杈戴氏黴真菌在降解氯酚類化合物中的應用的製作方法

2023-10-17 08:37:59 1

杈戴氏黴真菌在降解氯酚類化合物中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了一種杈戴氏黴GZUIFR-H104.1在降解降解氯酚類化合物中的應用。該產品降解酚類化合物具有酶適用於較寬的pH值和溫度範圍，對環境友好，過程控制簡單方便等優點。
【專利說明】杈戴氏黴真菌在降解氯酚類化合物中的應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及生物【技術領域】，尤其涉及杈戴氏黴真菌在降解氯酚類化合物中的應用。
[0002]
【背景技術】
[0003]酚類物質是一類非常重要的工業有機化合物，被廣泛應用於許多商品如染料、顏料、防腐劑、除草劑、殺蟲劑和殺菌劑等。由於酚類化合物具有不同程度的毒性，因此生產上述物質時所排放的工業廢水是一種對環境和人類健康都會造成嚴重危害的汙染物。
[0004]目前報導的降解酚類廢水的方法有臭氧法、絮凝法、吸附法、溶劑萃取法、離子交換法以及超聲波催化降解法等。但上述方法普遍存在成本高、操作繁瑣等缺點，因而限制了它們在實際生產中的進一步應用。
[0005]

【發明內容】

[0006]本發明的目的在於克服上述缺點而提供一種具有酶適用於較寬的pH值和溫度範圍，對環境友好，過程控制簡單方便的杈戴氏黴真菌在降解氯酚類化合物中的應用。
[0007]以下以4-氯苯酚作為氯酚類化合物的模型物，將用杈戴氏黴GZnFR_H104.1發酵製得的漆酶粗酶液對4-氯苯酚(即:4-CP)的降解實驗及結果來說明其在降解氯酚類化合物中的應用，具體步驟如下:
I)杈戴氏黴GZnFR-H104.1粗酶液的製備
、孢子液的製備:取4°C保藏菌株斜面，用接種環挑取少量菌絲，採用劃線法將其接種於PDA固體培養基上，37°C培養箱中培養。5d後發現所接微生物已大量擴增，用滅菌的5%o Tween-80輕輕洗出平板表面上的分生孢子，並在無菌條件下用16層紗布過濾，所得孢子懸浮液以血球計數器計數後置於4°C冰箱保存；
b、粗酶液的提取:移取Iml濃度為I X IOVmL的孢子液至300ml三角燒瓶中(內裝80ml產酶培養液)，於40°C，120rpm搖床上培養；7d後將發酵液於6000rpm下離心8min，取上清夜即得；
(2)杈戴氏黴GZnFR-H104.1漆酶粗酶液催化降解酚類廢水的實驗
a、酚含量的測定:採用4-氨基安替比林直接分光光度法
酚標準使用液的配製:準確稱取新蒸餾182?184°C的苯酚約lg，溶入水中移入IOOOml容量瓶，加水稀釋至刻度。
[0008]標準曲線的繪製:於一組50ml比色管中分別加入0ml、0.50ml、l.00ml、l.50ml、
2.00ml、2.50ml、5.0Oml和10.0Oml的酚標準使用液，加蒸餾水至50ml ;加入0.5ml緩衝溶液，Iml 2%的4-氨基安替比林溶液混勻，加入Iml濃度為80mg/L的鐵氰化鉀溶液顯色，混勻，放置IOmin ;以試劑空白為參比，在510nm波長處，用IOmm比色皿測量吸光值；得到標準曲線公式為:y=0.49x-0.5，R2=0.9997.x表示吸光值，y表示標準苯酚含量。
[0009]待測水樣的預蒸餾:250ml水樣於蒸餾瓶中，加入2滴甲基橙指示劑，用(1+9)磷酸調節水樣pH至溶液至紅橙色，加入10% (質量濃度)硫酸銅(CuSO4°C 5H20)5ml，加入數粒玻璃珠，加熱蒸餾，用250ml量筒收集餾出液；待餾出液達225ml後，停止蒸餾。蒸餾瓶內液面靜止後，加入25ml水，繼續蒸餾至餾出液為250ml為止；
水樣的測定:取50ml待測水樣於50ml比色管中，加入0.5ml緩衝溶液，Iml的2%的4-氨基安替比林溶液混勻，再加入Iml濃度為80mg/L鐵氰化鉀顯色，放置IOmin ;以試劑空白為參比，於510nm波長處，用IOmm比色皿測量吸光值。
[0010]酚含量經下式計算得到:
【權利要求】
1.一種杈戴氏黴GZHFR-H104.1，菌株保藏號為:CCTCC M 209119，在降解氯酚類化合物中的應用。
2.如權利要求1所述的杈戴氏黴GZHFR-H104.1在降解4-氯苯酚中的應用。
【文檔編號】A62D3/02GK103816637SQ201310742281
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2013年12月30日 優先權日:2013年12月30日
【發明者】韓燕峰, 趙丹, 張延威, 初華麗, 鄒曉, 梁宗琦 申請人:貴州大學