劑和穩定劑配製，通過非腸胃用藥方法使用，可對多種腫瘤的生長，轉移和侵潤形成抑制作用，並可改善荷腫瘤對象的健康狀況。
本發明研究了單獨使用卡介菌多糖核酸對各種腫瘤的抑制作用，包括路易斯肺癌，黑色素瘤和腎癌。通過對這些腫瘤的形成，生長和瘤重多方面考察證明卡介菌多糖核酸對這些腫瘤均有不同程度的抑制作用。其中黑色素瘤和腎癌是對免疫治療方法如幹擾素和白介素2較為敏感的腫瘤，對卡介菌多糖核酸也較為敏感，而路易斯肺癌是實體瘤中對藥物不敏感的腫瘤，屬於難以治療的腫瘤範疇，對卡介菌多糖核酸敏感度較差。
文獻中報導國卡介菌多糖核酸對S-180腫瘤的抑制作用(張杰玉等，湖北醫科大學學報，18305-307，1997)。在實體瘤模型中，卡介菌多糖核酸腹腔用藥，劑量為12.5毫克/公斤(每隻小鼠250微克)，隔日一次，共七次，對S-180皮下腫瘤有顯著抑制效果。同樣的用藥方法對S-180腹水瘤小鼠的存活期有顯著延長作用。
相比之下，卡介菌的純核酸組份MY-1對小鼠IMC腫瘤和豚鼠L10肝癌有顯著抑制作用，並有部分動物腫瘤完成消失，但用藥方法採用了瘤內注射，劑量為10毫克/公斤(Tokunaga et al.，JNCI，72955-962，1982；Yamamoto et al.，Microbiol.Immunol.，36983-997，1992)。
由於動物模型，腫瘤類型對藥物的敏感度，以及用藥方法的不同，直接的藥效比較難以進行，但值得指出的是，本發明所使用藥物劑量低於1毫克/公斤，或者低於0.5毫克/公斤，採用皮下或肌肉注射。本發明劑量遠遠低於文獻中所用劑量(10-12.5毫克/公斤)，這種低劑量和系統用藥的方法在臨床上具有更為廣泛和更安全的使用範圍。
以免疫增強或激活為機制的藥物，往往對劑量敏感度較大，比如白介素2，在小鼠模型中高劑量治療腫瘤效果非常出色，但由於人體對白介素2的耐受力要顯著低於小鼠，造成最終白介素2的使用受到局限。因此本發明所發現的低劑量用法對於藥物能夠在人體中得到類似結果提供了更大的空間。
根據長期臨床試驗的結果，卡介菌及其衍生物，包括多糖或核酸組份，往往在局部用藥時產生較為理想的效果，並有可能激活適應性免疫反應，對腫瘤的轉移和再侵潤產生抵抗效果。本發明給對象的用藥方法，採用皮下或肌肉注射等系統用藥方法，如採用局部用藥，可望顯著增加局部藥物濃度，達到更為可觀的治療效果。
本發明還公布了一種能夠與手術聯合使用，避免或減少手術後腫瘤復發和轉移的藥物組合物。此藥物組合物以卡介菌多糖核酸為主要組份，用藥物稀釋劑和穩定劑配製，通過非腸胃用藥方法使用，與手術治療方法配合使用，可達到抑制腫瘤復發和轉移的效果。
手術是腫瘤治療重要的方法之一，而現代造影技術如CT，核磁共振等為手術治療提供了更可靠的依據。但是由於技術手段的局限以及對腫瘤間的互動效果不完全了解，衛星腫瘤的切除，原發瘤的轉移，以及手術造成的創傷對腫瘤的作用便不可能完全避免，因此往往需要藥物與手術同時使用以避免腫瘤的復發和轉移。
免疫治療特別適用於最小剩餘腫瘤，如手術切除的情形，此時使用如卡介菌多糖核酸之類的免疫增強劑，可以減少腫瘤復發，增強免疫力，防止並發感染。
本發明將卡介菌多糖核酸製劑與手術結合，首先將皮下種植的路易斯肺癌手術切除，造成腫瘤自發性肺部轉移，手術後接受卡介菌多糖核酸製劑系統治療，不僅可以抑制腫瘤原位復發，還可以對腫瘤的肺部轉移形成顯著抑制。因此，卡介菌多糖核酸在癌症病人手術時使用，可以預防腫瘤復發和轉移，並且通過激活自然殺傷細胞的手段增強病人免疫力，減少並發感染的產生。
本發明還公布了一種能夠與癌症藥物治療方法，包括化療，放療等方法聯合使用的藥物組合物，這種藥用組合物以卡介菌多糖核酸為主要組份，用藥物稀釋劑和穩定劑配製，通過非腸胃用藥方法使用，可以達到增強癌症藥物治療方法藥效的作用。這種藥物組合物可以用於生產能夠輔助現有癌症標準藥物的新藥物，並達到增強癌症標準治療藥物療效的結果，並可以改善化放療藥物毒副作用，具體表現在體重的變化，血液組份的變化，並發感染，以及免疫力變化等。
化療和放療是癌症治療的重要的手段，主要依據腫瘤細胞繁殖比一般正常細胞快的特點，對核酸合成造成抑制和阻斷，從而對正在進行分裂的細胞造成殺傷，但不幸的是，人體中有多種細胞生長代謝很快，與腫瘤的生長速度相差無幾，如骨髓細胞，消化道黏膜細胞及毛囊細胞等，因此放化療藥物對這些細胞具有強烈的毒性，造成了化療和放療藥物最常見的毒副作用，骨髓抑制，噁心和嘔吐，和脫髮等。
改變這種狀況的方法之一是尋找對腫瘤更特異的藥物，隨著對腫瘤發生生物學和細胞信號的了解，有越來越多的這類藥物得到開發，但大規模的臨床應用仍需假以時日。
另外有種方法是採用化學或其他方法，對正常細胞進行保護，避免造成對正常組織的傷害。Amfostine是一種對正常細胞提供保護的化學藥物，目前已經上市用以保護化放療造成的毒副作用。由於藥物的保護作用，化放療藥物的劑量可以提高，從而增加了藥效(Spencer Goa，Drugs，501001-1031，1995)，但Amfostine本身對腫瘤並沒有抑制作用，因此對藥效的增強較為有限。
羅秋平等(湖南醫科大學學報，21281-284，1996)研究了卡介菌多糖核酸對環磷醯胺造成的小鼠免疫抑制所產生的作用，證明環磷醯胺對特異抗體的產生，脾細胞總數，巨噬細胞功能等均產生顯著抑制，而卡介菌多糖核酸則可以對這些效果產生相應的保護作用。但是這項試驗採用了正常小鼠，而在荷腫瘤小鼠中與化療藥物對腫瘤的影響仍然不清楚。
本發明將卡介菌多糖核酸製劑通過肌肉注射或皮下注射方法與化療藥物如環磷醯胺和絲裂黴素等同時使用，確認了卡介菌多糖核酸對化療藥物治療腫瘤的效果有增強作用，作用表現在抑制腫瘤形成，生長和腫瘤重量等各個方面。本發明還證明，卡介菌多糖核酸可以有效防止由於化療毒副作用而導致的機體體重降低和免疫抑制(表現為脾重降低)。
在路易斯肺癌模型中，小劑量(25毫克/公斤)和大劑量(100毫克/公斤)的環磷醯胺導致小鼠體重顯著降低，但小劑量環磷醯胺對腫瘤的抑制效果不明顯，卡介菌多糖核酸(20-200微克/公斤)與環磷醯胺同時使用，可以顯著增加對腫瘤的抑制效率，並對環磷醯胺造成的小鼠體重降低有顯著保護作用。大劑量環磷醯胺造成了荷腫瘤小鼠脾臟萎縮及嚴重的體重降低，而卡介菌多糖核酸的使用可以有效維持脾臟重量並減少小鼠體重降低。
在B16黑色素瘤模型中，絲裂黴素(5毫克/公斤)對荷腫瘤小鼠造成顯著的體重和脾重降低，並造成一隻小鼠死亡，而與化療同時使用卡介菌多糖核酸可有效保護小鼠體重和脾重的降低，並對絲裂黴素的抑瘤作用產生增強效果。BA009對超致死劑量的絲裂黴素造成的荷瘤小鼠體重嚴重降低也具有顯著的保護效果。
由於其他化療藥物和放療藥物對機體造成的損傷機理類似，因此可以預見卡介菌多糖核酸對絲裂黴素和環磷醯胺產生的保護作用和協同效果同樣可以在與其他化療或放療藥物使用時實現，因此卡介菌多糖核酸可以廣泛用於輔助化放療治療腫瘤，並達到增強抑癌效果，改善毒副作用的效果。
晚期腫瘤病人的身體狀況往往衰減狀態，如消瘦，免疫力低下等等，這種狀態在小鼠腎癌模型中表現較為突出，荷腎癌小鼠隨著腫瘤的生長，很快體重下降，解剖後可發現主要臟器如肝，腎，脾等均有衰竭(失重)現象。卡介菌多糖核酸對腫瘤病人生活質量的改善還表現在於單獨使用卡介菌多糖核酸製劑對荷腎癌小鼠的體重和脾重降低有顯著保護作用，對其他臟器的衰竭也有一定保護作用。
本發明確立了卡介菌多糖核酸單獨使用對腫瘤有顯著抑制作用，並第一次提出並證明了卡介菌多糖核酸可以增強腫瘤標準治療方法如手術，放化療等的抗癌效果，防止腫瘤復發和轉移，並可改善生活質量和健康狀況(體重和脾重降低等)。
本發明還確立了系統使用卡介菌多糖核酸的有效劑量，這種有效劑量遠遠低於文獻所報導的劑量。
本發明的另一目的是提供了上述治療癌症的藥物組合物的製備方法，將精製卡介菌多糖核酸用生理氯化鈉溶液溶解，濃度在1-5毫克/毫升，121℃滅菌20分鐘，並加入0.01mM到5mM的金屬絡合物，包括EDTA，HEDTA或EGTA中的一種或幾種的組合，攪拌均勻即為卡介菌多糖核酸溶液，其成分為生理氯化鈉溶液，卡介菌多糖組份0.7-4毫克/毫升，卡介菌核酸組份0.1-1毫克/毫升，金屬絡合物0.01-5毫摩爾。該方法是本發明確定了卡介菌多糖核酸對腫瘤治療的效果，並闡述了卡介菌多糖核酸在腫瘤治療各方面的作用和用途，提出用卡介菌多糖核酸製劑輔助手術，放化療藥物等，用以改善生活質量，增加療效。


圖1 BA009對B16F10黑色素瘤形成的影響B16F10黑色素瘤細胞皮下種植在C57BL6小鼠背部，並分別以溶媒和BA009治療，每天觀察腫瘤出現狀況。圖中顯示的是種植腫瘤後不同時間未出現腫瘤的小鼠比例。
圖2 BA009對B16F10黑色素瘤生長的影響B16F10黑色素瘤細胞皮下種植在C57BL6小鼠背部，並分別以溶媒和BA009治療，每天觀察腫瘤指數並計算腫瘤體積。圖中顯示的是種植腫瘤後不同時間的平均腫瘤體積。數據顯示為平均值±標準方差。
圖3 BA009和低劑量環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠體重的影響路易斯肺癌細胞種植在C57BL6小鼠背部皮下，並用BA009和環磷醯胺治療，小鼠體重每天測定。圖中顯示了在腫瘤種植後不同時間點荷瘤小鼠體重與治療前相比的變化百分比的平均值。溶媒為磷酸生理鹽水緩衝液，CTX為環磷醯胺治療組，20，40和80組均用環磷醯胺治療，並分別用20，40和80微克/公斤BA009治療。
圖4 BA009和絲裂黴素對B16F10黑色素瘤形成的影響B16F10黑色素瘤細胞皮下種植在C57BL6小鼠背部，並分別以溶媒，絲裂黴素(MMC)和BA009治療，每天觀察腫瘤出現狀況。圖中顯示的是種植腫瘤後不同時間未出現腫瘤的小鼠比例。溶媒為100微升含1毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液，MMC為絲裂黴素治療組，100和200均同樣使用絲裂黴素，並分別用100和200微克/公斤BA009治療。
圖5 BA009和絲裂黴素對B16F10黑色素瘤生長的影響B16F10黑色素瘤細胞皮下種植在C57BL6小鼠背部，並分別以溶媒，絲裂黴素BA009治療，每天觀察腫瘤指數並計算腫瘤體積。圖中顯示的是種植腫瘤後不同時間點的平均腫瘤體積。溶媒為100微升含1毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液，MMC為絲裂黴素治療組，100和200均同樣使用絲裂黴素，並分別用100和200微克/公斤BA009治療。
圖6 BA009和絲裂黴素對B16F10黑色素瘤瘤重的影響B16F10黑色素瘤細胞種植在C57BL6小鼠背部皮下，並分別以溶媒，絲裂黴素和BA009治療，治療完成後將腫瘤解剖稱重，圖中顯示的是不同治療組解剖後得到腫瘤的平均瘤重。數據顯示為平均值±標準方差。溶媒為100微升含1毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液，MMC為絲裂黴素治療組，100和200均同樣使用絲裂黴素，並分別用100和200微克/公斤BA009治療。
圖7 BA009和絲裂黴素對荷B16F10黑色素瘤小鼠體重的影響B16F10黑色素瘤細胞種植在C57BL6小鼠背部皮下，並分別以溶媒，絲裂黴素和BA009治療，每天觀察治療過程中荷瘤小鼠體重。圖中顯示的是不同時間點各治療組荷瘤小鼠與治療前相比體重變化百分比的平均值。溶媒為100微升含1毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液，MMC為絲裂黴素治療組，100和200均同樣使用絲裂黴素，並分別用100和200微克/公斤BA009治療。
圖8 BA009和高劑量環磷醯胺對路易斯肺癌生長的影響路易斯肺癌細胞種植在C57BL6小鼠背部皮下，並用溶媒，BA009和環磷醯胺治療，每天測定腫瘤指標並計算腫瘤體積。圖中顯示了在腫瘤種植後不同時間點各治療組腫瘤體積的平均值。溶媒為含0.5毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液，CTX為環磷醯胺治療組，BA009採用200微克/公斤BA009治療，共用組為同時使用BA009和環磷醯胺治療。
圖9 BA009和高劑量環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠體重的影響路易斯肺癌細胞種植在C57BL6小鼠背部皮下，並用溶媒，BA009和環磷醯胺治療，每天測定治療過程中荷瘤小鼠體重。圖中顯示了在腫瘤種植後不同時間點各治療組荷瘤小鼠與治療前相比體重變化百分比的平均值。溶媒為含0.5毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液，CTX為環磷醯胺治療組，共用組為同時使用BA009和環磷醯胺治療。
圖10 BA009對B16F10黑色素瘤生長的影響B16F10黑色素瘤細胞皮下種植在C57BL6小鼠背部，並分別以溶媒和BA009治療，每天觀察腫瘤指數並計算腫瘤體積。圖中顯示的是種植腫瘤後不同時間的平均腫瘤體積。數據顯示為平均值±標準方差。
圖11 解剖後B16F10黑色素瘤圖象B16F10黑色素瘤細胞種植在C57BL6小鼠背部皮下，並分別以溶媒和BA009治療，治療完成後將腫瘤解剖，圖中顯示的是不同治療組解剖後得到的腫瘤圖象。上半部為溶媒組腫瘤，下半部為BA009組腫瘤。
圖12 BA009和超致死劑量絲裂黴素對荷B16F10黑色素瘤小鼠體重的影響B16F10黑色素瘤細胞種植在C57BL6小鼠背部皮下，並分別以溶媒，超致死劑量的絲裂黴素和BA009治療，每天觀察治療過程中荷瘤小鼠體重。圖中顯示的是不同時間點各治療組荷瘤小鼠與治療前相比體重變化百分比的平均值。溶媒為100微升磷酸生理鹽水緩衝液，MMC為絲裂黴素治療組，共用組為同時使用BA009和絲裂黴素治療。絲裂黴素組和共用組小鼠在第10天前全部死亡。
具體實施例方式
實施例1 卡介菌多糖核酸製劑的製備卡介菌多糖核酸粉劑由成都生物製品所提供，質量標準按照中國《生物製品規程》檢定，含多糖76％，核酸13％，蛋白含量0.1％。
配製卡介菌多糖核酸製劑時，將適量粉劑溶於生理鹽水磷酸緩衝液，可包含或不含絡合劑(包括EDTA，EGTA，HEDTA等)，用0.2um濾器消毒過濾。具體的藥物使用在動物試驗中說明。
多糖組份的測定採用蒽酮法，並按照《生物製品規程》規定的試驗方法進行，用葡萄糖作為標準品。核酸測定採用OD260光吸收方法，並按照核酸濃度(ng/ul)＝50×OD260公式計算。
實施例2 卡介菌多糖核酸對B16黑色素瘤的抑制2.1.動物模型6-8周齡雌性C57BL6小鼠購自HARLAN公司，飼養與百藥藥業有限公司動物房，清潔級別為實驗室級別，小鼠食物購自HARLANTEKLAD公司，水和食物充分供應，動物房燈光每12小時交替。
B16F10黑色素瘤細胞購自ATCC，在添加10％胎牛血清的DMEM培養基中培養，置於攝氏37度的二氧化碳培養箱中，細胞每2-3天傳代一次，用EDTA-胰酶消化傳代。在注射小鼠時，將細胞消化，用生理磷酸緩衝液洗滌兩次，計數，並將細胞稀釋到每100微升一百萬細胞。
將小鼠背部毛髮剔除，在皮下注射一百萬細胞(100微升)，隨機分組並在耳朵上做記號。
2.2.藥物及觀察待測藥物為在本發明實施例1中製備的卡介菌多糖核酸製劑，每劑含卡介菌多糖核酸400微克/100微升。
十八隻注射腫瘤細胞後的小鼠，按每組9隻小鼠隨機分成兩組，一組為BA009組(BA009為本發明卡介菌多糖核酸製劑的代碼，以下同)，另一組為溶媒組。BA009組在皮下注射待測藥物，劑量20微克/公斤，溶於100微升溶媒，自腫瘤種植後第3日起，每天一次，連續十天，在溶媒組小鼠的皮下注射100微升溶媒(含1毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液)，每天一次，連續十天。
每日觀察小鼠的體重和腫瘤生長狀況，並在腫瘤長出後用遊標卡尺測量腫瘤的指數(長和寬)，腫瘤體積按照(長×寬2×0.5)的公式計算。停藥後2天將小鼠殺死解剖，觀察各主要臟器並稱重。統計學分析採用EXCEL軟體中的T試驗，指數為雙尾，不等方差。
2.3.結果圖1顯示了BA009對B16F10黑色素瘤腫瘤形成的影響。經10天20ug/kg BA009治療後，50％小鼠出現腫瘤的時間被延遲了14％。
圖2顯示了BA009對黑色素瘤生長的作用，表明BA009對皮下種植的黑色素瘤有顯著抑制效果。
表1列出了經過BA009治療歐對黑色素瘤瘤重的影響，表明BA009對黑色素瘤瘤重明顯抑制作用，並具顯著性差異。
表1 BA009對黑色素瘤重量的抑制作用

瘤重表示為平均值±標準方差。
表2列出了BA009對荷B16黑色素瘤小鼠脾臟重量的影響，表明經BA009治療後，小鼠脾臟重量顯著性增加。
表2 BA009對荷黑色素瘤小鼠脾重的影響

BA009治療對荷黑色素瘤小鼠體重和包括心，肺，肝，腎在內的其他臟器重量沒有顯著影響。
實施例3 BA009和低劑量化療藥物環磷醯胺對路易斯肺癌的作用3.1.動物模型6-8周齡雌性C57BL6小鼠購自HARLAN公司，飼養於百藥藥業有限公司動物房，清潔級別為實驗室級別，小鼠食物購自HARLANTEKLAD公司，水和食物充分供應，動物房燈光每12小時交替。
路易斯肺癌(LEWIS LUNG CARCINOMA)細胞購自ATCC，在添加10％胎牛血清的高葡萄糖DMEM培養基中，置於攝氏37度CO2培養箱中，細胞每2-3天傳代一次，用EDTA-胰酶消化傳代。在注射小鼠時，將細胞消化，磷酸緩衝液生理鹽水(PBS)洗滌，計數，並將細胞用PBS稀釋到百萬細胞每100微升。
將小鼠背部毛髮剔除，在背部下方皮內注射一百萬細胞(100微升)，隨機分組並在耳朵上做記號。
3.2.藥物和觀察待測藥物BA009為在本發明實施例1中製備的穩定化的卡介菌多糖核酸製劑。化療藥物為環磷醯胺，購自美國SIGMA化學試劑公司。
50隻小鼠注射腫瘤細胞後，按每組10隻小鼠隨機分成五組，第一組為溶媒組，第二組為環磷醯胺組，第三組為20微克/公斤BA009與環磷醯胺共用，第四組為40微克/公斤BA009與環磷醯胺共用組，第五組為80微克/公斤BA009與環磷醯胺共用組。BA009給藥方法為腿肌肉注射，自腫瘤注射之日起，每天一次，連續十天，在對照組小鼠的腿肌內注射溶媒對照，每天一次，連續十天，環磷醯胺給藥方法為皮下注射，劑量25毫克/公斤，自腫瘤注射第三天開始，每天一次，連續十天。
每日觀察小鼠的體重和腫瘤生長狀況，並在腫瘤長出後用遊標卡尺測量腫瘤的長寬，腫瘤體積按照長×寬×寬×0.5的公式計算。停藥後第1天將小鼠殺死解剖，觀察腫瘤及主要臟器並稱重。統計學分析採用T試驗。
3.3.觀察結果表3中顯示了BA009和環磷醯胺對路易斯肺癌形成的影響。低劑量環磷醯胺對路易斯肺癌的形成影響不明顯，但環磷醯胺與BA009聯合使用時，腫瘤的形成明顯延遲，這種延遲與BA009的劑量呈量效關係。
表3 BA009和環磷醯胺對路易斯肺癌形成的影響

TD50為50％的小鼠出現腫瘤所需要的天數，抑制率按照下公式計算，[(治療組TD50-對照組TD50)/對照組TD50×100]。
表4列出了BA009和環磷醯胺對路易斯肺癌腫瘤腫量的影響。低劑量環磷醯胺對瘤重略有抑制，其抑瘤作用與BA009共用後顯著增強，並且抑制效率與BA009的劑量呈量效關係。
表4 BA009和環磷醯胺對路易斯肺癌瘤重的影響

表5顯示了BA009和環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠脾重的影響。低劑量環磷醯胺對小鼠脾重無顯著影響，而BA009治療後，小鼠脾重顯著增加，並與BA009劑量呈量效關係。
表5 BA009和環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠脾重的影響

圖3顯示了BA009和環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠體重變化的影響。使用環磷醯胺導致小鼠體重顯著下降，BA009治療對環磷醯胺導致的小鼠體重降低有顯著保護作用，並與BA009劑量呈量效關係。
表6列出了BA009和環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠在第9天的定量關係。環磷醯胺顯著抑制小鼠體重，而BA009治療對環磷醯胺的體重降低作用有統計學顯著並且是BA009劑量依賴性的保護作用。
表6 BA009和環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠體重變化的影響。

％BWC為與治療前相比的小鼠體重變化百分比。
BA009或環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠的其他臟器包括心，肝，肺，腎等沒有顯著影響。
實施例4 卡介菌多糖核酸對路易斯肺癌自發性轉移的抑制4.1.動物模型6-8周齡雌性C57BL6小鼠購自HARLAN公司，飼養與百藥藥業有限公司動物房，清潔級別為實驗室級別，小鼠食物購自HARLANTEKLAD公司，水和食物充分供應，動物房燈光每12小時交替。
路易斯肺癌(LEWIS LUNG CARCINOMA)細胞購自ATCC，在添加10％胎牛血清的高葡萄糖DMEM培養基中培養，置於攝氏37度CO2培養箱中，細胞每2-3天傳代一次，用EDTA-胰酶消化傳代。在注射小鼠時，將細胞消化，用磷酸緩衝液生理鹽水(PBS)洗滌兩次，計數，並將細胞稀釋到每100微升一百萬細胞。
將小鼠背部毛髮剔除，在皮內注射一百萬細胞(100微升)，隨機分組並在耳朵上做記號。腫瘤種植20天後，將小鼠用乙醚麻醉，將腫瘤完全切除，傷口縫合。
4.2.藥物治療和觀察18隻手術去除腫瘤後的小鼠，按每組9隻小鼠隨機分成兩組，一組為溶媒組，另一組為BA009組。BA009組在皮下注射BA009，劑量40微克/公斤，溶於100微升溶媒，自手術之日起，每天一次，連續十天，溶媒組小鼠皮下注射100微升溶媒(含0.5毫摩爾HEDTA的磷酸生理鹽水緩衝液)，自手術之日起，每天一次，連續十天。
每日觀察小鼠的體重和腫瘤生長狀況，手術2周後將小鼠殺死解剖，觀察原位腫瘤，肺部轉移及主要臟器並稱重。統計學分析採用EXCEL軟體中T檢驗功能，指數為雙尾和不等方差。
4.3.結果表7顯示了BA009對路易斯肺癌自發性肺轉移的影響，表明BA009可以顯著降低肺部腫瘤轉移。
表7 BA009對路易斯肺癌自發性轉移的影響

表8顯示了BA009對小鼠肺重的影響，表明BA009對腫瘤轉移而造成的小鼠肺重增加有顯著抑制作用。
表8 BA009對小鼠肺重的影響

BA009治療對路易斯肺癌自發轉移小鼠體重和包括心，肺，肝，腎在內的其他臟器重量沒有顯著影響。
實施例5 卡介菌多糖核酸對腎癌的抑制5.1.動物模型6-8周齡雌性BALB/C小鼠購自HARLAN公司，飼養於百藥藥業有限公司動物房，清潔級別為實驗室級別，小鼠食物購自HARLANTEKLAD公司，水和食物充分供應，動物房燈光每12小時交替。
Renca小鼠腎癌細胞由美國國立癌症研究院提供，在添加10％胎牛血清的高葡萄糖DMEM培養基中，置於攝氏37度CO2培養箱中培養，細胞每2-3天傳代一次，用EDTA-胰酶消化傳代。在注射細胞時，將細胞消化，用磷酸緩衝液生理鹽水(PBS)洗滌，計數，並將細胞用PBS稀釋到每100微升一百萬細胞。
將小鼠背部毛髮剔除，在背部下方兩邊皮內各注射一百萬細胞(100微升)，隨機分組並在耳朵上做記號。
5.2.用藥物及觀察BA009為在本發明實施例1中製備的卡介菌多糖核酸製劑，幹擾素(阿爾法2A)和白介素2產品為瀋陽三生藥業公司出產的商品。
30隻小鼠注射腫瘤細胞後，按每組5隻小鼠隨機分成六組，如下所述；溶媒肌注100微升含1毫摩爾EDTA/1毫摩爾的磷酸生理鹽水緩衝液；BA009肌注100微升溶媒含100微克/公斤BA009；幹擾素皮注100微升溶媒含300,000IU幹擾素；幹擾素+BA009共用幹擾素和BA009；白介素2皮注100微升溶媒含30,000IU白介素2；白介素2+BA009共用白介素2和BA009。
自腫瘤種植之日起用藥，每天一次，連續十天。每日觀察小鼠體重和腫瘤生長狀況，並在腫瘤長出後用遊標卡尺測量腫瘤的長寬，腫瘤體積按照(長×寬×寬×0.5)的公式計算。停藥後第6天將小鼠殺死解剖，觀察腫瘤及主要臟器並稱重。統計學分析採用EXCEL軟體中T檢驗功能，指數為雙尾和不等方差。
5.3.觀察結果表9顯示了BA009，幹擾素和白介素2對解剖後腎癌瘤重的影響。結果表明，BA009，幹擾素和白介素2均對瘤重產生抑制作用，BA009的抑瘤效果(57％)比幹擾素(28％)或白介素2(43％)要好。BA009與幹擾素或白介素2共用對抑制腎癌沒有產生顯著協同效應。
表9 BA009，幹擾素和白介素2對腎癌瘤重的影響

表10顯示了BA009，幹擾素和白介素2對荷腎癌小鼠體重變化的影響。第15天體重變化的結果表明，隨著腎癌的形成的生長，荷瘤小鼠體重顯著降低，BA009，幹擾素和白介素2對荷瘤小鼠體重降低均有顯著保護作用，但BA009與幹擾素或白介素2合用未產生協同效應。
表10 BA009，幹擾素和白介素2對荷腎癌小鼠體重的影響

表11顯示了BA009，幹擾素和白介素2對荷腎癌小鼠脾重的影響。溶媒組有一隻小鼠出現嚴重的肺，腎，脾和肝臟轉移，從分析中剔除。結果表明，荷腎癌小鼠脾重顯著下降，幹擾素對脾重下降保護不顯著，BA009和白介素2均產生了顯著性脾重保護作用。BA009與幹擾素或白介素2共用未產生協同效應。
表11 BA009，幹擾素和白介素2對荷腎癌小鼠脾重的影響

表12顯示了BA009，幹擾素和白介素2對荷腎癌小鼠其他臟器的影響。數據表示為平均值±標準方差。溶媒組有一隻小鼠出現嚴重的肺，肝，脾和腎臟轉移，所以從此分析中剔除。結果表明，荷腎癌小鼠心，腎和肝臟出現一定程度減輕，顯示健康狀況惡化，BA009，幹擾素，白介素2及BA009與幹擾素或白介素2共用對主要臟器重量有改善作用。
表12 BA009，幹擾素和白介素2對荷腎癌小鼠主要臟器的影響

實施例6 卡介菌多糖核酸對B16黑色素瘤的抑制及與絲裂黴素化療藥物的協同作用6.1.動物模型6-8周齡雌性C57BL6小鼠購自HARLAN公司，飼養於百藥藥業有限公司動物房，清潔級別為實驗室級別，小鼠食物購自HARLANTEKLAD公司，水和食物充分供應，動物房燈光每12小時交替。
B16F10黑色素瘤細胞購自ATCC，在添加10％胎牛血清的高葡萄糖DMEM培養基中，置於攝氏37度CO2培養箱中，細胞每2-3天傳代一次，用EDTA-胰酶消化傳代。在注射小鼠時，將細胞消化，用磷酸緩衝液生理鹽水(PBS)洗滌兩次，計數，並將細胞用PBS稀釋到每100微升一百萬細胞。
將小鼠背部毛髮剔除，在背部下方兩邊皮內各注射一百萬細胞(100微升)，隨機分組並在耳朵上做記號。
6.2.用藥物及觀察BA009為本發明實施例1中製備的穩定化的卡介菌多糖核酸製劑，絲裂黴素由上海華聯製藥有限公司提供。
20隻小鼠注射腫瘤細胞後，按每組5隻小鼠隨機分成四組，每隻小鼠荷兩個腫瘤，分別測定，各組用藥方法為溶媒組肌注100微升含0.1毫摩爾EDTA的磷酸生理鹽水緩衝液；絲裂黴素靜注100微升溶媒，含5毫克/公斤絲裂黴素；100組肌注100微升含100微克/公斤BA009，絲裂黴素共用；200組肌注100微升含200微克/公斤BA009，絲裂黴素共用。
BA009和溶媒給藥方法為腿肌肉注射，自腫瘤種植之日起，每天一次，連續十天，絲裂黴素給藥方法為尾靜脈注射，劑量5毫克/公斤，在腫瘤種植後第二天注射一次。
每日觀察小鼠的體重和腫瘤生長狀況，並在腫瘤長出後用遊標卡尺測量腫瘤的長寬，腫瘤體積按照(長×寬×寬×0.5)的公式計算。停藥後第6天將小鼠殺死解剖，觀察腫瘤及主要臟器並稱重。統計學分析採用EXCEL軟體中的T檢驗功能，指標為雙尾和不等方差。
6.3.觀察結果圖4顯示了BA009和絲裂黴素對B16黑色素瘤形成的影響。結果表明，絲裂黴素對50％小鼠出現黑色素瘤的抑制率為45％，而BA009與絲裂黴素合用，抑制率可達到84％。
圖5顯示了BA009和絲裂黴素對B16黑色素瘤生長的影響。結果表明，絲裂黴素對黑色素瘤生長有顯著性抑制，BA009與絲裂黴素共用可顯著增強抑瘤效果。
圖6顯示了BA009和絲裂黴素對B16黑色素瘤瘤重的影響，數據顯示在表13中。結果表明，絲裂黴素對黑色素瘤瘤重有顯著性抑制，與BA009合用，抑瘤率顯著增強，並與BA009劑量成正比關係。
表13 BA009和絲裂黴素對B16黑色素瘤瘤重的影響


表14顯示了BA009和絲裂黴素對荷瘤小鼠脾重的影響。結果表明，絲裂黴素造成荷瘤小鼠脾重顯著性下降，而BA009(100或200ug/kg)對絲裂黴素引起的小鼠脾重下降有顯著性保護作用。
表14 BA009和絲裂黴素對荷瘤小鼠脾重的影響

圖7顯示了BA009和絲裂黴素對荷瘤小鼠體重的影響。結果表明，絲裂黴素導致了荷瘤小鼠體重顯著性降低，並有一隻小鼠死亡。100微克/公斤BA009對體重保護不明顯，而200微克/公斤BA009對絲裂黴素引起的小鼠體重下降具顯著性保護作用。
BA009或絲裂黴素對荷黑色素瘤小鼠的其他臟器包括心，肝，肺，腎等沒有顯著影響。
實施例7 BA009對手術後路易斯肺癌原位復發和自發轉移的作用7.1.動物模型6-8周齡雌性C57BL6小鼠購自HARLAN公司，飼養與百藥藥業有限公司動物房，清潔級別為實驗室級別，小鼠食物購自HARLANTEKLAD公司，水和食物充分供應，動物房燈光每12小時交替。
路易斯肺癌(LEWIS LUNG CARCINOMA)細胞購自ATCC，在添加10％胎牛血清的高葡萄糖DMEM培養基中培養，置於攝氏37度CO2培養箱中，細胞每2-3天傳代一次，用EDTA-胰酶消化傳代。在注射小鼠時，將細胞消化，用磷酸緩衝液生理鹽水洗滌，計數，並將細胞用稀釋到每100微升一百萬細胞。
部毛髮剔除，在皮內注射一百萬細胞(100微升)，待腫瘤生長到平均體積200-300立方毫米時(10天)，將小鼠用乙醚麻醉，將腫瘤完全切除，傷口縫合，將小鼠隨機分為兩組。
7.2.用藥物及觀察BA009為在本發明實施例1中製備的穩定化的卡介菌多糖核酸製劑，每100微升含卡介菌多糖核酸200微克。
二十七隻荷腫瘤小鼠在手術去除腫瘤後隨機分為兩組，溶媒組13隻小鼠，BA009組14隻小鼠，在腿肌肉注射100微升BA009，劑量200微克/公斤，自手術之日起，每天一次，連續十二天，溶媒組小鼠在腿肌肉注射100微升溶媒(含1毫摩爾EGTA的磷酸生理鹽水緩衝液)，每天一次，連續十二天。
每日觀察小鼠的體重和腫瘤生長狀況，手術後兩周將小鼠殺死解剖，觀察原位腫瘤，肺部轉移及主要臟器並稱重。統計學分析採用EXCEL軟體中的T檢驗功能，指標為雙尾和不等方差。
7.3.結果表15列出了BA009對路易斯肺癌原位復發的抑制作用。結果表明，BA009對手術後路易斯肺癌的原位復發具顯著性抑制。
表15 BA009對路易斯肺癌原位復發的作用

表16顯示了BA009對路易斯肺癌自發轉移小鼠肺重的作用。路易斯肺癌轉移後肺臟重量顯著增加，BA009對路易斯肺癌自發轉移小鼠肺重有明顯抑制作用。
表16 BA009對路易斯肺癌自發轉移小鼠肺重的影響

BA009對路易斯肺癌自發轉移小鼠的其他臟器包括心，肝，肺，腎和脾沒有顯著影響。
實施例8 BA009和高劑量環磷醯胺對路易斯肺癌的作用8.1.動物模型6-8周齡雌性C57BL6小鼠購自HARLAN公司，飼養於百藥藥業有限公司動物房，清潔級別為實驗室級別，小鼠食物購自HARLANTEKLAD公司，水和食物充分供應，動物房燈光每12小時交替。
路易斯肺癌細胞購自ATCC，在添加10％胎牛血清的高葡萄糖DMEM培養基中，置於攝氏37度CO2培養箱中，細胞每2-3天傳代一次，用EDTA-胰酶消化傳代。在注射小鼠時，將細胞消化，用磷酸緩衝液生理鹽水(PBS)洗滌，計數，並將細胞用PBS稀釋到百萬細胞每100微升。將小鼠背部毛髮剔除，在背部下方兩邊皮內各注射一百萬細胞(100微升)，隨機分組並在耳朵上做記號。
8.2.藥物和觀測BA009為在本發明實施例1中製備的穩定化的卡介菌多糖核酸製劑，每劑含卡介菌多糖核酸200微克/100微升。化療藥物為環磷醯胺，購自美國SIGMA化學試劑公司。
20隻小鼠注射腫瘤細胞後，按每組5隻小鼠隨機分成四組，第一組命名為溶媒組，溶媒為含0.1毫摩爾EDTA和1毫摩爾HEDTA的磷酸生理鹽水緩衝液，第二組為化療藥治療組(環磷醯胺組)，第三組為卡介菌多糖核酸單獨治療組(BA009組)，第四組為化療和卡介菌多糖核酸共用組。卡介菌多糖核酸給藥方法為腿肌肉注射，劑量200微克/公斤，自腫瘤注射之日起，每天一次，連續十天，在對照組小鼠的腿肌內注射一劑溶媒對照，每天一次，連續十天，環磷醯胺給藥方法為皮下注射，劑量100毫克/公斤，自腫瘤注射第三天開始，隔天一次，共注射四次。
每日觀察小鼠的體重和腫瘤生長狀況，並在腫瘤長出後用遊標卡尺測量腫瘤的長寬，腫瘤體積按照(長×寬×寬×0.5)的公式計算。停藥後第6天將小鼠殺死解剖，觀察腫瘤及主要臟器並稱重。統計學分析採用ECEL軟體中的T檢驗功能，指標為雙尾和不等方差。
8.3.觀察結果圖8顯示了BA009和高劑量環磷醯胺對路易斯肺癌生長的影響。結果表明，環磷醯胺和BA009單獨使用對路易斯肺癌均產生抑制作用，BA009與環磷醯胺共用時可顯著增加抑瘤效果。
表17顯示了BA009和環磷醯胺對路易斯肺癌瘤重的影響。結果表明，環磷醯胺對路易斯肺癌的抑制率為70％，BA009為41％。BA009與環磷醯胺合用，抑瘤率可達到81.9％。
表17 BA009和環磷醯胺對路易斯肺癌瘤重的影響

表18顯示了BA009和環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠脾重的影響。結果表明，環磷醯胺造成小鼠脾重顯著下降，BA009對環磷醯胺造成的小鼠脾重下降有顯著保護作用。
表18 BA009和環磷醯胺對荷瘤小鼠脾重的影響

圖9顯示了BA009和環磷醯胺對荷瘤小鼠體重的影響。結果表明，環磷醯胺導致小鼠體重顯著下降，而BA009對環磷醯胺造成的小鼠體重下降有顯著性的保護作用。
BA009和環磷醯胺對荷路易斯肺癌小鼠的其他臟器包括心，肝，肺，和腎沒有顯著影響。
實施例9 BA009與超致死劑量絲裂黴素對B16黑色素瘤的作用9.1.動物模型B16F10黑色素瘤細胞購自ATCC(CRL-6475)，在添加10％胎牛血清的含高葡萄糖(4.5mg/ml)的DMEM培養基中培養，置於二氧化碳培養箱，每2-3天用胰酶-EDTA消化傳代。注射小鼠前，將細胞消化，用磷酸生理鹽水緩衝液洗滌兩次，細胞計數，並將細胞稀釋至每毫升一千萬細胞。
6-8周齡雌性C57BL6小鼠購自Harlan SD公司，在具通風設備的動物房中飼養，燈光定時為每12小時轉換，標準小鼠飼料和水自由供給。注射腫瘤前，將小鼠背部毛髮剔除，並在皮下注射100微升的含細胞溶液，細胞數目為一百萬。
9.2.治療和觀察四十隻注射腫瘤細胞後的小鼠隨機分為四組，每組有十隻小鼠，各組治療藥物和方法如下溶媒組皮注100微升含0.5毫摩爾HEDTA/0.5毫摩爾EGTA的磷酸生理鹽水緩衝液，qldx10絲裂黴素靜注100微升含5mg/kg絲裂黴素的溶媒，qx1BA009皮注100微升含40ug/kgBA009的溶媒，qldx10共用組BA009和絲裂黴素共用溶媒和BA009治療自腫瘤種植之日起，每天一次，連續10天。絲裂黴素(由上海華聯製藥有限公司提供)治療自腫瘤種植之日起，每天一次，連續八天。經絲裂黴素治療小鼠包括共用組由於藥物毒性在第11天前全部死亡。
小鼠的體重和腫瘤大小每天觀察記錄。腫瘤指數(長和寬)通過遊標卡尺測量，腫瘤體積由[(長×寬2)/2]計算。用藥完成後第6天，將小鼠殺死並解剖，觀察主要臟器並秤重保存。
統計學分析採用EXCEL軟體中的T檢驗功能，指數為雙尾，不等方差。
9.3.結果圖10顯示了BA009對B16黑色素瘤的作用，表明BA009可顯著抑制黑色素瘤的生長。
圖11和表19分別列出了BA009對解剖後黑色素瘤重量的影響。BA009的抑瘤率為77.5％。
表19 BA009對解剖後黑色素瘤瘤重的影響

圖12顯示了BA009對超致死劑量絲裂黴素對荷黑色素瘤小鼠體重的影響。超致死劑量絲裂黴素自第3天起導致小鼠體重顯著下降，而40微克/公斤的BA009對絲裂黴素造成的小鼠體重下降自第4天起產生顯著的保護效應(圖中顯示為*號)。用絲裂黴素的小鼠在第10天前全數死亡。
權利要求
1.一種治療癌症的藥物組合物，其特徵在於該藥物組合物包括有效劑量的卡介菌多糖核酸，藥用輔料及穩定劑，其中卡介菌多糖核酸的多糖組分含量70-80％；核酸組分含量10-20％；蛋白含量0.1-0.99％。
2.一種根據權利要求1所述的藥物組合物，其中所述穩定劑為一種或幾種陽離子絡合劑，包括EDTA，EGTA或HEDTA中的一種或幾種的組合。
3.一種根據權利要求1和2所述的藥物組合物，其特徵在於向對象提供該藥物組合物後，能夠達到抑制腫瘤生長或轉移的效果。
4.一種根據權利要求1至2所述的藥物組合物，其特徵在於向接受手術治療的癌症對象提供該藥物組合物後，能夠達到增加手術療效的效果。
5.一種根據權利要求1至2所述的藥物組合物，其特徵在於向接受細胞毒性藥物治療的對象提供該藥物組合物，能夠達到增強細胞毒性藥物療效的效果。
6.一種根據權利要求1至2所述的藥物組合物，其特徵在於向接受細胞毒性藥物治療的對象提供該藥物組合物，能夠達到減少細胞毒性藥物毒副作用的效果，其中毒副作用的表現為骨髓抑制，體重降低和臟器毒性中的一種或幾種。
7.一種根據權利要求1至2所述的藥物組合物，其特徵在於向對象提供該藥物組合物後，能夠達到改善對象健康狀況或增加存活率的效果。
8.一種根據權利要求3至7所述的藥物組合物，其中所述的對象是包括人在內的哺乳動物。
9.一種如權利要求1所述的一種治療癌症的藥物組合物的製備方法，其特徵在於將精製卡介菌多糖核酸用生理氯化鈉溶液溶解，濃度在1-5毫克/毫升，121℃滅菌20分鐘，並加入0.01mM到5mM的金屬絡合物，包括EDTA，HEDTA或EGTA中的一種或幾種的組合，攪拌均勻即為卡介菌多糖核酸溶液，其成分為生理氯化鈉溶液，卡介菌多糖組份0.7-4毫克/毫升，卡介菌核酸組份0.1-1毫克/毫升，金屬絡合物0.01-5毫摩爾。
全文摘要
本發明屬生物製劑技術領域。本發明公開了能夠抑制腫瘤生長的藥物組合物。本發明的組合物含有有效量的卡介菌多糖核酸以及藥用稀釋劑、輔助劑或穩定劑。本發明的組合物可廣泛用於增強腫瘤治療標準方法如手術，放化療等的藥效，並改善健康狀態。
文檔編號A61P35/00GK1494918SQ02150068
公開日2004年5月12日 申請日期2002年11月20日 優先權日2002年7月18日
發明者李偉華, 王紹白 申請人:李偉華