一種光生物細胞的培養方法
2023-10-05 01:59:54
一種光生物細胞的培養方法
【專利摘要】本發明提供了一種光生物細胞的培養方法，屬於細胞培養領域，以提高光生物細胞的產量。所述光生物細胞的培養方法包括：利用第一營養液在介質上接種光生物細胞，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加；對所述介質上附著的光生物細胞進行給光培養，並向所述介質上附著的光生物細胞提供第二營養液，所述第二營養液沿細胞表層到底層的方向傳遞，得到光生物細胞的細胞聚集體；所述細胞聚集體包括直接附著在所述介質上的底層細胞和未直接附著在所述介質上的易脫離細胞。本發明可用於光生物細胞和/或其代謝物的生產中。
【專利說明】一種光生物細胞的培養方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及細胞培養領域，尤其涉及一種光生物細胞的培養方法。
【背景技術】
[0002] 光生物細胞的大規模、高產養殖是制約其產業化發展的瓶頸，低成本、高效培養方 式的開發是規模化生產的關鍵。目前，光生物細胞的培養方法為水體培養，具體為在跑道池 或反應器中將光生物細胞和營養物、水進行混合，並向其提供適宜的光照，使其自然生長。 但在實際應用中發現，採用水體培養方式對光生物細胞進行培養時，很容易受到光利用率 的限制，使其不能滿足目前光生物細胞培養技術的需求。
[0003] 為了更好地提高光生物細胞的光利用率，"附著培養"方法被應用於光生物細胞的 培養，具體為：將光生物細胞附著在介質的一側進行生長，並向介質的另一側提供營養液， 以使營養液依次經由布水層、介質、再由細胞底層向表層提供營養液。但在利用上述方法培 養光生物細胞的過程中，由於布水層和介質材料的性質、細胞層厚度等均會對營養液的傳 遞造成影響，使得營養液在傳遞的過程中，光生物細胞無法獲得與其實際生長條件相匹配 的營養液所需量，致使光生物細胞的整體產量不高。
【發明內容】
[0004] 本發明實施例提供了一種光生物細胞的培養方法，以提高光生物細胞的產量。
[0005] 為達到上述目的，本發明的實施例採用如下技術方案：
[0006] 一種光生物細胞的培養方法，包括：
[0007] 利用第一營養液在介質上接種光生物細胞，直至所述介質上附著的光生物細胞不 再增加；
[0008] 對所述介質上附著的光生物細胞進行給光培養，並向所述介質上附著的光生物細 胞提供第二營養液，所述第二營養液沿細胞表層到底層的方向傳遞，得到光生物細胞的細 胞聚集體；
[0009] 所述細胞聚集體包括直接附著在所述介質上的底層細胞和未直接附著在所述介 質上的易脫離細胞。
[0010] 可選地，所述接種包括：
[0011] 將光生物細胞加入到所述第二營養液中，獲得所述第一營養液；
[0012] 利用所述第一營養液對所述介質進行淋洗，使光生物細胞附著在所述介質上；
[0013] 重複上述步驟，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加。
[0014] 可選地，所述接種包括：
[0015] 將光生物細胞加入到所述第二營養液中，獲得所述第一營養液；
[0016] 將所述介質浸潤在所述第一營養液中，使光生物細胞附著在所述介質上。
[0017] 重複上述步驟，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加。
[0018] 優選地，光生物細胞附著在所述介質的兩側。
[0019] 進一步地，分別向所述介質的兩側提供所述第二營養液，所述第二營養液從所述 介質兩側分別沿細胞表層到底層的方向傳遞。
[0020] 可選地，所述接種在所述介質上附著的光生物細胞不再增加後還包括：
[0021] 對附著有光生物細胞的所述介質進行給光預培養，得到附著在所述介質上的細胞 聚集體；
[0022] 待給光預培養結束後，收集所述細胞聚集體中未直接附著在介質上的易脫離細 胞；
[0023] 利用所述第二營養液對所述介質進行淋洗或將所述介質浸潤在所述第二營養液 中，收集所述介質上殘留的易脫離細胞，獲得穩固附著有光生物細胞的所述介質。
[0024] 進一步地，將收集到的所述易脫離細胞再次加入到所述第二營養液中。
[0025] 優選地，所述介質選自柔性材料、親水材料和柔性親水材料中的一種。
[0026] 進一步地，所述介質為表面具有粗糙度和/或絨毛和/或孔洞和/或通孔的所述 柔性親水材料。
[0027] 可選地，所述光生物細胞選自球狀藻、絲狀藻、弧形藻、三角形藻、多角形藻、柵藻、 小球藻、綠球藻、紅球藻、絲狀綠藻和絲狀藍藻中的一種或多種。
[0028] 可選地，在所述得到光生物細胞的細胞聚集體之後還包括：
[0029] 收集所述細胞聚集體中未直接附著在介質上的易脫離細胞；
[0030] 重複上述給光培養和收集過程。
[0031] 本發明提供了一種光生物細胞的培養方法，該方法將光生物細胞接種在介質上， 使第二營養液沿細胞表層到底層的方向進行傳遞。與現有方法相比，本發明中所涉及的營 養液供給方式能夠使生長最旺盛的易脫離細胞得到充足的營養液，同時，使基本處於休眠 狀態的底層細胞也能獲得所必需的營養液。通過對營養液進行合理分配，使光生物細胞的 產量得到提高。
【具體實施方式】
[0032] 下面對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例 僅僅是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例，本領域普通 技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬於本發明保護的範 圍。
[0033] 下面對本發明實施例提供的光生物細胞的培養方法進行詳細描述。
[0034] 本發明實施例提供了一種光生物細胞的培養方法，包括：利用第一營養液在介質 上接種光生物細胞，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加；對所述介質上附著的光 生物細胞進行給光培養，並向所述介質上附著的光生物細胞提供第二營養液，所述第二營 養液沿細胞表層到底層的方向傳遞，得到光生物細胞的細胞聚集體。所述細胞聚集體包括 直接附著在所述介質上的底層細胞和未直接附著在所述介質上的易脫離細胞。
[0035]目前在對光生物細胞進行"附著培養"的過程中，布水層和介質材料的性質、細胞 層厚度等均會對營養液向細胞表層方向的供給造成影響。若布水層持液量大、質地均勻，介 質層親水性、通透性好，則利於營養液向底層細胞的傳輸；而隨著光生物細胞的生長，細胞 層厚度持續增加，且部分光生物細胞間的空隙縮小，各層細胞間的通透性較低（如某些光 生物細胞排列緊實，某些光生物細胞在生長的同時向胞外分泌粘性物質等），這在很大程度 上限制了營養液從細胞底層向表層的傳輸，致使向細胞表層供給營養物不足。
[0036] 對應於上述情況，在本發明實施例中，第二營養液沿細胞表層到底層的方向進行 滲透，以使易脫離細胞在獲得較多營養液的同時，底層細胞獲得足夠維持其生長的營養液， 從而提供較高的光生物細胞的整體產量。可以理解的是，向所述附著有光生物細胞的所述 介質提供第二營養液的具體方式可以有噴淋、滴灌、浸潤、霧化等，本發明並不對向所述介 質提供第二營養液的具體方式作具體限定。
[0037] 在本發明實施例中，介質為具有持液能力的介質（如多孔材質或親水材料），以確 保營養液在沿細胞表層到底層的方向進行滲透的過程中被細胞充分的吸收。
[0038] 所述第一營養液為添加有光生物細胞的營養液。所述第二營養液為未添加有光生 物細胞的營養液。在本實施例中，第二營養液包括水和/或營養物質和/或生長因子，營養 物質包括碳源、氮源、微量元素、金屬鹽等，該營養物質中的碳源和氮源可以以氣態（如C0 2、 N02等）或液態（指將碳源、氮源的物質溶於液體中）形式對細胞進行供給，優選以液態形 式供給。需要說明的是，所述培養過程中光照強度、營養物的組分及其各組分含量可以根據 實際培養的光生物細胞的生長需求變化而進行調節。
[0039] 在本發明實施例中，細胞聚集體是在培養過程中所得的最終產物，該細胞聚集體 包括底層細胞和易脫離細胞。其中，底層細胞即為直接附著在介質上的細胞，而易脫離細胞 則是在培養過程中生長出的新細胞，由於光生物細胞逐層生長，所以易脫離細胞並未直接 附著在介質上，而是附著在其他細胞上，因此與直接附著在介質上的底層細胞相比，易脫離 細胞較為容易收集。
[0040] 本發明實施例提供了一種光生物細胞的培養方法，該方法將光生物細胞接種在介 質上，使第二營養液沿細胞表層到底層的方向進行傳遞。與現有方法相比，本發明實施例所 涉及的營養液供給方式能夠使生長最旺盛的易脫離細胞得到充足的營養液，同時，使基本 處於休眠狀態的底層細胞也能獲得所必需的營養液。通過對營養液進行合理分配，使光生 物細胞的產量得到提高。
[0041] 在本發明的另一實施例中，所述接種包括：將光生物細胞加入到所述第二營養液 中，獲得所述第一營養液；利用所述第一營養液對所述介質進行淋洗，使光生物細胞附著在 所述介質上；重複上述步驟，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加。
[0042] 現有技術中，光生物細胞的接種多通過塗抹、抽濾等方式，依靠機械力作用使其堆 積於介質表面，微觀上並未和介質緊密結合，細胞間仍存在空隙。而本發明實施例所採用的 接種方法並不需要向光生物細胞及介質施加機械力，而是利用細胞自身特性（形狀、結構， 分泌物，表面帶電性等）使其自發地、較牢固地附著在介質上（如絲狀細胞和帶有鞭毛的細 胞易於嵌入或鉤掛在介質的孔隙或多毛結構中；分泌粘性物質的細胞易於通過包裹於細胞 外部的粘性物質與介質結合，表面帶有電荷的細胞易於通過靜電引力吸附於介質表面），這 樣，含有光生物細胞的營養液在介質表面不斷流動時，即對附著在介質上的細胞不斷衝淋， 使得附著不夠穩固的細胞脫離介質，而附著穩固的細胞為了抵禦衝淋時細胞脫離介質的趨 勢，會與介質結合得更加緊密、牢固。
[0043] 本實施例的優選實施方案為：向第二營養液中逐次加入光生物細胞，對介質進行 多次淋洗，以使光生物細胞附著在所述介質上。具體為：首先將光生物細胞均分為若干份， 向第二營養液中加入其中一份，然後對介質進行循環淋洗，直至第二營養液中加入的光生 物細胞近乎接種完全，再向第二營養液中加入一份光生物細胞，重複上述步驟直至淋洗後 所述介質上附著的光生物細胞不再增加。採用這種方式接種能夠更好地判斷光生物細胞在 介質上接種完全的臨界狀態，還可有效地節省光生物細胞的用量。
[0044] 在本發明的另一實施例中，將光生物細胞加入到所述第二營養液中，獲得所述第 一營養液；將所述介質浸潤在所述第一營養液中，使光生物細胞附著在所述介質上；重複 上述步驟，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加。
[0045] 在該實施例中，使光生物細胞利用細胞自身特性（形狀、結構，分泌物，表面帶電 性等）以自發的方式附著於介質上，以避免介質上的光生物細胞因營養液的流動而脫落。
[0046] 本實施例的優選實施方案為：向第二營養液中逐次加入光生物細胞，以對介質進 行多次浸潤，以使光生物細胞附著在所述介質上。具體為：首先將光生物細胞均分為若干 份，向第二營養液中加入其中一份，然後將介質浸潤在所述加入光生物細胞的第二營養液 中，直至第二營養液中加入的光生物細胞近乎接種完全，再向第二營養液中加入一份光生 物細胞，重複上述步驟，直至浸潤後所述介質上的光生物細胞不再增加。採用這種方式接種 能夠更好地判斷光生物細胞在介質上接種完全的臨界狀態。
[0047] 需要說明的是，本發明實施例所採用的接種方法並不限於上述情況，本領域技術 人員可以根據生產實際需要選擇最合適的接種方法；此外，判斷所述介質上附著的光生物 細胞不再增加的方法可以是觀察附著有光生物細胞的介質表面顏色或者是檢測第二營養 液中的光生物細胞含量，當附著有光生物細胞的介質表面顏色與光生物細胞顏色相同，或 第二營養液中的光生物細胞含量不再減少則表明所述介質上附著的光生物細胞不再增加。 [0048] 在本發明的又一實施例中，在所述接種過程中，在所述介質上附著的光生物細胞 不再增加後還包括：對附著有光生物細胞的所述介質進行給光預培養，得到附著在所述介 質上的細胞聚集體；待給光預培養結束後，收集所述細胞聚集體中未直接附著在介質上的 易脫離細胞；利用所述第二營養液對所述介質進行淋洗或將所述介質浸潤在所述第二營養 液中，收集所述介質上殘留的所述易脫離細胞，獲得穩固附著有光生物細胞的所述介質。
[0049] 在該實施例中，經過上述接種過程，在所述介質上附著有光生物細胞，這些光生物 細胞利用自身特性較為牢固地附著在介質上。對這些光生物細胞進行1-7天的給光預培 養，使其生長為細胞聚集體，該細胞聚集體包括直接附著在介質上的底層細胞和未直接附 著在介質上的易脫離細胞。這裡，優選採用刮取的方式收集所述易脫離細胞。採用刮取的方 式不但可收集細胞聚集體上的易脫離細胞，還可以調節介質表面的細胞聚集體的平整度， 從而獲得均勻良好的細胞生長面。
[0050] 進一步地，通常還會利用所述第二營養液對所述介質進行淋洗或將介質浸潤在第 二營養液中，以收集所述介質上殘留的易脫離細胞，利於在後續培養中準確衡量細胞產量。 同時，介質上的未脫離細胞為了抵禦衝淋時細胞脫離介質的趨勢，會利用自身特徵與介質 結合得更加緊密、牢固，從而可提高光生物細胞對後續培養的穩固性。在上述實施例的另一 優選實施例中，將收集到的所述易脫離細胞再次加入到第二營養液中。在該實施例中，可將 上述刮取和淋洗方式收集到的細胞再次加入到第二營養液中配製成第一營養液，以對新的 介質進行接種，這樣可較好地使易脫離細胞得到循環利用，節約光生物細胞及營養液的用 量。
[0051] 在本發明的又一實施例中，光生物細胞附著在所述介質的兩側。將光生物細胞單 側附著培養時，第二營養液在由細胞表層傳遞至細胞底層後，多餘的第二營養液可能會滲 透至介質另一側，特別對於底層細胞而言，這樣勢必會造成第二營養液的流失。所以，在本 發明的優選實施例中，將光生物細胞接種在介質兩側，即使第二營養液發生滲透，也會被另 一側的光生物細胞吸收，使兩側的底層細胞間含蓄更多的第二營養液，從而使底層細胞的 狀態更好、與介質結合的更為緊密牢固。
[0052] 進一步地，分別向所述介質的兩側提供所述第二營養液，所述第二營養液從所述 介質兩側分別沿細胞表層到底層的方向傳遞。在將光生物細胞雙側附著培養的過程中，需 要同時向介質的兩側提供營養液，使營養液從介質兩側沿細胞表層向底層進行傳遞，以使 介質兩側的光生物細胞都獲得充足的營養液。這樣能夠使介質兩側的易脫離細胞充分生 長，並使介質兩側的底層細胞都可以獲得滿足需要的營養液。將光生物細胞雙側附著培養 能夠大幅度提高光生物細胞和/或其代謝物的產量，可使底層細胞獲得更多的營養液，以 使其能夠與介質更好地結合，更有利於後續的培養過程。
[0053] 在本發明的又一實施例中，所述介質為柔性材料，柔性材料具有良好的柔韌性，能 夠適應任意培養器，以擴大本實施例所提供的培養方法的適用範圍。
[0054] 在本發明的又一實施例中，所述介質優選為親水材料。選用親水材料可使光生物 細胞更快、更好地對介質進行附著，從而提高效率，減少後續培養中可能出現的損失。
[0055] 進一步地，所述介質優選柔性親水材料。柔性親水材料兼具柔性和親水的特點，既 能夠適應各種不同的培養器，擴大本發明實施例的適用範圍，又能夠使光生物細胞更快、更 好地與介質相結合，從而提高效率，減少後續培養中可能出現的損失。
[0056] 更進一步地，所述介質為表面具有粗糙度和/或絨毛和/或孔洞和/或通孔的所 述柔性親水材料。由於"附著培養"需通過拓展附著面積來提高光生物細胞和/或其代謝 物產量。同時，為了讓光生物細胞能夠利用形狀、結構等自身特性附著於介質上，需為其提 供相對粗糙的表面結構，而孔洞或通孔可以顯著地擴大介質的可附著面積，高粗糙度或具 有絨毛的表面則更有利於光生物細胞對介質進行附著，這樣就能夠使本發明實施例的效率 以及單位時間的產量得到進一步提高。需要說明的是，本發明實施例中的介質可以為棉布、 棉絨布，但並不限於上述材質，本領域技術人員可以根據上述內容以及實際情況自行選擇。
[0057] 在本發明實施例中，光生物細胞選自球狀藻、絲狀藻、弧形藻、三角形藻、多角形 藻、柵藻、小球藻、綠球藻、紅球藻、絲狀綠藻和絲狀藍藻等光生物細胞中的一種或多種。
[0058] 本發明能夠適用於很多在傳統培養方法中無法接種的光生物細胞，如球狀藻。這 是由於該細胞表面較為光滑，在接種過程中並不能與介質形成良好的附著力。而採用本發 明實施例所提供的接種方法，利用球狀藻的分泌物能夠使該球狀藻自發地附著在介質上， 然後在對球狀藻細胞進行給光預培養後，通過刮取和淋洗等方式收集在介質上附著不夠穩 固的球狀藻細胞，而原本在介質上附著較為穩固的球狀藻細胞為了抵禦刮取和衝淋時脫離 介質的趨勢，會與介質結合的更加緊密、穩固。可以理解的是，本發明實施例所涉及的光生 物細胞的範圍較為廣泛，本領域技術人員還可根據實際需要將該方法應用在其它類型的藻 細胞中。需要說明的是，光生物細胞的培養中，最終需求的產物除光生物細胞本身以外，還 可以包括其代謝物，如多糖、抗氧化劑、油脂、不飽和脂肪酸等物質。
[0059] 在本發明的又一實施例中，在所述得到光生物細胞的細胞聚集體之後還包括：收 集所述細胞聚集體中未直接附著在介質上的易脫離細胞；重複上述給光培養和收集過程。 由於收集過程多採用刮取方式，介質上仍然會殘留一定量的底層細胞，該介質可以等同於 接種完畢的介質，這樣就可以再次對其進行給光培養，以得到附著在介質上的細胞聚集體， 從而形成循環過程。該循環過程能夠更好地利用介質上殘留的底層細胞，並且在減少工序 的同時獲得更高的產量。
[0060] 為了更好地說明本發明提供的光生物細胞的培養方法，下面以具體實施例進行詳 細說明。
[0061] 實施例1
[0062] 以球藻為待養殖光生物細胞，以棉絨布為介質，進行單面附著培養。
[0063] 將棉絨布包裹在直徑為10 cm的球形支架表面形成球形體，將其浸沒在含有約 3g/L球藻細胞的BG11營養液中，將該營養液中通入二氧化碳與空氣的混合氣體，使該營養 液pH值維持在7左右，使球形體在營養液中無規則運動，待球形體表面布滿球藻後將球形 體由該營養液中取出，放入BG11營養液中漂洗2次；再將球形體置於營養液中，球形體一半 浸入營養液中，另一半暴露於營養液外，將含有體積分數為2%的二氧化碳的混合氣體通入 營養液中，維持營養液pH在7左右，球形體在混合氣體的作用下無規則轉動，使附著於其上 的球藻細胞間歇浸入、離開營養液，於北方春季室外環境中連續培養10日；收集球形體表 面的球藻細胞後，繼續培養10日；重複培養收集步驟三次，平均產量約5克每平方米介質每 曰。
[0064] 實施例2
[0065] 以柵藻為待養殖光生物細胞，以棉布為介質，進行雙面附著培養。
[0066] 使含有約lg/L柵藻細胞的BG11營養液沿邊長為1米的正方形棉布的一條邊從兩 側緩緩流下，經棉布的兩個側面流至營養液收集池，流回至收集池的含有柵藻細胞的該營 養液經由潛水泵輸送至棉布使其沿棉布兩個側面緩緩流下，形成循環，待該營養液中的柵 藻細胞基本消耗完畢時，再向該營養液中加入柵藻細胞，至該營養液中柵藻細胞的濃度上 升至約lg/L，重複上述過程至第5次時，該營養液中的柵藻細胞含量不再降低，此時柵藻細 胞均勻附著於棉布的兩個側面；將收集池中含有柵藻細胞的營養液排淨，加入不含柵藻細 胞的營養液，經由潛水泵使營養液按照上述過程流經接種完畢的棉布，衝洗30 min後將收 集池中含有少量細胞的營養液排淨，並加入營養液，經由潛水泵使營養液按照上述過程流 經上述淋洗過的棉布，將含有體積分數為2 %的二氧化碳的混合氣體通入營養液中，維持營 養液pH在7左右，於北方秋季室外環境中連續培養7日；收集棉布表面的柵藻細胞後，繼續 培養7日；重複上述培養收集過程三次，平均產量約10克每平方米介質每日。
[0067] 顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而並非對實施方式的限定。對 於所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或 變動。這裡無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或 變動仍處於本發明創造的保護範圍。
【權利要求】
1. 一種光生物細胞的培養方法，其特徵在於，包括： 利用第一營養液在介質上接種光生物細胞，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增 加； 對所述介質上附著的光生物細胞進行給光培養，並向所述介質上附著的光生物細胞提 供第二營養液，所述第二營養液沿細胞表層到底層的方向傳遞，得到光生物細胞的細胞聚 集體； 所述細胞聚集體包括直接附著在所述介質上的底層細胞和未直接附著在所述介質上 的易脫離細胞。
2. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述接種包括： 將光生物細胞加入到所述第二營養液中，獲得所述第一營養液； 利用所述第一營養液對所述介質進行淋洗，使光生物細胞附著在所述介質上； 重複上述步驟，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加。
3. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述接種包括： 將光生物細胞加入到所述第二營養液中，獲得所述第一營養液； 將所述介質浸潤在所述第一營養液中，使光生物細胞附著在所述介質上； 重複上述步驟，直至所述介質上附著的光生物細胞不再增加。
4. 根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特徵在於，光生物細胞附著在所述介質的 兩側。
5. 根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，分別向所述介質的兩側提供所述第二營 養液，所述第二營養液從所述介質兩側分別沿細胞表層到底層的方向傳遞。
6. 根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特徵在於，所述接種在所述介質上附著的 光生物細胞不再增加後還包括： 對附著有光生物細胞的所述介質進行給光預培養，得到附著在所述介質上的細胞聚集 體； 待給光預培養結束後，收集所述細胞聚集體中未直接附著在介質上的易脫離細胞； 利用所述第二營養液對所述介質進行淋洗或將所述介質浸潤在所述第二營養液中，收 集所述介質上殘留的易脫離細胞，獲得穩固附著有光生物細胞的所述介質。
7. 根據權利要求6所述的方法，其特徵在於，將收集到的所述易脫離細胞再次加入到 所述第二營養液中。
8. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述介質選自柔性材料、親水材料和柔性 親水材料中的一種。
9. 根據權利要求8所述的方法，其特徵在於，所述介質為表面具有粗糙度和/或絨毛和 /或孔洞和/或通孔的所述柔性親水材料。
10. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述光生物細胞選自球狀藻、絲狀藻、弧 形藻、三角形藻、多角形藻、柵藻、小球藻、綠球藻、紅球藻、絲狀綠藻和絲狀藍藻中的一種或 多種。
11. 根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，在所述得到光生物細胞的細胞聚集體之 後還包括： 收集所述細胞聚集體中未直接附著在介質上的易脫離細胞； 重複上述給光培養和收集過程。
【文檔編號】C12N1/12GK104195045SQ201410401933
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月14日 優先權日:2014年8月14日
【發明者】王琳, 朱振旗, 許 永, 陳傳紅 申請人:新奧科技發展有限公司