一種治療慢性咽炎的藥物的製作方法

2023-10-17 12:40:09 2

專利名稱：一種治療慢性咽炎的藥物的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥技術領域。
背景技術：
咽炎的發病率特別高，其發病率要高於感冒的發病率，每人一生可多次發病，而且隨著人口的增多及新型病毒的出現，咽炎的發病率有上升的趨勢。慢性咽炎是咽黏膜發生慢性炎症的一種常見病，其中瀰漫性炎症常為上呼吸道慢性卡他性炎症的一部分，局限性炎症則伴有咽部淋巴組織的炎症。本病相當於中醫的慢喉症。常因受涼、疲勞、菸酒過度、各種物理和化學的刺激等誘因所引起。
目前市場上針對該症治療的中成藥物甚少，提出有治療慢咽作用的藥物，療效也一般。
經檢索有關治療咽炎的中藥文獻，結果有關以蟾酥、黃芩、牛蒡子組方及以蟾酥、黃芩及牛蒡子有效部位組方治療慢性咽炎的藥物研究情況如下。
1、利咽止嗽湯治療咽源性咳嗽126例/金小景等//陝西中醫.2002，23(12)1076-1077。
介紹利咽止嗽湯(荊芥、防風、白芷、牛蒡子、桔梗、枳殼等)對咽源性咳嗽的療效.方法採用治療本病126例.結果總有效率85.6.提示疏風解表，清熱利咽，宣肺止咳是治療咽源性咳嗽的有效方法。
2、扁咽合劑治療急慢性咽炎268例/王桂香等//陝西中醫.2005，26(6)530介紹中藥扁咽合劑(玄參、二花、麥冬、黃芩、桔梗、山豆根等)治療急慢性咽炎268例，結果總有效率93％.提示本方具有滋陰清熱、解毒潤肺的作用。
3、清咽利嗓湯治療慢性喉炎68例/劉朝飲等//陝西中醫.2004，25(12)1109-1110。
介紹清咽利嗓湯(雲故紙、枸杞子、牛蒡子、桔梗、甘草等)治療慢性喉炎68例。結果總有效率94.12％.對照組總有效率84.13％.治療組明顯優於對照組(P＜0.001)，提示本方法對本病具有宣肺開音，清火利嗓的功效。
4、普濟消毒飲加減治療流行性腮腺炎150例臨床觀察/陳和等//現代醫院.2005，5(11)58。
介紹普濟消毒飲(由黃芩、黃連、陳皮、甘草、玄參、柴胡、桔梗、連翹、板藍根、馬勃、牛蒡子、薄荷、僵蠶、升麻等組成)流行性腮腺炎的治療.結果治癒120例，顯效25例，無效5例，總有效率96.7％.結論普濟消毒飲治療流行性腮腺炎有較好療效.
5、清咽湯治療慢性咽炎80例/範喜軍//四川中醫.2004，22(6)84。
介紹清咽湯治療慢性咽炎的療效.採用自擬中藥方(銀花、桔梗、黃芩、山豆根、甘草、麥冬等)治療慢性咽炎80例.結果痊癒61例，好轉15例，無效4例，總有效率達95％。
6、六子親肺湯治療頑固性咳嗽138例/祝東友等//陝西中醫.2003，24(10)870-871。
介紹六子親肺湯(炒蘇子、白芥子、萊菔子、牛蒡子、五味子、葶藶子、桔梗、前胡等)治療頑固性咳嗽138例，並設急支糖漿組67例為對照組.結果兩組有效率分別為97.8，71.6，有顯著性差異(P＜0.01＝.提示本方法對本病有宣肺祛邪，調暢肺氣，降逆止咳化痰的功效.
7、蟾酥注射液治療呼吸道感染60例臨床觀察/楊文明等//中國中醫藥雜誌.2000，7(3)5-6。
介紹蟾酥注射液治療呼吸道感染60例的療效。結果治療組臨床症狀療效總有效率治療組為93.3％。
8、一清膠囊治療上呼吸道感染療效觀察/楊秀清//中國誤疹學雜誌.2005，5(17)3320。
介紹一清膠囊(大黃、黃芩、黃連)治療上呼吸道感染。結果總有效率在90％以上。
9、甘露飲加味治療慢性咽炎46例/王麗超//江西中醫學院學報.2000，12(3)59。
介紹甘露飲(玄參、熟地、生地、麥冬、茵陳、黃芩、桔梗、香附、浙貝、枳殼、枇杷葉)治療慢性咽46例.結果總有效率為95.7％。
10、清嗓利咽衝劑治療慢性咽炎196例/曹文團//陝西中醫.2001，22(9)523-524介紹清嗓利咽衝劑(黃芩、連翹、玄參、蟬衣、赤芍、浙貝等)治療慢性咽炎196例，總有效率92.9％，與利咽解毒顆粒組192例對照，有明顯差異(P＜0.01)。提示本方有瀉熱利咽，滋陰生津，化痰散結之效。
11、中藥蟾酥臨床應用簡介/韓莉//實用醫藥雜誌.2003，20(11)854。
介紹蟾酥的臨床應用進展，蟾酥性溫，味甘辛，有毒，歸脾心二經，具有消腫止痛、開竅醒神之功效。現代藥理研究發現蟾酥中含有腎上腺素、去甲腎上腺素、蟾毒配質和辛二酸、精氨酸等，具有強心、升壓、消炎、抗腫瘤等作用。其中介紹朱以服等用華蟾素治療慢性咽喉炎，總有效率達90.5％。
12、清咽湯治療慢性咽炎/羅恆等//中國民間療法.2003，11(9)47-48。
介紹清咽湯(玄參、牛蒡子、僵蠶、麥冬、桔梗、射幹、甘草、沙參)治療慢性咽炎的療效，結果106例患者經上法治療1-2個療程後，治癒101例，好轉5例。提示本製劑對慢性咽炎有很高的療效。
蟾酥內酯提取工藝將蟾酥粉碎成細粉，以氯仿加熱回流提取兩次，每次2小時，每次氯仿的加入量為藥材的6倍。合併氯仿提取液，濾過，回收氯仿，減壓乾燥，粉碎成細粉，過篩，即得。
黃芩總黃酮提取工藝黃芩加水煎煮三次，每次2小時，加水量分別為藥材的6倍，合併煎液，濾過，濾液中加入鹽酸至pH值為1～2，攪拌均勻後，靜置24小時，濾過，得沉澱，用水洗至pH值為6～7，減壓乾燥(控制真空度≤0.08Pa；溫度80～85℃)，粉碎成粗顆粒，用70％乙醇加熱回流提取3次，每次2.5小時，每次加醇量為3倍，合併醇提取液，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，濃縮至相對密度為1.30～1.35(80℃測)的稠膏，減壓乾燥(控制真空度≤0.08MPa，溫度80～85℃)，粉碎成細粉，過篩。
牛蒡子總苷提取工藝牛蒡子用6倍量85％乙醇回流提取2次，每次2小時，合併提取液，濾過，減壓回收乙醇至無醇味並濃縮至相對密度為1.30～1.35(80℃測)的稠膏，減壓乾燥(控制真空度≤0.08MPa，溫度70～80℃)，粉碎成細粉；過篩，即得。

發明內容
本發明提供一種治療慢性咽炎的藥物，具有顯著的抗菌，抗病毒，止痛，去炎作用。
本發明適用於慢性咽炎的虛火上炎證，症見咽喉幹疼、灼熱，多言之後症狀加重，嗆咳無痰，或有少量粘痰，頻頻求飲，飲量不多，午後及黃昏時症狀明顯。咽部充血呈暗紅色，黏膜乾燥，萎縮，或有淋巴濾泡增生，舌紅，苔薄少，脈細數。因此，其治則應以清熱瀉火、消腫止痛、解毒利咽為法。
方中君以蟾酥內酯，味甘、辛，性溫，有毒，具有解毒消腫，止痛開竅的功效。黃芩總黃酮，味苦，性寒；具有清熱燥溼，瀉火解毒之功，偏於清瀉上、中二焦之火熱，善解熱生之溼，清洩半表半裡之裡邪，使溼熱得瀉、邪毒得解。可助君藥清熱瀉火，故為臣藥，牛蒡子總苷味辛，苦，寒，歸肺，胃經，具有疏散風熱，宣肺透疹，解毒利咽之功效，既可助君藥解毒，有可協臣藥清熱，還可宣肺利咽，使藥物直達病所，故為佐使藥，全方共奏清熱瀉火、消腫止痛、解毒利咽之功效。
本發明藥物組分的用量也是經過發明人進行大量摸索總結得出的，各組分用量為在下述重量範圍內都具有較好療效蟾酥內酯1～2份，黃芩總黃酮500～550份，牛蒡子總苷900～1100份。
優選地蟾酥內酯1份，黃芩總黃酮520份，牛蒡子總苷1000份。
本發明藥物可以採用中藥製劑的常規方法製備成任何常規內服製劑。
本發明藥物的活性組分可以加入製備不同劑型時所需的各種常規輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規的中藥製劑方法製備成任何一種常用劑型，如丸劑、散劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、口服液等本發明由蟾酥內酯、黃芩總黃酮和牛蒡子總苷組成，意在清熱瀉火、消腫止痛、解毒利咽，用於受涼、疲勞、菸酒過度、各種物理和化學引起的慢性咽炎。藥效學實驗結果表明蒡芩慢咽滴丸有顯著的抗菌，抗病毒，止痛，去炎作用。蒡芩慢咽滴丸對由上呼吸道易感病毒(流感病毒、柯薩奇B3型、腺病毒7型)、細菌(溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌)等感染引起慢性咽喉炎證療效頗佳。成人每人每日用量為280mg～330mg。
具體實施例方式
以下通過試驗例來進一步闡述發明所述藥物的有益效果，這些試驗例包括了本發明藥物(以下稱蒡芩慢咽滴丸)的藥效學試驗。
本項研究通過對主症——慢性咽炎相關的疾病模型、抑菌(體內、外)、系列抗炎消腫試驗、抗過敏、祛痰等藥效學指標，進而觀察了蒡芩慢咽滴丸、蟾酥內酯、黃芩總黃酮、牛蒡子苷三個總有效部位群對慢性咽炎的治療作用。首先選擇經典的抗炎試驗，對單味原料藥進行了劑量篩選，根據其量效關係，交叉配比進行成方試驗，研究結果表明，蒡芩慢咽滴丸對氨水致家兔慢性咽炎模型有明顯的治療作用，病理組織學採用光鏡對動物咽部組織進行觀察，試驗用藥組可明顯減少動物咽部黏膜的慢性充血、炎細胞浸潤，及血管和上皮增生，而賦形劑對照組與模型組相近。系列抗炎試驗證實該藥，可明顯抑制大鼠角叉菜膠性足腫脹及棉球肉芽組織增生；對二甲苯致小鼠耳廓腫脹及醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加同樣亦有顯著的抑制作用；抗菌試驗體外抑菌試驗結果表明，該藥對金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌、肺炎克雷伯氏桿菌、糞鏈球菌、福氏志賀氏菌、肺炎雙球菌、流感桿菌等9種病原菌均有藥敏反應；體內抑菌，該藥對金黃色葡萄球菌、肺炎雙球菌腹腔感染引起的小鼠死亡數量具有明顯的保護作用，並且對2，4二硝氯苯所致小鼠遲髮型超敏反應具有顯著的抑制作用；另外，本品亦可明顯增加小鼠氣管的酚紅排出量。上述試驗證實，蒡芩慢咽滴丸具有多方面藥理活性，這些藥理活性與慢性咽炎的治則《中藥新藥藥理學研究指南》相對應，故此試驗者認為，該藥是治療慢性咽炎很好的有效藥物。
試驗目的慢性咽炎中醫屬「喉痺」範疇，是咽部的常見病，又是難以治癒的慢性病，病程較長，常因受涼、感冒、疲勞等原因導致病症加重。目前市場上針對該症治療的中成藥物甚少，提出有治療慢咽作用的藥物，療效也一般。鑑於此，我們通過單味中藥藥理活性的篩選，組成了由蟾酥內酯、黃芩總黃酮和牛蒡子總苷的複方製劑，三味中藥在藥理作用上不盡相同，其中藥配伍的互補作用充分體現了該藥的治療特點，對慢性咽炎的治療效果很好。
受試藥物1.名稱蒡芩慢咽滴丸，由蟾酥內酯、黃芩總黃酮、牛蒡子苷(比例為1∶520∶1000)，加賦形劑(聚乙二醇6000)組成，製成滴丸。
2提供單位吉林大學藥學院藥劑室。
3批號030201，為動物實驗用藥批號。
4配置方法實驗時將蒡芩慢咽滴丸研碎(含賦形劑)，以蒸餾水配成所需濃度混懸液，4℃冰箱放置備用，臨用時從冰箱內取出，常溫下2小時後搖勻給藥。
5賦形劑為聚乙二醇60006功效與臨床主要症狀具有清熱瀉火、消腫止痛、解毒利咽之功效。臨床上用於慢性咽喉炎；症見咽喉幹疼、灼熱，多言之後症狀加重，嗆咳無痰，或有少量粘痰，頻頻求飲，飲量不多，午後及黃昏時症狀明顯。咽部充血呈暗紅色，黏膜乾燥，萎縮，或有淋巴濾泡增生，舌紅，苔薄少，脈細數。
陽性對照藥陽性對照藥(一)利咽靈片，由北京同仁堂科技發展股份有限公司制廠出品，生產日期2003年7月23日，批號3126649。功能主治活血通絡，益陰散結，利咽止痛，用於慢性咽喉炎。臨床成人每日口服12片(服用藥物總量為3.6g)，選擇小鼠劑量為1000mg/kg，選擇家兔劑量為340mg/kg，為2倍等效劑量。主要用於主要藥效學陽性對照品。
陽性對照藥(二)阿莫西林片，由中外合資黑龍江三勤製藥有限公司出品，批號030108。選擇小鼠劑量為520mg/kg，相當於2倍等效劑量。用於體內抑菌試驗陽性對照品。
陽性對照藥(三)阿斯匹林(腸溶片)，每片含乙醯水楊酸25mg，臨床成人每日口服50mg，選擇小鼠劑量為0.3g/kg，大鼠劑量為0.2g/kg。由吉林省貝克藥業有限公司出品，批號000501。用於抗炎試驗陽性對照品。
陰性對照(賦形劑)將聚乙二醇6000，配成0.4％濃度，按10ml/kg灌胃。
試劑二甲苯分析純，批號0881229，北京五二九化工廠。
戊巴比妥鈉中國醫藥公司北京採購供應站分裝，批號953209氨水長春市化學試劑廠，批號990323。
松節油瀋陽化學試劑廠，批號941821。
角叉菜膠由瀋陽藥學院中藥系提供，臨用時以生理鹽水配製。
甲醛溶液天津化學試劑有限公司，批號000517苯酚紅上海化學試劑採購供應站試劑廠，批號860705碳酸氫鈉瀋陽試劑一廠，批號901208菌種及菌號國家標準菌種金黃色葡萄球菌 26003大腸埃希氏菌44113肺炎鏈球菌 31001(中國藥品生物製品檢定所提供)地方菌種肺炎克雷伯氏桿菌 13883糞鏈球菌 ATCC 29212福氏志賀氏ATCC 12022流感桿菌 9341C甲型鏈球菌(臨床臨時分離菌種)丙型鏈球菌(臨床臨時分離菌種)(吉林省衛生防疫站細菌室提供)儀器1.精密扭力天平，JN-A型，上海第二天平儀器廠2.752型紫外光柵分光光度計，上海第三分析儀器廠
3.生物顯微鏡，L-301型，廣州光學儀器廠4.T系列電子，美國雙傑兄弟集團有限公司5.多用氣體培養箱，NCP03100-1型，美國製造6.雙人超淨工作檯SW-CT-ZF型，中國蘇州儀器廠7.離心沉澱機，LXT-II型，中國上海製造8.202-1型乾燥箱，上海市試驗儀器總廠9.額鏡80，上海奧佳醫療設備有限公司10.喉頭噴霧器，L56-03，上海市嘉定區醫療設備廠動物1.健康成年大耳白家兔，雌(未孕)、雄兼用，體重2-2.5kg，由吉林大學試驗動物中心提供。
2.Wistar大白鼠，封閉群，體重120-150g，雌雄兼用，動物合格證號10-5112，2003-0004。
3.昆明種小白鼠，封閉群，體重18-22g，動物合格證號10-5113，2003-0004.
Wistar大白鼠和昆明種小白鼠均由長春高新醫學動物實驗研究中心提供。
飼養條件動物室為普通級，室溫26℃，相對溼度為40％，通風良好，採用標準飼料飼養，小白鼠籠具26×16cm，雌雄分籠，每籠5隻。大白鼠籠具50×35cm，雌雄分籠，每籠5隻動物。
藥物組成及劑量選擇一、處方篩選試驗1.蒡芩慢咽滴丸處方中蟾酥內酯單味原料藥與黃芩總黃酮、牛蒡子苷單味原料藥分別給藥的藥效劑量篩選試驗選擇蟾酥內酯劑量範圍蟾酥的藥典用量範圍為0.015～0.03g，處方組成是從蟾酥中提取的總有效部位群—蟾酥內酯，蟾酥內酯的口服LD50為34.9mg/kg，最小致死量為22.0mg/kg，根據《中藥新藥臨床研究指導原則》臨床劑量設計(改良Fibonacci法)以動物急性毒性試驗LD50的1/100作為臨床人用藥的劑量，即0.35mg，按小鼠與人體表面積等效劑量比值計算，小鼠的等效劑量為0.05mg/kg，在它周圍選擇5個劑量，進行藥效學劑量篩選試驗，劑量分別為0.10mg、0.05mg、0.025mg、0.0125mg、0.00625mg/kg。
選擇黃芩總黃酮劑量範圍黃芩的藥典用量範圍為3——9g，黃芩總黃酮每g粉相當於8.964g生藥，即335mg——1000mg，按人體與小鼠體表面積等效劑量比值計算，藥典的最大服用量折算成小鼠劑量為130mg/kg，根據文獻報導[3]，黃芩總黃酮的藥效劑量為50、100、200mg/kg均有明顯的抗炎作用，我們選擇了5個劑量130.0mg、65.0mg、26.5mg、13.0、8.7mg/kg，分別為小鼠的等效劑量及等效劑量的1/2、1/5、1/10、1/15。
選擇牛蒡子苷劑量範圍牛蒡子藥典用量範圍為6g——12g，牛蒡子苷每g粉相當於2.035g生藥，即2.95g——5.7g，根據文獻報導，牛蒡子苷的有效劑量為5mg/kg，我們在做抗炎試驗時，選擇劑量5mg/kg、10mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg。
1.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹影響試驗取小鼠160隻，隨機分為16組，每組10隻，第1、2、3、4、5組為蟾酥內酯組，劑量分別為0.10mg、0.05mg、0.025mg、0.0125mg、0.00625mg/kg，(分別相當於小鼠等效劑量的2倍、1倍、1/2、1/4、1/8)第6、7、8、9、10組為黃芩總黃酮組，劑量分別為130mg、65mg、26.5mg、13.0mg、8.7mg/kg組，第11、12、13、14、15組為牛蒡子苷組，劑量分別為100mg、50mg、25mg、10mg、5mg/kg，第16組為模型對照組，給同體積蒸餾水，每日灌胃(ig)給藥1次，連續5天，於末次給藥後1h，於右耳廓兩側均勻塗抹二甲苯30ul，以左耳為自身對照，致炎後2h剪下兩耳，用9mm打孔器，在同一耳面相同部位打孔，以等同打孔耳片稱重，以兩耳重量差為腫脹度。結果見表1。
表1蟾酥內酯、黃芩總黃酮、牛蒡子苷對小鼠耳廓腫脹的影響(X±SD)

與對照組比較**P＜0.01*P＜0.05表1結果表明，通過經典的抗炎指標——小鼠耳廓性腫脹試驗，處方中單味藥不同梯度劑量篩選，測得蟾酥內酯的最小有效劑量為0.025mg/kg，最佳劑量為0.05mg/kg，黃芩總黃酮的最小有效劑量為8.7mg/kg，最佳劑量為13.0mg/kg，牛蒡子苷的最小有效劑量為10mg/kg，最佳劑量為25mg/kg，，以下繼續通過兩種試驗方法來觀察蟾酥內酯及黃芩總黃酮和牛蒡子苷的最佳有效劑量。
1.2、對大鼠棉球肉芽組織增生的影響[6]
取160隻大鼠，雌雄各半，隨機分為16組，每組動物10隻，大白鼠由腹腔注射戊巴比妥鈉溶液30mg/kg，進行麻醉，在每隻鼠的左右的蹊部用碘酒消毒，用75％的酒精棉球脫碘後，各切1cm長的小口，用眼科鑷子將20mg棉球從切口處植入皮下，隨即縫合皮膚。手術當日將第1、2、3、4、5組為蟾酥內酯組，劑量分別為0.07mg、0.035mg、0.0175mg、0.0088mg、0.0044mg/kg，(分別相當於大鼠等效劑量的2倍、1倍、1/2、1/4、1/8)，第6、7、8、9、10組為黃芩總黃酮組，劑量分別為91mg、45.5mg、18.55mg、9.1mg、6.1mg/kg組，第11、12、13、14、15組為牛蒡子苷組，劑量分別為70mg、35mg、17.5mg、7mg、3.5mg/kg，第16組為模型對照組，給同體積蒸餾水，每日灌胃(ig)給藥1次，連續7天，於末次給藥30min後，打開原切口，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，放入70℃的烘箱中烘乾、稱重。結果見表2。
肉芽腫重量＝(兩個肉芽重量/2)-20mg
表2蟾酥內酯、黃芩總黃酮、牛蒡子苷對大鼠肉芽腫的影響(X±SD)

與對照組比較**P＜0.01*P＜0.05由表2結果表明，蟾酥內酯的最小有效劑量為0.0175mg/kg，黃芩總黃酮的最小有效劑量為6.1mg/kg，牛蒡子苷的最小有效劑量為7mg/kg。
二、藥物配比試驗為了尋求處方中藥物組合藥理活性的有效性和藥物配比的最佳條件，我們以抗炎指標——受試藥物「對大鼠棉球肉芽腫的抑制作用」試驗的「抑制率」為指標，擬以正交實驗表L9(34)進行試驗，從而確定最佳處方，因素水平以藥物的最佳劑量為基礎，分別在該基礎上增大一倍和減少一倍為因素進行正交試驗，藥物配比的因素水平表見表3，正交試驗結果見表4。
蟾酥內酯劑量0.0088mg/kg、0.0175mg/kg、0.035mg/kg黃芩總黃酮劑量6.1mg/kg、9.1mg/kg、18.55mg/kg牛蒡子苷劑量4.375mg/kg、8.75mg/kg、17.5mg/kg表3.藥物配比的因素水平表

表4.藥物配比的正交設計方案

從表3、4可見，以抑制率為指標，藥物配比的最佳工藝均為A2B2C3D1；從試驗結果可以看出，對抑制率影響的主要因素是蟾酥內酯、其次是黃芩總黃酮和牛蒡子苷，其最佳配比是蟾酥內酯∶黃芩總黃酮∶牛蒡子苷＝0.0175∶9.1∶17.5＝1∶520∶1000。
由以上試驗確定蒡芩慢咽滴丸的處方比例為蟾酥內酯∶黃芩總黃酮∶牛蒡子苷＝1∶520∶1000，且大鼠有效劑量為27mg/kg(即含蟾酥內酯0.0175mg、黃芩總黃酮9.1mg、牛蒡子苷17.5mg)，小鼠有效劑量為39mg/kg(即含蟾酥內酯0.025mg、黃芩總黃酮13.0mg、牛蒡子苷25.0mg)，按此劑量折算成擬臨床用量每人每日口服300.2mg(不含賦形劑)，由此確定處方中，藥物組成劑量，以下主要藥效學試驗均按處方藥物含量比例所製成藥後，用於藥理試驗。
選擇小鼠劑量蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量分別為164mg、82mg、41mg/kg，選擇大鼠劑量為114mg、57mg、28.5mg/kg，選擇家兔劑量為60mg、30mg、15mg/kg，分別為2倍等效劑量、等效劑量、1/2等效劑量，(通過予試驗結果對體內抑菌試驗提高了用藥劑量，選擇4倍等效劑量328mg/kg)。
藥效學試驗1、蒡芩慢咽滴丸對家兔慢性咽炎模型的影響取大耳白家兔48隻，雌雄各半，隨機分為6組，每組8隻，第1、2、3組為蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量組，劑量分別為60mg、30mg、15mg/kg，第4組為陽性藥利咽靈片組，劑量為1000mg/kg，第5組為模型對照組，第6組為正常對照組。前5組動物造模，第1日-15日用2.5％氨水噴咽部，在第8日於兔咽部黏膜下注射0.5ml松節油，從第16日開始，第1-4組按劑量分別灌胃給藥，第5、6組灌胃給同體積0.4％賦形劑，給藥10天，於第26日處死家兔，取咽部組織，肉眼觀察後，立即投入10％甲醛液固定，然後做病理組織學檢查。
表5 動物咽部組織病理形態學觀察表

與正常對照組比較**P＜0.01*P＜0.05 與模型對照組比較 ΔP＜0.05從上表可見，造模組動物咽部組織炎細胞(以淋巴細胞和單核細胞為主)浸潤明顯，血管增生，腺體分泌活躍，與空白對照組比較，有極顯著的差異(p＜0.01)，口服蒡芩慢咽滴丸的高劑量組、中劑量組則病變恢復較好，陽性藥組與其近似，二者與空白對照組比較皆無顯著性差異(p＜0.05)。口服蒡芩慢咽滴丸低劑量組則與模型對照組相近(P＞0.05)。
病理學觀察結果正常對照組咽部組織各層結構清楚，可見黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。上皮為復層扁平，未見明顯角化。固有層結締組織內富含無明顯擴張的血管，可見較多粘液腺和混合腺，腺體無肥大、增生或萎縮。固有層纖維組織無增生。部分固有層下能見到連接的骨骼肌。咽黏膜未見其他病理組織學結構明顯異常。
模型組咽部組織結構不規整，上皮為復層扁平上皮，未見明顯角化。但有輕度增生，上皮增厚。固有層血管明顯增多、擴張、淤血，有的部位固有層內可見大量炎細胞呈局灶性浸潤，以淋巴細胞為主。少數動物可見固有層纖維組織輕度增生。固有層腺體增生較活躍，泡漿內含大量分泌顆粒。肌層和外膜無明顯結構異常。
陽性藥組咽部組織各層結構尚清楚，上皮為復層扁平上皮，未見明顯角化。固有層結締組織內含較多血管，但無明顯擴張和淤血，腺體無明顯肥大、增生或萎縮。固有層內可見少量炎細胞浸潤，以血管周圍為多。固有層纖維組織增生不明顯。肌層和外膜無明顯結構異常。
蒡芩慢咽滴丸高劑量組咽部組織各層結構尚清楚，上皮為復層扁平上皮，未見明顯角化。固有層結締組織內含較多血管，但無明顯擴張和淤血，腺體無明顯肥大、增生或萎縮。固有層內可見少量炎細胞浸潤，以血管周圍為多。固有層纖維組織增生不明顯。肌層和外膜無明顯結構異常。
蒡芩慢咽滴丸中劑量組咽部組織各層結構尚清楚，上皮為復層扁平上皮，未見明顯角化。固有層結締組織內含較多血管，無明顯擴張和淤血，腺體無明顯肥大、增生或萎縮。固有層內可見炎細胞浸潤。肌層和外膜無明顯結構異常。
蒡芩慢咽滴丸低劑量組咽部組織各層結構尚清楚，上皮為復層扁平上皮，未見明顯角化。固有層結締組織內含較多血管，內可見炎細胞浸潤，以血管周圍為多。固有層纖維組織增生不明顯。肌層和外膜無明顯結構異常。
從以上結果可見，造模組動物咽部組織結構不規整，上皮有增厚，固有層血管明顯增多、擴張、瘀血，固有層內可見大量炎細胞呈局灶性浸潤，少數動物可見固有層纖維組織輕度增生，固有層腺體增生較活躍，泡漿內含大量分泌顆粒，表明慢性咽炎模型複製成功。給藥組上述病理組織學變化明顯改善，以高劑量效果最明顯，表明蒡芩慢咽滴丸對家兔實驗性咽炎有較好的治療作用。
2、蒡芩慢咽滴丸對大鼠棉球肉芽組織增生的影響取50隻大鼠，雌雄各半，隨機分為5組，每組動物10隻，第1-3組為蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量組，第4組為陽性對照阿斯匹林組，第5組為對照組，動物由腹腔注射戊巴比妥鈉溶液30mg/kg，進行麻醉，在每隻鼠的左右的蹊部用碘酒消毒，用75％的酒精棉球脫碘後，各切1cm長的小口，用眼科鑷子將20mg棉球從切口處植入皮下，隨即縫合皮膚。手術當日將第1、2、3、4開始按劑量灌胃給藥，第5組給賦形劑，每日灌胃(ig)給藥1次，連續7天，於末次給藥30min後，打開原切口，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，放入70℃的烘箱中烘乾、稱重。結果見表6。
肉芽腫重量＝(兩個肉芽重量/2)-20mg

表6 對大鼠棉球肉芽腫的影響

與對照組比較***P＜0.001**P＜0.01*P＜0.05由表6結果表明，蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量對大鼠棉球肉芽組織增生均具有明顯的抑制作用。
3、蒡芩慢咽滴丸對角叉菜膠性足腫脹的影響取大鼠50隻，雄性，隨機分為5組，每組動物10隻，1-3組為蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量組，第4組為陽性藥阿斯匹林組，劑量為200mg/kg，第5組為對照組，實驗時1-4組按劑量灌胃(ig)給藥，每天1次，連續7天，對照組按給藥高劑量給予同體積賦形劑。用自製窄帶尺測量大鼠左後足踝關節周長後，於末次給藥30min後，分別在大鼠右後足皮下注射1％角叉菜膠混懸液0.1ml/只。每小時測右後足踝關節周長1次，共6h。以每鼠左後足自身為對照，以左右後足踝關節周長之差為炎症腫脹度(mm)，結果見表7。
表7 蒡芩慢咽滴丸對角叉菜膠引起的大鼠足腫脹的影響

與對照組比較**P＜0.01*P＜0.05由表7結果表明，蒡芩慢咽滴丸114mg、57.0mg/kg組，對1-6h大鼠角叉菜膠性足腫脹均具有明顯的抑制作用，但作用不如陽性藥阿斯匹林，57mg/kg組(除2h外)28.5mg/kg組雖然亦有一定的抑制腫脹趨勢，但統計學處理無意義。說明本品具有一定的抗炎作用。
5、蒡芩慢咽滴丸對金黃色葡萄球菌體內(腹腔)感染小鼠的保護作用將金黃色葡萄球菌(購於中國藥品生物製品檢定所 菌號26003)進行培養37℃孵育16-18小時取出，加入5％濃度胃黏膜素(以強化毒力)製成不同梯度的菌懸液，為預試驗備用。
經預試驗，本試驗條件下給小鼠腹腔注射不同梯度的金黃色葡萄球菌(感染造成動物80％～100％的死亡率)，結果測得金黃色葡萄球菌最小致死量(MLD)為10-3。進行正式試驗時，取小鼠90隻，雌雄各半，隨機分為6組，每組15隻，第1組為蒡芩慢咽滴丸(含賦形劑)328mg/kg組、第2組為114mg/kg組、第3組為57mg/kg組，第4組為28.5mg/kg，第5組為陽性藥阿莫西林膠囊組，劑量為520mg/kg(按人體與動物體表面積等效劑量比值計算，相當於小鼠2倍等效劑量)，第6組為模型對照組(給予同體積賦形劑)，每日ig給藥2次，上、下午各一次，連續給藥兩天，於第4次給藥後腹腔注射10-3金黃色葡萄球菌懸液，每隻0.5ml，觀察24h死亡動物數，計算死亡率並進行λ2統計學處理，結果見表8。
表8、蒡芩慢咽滴丸不同劑量對金黃色葡萄球菌體內(腹腔)感染小鼠的保護作用

表8結果表明，蒡芩慢咽滴丸328mg、114mg、57mg/kg三個劑量組均對金黃色葡萄球菌致小鼠腹腔感染引起的小鼠死亡具有定的保護作用，其中328mg、114mg/kg劑量組，作用最為明顯，死亡率均為33.3％，與模型對照組比較經統計學處理P＜0.01，與陽性藥阿莫西林組比較無顯著性差異，說明均具有同等的體內抑菌作用。
6、蒡芩慢咽滴丸對肺炎鏈球菌體內(腹腔)感染小鼠的保護作用將肺炎鏈球菌(購於中國藥品生物製品檢定所菌號31001)進行培養37℃孵育16-18小時取出，用生理鹽水以10倍順序稀釋，同時加入5％濃度胃黏膜素(以強化毒力)製成不同梯度的菌懸液。
經預試驗，本試驗條件下腹腔注射肺炎鏈球菌最小致死量(MLD)為10-1。正式試驗，取小鼠90隻，雌雄各半，體重18-20g，隨機分為6組，每組15隻，第1、2、3、4組為蒡芩慢咽滴丸四個劑量組，第1組為蒡芩慢咽滴丸(含賦形劑)328mg/kg組、第2組為114mg/kg組、第3組為57mg/kg組，第4組為28.5mg/kg，第5組為陽性藥阿莫西林膠囊組，劑量為520mg/kg(按人體與動物體表面積等效劑量比值計算，相當於小鼠2倍等效劑量)，第6組為模型對照組(給予同體積賦形劑)，每日ig給藥2次，上、下午各一次，連續給藥兩天，於第4次給藥後腹腔注射肺炎鏈球菌，每隻0.5ml，觀察48h死亡動物數，計算死亡率並進行λ2統計學處理，結果見表9。
表9 對肺炎鏈球菌體內(腹腔)感染小鼠的保護作用

由表9結果表明，4個劑量均對肺炎鏈球菌致小鼠體內感染有不同程度的抑制趨勢，其中高、中劑量組抗菌作用最為明顯，與對照組比較經統計學處理P＜0.05。
7、蒡芩慢咽滴丸對體外各種細菌培養的藥敏反應把6種實驗菌接種在普通哥倫比亞血平皿上，37℃孵育16-18小時取出，用生理鹽稀釋，使菌液濃度為106/ml菌，試驗時取無菌試管10支，將藥液原液按等比倍數稀釋，濃度分別為0.5mg、0.25mg、0.13mg、0.06mg、0.03mg、0.015mg、0.0075、0.00375mg/ml後，再取10支試管每管加1ml藥液和0.1ml菌液，充分混勻後，37℃孵育18小時，結果以藥液管是否澄清、液面有無黴菌環為指標，如藥液管澄清、液面無黴菌環，則該管藥物有抗菌作用；如藥液管為渾濁，液面有黴菌環，則該管藥物無抗菌作用。以完全無菌生長最低藥物濃度作為藥物對該菌株的最低抑菌濃度(MIC)。結果見表10。
表10 蒡芩慢咽滴丸對6種實驗菌體外(試管法)藥敏試驗

由表10結果表明，蒡芩慢咽滴丸不同梯度藥液均能測出最低抑菌濃度。
8、蒡芩慢咽滴丸對小鼠二甲苯耳廓腫脹影響取50隻小鼠，隨機分為5組，每組動物10隻，第1、2、3組為蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量組，劑量分別為164mg、82mg、41mg/kg(分別相當於2倍等效劑量、等效劑量及1/2等效劑量)，第4組為陽性藥阿斯匹林，劑量300mg/kg，第5組為對照組，各組動物按劑量每日ig給藥1次，連續3次，對照組按給藥高劑量容積給予賦形劑。於末次給藥後1h，於右耳廓兩側均勻塗抹二甲苯30ul做為致炎耳，左耳作為對照，致炎後2h剪下兩耳，用9mm打孔器，在同一耳面部位打孔，以等同打孔耳片稱重，以兩耳重量差為腫脹度。結果見表11。
表11 蒡芩慢咽滴丸對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01
由表11結果表明，蒡芩慢咽滴丸164mg、82mg/kg劑量具有明顯的抑制耳廓腫脹作用，抑制率為14.8％、13.6％，但作用不如陽性藥阿斯匹林組，低劑量組亦有一定的抑制趨勢，但統計學處理無意義。
9、蒡芩慢咽滴丸對小鼠腹腔毛細血管通透性的影響取50隻小鼠，隨機分為5組，每組動物10隻，第1、2、3組為蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量組，劑量分別為164mg、82mg、41mg/kg(分別相當於2倍等效劑量、等效劑量及1/2等效劑量)，第4組為陽性藥阿斯匹林，劑量為300mg/kg，第5組為對照組，每日ig給藥1次，動物連續灌胃給藥5天，於末次給藥1小時後尾靜脈注射0.5％伊文思藍溶液o.1ml/10g，立即腹腔注射0.6％醋酸生理鹽水溶液0.2ml/只，20分鐘後處死小鼠，剪開腹腔，用生理鹽水衝洗，收集衝洗液，調至5ml，離心，取上清液，用752型分光光度計於590nm處測吸收度，測OD值，結果見表12。
表12 蒡芩慢咽滴丸對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的影響

與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001由表12結果表明，蒡芩慢咽滴丸高、中、低三種劑量均對小鼠腹腔毛細血管通透性具有不同程度的抑制作用。
10、慢咽滴丸對小鼠的祛痰試驗取50隻小鼠，隨機分為5組，每組動物10隻，第1、2、3組為蒡芩慢咽滴丸高、中、低劑量組，劑量分別為164mg、82mg、41mg/kg(分別相當於2倍等效劑量、等效劑量及1/2等效劑量)，第4組為陽性藥阿斯匹林，劑量為300mg/kg，第5組為對照組，每日ig給藥1次，動物連續灌胃給藥5天，於末次給藥30分鐘，腹腔注射0.25％苯酚紅溶液0.7ml/只，30分鐘後將動物拉頸處死，分離氣管，插入7號針頭，以5％碳酸氫鈉衝洗三次(0.4ml/次)，衝洗液合併，以苯酚紅標準管比色，計算所含苯酚紅量，用以表示祛痰的作用。結果見表13。
表13 蒡芩慢咽滴丸對小鼠苯酚紅含量的影響

與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.00111、對2.4二硝基氯苯所致小白鼠遲髮型超敏反應的影響取25±1g體重小白鼠，用1.25％二硝基氯苯丙酮液背部皮下注射0.02ml/只小白鼠，以致敏。致敏後一天，開始分別灌胃不同的藥液，連續9天，第10天以0.25％二硝基氯苯丙酮液皮下注射小白鼠右足墊中間，0.02ml/只，對側足注射相同容積的丙酮液作對照，38小時後從踝關節處剪下二足，於電子天平上稱重，以兩足的重量差為腫脹度，進行統計學處理。
表14 蒡芩慢咽滴丸對二硝基氯苯所致小白鼠遲髮型超敏反應的影響

與對照組比較*P＜0.05**P＜0.01***P＜0.001
結果表明蒡芩慢咽滴丸對二硝基氯苯所致小白鼠遲髮型超敏的反應有顯著的抑制作用。
結論現代醫學認為「慢性咽喉炎」乃細菌、病毒及一些有害的物理、化學因素刺激造成的咽部一系列炎症反應，因此根據其發病機理，相對應的選擇與主症有關的藥理學試驗和治療藥物是本項研究的宗旨，通過對新藥(中藥)蒡芩慢咽滴丸藥效學作用的研究，結果證實，該藥具有很好的治療由化學物質所致的實驗性慢咽疾病，而且對系列抗炎、消腫試驗指標均具有較明顯的抑制作用，同時本品亦有抑菌、抗過敏、祛痰等多方面藥理作用，這些作用是治療慢性咽炎的藥理學基礎。試驗通過經典的抗炎指標對單味原料藥進行了量效篩選，從對比試驗可以看出，合劑作用強於單味藥，而且作用持久，這體現了合劑配伍的合理性和互補性，從而大大地提高了蒡芩慢咽滴丸對該病的特殊治療作用。
實施例1本發明滴丸的製備荒蟾酥內酯0.013g，黃芩總黃酮6.7g，牛蒡子總苷13.3g，聚乙二醇6000，22g。
將聚乙二醇6000 22g於水浴中加熱至全部融化後，加入蟾酥內酯0.013g、黃芩總黃酮6.7g、牛蒡子總苷13.3g，攪勻後迅速轉移至貯液瓶中，密閉並保溫在80±2℃，由定量泵滴丸機由上往下滴制，冷卻劑為二甲基矽油，滴速60～80丸/分，將形成的滴丸瀝盡並擦去冷卻液，倒入有吸水紙的盤中，製得1000丸，待乾燥後灌裝，包裝，即得。
實施例2本發明膠囊劑的製備蟾酥內酯0.07g，黃芩總黃酮50.0g，牛蒡子總苷90.0g，將蟾酥內酯0.07g黃芩總黃酮50.0g牛蒡子總苷90.0g，與適量澱粉混合，加入適量輔料，混勻，制粒，裝入膠囊，製得1000粒，包裝，即得。
實施例3本發明片劑的製備蟾酥內酯0.13g，黃芩總黃酮55.0g，牛蒡子總苷110.0g，將蟾酥內酯0.13g黃芩總黃酮55.0g牛蒡子總苷110.0g，與適量澱粉混合，加入適量輔料，混勻，制粒，壓片，包衣，製得1000片。
權利要求
1.一種治療慢性咽炎的藥物，其特徵在於它是由下列重量份的原料藥製成的蟾酥內酯0.7～1.3份，黃芩總黃酮500～550份，牛蒡子總苷900～1100份。
2.根據權利要求1所述的治療慢性咽炎的藥物，其特徵在於它是由下列重量份的原料藥製成的蟾酥內酯1份，黃芩總黃酮520份，牛蒡子總苷1000份。
全文摘要
本發明涉及一種治療慢性咽炎的藥物，屬於中藥技術領域。它是由下列重量份的原料藥製成的蟾酥內酯0.7～1.3份，黃芩總黃酮500～550份，牛蒡子總苷900～1100份。用於治療慢性咽炎；能清熱瀉火、消腫止痛、解毒利咽。
文檔編號A61K31/7048GK1887311SQ200610016800
公開日2007年1月3日 申請日期2006年4月26日 優先權日2006年4月26日
發明者金向群, 毋英傑, 王英軍, 孫英蓮, 劉建璇, 管清香, 郝秀華, 丁志英, 韓叢成, 楊錦竹 申請人:吉林大學